南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2020年第09期

• 血液穴位注射后小鼠的注射部位发生了什么变化？

  陈 永, 刘永谱, 班素芬, 汤 瑶, 邱富娟, 肖长虹

  目的 自体血液穴位注射在临床用于多种各种疾病，但是该疗法影响人体的机制尚不清楚。本研究旨在观察穴位注射血液后穴位区域的组织学变化。方法 在小鼠左侧足三里（ST-36）穴位处注射从同种小鼠收集的血液0.1 mL。注射后0、6、12、24、48、72和96 h（每个时间点3只小鼠），收集外周血和注射部位的肌肉组织用于血细胞分类和组织学研究（HE染色）。结果 穴位注射治疗后，小鼠外周血白细胞、淋巴细胞和血小板呈一定增加趋势。注射24 h后，穴位注射部位表现为急性炎症反应，注射的血液成分主要被中性粒细胞浸润，并观察到少量单核细胞，而红细胞则逐渐消失。注射后24-96 h，穴位主要表现为慢性炎症反应，单核细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、成纤维细胞浸润逐渐增加；中性粒细胞逐渐减少，局部肌纤维被破坏，纤维组织增生。结论 注射到穴位的血液模拟肌肉组织中血肿的吸收过程，引发局部炎症反应以吞噬并清除血液成分，这可能是刺激穴位产生相关治疗效应的基础。

• 表没食子儿茶素没食子酸酯促进急性髓系白血病细胞凋亡的机制

  吴明彩, 蒋 明, 薛梦雅, 李 青, 程 彬, 黄梦珠, 徐 蕾, 章 尧

  目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）诱导CHD5基因去甲基化促进KG-1、THP-1细胞凋亡的相关机制。方法 设实验组及正常对照组，实验组：不同浓度（25、50、75、100、150 μg/mL）EGCG处理作用于KG-1、THP-1细胞，正常对照组：不加EGCG处理。MSP法检测KG-1、THP-1细胞CHD5基因甲基化；MTT法检测作用48 h后细胞增殖；流式细胞术检测作用48 h后细胞周期和细胞凋亡状况；RT-qPCR、Western blot检测DNMT1、CHD5、p19Arf、p53、p21Cip1基因和蛋白表达。结果 EGCG呈现剂量依赖性逆转了KG-1、THP-1细胞CHD5基因高甲基化；EGCG以剂量依赖性的方式抑制KG-1、THP-1细胞增殖（P<0.05）；EGCG诱导细胞周期停滞于G1期，促进细胞凋亡；EGCG以剂量依赖性的方式下调DNMT1的mRNA和蛋白表达，上调CHD5、p19Arf、p53、p21Cip1的mRNA和蛋白表达（P<0.05）。结论 EGCG可通过下调DNMT1降低KG-1、THP-1细胞CHD5基因高甲基化，恢复CHD5基因表达，从而上调p19Arf、p53、p21Cip1表达诱发细胞凋亡。

• DNMT1蛋白通过沉默MEG3基因促进视网膜母细胞瘤增殖

  高亚莉, 罗小玲, 孟 婷, 朱敏娟, 田渼雯, 陆晓和

  目的 探讨 DNMT1 蛋白是否通过沉默 MEG3 基因诱导视网膜母细胞瘤增殖。方法 通过转染 pcDNA-DNMT1 或si-DNMT1上调或干扰DNMT1的表达水平；通过转染pcDNA-MEG3或si-MEG3上调或干扰MEG3的表达水平；用Western blot检测视网膜母细胞瘤细胞系中DNMT1蛋白表达量；用CCK-8法及EdU法检测细胞的增殖能力；用实时荧光定量PCR技术检测转染后的视网膜母细胞瘤细胞中MEG3表达量的变化；干扰DNMT1表达后，用甲基化特异性PCR检测MEG3基因启动子DNA甲基化水平的变化。结果 视网膜母细胞瘤SO-RB50及HXO-RB44细胞中DNMT1蛋白表达量显著升高（P<0.05）。转染了 pcDNA-DNMT1 的 HXO-RB44 细胞中 DNMT1 蛋白表达增加，细胞增殖能力增加，MEG3 表达量降低；转染了 siRNADNMT1的SO-RB50细胞DNMT1蛋白表达减少，细胞增殖能力降低，MEG3表达量增加（P<0.05）。干扰DNMT1蛋白表达后，MEG3基因启动子DNA甲基化水平降低（P<0.05）。逆转DNMT1蛋白对MEG3基因的调控后，DNMT1蛋白调控RB细胞增殖的能力减弱（P<0.05）。结论 在视网膜母细胞瘤细胞中，DNMT1蛋白表达的上调，诱导了MEG3基因启动子DNA甲基化失活，最终导致细胞异常增殖。

• miR-200c-3p靶向CCNE2抑制肾母细胞瘤细胞增殖

  曹 娟, 孙丽萍, 安建红, 张 欢, 何潇潇, 申 洪

  目的 预测和验证miR-200c-3p的靶基因并探讨其对肾母细胞瘤增殖的抑制作用。方法 应用生物信息学软件对miR-200c-3p在肾母细胞瘤中的靶基因进行预测，建立SK-NEP-1及G401的miR-200c-3p过表达及抑制表达的稳定细胞系。实验设未转染组（Blank）、模拟物阴性对照组（mimic NC）、miR-200c-3p模拟物组（miR-200c-3p mimic）、抑制剂阴性对照组（inhibitorNC）及miR-200c-3p抑制剂组（miR-200c-3p inhibitor）。采用 RT-PCR及Western blot方法检测CCNE2在SK-NEP-1及G401不同组中的表达水平，荧光素酶报告基因检测miR-200c-3p 和CCNE2的靶向关系，细胞计数盒（CCK-8）和软琼脂克隆形成实验检测miR-200c-3p对SK-NEP-1及G401细胞增殖的抑制作用。结果 生物信息学方法预测CCNE2为miR-200c-3p的靶基因之一。RT-PCR实验结果示肾母细胞瘤细胞中miR-200c-3p模拟物组的CCNE2的表达水平低于模拟物阴性对照组（P<0.05）；荧光素酶报告基因检测证实CCNE2是miR-200c-3p的靶基因（P<0.01）。Western blot示在肾母细胞瘤细胞中miR-200c-3p模拟物组的CCNE2蛋白的表达水平低于模拟物阴性对照组（P<0.05）；CCK-8和软琼脂克隆形成实验证实miR-200c-3p对肾母细胞瘤细胞的增殖能力有明显抑制作用（P<0.01）；而miR-200c-3p抑制剂组结果相反。结论 miR-200c-3p通过靶基因 CCNE2抑制肾母细胞瘤细胞的增殖。

• 急性冠脉综合征患者血浆N-乙酰-神经氨酸水平和TIMI危险分层及临床预后之间的相关性

  李妙男, 钱少环, 姚卓亚, 闵生萍, 史晓俊, 康品方, 张宁汝, 王效静, 高大胜, 高 琴, 张 恒, 王洪巨

  目的 探讨急性冠脉综合征（ACS）患者血浆N-乙酰-神经氨酸水平与心肌梗死溶栓治疗临床试验危险评分（TIMI危险评分）和临床预后之间的相关性。方法 该研究为前瞻性单中心观察性研究，连续纳入2018年10月~2019年7月在我院拟行冠状动脉造影检查的患者708例。收集所有患者的一般临床资料、实验室检查结果、影像学资料和介入治疗资料。根据病史和检查结果分为：ACS组（597例）和对照组（111例）。根据TIMI危险评分对ACS组患者进一步分为高危组（104例）、中危组（425例）和低危组（68例）。采用液相色谱串联质谱法检测患者的血浆Neu5Ac水平；所有患者均行冠状动脉造影检查，计算血管病变支数和Gensini评分。设计调查表，出院后对ACS组患者通过电话或门诊随访平均15个月，统计Mace事件的发生，根据Mace事件将ACS组患者分为Mace组（80例）和非Mace组（517例）。结果 ACS组患者血浆Neu5Ac水平明显高于对照组（P<0.05），ROC曲线显示血浆Neu5Ac水平可以辅助ACS诊断[0.648（0.597~0.699）]，敏感性为39.2%，特异性为86.5%，其临界值为288.50 ng/mL。TIMI危险分层显示，高危组患者血浆Neu5Ac水平明显高于中危组和低危组患者（P<0.05），ROC曲线显示血浆Neu5Ac水平可以协助高危组患者诊断[0.645（0.588~0.703）]，敏感性为42.3%，特异性为80.1%，其临界值为327.50 ng/mL。相关性分析显示：血浆Neu5Ac与年龄、血尿酸、肌酐、脂蛋白a、D-二聚体、C反应蛋白、肌酸激酶同工酶和Gensin评分成正相关性报告P值，与高密度脂蛋白水平成负相关性报告P值。对ACS组患者随访平均15个月后，发现Mace事件组的患者血浆Neu5Ac水平明显高于非Mace事件组的患者。二元Logistic回归显示，血浆Neu5Ac水平、既往脑卒中病史是Mace事件发生的独立危险因素。结论 血浆Neu5Ac水平对ACS的诊断和危险分层具有参考价值，是ACS患者临床预后的独立危险因素。

• 长链非编码RNA LINC01106通过STAT3通路调控结直肠癌细胞增殖及凋亡

  谷昱琛, 黄莹莹, 孙一鸣, 梁 心, 孔令提, 刘 哲, 王路路

  目的 探讨LINC01106在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞增殖及凋亡能力的影响。方法 分析公共数据库结直肠癌患者的肿瘤组织及正常组织LINC01106表达水平及其对患者预后的影响；构建LINC01106敲减及过表达结直肠癌细胞株；采用CCK-8实验检测LINC01106敲减及过表达对结直肠癌细胞增殖能力的影响；流式细胞术检测LINC01106敲减对结直肠癌细胞凋亡水平的影响；免疫印迹检测LINC01106敲减对结直肠癌细胞p-STAT3、STAT3、Bcl-2蛋白表达的影响；建立裸鼠移植瘤模型观察LINC01106表达水平对结直肠肿瘤体内生长的影响，随机分为2组，9只/组。对照组：接种SW480细胞，敲减组：接种LINC01106敲减的SW480细胞。结果 TCGA数据库分析结果显示结直肠癌肿瘤组织LINC01106的表达水平明显高于正常组织，且LINC01106的表达水平与结直肠癌患者预后相关，差异具有统计学意义（P<0.05）；敲减LINC01106可以明显抑制SW480结直肠癌细胞增殖，促进凋亡（P<0.05），过表达LINC01106可以明显促进SW480结直肠癌细胞增殖；敲减LINC01106可以抑制p-STAT3和Bcl-2蛋白表达水平；下调LINC01106可以抑制裸鼠移植瘤体内生长。结论 LINC01106在结直肠癌患者肿瘤组织中表达显著上调，且与患者预后相关。INC01106可以通过STAT3/Bcl-2信号调控SW480结直肠癌细胞增殖及凋亡；LINC01106有望成为结直肠癌诊断及预后评估的潜在标志物。

• 乙型肝炎肝硬化患者行脾切除术后门静脉血栓形成的列线图预测模型的建立与验证

  徐 伟, 程 瑶, 涂 兵

  目的 建立并验证乙肝肝硬化患者行脾切除术后门静脉血栓形成的列线图预测模型，评价其临床应用价值。方法 回顾性收集重庆医科大学附属第二医院2014年1月~2020年1月期间收治的共180例乙肝肝硬化并行脾切除术患者的临床资料，本研究中患者行脾切除术后均常规予以低分子肝素或口服抗凝剂抗凝治疗，必要时加用双嘧达莫抗血小板治疗。通过随机数字表法按 7:3比例分为建模人群（120例）和验证人群（60例），并比较两人群的临床资料有无可比性。在建模人群中根据术后1月内有无门静脉血栓形成分为血栓组（49例）与无血栓组（71例），通过单因素及多因素Logistic回归分析筛选出乙肝肝硬化患者行脾切除术后门静脉血栓形成的独立危险因素，将这些因素纳入并建立列线图预测模型。分别在建模人群及验证人群中对预测模型进行内部及外部验证：采用AUROC（C指数）验证模型区分度；GiViTI校准带及Hosmer-Lemeshow检验验证模型校准度；DCA曲线验证模型临床有效性。结果 建模人群与验证人群间临床资料差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。单因素及多因素Logistic回归分析显示：血栓组与无血栓组在消化道出血史、门静脉直径、脾静脉直径、脾脏体积、静脉曲张程度、术后D-二聚体、血小板变化值等方面差异有显著统计学意义（P<0.05），其中门静脉直径、脾静脉直径、术后血小板变化值是乙肝肝硬化脾切除术后门静脉血栓形成的独立危险因素（P<0.05），将上述独立危险因素纳入并成功建立个体化列线图预测模型。分别在建模人群及验证人群中对列线图预测模型进行内部及外部验证：AUROC（C指数）分别为.880（95%CI：0.818~0.942）和0.873（95%CI：0.785~0.960），预测模型区分度良好；GiViTI校准曲线带的80%及95%CI区域均未穿过45°角平分线，P值分别为0.965和0.632，Hosmer-Lemeshow检验中P值分别为0.624和0.911，预测模型的校准度较高；DCA曲线中阈概率值设定为30.5%，两人群临床净获益分别为30%和34%，表明预测模型具有临床有效性。结论 通过建立乙肝肝硬化脾切除术后门静脉血栓形成的列线图预测模型，有助于临床早期筛选并识别乙肝肝硬化脾切除术后门静脉血栓形成的高危患者。

• 抑制Aurora激酶B的表达可促进骨肉瘤143B细胞凋亡

  吴 昕, 刘家明, 宋宏海, 杨起坤, 应 辉, 刘志礼

  目的 探讨抑制Aurora激酶B（AURKB）诱导骨肉瘤143B细胞自噬对凋亡的影响及其潜在的分子机制。方法 构建慢病毒载体（干扰慢病毒Lv/shAURKB和相应的空载慢病毒Lv/shScrambled），分别感染人源骨肉瘤细胞系143B细胞，并采用氯喹（CQ）进行干预24 h，分别作为：AURKB慢病毒干扰组（plv/shAURKB组）；阴性对照组（plv/NC组）；plv/shAURKB+CQ组；空载慢病毒+氯喹处理组（plv/NC+CQ组）。RT-qPCR检测Lv/shAURKB慢病毒载体对AURKB mRNA的干扰效率。Western blot检测AURKB、P62、LC3、Cleaved-Caspase3、Bcl2、P-ULK1（Ser555）等蛋白表达水平。采用透射电镜和LC3双标荧光法示踪143B细胞内自噬小体并检测自噬水平，流式细胞术和Tunel实验检测细胞凋亡。免疫共沉淀检测AURKB蛋白与ULK1（UNC-51样激酶1）蛋白间的相互作用关系。结果 plv/shAURKB组细胞中AURKB mRNA及蛋白表达水平均低于plv/NC组，差异有统计学意义（P<0.05）；plv/shAURKB组中自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ的比率和自噬小体数量高于plv/NC组，而P62的表达低于plv/NC组，差异均有统计学意义（P<0.05）；plv/shAURKB组细胞中促凋亡蛋白Cleaved-caspase3显著高于plv/NC组（P<0.05），而抑制凋亡蛋白Bcl2的表达水平显著低于plv/NC组（P<0.05）；与plv/shAURKB组相比plv/shAURKB+CQ组中凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3和Bcl2的表达得到明显回复（P<0.05）。Tunel实验和流式细胞术结果显示，plv/shAURKB组细胞凋亡率显著高于plv/NC组（P<0.05），plv/shAURKB+CQ组细胞凋亡率与plv /shAURKB组相比得到明显的回复（P<0.05）。plv/shAURKB组细胞中自噬启动蛋白ULK1Ser555磷酸化水平显著高于plv/NC组（P<0.05）。免疫共沉淀检测显示：免疫沉淀AURKB的同时ULK1也发生了沉淀。结论 沉默AURKB能够通过激活ULK1Ser555磷酸化诱导细胞自噬促进骨肉瘤143B细胞凋亡。

• 以caspase-1介导细胞焦亡筛选治疗糖尿病肾病潜在的中药及单体成分

  赵为陈, 何春远, 王法财

  目的 以caspase-1介导细胞焦亡为基础，筛查并探究中药及单体有效成分治疗糖尿病肾病（DN）的分子机制。方法 利用中药系统药理学分析平台（TCMSP）筛选靶向caspase-1的中药以及活性单体成分，并通过GeneCards数据库检索单体成分潜在的作用基因靶点，运用Cytoscape构建单体化合物-基因靶点网络构图。采用基因本体（GO）功能富集分析和京都基因与基因百科全书（KEGG）通路富集分析，预测中药及其单体的分子作用机制。实验SD大鼠随机分为对照组、糖尿病组（DM）和人参皂苷Rh2药物治疗组（Rh2）。DM组和Rh2组通过腹腔注射链脲佐菌素（STZ）（60 mg/kg）构建DN大鼠，对照组注射等量生理盐水。在造模成功后Rh2组大鼠给予Rh2（20 mg·kg-1·d-1）灌胃12周，对照组和DM组大鼠给予等量生理盐水灌胃。HE染色观察大鼠肾脏形态；Western blot检测焦亡标志蛋白caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18表达；试剂盒检测大鼠血浆IL-1β、IL-18含量以及cathepsin B和cathepsin L活性。结果 人参皂苷Rh2与caspase-1靶点蛋白能够有效分子对接，数据库筛选共涉及14个靶基因，GO功能富集分析共27个条目，其中分子功能（MF）条目4个，细胞组成（CC）条目10个，生物过程（BP）条目13个。KEGG通路富集筛选涉及溶酶体、糖胺聚糖降解、半乳糖代谢和鞘脂代谢通路。DM大鼠造模12周后肾脏出现显著的病理学改变，cleaved-caspase-1、GSDMD-N、IL-1β和IL-18表达显著增加（P<0.05或P<0.01），血浆IL-1β、IL-18含量显著升高（P<0.01），cathepsin B、cathepsin L活性显著降低（P<0.01）。与DM组相比，Rh2组大鼠肾脏病变得到显著改善，焦亡标志蛋白（cleaved-caspase-1、GSDMD-N、IL-1β和IL-18）表达显著下调（P<0.05或P<0.01），血浆IL-1β、IL-18含量显著降低（P<0.01），cathepsin B和cathepsin L活性显著增加（P<0.05）。结论 人参皂苷Rh2可能通过溶酶体途径抑制caspase-1介导的细胞焦亡进而改善DN肾脏损伤。

• 紫草素通过抑制人睾丸癌I-10和精原细胞瘤TCAM-2糖酵解诱导细胞死亡

  姚 越, 张 冲, 韩 兵, 汤玉锐, 熊言骏, 汪 盛

  目的 探究紫草素对睾丸癌细胞I-10和精原细胞瘤TCAM-2死亡形式的影响，并从线粒体功能和糖酵解方面探讨其可能机制。方法 I-10细胞组加入浓度分别为0 μmol/L（对照组）、1.2、1.4、1.6 μmol/L的紫草素，TCAM-2细胞组加入浓度分别为0 μmol/L（对照组）、0.5、1、1.5 μmol/L的紫草素，JC-1试剂盒和ROS试剂盒分别用来检测线粒体膜电位和活性氧的变化；乳酸试剂盒检测胞内乳酸变化；MTT法检测细胞增殖抑制；透射电镜观察细胞死亡形式；Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡；Western blot法检测线粒体通路相关凋亡蛋白Bax、Bcl-2、cleaved caspase 3和自噬相关蛋白LC3B以及糖酵解相关蛋白PKM2、GLUT1、HK2的相对表达水平。结果 MTT结果表明，紫草素能够随时间和剂量依赖性的抑制I-10和TCAM-2细胞的增殖（P<0.05），I-10组24、48、72 h的IC50值分别为1.8、1.36和1.16 μmol/L，TCAM-2组24、48、72 h的IC50值分别为2.37、0.8和0.41 μmol/ L；紫草素能通过下调I-10和TCAM-2细胞线粒体膜电位和增加细胞活性氧水平而影响其线粒体功能（P<0.05），抑制乳酸水平影响细胞糖酵解能力（P<0.05）；透射电镜和Annexin V-FITC/PI双染法检测出紫草素能够诱导I-10和TCAM-2细胞凋亡和过度自噬现象（P<0.05）；Western blot证明，紫草素可以通过下调线粒体通路相关凋亡蛋白Bax、Bcl-2、cleaved caspase 3的表达而影响I-10和TCAM-2细胞线粒体功能，下调PKM2、GLUT1、HK2影响其糖酵功能，通过上调LC3B增加细胞自噬（P<0.05）。结论 紫草素对睾丸癌细胞I-10和TCAM-2具有增殖抑制及诱导凋亡和增加自噬作用，其机制可能为紫草素影响I-10和TCAM-2细胞能量代谢功能。

• DNMT3b 基因在人膀胱癌组织中的表达及与临床预后的相关性

  曹 圆, 许 凯, 陈玢屾, 王奕铭, 李炳坤, 李朝明, 徐 鹏

  目的 探讨DNMT3b 在人膀胱癌组织的表达和意义及与膀胱癌患者术后生存期的相关性。方法 采用免疫组织化学技术（IHC）分别检测 DNMT3b 基因在 38 例手术切除人膀胱癌组织和38例相应癌旁组织的蛋白表达水平，分析其表达水平与患者年龄、性别、病理分级、肿瘤大小、T分期，淋巴转移和TNM分期临床病理参数的相关性，探讨DNMT3b对患者预后影响。结果 在38例膀胱癌组织中，DNMT3b 高表达率为 63.16%，而在对应的38例癌旁组织中高表达率为13.16%，两者间具有显著差异（P<0.05）。DNMT3b 在膀胱癌组织中高表达与患者病理分级（P=0.002）、肿瘤大小（P<0.001）、T分期（P<0.001）、淋巴转移（P=0.039）和TNM分期（P<0.001）相关，而与性别、年龄无明确相关性。多因素Logistic 回归分析发现，DNMT3b 的蛋白表达水平与肿瘤大小（P=0.008）和TNM 分级（P=0.042）相关。Kaplan-Meier生存分析显示，DNMT3b高表达组患者的总生存期明显缩短，与低表达组相比具有显著差异性（P=0.021）。结论 DNMT3b在膀胱癌组织中高表达，与病理分级、肿瘤大小、原发肿瘤范围、淋巴转移和临床分期等临床病理特征及总生存期密切相关，结果提示DNMT3b有望成为判断膀胱癌预后的标志物和肿瘤防治的新的靶点。

• 胶束毛细管电泳法检测IL-12的含量

  包鹏举, 孙 瑶, 王海华, 金孝岠, 张根葆

  目的 建立胶束毛细管电泳法鉴定白介素-12（IL-12）、检测其含量并分析IL-12去折叠的过程。方法 以50 ?m i.d.×48.5 cm未涂层毛细管为色谱分离柱，分析影响IL-12分离效果的因素并建立IL-12标准曲线；将IL-12与抗IL-12抗体混匀液在38 ℃水浴槽中孵育，40 min后在相同条件下进行毛细管电泳，将其与IL-12、抗IL-12抗体的电泳结果比较以鉴定IL-12；将IL-12与DTT在60 ℃水浴槽中孵育不同时间，并研究IL-12在不同状态下的电泳结果分析IL-12去折叠的过程。结果 建立了以含30 mmol/L十二烷基硫酸钠（SDS）的硼酸盐（pH=9.3，80 mmol/L）为缓冲液的胶束毛细管电泳在线扫集法；IL-12的峰面积与质量浓度具有良好的线性关系，线性相关系数为0.9991，线性范围为2~120 ng/L；随着IL-12与DTT孵育时间的延长，IL-12的二硫键逐渐被打开，图谱中可显示蛋白峰随之发生的变化。结论 毛细管电泳法操作简单、灵敏度高，这为今后在肿瘤等疾病中快速检测IL-12的含量以及分析其含量变化的原因提供理论依据。

• 纳米羟基磷灰石对牙本质表面矿化及吸附铅离子的作用

  杨剑珍, 元佩燕, 刘成霞, 刘 萍, 宁晖丽, 徐平平

  目的 研究纳米羟基磷灰石（nHA）对脱矿牙本质小管的表面矿化作用及对模拟污水中铅离子的吸附作用。方法 选择牙冠完好无损、新鲜拔除的前磨牙和磨牙制作离体牙本质片各30个，使用10%的枸橼酸酸蚀处理牙本质片2 min，建立小管开放的牙本质敏感模型。脱矿牙本质片用随机数字表法分组，10片/组。空白对照组：蒸馏水刷洗；HA组：0.2 g HA刷洗；n HA组：0.2 g n HA 刷洗。每天早晚分别用蒸馏水、0.2 g HA 和 0.2 g nHA刷洗牙本质片表面2 min，连续7 d，表面处理后扫描电镜（SEM）观察牙本质片表面情况，能谱仪（EDS）分析钙、磷原子百分比并采用SPSS20.0软件进行统计学分析。配制系列浓度的HA悬液和nHA悬液，分别取1 mL与50 mL初始浓度为1 mg/L的铅离子溶液反应24 h，电感耦合等离子发射光谱仪（ICP）测定上清液中铅离子浓度，计算铅离子吸附率及吸附能力。结果 扫描电镜下空白对照组的牙本质片表面光滑，牙本质小管空虚。HA组的牙本质片表面为块状颗粒物覆盖，附着疏通，管径缩小。nHA组的表面堵塞物细腻、均质，附着紧密，牙本质小管管径明显缩小。经HA刷洗后可显著增加牙本质片表面钙、磷原子百分比，增加量为：nHA组>HA组>空白对照组（P<0.000），差异具有统计学意义。在本实验的浓度范围内，HA对铅离子的吸附随浓度升高而下降，最高附率达83.01%，nHA对铅离子的吸附率随着浓度升高先升高后达吸附平衡，吸附率高达98.79%。并发现HA对铅离子的吸附能力倍数与其浓度倍数呈良好的线性相关关系。结论 nHA较普通HA具有更好的脱矿牙本质表面矿化能力和铅离子吸附能力。

• 高丽参热水提取物对神经母细胞瘤细胞parthanatos的影响

  郭远波, 张登文, 龙瑞春, 单松贵, 孙 强, 蔡 彬, 王 晟

  目的 探讨高丽参热水提取物预处理对 N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）诱导神经母细胞瘤（SH-SY5Y）细胞parthanatos的影响及其机制。方法 将SH-SY5Y细胞分为空白组、MNNG诱导组及高丽参热水提取物预处理组，空白组细胞不给予任何处理，MNNG诱导组给与MNNG 250 μmol/L刺激1 h或4 h，高丽参热水提取物预处理组在给与MNNG诱导前先给与高丽参热水提取物1 mg/mL预处理。以CCK-8和细胞流式技术检测细胞存活率，Western blot检测PAR蛋白，免疫荧光检测AIF核质分布，细胞流式技术检测细胞活性氧的表达。结果 与空白组比较，SH-SY5Y细胞的存活率随着MNNG刺激的浓度和时间的增加而逐渐降低（P<0.05）；MNNG刺激SH-SY5Y后多聚PAR蛋白表达增加（P<0.05）；高丽参热水提取物预处理可以抑制MNNG诱导的SH-SY5Y死亡，并且降低了MNNG诱导的AIF的表达和入核（P<0.05）；MNNG刺激后活性氧的表达增加，而高丽参热水提取物预处理后，活性氧的表达显著降低（P<0.05）。结论 高丽参热水提取物预处理SH-SY5Y细胞可以降低活性氧的产生并降低了MNNG诱导的parthanatos的发生。

• 基于高通量测序技术分析慢性鼻窦炎患者的肠道菌群结构特点

  黄嘉裕, 王利平, 吴小琴, 陈焕钧, 付秀丽, 陈少华, 刘 涛

  目的 采用高通量测序技术，检测和比较慢性鼻窦炎伴鼻息肉（CRSwNP）患者和正常人群的肠道菌群多样性、相对丰度及分布的改变，发现与慢性鼻窦炎伴鼻息肉显著相关的菌属结构，旨在探究慢性鼻窦炎发生发展过程中可能具有重要作用的菌群变化及预测相关代谢通路。方法 选取在广东省人民医院耳鼻喉头颈外科住院的慢性鼻窦炎伴鼻息肉（CRSwNP）患者10例作为观察组，另随机选取同期健康体检者10 例作对照，对粪便样本相关细菌采用粪便基因组DNA提取试剂盒抽提粪便样本中DNA，并进行DNA片段长度测定和定量，用一系列PCR引物扩增原核生物16S rDNA基因的V3、V4高度可变区，再进行文库构建、Illumina MiSeq测序、序列比对和物种鉴定分析。分析肠道菌群的相对丰度、多样性及分布特点，进而预测相关代谢通路。结果 慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者的肠道菌群整体结构与健康对照人群具有显著的差异（P<0.05），主要表现为糖多孢菌属（Saccharopolyspora）丰度增加，而瘤胃菌科（Ruminococcaceae）、粪球菌属（Coprococcus）、柯林斯氏菌属（Collinsella）、杆菌属（Dialister）含量降低。其中在代谢通路预测中，9条代谢通路存在显著差异（P<0.05）。结论 慢性鼻窦炎组与健康对照组对比，肠道菌群结构特点发生了明显改变，预测其与多个代谢通路水平变化相关。在慢性鼻窦炎的发生发展中，肠道菌群微生态的改变可能起到了重要作用。

• 靶向TUG1的mir-29c-3p通过调节CAPN7的表达影响膀胱癌细胞的迁移和侵袭

  余 淦, 周 辉, 许 凯, 孟丽荣, 郎 斌

  目的 探讨长链非编码RNA TUG1影响膀胱癌细胞迁移和侵袭的机制。方法 逆转录实时定量PCR检测膀胱癌组织和细胞中TUG1和mir-29c-3p的表达水平。在膀胱癌细胞系T24细胞中利用RNA干扰技术下调TUG1的表达后Transwell检测细胞的迁移和侵袭能力的变化，并检测CAPN7的表达水平。在膀胱癌细胞系T24细胞中利用mir-29c-3p类似物过表达mir-29c-3p后在转录及转录后水平检测CAPN7的表达变化。功能回复试验验证CAPN7及TUG1对膀胱癌细胞迁移和侵袭的影响。结果TUG1和mir-29c-3p在膀胱癌细胞和组织中分别表达升高（P=0.01）及减低（P<0.01），同时它们的表达呈现负相关关系（P=0.0109，r2=0.4295）。TUG1表达下调后可以抑制膀胱癌细胞T24的迁移和侵袭能力（P<0.01）。mir-29c-3p过表达后可以下调CAPN7的表达水平，CAPN7的表达水平与TUG1在膀胱癌中呈正相关关系（P=0.0139，r2=0.4081），荧光素酶报告试验验证了mir-29c-3p可同时靶向调节TUG1及CAPN7，功能回复试验验证了TUG1可以正向调节CAPN7的表达及其对膀胱癌细胞迁移和侵袭的影响（P<0.01）。结论 靶向TUG1的mir-29c-3p可通过调节CAPN7的表达影响膀胱癌细胞的迁移和侵袭。

• 碱制法炮制可显著增强斑蝥的抗肿瘤作用

  李 娴, 李姗姗, 庞金龙, 黄富豪, 郭 滨, 刘 浩

  目的 研究碱制法炮制前后斑蝥对人肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。方法 提取生品斑蝥中的斑蝥素和碱制斑蝥中的斑蝥酸钠。以人非小细胞肺癌A549细胞为研究对象，生斑蝥与碱制斑蝥处理细胞后，采用CCK-8法检测药物对细胞增殖活性的影响，划痕实验观察细胞迁移作用，Transwell实验观察细胞侵袭作用，WB观察药物对A549细胞MMP1、MMP2蛋白表达的影响，ELISA法检测细胞炎症因子IFN-γ、IL-1β和TNF-α水平，AnnexinV/PI染色观察细胞凋亡情况。结果 生斑蝥与碱制斑蝥均可使A549细胞活力明显降低；生斑蝥与碱制斑蝥均能抑制A549细胞迁移，且生斑蝥高浓度组划痕愈合程度最低，与生斑蝥高浓度组相比，差异具有显著性（P<0.01）；碱制斑蝥较生斑蝥抑制A549细胞侵袭作用更明显，差异具有显著性（P<0.01）；且生斑蝥与碱制斑蝥均可抑制 MMP1和MMP2蛋白的表达，显著上调炎症因子IFN-γ水平，但对IL-1β、TNF-α含量则没有显著影响，Annexin V/PI双染荧光拍照发现生斑蝥组与碱制斑蝥组红绿荧光强度均增加，且碱制斑蝥组荧光增加更明显。结论 碱制法炮制后斑蝥的抗癌作用显著提高，具有抑制A549细胞增殖，侵袭和迁移的作用，其机制可能与下调MMP1和MMP2的表达，促进凋亡及上调炎症因子IFN-γ水平有关。

• 人脐带间充质干细胞经添加B27的无血清培养基诱导后分化成神经元样细胞

  李云逸, 杨锦培, 傅 国, 周 攀, 刘 阳, 李志忠, 焦根龙

  目的 评价人脐带间充质干细胞（HUCMSCs）经添加B27的无血清培养基诱导后向神经元样细胞分化的能力和效率。方法 将第4代HUCMSCs分为4组：A组：血清培养基（SCM）处理14 d；B组：给予SCM+20 ng/mL神经生长因子（NGF）+10 ng/L碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）治疗14 d；C组：无血清培养基（SFM）处理14 d；D组：SFM+20 ng/mL NGF+10 ng/mL bFGF处理。每3 d更换各组细胞培养液。倒置显微镜观察神经球生长情况，流式细胞术分析细胞标记物。巢蛋白（Nestin）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、人重肽神经丝蛋白（NEFH）、神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）通过qRT-PCR和Western blotting进行定量。结果 在诱导前，HUCMSCs表现出丰富的间充质干细胞表面标志物（CD29、CD44和CD105分别为99.5%、49.6%和77.7%）的表达。在第7、10、14天观察神经元样细胞的形成，D组最优，其次是C、B、A组。qRT-PCR和Western blotting结果显示，A、B、C、D组Nestin和GFAP表达逐渐减少，NEFH和NSE表达逐渐增加，A组与其他3组的GFAP、NEFH、Nestin和NSE表达差异有统计学意义（P<0.05）。结论 添加B27的SFM可以有效地将HUMSCs分化为神经元样细胞，添加细胞因子（NGF和bFGF）使分化效果更显著。

• 雷帕霉素在兔眼滤过性手术后的抗瘢痕作用

  邰 雪, 申 颖, 赵海霞, 王召格, 关文英, 康 欣, 郭文奇

  目的 研究雷帕霉素在兔眼滤过性手术后抗瘢痕形成的作用及其产生作用可能的原因。方法 取健康成年的青紫兰兔96只，取每只兔左眼行小梁切除术，术后随机分为实验组及对照组，24只/组。术后将配制好的不同浓度雷帕霉素滴眼剂（1%、3%、5%）用于实验组，将药用蓖麻油滴眼剂用于实验对照组。4次/d。术后分别于第7、14、21、28天依照Krofeld分型法比较滤过泡的形态和功能。在术后第1、2、3、4周分别随机处死6只青紫蓝兔后，采用免疫组化法检测兔眼行小梁切除术区域的组织中增殖细胞核抗原（PCNA）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）因子局部表达情况，观察结果。体外原代培养兔眼结膜下成纤维细胞（RTFs），采用流式细胞技术检测经不同浓度雷帕霉素溶液（0、0.06、0.25、1、4 mg/L）作用后细胞的凋亡情况。结果 在术后第1、2、3周可见各实验组功能性滤过泡形成率比对照组高（P<0.05），且功能性滤过泡的形成率呈雷帕霉素药物浓度依赖性增长；免疫组化法可见实验组PCNA标记阳性成纤维细胞数表达量比相应的对照组高，各实验组数目比相应的对照组少（P<0.05），且α-SMA阳性成纤维细胞的表达程度随时间延长呈下降趋势；体外培养RTFs后，用不同浓度雷帕霉素溶液（0、0.06、0.25、1、4 mg/L）作用于RTFs，流式细胞技术检测可见RTFs在各药物浓度下均出现凋亡，当浓度为0.25 mg/L时凋亡出现明显的增加（P<0.05），并且RTFs的凋亡呈浓度依赖性。结论 雷帕霉素可以抑制兔青光眼术后滤过道组织过度增生，可较多的保留功能性滤过泡，并延长其寿命；雷帕霉素可以有效的诱导RTFs凋亡的发生，从而产生抑制青光眼术后滤过区成纤维细胞过度增殖的作用。

• 云南地区动脉瘤性蛛网膜下腔出血手术患者的长期结局分析

  孙 杰, 王泽易, 苏 平, 刘 俊, 李俊彦, 马 钢, 岑键昌, 常 谦, 刘兴海, 赵 楠

  目的 为云南地区动脉瘤性蛛网膜下腔出血（aSAH）手术患者的长期临床结局提供真实数据支撑。方法 回顾性分析85例aSAH手术患者，记录他们的人口学特征、血管危险因素、入院时的病情严重程度和动脉瘤的位置。采用改良Rankin量表（mRS）和ADL量表评价两种手术方式后患者的临床结局和生活能力。结果 34例（40.0%）行开颅夹闭，51例（60.0%）行血管内栓塞治疗。经过中位数66.23个月（IOR为12.03个月）的随访，84.7%的患者mRS评分较低，78.8%的患者能独立生活。入院时患者的WFNS分级，分别与随访时mRS评分（95% CI=1.48-19.09，P=0.011）和ADL评分（95% CI=2.55-28.77，P<0.001）显著相关。多变量分析显示，年龄（95% CI=1.02-1.23，P=0.017；95% CI=1.00-1.15，P=0.038）和入院时高WFNS分级（95%CI=2.19-141.48，P=0.007；95% CI=2.84-82.61，P=0.002）是随访时mRS评分和ADL评分的独立预测因子。两种手术方式的长期结果和住院时间无显著差异（P>0.05），但住院费用血管内栓塞组明显高于开颅夹闭组（P<0.001）。结论 在云南地区的这组患者中，老龄和入院时高WFNS分级都容易导致临床结局不良；开颅夹闭或血管内栓塞在长期治疗效果方面没有优劣；从卫生经济学的角度，高WFNS分级的患者更适合开颅夹闭。

• 亚低温治疗对脑出血模型大鼠动物行为学的影响及其机制

  彭 羽, 林 赟, 侯晓林, 廖晓灵, 刘进平

  目的 探讨亚低温治疗对脑出血大鼠脑组织炎症反应及血管新生的影响，分析其改善脑出血大鼠动物行为学的可能作用机制。方法 将120只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑出血组、亚低温组，40只/组。脑出血组、亚低温组：采用立体定向注射自体血的方法建立脑出血动物模型；假手术组：注入等体积生理盐水。亚低温组建模成功后15 min给予亚低温（30~32 ℃）干预8 h后复温（37~38 ℃），假手术组、脑出血组体温控制37~38 ℃。治疗2、4、7、14及21 d，采用Longa评分法、平衡木评分法、Berderson评分法评估大鼠动物行为学；采用免疫组化法检测大鼠脑组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、兔核转录因子-κB（NF-κB）蛋白表达；采用RT-PCR法检测缺氧诱导因子-1α（HIF1-α）、血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达。结果 治疗2、4、7、14、21 d，脑出血组、亚低温组脑出血大鼠动物行为学评分高于假手术组（P<0.05，P<0.01），脑组织TNF-α、NF-κB蛋白表达高于假手术组（P<0.01），脑组织HIF1-α mRNA、VEGF mRNA表达高于假手术组（P<0.01）；亚低温组脑出血大鼠动物行为学评分低于脑出血组（P<0.05），脑组织TNF-α、NF-κB蛋白表达低于脑出血组（P<0.01），脑组织HIF1-α mRNA、VEGF mRNA表达高于脑出血组（P<0.05，P<0.01）。结论 亚低温治疗能够改善脑出血模型大鼠动物行为学，可能与拮抗脑组织炎症反应、促进血管新生等因素有关。

• 上颌前牙区即刻种植修复中Straumann种植体对牙冠美观状况的影响

  姚钟雄, 贾 搏, 林少群, 邵 军

  目的 探讨上颌前牙区即刻种植修复中Straumann种植体对牙冠美观状况的影响。方法 选取2018年1~12月我院收治的上颌前牙区即刻种植修复患者86例，应用数字表法将其随机分为两组，对照组进行即刻种植修复，研究组在对照组的条件上联合Straumann种植体修复。比较两组患者修复效果、6月骨吸收水平、种植体长度、种植体直径、根部突度与牙龈色质、远中龈乳头、唇侧牙龈高度、近中龈乳头、唇侧牙龈曲线等美观状况、边缘骨高度变化。结果 研究组效果高于对照组（P<0.05）；研究组6月骨吸收水平小于对照组（P<0.05）；研究组种植体长度、种植体直径大于对照组（P<0.05）；研究组根部突度与牙龈色质、远中龈乳头、唇侧牙龈高度、近中龈乳头、唇侧牙龈曲线等美观评分高于对照组（P<0.05）；研究组边缘骨高度大于对照组（P<0.05）。结论 在上颌前牙区即刻种植修复过程中，应用Straumann种植体，其美观效果显著，值得应用。

• COVID-19流行期间医院急诊患者焦虑与抑郁现状调查

  王青霞, 曹晓霞, 吴秀颖, 刘江峰, 谢婧雯, 侯德仁

  目的 通过焦虑抑郁量表对COVID-19流行期间来医院急诊就医患者的焦虑抑郁现状调查，发现急性心理应激障碍患者，为COVID-19的综合防控提供资料。方法 在新型冠状病毒肺炎流行期间，医护人员在急诊就医预检分诊台通过询问将急诊就医患者分为疑似组、发热组和对照组，发放自制的焦虑自评量表（SAS）和抑郁自评量表（SDS）给每位患者，并由一位接受过量表培训的医护人员负责答疑或协助完成量表的评估。结果 共发放557套量表，其中疑似组211份，发热组167份，对照组179份；共收回516份量表，其中疑似组197份，发热组151份，对照组收回168份。疑似组、发热组和对照组焦虑与抑郁发生率分别为57.87%与58.88%，48.34%与43.71%，18.31%与18.99 %，与对照组比较，疑似组和发热组焦虑与抑郁发生率均较高（P<0.01）；疑似组与发热组比较，抑郁与焦虑发生率高（P<0.05）；说明在发热门诊就医的疑似COVID-19患者较普通发热患者、发热患者（包括疑似新冠患者和普通发热患者）较普通患者更易发生焦虑与抑郁情绪。焦虑和抑郁量表评分标准化后，疑似组、发热组和对照组标准分分别为57.38±16.25和42.58±14.27，51.23±15.29和38.32±15.39，32.58±17.8和12.25±12.94；与对照组比较，疑似组和发热组的焦虑和抑郁的标准分均高（P<0.01），与发热组比较，疑似组的焦虑和抑郁的标准分明显高（P<0.01）。结论 在COVID-19流行期间，来医院急诊就医患者，被疑似COVID-19患者和发热患者更易出现焦虑抑郁情绪，应做好综合防控。