南方医科大学学报

作者：李天梅,刘 力,王晓斌

目的 探究蛋白质丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（AKT）/糖原合成酶激酶3β（GSK3β）介导的信号通路在脓毒症导致骨骼肌细胞膜上烟碱型乙酰胆碱受体（nAChRs）聚集障碍中的作用。方法 小鼠源性C2C12肌原细胞经2%马血清诱导分化为肌管后随机分为4组：Sham组：假手术小鼠血清处理；Sepsis组：脓毒症小鼠血清处理；Sepsis+D组：脓毒症小鼠血清和二甲基亚砜（DMSO）处理；Sepsis+SB组：脓毒症小鼠血清和GSK3β抑制剂SB216763处理，各组在作相应处理前均加入Agrin蛋白诱导nAChRs聚集。血清处理 5.5 h后采用 Alexa Fluor 594-conjugated α-bungarotoxin（α-BTX）标记肌管膜上 nAChRs聚集簇，采用 Western blotting检测AKT、磷酸化AKT（p-AKT）、GSK3β、磷酸化GSK3β（p-GSK3β）、细胞质连接蛋白相关蛋白2（CLASP2）的表达水平，采用免疫共沉淀（Co-IP）检测磷酸化CLASP2（p-CLASP2）以及CLASP2与微管蛋白α-tubulin的结合水平。结果 与Sham组相比，Sepsis 组 C2C12 肌管膜上 nAChRs 聚集簇面积和密度均降低，p-AKT、p-GSK3β水平下降，p-CLASP2 水平升高，CLASP2 与 α-tubulin 的结合减少；与 Sepsis+D 组相比，Sepsis+SB 组 C2C12 肌管膜上 nAChRs 聚集簇面积和密度均增加，p-CLASP2水平降低，CLASP2与α-tubulin的结合水平增加。结论 脓毒症小鼠血清通过抑制Akt/GSK3β磷酸化导致下游信号分子CLASP2与α-tubulin结合减少，引起C2C12肌管膜上nAChRs聚集障碍。

来源：2019年第11期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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