南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2021年第4期

• 丹酚酸B及其镁盐通过阻止病毒融合抑制SARS-CoV-2感染靶细胞

  杨 婵, 程 晨, 王进绅, 陈 珂, 詹 剑, 潘晓彦, 许鑫锋, 徐 伟, 刘叔文

  目的 探究中药单体丹酚酸B（Sal-B）及其镁盐体外抑制SARS-CoV-2感染靶细胞的效果及作用机制。方法 利用感染性SARS-CoV-2及SARS-CoV-2假病毒体外细胞感染模型，检测Sal-B及其镁盐制剂注射用丹参多酚酸盐（ZDDY）的抗SARS-CoV-2活性；利用分子对接技术与分子动力学模拟技术，寻找Sal-B的抗病毒作用靶点；利用圆二色谱技术，检测六螺旋束（6-HB）的α-螺旋构象；利用SARS-CoV-2 S蛋白介导的细胞-细胞融合体系，检测Sal-B是否作用于新冠病毒入侵宿主的膜融合过程；利用流式细胞术，检测Sal-B是否作用于新冠病毒受体结合区RBD蛋白。结果 Sal-B与ZDDY在非洲绿猴肾细胞（Vero-E6）感染模型上抑制SARS-CoV-2的半数有效浓度EC50分为55.47 μmol/L，36.07 μg/mL；Sal-B与ZDDY抑制SARS-CoV-2的进入阶段，抑制SARS-CoV-2假病毒活性的IC50 分别为1.69 μmol/L，24.81 μg/mL；Sal-B可与SARS-CoV-2 S2亚基的8个氨基酸位点结合，亲和力为-8.2 kcal/moL，Sal-B在分子对接预测位点与 SARS-CoV-2 S2亚基稳定结合；Sal-B干扰SARS-CoV-2 HR1与HR2形成6-HB，显著降低6-HB的α-螺旋百分比（P<0.05）；Sal-B浓度依赖性抑制SARS-CoV-2 S蛋白介导的细胞-细胞膜融合，IC50为3.33 μmol/L；Sal-B不影响SARS-CoV-2 RBD蛋白与受体ACE2结合。结论 Sal-B及其镁盐制剂ZDDY体外可有效抑制SARS-CoV-2感染靶细胞，Sal-B通过抑制病毒膜融合过程发挥抗SARS-CoV-2活性。

• 新风胶囊通过 miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR 抑制骨关节炎CD4+T与软骨细胞共培养的免疫炎症

  鲍丙溪, 刘 健, 万 磊, 张 颖, 龙 琰, 孙广瀚

  目的 观察新风胶囊（XFC）含药血清通过调控miR-23a-3p /PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制骨关节炎（OA）CD4+T与软骨细胞共培养中免疫炎症反应的作用机制。方法 选取30例OA患者（OA组）及30例正常人（NC组）检测miR-23a-3p、10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因（PTEN）、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的表达，观察临床指标：红细胞沉降率（ESR）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、IgA、IgG、IgM、补体 C3、补体C4的表达，并观察通路与临床指标的相关性。观察 30 例 OA 患者经 XFC 治疗后通路及临床指标的变化。分离及提取 OA-CD4 +T 细胞，transwell小室培养OA-CD4+T细胞与OA-CH，SD大鼠给药灌胃制备XFC含药血清；采用CCK8法检测OA-软骨细胞的细胞增殖；双荧光素酶报告实验分析miR-23a-3p和PTEN的靶向关系；RT-PCR技术检测共培养细胞中miR-23a-3p、PTENmRNA、PI3KmRNA、AKTmRNA、mTORmRNA 的表达；采用 ELISA 法检测 IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的水平；Western blotting 检测PTEN、PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白表达。结果 与NC组相比，OA组miR-23a-3p、PTEN、PI3K、AKT、IL-1β、IL-6、TNF-α表达显著上调，而PTEN、IL-10表达显著下调（P<0.01）；相关性分析表明：miR-23a-3p与IL-6呈正相关（P<0.01），PI3K与IL-10呈正相关，mTOR与IL-6、IL-10、补体C3、补体C4呈正相关（P<0.01或P<0.05）；加入XFC含药血清，miR-23a-3p及PI3K/AKT/mTOR通路被抑制，L-1β、IL-6、TNF-α表达水平下降、IL-10表达水平升高（P<0.01）；Model组miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR、IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平升高，PTEN、IL-10表达水平降低（P<0.01）；miR-23a-3p经过表达后，miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR、IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平显著升高，PTEN、IL-10表达水平显著降低（P<0.01或P<0.05）；XFC组IL-1β、IL-6、TNF-α表达降低，IL-10表达升高，miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR表达下调，PTEN表达上调（P<0.01或P<0.05）。结论 XFC可通过下调miR-23a-3p的表达，抑制PTEN/PI3K/AKT/mTOR通路的活化，改善IL-1β、IL-6，IL-10和TNF-α的表达，降低OA患者炎症反应。

• 运动性心肌肥厚预适应的抗肥厚记忆及其与交感神经活性的关系

  胡东红, 黄晓霞, 郑灿坤, 朱颖琪, 陈 露, 林海若, 廖禹林

  目的 揭示运动引起的生理性心肌肥厚（PMH）消退后是否有抵抗病理性心肌肥厚的记忆及其产生机制。方法 建立小鼠运动肥厚预适应与主动脉缩窄（TAC）模型，按随机数字表法分为静息假手术组（Sed+Sham），静息TAC组（Sed+TAC），运动预适应假手术组（Exe+Sham），运动预适应TAC组（Exe+TAC），比索洛尔+运动预适应假手术组（biso+Exe+Sham），比索洛尔+运动预适应TAC组（biso+Exe+TAC），共6个组，12只/组。运动预适应组小鼠进行为期3周的游泳训练，而后检查PMH的产生与消退。测量小鼠体质量、心重、肺重和胫骨长度等数据，用实时荧光定量PCR检测心肌肥厚标志基因肌球蛋白重链7（Mhy7）的表达，用小动物心脏超声与左心导管检测小鼠心功能。最后，用组织学染色分析心肌细胞横截面积大小与心肌纤维化程度。结果 与静息组相比，游泳运动3周后小鼠心重体质量比（HW/BW）、心重胫骨长度比（HW/TL）以及心肌细胞横截面积明显增加（P<0.05），而心肌纤维化与Mhy7无明显变化。比索洛尔处理的运动小鼠与静息组小鼠相比HW/BW和HW/TL未见明显差异。游泳运动终止1周后，心肌肥厚指标（HW/BW、HW/TL）消退至基线水平。TAC 4周后，与Sed+TAC组小鼠相比，Exe+TAC组小鼠的左室后壁厚度、HW/BW、HW/TL、肺重体质量比值、左室舒张末压和左室松弛时间常数、心肌细胞横截面积以及纤维化程度明显降低（P<0.05）；而左室射血分数和左室最大压力变化速率明显增高（P<0.05）。这些指标在biso+Exe+TAC组与Sed+TAC组小鼠之间无明显差异。结论 运动引起的生理性心肌肥厚消退后存有抗病理性肥厚记忆，该记忆的产生可归因于运动引起的交感活性增强

• 拟康氏木霉胞外多糖联合奥沙利铂可体外协同抑制结直肠癌细胞的增殖

  李 萍, 袁平川, 阙月月, 刘筱琴, 王国栋

  目的 探讨拟康氏木霉胞外多糖（EPS）联合奥沙利铂（Oxa）用药对结肠癌细胞HCT116的协同抑制作用。方法 实验分为Control组（0 μg/mL）、Oxa组（8 μg/mL Oxa）、EPS组（100 μg/mL EPS）、EPS+Oxa组（8 μg/mL Oxa+100 μg/mL EPS）。CCK-8检测细胞活力，CompuSyn软件拟合Fa-CI曲线评价联用效果。流式检测凋亡和周期、划痕实验和transwell实验检测细胞迁移能力，Oxa和EPS相关基因与结直肠癌相关基因取交集进行PPI分析以及GO和KEGG富集分析。结果 Oxa单用或与EPS联用处理HCT116细胞，均可使HCT116细胞活力受到抑制，并呈现剂量与时间依耐性，两者联用有明显的协同作用（CI<1）。两药联用组的细胞总凋亡率与Oxa组以及对照组比较均显著升高（P<0.05）；联合用药组处于S期的比例高于其他各组。EPS和Oxa均具有抑制HCT116细胞迁移的作用，两者联用后抑制作用更为明显。KEGG分析显示主要涉及耐药、凋亡、血管新生等通路。结论 EPS联合奥沙利铂可协同抑制HCT116细胞增殖，促进该细胞凋亡和细胞S周期阻滞、抑制细胞迁移，铂耐药、PI3K-Akt、MAPK等信号通路发挥了关键作用。

• 五步蛇毒蛋白C激活剂在脓毒症大鼠早期适应性免疫应答中的作用

  孙 瑶, 包鹏举, 张根葆, 王海华, 王国栋

  目的 探讨五步蛇毒蛋白C激活剂（PCA）在脓毒症大鼠早期适应性免疫应答中的作用。方法 采用SPF级SD大鼠78只，用随机数字表法分组：对照组（n=6，腹腔注射生理盐水）；通过腹腔注射脂多糖（LPS 10 mg/kg）复制脓毒症大鼠模型，模型组以LPS注射后4、6、8、12、16、24 h时的标本采集时间分为6组，6只/组；余36只大鼠于LPS注射30 min后使用药物干预，分为1-磷酸鞘氨醇受体1（S1PR1）激动剂SEW2871干预组（0.5 mg/kg，腹腔注射）和PCA干预组（0.1 mg/kg，腹腔注射），各干预组以LPS注射后6、12、24 h时的标本采集时间分为3组，每组6只。采用ELISA法检测血浆IL-4、S1P、IL-12和IFN-γ水平，应用免疫荧光法检测肠系膜淋巴结S1PR1和CD103表达的变化。结果 与对照组比较，脓毒症大鼠在注射LPS后的24 h内，血浆S1P、IL-12、IL-4和IFN-γ水平明显增高（P<0.05），LPS注射后6 h内IFN-γ/IL-4比值逐渐增高，之后逐渐降低；肠系膜淋巴结中S1PR1和CD103的表达明显增高（P<0.05）。SEW2871明显增加血浆S1P、IL-12和IFN-γ的浓度，降低血浆IL-4水平（P<0.05），且明显减少淋巴结中S1PR1和CD103的表达（P<0.05）。蛇毒PCA干预后，血浆IL-4水平明显增高，淋巴结S1PR1表达显著增多（P<0.05）。结论 五步蛇毒PCA对维持脓毒症早期机体炎症和免疫反应的平衡具有调节作用，其机制可能与S1P-S1PR1通路有关。

• 慢性不可预知温和刺激小鼠内侧前额叶的能量代谢障碍及功能磁共振成像

  张竞予, 刘 恺, 曾善美, 陈纯辉, 邓燕佳, 靖林林, 文 戈

  目的 研究慢性不可预知温和刺激（CUMS）小鼠活体状态下内侧前额叶灰质体积和自发活动的变化，及其与mTORC1能量信号通路的关联及机制。方法 4周龄健康C57Bl/6小鼠随机分为正常对照组（n=16，未予处理）和抑郁模型组（n=16，CUMS方法造模8周）。旷场实验、强迫游泳实验、悬尾实验、糖水摄取实验检测小鼠抑郁倾向，利用结构功能磁共振探究小鼠脑灰质体积和低频振幅的改变。而后，将抑郁模型组的CUMS小鼠随机分成CUMS治疗组（n=8，氯胺酮活化mTORC1通路）和CUMS对照组（n=8，生理盐水）。取小鼠内侧前额叶组织，蛋白免疫印迹法检测并比较正常对照组、CUMS治疗组及CUMS对照组3组小鼠mTORC1相关蛋白的磷酸化水平，ELISA法检测ATP和NADP+/NADPH为代表的3组小鼠组织能量代谢情况。结果 经过CUMS后小鼠出现明显抑郁行为倾向，CUMS小鼠的糖水偏爱百分比下降（P<0.05）、糖和水的总摄取量减低（P<0.01），旷场实验总运动距离（P<0.05）及中央区域运动距离（P0.05），但不具有统计学意义。磁共振检测发现CUMS小鼠内侧前额叶灰质体积增大，mALFF显著增高（P<0.01，Alphasim矫正）；mTORC1相关蛋白的磷酸化水平减低，ATP和NADP+/NADPH降低（P<0.05），经过氯胺酮治疗，mTORC1相关蛋白的磷酸化水平升高，ATP显著升高（P<0.05）。结论 CUMS小鼠内侧前额叶存在更高的自发活动以及更低的产能效率，这种自发活动与产能效率的不匹配提示内侧前额叶存在mTORC1磷酸化减低相关的能量代谢方面的障碍，且此障碍可以通过氯胺酮活化mTORC1通路得到缓解。

• 肝细胞线粒体NDUFA13蛋白缺陷可诱导小鼠自发性慢性肝纤维化

  徐小惠, 曾 欣, 李 锐, 冯金梅, 黄道超, 黄 轶

  目的 探究肝细胞线粒体NDUFA13蛋白表达缺失在诱导小鼠肝脏纤维化发生中的作用及可能机制。方法 以肝脏特异性NDUFA13杂合敲除小鼠品系（NDUFA13fl/-；Alb-Cre）作为研究对象，以同窝NDUFA13fl/fl小鼠作为对照，8只/组，进行长达两年的实验观察，分别在实验早期和晚期处死小鼠获取肝组织样本。采用HE染色、Masson染色观察不同时期小鼠的肝组织病理变化及纤维化表型。Western blot检测肝组织中NDUFA13蛋白表达水平。免疫荧光分析巨噬细胞标志物F4/80与转化生长因子TGF-β1、肿瘤坏死因子TNF-α与白介素IL-1β的表达。免疫组化分析肝星型细胞活化标志物α-SMA、基质金属蛋白酶MMP-9与基质金属蛋白酶组织抑制剂TIMP-1、胶原纤维Collagen-Ⅰ与Collagen-Ⅲ的表达情况。结果 HE染色、Masson染色发现4周 龄NDUFA13fl/-小鼠肝组织炎症浸润明显但未出现纤维化表型；2年龄NDUFA13fl/-小鼠肝组织严重损伤且伴大量胶原纤维产生。Western Blot结果显示2年龄NDUFA13fl/-小鼠肝组织中NDUFA13蛋白表达水平较对照小鼠明显降低（P<0.05）。免疫荧光与免疫组化结果显示，NDUFA13fl/-小鼠肝组织中巨噬细胞F4/80聚集增多并伴随大量TGF-β1产生（P<0.05），以及TNF-α、IL-1β等炎症因子大量分泌（P<0.05）；同时，α-SMA、Collagen-Ⅰ及Collagen-Ⅲ表达明显增多（P<0.05），基质金属蛋白酶MMP-9表达降低（P<0.05），而其抑制剂TIMP-1表达明显增加（P<0.05）。结论 肝细胞线粒体NDUFA13蛋白缺陷能够诱导小鼠自发的慢性肝纤维化病理表型，可能与巨噬细胞/炎症因子信号诱导的肝星状细胞异常活化有关。

• FⅧ剂量对青少年重型血友病A的关节结构与功能的影响：43例前瞻性队列研究中期随访报告

  孟 蕾, 庄金木, 孙雪岩, 柳竹琴, 周 璇, 刘 昊, 周 芳, 李颖嘉, 孙 竞

  目的 运用综合评估手段比较分析不同剂量FⅧ治疗下青少年重型血友病A患者的临床表型、关节结构与功能变化规律。方法 43例青少年（4~18岁）重型血友病A患者，分为按需组（n=7），低剂量预防组[FⅧ 10~15 U/kg，2~3次/周，且≤30 U/（kg·周），n=17]，中剂量预防组[FⅧ 15~20 U/kg，2~3次/周，且45~60 U/（kg·周），n=19]。比较分析其24月间临床出血表型[年出血率/年关节出血率/最严重单个关节年出血率]、关节影像评分（超声HEAD-US评分，IPSG MRI评分）、血友病关节健康评分量表（HJHS）、血友病功能独立性评分（FISH）及变化规律。使用Kruskal-Wallis检验、Wilcoxon和重复测量的方差分析进行统计检验。结果 低中剂量组的年出血率较按需组明显减少（P1=0.004，P2=0.000），中剂量较低剂量组减少32.87%。按需组、低剂量组和中剂量组的年关节出血率差异有统计学意义（P1=0.001，P2=0.000，P3=0.001）。按需组、低剂量组和中剂量组的最严重单个关节年出血差异有统计学意义（P1=0.016，P2=0.000，P3=0.005），按需组出血次数渐快增加，低剂量组维持不变，中剂量组则有减缓趋势。3组患者最严重单个关节影像学评分均有进展。低中剂量组的超声评分变化值进展较按需组延缓（P1=0.002，P2=0.000），按需组评分按原速率增长，低、中剂量组均有减缓趋势。低中剂量组的MRI评分变化值进展较按需组均有延缓（P1=0.041，P2= 0.000），按需、低剂量组评分增长加快，中剂量组速率保持不变。按需组的HJHS评分变化值较低中剂量组增加（P1=0.003，P2= 0.000）；按需组保持原有增长速度，低、中剂量组评分均出现负值趋势。按需组FISH评分降低0.29±3.09分，低中剂量组均回升，与按需组差异有统计学意义（P1=0.000，P2=0.000）。结论 两年中期随访结果显示，中国青少年低中剂量FⅧ的预防治疗在保护关节结构和功能方面明显优于按需治疗，中剂量可能稍优于低剂量预防。

• 联合GCS评分、CT评分与血清S100B蛋白可评估急性颅脑创伤患者损伤程度及早期预后

  尹文国, 翁山山, 赖仕宇, 聂 虎

  目的 探讨格拉斯哥昏迷评分（GCS）与CT评分联合血清S100B蛋白对急性颅脑创伤（TBI）患者损伤程度及早期预后的评估价值。方法 选择2019年5月~2020年5月期间就诊于四川大学华西医院急诊科的伤后24 h内的TBI患者108例，收集临床资料、实验室检查、CT检查、GCS评分、全面无反应量表评分、Fisher CT 分级、Rotterdam CT评分、血清S100B蛋白，随访患者28 d的预后情况，计算格拉斯哥预后评分（GOS）。根据GOS评分分为预后不良组（GOS 1-3）和预后良好组（GOS 4-5），选出与预后不良相关的指标，分析比较指标预测预后的效能；根据头部CT结果分为CT阳性组（CT+）与CT阴性组（CT-），评估血清S100B蛋白水平预测CT阳性表现的效能。结果 与预后良好组相比，预后不良组患者GCS评分更低（P<0.01），Rotterdam CT评分、血清S100B蛋白水平更高（P<0.01）。在单一指标中，血清S100B蛋白的AUC值最大（0.79）；在联合指标中，GCS评分与血清S100B蛋白组合的 AUC 值最大（0.80）。与 CT-组相比，CT+组患者血清 S100B 蛋白水平更高（P<0.05），血清 S100B 蛋白水平与Rotterdam CT评分呈低度正相关（r=0.26，P<0.01）。结论 血清S100B蛋白、GCS评分、Rotterdam CT评分三者可以作为评估急性TBI严重程度指标，且与患者早期预后均密切相关。血清S100B蛋白、GCS评分、Rotterdam CT评分联合指标预测预后的能力总体上较单一指标更好。血清S100B蛋白与急性TBI患者头部影像学表现存在一定相关性，但尚需进一步研究以探讨其对临床影像学检查选择的指导价值。

• siRNA 干扰 CTHRC1 可体外抑制甲状腺乳头状癌 TPC-1细胞的增殖并诱导凋亡

  唐振宁, 丁小云, 秦少杰, 张朝林

  目的 探讨胶原三股螺旋重复蛋白1（CTHRC1）甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖、凋亡的影响。方法 成功筛选干扰甲状腺乳头状癌TPC-1细胞CTHRC1表达的siRNA，以脂质体转染法将siRNA转染甲状腺乳头状癌TPC-1细胞，采用real-time PCR和Western blot检测转染后TCP-1细胞中CTHRC1mRNA和蛋白表达的变化。实验分组：将筛选的干扰序列转染TPC-1细胞作为干扰组（si-CTHRC1组），将随机阴性对照序列转染的TPC-1细胞作为阴性对照组（si-NC组），以不做任何处理TPC-1细胞为空白组（WT组）。采用CCK-8实验检测细胞增殖；流式细胞术AV/PI双染观察各组TCP-1细胞凋亡的变化；采用Western blot法检测各组 TPC-1 细胞中含剪切型半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（c-Caspase-3）蛋白、剪切型多聚 ADP 核糖聚合酶 1 （c-PARP1）蛋白表达水平以及磷酸化细胞外信号调节激酶 1/2(ERK1/2)表达水平。结果 将筛选出明显抑制 TPC-1 细胞CTHCR1表达的siRNA转染细胞后，TPC-1细胞中CTHRC1 的mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05）。与WT组和si-NC组相比，si-CTHRC1组的细胞活降低（P<0.05）；与对照组相比，si-CTHRC1组的TPC-1细胞细胞凋亡率升高，Western blot实验发现：si-CTHRC1组的c-caspase-3、c-PARP1蛋白表达水平均升高（P<0.05）；si-CTHRC1组ERK1/2蛋白的磷酸化水平增加。结论 干扰CTHRC1能够抑制TPC-1细胞的增殖并诱导凋亡，此过程可能通过激活ERK1/2信号通路介导。

• ENTPD5在上皮性卵巢癌组织中高表达：基于Oncomine数据库及生物信息学方法

  王 卉, 陈学平, 陈 运, 曹颖诗, 陈 瑶, 刘国炳, 黄莉萍

  目的 探讨ENTPD5在上皮性卵巢癌中的表达及临床价值。方法 通过Oncomine、TCGA数据库对ENTPD5在上皮性卵巢癌中的表达水平进行分析，UALCAN数据库分析ENTPD5表达水平与上皮性卵巢癌患者临床性状的相关性，基因富集分析（GSEA）软件分析ENTPD5在上皮性卵巢癌中的可能作用机制，CIBERSORT包探讨ENTPD5的表达量与免疫浸润的相关性。为进一步验证生物信息挖掘结果，RT-qPCR及Western blot检测23例上皮性卵巢癌组织和15例正常卵巢组织中ENTPD5的表达水平，免疫组化法检测50例上皮性卵巢癌石蜡样本和6例正常卵巢石蜡样本中ENTPD5的表达水平。结果 Oncomine、TCGA数据库发现与正常卵巢组织相比，ENTPD5在上皮性卵巢癌组织中表达显著增高（P<0.05），ENTPD5表达水平与上皮性卵巢癌患者生存呈负相关（P<0.05）。UALCAN数据库发现ENTPD5表达水平与患者年龄相关。GSEA软件分析发现ENTPD5参与ABC转运蛋白、WNT信号通路、胰岛素信号通路以及糖降解等过程，并在其中高度富集。CIBERSORT包分析显示ENTPD5表达水平与NK细胞、肥大细胞及嗜酸性粒细胞的含量呈负相关（P<0.05）。RT-qPCR结果提示ENTPD5在上皮性卵巢癌组织中的表达水平（2.592±0.339）显著高于其在正常卵巢组织表达水平（1.00±0.123）（t=4.312，P<0.01）。Western blot结果提示上皮性卵巢癌组织中的ENTPD5表达显著高于正常卵巢组织（P<0.05）。免疫组化结果提示ENTPD5在上皮性卵巢癌组织中高表达。结论 ENTPD5在上皮性卵巢癌中高表达，其可能通过参与细胞多种功能过程以及细胞免疫浸润，参与上皮性卵巢癌的发生发展。

• COVID-19患者行无痛纤维支气管镜诊疗术的临床效果

  王加芳, 杨 硕, 陈 菁, 陈治军

  目的 探讨COVID-19患者行无痛纤维支气镜诊疗术的必要性、安全性和可行性。方法 采用回顾性研究方法，收集在武汉市第一医院住院期间行无痛纤支镜诊疗术的COVID-19患者的临床资料。记录患者的年龄、性别、ASA分级等基本信息。术中采用静脉全麻联合利多卡因气道表面麻醉的麻醉方式。记录患者术前、术中和术后的基本生命体征变化。评估并记录患者检查过程中的咳嗽程度。追踪患者检查结束后24 h内不良反应的发生情况。监测医务人员的健康状况。结果 最终共有33例患者纳入本研究，平均年龄63.58岁，ASA分级Ⅱ~Ⅳ级。患者术前SpO2为（99.1±1.3）%，术中最低SpO2为（94.8±4.3）%，较术前有所降低（P<0.05），但经托下颌开放气道、面罩加压辅助呼吸等处理均可恢复到95%以上。33例患者均成功实施了纤支镜诊疗术，84.85%的患者术中表现为轻微的咳嗽。术后患者无明显麻醉相关并发症。除了标准的三级防护外，检查过程中还创新性地使用了关节镜手术中使用的一次性医用无菌防护套包裹患者的头面部，降低病毒播散的风险。最终未发生医务人员感染的情况。结论 COVID-19患者实施纤支镜诊疗过程中采取无痛技术是有临床价值的，且在严格的三级防护下，此操作应该是安全可行的。

• TEAD1基因敲除对糖尿病性ED大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化的影响

  张 涛, 李维丽, 邱晓拂, 刘百川, 李高远, 冯才鑫, 廖俊发, 林康健

  目的 利用CRISPR/Cas9技术敲除糖尿病性ED大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞（CCSMCs）中TEAD1基因，探讨TEAD1基因对糖尿病性ED大鼠CCSMCs表型转化的影响。方法 利用链脲佐菌素建立糖尿病性ED大鼠模型。原代及传代培养CCSMCs，并进行免疫荧光染色鉴定。根据CRISPR/Cas9靶点设计规则设计了3组特异性sgRNA（sgRNA-1、sgRNA-2、sgRNA-3），构建表达载体并转染293T细胞，包装并收集慢病毒，将其感染糖尿病性ED大鼠CCSMCs，嘌呤霉素筛选阳性细胞，Western blot检 测TEAD1蛋白的表达水平。然后将实验分3组：敲除TEAD1基因的糖尿病性ED大鼠CCSMCs为实验组（CCSMCs-sgRNA-2）、空载体病毒感染组为阴性对照组（CCSMCs-sgRNA-NC）、不感染病毒组为空白对照组（CCSMCs-CK），分别使用qRT-PCR和Western blot检测各组细胞表型标志物平滑肌肌球蛋白重链（SMMHC）、碱性调宁蛋白（Calponin）和增殖细胞核抗原（PCNA）mRNA和蛋白水平的表达。结果 原代培养的糖尿病性ED大鼠CCSMCs α-SMA阳性细胞率达95%以上。成功包装了含有TEAD1-sgRNA的重组慢病毒，筛选得到了稳定低表达TEAD1基因的糖尿病性ED大鼠CCSMCs细胞系。Western blot结果显示感染TEAD1-sgRNA-2的糖尿病性ED大鼠CCSMCs中TEAD1蛋白水平最低（P<0.05）。qRT-PCR和Western blot结果显示，敲除 TEAD1 基因的糖尿病性 ED 大鼠 CCSMCs，SMMHC 和 Calponin mRNA 和蛋白水平的表达均显著上调（P<0.05），而PCNA mRNA和蛋白水平的表达均显著减少（P<0.05）。结论 利用CRISPR/Cas9基因技术成功构建了定向敲除TEAD1基因的慢病毒载体，TEAD1基因的缺失可使糖尿病性ED大鼠CCSMCs表型从合成型向收缩型转化。

• 脑脊液中β淀粉样蛋白42和神经丝轻链蛋白水平与术后神经认知功能障碍的相关性：基于90例66~78岁患者

  张雪卫, 傅 强

  目的 检测β淀粉样蛋白42（Aβ42）和神经丝轻链蛋白（NFL）在老年患者脑脊液中的表达情况，并探讨其与患者发生术后神经认知功能障碍（PNCD）的相关性。方法 选取2017年1月~2018年12月在解放军301医院麻醉科接受脊椎-硬膜外联合麻醉下行髋关节或膝关节置换术的90例老年患者作为研究对象。采用ELISA 法检测脑脊液中Aβ42和NFL的浓度水平。于术前1 d和术后7 d采用简易认知状态评价量表（MMSE）对患者进行认知评估；采用相关神经认知功能测试后，以Z 值计分法判定患者是否发生PNCD。Spearman秩相关分析脑脊液Aβ42和NFL的表达与MMSE评分的相关性。采用受试者工作特征曲线（ROC）曲线分析脑脊液Aβ42和NFL水平对PNCD的预测价值。结果 90例老年患者中有38例术后发生PNCD，发生率为42.2%。PNCD组患者脑脊液Aβ42为1.96 ng/mL，明显低于非PNCD组的2.54 ng/mL（t=3.29，P<0.05）；而PNCD组患者脑脊液浓度值为4.59 ng/mL，明显高于非PNCD组（3.16 ng/mL）（t=3.72，P<0.05）。患者脑脊液Aβ42与MMSE分值存在正相关（r=-0.659，P< 0.05）；脑脊液NFL浓度水平与MMSE分值存在负相关（r=-0.626，P<0.05）。ROC曲线分析结果，脑脊液Aβ42和NFL预测PNCD的的曲线下面积(AUC)分别为为0.744和0.768，而二者联合预的ROC曲线下AUC为0.847。结论 PNCD患者术前脑脊液Aβ42和NFL明显高于非PNCD患者。脑脊液中Aβ42和NFL浓度水平均可预测老年患者PNCD的发生，联合二者的诊断价值更高。

• 基于网络药理学和分子对接探讨四妙丸治疗高尿酸血症的作用机制

  曾丽莹, 邓伊健, 陈洁瑜, 孙晓敏, 刘艳艳, 聂晓莉, 周 琳, 赵晓山, 戴娇娇

  目的 基于网络药理学及分子对接探讨四妙丸治疗高尿酸血症的作用机制。方法 利用 TCMSP、SEA、Swiss 和PharmMapper数据库预测四妙丸活性成分的作用靶点，运用GeneCards和TCD数据库检索与高尿酸血症相关的疾病靶点。使 用Cytoscape 3.6.1构建蛋白质相互作用网络图，通过STRING平台对四妙丸治疗高尿酸血症的靶点进行GO富集分析和KEGG通路分析。利用SwissDock平台进行分子对接，预测主要化合物与关键靶点的结合度。结果 本研究共筛选出四妙丸中的28种活性成分及429个潜在靶点，与高尿酸血症相关的疾病靶点有494个，得到四妙丸与高尿酸血症的共同靶点有118个，并筛选出其中几个关键靶点AKT1、IL-6、JUN、TNF和CASP3进行分子对接，对接结果显示AKT1、IL-6、JUN、TNF和CASP3与小檗红碱、表小檗碱、豆甾醇、谷甾醇等具有良好的结合活性。预测AKT1、IL-6、JUN、TNF和CASP3可能是四妙丸治疗高尿酸血症的关键靶点。KEGG通路富集分析结果显示四妙丸可能通过TNF信号通路、IL-17信号通路、细胞凋亡信号通路等多条信号通路治疗高尿酸血症。结论 四妙丸是通过多组分、多靶点和多途径协同治疗高尿酸血症，为后续进一步研究四妙丸的活性成分及作用机制提供了依据。

• 陈皮酵素可体内抑制小鼠的肝纤维化

  曾 兵, 廖柏鸿, 周东耀, 白英明, 陈恒星, 陈柏忠, 朱志博

  目的 研究陈皮酵素在体内抗肝纤维化的作用。方法 119只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组：模型组（n=49）、实验组（n=56）、对照组（n=7）和陈皮酵素组（n=7）。模型组灌胃40% CCl4橄榄油溶液（3×0.1 mL/周）；实验组灌胃40% CCl4橄榄油溶液（3× 0.1 mL/周）和陈皮酵素（0.26 mL/d）；对照组和陈皮酵素组分别给予橄榄油（3×0.1 mL/周）和陈皮酵素（0.26 mL/d），共8周。采用腹腔注射CCl4的方法来构建小鼠肝纤维化模型，模型组和实验组每周处死7只小鼠，对照组和陈皮酵素组小鼠第8周处死，收集肝脏标本和血清。用HE染色和天狼星红染色观察各组小鼠肝组织病理改变，测定血清甘氨酸、丙氨酸氨基转移酶、谷氨酰胺转氨酶、碱性磷酸酶水平。结果 HE和天狼星染色结果显示，只灌胃CCl4的模型组，肝纤维化程度逐渐加深，表现为汇管区明显的脂肪变性、坏死和炎性细胞浸润。但给予陈皮酵素的实验组炎症程度较模型组减轻，表现为空泡化和炎症细胞浸润减少，胶原沉积减少且实验组 Ishak 评分显著低于模型组（P<0.05）。与模型组相比，实验组血清肝功能指标甘氨酸、丙氨酸氨基转移酶、谷氨酰胺转氨酶、碱性磷酸酶水平显著降低（P<0.05）。结论 陈皮酵素有肝保护作用，可以显著减轻肝纤维化程度。

• 钙蛋白酶激活可促进大鼠透析相关性腹膜纤维化

  李 芳, 洪 雪, 蒋建平

  目的 观察钙蛋白酶（CAPN）激活在腹膜纤维化中的表达和作用。方法 将24只SD雄性大鼠随机分为4组：对照组、生理盐水MDL28170（CAPN抑制剂）组、腹膜透析组、腹膜透析+MDL28170组。8周后处死大鼠，观察各组大鼠腹膜厚度、组织中CAPN的活化状态以及纤维连接蛋白(FN)和胶原蛋白I（COL I）蛋白的表达。体外培养原代大鼠腹膜间皮细胞，分为对照组、单纯MDL28170组、转化生长因子（TGF-β）诱导组、MDL28170联合TGF-β干预组，其中MDL28170联合TGF-β干预组按照施加的MDL28170浓度再分为30、20、10 μmol/L组。采用Western blot和免疫荧光检测CAPN活化状态、FN和COL-I在腹膜间皮细胞中的表达。结果 与对照组相比，腹膜透析组大鼠腹膜厚度增加（P<0.05），腹膜组织CAPN活化程度、FN和COL-I的表达均增加（P<0.05）。应用MDL28170干预后，大鼠腹膜纤维化程度改善，腹膜厚度变薄（P<0.01），FN和COL-I的表达减少（P<0.01）。体外实验与体内实验结果相符，MDL28170与TGF-β共同孵育的腹膜间皮细胞α-SMA、FN和COL-I的表达量较TGF-β组均减少（P<0.05）。结论 腹膜透析模型大鼠腹膜CAPN的活性、FN和COL-I的表达明显增加，CAPN的活化可以促进腹膜纤维化，抑制其活化可以减轻腹膜纤维化程度。

• 右美托咪定剂量对老年脊柱手术患者术后认知功能障碍发生率及Aβ和细胞因子水平的影响：120例随机对照试验

  李 智, 李 虎, 姚尚龙, 程明华, 陈建颜

  目的 探讨右美托咪定（DEX）预防老年脊柱手术患者术后认知功能障碍（POCD）发生率的免疫调节机制及合理剂量。方法 选择行择期脊柱手术患者120例，随机分为4组：S组（n=30，0.2 μg·kg-1 ·h-1 DEX），M组（n=30，0.5 μg·kg-1 ·h-1 DEX），L组（n=30，0.8 μg·kg-1 ·h-1 DEX），C组（n=30，等容量生理盐水）；S组、M组、L组麻醉诱导前使用0.3 μg/kg负荷量DEX泵注10 min，C组则使用等容量生理盐水泵注；全身麻醉诱导气管插管后对S组、M组、L组分别静脉泵注DEX 0.2、0.5、0.8μg·kg-1 ·h-1至手术结束前40 min，记录苏醒时间和低血压、窦性心动过缓的发生，术前（D0）及术后1 d（D1）、3 d（D2）、7 d（D3）评估患者MMSE评分及检测Aβ、TNF-α、IL-1β和 IL-6 的血清浓度。结果 与DO比较，4组患者术后D1时间点的Aβ、TNF-α、IL-1β和 IL-6 血清水平明显升高（P0.05），而C组、S组仍较高水平；M组、L组的TNF-α、IL-1β和IL-6 的血清水平在D2时间点恢复术前水平（P>0.05），而C组、S组D3时间点才恢复。与C组比较，M组、L组的POCD发生率显著减少（P<0.05），但M组、L组两组之间没有显著差异。L组患者低血压和心动过缓的发生率最高（P<0.01），苏醒时间（Tw）也比其他3组长（P<0.05）。结论 围术期使用DEX0.3 μg/kg负荷剂量泵注10 min后，持续泵注0.5 μg·kg-1·h-1 DEX可控制Aβ和促炎性细胞因子血清水平，有效预防老年脊柱手术患者POCD发生。

• 朴素贝叶斯分类器在化疗所致恶心呕吐风险预测模型上的应用

  曹众平, 熊习安, 杨 群

  目的 研究朴素贝叶斯分类器在化疗所致恶性呕吐风险预测模型上的应用，构建基于中国患者的化疗所致恶性呕吐风险预测模型。方法 收集2020年7~9月中南大学湘雅二医院肿瘤中心300例住院化疗患者的基本资料和治疗方案，并随访患者出院后临床资料。对治疗方案中的特征和患者个体特征进行相关性分析，对相关性大于0.8的两个特征，分别计算两个特征对模型评价指标曲线下面积的贡献，去除其中贡献相对较小的特征。使用机器学习库scikit-learn中的朴素贝叶斯分类器作为化疗所致恶心呕吐风险预测模型，使用10折分层随机分割交叉验证得到模型最终结果。其中70%的样本用来训练机器学习模型，30%的样本作为测试集用来衡量模型的表现。结果 急性化疗所致恶心呕吐风险预测灵敏度为 0.83±0.04（95%CI: 0.80~0.86)，特异度为0.45±0.03（95%CI: 0.42~0.47），曲面下面积为0.72±0.04（95%CI: 0.69~0.75）。延迟性化疗所致恶心呕吐风险预测灵敏度为0.84±0.01（95%CI: 0.83~0.86），特异度为0.48±0.03（95%CI: 0.45~0.52），曲面下面积为 0.74±0.02（95%CI: 0.72~0.77）。结论 在本研究中，基于朴素贝叶斯分类器构建了适用于中国肿瘤患者的化疗致所致恶心呕吐风险预测模型，具有较好的预测效果，为化疗致所致恶心呕吐风险预测模型提供新的研究方向和思路。

• 阿霉素-甘草酸分子复合物的制备及体外抗肿瘤活性

  吕雪丽, 刘 媛, 祝瑶露, 赵博欣, 魏 理, 李国锋

  目的 以中药组份甘草酸为载体，按照阿霉素与甘草酸的不同比例制备阿霉素-甘草酸分子复合物（ADR-GL复合物），探究其在pH=7.4下的溶解度差异并初步评价其抗肿瘤效果。方法 按照阿霉素与甘草酸摩尔比2∶1，1∶1，1∶2的量（ADR∶GL=2∶1，1∶1，1∶2）投料，采用旋蒸法制备ADR-GL分子复合物并经红外光谱（FT-IR）和差式扫描量热（DSC）分析鉴定所得固体复合物。将ADR-GL复合物溶解于pH=7.4的磷酸盐缓冲液中，过夜超声后3000 r/min离心5 min得ADR-GL复合物饱和溶液，采用高效液相色谱法测定其中的阿霉素溶解度。最后，MTT法测定ADR-GL对肝癌细胞HepG2的增殖抑制作用，及经流式细胞仪测定CD44+ MDA-MB-231干细胞所占总MDA-MB-231细胞的比例以初步探究其抗肿瘤活性。结果 ADR-GL复合物中阿霉素1525 cm-1红外光谱吸收峰消失，且DSC分析显示ADR-GL在86 ℃处出现一个明显的新的吸收峰，表明阿霉素可能被甘草酸所包裹而以新的形式存在，称之为“ADR-GL分子复合物”。对照组盐酸阿霉素组在pH=7.4的磷酸盐缓冲液中溶解度为0.844±0.011 mmol/L，ADR-GL复合物组与对照组相比溶解度均有显著性差异（P<0.05），其中阿霉素与甘草酸摩尔比为1∶2组溶解度最高，为5.562±0.049 mmol/L，是对照组的6.3倍。此外，与阿霉素对照组相比，ADR-GL分子复合物组对HepG2细胞活力的直接影响及对MDA-MB-231肿瘤干细胞群比负作用二者无显著差异。结论 ADR-GL不降低阿霉素抗肿瘤活性，其可能是一种潜在的安全的具有开发价值的新颖递药系统。

• 晚期胃癌生存预后因素及列线图预测模型的建立与验证

  张力苹, 刘喜娟, 林 卉, 王嘉丽, 张启周

  目的 探讨新药治疗下晚期胃癌患者生存预后因素，并建立可靠的预测模型。方法 收集我院肿瘤内科2015年1月~2019年12月收治的晚期胃癌（AGC）患者的的临床特征、辅助检查资料、治疗相关资料、疗效评估、疾病转归等相关临床资料，建立数据库，采用Kaplan-Meier法进行单因素生存分析，并根据单因素分析结果、将部分因素纳入多因素Cox回归模型进行分析，筛选出影响AGC患者生存的影响因素。R软件用于分析生存率及通过多因素分析结果建立生存列线图。编制校准曲线和一致性指数(C-index)以确定预测能力和判别能力。通过时间相关的受试者工作特征曲线（ROC）、临床决策曲线分析（DCA）以证实列线图模型的预测能力。结果 单因素分析显示，转移部位数目、接受治疗线数、一线治疗疗效是否达到疾病控制率（DCR）、一线治疗中位无进展生存（PFS）时间，以及一线是否接受手术治疗与AGC患者总生存（OS）显著相关（P<0.05）。多因素Cox回归分析显示，一线是否接受手术治疗、接受治疗线数、一线治疗PFS时间、腹膜转移与晚期胃癌患者OS显著相关，是影响AGC患者OS的独立预后因素（P7.0月、接受三线及后线治疗与较长的生存期相关；选择性对部分晚期胃癌患者进行含手术的系统治疗方案可改善其生存期。本研究构建的列线图是一个可靠的AGC预后预测模型。

• COVID-19与心血管代谢性疾病的临床研究进展

  韩 拓, 苑 昊, 叶琳樱, 江 旭, 白 亮, 王聪霞

  COVID-19与心血管代谢性疾病（CVMD）之间高共患病率和死亡率，及其潜在的心血管损伤风险，为其临床诊治带来巨大挑战。最新研究发现：高龄状态、免疫功能缺陷、炎症因子风暴及氧化应激损伤等是二者高共患病率的潜在机制；病毒直接侵袭、心肌氧供需失衡以及血管内皮与凝血功能障碍则可能是COVID-19患者心血管损伤的重要机制。此外，SARS-CoV-2细胞膜受体ACE2在各脏器与循环系统中的表达水平，不仅介导病毒对脏器直接侵袭损伤，还可参与机体炎症与氧化应激平衡的调节，从而影响患者COVID-19易感性与预后结局。本文将就COVID-19合并心血管代谢性疾病的上述研究进展进行回顾，并探讨SARS-CoV-2引起心血管损伤机制，以期为COVID-19合并CVMD患者的临床诊治提供理论依据。