南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2022年第12期

• WP1130通过抑制NLRP3炎症小体活化缓解小鼠的感染性休克

  陆 莉, 刘迪迪, 杨燕青, 王凤超

  目的 探究小分子化合物WP1130抑制NLRP3炎症小体活化并缓解感染性休克的作用机制。方法 细胞生物学水平：WP1130预处理小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）或人THP-1细胞后，利用多种NLRP3炎症小体活化剂（Nigericin、ATP、MSU、胞内LPS转染）活化NLRP3炎症小体，使用poly A:T活化AIM2炎症小体，通过Western blot和ELISA检测细胞培养上清中caspase-1和IL-1β的分泌水平，确定WP1130对NLRP3炎症小体的抑制效果及其特异性。利用激光共聚焦显微镜观察Nigericin诱导的线粒体损伤情况，探究WP1130是否影响NLRP3炎症小体组装活化的上游信号。动物水平：将SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为3组，即空白对照组（Control组）、感染性休克组（LPS组）、WP1130治疗组（WP1130+LPS组），ELISA检测小鼠血清和腹腔液中IL-1β、TNF-α的分泌水平。结果 WP1130可剂量依赖性的抑制多种激动剂诱导的NLRP3炎症小体活化（P0.05）。此外，WP1130对AIM2炎症小体的活化无显著影响（P>0.05）。机制研究表明，WP1130并不影响NLRP3炎症小体组装活化的上游信号线粒体损伤。动物实验结果表明，相较感染性休克组（LPS组），WP1130治疗组（WP1130+LPS组）小鼠血清和腹腔液中IL-1β的水平显著降低（P0.05）。结论 WP1130能够特异性抑制NLRP3炎症小体活化并缓解LPS诱导的小鼠感染性休克。

• 基于复值损失函数的并行MRI的深度重建

  黄进红, 周根娇, 喻泽峰, 胡文玉

  目的 研究一种新的以幅值和相位均方误差和为损失函数的深度重建方法，用以加快磁共振图像重建速度及提高重建精度。方法 考虑到磁共振不同线圈之间的数据噪声并不完全独立，本文首先将多线圈数据合并成单线圈幅值数据，以消除不同线圈噪声间的相关性，并以此作为训练数据的样本标签；同时考虑到相位信息的重要性，我们将损失函数定义为幅值和相位均方误差的加权和，权重系数用来平衡两者在不同应用中的重要程度。为了验证方法的有效性，本文利用FastMRI数据集中真实的脑部和膝部K空间数据进行训练和测试，并与一些以均方误差或平均绝对误差作为损失函数的相关方法进行了比较。结果 所提方法能够有效去除噪声及重叠伪影，同时较好地保留图像细节。定量结果显示，相比于已有的以均方误差或平均绝对误差作为损失函数的方法，本文提出的方法可以提高重建图像的峰值信噪比（PSNR）1dB左右。结论 本文针对深度磁共振重建提出了一种新的损失函数，以适应并行磁共振数据中的噪声特点，利用该方法可以加快重建速度，同时可以有效地提高重建质量。

• NDRG2通过调控肝癌细胞磷脂和甘油三酯代谢抑制肝细胞癌的生长：基于代谢组学分析

  王佳媛, 袁依依, 张 坤, 孙 翔, 卜 歆, 董 健, 吴有盛, 田红英, 沈 岚

  目的 观察抑癌基因N-Myc下游调控基因2（NDRG2）对人肝癌细胞脂类物质代谢的调控方式及调控特征，阐述NDRG2在肝癌脂质代谢中的作用。方法 基于TNMplot数据库分析抑癌基因NDRG2在809例肝细胞癌组织和379例正常肝组织中的表达差异，应用人类蛋白质图谱（THPA）分析NDRG2在肝细胞癌的表达水平与患者生存期的关系，以及NDRG2在肿瘤细胞株的表达丰度并筛选肝癌细胞系。利用携带NDRG2 cDNA慢病毒及其对照组慢病毒分别感染人肝细胞癌细胞系HepG2，采用实时荧光定量PCR法检测慢病毒感染后两组细胞中NDRG2基因的mRNA含量；Western blot检测慢病毒感染后两组细胞中NDRG2的蛋白含量，建立NDRG2过表达及其对照组细胞系。利用脂质代谢组学分析NDRG2表达增强对肝癌细胞脂质代谢的调控效应，利用酶联免疫分析试剂盒验证NDRG2表达增强对肝癌细胞磷脂代谢物的影响，利用油红染色验证NDRG2表达增强对肝癌细胞甘油三酯的影响。结果 TNMplot数据库结果统计分析发现NDRG2在肝癌组织中表达量对比普通肝组织明显下降（P<0.001）；THPA数据库生存分析发现NDRG2 mRNA水平高的患者比NDRG2 mRNA水平低的患者存活时间更长；THPA数据库细胞系RNA表达分析显示在多种肿瘤细胞中，肝细胞癌HepG2中NDRG2表达丰度较高。代谢组学研究发现NDRG2表达增强能够显著调控肝癌细胞HepG2磷脂的含量。其中甘油三酯TG、卵磷脂PC、磷脂酰甘油PG、磷脂酰乙醇胺PE、鞘磷脂酰丝氨酸SM、神经酰胺Cer等变化明显。酶联免疫分析发现NDRG2表达增强能够显著抑制肝癌细胞HepG2内多种磷脂代谢物的含量。油红染色分析发现NDRG2表达增强能够显著抑制肝癌细胞HepG2内甘油三酯的含量。结论 抑癌基因NDRG2可以通过调控肝癌细胞磷脂和甘油三酯含量，抑制肝细胞癌的发生与发展。

• 苗药验方四大血可减少关节炎大鼠滑膜组织的坏死性凋亡和血管新生：基于抑制RIPK1/RIPK3/MLKL通路

  王远迎, 戴兴月, 陈春彦, 程培钧, 陈松江, 黎欣悦, 毕 炫, 程 瑶, 吴昌学, 吴 宁

  目的 探究贵州苗医验方“四大血”（SX）对胶原诱导型关节炎（CIA）大鼠滑膜组织坏死性凋亡和滑膜血管新生的作用机制。方法 将42只SD大鼠均分为空白组（Nor）、模型组（Mod）、雷公藤多苷片阳性对照组（GTW，40 g/kg）和SX高、中、低剂量组（SX 40 g/kg、SX 20 g/kg、SX 10 g/kg），7只/组。构建CIA大鼠模型。建模后测量大鼠双后肢足跖肿胀程度并进行关节炎指数评分。ELISA法检测血清中TNF-α、IL-1β和IL-17变化，HE染色法观察大鼠关节滑膜病理变化，Real-time PCR检测滑膜组织中VEGF、MMP-9、Ang-1、RIPK1、RIPK3、Caspase-8 mRNA表达水平，Western blot检测滑膜组织中VEGF、MMP9、Ang-1、STAT-3、RIPK1、RIPK3、MLKL、p-MLKL、Caspase-8蛋白表达水平。结果 GTW组和SX高、中、低剂量组足跖肿胀度及关节炎指数评分均小于Mod组（P<0.05）。在光镜下观察大鼠关节滑膜病理组织切片，Mod组可见大量炎性细胞浸润，各层组织结构混乱；而药物治疗组中，炎性细胞浸润、滑膜血管新生和滑膜增生程度均降低。且随SX剂量增高，治疗效果呈逐渐增强的趋势。与Mod组相比，GTW组和SX 40 g/kg组大鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-17含量，滑膜组织中RIPK1、RIPK3、VEGF、Ang-1、MMP9 mRNA和蛋白表达均降低（P<0.05），Caspase-8 mRNA和蛋白表达水平增高（P<0.05）并下调Stat-3蛋白表达和MLKL的磷酸化水平（P<0.05）。结论 SX可以改善CIA大鼠滑膜血管新生，其机制可能与抑制RIP1/RIP3/MLKL信号通路激活，并下调促血管生长因子VEGF、Ang-1、MMP9、STAT-3表达有关。

• PRMT1通过促进RRM2表达抑制鼻咽癌细胞凋亡

  周兰柱, 吴 俊, 张明洁 , 赵 报 , 马士崟

  目的 探讨PRMT1能否通过促进RRM2抑制鼻咽癌细胞凋亡。方法 免疫组化和Western blot共同检测鼻咽癌和癌旁组织中PRMT1及RRM2的相对表达量；以人正常鼻黏膜上皮细胞系（HNEpC）作为对照，Western blot实验检测不同鼻咽癌细胞系中PRMT1和RRM2蛋白的相对表达量；对CNE-2细胞中PRMT1分别进行过表达和下调，过表达实验设阴性对照组（oe NC：CNE-2细胞中转染pcDNA3.1质粒）、过表达PRMT1组（oe PRMT1：CNE-2细胞中转染pcDNA3.1 PRMT1质粒）、下调实验设阴性对照组（si-NC：CNE-2细胞中转染NC无关序列）及PRMT1小干涉RNA组（si-PRMT1：CNE-2细胞中转染PRMT1小干涉RNA），对CNE-2细胞中RRM2分别进行过表达和下调，过表达实验设阴性对照组（oe NC：CNE-2细胞中转染pcDNA3.1质粒）、过表达RRM2组（oe RRM2：CNE-2细胞中转染pcDNA3.1 RRM2质粒）、下调实验设阴性对照组（si-NC：CNE-2细胞中转染NC无关序列）及RRM2小干涉RNA组（si-RRM2：CNE-2细胞中转染RRM2小干涉RNA）。Western blot验证PRMT1和RRM2的表达关系；AnnexinV-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡；活性氧试剂盒检测细胞活性氧。结果 与癌旁组织和HNEpC细胞相比，鼻咽癌组织和CNE-2细胞中的PRMT1和RRM2相对表达量均显著增加（P<0.05）；Western blot证明PRMT1可促进RRM2表达，过表达PRMT1或RRM2，CNE-2细胞活性氧产生量与凋亡率均降低（P<0.05），下调PRMT1或RRM2表达，CNE-2细胞活性氧产生量与凋亡率凋亡率均增加（P<0.05）。Western blot显示，过表达PRMT1或RRM2表达，Cleaved caspase-3和Cleaved caspase-8蛋白表达减少（P<0.05），下调PRMT1或RRM2表达，Cleaved caspase-3和Cleaved caspase-8蛋白表达增加（P<0.05）；当同时下调PRMT1和过表达RRM2表达，与单独下调PRMT1组比，CNE-2细胞活性氧产生量与凋亡率均显著降低（P<0.05），Cleaved caspase-3和Cleaved caspase-8蛋白表达均减少（P均<0.05）。结论 PRMT1通过促进RRM2表达影响CNE-2细胞凋亡。

• 三种商品化光敏剂诱导小鼠免疫原性细胞死亡的效果比较

  林 萱, 毛 铎, 白瑞霞

  目的 研究二氢卟吩 e6（Ce6）、中性红（NR）以及虎红钠盐（RB）3种商品化光敏剂的光敏性质、光动力治疗（PDT）效果及诱导免疫原性细胞死亡（ICD）能力，筛选出最高效的ICD诱导剂用于抗肿瘤免疫治疗。方法 溶液实验：利用不同的活性氧（ROS）荧光探针评估溶液中3种光敏剂的光敏能力。细胞实验：探针检测肿瘤细胞内ROS生成能力；CCK-8细胞毒性试验比较3种光敏剂的细胞杀伤效果以及生物相容性；检测细胞表面暴露的钙网蛋白（ecto-CRT），高迁移率族蛋白1（HMGB1）以及培养基上清三磷酸腺苷（ATP）浓度评估3种药物的ICD诱导能力。动物实验：建立BALB/c小鼠4T1皮下肿瘤模型，10 d后分别在瘤内注射Ce6和NR（30 μL，5 mg/mL），2 h后白光光照处理（10 min，400 mW/cm2），监测小鼠体质量及肿瘤组织体积变化。14 d后取材，通过流式细胞技术分析肿瘤组织中CD8+ T细胞及脾脏组织CD8+ T的IFN-γ因子分泌量；通过HE染色和TUNEL组织染色分析肿瘤组织中细胞凋亡情况。结果 在3种光敏剂中，Ce6的ROS产生能力最高，且显示出最强的肿瘤细胞杀伤效果；ecto-CRT、HMGB1荧光成像及胞外ATP含量显示Ce6相对于NR和RB具有更好的ICD诱导能力。动物实验显示，Ce6和NR组小鼠在光动力治疗后肿瘤体积显著变小，其中Ce6肿瘤治疗效果明显好于NR及PBS组。流式结果显示Ce6与NR组瘤内CD8+ T细胞占比分别为12.7%和6.1%，脾脏组织IFN-γ+ CD8+ T细胞占比分别为7.1%和2.8%，两组之间差异有统计学意义（P<0.05）。HE染色和TUNEL染色显示相对于PBS组，两个治疗组肿瘤组织有明显核凋亡情况，且Ce6的治疗效果明显强于NR。结论 3种光敏剂中Ce6的ROS生成效率最高，光动力效果最好，诱导ICD能力最强，并且在肿瘤治疗中能明显提升CD8+ T细胞的数量及功能，能相对高效的启动适应性免疫应答，抑制肿瘤生长。

• 定量磁化率成像中磁化率重建伪影的清除：基于多通道输入的卷积神经网络方法

  斯文彬, 冯衍秋

  目的 基于深度学习方法消除定量磁化率成像（QSM）过程中出现的各类磁化率相关伪影。方法 为消除磁化率差异较大的分界面上出现的伪影，本文提出了一种基于多通道输入的卷积神经网络方法（MAR-CNN），用于单方向偶极子反卷积QSM重建。该方法根据磁化率的阈值与静脉掩膜将原始组织场分成两个分量，与原始组织场拼接作为MAR-CNN的三通道输入。实验将MAR-CNN与三种基于模型的方法，阈值截断k空间除法（TKD），形态学的偶极子反卷积方法（MEDI）和改进的稀疏线性方程最小二乘法（iLSQR）和一种深度学习方法（QSMnet）进行比较，并使用高频误差范数、峰值信噪比、归一化均方根误差和结构相似性指数进行定量评估。结果 在健康志愿者中，与TKD、MEDI、iLSQR和QSMnet相比，MAR-CNN重建图像的峰值信噪比最高（43.12±1.19）、归一化均方根误差最小（51.98±3.65）。与QSMnet相比，MAR-CNN在所有四个量化指标上都是更优的，且具有显著性差异（P<0.05）。对于仿真的出血患者，MAR-CNN在高磁化率的出血病灶周围产生的阴影伪影更少。结论 本文提出的多通道输入卷积神经网络QSM重建方法可提高定量磁化率重建的准确度并有效消除QSM伪影。

• 超声引导下的星状神经节阻滞可改善老年肺癌患者胸腔镜术后早期睡眠：86例前瞻性随机对照试验

  古翠方, 翟明见, 吕爱俊, 刘 露, 胡 欢, 刘 溪, 李 璇, 程向阳

  目的 探讨超声引导下星状神经节阻滞(SGB)对老年肺癌患者胸腔镜手术后早期睡眠的影响。方法 纳入我院择期行胸腔镜手术的肺癌患者86例，年龄60~80岁，BMI 20~27 kg/m2，ASA I-III级，随机分为星状神经节阻滞组（SGB组，n=43）和对照组（对照组，n=43）。麻醉诱导前30 min，SGB组在超声引导下行C6-7水平右侧星状神经节阻滞，给予0.5%罗哌卡因7 mL；对照组在相同位置给予生理盐水7 mL。我们需要通过BIS-Vista监测术前最后1晚、术后第1晚及术后第2晚的睡眠持续时间、睡眠效率指数和N3睡眠阶段；记录术前、术后第1天及术后第2天的主观睡眠阿森斯失眠（AIS）评分；采取患者静脉血样，测定星状神经节阻滞前（T1）、拔管后5 min（T2）及术后第1天早上6:00（T4）血浆去甲肾上腺素、皮质醇的浓度；采取患者晨尿样本，测定手术当天早上6:00（T3）、术后第1天早上6:00（T4）、术后第2天早上6:00（T5）晨尿中6-羟基硫酸褪黑素（6-HMS）的浓度；我们还需要记录VAS评分、术后谵妄发生率、术后抑郁发生率、术后舒芬太尼用量、术后住院时间。结果 最后SGB组有36例患者，对照组有35例患者纳入分析。两组患者术后大多出现失眠，但与对照组相比，SGB组患者术后第1晚及术后第2晚的睡眠持续时间更长（P<0.05），睡眠效率指数更高（P<0.05），N3阶段睡眠时间更长（P<0.05）；与对照组相比，SGB组患者术后AIS评分更低，术后失眠率更低（P<0.05）；与对照组相比，SGB组患者在T2、T4时间点血浆中去甲肾上腺素及皮质醇浓度更低（P<0.05），T5时间点晨尿中6-HMS浓度更高（P<0.05），术后住院时间更短（P<0.05），术后拔管时间、VAS评分、术后舒芬太尼用量、术后谵妄、术后抑郁发生率无明显差异。结论 超声引导下SGB可以改善老年肺癌患者胸腔镜手术后早期客观及主观睡眠，使应激反应与睡眠障碍间的恶性循环关系有所缓解，减少术后住院天数，促进患者快速康复。

• 敲除S1PR3可缓解小鼠的急性肺损伤：基于抑制MAPK信号通路

  房尚萍, 袁 冉, 孙任珂, 马同军

  目的 探讨敲除S1PR3是否通过抑制丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）途径改善脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺损伤。方法 用LPS诱导小鼠急性肺损伤模型。雄性C57BL/6J和S1PR3敲除小鼠，随机分为4组：C57 NS组（C57，生理盐水处理）、C57 LPS组（C57，LPS诱导）、S1PR3-/- NS组（S1PR3敲除鼠，生理盐水处理）、S1PR3-/- LPS组（S1PR3敲除鼠，LPS诱导），8只/组。RT-qPCR检测S1PR3，IL-β和IL-18表达，HE染色检测肺部组织损伤，流式细胞术检测细胞凋亡水平，Western blot法检测caspase-1，GSDMD，p-JNK，p-ERK p-p38 蛋白表达水平。同时，Ⅱ型肺泡上皮细胞（MLE-12 细胞）铺板后分为 4 组：PBS 组、LPS 组、CYM5541组（仅加入S1PR3激动剂）、CYM5541+LPS组（加入S1PR3激动剂+LPS），检测各组细胞焦亡水平及MAPK信号通路分子的表达水平。结果 急性肺损伤小鼠肺组织S1PR3表达上调（P<0.001）；血清IL-1β和IL-18因急性肺损伤而明显升高（P<0.05）。急性肺损伤小鼠因敲除S1PR3肺出血、炎症渗出明显改善，肺湿干比重下降，细胞凋亡比例和焦亡相关蛋白如clv-caspase-1，GSDMD表达均降低（P<0.05）。MLE-12细胞因加入S1PR3激动剂，细胞焦亡相关蛋白表达均升高（P<0.05）。此外，MAPKs家族（JNK，ERK p38）的激活因S1PR3敲除后受到抑制，因加入S1PR3激动剂而表达明显升高（P<0.05）。结论 敲除S1PR3可通过抑制MAPK信号通路改善急性肺损伤。

• 组蛋白赖氨酸去甲基化酶家族在膀胱癌中的表达模式及其潜在作用：基于多组学分析

  付小聪, 余光创, 郭艳芳

  目的 探讨 19 个组蛋白赖氨酸去甲基化酶（KDMs）在膀胱癌多组学中的表达模式与潜在作用。方法 本研究使用UALCAN和GSCALite分析来自TCGA的膀胱癌样本的KDMs的转录表达和甲基化水平、体细胞变异多组学高通量测序数据。使用Kaplan Meier-Plotter和Assistant for clinical bioinformatics探讨KDMs的表达对BLCA样本的预后影响。利用Timer和GSCALite分析KDMs在膀胱癌中的免疫浸润和药物敏感性。结果 分析结果首先揭示了KDMs在膀胱癌多组学中的表达特征，并不是所有KDMs都具有一致的表达模式。转录组数据分析显示KDM1A/1B/2B/4A/4B/5B/5C的表达上调（P<0.05），而KDM3B/6B/7C的表达下调。甲基化水平差异分析显示KDM1A/3B/4A/4B/4C/5A/5B/5C/7B的甲基化水平下调，而KDM7C甲基化水平上调（P<0.05）。相关性分析显示，14个KDMs家族成员的转录水平与甲基化水平呈负相关，其中KDM1A最显著。突变分析显示，KDM6A非同义突变频率最高，突变种类最多，且与其它KDMs 的非同义突变具有互补性。生存分析显示，KDM3A/4C/5D/6A/7B对BLCA患者总生存率具有保护性作用，而KDM3B/5B/5C对BLCA患者无复发生存率具有危险性影响。综合预后模型证实KDM4C/6A/7B具有膀胱癌预后生物标志物的潜在作用，其表达与BLCA患者免疫浸润呈正相关。药物敏感性分析显示，KDM2B/3B/4B/4C/5A与大多数抗癌药物呈负相关，而KDM2B/4B与6种抗癌药物呈正相关（P<0.05）。结论 本研究系统性地揭示了KDMs基因家族在膀胱癌中的高突变互补性、过表达与低甲基化负相关性的特征，并与膀胱癌预后、免疫浸润和药物敏感性密切相关。

• 乌司他丁联合右美托咪定对肝脏缺血再灌注损伤起保护作用：基于80例肝癌合并肝硬化行腹腔镜肝切除术患者

  欧 毅, 刘 刚, 殷凤伟, 杨 杨, 张方圆

  目的 探讨乌司他丁联合右美托咪定对肝癌合并肝硬化患者行腹腔镜肝切除术（LH）缺血再灌注损伤（IRI）的保护作用。方法 择期行LH的肝癌合并肝硬化患者80例，随机分为U、D、UD和C 4组，每组20例。U组予以乌司他丁（1.0×104 U/kg），D组予以右美托咪定（负荷量0.5 μg/kg，持续10 min，然后以0.5 μg/（kg.h）维持至术毕前30 min），UD组予以乌司他丁联合右美托咪定处理，C组予以等容量0.9%氯化钠。于术前（T0）、术后30 min（T1）、术后24 h（T2）、术后3 d（T3）、术后5 d（T4）采集静脉血样。记录T0~T2时血清α-谷胱甘肽S-转移酶（α-GST）、丙二醛（MDA）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）浓度与T0和T2~T4时血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）浓度，并记录肝功能不全、并发症发生率和术后住院时间。结果 T1时，与C组比较，U组、D组和UD组血清α-GST、MDA、TNF-α和IL-6浓度明显降低（均P<0.05）；与UD组比较，U组和D组α-GST、MDA、TNF-α和IL-6浓度高于UD组（P<0.05）。T2时，与C组比较，U组、D组和UD组MDA、TNF-α和IL-6浓度明显降低（均P<0.05）；与UD组比较，U组和D组MDA、TNF-α和IL-6浓度高于UD组（均P0.05）。T2~T4时，与C组比较，U组、D组和UD组ALT和AST浓度明显降低（均P<0.05）；与UD组比较，U组和D组ALT和AST浓度高于UD组。与C组比较，UD组术后住院时间明显缩短（P0.05）。结论 乌司他丁联合右美托咪定可能通过协同抗氧化应激与抗炎反应，对肝脏IRI具有进一步的保护作用，从而减轻肝癌合并肝硬化患者围术期肝损伤，加速术后恢复。

• miR-34a通过靶向抑制Notch信号通路减轻糖尿病肾病小鼠的足细胞损伤

  王欢岚, 刘 红, 张燕敏, 陈伟栋

  目的 探讨miR-34a介导Notch信号通路对糖尿病肾病（DN）足细胞损伤及凋亡的影响。方法 体外实验：通过RT-PCR法检测高糖（30 mmol/L）环境下足细胞中miR-34a表达水平，构建miR-34a过表达足细胞系（miR-34a组）及其阴性对照（miR-NC组），使用荧光素酶实验验证miR-34a与Notch 1的靶向关系，构建Notch 1过表达足细胞系（Notch 1组）和miR-34a、Notch 1均表达升高细胞系（miR-34+Notch 1组）；采用CCK-8法检测足细胞存活情况，流式细胞法检测细胞凋亡情况，Western blot法检测细胞凋亡关蛋白水平。体内实验：通过高脂饮食和链脲佐菌素建立DN小鼠模型并分为模型组、miR-34a组（n=15/组），另选15只不做干预小鼠为对照组，miR-34a组和模型组小鼠分别尾静脉注射agomir-34a[80 mg/(kg·d)]、agomir-NC[80 mg/(kg·d)]，连续注射3 d，4周后，HE染色、TUNEL法分别观察肾组织病理、凋亡情况，Western blot检测肾组织凋亡相关蛋白和Notch 1蛋白表达水平。结果 高糖环境下足细胞中miR-34a表达水平低于正常糖诱导下足细胞和高渗透压下作用下的足细胞（P<0.05），miR-34a组足细胞中Notch 1表达水平低于miR-NC组（P<0.05）；Notch 1 wt/miR-34a组荧光素酶活力值低于Notch 1 wt组（P0.05）；miR-34a组足细胞的A值高于miR-NC组（P<0.05），而细胞凋亡率和caspase-3、caspase-9、Bax/Bcl-2蛋白水平均低于miR-NC组（P<0.05）；Notch 1组足细胞的A值低于miR-NC组（P<0.05），而细胞凋亡率和caspase-3、caspase-9、Bax/Bcl-2蛋白水平均高于miR-NC组（P<0.05）；miR-34a+Notch 1组足细胞的A值低于miR-34a组（P<0.05），而细胞凋亡率和caspase-3、caspase-9、Bax/Bcl-2蛋白水平均高于miR-34a组（P<0.05）。对照组小鼠肾组织结构清晰完整，模型组小鼠肾小球肿胀、体积增大，miR-34a组小鼠肾组织病变程度得到改善；模型组小鼠肾组织 miR-34a 表达水平低于对照组（P<0.05），miR-34a 组小鼠的肾组织 miR-34a 表达水平高于对照组（P<0.05）；模型组小鼠肾组织凋亡指数和caspase-3、caspase-9、Notch 1蛋白水平高于对照组（P<0.05），miR-34a组小鼠肾组织凋亡指数和caspase-3、caspase-9、Notch 1蛋白水平低于模型组（P<0.05）。结论 miR-34a可通过靶向作用Notch 1改善DN足细胞损伤和凋亡。

• 新风胶囊含药血清抑制脂多糖诱导的类风湿关节炎大鼠的滑膜成纤维细胞焦亡

  王露琳, 汪 元, 刘 健, 黄传兵, 张皖东, 万 磊, 孙 玥, 黄 旦

  目的 观察新风胶囊（XFC）含药血清对脂多糖（LPS）诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞（RA-FLS）焦亡的影响及其机制。方法 将20只SD大鼠利用随机数字表法分为2组：空白组和XFC组，XFC组予0.324 mg/g灌胃7 d后制备含药血清。CCK-8法检测XFC含药血清作用于RA-FLS最佳干预浓度和时间。将RA-FLS分为空白组（RA-FLS）、模型组（RA-FLS+5 μg/mLLPS）、MCC950组（RA-FLS+LPS+MCC950）、XFC组（RA-FLS+LPS+XFC含药血清）。CCK-8法检测细胞活性，电镜观察RA-FLS焦亡形态，ELISA检测IL-1β、IL-18浓度，Western blotting和qRT-PCR检测NLRP3、caspase-1、GSDMD的蛋白和mRNA的表达。结果 XFC作用于RA-FLS最佳干预浓度和时间分别为20%和24 h。与空白组相比，模型组细胞活性显著上升（P<0.05），电镜下可见RA-FLS内形成大量小泡，膜上形成孔隙，胞膜破裂，细胞内容物流出，IL-1β、IL-18浓度和NLRP3、GSDMD、caspase-1mRNA及蛋白表达显著升高（P<0.05或P<0.01）；与模型组相比，XFC含药血清组、MCC950组细胞活性显著下降（P<0.01），细胞焦亡情况改善，IL-1β、IL-18浓度和NLRP3、GSDMD、caspase-1 蛋白及mRNA表达明显降低（P<0.05、P<0.01）。结论 XFC可能通过NLRP3/GSDMD通路抑制FLS细胞焦亡，下调炎症细胞因子的分泌，减轻关节局部炎症反应而发挥治疗作用。

• 丹参酮IIA通过抑制RIP3/FUNDC1信号通路减轻LPS诱导的小鼠肾小管上皮细胞凋亡

  张 舒, 苏保林, 王亮亮, 汤水福, 陈刚毅

  目的 探讨丹参酮IIA在防治脓毒血症急性肾损伤（AKI）方面的作用及潜在机制。方法 将30只C57BL/6小鼠随机分为对照组（10 mg/kg LPS等体积无菌生理盐水）、LPS组（10 mg/kg LPS作用24 h）、LPS+丹参酮IIA组（10 mg/kg 丹参酮IIA预处理15 min再给予10 mg/kg LPS作用24 h）（10只/组）。给药后检测小鼠血肌酐(Scr)、血尿素氮水平(BUN)，PAS染色观察小鼠肾组织病理变化，Western blot检测小鼠肾组织RIP3、Cleaved-caspase3、p18-FUNDC1表达水平。将体外培养正常的人肾小管上皮细胞（HK-2）分为空白对照组、LPS 刺激组（LPS，10 μg/mL）、LPS+siNC 组（LPS 10 μg/mL+50 nmol/L siNC）、LPS+siRIP3 组（LPS 10 μg/mL+50 nmol/L siRIP3）、丹参酮IIA干预组（LPS 10 μg/mL+ 丹参酮IIA 10 mg/L），分别给予以上干预措施。采用TUNEL方法检测各组HK-2细胞的凋亡情况，Western blot检测各组RIP3、Cleaved-caspase3、p18-FUNDC1表达水平，qT-PCR检测RIP3基因表达水平。结果 与对照组相比，LPS作用小鼠24 h后，小鼠Scr及血BUN水平升高，PAS染色提示近段肾小管损伤，肾组织中RIP3、Cleaved-caspase3、p18-FUNDC1蛋白表达上调（P<0.001）。与LPS组相比，丹参酮IIA预处理后，小鼠Scr及BUN水平下降，PAS染色显示近段肾小管损伤减轻，肾组织中RIP3、Cleaved-caspase3、p18- FUNDC1蛋白表达下降（P<0.001）。体外研究显示，与对照组相比，LPS刺激的HK-2细胞后，TUNEL染色显示细胞凋亡水平明显增加，Cleaved-caspase3、RIP3、p18-FUNDC1表达上调（P<0.05）。应用丹参酮IIA预处理或体外沉默RIP3表达后再次予以LPS刺激细胞，TUNEL染色显示细胞凋亡水平较LPS组明显减少，Cleaved-caspase3、RIP3、p18-FUNDC1表达水平较LPS组下降（P<0.05）。结论 丹参酮IIA可能通过抑制RIP3/ FUNDC1信号通路来改善LPS诱导的肾小管上皮细胞凋亡。

• 基于顺序嵌入结合关联嵌入的呼吸运动预测

  张昆鹏, 于佳弘, 靳 爽, 苏 哲, 徐晓桐, 张 华

  目的 提出一个深度学习模型实现呼吸运动各个方向一体化的建模预测。方法 将不同方向的呼吸运动信号分别输入由LSTM组成的顺序嵌入层去捕获历史运动状态的顺序依赖，得到顺序嵌入表示。顺序嵌入表示通过自注意力机制实现各个方向的关联嵌入，得到关联嵌入表示。将顺序嵌入表示和关联嵌入表示进行拼接输入由全连接神经网络组成的预测层生成非线性预测分量，并于平行于上述结构的自回归模块生成的线性预测分量相加生成最终的预测。模型的训练采用“预训练+微调”的模式。在我们的实验中，304例呼吸运动轨迹被使用进行模型预训练，7例测评样本被使用进行模型的测试。结果 所提出预测模型相比于其他比较方法取得更准确的预测效果，在7例测评样本不同延迟时间上的3D方向绝对偏差减小平均达70%以上。结论 提出模型在解决精准放疗过程中的系统延迟问题有很大的应用价值，能提供精准的位置预测。

• PCR-核酸试纸条快速鉴定皮氏罗尔斯顿菌

  王 丹, 赵潇颖, 姜菲菲, 孙丽颖, 许 萌, 宿建胜, 赵云冬

  目的 基于PCR-核酸试纸条技术，建立快速检测制药用水中皮氏罗尔斯顿菌的方法。方法 利用煮沸法提取皮氏罗尔斯顿菌基因组DNA，以皮氏罗尔斯顿菌16S rDNA为靶基因使用NCBI primer-BLAST 5.0设计一对特异性引物，经克隆转入大肠杆菌感受态细胞DH5α，鉴定PCR产物；分别在引物的5’端标记FITC与Biotin；组装核酸试纸条，建立PCR-核酸试纸条的方法；优化反应体系中胶体金标记的链霉亲和素与抗体浓度的最佳工作量；并对试纸条进行反应原理验证及灵敏度、特异性、稳定性评价；对某生物科技有限公司制药用水检测出的7株皮氏罗尔斯顿菌进行实验并利用MEGA构建进化树，对污染溯源进行分析。结果 煮沸法提取基因组浓度较好，纯度1.8~2.0；PCR产物经克隆转化、测序比对，与GenBank已登记的皮氏罗尔斯顿菌16S rDNA相似度为100%；利用胶体金放大原理，每100 μL胶体金溶液中，加入3.5 μL链霉亲和素进行标记，硝酸纤维素膜上检测线为2.0 mg/mL抗FITC抗体，质控线为1.2 mg/mL生物素化BSA，与阳性扩增产物结合产生红色条带；按照优化条件进行试纸条组装，每100 μL样品展开液中加入8 μL PCR产物，反应5 min后观察结果；核酸试纸条特异性结果与琼脂糖凝胶电泳结果一致，仅有皮氏罗尔斯顿菌为阳性结果，不动杆菌、气单胞菌、假单胞菌、非脱羧勒克氏菌均为阴性结果；核酸试纸条灵敏度评价，将DNA浓度降至10-5 ng/μL时，试纸条检测线仍有条带，较琼脂糖凝胶电泳结果灵敏度高1000倍；核酸试纸条稳定性评价，将试纸条在3、6、9、12月进行检测，稳定性较好。结论 建立PCR-核酸试纸条技术检测制药用水中皮氏罗尔斯顿菌，具有简单快速、特异性强、灵敏度高、成本较低等优点，适用于制药企业对制药用水的日常检测。

• 羟基红花黄色素A通过抑制程序性坏死减轻小鼠重症中暑引起的急性肺损伤

  柳晓峰, 张 爽, 余让辉, 林晓萍, 樊文浩, 王玉晶, 梁志立, 谢维当, 刘亚楠, 陈 辉

  目的 研究羟基红花黄色素A（HSYA）是否在重症中暑肺损伤中起保护作用及其可能的作用机制。方法 使用不同浓度（1.125、2.25、4.5 mg/kg）HSYA腹腔注射预处理小鼠，建立重症中暑（sHS）小鼠模型，分为低、中、高剂量HSYA中暑组、单纯中暑组及正常对照组，12只/组。初步观察及比较各组热耐受的情况，以确定HSYA最佳治疗剂量；后使用中剂量HSYA及RIP1活化抑制剂Nec-1预处理小鼠，分组为HSYA+HS组、Nec-1+HS组、HS组及正常对照组，8只/组，观察72 h恢复期核心体温变化特征，比较热耐受情况及生存情况。给予相同处理因素处理小鼠分组为正常对照组，HS组，HSYA+HS组及Nec-1+HS组，正常对照组6只，其余18只/组，分别于重症中暑恢复期不同阶段（0、2、6、12、24 h）处死小鼠，每个时间点处死3只小鼠，收集小鼠的肺组织、肺泡灌洗液及血液样本，取肺组织行HE染色，并进行病理评分，检测肺湿干重比，肺含水量，肺泡灌洗液中白细胞、中性粒细胞、蛋白含量；ELISA法检测肺泡灌洗液中HMGB1水平及血清中TNF-α、IL-6及HMGB1水平；Western blotting检测恢复期（2、6、12 h）肺组织中RIP1、RIP3、MLKL-s358、MLKL表达水平，及经HSYA预处理后MLKL-s358蛋白水平。结果 中剂量及高剂量HSYA预处理可明显改善小鼠热耐受能力，中剂量与高剂量无显著差异，后续药物预处理以中剂量（2.25 mg/kg）作为标准剂量；与HS组相比，HSYA+HS组和Nec-1+HS组小鼠热耐受程度均增加（P<0.05），HSYA+HS组和Nec-1+HS组无明显差异。HSYA及Nec-1预处理组小鼠生存率增加（P<0.05），肺组织病理评分、TNF-α、IL-6及HMGB1水平降低（P<0.05），肺湿干重比，肺含水量，肺泡灌洗液中白细胞、中性粒细胞、蛋白含量及HMGB1水平降低（P<0.05），HS小鼠恢复期肺组织RIP1水平及MLKL-s358磷酸化水平升高（P<0.05），与HS组相比，HSYA+HS组MLKL-s358磷酸化水平降低。结论 重症中暑小鼠肺组织可发生程序性坏死，HSYA可通过抑制程序性坏死发挥肺保护作用。

• ALDH2通过线粒体融合与裂变减轻脂多糖诱导的脑微血管内皮细胞屏障的损伤

  王莎莎, 吕 恒, 王丽娅, 田美惠, 高 洁, 刘忠义, 王佳慧, 于 影

  目的 观察乙醛脱氢酶2（ALDH2）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠脑微血管内皮细胞屏障的影响，并探讨线粒体融合与裂变在内皮屏障中的作用。方法 小鼠脑微血管内皮细胞分为3组：对照组：不给予任何处理；LPS损伤组（LPS）：1 μg/mL的LPS刺激24 h；LPS+ALDH2激动剂Alda-1组（LPS+Alda-1）：在LPS刺激前给予20 μmol/mL的Alda-1预处理1 h。CCK-8实验检测细胞活性；跨内皮细胞电阻和FITC-Dextran葡聚糖实验检测细胞通透性变化；试剂盒丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）测定氧化应激水平；超氧化物阴离子荧光探针检测细胞活性氧（ROS）的表达；Western blot检测细胞ALDH2、紧密连接蛋白ZO-1、Occludin以及线粒体融合蛋白Mfn2、OPA1和分裂蛋白Drp1、Fis1表达。结果 与对照组相比，LPS组跨内皮细胞电阻值降低、FITC-Dextran渗漏性增高，MDA含量升高、SOD活性下降，ROS荧光表达增强，ALDH2、紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、线粒体融合蛋白Mfn2和OPA1表达降低，而线粒体分裂蛋白Drp1和Fis1表达升高（P<0.05）。应用Alda-1干预后，可显著抑制LPS所致的内皮细胞膜通透性升高，减低ROS荧光表达，ALDH2、ZO-1、Occludin 、OPA1和Mfn2蛋白表达增高，而Drp1和Fis1蛋白表达降低（P<0.05）。结论 ALDH2通过抑制线粒体ROS的产生，减轻LPS诱导脑微血管内皮细胞屏障的损伤，其机制可能与促进线粒体融合及抑制线粒体裂变有关。

• 小鼠纹状体尾部和听皮层PV神经元的电生理性质比较

  游佳鹏, 宋长宝, 梁妃学

  目的 研究小白蛋白（PV）神经元在听皮层（AC）及其下行听觉投射脑区纹状体尾部（TS）的电生理性质异同。方法 以PV-Cre-Ai14小鼠为研究对象，运用离体膜片钳技术记录PV神经元对步进电流的刺激响应，并通过Clampfit和MATLAB软件分析PV神经元动作电位（AP）的发放特性和波形特性。AP的发放特性包括延时、阈值、平均放电率、F/I斜率以及动作电位频率自适应性(SFA)；波形特性包括峰电位特性和后电位特性。实验结束后统计共使用PV-Cre-Ai14小鼠5只，共记录到29个TS-PV神经元和22个AC-PV神经元。结果 TS和AC的PV神经元存在显著不同的电生理特性。从峰电位特性上看，TS的PV神经元具有更小的半峰宽（P<0.001）和更大的幅值（P<0.01），AP的最大上升斜率（P<0.01）和最大下降斜率（P<0.05）也更大；从后电位特性上看，TS的PV神经元后超极化程度更大（P<0.01），恢复到静息电位的时间更短（P<0.01）；从发放特性上看，TS的PV神经元有更高的AP发放阈值（P<0.01）、更大的F/I斜率（P<0.01）和发放延时（P<0.001），其SFA也更大（P<0.01）。结论 TS中的PV神经元和AC中的PV神经元在处理听觉信息的过程中表现出显著不同的电生理特性。

• 纳米炭示踪前哨淋巴结在宫颈癌诊治中的应用价值

  林小丽, 何金梅, 卢佳蕴, 黄承颖, 刘 楠

  目的 探讨纳米炭示踪前哨淋巴结（SLN）检测在宫颈癌诊治中的应用价值及淋巴结超分期检测的临床价值。方法 选取2018年6月~2021年1月在南方医科大学南方医院妇产科收治IA2期、IB1期、IB2期、IIA1期、IIICp1期的宫颈癌患者79例，术前于宫颈3点、9点注射纳米炭示踪剂，术中将最先黑染的淋巴结作为SLN并切除，然后均行盆腔淋巴结清扫术+广泛性子宫切除术±腹主动脉旁淋巴切除术。SLN单独送病理检查，并随机抽取其中30例阴性的SLN进行病理超分期检测。结果 79例患者中共67例至少成功检出1枚SLN，检出率为84.8%，共检出SLN 417枚，平均每例检出5.28枚。术后5例SLN阳性，1例SLN阴性而非SLN阳性，SLN检测的灵敏度为83.3%，特异度为100%，假阴性率为16.7%，准确率为98.5%，阴性预测值为98.4%。SLN主要分布于髂外、闭孔、髂内、髂总区。在单因素分析、多因素分析中，术前宫颈锥切（P=0.045、P=0.009）、肿瘤大小（P=0.033、P=0.008）对SLN总体检出率的影响均有统计学意义。对SLN与盆腔淋巴结转移状态的一致性进行Kappa检验，Kappa值为0.901，P<0.001，SLN和盆腔淋巴结转移状态高度一致。对30例阴性的SLN进行病理超分期检测后，未检出微转移或孤立肿瘤细胞，其检出率为0%。结论 纳米炭示踪SLN在宫颈癌的诊治中具有较好的安全性及可行性；肿瘤原发病灶<2 cm或术前未行宫颈锥切的宫颈癌患者应用SLN检测技术较安全；SLN联合病理超分期检测，并不能提高孤立肿瘤细胞和微转移的检出率。

• 超声联合Ki67分析Graves病患者131I治疗后甲亢未愈或复发的相关因素

  王月桂, 洪理伟, 吕国荣, 杨舒萍, 李 玲, 黄学鹏, 沈浩霖

  目的 应用超声新技术及Ki67等指标研究与Graves病（GD）患者131I治疗后甲亢未愈或复发的相关因素。方法 研究2020年1月~2021年11月在我院核医学科接受131I治疗的GD患者89例。随访结局分为甲状腺功能亢进（甲亢）未愈或复发、早发甲状腺功能减退（早发甲减）和甲状腺功能正常或失随访。131I治疗后1个月为随访开始，每位患者最长随访时间为1年。治疗前应用三维超声自动测量技术、剪切波弹性成像技术和超声引导下细针穿刺抽吸技术，获取患者甲状腺容积、腺体剪切波弹性值和滤泡上皮细胞Ki67表达情况。并纳入年龄、病程、用药史、131I治疗剂量、TRAb等因素。应用竞争风险模型分析患者发生甲亢未愈或复发的相关因素并计算其调整风险比（HR）和95%置信区间（95% CI）。结果 在89例GD患者中，出现甲亢未愈或复发的患者有27例，早发甲减患者有50例，甲状腺功能恢复正常的患者1例，失随访11例。竞争风险模型分析显示Ki67表达、131I治疗剂量及甲状腺容积与治疗后甲亢未愈或复发存在独立关联，其HR（95% CI）分别为0.36（0.15，0.86）、0.81（0.68，0.96）和1.11（1.07，1.15）。结论 Graves病患者甲状腺滤泡上皮细胞Ki67表达阳性、131I治疗剂量及甲状腺容积与131I治疗后甲亢未愈或复发存在独立关联。超声新技术可以在评估GD患者131I治疗结局中发挥重要作用。

• 肝脏血管认知更新与研究新思路

  林 媛, 刘志敏, 董梦琦, 周伟杰

  尽管很早就知道肝小叶汇管区、肝血窦、中央区等不同位置存在不同结构和功能的微血管，但一直以来这些血管在肝纤维化中的变化与功能并不完全清楚。最近的研究发现，在小鼠肝纤维化模型中，汇管区、肝血窦、中央区的血管在病变极早期即发生了不同的变化，提示其具有不同的功能：汇管区血管减少，肝血窦毛细血管化增加，中央静脉区血管增多；汇管区血管增多抑制肝纤维化，肝血窦毛细血管化增加促进肝纤维化，中央静脉区血管增多促进肝纤维化。从干预肝血管的角度来治疗肝纤维化需要充分考虑针对这些不同血管进行不同调控，因此，彻底研究清楚这些不同血管独特的调控通路非常重要，组合多种血管调控信号来精准靶向这些不同的血管使之正常化是治疗肝纤维化的新策略。沿着这个思路，进一步研究肝脏发育、再生及各种病变中不同位置血管的变化与功能，将有可能带来重要突破。本综述总结了肝三种微血管在肝纤维化中的不同变化与作用，重点关注并讨论门脉、肝血窦、中央静脉三者的不同变化与功能，并指出该领域未来的研究方向。