南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2023年第8期

• 西维来司他钠治疗COVID-19相关急性呼吸窘迫综合征重症患者的疗效：一项回顾性、单中心、队列研究

  罗 敏, 胡鸿彬, 孙 烨, 赵 新, 曾振华, 刘易林, 武 钢

  目的 探讨西维来司他钠治疗对COVID-19相关急性呼吸窘迫综合征（ARDS）重症患者的生存率、氧合指数和感染血清标志物的影响。方法 回顾性纳入南方医科大学南方医院重症医学科中诊断为COVID-19相关ARDS患者，从医疗系统收集其入ICU 24 h内以及出院当天的数据，并收集入ICU后第1、3、7天的CRP、PCT、IL-6和氧合指数值。采用倾向性评分匹配将接受西维来司他钠治疗的患者与未接受治疗的患者进行匹配。采用Cox回归分析与线性回归分析探讨西维来司他钠给药与院内死亡率以及住院时间之间的相关性。结果 研究纳入199名COVID-19相关ARDS重症患者。经过倾向性评分匹配，接受西维来司他钠治疗的35名患者和没有接受西维来司他钠治疗的70名患者进行了匹配。西维来司他钠治疗与院内死亡率的降低（P=0.36）、ICU住院时间的延长（P=0.39）、住院时间（P=0.68）以及氧合指数的改善（P>0.05）无关。C反应蛋白和降钙素原没有发现明显的差异，但在西维来司他钠治疗组发现IL-6水平明显降低（P=0.016）。结论 西维来司他钠与COVID-19相关ARDS重症患者的死亡率和住院时间的减少没有相关性，但与血清IL-6水平的降低有关。

• 双氢杨梅素通过诱导自噬减轻慢性帕金森病小鼠的细胞焦亡和坏死性凋亡

  张 蒙, 张源源, 牛梦竹, 朱 悦, 童诗逸, 寇现娟

  目的 探讨8周的双氢杨梅素（DHM）对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）/丙磺舒（probenecid）（MPTP/p）诱导慢性帕金森病（PD）小鼠运动功能障碍的影响及其分子机制。方法 C57BL/6小鼠腹腔注射MPTP/p构建PD模型，将60只健康雄性小鼠随机分为4组（n=15）：对照组（Control）、模型组（PD）、DHM干预组（PD+DHM）、阳性对照NEC-1抑制剂组（PD+NEC-1）。除对照组外，其余小鼠（n=45）腹腔注射MPTP（25 mg·kg-1·d-1）联合Probenecid（250 mg·kg-1·d-1），每周2次，干预5周构建慢性PD模型。造模结束后，DHM干预组进行8周DHM灌胃处理（100 mg·kg-1·d-1，5 d/周），阳性对照组进行5周NEC-1腹腔注射（6.25 mg·kg-1·d-1，2 d/周）。随机选取小鼠进行运动协调性测试（n=10）；免疫荧光染色观察黑质内TH、GFAP、Iba-1的表达（n=3）；ELISA检测小鼠血清中IL-1β；试剂盒测定纹状体内LDH酶活性；RT-PCR测定TNF-α及IL-6的mRNA水平；Western blot检测小鼠纹状体中TH和病理蛋白α-syn、神经炎症、细胞焦亡、坏死性凋亡及自噬相关蛋白的表达。1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP+）激活Bv-2小胶质细胞，采用不同浓度的DHM（3.12、6.25、12.5 μg/mL）及自噬抑制剂3-MA进行干预；Western blot检测干预后Bv-2细胞自噬及NLRP3炎症小体相关蛋白的表达水平；PI染色检测细胞的死亡情况。结果 与对照组相比，PD组小鼠存在运动功能障碍，且TH的阳性细胞数及蛋白水平显著下降（P<0.001），而DHM干预显著改善了小鼠的运动协调能力，增加TH（P=0.0023），降低α-syn的表达（P<0.001）。8周的DHM干预降低了PD小鼠纹状体中胶质细胞异常活化，下调GFAP（P=0.045）和Iba-1（P<0.001）的表达；降低TNF-α（P=0.0015）、IL-6（P<0.001）的mRNA和蛋白水平，上调IL-4（P<0.001），减轻神经炎症反应；DHM通过下调Caspase1的活性、NLRP3炎症小体、GSDMD-N、IL-1β、IL-18的表达水平（P<0.001）抑制细胞焦亡；降低LDH、p-RIPK1、RIPK1、p-RIPK3、RIPK3、MLKL的水平（P<0.001），上调Caspase8（P=0.8944），改善坏死性凋亡；上调Beclin1和ULK1（P<0.001），下调p62和LC3 Ⅰ（P<0.001），激活自噬。体外实验结果表明，不同浓度的DHM干预（3.25、6.5、12.5 μg/mL）均可通过改善MPP+诱导的Bv-2细胞自噬受损，抑制NLRP3炎症小体的激活减轻炎症，而抑制自噬钝化了DHM的抗炎功效。结论 DHM能改善慢性MPTP/p诱导PD小鼠的运动协调能力障碍，其机制可能是通过激活自噬抑制神经胶质细胞活化引起的神经炎症反应、细胞焦亡以及坏死性凋亡。

• 二甲双胍通过抑制线粒体氧化磷酸化降低结直肠癌干细胞的自我更新能力

  颜 畅, 刘 爽, 宋庆志, 胡艺冰

  目的 探讨二甲双胍抑制结直肠癌干细胞自我更新的作用及机制。方法 通过Wnt报告基因慢病毒从人原代结直肠癌类器官中分选出癌干细胞（Wnt+）和癌分化细胞（Wnt）；- 用0、5、10、20、30 μmol/L二甲双胍分别处理Wnt+细胞和Wnt-细胞，检测其对体外细胞球体形成能力的影响，并筛选合适的药物浓度。以该浓度二甲双胍处理Wnt+细胞，与空白对照相比，克隆形成实验和小鼠体内成瘤有限稀释实验检测体外和体内自我更新能力的改变；流式细胞术检测Wnt表达比例及其强度的变化；qRT-PCR检测干性、分化和Wnt信号通路下游关键基因的mRNA表达水平；Seahorse能量代谢分析仪检测细胞氧耗率和细胞外酸化率；TMRE探针检测线粒体膜电位；MitoSOX探针检测活性氧（ROS）水平。分别使用10 mmol/L半乳糖、10 μmol/L二甲双胍、5 mmol/L NAC和10 mmol/L半乳糖+10 μmol/L二甲双胍调控Wnt+细胞ROS水平并用MitoSOX探针检测验证，细胞球体形成实验检测各组自我更新能力，流式细胞术检测各组Wnt比例和Wnt信号通路活性的改变。采用10 μmol/L二甲双胍和空白对照分别与Wnt+细胞共培养，TMRE探针、MitoSOX探针、免疫荧光和流式细胞术分别检测转染酵母NADH脱氢酶NDI1和空白对照质粒对线粒体膜电位水平、细胞内ROS水平、Wnt表达比例及其信号强度的影响。结果 二甲双胍可以显著抑制Wnt+细胞自我更新形成细胞球体（P0.05）。与对照组相比，10 μmol/L二甲双胍显著抑制结直肠癌干细胞形成单克隆和移植瘤的能力（P<0.001）；显著降低其Wnt+细胞的比例和Wnt通路活性（P<0.01）；显著降低其干性和Wnt通路相关基因的mRNA水平，并升高分化相关基因的mRNA水平（P<0.05）。糖代谢相关试验显示二甲双胍显著降低Wnt+细胞氧耗率、线粒体膜电位水平和ROS水平，显著增强其细胞外酸化率（P<0.001）。半乳糖显著增强结直肠癌干细胞细胞球体形成能力、细胞内ROS水平和Wnt+细胞比例及其Wnt活性（P<0.01）；加入二甲双胍能显著抑制以上效应，并削弱半乳糖的促进效应（P<0.05）。转染NDI1替代人线粒体复合体I可显著削弱二甲双胍降低结直肠癌干细胞比例和Wnt信号通路活性的效应（P<0.001）。结论 二甲双胍通过抑制人线粒体复合体I降低结直肠癌干细胞的线粒体氧化磷酸化及细胞内ROS水平，从而抑制其Wnt信号通路降低其自我更新能力。

• 二陈汤通过调控脾脏铁转运能力改善非酒精性脂肪性肝病小鼠的铁代谢

  邓广辉, 贾 慧, 李允家, 李俊杰, 吴潮锋, 石 皓, 秦梦晨, 赵嘉敏, 刘 畅, 廖雨欣, 高 磊

  目的 探讨二陈汤对非酒精性脂肪性肝病铁稳态的影响以及调控脾脏细胞铁离子转运能力的机制。方法 将36只雄性C57BL/6J小鼠，随机分为对照组、模型组、二陈汤低剂量组（7.5 g/kg）、二陈汤中剂量组（15 g/kg）、二陈汤高剂量组（30 g/kg）、多烯磷脂酰胆碱组（9.12 mg/kg），6只/组。对照组给予低脂低糖饮食，其余组给予高脂饲料饲养12周。药物组于第7周开始灌胃给药，其余组灌胃等体积饮用水，3次/周。采用HPLC-MS检测二陈汤的活性成份；HE染色和尼罗红染色评估肝脏脂质累积情况；普鲁士蓝染色观察脾脏铁含量；蛋白印迹法、免疫组织化学法以及免疫荧光染色法检测铁转运蛋白（Fpn1）、转铁蛋白受体（TfR）、前列腺六跨膜上皮抗原3（Steap3）、血红素加氧酶1（HO-1）、Ter-119、CD163和CD68的表达。结果 与对照组相比，模型组小鼠肝组织脂质累积显著增多，而中剂量和高剂量二陈汤组可部分逆转上述结果。与多烯磷脂酰胆碱组相比，中浓度和高浓度二陈汤组的降脂效果更佳。与对照组相比，模型组小鼠脾脏铁离子含量降低，血清铁离子浓度升高（P<0.05），TfR 蛋白表达降低（P<0.05），Fpn1蛋白表达升高（P<0.05）以及Steap3蛋白表达升高（P<0.01）。药物组可降低血清铁离子水平（P<0.01），上调脾组织铁离子含量，降低Fpn1和Steap3蛋白的表达（P<0.01，P<0.05），并上调脾脏TfR蛋白的表达（P<0.05）。此外，与对照组相比，模型组脾脏HO-1表达显著降低（P<0.01），而二陈汤通过上调HO-1的表达改善脾脏CD163巨噬细胞的功能（P<0.05）。结论 二陈汤通过改善脾脏细胞铁离子转运能力抑制高脂饮食诱导的铁代谢紊乱，进而缓解NAFLD的进展。

• 脱醇红酒抑制肝细胞癌的发生和发展：基于诱导细胞周期的阻滞和凋亡

  兰 玉, 王凯风, 蓝智贤, 周何琪, 孙 剑

  目的 探讨脱醇红酒对肝细胞癌（HCC）发生发展的抑制作用，并初步探索其可能的机制。方法 不同浓度的脱醇红酒（0、5、10、25、50和100 μL/mL）处理人肝癌细胞（Huh7，HepG2和SK-Hep-1）后，采用CCK-8和克隆形成实验分别检测各组细胞的增值活性和克隆形成能力。构建裸鼠皮下瘤模型，分为实验组（脱醇红酒，300 μL/d）和对照组，干预4周后对比两组肿瘤体积。构建化学诱导小鼠肝癌模型，分为实验组（脱醇红酒，300 μL/d）和对照组，干预6周后对比两组肝脏肿瘤数量、最大肿瘤直径和肝体比。脱醇红酒（60 μL/mL）处理48 h后，利用RNA-seq对Huh7细胞转录组测序，基因集富集分析（GSEA）观察基因集及通路的变化；流式细胞术检测脱醇红酒（60 μL/mL）干预后Huh7细胞周期和凋亡变化。结果 在体外，脱醇红酒呈浓度和时间依赖性地抑制肝癌细胞的增殖活性，呈浓度依赖性地抑制其克隆形成能力。在体内，相比于对照组，脱醇红酒显著抑制实验组裸鼠皮下瘤的体积（P<0.05），也能显著抑制实验组化学诱导肝癌小鼠的肝脏肿瘤数量（P<0.001）、最大肿瘤直径(P<0.05）和肝体比（P<0.01）。RNA-seq结果显示，脱醇红酒干预后Huh7细胞内有634个基因上调和478个基因下调（|log2FC|≥2，Q≤0.05）。基因集富集分析发现，脱醇红酒能够诱导细胞周期通路相关基因集显著下调（包括E2F Targets、G2M Checkpoint、MYC Targets等）和细胞凋亡通路相关基因集上调；流式细胞检测结果表明，脱醇红酒的干预使Huh7细胞G1期阻滞，同时诱导细胞凋亡。结论 脱醇红酒对HCC的发生发展具有抑制作用，其机制可能与细胞周期和凋亡相关通路介导的肝癌细胞G1期阻滞和细胞凋亡有关。

• 乙酰紫堇灵通过抑制肠上皮细胞凋亡改善三硝基苯磺酸诱导的小鼠克罗恩病样结肠炎

  李晴晴, 黄 菊, 孙 洋, 徐赟辉, 王 炼, 张小凤, 王月月, 耿志军, 宋 雪, 左芦根, 李 静, 胡建国

  目的 探究乙酰紫堇灵（Ace）对2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的小鼠克罗恩病（CD）样结肠炎的作用及机制。方法 将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为5组：WT组、TNBS组和Ace干预组（Ace-10组、Ace-20组和Ace-40组），每组8只。TNBS组和Ace干预组小鼠均采用TNBS诱导建立结肠炎模型，Ace干预组分别给予10、20、40 mg/kg的Ace灌胃治疗，而TNBS组均给予等量生理盐水。通过监测体质量变化、疾病活动评分（DAI）、结肠长度测量、HE染色和组织学评分评估Ace对TNBS结肠炎小鼠的保护作用。小鼠结肠组织经免疫荧光检测Claudin-1、Western blot检测紧密连接蛋白（Claudin-1和ZO-1）和凋亡相关蛋白（C-caspase3、Bax和Bcl-2）以及Tunel染色检测肠上皮细胞凋亡的数量。采用结肠类器官经脂多糖诱导建立凋亡模型，分为Control组、脂多糖组及Ace组，采用免疫荧光检测Claudin-1以及Western blot检测Claudin-1、ZO-1、C-caspase3、Bax和Bcl-2的表达。利用网络药理学预测Ace抑制肠上皮细胞凋亡的分子机制可能与PI3K-AKT通路相关，采用Western blot验证小鼠结肠组织和结肠类器官中p-PI3K和p-AKT的表达。体外凋亡模型中加入PI3K-AKT信号通路激活剂（740Y-P），Western blot验证结肠类器官中p-PI3K、p-AKT、C-caspase3、Bax及Bcl-2的表达。结果 与TNBS组相比，Ace治疗可显著缓解TNBS小鼠的体质量下降、结肠长度缩短、DAI评分和炎症评分升高（P<0.05）。在Ace组小鼠结肠组织中，免疫荧光结果显示：Claudin-1的表达上调（P<0.05）；Western blot结果显示：Claudin-1、ZO-1和Bcl-2的蛋白水平升高，而C-caspase3和Bax的表达降低（P<0.05）；Tunel染色结果显示：肠上皮细胞凋亡数量减少（P<0.05）。在体外凋亡模型中，经Ace干预后，免疫荧光和Western blot结果显示，结肠类器官组织中ZO-1和Claudin-1的表达升高（P<0.05）、C-caspase3和Bax表达降低，而Bcl-2表达升高（P<0.05）。KEGG通路富集预测发现PI3K-AKT信号通路与Ace治疗CD具有相关性，且Western blot结果表明，在体内外模型中经Ace干预后p-AKT和p-PI3K的表达显著降低（P<0.05）。另外，PI3K-AKT激活剂（740Y-P）促进p-PI3K、p-AKT、C-caspase3和Bax的表达，而抑制Bcl-2的表达（P<0.05）。结论 Ace可能通过干扰PI3K/AKT信号的激活抑制肠上皮细胞凋亡，进而发挥对TNBS诱导的小鼠CD样结肠炎的保护作用。

• 桂枝茯苓胶囊通过调控NF-κB通路抑制卵巢癌细胞的迁移和诱导卵巢癌细胞的凋亡

  郭晓娟, 陈丽平, 吕 芹, 杜瑞娟, 罗 琴, 张 阳, 卞 华, 韩 立

  目的 研究桂枝茯苓胶囊（GFC）抑制人卵巢癌转移的作用和潜在机制。方法 60只Wistar大鼠随机分为4组，15只/组：给药组分别灌胃给予4、8、16 g·kg-1·d-1剂量的GFC悬液5 d，分别制备GFC低、中、高剂量含药血清，空白组给予相同体积的生理盐水制备空白血清；卵巢癌耐顺铂SKOV3/DDP细胞分为空白血清组、不同剂量GFC含药血清组和NF-κB抑制剂SN50阳性对照组。采用划痕实验检测含药血清对迁移的影响，采用流式细胞术检测含药血清对凋亡的影响，采用RT-qPCR和Western blot检测含药血清对细胞中上皮表型E-钙粘蛋白（CDH1）、间质表型N-钙黏蛋白（CDH2）、caspase 3和NF-κB mRNA和蛋白表达的影响。采用ATAC-seq检测染色质开放区域CDH1、CDH2、caspase 3和NF-κB 基因表达差异。结果 GFC含药血清可剂量依赖性地抑制SKOV3/DDP细胞迁移，增加细胞凋亡（P<0.05，P<0.01）。随着含药血清剂量增加，其对CDH2和NF-κB的抑制作用，及其对CDH1和caspase 3的诱导作用均逐渐增强（P<0.05，P0.05），但诱导CDH1蛋白表达的作用弱于SN50（P<0.01）。含药血清可减弱染色质开放区域NF-κB、CDH2基因表达，增强CDH1表达，但对caspase 3无影响。结论 GFC含药血清抑制SKOV3/DDP迁移作用可能与其诱导凋亡、caspase 3和CDH1表达，抑制CDH2和NF-κB表达，调控染色质开放区域NF-κB、CDH2和CDH1表达有关。

• ARHGAP21通过失活WNT信号通路抑制非小细胞肺癌中的上皮间质转化

  谢紫平, 刘立威, 房锦存, 钟星怡, 林俊豪, 陈逢生

  目的 探究Rho GTPase激活蛋白21（ARHGAP21）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞迁移、转移的影响并探讨其作用机制。方法 通过TCGA、CPTAC数据库和临床资料确定ARHGAP21在NSCLC中的表达与患者预后的关系；通过免疫印迹（Western blot）和免疫组化验证 ARHGAP21 在 NSCLC 的基础表达；通过慢病毒稳转构建敲低 ARHGAP21 的 NSCLC 细胞系；通过Transwell实验和划痕愈合实验检测敲低ARHGAP21对肺癌细胞体外迁移能力的影响；通过裸鼠肺转移肿瘤模型的构建检测敲低ARHGAP21对肿瘤细胞体内转移能力的影响；通过生物信息学分析预测ARHGAP21的可能作用机制；通过Western blot实验验证其相关机制。结果 ARHGAP21的低表达与不良预后相关（P<0.05）；与正常组织相比，ARHGAP21在肺癌组织中表达下调（P<0.001）；Transwell和划痕愈合实验结果显示敲低ARHGAP21促进了肺癌细胞迁移能力（P<0.001）。裸鼠尾静脉肺转移模型结果显示与阴性对照组相比，敲低ARHGAP21组肺部肿瘤转移结节数量更多（P<0.05）且具有更高表达水平的N-钙粘蛋白和波形蛋白。生物信息学分析表明，APC、GSK3β、Axin和ARHGAP21之间存在高度相关性（P<0.001）。Western blot结果显示敲低ARHGAP21能够降低β-catenin的泛素化，上调N-钙黏蛋白并激活WNT信号通路。结论 ARHGAP21的下调能够显著促进NSCLC的迁移、转移能力，这可能与ARHGAP21基因下调后激活WNT信号通路，影响APC、GSK3β、Axin的表达从而降低β-catenin的泛素化有关。

• VDAC1通过诱导气道上皮细胞铁死亡参与屋尘螨诱导的哮喘小鼠气道炎症

  黄 奕, 林丽珊, 黄浩华, 董航明

  目的 探讨电压依赖性阴离子选择性通道蛋白1（VDAC1）参与屋尘螨（HDM）诱导的哮喘气道炎症的作用及调控气道上皮细胞铁死亡的机制。方法 人气道上皮细胞（HBE）体外培养，由HDM诱导HBE细胞进行体外实验，浓度梯度刺激24 h，分为正常对照组；200 U刺激组；400U刺激组；800U刺激组。随后使用VDAC1抑制剂VBIT-4干预，分为HBE正常对照组、VBIT-4组（10 μmol/L，24 h）、HDM（800 U/mL，24 h）组、HDM（800 U/mL，24 h）+VBIT-4（10 μmol/L，24 h）组，测定VDAC1以及铁死亡标志物蛋白的表达水平。使用BALB/c小鼠给予HDM构建哮喘小鼠模型，分为正常对照组、VBIT-4滴鼻组、HDM滴鼻组、HDM+VBIT-4滴鼻组，测定气道炎症水平与铁死亡蛋白的表达水平。结果 通过使用HDM诱导的HBE细胞后，MtROS生成增多，线粒体膜电位下降，免疫印迹试验结果显示VDAC1（P=0.005）表达上调，铁死亡标记物标志物GPX4（P=0.015）表达水平显著降低，FTH1（P=0.030）水平则出现上调；而使用VBIT-4会显著抑制因HDM诱导的FTH1（P=0.037）的表达，并且恢复了GPX4（P=0.029）表达；在HDM诱导的哮喘小鼠模型中，H&E染色和肺泡灌洗细胞计数显示，相较于HDM组，HDM+VBIT-4组的气道炎症细胞浸润减少，炎症细胞数量显著减少（P=0.0002）；瑞氏-姬萨姆染色也表明VBIT-4减少了肺泡灌洗液中嗜酸粒细胞的数量（P=0.001）免疫组织化学染色显示气道上皮细胞GPX4表达在VBIT-4干预下上调。结论 VDAC1参与HDM诱导的支气管哮喘的慢性气道炎症，可能通过引起铁死亡实现的。

• 脂质运载蛋白2自限性抑制间充质干细胞的成骨细胞分化

  陈梓锋, 李胜发, 张祐鸣, 杨婉雯, 王 婷

  目的 探究脂质运载蛋白2（Lcn2）在骨发育和老年性骨质疏松的作用。方法 C3H10T1/2 MSC细胞用成骨诱导液诱导3 d或不作处理（control），收集细胞核提取染色质，以H3K27A和H3K9Me3抗体进行免疫沉淀；ChIP-seq分析了诱导成骨分化前后C3H10T1/2间充质干细胞Lcn2基因座位的修饰组蛋白结合情况；ROSE软件（利用H3K27AC信号计算）显示成骨诱导后出现超级增强子；RNA-seq结果证实Lcn2在C3H10T1/2成骨诱导后上调的倍数在所有基因中位列第4；逆转录-实时定量PCR结果用于证实Lcn2的mRNA水平在C3H10T1/2成骨诱导后上调；蛋白质组学分析了16月龄C57BL/6J雄鼠相对于3月龄雄鼠股骨远端总蛋白表达谱的差异。iTRAQ-MS/MS用于分析，16月龄的老年雄鼠的松质骨中Lcn2蛋白表达相对于3月龄雄鼠的差异；ELISA检测3月龄和16月龄老年雄鼠血清中Lcn2含量；用50、100、200、500 ng/mL浓度的Lcn2重组蛋白处理C3H10T1/2后以ALP检测成骨分化能力，以Westem blot检测早期成骨转录因子OSX和晚期成骨指标OCN。结果 iTRAQ-MS/MS结果显示，16月龄的老年雄鼠的松质骨中Lcn2蛋白表达相对于3月龄雄鼠明显上调（P<0.01）。与此对应，ELISA结果示16月龄老年雄鼠血清中Lcn2含量比3月龄对照（control）雄鼠明显升高（P<0.01）。ALP染色结果和定量结果显示加入100、200、500 ng/mL浓度Lcn2 RP后ALP表达减弱（P<0.05，P<0.01，P<0.01）。Westem blot定量结果显示OSX在100、200、500 ng/mL浓度的Lcn2 RP组中的表达减低，呈剂量依赖性（P<0.05）。Westem blot定量结果显示OCN在100、200、500 ng/mL浓度的Lcn2 RP组中的表达减低，呈剂量依赖性（P<0.05，P<0.01，P<0.001）。ROSE软件（利用H3K27AC信号计算）显示成骨诱导后Lcn2基因区域出现超级增强子。RNA-seq结果证实Lcn2在C3H10T1/2成骨诱导后上调的倍数在所有基因中位列第4。C3H10T1/2成骨诱导后上调倍数最高的Zbtb16基因区域也在成骨诱导后出现超级增强子。逆转录-实时定量PCR进一步证实了Lcn2的mRNA水平在成骨诱导后急剧升高（P<0.001）。结论 Lcn2是间充质干细胞（MSCs）正常成骨分化所必须的，但在衰老时过度表达和分泌以自限性抑制MSCs的成骨分化。

• TMEM64在肝癌组织中高表达并促进肝癌细胞的增殖和侵袭

  曹丹萍, 蔡 娟, 李艳娜, 董润雨, 王智雄, 左学良

  目的 分析TMEM64在肝癌中的表达情况及对肝癌患者预后评估价值，探讨TMEM64对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法 采用癌症基因组图谱（TCGA）数据库和基因型组织表达项目（GTEx）分析 TMEM64 在肝癌中表达水平。采用Wilcoxon秩和检验方法比较分析TMEM64基因在肝癌和癌旁组织中的表达差异。利用Kaplan-Meier曲线和Cox回归分析评估TMEM64 的表达水平对肝癌患者总生存期的影响及预后预测价值。通过单样本基因富集分析评估TMEM64的表达与免疫细胞浸润水平之间的相关性。依据 TMEM64 表达水平及相关临床变量构建基于总体生存率的nomogram图并进行验证。细胞实验中，在HCCLM3细胞中敲低TMEM64，分为si-NC（对照组）、si-TMEM64#1（敲低组1）、si-TMEM64#2（敲低组2）3个组；在Huh7细胞中过表达TMEM64，并分为vector（对照组）和TMEM64（过表达组），采用CCK-8、EdU和克隆形成实验检测TMEM64对肝癌细胞增殖的影响，使用Transwell和细胞划痕实验验证TMEM64对肝癌细胞迁移和侵袭能力的改变。结果 TMEM64在肝癌中的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.001）。Kaplan-Meier生存分析显示，TMEM64高表达与肝癌患者不良总生存时间相关，差异有统计学意义（P<0.05）。多因素Cox回归分析显示，TMEM64高表达是肝癌患者OS的独立危险因素（P<0.05）。TMEM64的表达与NK细胞、CD8+T细胞和pDCs细胞的免疫细胞浸润水平呈负相关（P<0.05）。GO、KEGG和GSEA富集分析结果显示TMEM64与信号传递及肿瘤转移相关通路显著富集。列线图和校准曲线显示模型预测效能与实际结果相符。敲低TMEM64能抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭（P<0.01），过表达TMEM64能促进肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭（P<0.01）。结论 TMEM64在肝癌中高表达，TMEM64高表达是肝癌患者不良预后的独立危险因素。TMEM64能促进肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

• 姜黄素通过Keap1-Nrf2通路抑制甲状腺乳头状癌B-CPAP细胞的增殖、迁移及侵袭

  任 丽, 邹明远, 朱行春, 徐文隽, 刘 刚, 孙俊杰, 范方田, 张从利

  目的 研究姜黄素对B-CPAP人甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响作用及其机制。方法 姜黄素（0、5、10、15、20 μmol/L）作用B-CPAP细胞，MTT法、Transwell法检测细胞存活率、迁移及侵袭；DCFH-DA试剂盒流式细胞仪检测细胞ROS水平；Western blot法验证Nrf2、Keap1蛋白变化情况，qRT-PCR法检测Nrf2、Keap1基因mRNA。结果 与0 μmol/L组细胞比较，随着姜黄素作用的时间（24、48、72 h）增加，B-CPAP细胞存活率显著下降，随着姜黄素浓度的增加细胞存活率、迁移、侵袭能力显著下降（P<0.05或P<0.01）；姜黄素剂量依赖性触发B-CPAP细胞ROS产生、并且可被N-乙酰半胱氨酸（NAC）有效逆转；20 μmol/L姜黄素组细胞Nrf2蛋白及mRNA水平显著降低、Keap1蛋白及mRNA水平表达显著升高（P<0.05或P<0.01），对细胞核、胞浆Nrf2蛋白水平的Western blot检测分析发现20 μmol/L姜黄素显著降低细胞核内Nrf2蛋白水平（P0.05）。结论 姜黄素可能通过调节Keap1-Nrf2通路抑制B-CPAP甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。

• MiR-301a-5p调节继发性甲状旁腺功能亢进症中甲状旁腺激素的分泌：基于调控钙敏感受体的表达

  柳丽丹, 钱立元, 李珮婷, 李 俊, 黄 珊, 易文君, 柳双喜, 吴 唯

  目的 探索继发性甲状旁腺功能亢进症（SHPT）中引起钙敏感受体（CaSR）低表达的miRNA及其对甲状旁腺激素（PTH）分泌的影响。方法 对6例正常甲状旁腺组织标本和11例SHPT的甲状旁腺组织标本进行了全转录组测序，结合网站的预测，初步筛选了7个有可能调控CaSR的miRNAs，通过双荧光素酶实验，选定出一个最可能调控CaSR的miRNA。采用qRT-PCR检测正常甲状旁腺组织与SHPT甲状旁腺组织中miR-301a-5p和CaSR信使RNA表达的差异，并分析其表达量与患者血清PTH水平的相关性。采用Western blot检测SHPT甲状旁腺原代细胞转染miR-301a-5p mimics、inhibitors及各自对照之后CaSR蛋白表达的情况，同时取其上清液测定PTH的分泌情况。结果 初步选定了7个有可能调控CaSR的miRNAs，分别是：miR-15a-5p、miR-15b-5p、miR-16-5p、miR-221-3p、miR-222-3p、miR-301a-5p和miR-503-5p。与正常甲状旁腺组织相比，miR-301a-5p在SHPT中表达上调（P0.05）；而CaSR信使RNA表达下调（P0.05）。在细胞实验中，当miR-301a-5p过表达时，SHPT甲状旁腺原代细胞中CaSR蛋白的表达较对照组减少（P<0.05）；反之，当miR-301a-5p的表达被抑制时，CaSR蛋白的表达较对照组增加（P0.05），而拮抗miR-301a-5p的表达后，PTH的分泌较对照组增加（P<0.05）。结论 miR-301a-5p可能通过调控SHPT中CaSR的表达而影响PTH的分泌。

• 心力衰竭患者Circ-PALLD的高表达受转录因子GATA4的转录调控

  黄 卓, 曾振宇, 李 佳, 蔡 蕊, 贺文霞, 胡淑婷

  目的 确定环状RNA-Circ-PALLD在心力衰竭中的表达变化；初步探究Circ-PALLD的生物学发生。方法 通过现有分析人和鼠心衰样本中的二代测序结果，确定候选CircRNAs；PCR扩增后进行Sanger一代测序，比对测序结果，确定对应CircRNA的反向剪接方式；纳入我院心衰患者8例，提取RNA后进行PCR扩增，检测CircRNAs与线性RNA的表达；RT-qPCR检测在衰竭心肌中Circ-PALLD与PALLD的表达水平；生物信息学预测可能调控基因PALLD的转录因子；设计并合成针对GATA4的siRNA，确定转录因子 GATA4 对 PALLD 的调控作用。结果 Sanger 测序和序列比对验证了 Circ-VWA8，Circ-VMP1，Circ-PRDM5，Circ-PLCL2，Circ-PALLD，Circ-NFATC3，Circ-MLIP，Circ-FAM208A ，Circ-ANKIB1 ，Circ-AGTPBP1的反向剪接，证明了其成环性，确定了反向剪接的外显子排列；半定量PCR结果表明Circ-PALLD，Circ-NFATC3和Circ-AGTPBP1在心衰患者的心肌组织中表达水平明显增加，而其中线性PALLD的表达水平明显降低，提示Circ-PALLD在慢性心衰中的潜在作用；通过生物信息学分析后发现PALLD的转录可能受转录因子GATA4所调控；RT-qPCR结果表明，Circ-PALLD在衰竭心肌中表达水平明显升高，而PALLD表达水平明显降低，其结果与半定量PCR结果一致；在原代乳鼠心肌细胞中敲降GATA4后Circ-PALLD与PALLD表达水平均降低。结论 Circ-PALLD在心衰中高表达，可作为慢性心衰的新型分子标志物，且转录因子GATA4在PALLD的转录中或有重要作用，因此Circ-PALLD可能为心力衰竭发生的分子机制提供新的研究方向并且为心衰治疗提供了潜在的药物靶点。

• 磁共振酰胺质子转移模态的胶质瘤IDH基因分型识别：基于深度学习的Dual-Aware框架

  楚智钦, 屈耀铭, 钟 涛, 梁淑君, 温志波, 张 煜

  目的 基于磁共振酰胺质子转移（APT）模态数据，提出Dual-Aware深度学习框架实现胶质瘤异柠檬酸脱氢酶（IDH）基因分型，实现无创性的辅助诊断。方法 共收集118例多模态磁共振脑影像数据，其中68例为野生型，50例为突变型，所有数据完成了脑部胶质瘤ROI区域勾画。APT模态成像无需造影剂，它对肿瘤的信号强度跟肿瘤恶性程度呈正相关，且对IDH野生型的信号强度高于对IDH突变型的信号强度。针对APT模态肿瘤成像及衍生区域形态多变，且相对其他模态更缺乏明显的边缘轮廓特点，构建Dual-Aware框架，引入Multi-scale Aware模块挖掘多尺度特征，Edge Aware模块挖掘边缘特征，以实现基因分型的自动识别。结果 两类Aware机制的引入能够有效提升模型对胶质瘤IDH基因分型的识别率。对各模态数据在准确率和AUC方面都取得了一定的提升，并在APT模态上取得了最佳性能，预测精度达到83.1%，AUC达到0.822，从而验证了APT模态对于脑胶质瘤IDH基因分型识别的优势和有效性。结论 本文采用的深度学习算法模型基于APT模态的图像特点构建，验证了APT模态在胶质瘤IDH基因分型识别任务中的有效性，有望在该任务利用APT模态取代目前常用的T1CE模态，避免造影剂注射，以实现无创性的IDH基因分型。

• 乙醛脱氢酶2改善急性肺损伤小鼠的肺内皮屏障及维持线粒体动力学平衡

  王丽娅, 田美惠, 李 蓉, 吴 越, 王莎莎, 吕 恒, 刘忠义, 于 影

  目的 探讨乙醛脱氢酶2（ALDH2）在脂多糖（LPS）致小鼠急性肺损伤（ALI）中的作用及潜在机制。方法 60只C57BL/6J 小鼠随机分为 Sham 组、LPS 组、LPS+ALDH2 激动剂 Alda-1 组（LPS+Alda-1）、LPS+ALDH2 抑制剂 Daidzin 组（LPS+Daidzin），15只/组。实验结束后检测肺湿干重比，伊文思蓝（EB）检测渗透量；HE染色和透射电镜观察肺组织病理变化及超微结构改变；ELISA 检测血清中 4-羟基壬烯醛（4-HNE）的水平，氧化应激试剂盒测定丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）水平；Western blot检测ALDH2、紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、线粒体融合蛋白Mfn2、OPA1和分裂蛋白Drp1、Fis1以及Nrf2核蛋白和HO-1蛋白的表达。结果 与Sham组相比较，LPS组小鼠肺组织湿干重比，EB渗透均增高（P<0.01）；肺组织结构、内皮细胞间紧密连接及线粒体损伤严重；4-HNE、MDA含量升高，CAT及SOD活性下降（P<0.01）；ALDH2、紧密连接蛋白ZO-1和Occludin、线粒体融合蛋白Mfn2和OPA1表达降低，而线粒体分裂蛋白Drp1和Fis1表达升高（P<0.05，P<0.01）；此外，Nrf2核蛋白和HO-1蛋白表达均增高（P<0.01）。应用Alda-1干预后，小鼠肺组织结构、内皮细胞间紧密连接及线粒体损伤明显改善（P<0.01）；ALDH2、ZO-1、Occludin、OPA1和Mfn2蛋白表达增高，Drp1和Fis1蛋白表达降低（P<0.05，P<0.01）；Nrf2核蛋白和HO-1蛋白表达均上调（P<0.05，P<0.01）。相比LPS+Alda-1组，LPS+Daidzin组肺部通透性增加，线粒体损伤明显；并伴有ALDH2、ZO-1、Occludin、Mfn2、OPA1、Nrf2核蛋白和HO-1蛋白表达降低，Drp1和Fis1蛋白表达升高（P<0.05，P<0.01）。结论 ALDH2可通过维持线粒体动力学平衡，抑制氧化应激，改善LPS诱导的ALI小鼠肺内皮屏障损伤，其机制可能与Nrf2/HO-1通路有关。

• 1型糖尿病可能增加甲状腺毒症的风险：基于两样本孟德尔随机化方法

  占雯婕, 赵 玲

  目的 采用两样本孟德尔随机化（MR）方法探究 1 型糖尿病（T1DM）和甲状腺毒症之间的关系。方法 利用IEUOpenGWAS project网站获取T1DM及甲状腺毒症的全基因组关联研究（GWAS）数据。筛选与T1DM密切相关且独立的单核苷酸多态性（SNPs）作为工具变量（IVs），用MR-PRESSO进行离群值检验并剔除离群值，分别运用逆方差加权法（IVW）、MR-Egger回归、加权众数法（WM）和加权中位数法（WME）进MR分析，以OR值及95% CI评价T1DM与甲状腺毒症之间是否存在关联。分别采用IVW和MR-Egger法进行Cochran Q 和Rücker Q异质性检验，用Egger-intercept法进行多效性检验、逐个剔除检验进行敏感性分析，并计算F值以评估是否存在弱IVs偏倚。结果 4种MR方法所得结果显示，整体人群中T1DM与甲状腺毒症具有正向的因果关系，且具有显著的统计学意义，IVW、MR-Egger回归、加权模型和WME计算所得OR值和95% CI分别为1.077（95% CI 1.046~1.109）、1.076（95% CI 1.031~1.124）、1.082（95% CI 1.048~1.118）、1.090（95% CI 1.052~1.129）。异质性检验结果分别为P=0.127和P=0.155，即不存在异质性；Egger-intercept结果为P=0.965，即不存在多效性；敏感性分析显示结果稳定；全部F值大于10，提示不存在弱IVs偏倚。结论 T1DM可能会增加甲状腺毒症的风险。

• 基于物理模型的级联生成对抗网络加速定量多参数磁共振成像

  刘羽轩, 楚智钦, 张 煜

  目的 探讨基于物理模型的级联生成对抗网络使用原始的多回波多线圈k空间数据加速定量多回波多参数磁共振成像方法的可行性分析与解释。方法 提出了一种基于物理模型的级联生成对抗网络，利用多域信息联合训练以及通过系统矩阵学习图像重建所需的关键参数，并自适应地优化k空间生成器和图像生成器结构来增强图像特征信息以获得高质量的重建图像。使用原始的多回波多线圈k数据加速多对比度多参数磁共振图像成像。提出了基于物理驱动的深度学习重建方法，通过建立系统矩阵函数而不是直接通过模型端到端训练的方式来增加模型的泛化能力和提高模型性能。结果 在整体回波图像质量评价方面，该模型在80例测试集上的重建图像的平均PSNR值为34.13，SSIM为0.965，NRMSE为0.114，大幅度优于本文的其它对比方法。在多对比度多参数图像重建方面，该模型评估的PDW、T1W以及T2* Map的PSNR分别为38.87、35.62和34.38，在定量上也显著优于其它对比方法，并拟合出更为清晰的大脑灰质、白质和脑脊液特征。除此以外，在重建时间相差不到10%的前提下与现有的方法相比，本研究的方法对PSNR、SSIM和NRMSE的指标提升最高可达到20%。结论 相比现有的方法，基于物理模型的级联生成对抗网络方法可以重建出更多的图像细节和特征，从而提高了图像的质量和准确性，并有望将其应用于临床诊疗流程中。

• 肺泡一氧化氮在间质性肺疾病诊断及鉴别中的应用价值

  常潇丹, 陈美佳, 廖 画, 董航明, 蔡绍曦

  目的 探讨呼出气一氧化氮（eNO）在间质肺疾病诊断及鉴别诊断中的应用价值。方法 根据欧洲呼吸学会关于eNO的指南，收集68例健康者和45例间质性肺疾病（ILD）患者，其中包括18例结缔组织相关间质性肺疾病（CTD-ILD），27例非结缔组织相关间质性肺疾病（non CTD-ILD），在流速50 mL/s和200 mL/s时检测呼出气一氧化氮（FeNO）值和肺泡一氧化氮（CaNO）值，比较组间及亚组间eNO差异，应用受试者工作特征曲线（ROC）分析eNO的预测价值。并在ILD组探索CaNO与肺功能指标的相关性。结果 ILD组CaNO、FeNO50、FeNO200水平高于健康对照组（P<0.05）；Logistic回归分析显示CaNO和FeNO200是发生ILD的危险因素；ROC曲线分析显示CaNO和FeNO200联合诊断ILD的曲线下面积为0.829（95% CI：0.752~0.906）。在ILD组中，CaNO水平与肺一氧化碳弥散量占预计值的百分比呈负相关（r=-0.471，P<0.05）。ILD组中分组比较显示CTD-ILD组CaNO值明显高于非CTD-ILD组（P<0.05）。ROC曲线分析显示CaNO鉴别CTD-ILD和非CTD-ILD曲线下面积为0.725（95%CI：0.576~0.875）。结论 CaNO在诊断ILD和鉴别CTD-ILD方面具有一定的价值。

• 社会经济学地位与盲肠腺癌死亡风险的关系：一项基于美国人群的分析

  邵子安, 吕 军

  目的 通过监测、流行病学和最终结果（SEER）数据库了解美国复杂社区水平的社会经济学地位（SES）与盲肠腺癌患者死亡率之间的关系。方法 通过SEER数据库对2011~2015年确诊的美国盲肠腺癌患者的信息进行查询。采用因子分析、聚类分析、单变量和多变量COX比例风险模型，确立了5个社会保障因素：因素1：经济和教育劣势；因素2：与移民有关的特征（语言隔离高，国外出生率高，住宅拥挤率高）；因素3：县内搬迁率高；因素4：州内搬迁率高；因素5：国内搬迁率高。确定了5个SES定义的集群。结果 在17 185例患者中，全因死亡人数为5948例，存活人数为11 237例。在多变量COX回归分析中，以集群1（贫困率低、受教育程度高）为参考，集群 3（县内流动率高）的 HR 值为 1.13（95% CI=1.04-1.21，P<0.05），风险比集群1高13%。集群4（语言隔离率低、国外出生率低和住宅拥挤率低、国内流动率低）的HR值为1.15（95% CI=1.07-1.24，P<0.001），风险比集群1高15%。集群5（经济和教育劣势、与移民有关特征、国内流动率低）的HR值为1.11（95% CI=1.03-1.20，P<0.01），风险比集群1高11%。相关SES指标的因素基于盲肠腺癌患者的死亡率显示出显著的统计学意义，表明经济水平和受教育程度低的是盲肠腺癌患者死亡的危险因素。结论 较低的社会经济学地位与美国盲肠腺癌患者的死亡风险的增加相关，且人群分布存在差异，完善医保政策和加强心理治疗可为盲肠腺癌患者的预后改善提供指导。

• 丹参新醌乙减轻ox-LDL诱导的内皮细胞损伤：基于抑制NF-κB/NLRP3信号通路介导的细胞焦亡

  李洪涛, 邓 宇, 王添乐, 黄克勇, 于传沛, 陈朝俊

  目的 探讨丹参新醌乙对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响及机制。方法 取对数生长期的人脐静脉内皮细胞，分为正常组（加入10%胎牛血清）、ox-LDL组（在正常组基础上加入100ug/mL的ox-LDL）、二甲基亚砜（DMSO）组（在ox-LDL组基础上加入0.1%浓度DMSO）、丹参新醌乙组（在ox-LDL组基础上加入由DMSO溶解的100ng/ml的丹参新醌乙），培养24 h后进行实验。微板法检测乳酸脱氢酶（LDH）表达；qRT-PCR法检测NF-κB1、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）、消皮素D（GSDMD）、白介素（IL）-1β的mRNA表达；Western Blot法检测NF-κB1、NLRP3、caspase-1、GSDMD-N的蛋白表达。免疫荧光法检测GSDMD表达情况。结果 与正常组比较，ox-LDL组、DMSO组LDH表达明显升高（P<0.01），NF-κB1、NLRP3、GSDMD、IL-1β的mRNA水平均显著上调（P<0.01），NF-κB1、NLRP3、caspase-1、GSDMD-N、IL-1β的蛋白表达水平明显升高（P<0.01）；与 ox-LDL 组、DMSO 组比较，丹参新醌乙组 LDH 表达有所降低（P<0.05），NF-κB1、NLRP3、GSDMD、IL-1β的mRNA水平显著下调（P<0.01），NF-κB1、NLRP3、caspase-1、GSDMD-N、IL-1β的蛋白水平显著降低（P<0.01），GSDMD在质膜表达抑制，入核受限。结论 丹参新醌乙可能通过NF-κB/NLRP3信号通路，抑制NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡，改善ox-LDL诱导的内皮细胞损伤。

• 锰基纳米材料用于胃肠道恶性肿瘤的化学动力治疗

  林晓丰, 黄马养, 陈君千, 周 逊, 钟卓丹, 陆文聪, 黄显莹, 刘添文

  目的 探讨携载葡萄糖氧化酶的富含锰介孔硅纳米（MSN@Mn-GOx）的制备、物化表征及其治疗胃肠道恶性肿瘤的效果。方法 检测MSN@Mn-GOx的形貌、大小、元素、价态、电位、耗氧能力及类芬顿性能；采用核磁共振成像（MRI）方法分析MSN@Mn-GOx在T1加权下的成像能力，构建荷瘤小鼠肠癌模型（n=3），通过尾静脉注射MSN@Mn-GOx观察注射前后的T1成像能力；体外试验分为Control组（PBS）、含锰介孔硅（MSN@Mn）组（20 μg/mL MSN@Mn纳米颗粒）及携载葡萄糖氧化酶的富含锰介孔硅（MSN@Mn-GOx）组（20 μg/mL MSN@Mn-GOx纳米颗粒），按上述分组对胃肠癌细胞进行处理。分别采用细胞增殖-毒性实验（CCK-8）、细胞免疫荧光实验检测MSN@Mn-GOx诱导胃肠癌细胞的活性氧（ROS）生成、细胞增殖及细胞杀伤能力的改变。结果 MSN@Mn-GOx为带负电荷的100 nm类圆形实心纳米颗粒，可催化葡萄糖产生大量氧气继而增加H2O2浓度。相比于中性H2O2溶液，MSN@Mn-GOx在低酸条件（pH=6.0）下可催化生成更多羟自由基（P<0.05）。MRI成像试验中，MSN@Mn-GOx有浓度依赖性的T1增强成像效果，在荷瘤小鼠体内观察到，相比于注射前，注射MSN@Mn-GOx后的瘤体有T1增强信号（P<0.01）。细胞免疫荧光实验显示：相比于Control组，MSN@Mn及MSN@Mn-GOx均可明显诱导胃肠癌细胞ROS产生（P<0.05）。CCK-8实验显示，相比于Control组，MSN@Mn及MSN@Mn-GOx对胃肠癌细胞浓度依赖性杀伤效果（P<0.05）。Edu实验显示，相比于Control组，MSN@Mn及MSN@Mn-GOx均可抑制胃肠癌细胞的增殖能力（P<0.05）。结论 MSN@Mn-GOx具有良好的MRI成像效果、自产H2O2能力及类芬顿性能，可诱导胃肠癌细胞内ROS产生进而产生良好的抗肿瘤效应，是胃肠道恶性肿瘤治疗的一种潜在新方法。

• 生酮饮食导致小鼠骨质疏松的转录组学

  吴秀华, 范应静, 叶永浓, 李 萍, 朱青安, 陈泽森, 李 博, 王 文, 郑 磊

  目的 通过转录组学分析探讨生酮饮食（KD）导致骨质疏松的分子机制。方法 16只8周龄雌性C57BL/6J小鼠分为喂养生酮饲料的KD组和给予普通饲料的正常饮食（Sham）组，喂养3个月。每两周监测体质量、血糖和血酮。采用Micro-CT测量小鼠股骨远端松质骨的骨微结构。提取小鼠骨髓细胞中的RNA，行转录组学检测及生物信息学分析。RT-qPCR验证显著差异基因的表达水平。结果 KD弱化小鼠松质骨的骨微结构。与Sham组相比，KD组有165个差异基因（上调91个，下调74个），包括Acot1、Mpig6b、Gp9、Ppbp、Slc2a9等基因。KEGG通路富集分析显示以Apelin信号通路、PI3K-Akt信号通路、ECM受体互作通路的富集程度和差异基因数较高。qPCR结果显示转录组学筛选的5个差异基因在KD组均显著上调，其中Acot1、Mpig6b、Ppbp上调倍数大于2，上调倍数分别为2.49±0.665倍、2.58±0.470倍和2.59±0.611倍，可能与KD导致的骨质疏松相关。结论 基于KD小鼠的转录组学分析及RT-qPCR验证表明Acot1、Mpig6b和Ppbp等基因有差异表达。KEGG通路富集分析提示以Apelin信号通路、PI3K-Akt信号通路、ECM受体互作通路的富集程度和差异基因数较高，为研究KD导致骨质疏松的分子机制奠定基础，进而为预防KD导致骨质疏松提供思路。