南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2020年第10期

• 胃癌中Piwil1基因启动子区rs28416520位点单核苷酸多态性及其临床意义

  李珍珍, 周兰庭, 翟立红, 肖 娟, 程正江

  目的分析Piwil1基因启动子区域的单核苷酸多态性（SNP）和胃癌的相关性。方法利用实时定量PCR检测3例胃癌患者肿瘤组织中Piwil1mRNA的表达，并通过肿瘤转录组测序数据库分析胃癌组织中Piwil1mRNA的表达水平。采用PCR克隆出Piwil1基因启动子区的序列，直接测序法测定24例胃癌患者和29例健康对照者的基因多态性，并使用SnapGene软件对测序结果进行分析。结果对Cancer RNA-Seq Nexus数据库查询结果和3例胃癌患者肿瘤组织和癌旁组织的实时定量PCR检测结果进行分析，发现胃癌组织中Piwil1基因表达量较癌旁组织高。检测到Piwil1基因启动子两个CpG区域的7个SNP位点，发现仅有一个SNP位点和胃癌有相关性。CpG 67区域rs28416520位点基因型GG、GA、AA在胃癌组中的频率分别为79.2%、16.7%、4.1%，在健康对照组中分别为37.9%、55.2%、6.9%，胃癌组GG基因型频率显著高于对照组（OR=0.144，95%CI：0.045~0564，χ2=9.071，P<0.01）。胃癌组rs28416520等位基因G的频率显著高于对照组（87.5%vs65.5%；OR=0.271，95%CI：0.099~0.766, χ2=6.856，P<0.01）。其它6个SNP位点在胃癌组和正常组之间没有显著差异。结论Piwil1基因启动子CpG 67区域rs28416520位点基因型GG和等位基因G与胃癌发病风险升高相关，且Piwil1基因在胃癌肿瘤组织中表达升高。

• 重症感染患者接受万古霉素治疗个体化药学服务临床价值评估——一项基于真实世界数据的回顾性病例对照试验

  陈海琴, 石庆平, 孔令提, 桑 冉, 余美玲, 苏 君, 朱裕林, 朱锦秀

  目的 探讨临床药师开展万古霉素个体化药学服务的临床价值，初步建立万古霉素临床监测流程。方法 收集2017年1月~2018年12月期间开展万古霉素个体化药学服务（试验组：144例）和未开展药学服务（对照组：884例）的病例资料，基于纳入排除标准和倾向评分匹配法，筛选出两组基线数据保持基本一致的患者病例纳入研究（每组各62例，共124例），统计比较试验组和对照组之间的疗效、安全性和经济性指标。结果 疗效比较时，试验组治疗效果总有效率绝对值（95.16% vs 91.94%）大于对照组，但差异无统计学意义（P>0.05）；两组之间使用万古霉素前中性粒细胞分类比例和使用后降钙素原差异有统计学意义（P<0.05）。安全性比较时，试验组不良反应发生率绝对值低于对照组（8.06%<9.68%）但其差异无统计学意义（P>0.05）；两组之间使用万古霉素后肌酐差异有统计学意义（P<0.05）。经济性比较时，用药天数、万古霉素费用及费用占比差异有统计学意义（P<0.05）；成本—效果分析试验组经济性优于对照组（50052.78 vs 57601.23）；万古霉素使用强度试验组使用强度低于对照组（0.11<0.36）。结论 临床药师的参与可提高万古霉素的临床获益，建立的万古霉素临床监测流程值得推荐。

• miR-133b靶向YES1抑制心肌缺血再灌注引起的心肌细胞凋亡和活性氧簇的积累

  彭 兴, 林 玲, 周祥群, 杨大英, 曹 阳, 尹涛源, 刘媛媛

  目的 探究miR-133b对心肌缺血再灌注（I/R）诱导心肌细胞凋亡的作用及机制。方法 体内实验，将大鼠随机分为4组：假手术组、模型组、转染腺病毒对照组、转染miR-133b腺病毒组，每组9只。在左心室心肌的6个随机点注射转染复合物后，利用左侧冠状动脉前降支打活结方法诱导心肌I/R。通过RT-qPCR检测miR-133b的表达水平，FDP-1 HRV和BRS分析系统测定心功能，酶联免疫吸附法测定血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）和心肌肌钙蛋白（I CTnI）水平，HE染色观察心肌损伤，流式细胞术检测细胞凋亡，2,7-二氯荧光素双乙酸酯（DCFH-DA）探针测定ROS含量。体外实验，心肌H9C2细胞经缺氧/复氧（H/R）处理后，转染miR-NC或miR-133b mimic，RT-qPCR检测miR-133b的表达水平，流式细胞术检测细胞凋亡，DCFH-DA探针测定ROS含量；双荧光素酶报告实验验证靶向关系；转染pc-YES1或miR-133b mimic后，Western blot检测YES1的表达水平，流式细胞术检测细胞凋亡，DCFH-DA探针测定ROS含量。结果 与I/R组相比，AdmiR-133b组大鼠心肌中miR-133b的表达显著上调，LVEDP、cTnI和CK-MB水平显著降低，LVSP、+dp/dt、-dp/dt、HR和CF水平显著升高，病理损伤显著减轻，心肌细胞凋亡和ROS积累显著减少（P<0.01）。与H/R组相比，miR-133b mimic组H9C2细胞的miR-133b表达显著上调，细胞凋亡和ROS积累显著减少（P<0.01）。miR-133b与YES1在3’UTR区存在靶向结合位点，共转染YES1 WT和miR-133b mimic可以显著降低荧光素酶活性（P<0.01）。miR-133b mimic 组与H/R组相比H9C2细胞中YES1蛋白的表达显著下调（P<0.01）。共转染pc-YES1逆转miR-133b过表达对心肌细胞凋亡和ROS积累的作用。结论 无论是在体内还是体外，miR-133b靶向YES1抑制I/R引起的心肌细胞凋亡和ROS的积累，从而减轻心肌I/R损伤。

• 牛蒡子苷通过抑制炎症通路降低雷公藤甲素所致肾毒性

  周玉燕, 陆萧雅, 夏 丽, 姚伟强, 秦国正, 王国栋

  目的 探讨具有抗炎活性的牛蒡子苷对雷公藤甲素（TP）所致的大鼠肾毒性的保护作用和潜在机制。方法 将40只SD大鼠随机分为4组：对照组（不含药液的PBS），牛蒡子苷组（500 mg· kg-1· d-1），雷公藤甲素组（500 μg· kg-1· d-1），联合用药组（牛蒡子苷500 mg· kg-1· d-1+雷公藤甲素500 μg· kg-1· d-1）。分别予以相应处理后，采血测定肾脏生化指标，取肾脏测定肾脏指数并用HE染色观察其组织病理学变化。进一步体外培养人肾小管上皮细胞（HK-2细胞），MTT法检测细胞的存活率变化，激光共聚焦显微镜记录各组细胞的形态变化，流式细胞术测定细胞凋亡率改变，Western blot法检测炎症相关通路蛋白表达变化。结果 在体内实验中，牛蒡子苷显著降低了TP所致的大鼠血清尿素氮（BUN），肌酐（Scr）等肾脏生化指标和肾脏指数（P<0.05）。此外，牛蒡子苷明显改善了TP所致的肾细胞的水肿，空泡化和点状坏死等组织病理学改变。在体外实验中，牛蒡子苷抑制了TP诱导的HK-2细胞毒性，24 h细胞存活率明显升高（P<0.05）；改善了凋亡的细胞形态，细胞凋亡率显著下降（P<0.05）；逆转了炎性通路中IκBα和Nuclear p65蛋白表达（P<0.05）。结论 牛蒡子苷可以减轻雷公藤甲素所致的肾损害，其机制可能与其抗炎活性有关。

• 高脂饮食和运动影响妊娠中期大鼠皮下和腹膜脂肪组织中asprosin和CTRP6的表达

  杨 昭, 蒋佳男, 黄佳琪, 招雨佳, 罗 肖, 宋 琳

  目的 研究孕期高脂饮食和运动对皮下和腹膜后脂肪组织中asprosin和CTRP6表达的影响。方法 从妊娠第1天开始，大鼠分别以脂肪含量13.5%的常规饲料和脂肪含量60%的高脂饲料喂养，妊娠第3天运动组大鼠放开转轮开始自主运动，饮食和运动处理持续整个孕期。按照处理将妊娠Sprague-Dawley大鼠随机分为4组：正常饮食非运动组（CH-SD）、正常饮食运动组（CH-RW）、高脂饮食非运动组（HF-SD）、高脂饮食运动组（HF-RW）。于妊娠第14天用RT-qPCR测定脂肪组织中asprosin和CTRP6 的 mRNA 表达水平，Western blotting 测定 asprosin 和 CTRP6 的蛋白表达水平。结果 腹膜后脂肪组织中，asprosin mRNA表达在HF-RW组显著高于CH-SD组、CH-RW组和HF-SD组（P<0.001）。皮下脂肪组织中，asprosin mRNA表达在HFSD 组显著高于 CH-SD 组（P=0.0234），而 HF-RW 组中 asprosin mRNA的表达水平正常（P=0.0494）。腹膜后脂肪组织中，CTRP6 mRNA水平在HF-RW组显著高于CH-SD组、CH-RW组和HF-SD组（P<0.0001），CTRP6蛋白水平在HF-RW组显著高于 CH-RW组和 HF-SD 组（P<0.05）。皮下脂肪组织中，CTRP6 蛋白表达在 CH-RW组显著高于 HF-SD 组和 HF-RW组（P<0.05）。皮下脂肪组织中CTRP6的蛋白水平与血糖呈显著负相关（r=-0.6038，P=0.0172），而腹膜后脂肪组织中CTRP6的蛋白水平与血糖呈显著正相关（r=0.5305，P=0.0285），且asprosin和CTRP6 mRNA在皮下脂肪组织中的表达量要显著低于其在腹膜后脂肪组织中的表达量（P<0.0001）。结论 妊娠期高脂饮食和运动会影响妊娠中期大鼠脂肪组织内asprosin和CTRP6的表达水平，且具有部位差异性。

• 一站式手术对房颤消融成功率及心功能的影响：一项倾向评分匹配研究

  朱世杰, 郑慕晗, 颜如玉, 谭振林, 赵海玉, 张建武, 彭 健

  目的 探讨在房颤消融术的基础上加行左心耳封堵术对房颤消融成功率及患者心功能的影响。方法 回顾性纳入2015年5月~2019年5月就诊于我院同时行房颤消融术及左心耳封堵术（一站式手术）的56名患者作为病例组，并运用倾向评分匹配的方法按1∶1的比例从同时期行房颤消融术的具有高卒中风险的患者（n=375）中筛选出与一站式组在临床基线资料上匹配的房颤消融组（n=56），对比两组房性心律失常的复发率以及心功能情况，同时对比两组围术期并发症和血栓栓塞事件的发生率。结果 一站式组和房颤消融组在年龄、性别、BMI、房颤病程、类型、合并症、CHA2DS2-VASc和HAS-BLED 评分上差异均无统计学意义（P>0.05）。一站式组和房颤消融组在围术期并发症的发生率上并无差异（17.9% vs 12.5%，P=0.430），一站式组血栓栓塞事件的发生率有较房颤消融组下降的趋势（1.8% vs 3.6%），但差异无统计学意义（P=1.000）。一站式手术并不提升房颤消融的成功率（OR：1.338，95%CI：0.451~3.973，P=0.600），一站式术后患者的心功能较术前明显改善（NT-pro BNP：945.3±1401.6 pg/mLvs 1520.7±2089.1 pg/mL，P=0.010；LVEF：（60.8±7.0）% vs（58.6±7.8）%，P=0.044；左心房内径：43.9±7.5 mm vs 45.6±6.3 mm，P=0.076），但房颤消融组术后心功能的改善程度更佳（P<0.005）。结论 在房颤消融术的基础上加行左心耳封堵术具有足够的安全性，且不影响房颤消融的成功率。虽然一站式术后患者的心功能明显较术前改善，但改善程度不如房颤消融术。

• SAC复合体相关基因TTK和MAD2L1基因在肺腺癌中过表达：基于大数据的生物信息学分析

  刘 铸, 郭泽钦, 龙利丽, 张艳培, 卢钰雯, 吴德华, 董忠谊

  目的 通过大数据筛选与肺腺癌预后相关的关键基因并探讨其临床价值和潜在机制。方法 基于基因表达综合数据库（GEO）中获得的GSE18842，GSE27262以及GSE33532基因表达谱进行数据分析；生物信息学方法筛选肿瘤组织和正常肺组织的差异表达基因，对其进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）和基因本体论（GO）富集分析后进行蛋白质-蛋白质相互作用网络（PPI）、模组、表达差异和预后分析和筛选。35例非小细胞肺癌标本和35例配对的癌旁正常组织，共70例组织标本分为肿瘤组和正常组对MAD2L1和TTK的表达进行了免疫组化验证。结果 共有256个基因的表达谱数据有统计学差异（P<0.05），包括66个上调基因，190个下调基因。进行功能分析后筛选出 32 个上调基因。32个基因中的29与肺腺癌预后显著相关。相较与正常肺组织，所有29个基因均在肺腺癌组织中高表达并主要富集在细胞周期通路。其中7个关键基因与纺锤体组装检查点（SAC）复合体紧密相关，负责调控细胞G2/M期行为。我们选择了SAC相关基因TTK和MAD2L1，在肺腺癌患者组织标本中观察到了TTK和MAD2L1相较与癌旁正常肺组织的过表达。结论 以TTK和MAD2L1为代表的7个SAC复合体相关基因在肺腺癌患者中存在过表达，且其过表达与预后相关。

• 薄荷醇增强白介素-13诱导的人支气管上皮细胞粘液蛋白5AC的合成与分泌

  张明洋, 王 静, 李敏超

  目的 研究白细胞介素-13（IL-13）联合薄荷醇对人支气管上皮细胞（16HBE）黏液蛋白（MUC）5AC合成及分泌的影响，并探索瞬时受体电位通道（TRP）melastatin 8（TRPM8）和抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）在此环节中所起的作用。方法 将16HBE细胞分为：对照组、IL-13组（培养基加入终浓度10 ng/mL的IL-13连续刺激）、薄荷醇组（于第6天加入1 mmol/L薄荷醇刺激）、IL-13+薄荷醇组（IL-13连续刺激6 d后加入1 mmol/L薄荷醇刺激），观察各组MUC5AC表达量、胞内Ca2+浓度和Bcl-2表达；予以Bcl-2抑制剂ABT-263、TRPM8离子通道特异性抑制剂BCTC干预，观察两者对各组MUC5AC的影响及BCTC对胞内Ca2+浓度、Bcl-2表达的影响。CCK-8法检测细胞活力，流式细胞术检测各组细胞内Ca2+荧光强度，实时荧光定量PCR检测MUC5AC及Bcl-2mRNA水平，酶联免疫吸附法检测培养液中MUC5AC含量。结果 IL-13组、薄荷醇组、IL-13+薄荷醇组MUC5AC mRNA和蛋白的表达均明显高于对照组（P<0.05），且IL-13+薄荷醇组最高并于24 h达到最高峰（P<0.01）；薄荷醇组、IL-13组、IL-13+薄荷醇组胞内Ca2+荧光强度、Bcl-2mRNA表达均明显高于对照组（P<0.05），且IL-13+薄荷醇组最高（P<0.01）；予以BCTC干预后，薄荷醇组、IL-13+薄荷醇组胞内Ca2+荧光强度、Bcl-2mRNA、MUC5AC mRNA和蛋白表达水平均显著低于相应的未干预组（P<0.05），而IL-13组未发生明显变化（P>0.05）；予以ABT-263干预后，各ABT-263干预组MUC5ACmRNA和蛋白表达水平均显著低于相应的未干预组（P<0.05）。结论 IL-13联合薄荷醇对于16HBE细胞MUC5AC的合成及分泌产生协同效应，其机制可能与TRPM8受体诱导的Bcl-2协同性增强有关。

• 唑来膦酸盐通过p38 MAPK通路调控高糖条件下破骨细胞分化生成及骨吸收功能

  蔺一凡, 谷营营, 左桂福, 贾顺义, 梁永强, 戚孟春, 董 伟

  目的 探究在高浓度葡萄糖的条件下，唑来膦酸盐（ZOL）对破骨细胞分化及功能的影响，以及p38丝裂原蛋白活化激酶（p38 MAPK）通路在其中的调控机制。方法 将RAW264.7细胞向破骨细胞方向分化诱导，分为4组：低糖组（5.5 mmol/L葡萄糖）、高糖组（16.5 mmol/L葡萄糖）、低糖+ZOL组（5.5 mmol/L葡萄糖+0.1 μmol ZOL）、高糖+ZOL组（16.5 mmol/L葡萄糖+0.1 μmol ZOL）。MTT法测定各组细胞增殖活性，光学显微镜检测RAW264.7细胞的迁移数目，免疫荧光组织化学染色检测各组破骨细胞细胞骨架的清晰程度。增加第 5 组：高糖+ZOL+SB203580（16.5 mmol/L 葡萄糖+0.1 μmol ZOL+10 μmol SB203580）后，TRAP染色鉴定各组阳性破骨细胞数量；将RAW264.7细胞与牙本质磨片共同培养，扫描电子显微镜测定各组细胞骨吸收陷窝的数量及面积；实时荧光定量PCR（Real-time PCR）及Western blotting检测破骨细胞相关因子的mRNA和蛋白的表达情况。结果 细胞增殖实验中各组细胞增殖情况无明显差别。高糖条件对RAW264.7细胞的迁移具有促进作用，差异具有统计学意义（P<0.05）；抑制细胞骨架的清晰程度及破骨细胞封闭区的形成；下调p38 MAPK、p-p38 MAPK、NFATc1、CTSK、TRAP mRNA和蛋白表达情况从而对破骨细胞的分化及功能发挥抑制作用，差异具有统计学意义（P<0.05）。加入唑来膦酸盐后，RAW264.7细胞迁移受到抑制，差异具有统计学意义（P<0.05）；细胞骨架的清晰程度进一步下降，破骨细胞封闭区的形成被进一步破坏破；p38 MAPK、p-p38 MAPK、NFATc1、CTSK、TRAP的mRNA和蛋白质表达降低，进一步抑制破骨细胞分化及功能，差异具有统计学意义（P<0.05）；加入SB203580后，破骨细胞分化和骨吸收功能受到抑制，p38 MAPK、p-p38 MAPK表达受到抑制，下游NFATc1、CTSK、TRAP表达降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 高糖条件抑制破骨细胞的分化生成和骨吸收功能。ZOL通过p38 MAPK信号通路实现了对高糖条件下破骨细胞分化及功能的抑制作用，提示p38 MAPK分子通路可作为唑来膦酸盐调控糖尿病性骨质疏松的新机制。

• 帕那替尼对内源性表达FGFR2-CCDC6融合蛋白的人胆管癌异种移植小鼠的抗肿瘤作用

  吴天宇, 蒋晓青, 徐 斌, 王 宇

  目的 探讨FGFR抑制剂帕那替尼对内源性表达FGFR2-CCDC6融合蛋白的新型胆管癌患者异种移植小鼠模型的抗肿瘤作用。方法 通过一个晚期肝内胆管细胞癌（iCCA）患者的肺转移瘤组织建立了一个表达了FGFR2-CCDC6融合蛋白异种移植（PDX）小鼠模型。将PDX小鼠模型分为4组（每组10只，帕那替尼组9只可供评估）。对照组（柠檬酸盐缓冲液）、帕那替尼组（20 mg/kg，溶于柠檬酸盐溶液中）、吉西他滨（50 mg/kg，每周腹腔注射）+顺铂（2.5 mg/kg，每周腹腔注射）组、帕那替尼联合吉西他滨+顺铂组（上述等剂量），用免疫组织化学染色对p-FGFR、p-FRS2、p-AKT、p-ERK、CD31、Ki-67进行染色评估其表达。通过裂解半胱天冬酶-3（CC3）染色和TUNEL染色试验评估细胞凋亡。Western blot 检测FGFR2、p-FGFR、AKT、p-AKT、ERK、pERK、FRS2和p-FRS2的表达。结果 与对照组相比，帕那替尼组小鼠肿瘤生长体积明显减小（P<0.0001），Ki-67染色显示肿瘤细胞增殖减少，裂解半胱天冬酶-3染色和TUNEL染色试验显示肿瘤细胞凋亡显著增加。蛋白质印迹和IHC显示，FGFR及其下游信号标记FRS2、AKT和ERK的磷酸化均降低。与对照组相比，吉西他滨+顺铂组显著抑制肿瘤生长（P<0.0001），且明显比单独使用帕那替尼更有效（P<0.0001）。但没有降低FGFR或下游信号分子FRS2、AKT和ERK的磷酸化。结论 FGFR抑制剂帕那替尼在含有FGFR2融合的胆管癌肿瘤中调节FGFR信号传导、抑制细胞增殖和诱导凋亡的能力，可作为FGFR2融合的胆管癌患者的治疗选择方案。

• 中老年人的糖代谢状态与慢性肾脏疾病的相关性

  王强梅, 甄洁玉, 关聪会, 赵 楠, 刘进进, 李红利, 傅松波, 汤旭磊, 韩艳萍, 苏 姗, 张 迪, 刘丽娟, 甄东户

  目的 探讨兰州市中老年人不同糖代谢状态与慢性肾脏疾病（CKD）的相关性。方法 采用“REACTION”研究兰州地区的基线资料，随机抽取兰州市3个社区中40~75岁的符合条件的常住居民10038名为研究对象，根据其空腹血糖、负荷后2 h血糖和自报糖尿病分为正常糖耐量（NGT）组、糖调节受损（IGR）组和糖尿病（DM）组。分别用肾小球滤过率（eGFR）和尿白蛋白/肌酐比值（ACR）评价肾功能。采用协方差分析比较不同糖代谢状态下蛋白尿的患病率及eGFR的水平。采用Logistic回归分析探讨IGR和DM是否是蛋白尿和肾功能不全（RI）的危险因素。采用多元回归分析探讨eGFR随ACR增加的趋势。结果 在整个研究人群中，蛋白尿、CKD和RI的患病率分别为26.2%、27.4%和2.5%。DM组蛋白尿、CKD和RI的患病率明显高于IGR组和NGT组（P均<0.05）。无论是否合并糖代谢异常，高血压患者蛋白尿、CKD及RI的患病率均明显高于血压正常者（P<0.05）。随着CKD1期进展到CKD4期，高龄、DM病史、高血压病史、血脂异常病史、冠心病病史、DM、高血压及血脂异常人群的比例明显增加（P<0.05）。IGR人群中，年龄、高血压、高甘油三酯（TG）血症与RI的患病风险呈正相关（OR分别为：1.113、1.904、2.608，P均<0.05）。在DM人群中，年龄、冠心病、肥胖、高TG血症及高LDL-C血症与RI的患病风险呈正相关（OR分别为：1.069、2.535、3.359、1.827、2.690，P均<0.05）。logistic回归分析显示：DM显著增加蛋白尿和RI的风险，OR分别为1.543（P=0.000）和1.446（P=0.005）。logistic回归分析及多元回归分析综合显示：虽然eGFR在DM和IGR患者中的恶化趋势相似，但IGR不是蛋白尿或RI的显著危险因素（OR=1.057，P=0.355；OR=0.918，P=0.614）。结论 DM是蛋白尿及RI的显著危险因素，IGR不是蛋白尿及RI的显著危险因素。对于糖尿病、高血压、肥胖和心血管疾病患者，特别是老年人和女性，强烈建议筛查蛋白尿和eGFR，以预防终末期肾病。

• 白三烯B4在“肺保护性”通气致肺损伤中的作用机制

  袁凌跃, 李 江, 杨 泳, 郭 欣, 刘星玲, 李丽莎, 朱晓燕, 刘 睿

  目的 探讨白三烯B4（LTB4）在“肺保护性”机械通气（LPMV）致肺损伤中的作用机制。方法 32只健康日本大耳白兔随机平均分为：溶剂预处理+假手术组（S组）、乌苯美司（白三烯A4水解酶抑制剂）预处理+假手术组（BS组）、溶剂预处理+ LPMV组（PM组）和乌苯美司预处理+LPMV组（BPM组）。BS组和BPM组先实施连续5 d的乌苯美司8 mg/ （kg· d）灌胃预处理，S组和PM组则在相同时间点灌胃给予同等容积的溶剂。乌苯美司或溶剂预处理结束后，对PM组和BPM组实验动物实施时长为5 h的LPMV：潮气量（VT）=8 mL/kg，呼气末正压（PEEP）=5 cm H2O，吸气时间：呼气时间（I∶E）=1∶2，吸入氧浓度（FiO2）=0.5，调整呼吸频率（RR）维持呼末CO2在35~45 mmHg范围内；S组和BS组则保留自主呼吸。酶联免疫法用于检测实验动物肺组织LTB4和环一磷酸腺苷（cAMP）含量；肺组织cAMP含量、蛋白激酶A（PKA）蛋白表达水平和活化Rap1蛋白（Rap1-GTP）/总Rap1蛋白比值分别用于反映cAMP/PKA和Rap1信号通路活性变化情况；用肺通透性[肺通透性指数和肺湿/干（W/D）重比值]、肺炎症反应[支气管肺泡灌洗液（BALF）中多形核白细胞（PMN）计数和肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性]和肺组织形态学评分对肺损伤的严重程度进行判断。结果 S组与BS组实验动物各检测指标无显著差异；除肺组织学评分无显著差异外，PM组和BPM组实验动物其余各指标均显著增高于S组（P<0.05）；与PM组相比，BPM组实验动物肺内LTB4生成明显减少（P<0.05），cAMP/PKA和Rap1信号通路活性进一步上调（P<0.05），肺炎症反应与肺通透性增加明显减轻（P<0.05）。结论 LPMV会造成实验动物肺内LTB4大量生成继而诱发肺炎症反应和肺通透性增加，LTB4在其中的作用机制与下调cAMP/PKA和Rap1信号通路活性有关；乌苯美司可通过抑制肺内LTB4的生成发挥抗LPMV诱导的肺炎症反应和肺通透性增加保护作用。

• 高盐刺激可诱导巨噬细胞极化从而促进肾脏成纤维细胞的增及表型转化

  陆 静, 白志勋, 匡晓燕, 李 玲

  目的 探讨高盐诱导单核巨噬细胞极化，以及极化后巨噬细胞对肾脏纤维细胞株（NRK-49F）增殖及表型转化的影响。方法 培养大鼠骨髓单核巨噬细胞及NRK-49F，随后予以高盐（Na+161 mmol/L）刺激单核巨噬细胞2 h。采用RT-qPCR检测M0、M1、M2各型巨噬细胞表面标记物，同时分别收集正常及高盐组巨噬细胞培养基，予以RT-qPCR及Elisa分别检测培养基中IL-6及TGF-β的mRNA表达与蛋白表达。随后建立巨噬细胞与NRK-49F的Transwell小室共培养体系。采用EdU及Transwell分别检测NRK-49F增殖及迁移能力。予以Western blot检测NRK-49F中collagen I、collagen III及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)相对表达情况。结果 RT-qPCR结果显示，与对照组相比，高盐组细胞中表达M2型巨噬细胞表面标记物甘露糖受体（MR）和精氨酸酶（Arg）基因的mRNA水平显著升高（P<0.05）。EdU及Transwell结果显示，共培养体系中，高盐处理巨噬细胞组上层NRK-49F增殖、迁移能力增强（P<0.05）。Western blot结果显示，高盐处理组细胞培养基可诱导NRK-49F中collagen I、collagen III及和α-SMA蛋白表达增强（P<0.05）。此外，RT-qPCR及Elisa结果显示高盐处理组单核巨噬细胞培养基中IL-6与TGF-β1均显著高表达（P<0.05）。结论 高盐处理可诱导单核巨噬细胞像M2型极化并分泌IL-6与TGF-β1，从而诱导NRK-49F增殖及表型转化。

• 双氢青蒿素通过调节肥大细胞浸润减轻小鼠特应性皮炎

  薛 雪, 董哲宇, 邓 愉, 殷淑娴, 王 萍, 廖燕霞, 胡国栋, 陈英华

  目的 观察不同剂量的双氢青蒿素（DHA）对C57BL/6小鼠特应性皮炎（AD）的治疗作用及相关机制。方法 将42只C57BL/6小鼠随机分为7组，每组6只：空白对照组（无处理）、模型对照组（2,4-二硝基氯苯DNCB）、溶剂对照组（DNCB+溶解剂）、25 mg/kg DHA治疗组（DNCB+25 mg/kg DHA）、75 mg/kg DHA治疗组（DNCB+75 mg/kg DHA）、125 mg/kg DHA治疗组（DNCB+125 mg/kg DHA）和地塞米松治疗组（DNCB+地塞米松）。每天观测各组搔抓次数和皮损程度并进行评分。连续7 d给药后，将各组小鼠背部及耳部皮损涂抹处取材进行 HE 染色，Masson染色，甲苯胺蓝染色，观察皮肤病理学改变及炎症反应的好转情况。结果 25、75、125 mg/kg DHA治疗组，地塞米松治疗组均能缓解小鼠症状。小鼠皮损症状减轻，皮损评分降低，组织病理学改善，但125 mg/kg DHA治疗组效果最佳，能明显减少肥大细胞浸润，相对其余各组均具有统计学差异（P<0.05）。 结论DHA对小鼠AD有较好的治疗效果，125 mg/kg DHA组治疗效果最佳。推测DHA可能通过抑制肥大细胞浸润，调节局部免疫，改善AD症状。

• 医用臭氧油防治索拉非尼所致手足皮肤反应： 91例随机对照临床试验

  陈晓薇, 江一越, 张 颖, 戴文聪, 樊 蓉, 翁 勰, 贺 鹏, 晏菲菲, 郭亚兵

  目的 对比医用臭氧油和尿素软膏在预防和治疗索拉非尼治疗肝细胞癌（HCC）所导致手足皮肤反应（HFSR）的效果。方法 于2018年4月~2020年1月共入组99例依据美国国家综合癌症网（NCCN）指南诊断标准确诊为晚期原发性肝癌并且首次接受索拉非尼治疗的患者，按照数字随机方法分为试验组和对照组，其中试验组（医用臭氧油组）49例，对照组（尿素软膏组）50例。在开始服用索拉非尼治疗时，试验组和对照组患者分别给予医用臭氧油和10%尿素软膏外涂，均匀涂抹手掌和足底皮肤，包括指缝、关节处。试验组采用医用臭氧油涂抹手足，1 mL/次，3次/d；对照组采用10%尿素软膏涂抹手足，2 g/次，3次/d。两组皆护理干预12周，随访14周，每2周观察HFSR发生情况。结果 在排除8例因依从性不佳或方案违背的患者后，共计91例被纳入分析，其中试验组44例，对照组47例。在随访过程中，试验组累积16例（36.4%）发生HFSR，显著低于对照组27例（57.4%），（P<0.05）；2/3级HFSR占15.9%（7/44），低于对照组27.7%（13/47）。结论 相较于尿素软膏组，医用臭氧油可显著降低HCC患者使用索拉非尼治疗时HFSR发生率，减轻HFSR严重程度，从而改善索拉非尼治疗患者的生活质量，提高患者的治疗依从性。

• 针对单体型扩增区域的肿瘤易感变异关联分析

  耿 彧, 杨蓉蓉, 张 静

  目的 遗传变异中的单体型扩增因具有潜在的选择优势和克隆演变敏感性，成为寻找易感癌基因的一个重要标志。本文充分考虑单体型扩增状态的影响因素，有效实现稀有变异关联分析。方法 通过等位基因变异频率估计单体型扩增状态。首先采用置换检验，基于等位基因变异频率实现候选变异位点的聚类。再应用似然聚类方法，确定隐马尔科夫随机场模型中的邻域系统。此外，引入一个威尔逊区间和错误识别率的组合过滤机制，进一步提高变异位点识别精度。最后将候选集与单体型扩增状态合并到加权虚拟位点中用于关联分析。结果 通过仿真实验，分别对不同次等位基因变异频率的Ⅰ型错误率比较分析，发现Ⅰ型错误率基本稳定在2%以内。与其他5种关联分析方法分别进行Ⅰ型和Ⅱ错误率比较分析，Ⅰ型与Ⅱ型错误率均控制在2%以内，显示出其显著优势及较好的统计能力。结论 本研究提出的针对单体型扩增区域的肿瘤易感变异关联分析方法能够较为精确的识别单体型扩增区域的肿瘤易感变异，具有良好的健壮性与稳定性，可为临床诊断提供决策支持。

• 优化的概率神经网络对基于介电常数的肺癌及其周围正常组织的鉴别

  于洪峰, 孙 颖, 卢 笛, 蔡开灿, 余学飞

  目的 提出一种基于介电常数，模拟退火算法优化的概率神经网络（SA-PNN）分类鉴别方法，用于肺癌及其周围正常组织的鉴别。方法 基于开端同轴探头测量得到的肺肿瘤及其周围正常组织的介电常数，利用Statistical Dependency（SD）算法进行频率筛选，将筛选得到的频率点下的介电常数作为特征变量，使用SA-PNN进行分类鉴别。结果 经过SD算法最终筛选出3个频率点，分别为984、2724、2723 MHz，将这3个频率点下的介电常数作为特征变量，利用SA-PNN对200例样本数据进行鉴别，通过10折交叉验证，最终鉴别准确率为92.50%，灵敏度为90.65%，特异性为94.62%。结论 SA-PNN方法与传统的概率神经网络、BP神经网络、RBF神经网络以及MATLAB中的Classify判别分析函数相比，基于介电常数，SA-PNN方法对肺癌及其周围正常组织进行鉴别具有更高的准确率、灵敏度及其特异性。

• 非糜烂性反流病、反流高敏感和功能性烧心患者食管pH-阻抗反流模式比较

  张阿静, 姚文柱, 狄 佳, 崔曼莉, 张明鑫, 张 军

  目的 通过分析比较非糜烂性反流病（NERD）、反流高敏感（RH）和功能性烧心（FH）患者的食管24 h pH-阻抗监测反流模式，探讨内镜阴性烧心患者症状可能的发生机制。方法 选取我院消化科门诊和胃肠功能室的以烧心为主要症状的患者，通过胃镜、24 h pH-阻抗监测，最终纳入79例患者，包括NERD 35例，RH 16例和FH 28例，进行pH-阻抗数据分析。结果 NERD组较RH组、FH组酸反流次数显著性增加、弱碱反流次数显著性减少，差异有统计学意义（P均<0.05）；NERD组、RH组合计反流次数、混合反流次数、近端酸反流次数及百分比、近端弱酸反流次数及百分比、近端合计反流次数及百分比较FH组显著性增加，差异有统计学意义（P均<0.05）；分析反流的酸度，NERD、RH和FH三组中各种反流所占的比例之间差异有统计学意义（P<0.05），在NERD组以酸反流为主，但在RH和FH组，则以弱酸反流为主，且弱碱反流也较NERD组显著性增加。结论 NERD患者与RH患者、FH患者反流模式不同，前者以酸反流为主，后两者弱碱反流明显增多；对于pH-阻抗监测期间无症状或未记录症状的食管酸暴露正常患者，合计反流次数、混合反流次数、近端反流次数及百分比等阻抗监测指标将有助于鉴别RH和FH。

• 电针干预促进大鼠肩袖损伤修复和运动功能康复

  宋文秀, 韩晓实, 李克雷, 陈 超, 王华军, 郑小飞

  目的 观测电针治疗对肩袖损伤模型大鼠的肌腱愈合和功能恢复的治疗作用，检测关节液介素-1β（IL-1β）、IL-6、α肿瘤坏死因子（TNF-α）等3种炎症因子表达以及肩袖生物力学的影响，探讨电针治疗肩袖损伤的疗效及机制。 方法 选取90只SD大鼠，随机分为电针组、对照组及空白组各30例，其中电针组和对照组行肩袖损伤造模手术，空白组不做处理。术后电针组给予电针干预，空白组与对照组不予干预，分别于造模术后2、4、8周测定各组大鼠的右前足足底热缩足潜伏期（TWL），关节液IL-1β、IL-6、TNF-α含量以及肩袖的最大拉力负荷。结果 术后2、4、8周，对照组TWL值均低于空白组，均高于对照组（P<0.05）；在3个观测时间点，对照组IL-1β、IL-6和TNF-α含量均高于空白组，电针组的IL- 1β、IL-6和TNF-α含量均低于对照组（P<0.05）；在造模术后2周时，电针组与对照组最大载荷均小于空白组（P<0.05）。术后4、8 周时，电针干预组的最大拉力载荷高于对照组（P<0.05）。结论 电针疗法既能有效降低炎症因子的表达以缓解疼痛，又能促进损伤组织的修复以提高肩袖的生物力学性能，是肩袖损伤的有效治疗方法。

• COVID-19患者肺外多器官早期损害的临床分析

  范景如, 张永海, 潘泽群, 王良玉, 洪旭伟, 吴令杰, 郭舜奇

  目的分析COVID-19患者病程中合并早期心脏、肝脏和肾脏损害的临床表现，探讨可识别COVID-19心、肝、肾早期损害的指标。方法收集2020年1月20日~2月20日，我院收治的12例COVID-19患者病程中发热、畏寒、咳嗽、乏力等临床特征、存在的相关基础疾病，入院后第2天的血常规、电解质、血脂、止凝血功能中的主要指标及相关感染指标。收集并分析患者的肌酶激酶MB同工酶（CK-MB）、肌钙蛋白 （I aTnI）、B型钠尿肽（BNP）、心率、心电图新发改变（通过心电图检查获取）、左心室射血分数（LVEF，%）及左室总体纵向应变（GLS）（通过心脏彩超检查获取）；通过动态复查患者白蛋白（ALB）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、谷氨酰转肽酶（GGT）、直接胆红素（DBIL）、总胆红素（TBIL）等肝功能生化指标的动态变化；记录血尿素（BUN）、尿肌酐（UCR），通过计算肾小球滤过率（eGFR）、内生肌酐清除率（Ccr）及尿微量白蛋白/尿肌酐比值（UACR），评估早期肾损害发病情况,损害的发生情况,并通过检测尿微量白蛋白（MA）、α1-微球蛋白（A1M）、尿免疫球蛋白G（IGU）及尿转铁蛋白（TRU）水平。综合分析COVID-19肺外器官早期损伤的情况。结果12例COVID-19患者包括2例重型、8例普通型和2例轻型。肌钙蛋白I（aTNI）、左心室射血分数均无明显异常的情况下观察到窦性心动过速、心电图新发改变及GLS的异常率均为33.3%，CKMB与BNP的异常率均为8.3%；入院第1、3天，未见谷丙转氨酶（ALT）、谷草氨酶（AST）、谷氨酰转肽酶（GGT）升高；第7天，观察到重症COVID-19患者出现肝功能损伤，表现为ALT、AST升高；患者血肌酐、血尿素均无明显异常情况下仍观察到eGFR、Ccr及UACR的异常率分别为66.7%、41.7%、41.7%，尿液蛋白中MA、A1M、IGU、TRU异常升高率分别为33.3%、33.3%、41.7%、16.7%。结论COVID-19患者中：在aTNI、LVEF未见异常的，可通过观察患者的心电图的是否存在窦速、新发异常改变、GLS的异常，早期识别其心脏损害；早期肝损伤不明显，但仍应重视特别是重症患者肝功能指标的动态监测；在血肌酐、血尿素正常的情况下，可通过计算eGFR、Ccr及UACR及检测尿液蛋白联合早期识别肾损伤。

• 胃内水球的理性认识与合理选择

  吴良平, 戴晓江, 赵为国, 黄红艳, 莫 澧, 吴晓枫

  肥胖是一种全球性的慢性疾病，严重影响着肥胖个体的身心健康，给家庭和社会带来沉重的负担。减重手段从传统内科→内镜→外科手术呈梯次发展，不同人群根据自身需求可以选择不同的减重方式。胃内水球（IGB）是一种内镜下无创的减肥方法，通过在胃内放置占位性球囊，实现优于药物治疗的减重效果。本文简述了IGB的发展史，综述其减重效果及机制，探讨了适用人群，强调了IGB联合高强度的术后管理对维持长期减重的重要性以及未来发展趋势，旨在引导患者理性认识：IGB较高的安全性、减重效果的有限性和对术后管理的依赖性。患者可以根据身体状况、经济条件、心理状态及生活工作性质结合IGB的适应证进行合理选择。在IGB放置后结合高强度的术后管理，积极干预患者的生活方式和饮食习惯，才有可能实现长期减重及改善肥胖相关伴发病。

• COVID-19流行期间广东省普通群众及医务人员心理状况对比及影响因素调查

  刘峥嵘, 张旭东, 吕芷菡, 梁 洁, 邓玉娣, 冯麟斐

  目的 探究疫情期间广东省内普通群众及医护人员的心理健康状况及其影响因素。方法 利用线上问卷的方法进行调查，调查自3月11日开始，于3月15日结束。调查问卷内容包括4部分：基本情况部分、疫情相关情况部分、疫情认知情况调查部分、焦虑及抑郁调查部分。调查共收集有效问卷1433份，其中普通人群有效问卷706份，医务人员有效问卷727份。采用克朗巴哈系数及探索性因子分析对量表进行信、效度检验，应用单因素分析（卡方和秩和检验）及多因素分析（有序或无序logistic回归）方法对数据进一步分析。结果 校正人口学因素后的分析结果显示，两类人群的焦虑、抑郁情况与疫情认知情况无统计学差异（P>0.05），但相较于疫情前均更高。对于普通人群受调查者，多因素logistic回归结果显示，关注疫情信息达1~2 h者的焦虑的OR值为1.93（1.18，3.17），而3 h以上者焦虑的OR值为1.88（1.14，3.11）；普通人群中尚未结婚者抑郁的OR值为2.19（1.51，3.18）；不正确疫情认知与焦虑、抑郁发生正相关；尚未结婚的人、高学历的人的不良疫情认知的发生率更低；对于医务人员受调查者，多因素logistic回归结果显示，休息时间不足、对自身感染病毒的担忧易导致焦虑与抑郁；护士发生明显抑郁的OR值为2.99（1.45，6.18）；相较于非定点医院医务人员，定点医院医护人员发生明显抑郁、严重抑郁的OR值分别为0.48（0.25，0.93）及0.39（0.17，0.89）；对自身感染病毒的担忧会增加认知错误的可能性。结论 应加强普通人群及医务人员的心理干预，尤其是普通人群中尚未结婚的群体及医务人员中的护士群体，避免人们过长时间接触疫情相关信息，保证医务人员的充分休息，同时应加强在基层及医院的疫情科普宣传。