南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2020年第07期

• de Winter综合征， 一种易被忽视却致命的疾病： 1例报告

  肖园园, 樊仲国, 徐 宝, 何胜虎

  de Winter综合征是与ST段抬高型心肌梗死等同的一种特殊疾病，其特征是没有明显的ST段抬高，表现为上斜型ST段压低，心前导联出现高而对称的T波，并通常与冠状动脉左前降支完全阻塞有关。本文中我们报告1例de Winter综合征病例，该63岁男性患者初始心电图未显示ST段抬高，但随后在冠状动脉造影中证实近端冠状动脉左前降支完全闭塞。该患者通过机械再灌注治疗和支架置入术后得到成功治疗。临床医生通常对此病认识不足，因此常导致较高的死亡率。迅速识别该综合征的这种ECG模式以确保及时通过经皮冠状动脉介入术进行有效的再灌注治疗对于挽救患者的生命至关重要。

• 卒中后抑郁患者血浆中miR-30a-5p的差异性表达及其作用机制的生物信息学预测

  胡 佳, 周志明, 杨 倩, 杨 科

  目的 探讨卒中后抑郁（PSD）患者miR-30a-5p的表达差异性及其在PSD中的诊断价值，基于生物信息学方法，分析其可能作用机制。方法 检索PubMed数据库，利用VENNY2.1在线软件获取到目标microRNA。贯续性纳入2018年10月~2019年3月就诊于皖南医学院弋矶山医院神经内科卒中病房并首次诊断为急性脑梗死的患者，收集患者入院时人口统计学资料、卒中危险因素、既往卒中病史、美国国立卫生研究院脑卒中量表（NHISS）评分等临床基线资料及影像学资料，并与入院当天留取研究对象外周静脉血5 mL。随访3个月根据Hamilton 抑郁量表（HAMD-17）行抑郁程度的评价，对于评分值≥7 者按照《美国精神病学会叶精神疾病诊断与统计手册》第4 版（DSM-IV）诊断标准诊断抑郁，分为PSD组（n=11）和non-PSD组（n=25）。使用qRT-PCR法检测卒中后抑郁患者（PSD）和非卒中后抑郁患者（NPSD）外周血miR-30a-5p表达水平，利用ENCORI数据库和CTD（Comparative Toxicogenomics Database）数据库共同预测和筛选miR-30a-5p调控的抑郁相关可能作用的靶基因，通过生物信息学方法对靶基因的可能作用机制进行进一步分析。结果 通过交叉筛选得到同时与卒中和抑郁相关的miR-30a-5p，临床样本 qRT-PCR 验证 miR-30a-5p 在 PSD 和 non-PSD 组有差异性表达（2.462±0.326 vs 1±0.126，P<0.0001）。ROC曲线分析提示miR-30a-5p预测PSD的AUC=0.869（95%CI，0.745-0.993，P=0.0005），cut-off值为1.597，对应的敏感性和特异性分别为0.727、0.840。靶蛋白主要作用的生物学过程包括信号转导、细胞间通讯、核酸碱基、核苷、核苷酸和核酸代谢的调节；KEGG通路富集分析发现，靶蛋白主要作用于神经营养素信号通路、轴突导向信号通路、胰岛素信号传导系统；经过CytoHUBBA分析得出可能与卒中后抑郁相关的前20种HUB基因。结论 外周血miR-30a-5p在卒中后抑郁患者和非卒中后抑郁患者中存在差异性表达，可以作为诊断PSD的临床标志物，其可能是通过神经营养素信号通路、轴突导向信号通路、胰岛素信号传导系统来影响PSD的发生。

• 抑制CD96可促进NK细胞分泌IFN-γ并减轻小鼠肺部的衣原体感染

  李 静, 郑 晶, 王敏达, 张 艳, 江益凡, 张小凤, 郭 普

  目的 通过调控CD96在C. muridarum肺炎小鼠体内的水平，探讨CD96调控NK细胞功能在衣原体肺部感染中的作用及可能机制。方法 选取雄性BALB/c小鼠45只，采用随机数字表法将小鼠分为Cm组、anti-CD96组及sham组，5只/组，进行3次独立重复实验。采用滴鼻吸入C. muridarum建立肺部感染模型，anti-CD96组：小鼠在感染基础上给予腹腔注射anti-CD96抗体（250 μg/只，每3 d给药1次）；Cm组：腹腔注射生理盐水；sham组：小鼠鼻吸入缓冲液。小鼠每日称重并绘制体质量曲线，造模5 d后，经颈椎脱臼法处死小鼠。采用荧光定量PCR与Western blot法检测CD96的表达；通过HE染色及病理评分评估小鼠肺炎症状；肺组织匀浆检测包涵体形成单位，评估肺部衣原体负荷；采用流式细胞术及ELISA等方法检测肺NK细胞产生IFN-γ的能力，以及NK细胞对巨噬细胞和Th1型细胞的免疫调节能力。结果 C. muridarum感染后第1、3、5天，采用磁珠分离各时间点以及Sham组小鼠肺NK细胞，结果显示NK细胞中CD96 mRNA表达显著降低（P<0.05），NK92细胞系经C. muridarum感染后6、12、24 h，CD96表达均明显下降（P<0.05）；Western blot验证anti-CD96抗体可有效中和小鼠肺组织中CD96表达（P<0.05），自感染后第3天开始anti-CD96组小鼠体质量下降程度较Cm组减轻（P<0.05），肺组织病理切片结果证实，anti-CD96组小鼠肺炎减轻。与Cm组相比，anti-CD96组小鼠肺部衣原体负荷降低（P<0.05）；Anti-CD96组小鼠肺组织中分泌IFN-γ的NK细胞（DX5+IFN-γ+）比例高于Cm组（P<0.05），与Cm组相比，anti-CD96组小鼠肺单个核细胞中IFN-γ的蛋白表达水平也显著升高（P<0.05）。anti-CD96组与Cm组相比，NK细胞免疫调节作用也显著增强，小鼠肺脏中巨噬细胞比例增加（F4/80+，P<0.05），Th1应答增强（CD3+CD4+IFN-γ+，P<0.05）。结论 抑制CD96可减轻C. muridarum感染小鼠肺炎，可能与其增强NK细胞分泌IFN-γ能力及对固有和适应性免疫的调节作用有关。

• 子宫内膜间质肉瘤HELQ和RAD51C蛋白的表达及其临床意义

  刘 鹰, 张 瑜, 田 焱

  目的 观察正常子宫内膜和子宫内膜间质肉瘤（ESS）组织POLQ样蛋白解旋酶（HELQ）和RAD51C蛋白表达情况，并分析其与ESS患者临床特征的相关性。方法 收集2013年1月~2016年12月在湖南省肿瘤医院接受手术治疗并确诊的ESS患者肿瘤组织（37例）及正常内膜组织标本（14例），采用免疫组织化学染色法检测组织中HELQ和RAD51C蛋白表达，分析其与患者年龄、FIGO分期、肿瘤大小和淋巴结转移的相关性。结果 免疫组织化学染色结果显示：ESS患者HELQ和RAD51C表达较正常组显著降低，并且HELQ和RAD51C表达呈正相关（P<0.05）。ESS中HELQ表达强度与肿瘤大小相关（P<0.05）。HELQ和RAD51C表达强度与患者年龄、FIGO分期和淋巴结转移无关（P>0.05）。结论 提示HELQ与RAD51C参与的DNA同源重组修复可能与ESS的发生发展有关。

• 骨膜素通过p38 MAPK信号通路抑制缺氧诱导的人牙周膜成纤维细胞的氧化应激和细胞凋亡

  刘惠莉, 王一丹, 岳阳丽, 张 朋, 孙亚丽, 陈巧华

  目的 探讨骨膜素对缺氧诱导的人牙周膜成纤维细胞氧化应激与细胞凋亡的影响及其分子机制。方法 体外培养人牙周膜成纤维细胞，厌氧产气袋内缺氧处理48 h。采用不同浓度（25、50、100 ng/mL）的骨膜素处理细胞，随机分为空白组、缺氧组、骨膜素低浓度组、骨膜素中浓度组、骨膜素高浓度组。甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞存活率；流式细胞术检测细胞凋亡率；夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）测定炎症因子白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量；应用荧光酶标仪检测细胞活性氧（ROS）水平；ELISA检测细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测HIF-1α、P21、CyclinD1、Bax、Cleaved caspase-3、Bcl-2、P38MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达量。结果 缺氧处理后可明显降低细胞存活率（P<0.05），提高P21、Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平（P<0.05），促进细胞凋亡（P<0.05），降低CyclinD1、Bcl-2蛋白水平（P<0.05）；与缺氧组相比，骨膜素不同浓度组细胞存活率升高（P<0.05），细胞凋亡率降低（P<0.05），P21、Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平降低（P<0.05），CyclinD1、Bcl-2蛋白水平升高（P<0.05）。与空白组相比，缺氧组HIF-1α、p-p38 MAPK蛋白表达水平升高（P<0.05），IL-1β、IL-6、TNF-α、ROS水平升高（P<0.05），SOD活性降低（P<0.05）；与缺氧组相比，骨膜素不同浓度组HIF-1α、p-p38 MAPK蛋白水平降低（P<0.05），IL-1β、IL-6、TNF-α、ROS水平降低（P<0.05），SOD活性升高（P<0.05）。结论 骨膜素可促进缺氧诱导的人牙周膜成纤维细胞增殖，抑制细胞凋亡，增强细胞抗氧化能力，减轻炎症损伤，其可能通过抑制p38 MAPK信号通路的活化而发挥作用。

• 原发性干燥综合征患者肠道菌群特点分析

  王 信, 王 健, 郭文静, 周 瀛, 孙 超, 李志军, 陈琳洁, 潘新兰

  目的 探索原发性干燥综合征（pSS）与健康人之间肠道菌群是否存在差异。方法 收取18例符合纳入标准的女性pSS患者的粪便样本，其中9例为病情活动组（A组）、9例为病情不活动或低活动组（B组），另外收取10例健康人的粪便（C组）。收集每份粪便样品的细菌总DNA，PCR扩增，针对16SrDNA基因的V3~V4区进行illumina hiseq 2500高通量测序，得到3组的肠道菌群生物信息数据，随后结合文献智库信息挖掘进行组间OTU分析、样品多样性分析、样品组间显著性差异分析及LEfSe分析。结果 肠道菌群多样性比较：α多样性（Alpha diversity）指数分析，Shannon指数在A组和B组间、Simpson指数在A组和B组间及A组和 C组间差异存在统计学意义（P<0.05）；菌群结构比较：将3组分别进行序列分析，在门水平上3组均主要有 4 个菌门组成，分别是：厚壁菌门（Firmicutes），拟杆菌门（Bacteroidetes），放线菌门（Actinobacteria），变形菌门（Proteobacteria），在属水平上3组均主要有4个菌属组成，分别是：大芬戈尔德菌属（Finegoldia），普雷沃菌属（Prevotella），链球菌属（Streptococcus），棒状杆菌属（Corynebacterium_1），在门水平和属水平上分析显示3组肠道菌群主要菌门和主要菌属两两比较差异无统计学意义（P>0.05），但Streptococcus属在3组之间比较，差异具有统计学意义（P<0.05）；肠道菌群结构的差异分析：肠道菌群 16S V3~V4 区组间显著性差异分析，在属水平上，3 组间相比，在 Alloscardovia 属、Bacteroides 属、Barnesiella 属 、Butyricicoccus 属 、Facklamia 属 、Faecalibacterium 属 、Lachnospiraceae_FCS020_group 属 、Lachnospiraceae_ND3007_group属、Lachnospiraceae_UCG-001属、Lachnospiraceae_UCG-004属、Lachnospiraceae_UCG-008属、Ruminococcaceae_UCG-002属、Streptococcus属之间存在统计学差异（P<0.05）；在Coprococcus_1属存在显著性差异（P=0.005，P<0.01）。3组间肠道微生物进行高维生物标识和揭示基因组特征的分析，差异存在统计学意义（P<0.05）。结论 pSS患者与健康人之间的肠道菌群多样性存在一定差异，在主要菌门水平和菌属水平上虽无显著性差异，但在Streptococcus属等一些特定细菌比例有显著差异；3组肠道菌群在16S V3~V4区组间差异具有统计学意义，提示菌群结构的差异在pSS的发病中起一定作用。

• 褪黑素通过抑制挛缩减轻大鼠离体心脏的缺血再灌注损伤

  孔令恒, 孙 娜, 魏兰兰, 张丽君, 陈玉龙, 常 利, 苏兴利

  目的 探讨褪黑素（Mel）抑制挛缩改善大鼠离体心脏缺血再灌注（IR）损伤的作用及机制。方法 采用Langendorff离体心脏灌流方法模拟缺血再灌注模型，40只SD大鼠按随机数字表法分为4组（10只/组）。正常对照组（Control）：正常灌注175 min；IR组：全心缺血45 min，再灌注120 min；Mel+IR组：用Mel（5 μmol/L）灌注1 min，全心缺血45 min，用Mel（5 μmol/L）再灌注5 min，Krebs-Henseleit液再灌注115 min；挛缩抑制剂2,3-丁二酮单肟（BDM）干预缺血再灌注组（BDM+IR）：用BDM（20 mmol/L）灌注1 min，全心缺血45 min，用BDM（20 mmol/L）再灌注5 min，KH液再灌注115 min。以心肌死亡面积、caspase-3活性、细胞色素c（cytochrome c）和cleaved caspase-3蛋白表达检测各组心肌损伤程度；以HE染色、冠脉流出液中乳酸脱氢酶（LDH）活性、肌钙蛋白（I cTnI）含量、左心室舒张末压（LVEDP）和电镜观察肌原纤维收缩带的形成评价各组心脏挛缩程度；检测心肌组织中ATP含量的变化。结果 与Control组相比，IR组心肌死亡面积、caspase-3活性、cytochrome c和cleaved caspase-3蛋白表达显著增加（P<0.01）；同时，冠脉流出液中LDH活性和cTnI含量明显增加，再灌注末LVEDP显著抬升，HE染色显示心肌纤维发生明显断裂，ELISA检测发现ATP含量显著降低（P<0.01）；另外，透射电镜结果表明IR组肌节过度收缩，形成明显的肌原纤维收缩带；而给予Mel和BDM处理后，可显著减小心肌死亡面积、aspase-3活性、cytochrome c和cleaved caspase-3蛋白表达，还可明显抑制LDH活性、cTnI含量和LVEDP，减少心肌纤维断裂，并增加胞内ATP含量；更为重要地是，Mel和BDM能减轻IR引起的肌节过度收缩，并抑制收缩带的形成。结论 Mel可通过抑制挛缩明显改善心肌缺血再灌注损伤，其机制可能与增加心肌细胞内ATP含量，减轻心肌机械性损伤引起的肌膜撕裂，减少细胞内容物的漏出有关。

• COVID-19普通型与危重型患者的生化分析及中性粒细胞/淋巴细胞比值的临床应用

  李红兵, 赵茂军, 徐英生

  目的 寻求影响COVID-19患者临床分型与转归的关键指标以指导临床诊疗，并探索中性粒细胞/淋巴细胞比值（NLR）在COVID-19中的应用。方法 收集2020年2~4月援鄂期间在湖北省鄂州市中心医院确诊的COVID-19患者共93例，其中ICU危重病例43例，随机选择呼吸科普通型病例50例进行对照研究，收集所有患者入院时和住院期间的基线资料、血常规、生化指标。计算NLR值，按照文献NLR四分类法对患者进行COX生存分析；根据患者转归信息绘制受试者工作曲线（ROC），根据NLR截断值将患者分为2类，与临床分类比较以评价截断值分类的科学性；根据患者转归、NLR截断值分类及临床分型进行多重二元logistics回归，筛选关键变量，并探讨其在COVID-19中的意义。结果 NLR四分类法不适合COVID-19患者预后判断；NLR预测患者死亡的截断值为11.26，敏感性为0.903，特异性为0.839；NLR<11.26患者血常规，生化指标与普通型无统计学差异（P>0.05），NLR≥11.26患者上述指标与危重型患者无统计学差异（P>0.05）；NLR，白血病计数（WBC），中性粒细胞绝对值（NEUT），降钙素原（PCT），D-二聚体（DD），尿素氮（BUN），肌钙蛋白（I TNI），脑钠肽（BNP），乳酸脱氢酶（LDH）对患者临床分型、转归均有明显影响（P<0.05）；此外，血肌酐（Cr）、血清钙（Ca）、PH、乳酸（Lac）对患者转归有较大影响（P<0.05）；血清钠（Na）与动脉血二氧化碳分压（PCO2）对患者临床分型有较大影响（P<0.05）。结论 NLR可以作为COVID-19临床分型、预后评估、生化异常的重要预警因子；危重型及预后差的患者多合并细菌感染、炎症反应更强烈、心肺肾功能损伤更重，常伴有DD，LDH明显升高；NLR、NEUT、DD、TNI、BNP、LDH、Ca、PCT、PH、Lac对COVID-19预后影响较大，应动态观察。

• 酸敏感离子通道对细胞外酸化时海马锥体神经元发作性和非发作性癫痫样活动具有不同调控作用

  刘 帅, 陈荣清

  目的 探讨细胞外酸化时酸敏感离子通道（ASICs）对癫痫样活动的调控作用及其潜在机制。方法 在海马脑片上使用场电位记录方法研究细胞外酸化对高钾环境的高钾模型和使用GABAA受体拮抗剂的去抑制模型的癫痫样活动的影响；使用全细胞膜片钳技术记录方法研究细胞外酸化对神经元的兴奋性的影响；使用ASICs拮抗剂研究ASICs对癫痫样活动和神经元兴奋性影响。结果 细胞外酸化在高钾模型明显减弱癫痫样放电的程度（P<0.001），明显减少癫痫样活动的单次峰电位数量（P<0.01）及其幅度（P<0.001），并且癫痫样放电的模式从发作性癫痫样放电转换为发非发作性癫痫样放电；ASICs的拮抗剂不能阻断细胞外酸化对神经元兴奋性的抑制作用以及对癫痫样放电的模式的转换的作用；ASICs的拮抗剂在细胞外酸化条件下可增强非发作性癫痫样放电的活动（P<0.05）。在去抑制模型中，细胞外酸化对癫痫样活动的抑制和癫痫放电模式的转换作用与高钾模型一致；细胞外酸化可明显升高动作电位的阈电位（P<0.01）、半波宽（P<0.05）和达到动作电位峰值的时间（P<0.01），可明显降低神经元兴奋性，并且这种减弱作用不能被ASICs拮抗剂和GABAA受体拮抗剂阻断。结论 ASICs可以直接作用于兴奋性神经元，对癫痫样放电中的发作性癫痫样放电和非发作性癫痫样放电的活动有不同的调控作用。

• EGFR酪氨酸激酶抑制剂HS-10296诱导三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞发生自噬和凋亡

  葛贤明, 周 巧, 张语涵, 周文静, 伍 宇, 甄 诚, 张梦晓, 范方田, 陈刚胜, 赵军军, 刘 浩

  目的 探讨表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKT）HS-10296对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用及潜在分子机制。方法 HS-10296处理MDA-MB-231细胞24、48、72 h。CCK-8法检测MDA-MB-231细胞存活率；集落克隆法检测HS-10296对细胞的增殖抑制作用；JC-1与流式细胞术检测细胞凋亡情况；电镜观察细胞超微结构；自噬抑制剂氯喹预处理后分为不含药物的对照组、单用氯喹组、单用HS-10296（4、6 µmol/L）组和两者联合组，CCK-8法检测MDA-MB-231细胞对HS-10296的敏感性变化；Western blot分析HS-10296对MDA-MB-231细胞凋亡和自噬相关蛋白以及EGFR信号通路的影响。结果 CCK-8和集落克隆结果显示，HS-10296对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞具有增殖抑制作用（P<0.01），24、48、72 h的IC50值分别为8.393、2.777、2.016 µmol/L。JC-1与流式细胞术显示HS-10296可诱导细胞发生凋亡，8 µmol/L HS-10296处理后，细胞凋亡率为（21.63±2.97）%。电镜观察到经HS-10296处理后，细胞内出现自噬囊泡，使用氯喹预处理细胞后，观察到抑制自噬可增强HS-10296诱导的细胞死亡。Western blot显示经HS-10296处理后凋亡相关蛋白Caspase-3出现活化形式，并对其底物PARP进行剪切。自噬相关蛋白轻链3B表达高于对照组（P<0.01），同时，HS-10296可抑制细胞内EGFR及AKT蛋白的磷酸化。结论 HS-10296可通过抑制EGFR/PI3K/AKT信号通路，抑制MDA-MB-231细胞增殖，诱导细胞发生自噬和凋亡。

• 脐带间充质干细胞来源的外泌体通过抑制上皮间质转化缓解肺纤维化

  杨 静, 胡华钟, 张书勤, 姜琳瑞, 程远雄, 谢浩俊, 王小燕, 姜交华, 王 红, 张 群

  目的 研究人脐带间充质干细胞外泌体（hUCMSC-EXOs）的抗纤维化作用及其潜在机制。方法 采用随机数字表法将24只C57 BL/6小鼠平均分为4组，6只/组。空白组：气管内注射生理盐水（3 mg/kg）；肺纤维化组：气管内注射1.5 mg/mL博来霉素溶液（生理盐水配成，3 mg/kg）；EXOs1组：气管内注射1.5 mg/mL博来霉素溶液（3 mg/kg）和hUCMSC-EXOs（造模第2天尾静脉注射，100 μg/250 μL）；EXOs2组：气管内注射1.5 mg/mL博来霉素溶液（3 mg/kg）和hUCMSC-EXOs（造模第11天尾静脉注射，100 μg/250 μL）。造模后21 d处死小鼠，取小鼠双侧肺组织，计算肺系数，分别通过HE染色和Masson染色进行肺组织病理学和胶原蛋白沉积检查，ELISA实验检测血清中TGF-β1的表达水平，免疫组化法检测vimentin、E-cadherin和p-Smad2/3的表达水平。在体外A549细胞模型上，CCK8实验观察hUCMSC-EXOs对细胞增殖的影响，Western blotting观察hUCMSC-EXOs 对p-Smad2/3、vimentin和E-cadherin的表达水平的影响。结果 hUCMSC-EXOs显著降低肺纤维化小鼠的肺系数（P<0.05）、改善肺组织切片胶原沉积和肺组织病理变化，减少小鼠TGF-β1的表达（P<0.05），抑制p-Smad2/3、vimentin的表达而增加E-cadherin的表达，且外泌体一组的治疗效果优于外泌体二组；hUCMSC-EXOs对细胞增殖无明显影响（P>0.05），且可抑制p-Smad2/3、vimentin的表达而促进E-cadherin的表达。结论 hUCMSC-EXOs可以通过抑制TGF-β1/Smad2/3信号通路激活的上皮-间质转化而缓解小鼠肺纤维化程度，且在第2天给予缓解效果更加明显。

• LC-MS/MS法研究瓜蒌缓释微丸在大鼠体内的药代动力学特征

  卞莹莹, 邹纯才, 鄢海燕, 孙德考, 胡 倩

  目的 建立高效液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）考察瓜蒌缓释微丸与瓜蒌提取物中3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇（3,29-DK）在大鼠体内不同时间点的血药浓度及药代动力学特征。方法 健康雄性SD大鼠分为2组：瓜蒌缓释微丸组与瓜蒌提取物组，单次灌胃给药后，瓜蒌缓释微丸组在第0、1、2、4、6、8、10、12、18、24、36、48小时眼眶取血；瓜蒌提取物组在第0、15、30、45、60、90、120、180、240、300分眼眶取血。血浆样品预处理，采用LC-MS/MS法测定瓜蒌缓释微丸组与瓜蒌提取物组血浆中的3,29-DK浓度，建立3,29-DK含量测定标准曲线并进行专属性、最低检测限、精密度及准确度、提取回收率、稳定性、基质效应等方法学考察。测定瓜蒌缓释微丸组和瓜蒌提取物组不同时间点的3,29-DK平均血药浓度，运用Das 2.0软件处理数据，求算药代动力学参数，采用SPSS 26.0统计学软件进行统计分析。结果 3,29-DK浓度在0.5 ng/mL~32 ng/mL范围内线性关系良好，方法学验证结果均符合生物样品测定的规定。与瓜蒌提取物组相比较，瓜蒌缓释微丸组3,29-DK的AUC(0-t)、AUC（0-∞）、MRT（0-t）、MRT（0-∞）、t1/2z及Tmax差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 瓜蒌缓释微丸提高了药物在大鼠体内的缓释效果，为瓜蒌新剂型的研究提供基础。

• 胆汁酸通过p-STAT3-SOCS3途径调节下丘脑神经元食欲及抑制信号肽表达

  陈春秀, 周 永, 黄荣凤, 王妙然, 李 月, 李继斌

  目的 探索胆汁酸牛磺石胆酸或鹅去氧胆酸对小鼠下丘脑GT1-7细胞食欲抑制信号肽表达的影响及可能的作用途径。方法 将实验分为3组，每组3个平行样本。空白对照组：仅给予含10%胎牛血清高糖培养基培养GT1-7细胞。胆汁酸牛磺石胆酸处理组：分别采用10 nmol/L，100 nmol/L，1 μmol/L和10 μmol/L浓度的胆汁酸牛磺石胆酸处理GT1-7细胞12、24和48 h。鹅去氧胆酸处理组：分别采用10 nmol/L，100 nmol/L，1 μmol/L和10 μmol/L浓度的鹅去氧胆酸处理GT1-7细胞12、24和48 h。采用Real-time PCR 检测GT1-7细胞食欲抑制信号肽阿黑皮素原（POMC）mRNA表达水平；ELISA法检测POMC剪切产物抑制食欲肽α-促黑素细胞激素水平。采用Western blot检测G蛋白偶联胆汁酸受体（TGR5）和法呢醇X受体表达以及磷酸化信号转导转录激活因子3（p-STAT3），磷酸化蛋白激酶（p-AKT），细胞因子信号传导抑制因子3（SOCS3）蛋白表达量。结果 Western blot结果显示，下丘脑神经元GT1-7细胞能表达TGR5和FXR两种胆汁酸受体，且表达量受胆汁酸调节。Real-time PCR检测结果显示，10 μmol/L tLCA或鹅去氧胆酸处理GT1-7细胞24 h后POMC mRNA表达水平上升，ElISA结果也发现10 μmol/L 胆汁酸牛磺石胆酸或鹅去氧胆酸处理GT1-7细胞24 h后具有抑制食欲作用的POMC衍生肽[α]-MSH释放增多。Western blot结果显示，胆汁酸处理可上调GT1-7细胞p-STAT3和p-AKT蛋白表达，且调控STAT3信号通路的SOCS3蛋白表达也有增加。结论 胆汁酸牛磺石胆酸或鹅去氧胆酸通过GT1-7细胞胆汁酸受体TGR5和FXR促进POMC mRNA表达，增加[α]-促黑素细胞激素水平，提示胆汁酸具有通过抑制食欲信号肽表达调节食欲的潜在作用，该作用是通过p-AKT和p-STAT3 -SOCS3 信号通路实现。

• 反比通气联合呼气末正压在婴儿肺囊腺瘤术单肺通气中的应用： 63例前瞻性随机对照临床试验

  王 昀, 黄伟坚, 贺牡丹, 彭玲莉, 蔡明阳, 袁 超, 胡祖荣, 黎昆伟

  目的 探讨反比通气（IRV）联合呼气末正压（PEEP）对单肺通气（OLV）时肺囊腺瘤术婴儿的影响。方法 选择2018年2月~2019年2月于广东省妇幼保健院择期行胸腔镜下肺囊腺瘤手术单肺通气的婴儿患儿66 例，随机分为常规通气组（N组，n=33）和反比通气组（R组，n=33）。记录双肺通气（TLV）15 min（T）、 l OLV30 min（T2）、OLV60 min（T3）、恢复TLV15 min（T4）患儿的血流动力学和呼吸参数，并进行动脉血气分析。于术前和术后行支气管灌洗，并收集支气管灌洗液，检测晚期糖基化终末产物受体（RAGE）的表达水平。结果 共63例婴儿最终入选。在T2、T3时点，R组Cdyn、PaO2、OI显著高于N组同时间点（P<0.05），气道峰压、动脉二氧化碳分压（PaCO2）、动脉血氧分压（PaO2）显著低于N组同时间点（P<0.05）。T2、T3时间点的HR和MAP两组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。两组术后RAGE与同组术前相比都明显增高（P<0.05），而术后与N组相比，R组的RAGE表达水平较低（P<0.05）。结论 合适的IRV联合PEEP应用于胸腔镜下肺囊腺瘤术的OLV婴儿患者，既不影响血流动力学稳定，同时能增加肺顺应性，降低峰压，改善氧合，安全可行，有一定的肺保护作用。

• 右美托咪定联合肺保护性通气策略可减轻单肺通气食管癌根治术患者的肺损伤

  龚 拯, 龙小毛, 韦慧君, 唐 莹, 栗 俊, 马 利, 余 军

  目的 探讨右美托咪定联合肺保护性通气策略对单肺通气（OLV）食管癌患者肺损伤保护作用的影响。方法 选择我院行外科手术单肺通气食管癌患者40例，按随机数字表法将其随机分为肺保护性通气策略组（F）和右美托咪定联合肺保护性通气策略组（DF），每组20例。F group在麻醉过程中单纯采用肺保护性通气策略，DFgroup于麻醉诱导前10 min 开始静脉泵注盐酸右美托咪定0.3 μg/kg/h，并维持至手术结束，同时术中联合肺保护性通气策略。于术前双肺通气时（T0），OLV开始30 min（T1）、OLV后90 min（T2）和术毕（T3）四个时间点采集患者的桡动脉血5 mL，比较两组各时点的超氧化物歧化酶、丙二醛、肿瘤坏死因子α和白介素6的表达水平，以及动脉血氧分压、氧合指数和肺顺应性指标。结果 超氧化物歧化酶和白介素6在两组间的变化趋势有统计学意义（P<0.05），且在T1、T2和T3时间点，DF组的超氧化物歧化酶水平均高于F group，白介素6水平均低于F group，差异有统计学意义（P<0.05）。动脉氧分压、氧合指数和肺顺应性在两组间的变化趋势有统计学意义（P<0.05），且在T1、T2和T3时间点，DF组的PaO2、氧合指数和肺顺应性水平均高于F组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 右美托咪定联合肺保护性通气策略可以通过抗炎与抗氧化应激反应减少单肺通气食管癌患者围术期的肺脏损伤，改善患者的肺脏功能，降低了外科治疗对患者造成的不良影响。

• 阻断ERK信号通路降低大鼠脑创伤后MMP-9的表达及减轻脑水肿

  唐兆华, 王文涛, 刘自力, 孙晓川, 廖正步, 陈飞兰, 蒋光远, 霍 钢

  目的 观察并探讨阻断ERK通路激活对SD大鼠脑创伤后基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达变化及脑水肿形成的影响及意义。方法 取健康成年雄性SD大鼠90只，随机分为：对照组：只在颅骨上做一直径约为4 mm的骨窗，不作脑创伤；脑创伤组：制作改进式Feeney’s创伤性脑损伤模型；ERK抑制组：脑创伤前15 min股静脉注射ERK抑制剂（SCH772984，500 μg/kg），每组30只/组大鼠。制作改进式Feeney’s 脑创伤模型后，分别在脑创伤后2 h、2 d时断头取脑，Evans Blue法测定血脑屏障通透性变化，干湿比重法测定脑组织含水量，RT-PCR法和Western blotting法检测各组大鼠脑组织ERK磷酸化的水平及MMP-9 mRNA及蛋白的表达水平。结果（1）与对照组比较，脑创伤组大鼠脑组织中ERK的磷酸化水平在伤后2 h和2 d均出现明显上升（P<0.01），MMP-9mRNA和蛋白的表达在脑创伤后2 d时表达也出现显著增高（均P<0.01）；与脑创伤组比较，ERK抑制组大鼠脑组织中ERK的磷酸化水平在各时间点均明显下降（P<0.01），MMP-9 mRNA和蛋白在伤后2 d的过表达水平也较脑创伤组出现明显降低（均P<0.01）；（2）脑创伤组大鼠的血脑屏障通透性较对照组在伤后出现显著升高（P<0.05），ERK抑制组大鼠的血脑屏障通透性则较脑创伤组出现明显降低（P<0.05）；脑创伤组大鼠的脑含水量在伤后在2 d时出现显著增加（P<0.01），ERK抑制组大鼠的脑含水量则较脑创伤组有明显降低（P<0.01）。结论 阻断ERK通路过度的活化可显著降低大鼠脑创伤后MMP-9高表达，减轻大鼠血脑屏障破坏及创伤性脑水肿，提示ERK信号通路在脑创伤后的过度活化可通过调节MMP-9的表达在创伤性脑水肿中发挥重要作用。

• 水苏碱对阿尔茨海默病体外模型 Aβ25-35诱导 PC12 细胞凋亡的影响

  曲良超, 黄佳佳, 范明达, 郝雨辰, 严金秀

  目的 探讨水苏碱对阿尔茨海默病体外模型Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的影响及其机制。方法 根据GSE85871数据分析水苏碱的差异基因，并使用STITCH数据库鉴定水苏碱的靶基因。用Aβ25-35处理的PC12细胞建立阿尔茨海默氏病体外模型，水苏碱处理PC12细胞后，MTT法测定细胞活力，通过流式细胞术检测细胞周期，并使用qRT-PCR和Western blot检测相关的基因或蛋白质的表达。结果 GSE85871数据显示，水苏碱的差异基因中有37个上调基因和48个下调基因。STITCH数据库的结果显示，RPS8和EED是水苏碱的靶基因。PC12细胞用Aβ25-35处理后，细胞的活力与对照组比较明显下降（61.06±3.32 vs 93.11±5.37，P<0.05），RPS8（0.52±0.11）和EED（0.47±0.12）基因表达水平与对照组比较明显下降下降（P<0.05），同时RPS8（0.62±0.14）和EED（0.60±0.13）蛋白表达水平与对照组（0.93±0.06）比较明显下降（P<0.05），抑制凋亡相关蛋白Bcl-2（0.36±0.02）和p53（0.35±0.03）表达降低（P<0.05）。水苏碱治疗可以改善Aβ25-35的作用，阻断G2/M期细胞周期，RPS8和EED基因表达水平明显升高（P<0.05），Bcl-2和p53的蛋白表达升高（P<0.05）。结论 水苏碱在抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡中起重要作用，其机制可能与调节RPS8和EED从而促进Bcl-2和p53表达并抑制细胞的凋亡有关。

• 特发性炎症性肌病的分类： 基于临床表现和肌炎特异性抗体

  郑松塬, 陈世贤, 吴利生, 赵 迪, 陈飞龙, 朱俊卿, 李 娟

  目的 应用聚类方法探讨基于临床表现和肌炎特异性抗体的特发性炎症性肌病（IIM）的疾病分类。方法 回顾性分析2015~2019年期间就诊于南方医院符合纳入及排除标准的IIM患者，收集血清肌酸激酶（CK）、间质性肺炎（ILD）、合并肿瘤、肌炎特异性抗体等临床资料，通过二阶聚类法进行疾病分类，并分析不同聚类组的临床特征。结果 共71例IIM患者纳入本研究，其中多发性肌炎（PM）30例（42.3%），经典皮肌炎（DM）20例（28.2%），无肌病皮肌炎（CADM）16例（22.5%），免疫介导的坏死性肌病（IMNM）5例（7.0%）；二阶聚类将IIM分为3类；第1类患者典型临床特征为皮疹、抗MDA5抗体阳性和低蛋白血症（P<0.05），CK正常或略高，主要对应CADM[占15例（51.7%）]；第2类患者CK值及抗SRP抗体阳性率显著较高（P<0.001），对应IMNM[占4例（57.1%）]；第3类主要为PM患者，以抗合成酶抗体阳性为主要特点（P=0.022），与抗合成酶抗体综合征（ASS）密切相关[占17例（48.6%）]。结论 本研究基于临床和血清学特征（特别是肌炎特异性抗体）的聚类分析表明IIM可分为3个亚组，其中ASS是具有独特临床特征的IIM疾病亚群，研究提供了新的IIM分类思路。

• 开端同轴探头法测量组织介电特性的感应范围

  刘永泓, 黄 云, 辛学刚, 余学飞

  目的 研究开端同轴探头法测量介电特性参数的感应范围。方法 利用介电特性参数分层模型结合微距测量装置的方式建立开端同轴探头法感应范围的测量模型，以感应深度表示垂直方向感应范围，以感应直径表示水平方向感应范围。利用介电特性参数存在差异的多种材料（特氟龙、去离子水、乙醇、梯度浓度氯化钠溶液），设置了介电特性差异化分层模型。为标定不同输出功率下介电特性测量系统的误差范围，我们测定了不同输出功率环境下的合成不确定度（TCU），确定测量实验最佳可变功率范围。感应范围测量实验中，根据可能对感应范围造成影响的测量参数设置对照组，包括功率（-10、-5、0、3、6、9 dBm）、频率（1~500 MHz）、特氟龙与去离子水、乙醇形成介电常数[ε]差异高低对比组、特氟龙与不同浓度氯化钠溶液形成电导率[σ]差异高低对比组，上述分组均被设置在感应深度与感应直径测量实验中。结果 合成不确定度测量结果表明测量功率大于-10 dBm（0.10 mW）可以得到相对准确的测量结果（TCU<2%）。感应深度测量结果表明感应深度与功率正相关（P<0.05）随着测量功率上升感应深度在去离子水与乙醇溶液中逐渐增大，差异达到70 μm；感应深度与被测物电导率负相关（P<0.05），随着氯化钠溶液浓度的上升，对应感应深度逐渐下降，差异达到270 μm；高介电常数的去离子水测量组感应深度在不同测量参数环境下均大于低介电常数的乙醇测量组。测量参数变化对感应直径影响不显著，不同测量参数环境下感应直径稳定在固定范围内（1.0~1.8 mm），介于在探头内导体直径与绝缘层直径之间，小于探头直径。结论 开端同轴探头法测量介电特性感应范围受测量参数与被测物介电特性参数共同影响，其中感应深度受影响较大。

• 腹腔镜胃旁路术治疗非肥胖2型糖尿病患者的疗效分析

  吴壮炜, 吴良平, 戴晓江, 赵为国, 余 翔, 宋志高, 杨宝琳, 黄宗海

  目的 探讨腹腔镜下胃旁路手术治疗非肥胖2型糖尿病的有效性。方法 回顾性分析2012年3月~2018年6月在广州军区广州总医院甲乳糖尿病外科及广州中医药大学金沙洲医院接受腹腔镜胃旁路术手术，且术后随访满1、2、3年的BMI<27.5 kg/m（2 低BMI组，n=39）和BMI≥27.5 kg/m（2 高BMI组，n=35）的2型糖尿病患者的物理指标、糖代谢相关指标及胰岛功能相关代谢指标。结果 74例患者均成功实施腹腔镜下胃旁路手术，无中转开腹。在低BMI组中，术后1年空腹血糖、HbA1c、餐后2 h血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR、空腹C肽、BMI、体质量、腰围较术前均有明显改善（P<0.05）；术后2年，空腹血糖、HbA1c、餐后2 h血糖、HOMA-IR、BMI、体质量、腰围较术前均有明显改善（P<0.05）；术后3年，空腹血糖、HOMA-IR、空腹C肽、体质量、腰围较术前均有明显改善（P<0.05）；无严重并发症。低BMI组和高BMI组术后糖代谢和胰岛功能等指标未见明显差异（P>0.05）。结论 腹腔镜下胃旁路手术对我国非肥胖2型糖尿病患者是一种长期有效的降糖方法，主要降低患者腰围而不会有明显的体质量下降。更加长期的疗效还需大样本、更长时间的随访。

• 耳念珠菌不同条件下生长特性及体内毒性

  付雷雯, 乐婷婷, 王 玲, 郭辉杰, 刘志华, 杨 钧, 陈 清, 胡 静

  目的 探讨耳念珠菌在不同条件下的生长特性、代谢特点及体内毒性特征。方法 以白色念珠菌为参照，测定并比较耳念珠菌与白色念珠菌在常规培养条件、不同pH值和不同盐含量下的生长情况；利用微量生化反应管测定两种念珠菌糖醇发酵情况；以四周龄裸鼠为实验动物，用随机数字表法分为3组，耳念珠菌感染组、白色念珠菌感染组和生理盐水对照组，5只/组。耳念珠菌感染组和白色念珠菌感染组取0.3 mL已调至5×109 cfu/mL菌液，对裸鼠进行灌胃处理，建立胃肠道感染模型，对照组用等量生理盐水灌胃，取肝脏、肾脏、肠、粪便和血液等标本，通过真菌培养和组织病理学变化分析耳念珠菌的体内分布和毒性特征。结果 耳念珠菌的对数生长期约为8~24 h，约在24 h后进入生长稳定期，最适生长的pH值范围为5~7，生长模式与白色念珠菌相同；耳念珠菌在浓度为5%和10%的NaCl培养基中生长情况优于白色念珠菌，能发酵葡萄糖、蔗糖、海藻糖和山梨醇；从裸鼠的粪便、血液、肝脏和肾脏组织中分离出耳念珠菌，肝脏载菌量最多为5.7 log10 cfu/g，其可造成肝组织和肠组织病理学改变，但病变程度比白色念珠菌弱。结论 耳念珠菌在弱酸或中性条件下最适宜生长，具有高耐盐性，在免疫抑制状态下感染机体后，存在突破肠屏障入血及随血流播散并导致组织病变的可能。

• 基于MRI和CT数据的女性泌尿系统三维建模

  陈 兰, 陈春林, 刘 萍, 陈瑞莹, 李彩霞, 唐 连, 廖科丹, 姜文轩, 梁诗琪

  目的 探索女性泌尿系统三维模型的构建方法及意义。方法 收集2018年于南方医科大学南方医院妇科就诊患者的MRI及CT影像数据，选取采用妇科常用扫描序列进行扫描的MRI及CT数据集各10套，利用Mimics19.0软件对不同数据集的女性泌尿系统进行三维重建，并联合工程学软件，探索对膀胱尿道可进行测量的指标。结果 10套MRI数据集均成功构建膀胱及尿道，而10套CT数据集成功构建双肾、输尿管及膀胱。联合工程学软件，诸多膀胱尿道相关的几何参数可被测量，本研究中膀胱尿道后角：151.1±17.9°、β角：137.3±14.0°、尿道耻骨角：47.8±12.1°、尿道倾斜角：21.5±7.3°、α角：83.8±13.8°、耻骨后间隙：15.3±3.0 mm、尿道横纹肌厚度：2.6±0.6 mm。结论 计算机三维重建技术能够直观再现人体泌尿系统三维解剖形态，提供女性泌尿系统精细解剖的三维研究的平台，通过多项径线和角度的测量，可为将来研究不同人群泌尿系统精细解剖及功能的差异提供技术基础。

• 生物标志物在特发性肺纤维化中的临床价值

  范宇斌, 何荣伶, 邹丽君, 孟 婕

  特发性肺纤维化（IPF）以成纤维细胞灶进行性积聚和肺泡结构破坏为特点的慢性间质性肺炎。由于发病和进展机制未完全阐明，目前缺乏有效的早期筛查和治愈方法，患者总体预后差，中位生存期仅2~4年。近年，多篇研究证实数十种参与IPF发展过程的分子可作为潜在生物标志物。这些生物标志物可以在IPF的早期诊断（如SP-D、MMP-7、骨桥蛋白）、判断预后（如端粒酶长度、KL-6、mtDNA、HSP-70、LOXL2、CXCL13、miRNA、ICAM-1、CCL18）、指导治疗（如 TOLLIP rs3750920 基因型、SAMS评分、SP-D）、提供新的治疗靶点（如TERT、TERC、RTEC、PARN）等方面发挥重要作用。