南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2020年第06期

• 胆汁淤积和缺氧性肝炎对ICU患者预后的影响：基于重症监护-III数据库的回顾性分析

  宋慧敏,王 静,胡 畅,刘 畅,李建国

  目的 肝脏相关指标异常在危重患者中是一种常见的现象，但是危重症引起的胆汁淤积和缺氧性肝炎对患者预后的影响尚不清楚。本研究旨在探讨胆汁淤积和缺氧性肝功能障碍对ICU患者预后的影响。方法 利用重症监护-III （MIMIC-III）数据库提取2001年至2011年首次收入ICU的患者基本信息及疾病相关数据进行回顾性研究。所有病例分组为缺氧性肝炎组、胆汁淤积组及对照组；胆汁淤积定义为胆红素>2 mg/dL，碱性磷酸酶升高为正常值上限（120 U/L）的两倍，转氨酶正常。以 28 d病死率为主要结局指标分析胆汁淤积和缺氧性肝功能障碍对ICU患者预后的影响。 结果 共有5852例患者纳入研究，胆汁淤积性和缺氧性肝功能障碍发生率分别为31.9%（1869/5852）和17.9%（1046/5852）；胆汁淤积组和对照组之间死亡率无统计学差异。与对照组相比，缺氧性肝炎组有更高的28 d病死率（46% vs 35%，P<0.01），住院病死率（40% vs 31%，P<0.01），以及ICU病死率（35.7% vs 22.2%，P<0.01）。Logistic回归显示，乳酸、天冬氨酸转氨酶、国际化标准比值是患者收入ICU后28 d内死亡的独立危险因素。结论 ICU患者早期胆汁淤积性肝功能障碍的发生率高于缺氧性肝炎，但不增加患者的死亡率，提示胆汁淤积性肝功能障碍可能是肝脏对危重疾病的早期适应性改变。

• 湖北省洪湖市ICU成年COVID-19患者的临床特征和结局分析

  陆嘉茵,章 媛,程 功,何 劲,吴 凤,胡鸿彬,沙 桐,曾振华,陈仲清

  目的 描述成年重症COVID-19 患者的临床特征及结局病探讨其院内死亡的危险因素。方法 本研究纳入了来自湖北省荆州市洪湖市人民医院重症监护病房的确诊为COVID-19的20名成人患者，根据最后的结局分为生存组和死亡组，10人/组。从电子病历中获取人口学、临床表现及体征、实验室指标、治疗措施和临床结局等数据，总结ICU成年COVID-19患者的临床特征和结局分析。通过使用单因素Logistic分析两组与院内死亡相关的危险因素。结果 COVID-19确诊患者的平均年龄为70 ±12岁，其中40%为男性，起病11±9 d后入住ICU。入院时最常见的症状分别是咳嗽（19例，95%）、乏力或肌痛（18例，90%）、发热（17例，85%）和呼吸困难（16例，80%）。11名（55%）患者有基础疾病，其中高血压最常见（11例，55%），其次是心血管疾病（4例，20%）和糖尿病（3例，15%）。6人（30%）接受了有创机械通气和持续肾脏替代治疗，并最终死亡。急性心脏损伤是最常见的并发症（19例，95%）。50%的患者（10人）在入住ICU后第2~19天之间死亡，相较于死亡患者，生存患者的平均体质量更低（61.70±2.36 vs 68.60±7.15，P=0.01），格拉斯哥昏迷评分更高（14.69±0.70 vs 12.70±2.45，P=0.03），更少并发休克（2 vs 10，P=0.001）和急性呼吸窘迫综合征（2 vs 10，P=0.001）。结论 患有 COVID-19 的危重患者年龄较高，体质量较重、淋巴细胞计数减少可能是ICU中COVID-19患者死亡的潜在危险因素。

• CHA2DS2-VASc评分预测非房颤人群首发缺血性脑卒中幸存者复发风险的效果评价

  杨燕玲,严 可,李亚文,姚 强,蒋 敏,朱彩蓉

  目的 探讨CHA2DS2-VASc评分是否可用于非房颤人群首发缺血性脑卒中幸存者复发风险预测。方法 本研究共纳入768例非房颤首发缺血性脑卒中幸存者，男性475例（61.85%），女性293例（38.15%），年龄为61.52±12.59（17~90）岁。基线信息采用面对面问卷调查及查阅电子病历收集，随访信息采用3月1次的电话随访收集；采用χ2检验和Wilcoxon秩和检验比较正常随访者与失访者的基线特征；采用ROC曲线下面积（AUC）及灵敏度、特异度、阳性似然比等指标；构建Cox比例风险模型，计算C指数；评价CHA2DS2-VASc评分对非房颤人群首发缺血性脑卒中幸存者不同随访时间内复发风险的预测效果。结果 脑卒中1年、3年、5年复发率分别为10.59%、20.45%、29.46%。该评分预测非房颤人群首发缺血性脑卒中幸存者1年、3年和5年复发风险AUC值（95%CI）、最佳工作点及对应的阳性似然比分别为0.558（0.492-0.624）、4.5、1.256；0.574（0.517-0.630）、4.5、1.397；0.604（0.548-0.661）、4.5、1.655。对“充血性心力衰竭”项进行敏感性分析后提示CHA2DS2-VASc评分的预测效果基本不变。结论 CHA2DS2-VASc评分可用于非房颤人群首发缺血性脑卒中幸存者3年和5年复发风险预测，对长期脑卒中复发的预测效果更好，但预测价值均较低，建议今后可尝试对该评分进行改进或建立新的评分。

• 白三烯D4支气管激发试验在儿童气道高反应性检测中的应用价值

  刘芳君,龚财惠,秦江蛟,符 州,刘 莎

  目的 探讨白三烯D4（LTD4）支气管激发试验（BPT）在儿童气道高反应性（AHR）检测中的应用价值。方法 选取2017年11月~2018年8月在我院呼吸专科门诊随访的6~14岁患儿151例，其中哮喘缓解期患儿86例，急性支气管炎（急支）复查患儿65例。以上患儿按随机数字表法分为LTD4组和乙酰甲胆碱组（MCH组），LTD4组患儿共78例行LTD4-BPT，包括46例哮喘患儿和32例急支复查患儿；MCH组患儿共73例行MCH-BPT，包括40例哮喘患儿和33例急支复查患儿。LTD4组BPT阴性的哮喘患儿洗脱后再行MCH-BPT。记录两种BPT过程中患儿的主要不良反应。利用受试者工作特征(ROC)曲线对两种BPT的诊断学价值进行评估。结果 LTD4组与MCH组患儿基础肺功能检测结果无显著差异（P>0.05）。LTD4组哮喘患儿BPT阳性率（26.1%）明显低于MCH组（72.5%）（P<0.05）；LTD4组急支复查患儿BPT阳性率（3.1%）低于MCH组（15.2%）。LTD4组BPT阴性的哮喘患儿MCH-BPT的阳性率为58.8 %，分度以轻度、极轻度为主。LTD4组敏感性（0.2609）低于MCH组（0.725），其特异度（0.9688）稍高于MCH组（0.8485），LTD4组的ROC曲线下面积（0.635）低于MCH组（0.787）。BPT过程中，LTD4组哮喘患儿主要不良反应为咳嗽（34.8%）、气促（19.6%）、胸部紧缩感（15.2%）以及喘息（10.9%），其发生率明显低于MCH组（P<0.05），两种试验中均未发生严重不良反应。结论 LTD4-BPT在儿童临床应用中安全性高，与MCH-BPT特异性相似，但敏感性较低，诊断学价值较低，在儿童气道高反应性检测中的应用价值有限。

• 基于CT检查的正位定位像计算等效水直径

  梁保辉,付亚军,曹明娜

  目的 研究基于CT检查的正位定位像计算等效水直径（Dw）的方法，用于计算CT检查的体型特异性辐射剂量（SSDE）。方法 利用GE Revolution CT和LightSpeed VCT设备，设置管电压为80、100、120 kV分别扫描直径为16 cm和32 cm圆柱形CT剂量体模，获取正位定位像和断层图像。根据断层图像的CT值的定义获得体模材料相对于水的衰减系数，用于计算剂量体模的体模厚度转换为等效水厚度，再对定位像的灰度值与等效水厚度进行线性拟合获得刻度曲线。利用CT剂量体模和22例胸腹部检查数据验证基于定位像计算Dw的方法。结果 基于定位像和断层图像计算CT剂量体模Dw的偏差小于3%。两种方法计算未成年人胸腹部CT检查的Dw变化趋势一致，计算胸腹部CT检查中间层面的Dw和所有断层Dw均值的偏差分别小于6.6%和7.5%。结论 利用CT正位定位像和断层图像刻度定位像的灰度值与等效水厚度，建立基于定位像计算Dw的方法，可用于快速计算SSDE。

• 重组人 HER3 胞外域Ⅰ区 183-227aa 的原核表达及大鼠多克隆抗体的制备与鉴定

  朱 磊,袁平川,赵志刚,王 鑫,王国栋,颜 亮

  目的 原核表达、纯化由人表皮生长因子受体3（HER3）183-227aa肽段（HER3Ⅰ）和麻疹病毒蛋白288-302aa肽段（MVF）融合构建的重组肽（MVF-HER3Ⅰ），并制备其多克隆抗体。方法 将MVF与HER3Ⅰ融合构建重组肽MVF-HER3Ⅰ，用化学合成法合成重组肽基因，并将其与pET21b质粒和含有硫氧还蛋白（Trx）基因的pET32a质粒连接构建重组肽表达质粒，重组质粒用双酶切法鉴定。将重组质粒导入到大肠杆菌BL21（DE3）并进行表达参数优化及诱导表达。融合蛋白依次经镍离子亲和层析、肠激酶酶切和再次镍离子亲和层析制备重组肽。表达和纯化过程中的样品纯度和相对分子质量用SDS-PAGE分析。以纯化的重组肽为抗原免疫大鼠制备多克隆抗体。用ELISA法测定抗重组肽多克隆抗体效价，免疫印迹和免疫沉淀法分析抗重组肽多克隆抗体对重组肽和非变性状态HER3的识别，激光共聚焦法分析抗重组肽多克隆抗体与MCF7 细胞的结合，磺酰罗丹明B染色法测定在有无神经调节素刺激下抗重组肽多克隆抗体对高表达HER3的MCF7细胞的增殖抑制作用。结果 成功构建了重组肽的两种表达质粒，重组肽基因不能单独表达，但和Trx融合后可在37 ℃、0.2 mmol/L IPTG条件下呈可溶高表达。融合蛋白经亲和层析、酶切和再次亲和层析后得到重组肽。重组肽可刺激大鼠产生效价达1:512 000的抗重组肽多克隆抗体。该抗体不仅可特异性识别重组肽,还可特异性沉淀非变性HER3和结合于MCF7细胞的细胞膜。不管有无神经调节素刺激，该抗体均呈浓度依赖性地抑制HER3高表达的MCF7细胞的增殖（P<0.01）。结论 成功进行了重组肽 MVF-HER3Ⅰ的原核表达和纯化，制备并鉴定了抗MVF-HER3Ⅰ多克隆抗体，为在体内外深入研究该抗体对HER3信号通路的影响打下基础。

• 游离腓动脉双叶穿支皮瓣在晚期口咽癌术后缺损解剖重建中的临床效果

  李建成,宋培军,杨东昆,胡 恺,陈 默,许 操,孙 悦

  目的 评价应用游离小腿后外侧腓动脉双叶穿支皮瓣移植重建晚期口咽癌术后口咽部解剖结构和功能的临床效果。方法2016年7月~2018年7月，对26例口咽癌根治术患者术中采用小腿后外侧腓动脉双叶穿支游离皮瓣重建口咽部解剖结构，其中舌根部癌12例，咽侧壁癌5例，软腭癌9例。术中切取的双叶穿支皮瓣修复口咽部组织缺损的面积范围是72.5~40.5 cm2。重建方式：9例重建软腭—翼腭缺损，5例重建翼颌—舌外侧缘缺损，12例重建舌根-咽侧缺损。术后6月的门诊随访和12月、24月、36月的跟踪随访，评价患者开口度、吞咽功能、语音功能恢复和患者的生存状况，并通过鼻咽镜检查评价重建后的咽部结构和腭咽闭合功能，采用中文版FACT-H&N（4）量表计算患者术后生存质量。结果 26例患者游离皮瓣均成活。术后6月，患者口咽功能基本恢复正常和解剖结构恢复良好；量表调查显示：患者在身体状况、社会/家庭状况、情感状况、功能状况、核心量表总分、头颈模块和量表总分均获得较高的术后生存质量量值，与术前相比较，有明显的统计学意义（P<0.05）。结论 小腿后外侧游离腓动脉双叶穿支皮瓣穿支血管恒定，设计灵活，组织量丰富，修复方式和幅度多变，是晚期口咽癌术后重建口咽部解剖结构和功能较为理想的穿支皮瓣，且有效提高了患者的生存质量。

• 生物节律相关脑功能连接异常与双相情感障碍的相关性

  刘幔利,孟雅婧,魏 巍,李 涛

  目的 探讨双相情感障碍患者视交叉上核功能连接（FC）的改变，以及生物节律异常是否可作为双相情感障碍生物亚型分类的一种指标。方法 研究共纳入符合美国精神疾病诊断与统计手册第四版诊断标准的双相情感障碍患者138例和正常对照150例，所有被试均通过静息态脑功能磁共振扫描，使用DPARSF软件对磁共振数据分析视交叉上核脑通路功能连接图（FC值），进行t检验；并基于静息态FC值，使用Scikit-learn 0.20.1中的主成分分析和K-means对双相情感障碍患者聚类分析。结果 与正常对照相比，双相情感障碍患者右侧视交叉上核与室旁核、右侧视交叉上核与下丘脑背内侧核、左侧视交叉上核与室旁核、左侧视交叉上核与下丘脑背内侧核功能连接增强。基于以上FC值，使用无监督机器学习K-means方法对双相情感障碍的最佳聚类为2类，轮廓系数为0.49。结论 双相情感障碍患者视交叉上核节律通路功能连接比正常对照增强，且节律通路功能连接值可将双相情感障碍分为两种亚型，提示生物节律是潜在的双相情感障碍的生物标记物之一。

• 肠道病毒71型能诱导THP-1巨噬细胞的自噬和凋亡

  罗文英,杨拉维,潘庆军,邱丽红

  目的 探讨肠道病毒71型（EV71）诱导THP-1巨噬细胞自噬和凋亡及其相关信号通路。方法 设置EV71处理组和DMEM对照组，EV71处理组是用感染复数0.1感染THP-1巨噬细胞2、8和16 h，对照组是用DMEM培养基作为阴性对照即是0 h组。CCK-8检测EV71对THP-1巨噬细胞增殖和毒性的影响；荧光定量PCR法检测EV71在细胞内病毒核酸变化情况；透射电镜观察THP-1巨噬细胞内超微结构变化；Hoechst 33342染色法和AnnexinV/PI 双染法检测EV71诱导THP-1巨噬细胞凋亡的情况；免疫印迹法分析EV71诱导THP-1巨噬细胞自噬和凋亡相关蛋白水平的变化；用3-MA和Ac-DEVD-CHO抑制剂分别检测EV71对THP-1巨噬细胞自噬和凋亡的影响。结果 EV71作用THP-1巨噬细胞2、8和16h的细胞存活率逐渐下降（P<0.05）；细胞内病毒核酸拷贝数逐渐增多（P<0.01）；可见细胞内自噬小体和病毒颗粒；总细胞凋亡率逐渐增加（P<0.01）；与对照组比较，EV71处理组LC3转化量（LC3-II/LC3-I）逐渐增多，而p62蛋白逐渐减少，cleaved caspase 3蛋白增多，Bcl-2和caspase-3蛋白减少（P<0.01），而cleaved caspase-8无差异（P>0.05）；与PBS对比，在8 h时3-MA明显抑制EV71诱导THP-1巨噬细胞自噬，LC3-II/LC3-I比值减少，而p62蛋白增多（P<0.01）；与DMSO对比，Ac-DEVD-CHO明显抑制EV71诱导THP-1巨噬细胞凋亡，凋亡率分别为15.5%和7.7%（P<0.01）。结论 EV71能感染THP-1巨噬细胞并在其中复制，且能诱导自噬和凋亡，其可能与激活LC3/p62自噬途径和caspase凋亡途径有关。

• 阳性淋巴结比率≥0.16是影响食管癌患者预后的独立危险因素

  姚文柱,路 宁,崔曼莉,王 佳,杜召召,张明鑫

  目的 探讨阳性淋巴结比率（LNR）对判断食管癌患者预后的价值。方法 选取2010年到2015年seer数据库中有完整临床病理资料的862例食管癌患者为研究对象，应用X-tile软件选取LNR的最佳截断点，在进行倾向性评分匹配（PSM）后，运用单因素和多因素COX比例风险模型探讨LNR在食管癌患者预后中的价值。结果 X-tile 3.6.1软件筛选出LNR的最佳截断点为LNR<0.16和LNR≥0.16。匹配前LNR<0.16和LNR≥0.16两组患者的被检淋巴结数、病理类型、T分期和M分期差异有统计学意义；1∶1匹配后，两组患者的临床资料和病理学指标差异均无统计学意义。匹配后的单因素和多因素COX回归分析结果显示，LNR、原发部位、M分期均是影响食管癌患者预后的独立危险因素，其中尤以LNR最为显著（LNR<0.16 vs LNR≥0.16，HR=1.827，95%CI：1.140~2.929，P=0.000）。LNR<0.16组患者的中位生存时间为31个月（95%CI：22.556~39.444），LNR≥0.16组为16 个月（95%CI：12.989~19.011），LNR<0.16 组患者的预后显著优于 LNR≥0.16 组，差异有显著统计学意义（Log Rank χ2=27.392，P<0.0001）。LNR和N分期对评估预后的准确性分析显示，LNR的ROC曲线下面积为0.617（95%CI：0.567~0.666），N 分期的ROC曲线下面积为0.515（95%CI：0.463~0.565），LNR预测预后的价值明显优于N分期（z=3.008，P=0.0026）。结论LNR≥0.16是食管癌患者预后的独立危险因素，预后预测价值显著优于传统N分期。

• 共振光散射法可直接表征蛋白质的溶解度

  陈 童,同婷婷,杨林玉,廖 飞,杨晓兰

  目的 建立一种快捷、灵敏、成本低的蛋白质溶解度的共振光散射（RLS）表征方法，用于蛋白质突变体溶解度比较。方法同步扫描模式下，跟踪RLS信号强度对蛋白浓度的响应，根据响应曲线拐点预测蛋白质相应分散状态的最大浓度，据此定义该状态的溶解度。选择牛血清白蛋白（BSA，0~50.0 g/L），考察pH（6.5、7.0、7.4）、盐离子浓度（0.05、0.10、0.15、0.20 mol/L）对溶解度测定值的影响；并测定谷胱甘肽 S-转移酶同工酶alpha（GSTA，0~27.0 g/L）、Mμ（GSTM，0~20.0 g/L），考察方法通用性。应用RLS测定季也蒙毕赤酵母菌尿酸酶（MGU，0~0.4 g/L）溶解度并指导其突变体溶解度改进。结果 所测蛋白质RLS响应曲线均出现两个拐点，低浓度拐点可近似蛋白质单分子分散状态的最大浓度，而高浓度拐点近似蛋白质多分子聚集状态的最大饱和浓度即热力学平衡溶解度。BSA（等电点4.6）两个拐点均随pH的增大（6.5~7.4）而增高，pH7.4 HEPES缓冲液中分别对应~1.2 g/L、~33 g/L，后者与相同条件下商品溶解度接近；加入 NaCl 使两个浓度拐点均降低，初步表明 RLS 可直接表征蛋白溶解度。GSTA、GSTM 的RLS响应曲线低浓度拐点为~0.7 g/L，~0.8 g/L，高浓度拐点分别为~10 g/L、~11 g/L，均小于BSA，方法有通用性。MGU两个拐点分别对应0.24 g/L和0.30 g/L，而其突变体溶解度提高约2倍。结论 共振光散射法可直接表征蛋白质溶解度，且简便、灵敏，蛋白用量少，尤其适用于表达丰度低的蛋白质突变体溶解度的快速比较。

• 寿胎丸对邻苯二甲酸二乙酯染毒孕鼠免疫功能及氧化应激的影响

  金梅君,传 洁,沈 毅,傅 萍

  目的 探讨寿胎丸对邻苯二甲酸二乙酯（DEHP）染毒孕鼠免疫功能及氧化应激的影响。方法 将36只性成熟雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药组，每组12只。确认妊娠后，分别予对照组玉米油10 mL/kg+生理盐水10 mL/kg、模型组DEHP500 mg/kg+生理盐水10 mL/kg、中药组DEHP 500 mg/kg+寿胎丸10 mL/kg灌胃，至妊娠第19天处死孕鼠。剖腹取出胎鼠，记录各组胎鼠体质量、孕鼠活胎数、死胎数；检测血清白介素-6（IL-6）、白介素-2（IL-2）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、雌二醇、孕激素水平；记录各组胎盘外观、色泽、质量情况，取胎盘组织做病理切片；检测胎盘组织中总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）、活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）水平。结果 与对照组比较，模型组大鼠孕中后期体质量增加缓慢，胎鼠质量显著降低（P<0.05），血清IL-2、IL-6、TNF-α水平降低，雌二醇水平升高（P<0.05），胎盘T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT水平显著降低，ROS、MDA水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较，中药组大鼠孕中后期体质量明显增加，胎鼠质量增加（P<0.05）；血清IL-2、IL-6升高，雌二醇降低（P<0.05），TNF-α有升高趋势（P>0.05），胎盘T-AOC、GSH-Px、CAT水平升高，MDA值明显降低（P<0.05），SOD升高，ROS降低（P>0.05）。孕激素各组皆无统计学差异（P>0.05）。HE染色结果显示，模型组胎盘组织海绵滋养层明显疏松杂乱，出现较多空泡。中药组胎盘组织结构完整，迷路带、海绵滋养层、巨细胞滋养层均清晰可见，各层中细胞分布均优于模型组。结论 寿胎丸可调节孕鼠免疫功能，机制可能与其拮抗DEHP的雌激素样作用，调节血清免疫因子含量有关；寿胎丸可能通过纠正DEHP引起的胎盘组织内氧化应激失衡状态，减少胎盘组织损伤，改善妊娠结局。

• 过表达IL-12的恶性黑色素瘤细胞在肿瘤免疫微环境重建过程中抑制T细胞表面PD-1的表达

  刘严友葓,徐虹铃,赖 楠,杨子科,康世均

  目的 探讨过表达IL-12的恶性黑色素瘤细胞B16对肿瘤免疫微环境重建过程中T细胞表面PD-1表达水平的影响。方法 利用慢病毒感染小鼠黑色素瘤细胞B16以构建稳定过表达IL-12的B16细胞株；利用qRT-PCR、ELISA检测IL-12的表达情况；通过平板细胞克隆形成实验验证转染病毒对B16细胞增殖能力的影响；利用ELISA检测B16/IL-12细胞在体内表达IL-12的能力；将健康的C57BL/6小鼠随机分为2组，分别接种B16细胞及B16/IL-12细胞，14 d后用流式细胞术检测肿瘤引流区淋巴结中高表达PD-1的T细胞比例；利用650cGy剂量的放射线照射C57BL/6小鼠以构建免疫重建模型，并将造模后的小鼠随机分为2组，分别接种B16细胞及B16/IL-12细胞，将未接受放疗处理的小鼠作为对照组接种B16细胞，记录各组小鼠肿瘤生长情况，接种细胞14 d后用流式细胞术分别检测肿瘤引流区淋巴结以及肿瘤组织中PD-1+T细胞比例。结果 B16/IL-12细胞相比于B16细胞显著增加IL-12的表达（P<0.001）；转染IL-12过表达慢病毒并未对B16细胞增殖能力造成显著影响（P>0.05）；接种B16/IL-12细胞的何瘤小鼠在其肿瘤组织中含有更高水平的IL-12（P<0.01）；常规荷瘤小鼠模型中，B16/IL-12组小鼠较B16组小鼠具有更低比例的CD4+PD-1+T细胞（P<0.01），而CD8+T细胞群中，PD-1表达水平差异不显著（P>0.05）；免疫重建小鼠模型中，接种B16细胞的小鼠肿瘤引流区淋巴结和肿瘤组织中的CD4+PD-1+T细胞（P<0.05）及CD8+ PD-1+T细胞比例（P<0.01）均高于正常B16组小鼠，接种B16/IL-12细胞的免疫重建小鼠肿瘤引流区淋巴结及肿瘤组织中的CD4+PD-1+T细胞比例（P<0.01）和CD8+ PD-1+T细胞比例（P<0.001）相比于接种B16细胞的免疫重建小鼠均有显著降低；在小鼠肿瘤生长过程中，接种B16/IL-12细胞的免疫重建小鼠的肿瘤生长受到明显抑制（P<0.001）。结论 肿瘤区域过表达IL-12后可减少免疫重建过程中肿瘤区域T细胞表面PD-1的表达，达到良好的肿瘤控制效果。

• 右美托嘧啶滴鼻镇静在非紫绀性先心病小儿心脏手术前后的半数有效剂量

  张 敬,于 晴,刘 阳,刘 辉,孙 茫,田 芹,涂生芬

  目的 确定和比较右美托嘧啶滴鼻镇静用于患有非紫绀性先天性心脏病的儿童心脏手术前后的半数有效剂量。方法 本文前瞻性地招募了47名（术前组22名，术后组25名）需要镇静进行经胸心脏彩超检查的儿童。采用Dixon序贯法探究ED50，设定初始剂量为2.0 μg/kg，如果镇静失败，则该组下一位患者右美托嘧啶的剂量增加0.25 μg/kg。如果患儿镇静成功，则该组下一位患者右美托嘧啶的剂量减少0.25 μg/kg，当每组有6个由失败到成功的转折点时终止实验。之后运用Dixon-Massey法计算每组患儿的ED50，此外我们还使用概率回归法推测了ED95。实验中我们同时记录了药物起效时间，检查时间，唤醒时间和不良反应。每5 min根据检测1次生命体征以评估患儿安全。结果 两组的患儿在年龄、体质量、禁食时间、失眠率、体温等一般情况上的差异均无统计学意义（P>0.05）。两组的起效时间，检查时间，唤醒时间，不良反应发生率等方面的差异也没有统计学差异（P>0.05）。基于Dixon序贯法的计算结果为：术前组的ED50值为1.84 μg/kg（95%CI，1.68~2.00 μg/kg），术后组ED50为3.38 μg/kg（95%CI，3.21~3.54 μg/kg）（P<0.05）。基于保序回归的计算结果为：术前组的ED50和ED95值分别为1.79 μg/kg（95%CI，1.49~2.00 μg/kg）和2.18 μg/kg（95%CI，1.96~2.23 μg/kg）（P<0.01）；术后组ED50和ED95值分别为3.32 μg/kg（95%CI，3.08~3.50 μg/kg）和3.68 μg/kg（95%CI，3.47~3.73 μg/kg）（P<0.01）。结论 非紫绀性先心病患儿心脏术前右美托嘧啶镇静半数有效剂量为1.84 μg/kg，术后为3.38 μg/kg。

• MiR-204通过靶向调控HNRNPA2B1抑制乳腺癌的侵袭和转移

  张丽萍,白 俊,胡雅琼,周丹丹,郑 荃,尹崇高,牟青杰,李洪利

  目的 探讨miR-204通过靶向调控HNRNPA2B1对乳腺癌侵袭和转移的影响。方法 生物信息学数据库查询miR-204在乳腺癌患者中的表达情况和 miR-204对乳腺癌患者生存率的影响；RT-qRCR检测miR-204在乳腺癌细胞系中的表达情况；利用 GV369-miR-204过表达慢病毒上调MDA-MB-231细胞中的miR-204；Transwell实验检测miR-204对MDA-MB-231细胞侵袭和迁移能力的影响；生物信息学方法确定miR-204的关键基因（Hub基因）；双荧光素酶实验检测miR-204和HNRNPA2B1的靶向关系；Western blot实验检测过表达miR-204后HNRNPA2B1的表达情况；Transwell实验检测MDA-MB-231/miR-204+NC、MDA-MB-231/miR-204+HNRNPA2B1细胞的侵袭和迁移能力的变化。结果 miR-204在乳腺癌组织中表达降低（P<0.05），低表达水平的miR-204与患者不良预后相关（P<0.05）；miR-204在乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞系中表达量低于正常乳腺上皮细胞MCF-10A的表达（P<0.0001）。通过过表达慢病毒上调MDA-MB-231细胞中miR-204的表达，结果显示上调miR-204可抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力（P<0.05）；HNRNPA2B1为miR-204的Hub基因，starbase网站发现miR-204-5p和HNRNPA2B1表达呈负相关且HNRNPA2B1在乳腺癌患者中表达升高（P<0.05）；生存分析证明高表达HNRNPA2B1的乳腺癌患者预后不良（P<0.05）；双荧光素酶实验证明miR-204和HNRNPA2B1可靶向结合（P<0.05）。Western blot和Transwell实验证明，miR-204通过靶向调控HNRNPA2B1抑制乳腺癌的侵袭和迁移，且差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-204在乳腺癌组织和细胞中表达降低，且miR-204可通过靶向调控HNRNPA2B1抑制乳腺癌的侵袭和转移。

• 攀登鱼藤异黄酮脂质体有较好的物理性能及抗乳腺癌细胞的增殖活性

  毛联智,刘会平,刘华缓,卞中博,张秋玉,廖文镇,孙素霞

  目的 制备和鉴定攀登鱼藤异黄酮温敏脂质体并研究其抗乳腺癌作用。方法 MTT法检测攀登鱼藤异黄酮、大豆异黄酮和金雀异黄酮对人乳腺癌细胞（MDA-MB-231、MCF7、SKBR3）增殖活性影响；克隆形成实验探讨攀登鱼藤异黄酮对三阴性乳腺癌细胞（MDA-MB-231）克隆形成的影响；细胞划痕实验检测MDA-MB-231细胞迁移；蛋白印迹法检测MDA-MB-231细胞迁移和侵袭蛋白MMP2，MMP9表达量；薄膜水化法制备温敏脂质体及攀登鱼藤异黄酮温敏脂质体；透射电子显微镜、动态光散射扫描仪以及紫外分光光度计分别鉴定攀登鱼藤异黄酮温敏脂质体形貌、粒径、包封率及稳定性，并用MTT法检测攀登鱼藤异黄酮温敏脂质体抗小鼠乳腺癌细胞（4T1）增殖活性。结果 攀登鱼藤异黄酮可显著抑制人乳腺癌细胞（MDA-MB-231、MCF7、SKBR3）增殖，且效果优于大豆异黄酮和金雀异黄酮；攀登鱼藤异黄酮显著减少三阴性乳腺癌细胞（MDA-MB-231）克隆形成量，降低其划痕面积的愈合速度，并下调MMP2和MMP9的表达。薄膜水化法制备得到的温敏脂质体呈均质不规则球形，其粒径为56.23±0.61 nm、聚合物分散指数为0.241±0.014、Zeta电位为-40.40±0.46 mV、包封率为（87.68±2.41）%、稳定性较好，且抗小鼠乳腺癌增殖活性增强。结论 攀登鱼藤异黄酮通过抑制乳腺癌细胞增殖、转移和侵袭发挥其抗癌活性，攀登鱼藤异黄酮温敏脂质体具有较好的物理性能及抗乳腺癌活性。

• 吉非替尼抑制糖酵解诱导非小细胞肺癌的程序性死亡

  周 巧,李佳会,庞金龙,范方田,李姗姗,刘 浩

  目的 探究吉非替尼对非小细胞肺癌A549和H1975细胞死亡形式的影响，并从糖酵解方面探讨其可能机制。方法 A549细胞加入浓度分别为0、20、30、40 µmol/L的吉非替尼，H1975细胞加入浓度分别为0、20、40、80 µmol/L的吉非替尼。采用MTT法检测吉非替尼对非小细胞肺癌细胞的增殖抑制作用。用乳酸试剂盒检测细胞内乳酸的变化，Western blot法检测细胞内糖酵解相关蛋白（PKM2、HK2）和PI3K-Akt-mTOR信号通路中蛋白的表达水平；2-NBDG检测细胞葡萄糖摄取能力，ATP试剂盒检测胞内ATP水平；JC-1试剂盒检测细胞线粒体膜电位，Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡，Western blot法检测凋亡蛋白（Bax、Bcl-2）以及自噬标志蛋白LC3B的相对表达水平。结果 MTT结果显示吉非替尼可呈时间剂量依赖性的抑制A549和H1975细胞增殖（P<0.05），A549细胞24、48、72 h的IC50值分别为48.6、28.6和19.7 µmol/L，H1975细胞24、48、72 h的IC50值分别为321.6、49.1和14.6 µmol/L。乳酸检测结果显示，吉非替尼抑制胞内乳酸水平（P<0.05）。Western blot结果显示，糖酵解相关蛋白PKM2、HK2表达下调（P<0.05），PI3K-Akt-mTOR信号通路中相关蛋白表达下调（P<0.05）。吉非替尼也可以抑制A549和H1975细胞葡萄糖摄取、ATP水平（P<0.05）。JC-1试剂盒和Annexin V-FITC/PI双染法检测出吉非替尼能够诱导A549和H1975细胞发生凋亡，A549细胞中0、20、30、40 µmol/L的凋亡率分别为（10.77±1.0）%、（14.5±0.4）%、（17.4±0.2）%、（32.1±0.6）%，差异有统计学意义（P<0.05）；而H1975细胞0、20、40、80 µmol/L的凋亡率分别为（10.5±0.6）%、（13.2±0.92）%、（18.9±0.98）%、（35.1±1.4）%，差异有统计学意义（P<0.05）。促凋亡蛋白Bax表达增加和抑凋亡蛋白Bcl-2表达下调（P<0.05）。同时LC3B表达增加证明吉非替尼能够诱导A549和H1975细胞自噬增加（P<0.05）。结论 吉非替尼对A549和H1975细胞具有增殖抑制、诱导凋亡和增加自噬作用，凋亡机制可能为吉非替尼影响A549和H1975细胞糖酵解功能和PI3K-Akt-mTOR信号通路。

• 整合素α5的表达下调抑制肝癌Bel-7404细胞的增殖、侵袭及转移

  郭亚妹,徐广贤,闪明海,杨少奇

  目的 分析整合素α5（ITGA5）与肝癌分级及肝癌患者总体生存率之间的关系，进一步研究整合素ITGA5基因沉默后对人肝癌Bel-7404细胞增殖、侵袭迁移能力的影响及其作用机制探讨。方法（1）利用UALCAN分析ITGA5在肝癌组织及正常组织中的表达，以及在不同分级肝癌组织中的表达及其差异统计；通过GEPIA在线分析ITGA5表达量与肝癌患者生存情况的关系。（2）培养前期已经构建的ITGA5沉默细胞系，采用Western blot方法检测ITGA5蛋白水平的表达，以鉴定ITGA5基因沉默的效果。（3）采用平板克隆形成实验、Transwell等实验方法检测ITGA5基因沉默后Bel-7404细胞的增殖、侵袭迁移能力的变化。（4）通过Oncomine癌标本数据库分析肝癌组织及对照组织中ITGA5与PI3K表达及分析其相关性。结果（1）ITGA5在肝癌中的表达显著高于正常组，差异有统计学意义（P<0.05）；在不同肝癌分级中，Grade 1的ITGA5 表达量显著低于Grade 2，Grade 2的 ITGA5表达量显著低于Grade 3，差异均有统计学意义（P<0.05）。ITGA5高表达组的总体生存率（OS）显著低于低表达组，差异有统计学意义（P<0.05）。（2）Western blot鉴定ITGA5基因沉默组的蛋白质表达水平比空白、阴性对照组明显降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。（3）平板克隆形成实验结果显示，基因沉默组比空白、阴性对照组的克隆形成率降低，差异具有统计学意义（P<0.05）；Transwell结果显示，基因沉默组细胞穿膜数均比空白及阴性对照组显著降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。（4）ITGA5和PI3K在肝癌组织中高表达且呈正相关，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 ITGA5与肝癌进展及肝癌患者预后密切相关，其表达下调抑制肝癌细胞的增殖、侵袭迁移；ITGA5可能通过调控PI3K信号通路促进促进肝癌增殖及转移。

• 麝香通心滴丸改善猪心肌缺血再灌注后冠脉微循环和心功能

  姚玉斯,曾智桓,赵艳群,黎土娣,刘育宏,陈 荣

  目的 探究麝香通心滴丸（STDP）改善猪心肌缺血再灌注后冠脉微循环障碍（CMD）和心功能障碍的可能作用机制。方法根据随机数字表法，从21只小型猪随机选取14只行介入球囊阻断左前降支中部血流再灌注建立CMD模型，其余7只作为假手术组，仅行冠脉血管造影，不需要实施手术；再根据随机数字表法将14只动物随机分为CMD模型组（n=7）、CMD+STDP治疗组（n=7），3组动物均以普通饲料喂养8周。药物干预：治疗组予将麝香通心滴丸（3 mg· kg-1· d-1）拌入饲料中进行喂养8周。分别于第0周（手术前）、8周行冠脉造影、计算管腔直径和校正TIMI帧数（CTFC）、心脏彩色超声多普勒检查；8周时处死并取出左前降支冠脉远端分布区域心肌，HE染色观察心肌小血管及心肌组织的病理改变；Western blot检测前降支远端供血区心肌组织中沉默信息调节因子（Sirt1）、过氧化物酶增殖激活受体-γ共激活子-1α（PGC-1α）、过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）、细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）、Toll样受体4（TLR4）、解偶联蛋白2（UCP2）的表达。结果 实验0周和8周时，3组实验动物的冠脉左前降支血管直径差异无统计学意义（P>0.05）。实验0周时，各组实验动物CTFC血流帧数值差异无统计学意义（P>0.05）；第8周时，与假手术组相比，模型组CTFC血流帧数显著增加；与模型组比较，STDP治疗组CTFC血流帧数减少（P<0.05）。实验0周，3组实验动物心脏彩超各项指标差异无统计学意义（P>0.05）；实验8周时，相对于假手术组，模型组舒张期室间隔厚度、左室舒张期内径、左室舒张末容积、收缩期室间厚度、左室质量指标值增加（P<0.05）；与模型组比较，治疗组的上述指标值减小（P<0.05）。HE染色结果显示，与假手术组相比，模型组心肌组织微血管充血、血栓形成及周边炎症细胞聚集，心肌纤维萎缩，心肌间质炎性细胞浸润；与模型组相比，治疗组未见明显充血，血管周边炎症细胞较少，心肌肌纤维萎缩程度较明显，但心肌间质炎症浸润相对较轻。相对于假手术组，其余各组的心肌组织中Sirt1、PGC-1α、PPARα表达下调，ERK1/2、TLR4、UCP2表达上调；而治疗组与模型组相比，Sirt1、PGC-1α、PPARα表达量更高，ERKI/2、TLR4、UCP2表达量更低。结论 STDP可能通过Sirt1、PGC-1α、PPARα、ERK1/2、TLR4、UCP2发挥抗炎和调节能量代谢作用，从而改善缺血再灌注后冠脉微循环障碍和心功能障碍。

• 数字化定位导板在埋伏多生牙拔除中的应用

  郑相淮,林 曦,柴金友,齐 锐,刘曙光

  目的 探讨数字化定位导板在埋伏多生牙拔除中的应用，并评价其应用效果。方法 选取2019年3月~2019年8月于南方医科大学口腔医院颌面外科病房就诊的上颌前牙区唇侧埋伏多生牙患者30例，实验组15例通过数字化定位导板拔除埋伏多生牙，定位导板根据患者的CBCT数据和牙列模型，避开重要解剖结构，以牙-骨面作为支持，设计出软组织切口线和骨组织暴露范围。对照组15例不使用导板进行手术。记录术前设计时间、找牙时间、手术时间、术中并发症出现情况。结果 实验组定位导板在术中均贴附良好，可快速定位并协助暴露多生牙，同时避免邻近重要解剖结构损伤。实验组术前设计时间为50±5 min，对照组该时间为0 min。实验组平均找牙时间为5±2 min，对照组为10±3 min，实验组显著小于对照组（t=15.40，P<0.01)；实验组平均手术时间为25±4 min，对照组为45±6 min，实验组显著小于对照组（t=35.50，P<0.01)；实验组未出现术中并发症，对照组出现一例定位稍偏差。结论 应用数字化定位导板拔除埋伏多生牙，明显缩短了找牙时间，减少手术难度，提高手术质量，值得临床推广。

• 下颌骨囊性病变的三维有限元模型生物力学分析

  庞亚倩,张 凯,刘 亮,冯大军,刘 畅,王 晶,杜 悦,郭振飞

  目的 对下颌体部囊性病变三维有限元模型行生物力学分析，为临床制定手术方案提供参考依据。方法 基于牙颌关系正常健康女性志愿者的下颌骨CT图像，构建出下颌体部囊性病变三维有限元模型，分析在一定约束及载荷条件下病变区接近应力峰值时囊肿大小及剩余骨壁情况。结果 当囊肿大小为37.63 mm×11.32 mm×21.45 mm时，病变区最大Von Mises应力值达到77.295 Mpa，接近于下颌骨的屈服强度，存在病理性骨折的风险，此时病变区颊、舌侧及下颌骨下缘剩余骨厚度分别为1.52、0.76、1.04 mm。结论 剩余骨量是影响囊性病变刮治术后病理性骨折的重要因素，当下颌体部囊性病变区各壁剩余骨皮质厚度低至1mm时，此界值可作为临床制定一期开窗减压治疗联合二期刮治术式的参考依据。

• 内镜下袖状胃成形术的机遇和挑战

  吴良平,戴晓江,黄红艳

  肥胖及其相关伴发病，如2型糖尿病、高血压、高脂血症、非酒精性脂肪肝等是困扰全世界公共卫生的严重问题。内镜下袖状胃成形术（ESG）通过模拟外科袖状胃切除术，在胃腔内以全层缝合的方式减少胃的长度和宽度从而减少胃容量；是一种安全、可行、减重效果良好的减肥方法；具有非侵入、不切胃、可重复、操作简单、无切口疤痕、并发症极少、住院时间短、术后康复快的优点。ESG可以作为内科治疗与外科手术的中间手段，为不能耐受或不愿接受外科手术的肥胖患者提供新的减肥方法。本文追溯了ESG在国外的起源，分析了ESG独特的缝合优势，探索了ESG发展过程中的技术改进，简述了ESG的减重效果及其与腹腔镜袖状胃切除术的疗效对比。在外科微创极致化的大趋势下，ESG将迎来快速发展和成熟的历史性机遇，同时它将面临建立标准流程、厘清减重机制、确立适应人群等挑战，展望未来ESG将成为主流的减重术式。