南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2021年第12期

• 基于加权基因共表达网络分析阿尔茨海默病相关的核心基因

  薛继国, 刘 静, 耿 淼, 岳敬伟, 贺浩宸, 范 皎

  目的 采用加权基因共表达网络分析（WGCNA）探索阿尔茨海默病（AD）相关的差异基因模块及其枢纽基因，并对差异基因模块进行生物功能注释。方法 从GEO数据库下载转录组测序数据，根据基因的相关性，当关联系数阈值设定为0.85时，参数β=8，以此构建基因共表达网络；采用Pearson相关性检验计算模块基因与临床表型相关性，筛选出与AD显著相关的基因模块，根据模块内的连接性筛选枢纽基因；利用GO功能富集分析和KEGG通路分析对模块进行功能注释。进一步建立β-淀粉样蛋白（Aβ1-42）诱导SH-SY5Y细胞损伤模型，在模型组和对照组中检测枢纽基因的表达水平。结果 根据基因表达的相关性，共构建了10个基因共表达模块，其中brown和turquoise模块与AD组显著相关（brown：r=0.66，P<0.001；turquoise：r=-0.68，P<0.001）；结果显示48个基因在共表达网络中处于核心地位；通过生物注释功能发现，两模块中的基因主要富集在DNA损伤修复通路和代谢相关通路等生物学过程中。基因的差异表达分析显示，DNASE1、TEKT2、MTSS1L等基因在AD组中高表达，ACP2、LANCL2、GMPR2 等基因在 AD 组中低表达；体外实验进一步验证了在 Aβ1-42 诱导的 SH-SY5Y 细胞损伤过程中DNASE1、TEKT2、MTSS1L表达上调（P<0.01），ACP2、LANCL2、GMPR2表达下调（P<0.01）。结论 brown和turquoise模块与AD高度相关，并从模块中筛选出MTSS1L、GMPR2、ACP2、ACTG1、LANCL2等枢纽基因，可能通过调节DNA损伤和修复参与AD发病机制。

• 天然虾青素治疗肾透明细胞癌的作用机制：基于网络药理学与生物信息学方法

  高俊杰, 杨丹丹, 曹若雪, 潘雪珊, 夏 俊

  目的 基于网络药理学和生物信息学研究天然虾青素（AST）治疗肾透明细胞癌（KIRC）的分子作用机制。方法 利用PharmMapper数据库检索AST的作用靶点，TCGA数据库获得并筛选KIRC癌组织和癌旁组织中的差异基因，Cytoscape软件对靶基因进行分析并构建“药物-靶点”网络图，String数据库构建可视化PPI网络，对核心作用靶点进行GO富集分析。接着，对筛选出的核心靶点胎盘生长因子（PGF）进行单基因生物信息学分析，采用CCK-8法验证AST对KIRC细胞活性的影响，分子对接技术验证AST与PGF结合情况，RT-qPCR和Western blot验证AST对靶基因mRNA和蛋白表达的影响。结果 分析得到AST作用靶点278个，KIRC相关作用靶点1081个，AST治疗KIRC的核心作用靶点7个，其中核心靶点PGF在KIRC中表达增高（P<0.001）且与预后不良相关（HR=1.37，P=0.043）；分子对接显示AST与PGF的结合能为-5.43 kcal/mol；CCK-8显示当AST浓度为50 μmol/L时即可以抑制KIRC细胞的增殖且AST浓度越高抑制作用越显著；RT-qPCR结果显示，AST处理KIRC后PGF的mRNA表达水平显著降低；Western blot结果显示，经AST处理后KIRC中PGF的蛋白表达受到了明显抑制。结论 AST可以抑制KIRC的增殖并抑制其细胞中PGF的表达。

• TNF-α通过唾液酸化促进小鼠破骨细胞分化

  李夏林, 张维新

  目的 探究TNF-α促进破骨细胞分化的作用机制。方法 利用4月龄野生型小鼠与同龄TNF-α转基因鼠进行体内研究，分别收集双侧膝骨关节样本后，进行CT扫描分析骨量差异，TRAP染色及免疫荧光染色分析破骨细胞分化程度及唾液酸表达水平。体外培养破骨细胞前体细胞系RAW264.7分为3组：RAW对照组（不含药物的分化培养基处理）；RAW实验组（含有TNF-α的分化培养基处理）；RAW药物组（含有TNF-α和唾液酸酶的分化培养基处理）。体外培养3 d后进行qPCR检测，TRAP染色，唾液酸免疫荧光共定位染色分析。同时，分离培养野生型小鼠（BM对照组）和TNF-α转基因鼠[BM实验组（不含药物的分化培养基处理），BM药物组（含有唾液酸酶的分化培养基处理）]原代骨髓源巨噬细胞，3 d后进行TRAP染色及唾液酸染色。结果 TRAP染色显示，TNF-α转基因鼠膝关节软骨下骨中破骨细胞数量较野生型小鼠显著增多（P<0.001）；其骨量/体积（BV/TV）、骨小梁数量（Tb.N）、骨小梁厚度（Tb.Th）则显著降低（P<0.001）；而TNF-α转基因鼠软骨下骨中唾液酸与TRAP荧光共定位阳性细胞数也显著高于野生型小鼠（P=0.004）。RAW实验组唾液酸表达平均荧光强度（P<0.001）及破骨细胞形成率（P<0.001）均显著高于RAW对照组，而RAW药物组唾液酸表达平均荧光强度、破骨细胞形成率以及TRAP基因转录水平显著低于RAW实验组（P<0.001）。BM实验组较BM对照组唾液酸表达平均荧光强度、破骨细胞形成率均显著提高（P<0.001），而BM药物组较BM实验组唾液酸表达平均荧光强度、破骨细胞形成率均显著降低（P<0.001）。结论 TNF-α可通过提高破骨细胞的唾液酸化水平进而促进破骨细胞的分化和功能。

• 黑棘皮病和非黑棘皮病患者的总睾酮水平与胰岛素抵抗的相关性

  张 玲, 李贵芳, 苏莉莉, 杜 磊, 周东雷, 程晓芸, 林紫薇, 曲 伸

  目的 探讨在黑棘皮病（AN）和非黑棘皮病（NAN）人群中的总睾酮水平对胰岛素分泌和胰岛素抵抗的影响及其相关性。方法 选取超重患者（体质量指数≥24 kg/m2）639例，根据性别及是否有黑棘皮病分为四组：AN女性137例，NAN女性227例，AN男性129例，NAN男性146例。每组按照总睾酮（TT）四分位数分为4个亚组，比较不同TT水平胰岛素分泌和抵抗的差异及变化规律。结果 无论男性和女性AN组较非AN组胰岛素分泌水平明显增加、胰岛素曲线下面积增加（P<0.05），稳态模型-胰岛素抵抗指数升高（HOMA-IR）（P<0.05），总体胰岛素敏感性指数（WBISI）下降（P<0.01），但并未观察到随TT变化趋势。NAN女性随着TT水平升高，胰岛素分泌水平逐渐升高，TT升高至Q4水平，胰岛素曲线下面积显著升高（P<0.01）、WBISI明显下降（P< 0.05）；而NAN男性随着TT水平下降，胰岛素分泌水平逐渐升高，TT降至Q1水平，胰岛素曲线下面积明显升高（P<0.05）、WBISI明显下降（P<0.05）。结论 总睾酮水平对胰岛素抵抗和胰岛素分泌有明显影响，在男女中具有不同作用，并且在NAN患者中较AN患者中更为明显。

• 敲低EEFSEC可体外抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

  徐彬兵, 郝敬兰, 谢倩文, 萨娜尔, 王诗虞, 杜晓文, 卢海成, 高 平, 石光耀, 董小明

  目的 探讨硒代半胱氨酸tRNA特异性真核延伸因子（EEFSEC）对人前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 采用qRT-PCR法检测人正常前列腺细胞系RWPE1和人前列腺癌细胞系22Rv1、LNcap、Vcap、PC-3细胞中EEFSEC mRNA的表达；收集前列腺癌患者的癌组织和癌旁组织，采用Western blot法检测前列腺癌组织中EEFSEC的蛋白表达情况。慢病毒感染22Rv1 细胞，Western blot检测敲低效率；XTT实验检测各组细胞的增殖能力；划痕实验和Transwell实验用来检测细胞迁移能力；Transwell试验检测细胞侵袭能力；流式细胞术检测细胞周期；qRT-PCR检测敲低EEFSEC后周期相关基因的mRNA水平的变化。结果 与对照组相比，EEFSEC在前列腺癌中高表达（P<0.05）；且EEFSEC高表达导致前列腺癌患者不良预后；感染敲低EEFSEC的慢病毒后，可明显降低22Rv1细胞中EEFSEC的蛋白表达水平；与对照组相比，敲低EEFSEC可显著抑制22Rv1细胞的增殖（P<0.001），迁移（P<0.001）和侵袭能力（P<0.001）；敲低EEFSEC细胞周期主要阻滞在G0/G1期，qRT-PCR实验显示敲低EEFSEC可明显下调C-myc和CCNB1的表达，上调p15的表达。结论 敲低EEFSEC可能通过降低C-myc表达来抑制前列腺癌细胞22Rv1的增殖、迁移和侵袭能力。

• 沉默神经元HIF-1α和PTEN的表达对体外培养的大鼠神经元氧糖剥夺损伤的影响

  唐静华, 杨 颖, 陈 洁, 李廷玉, 代 英

  目的 利用RNA干扰技术分别沉默神经元中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和磷酸酶并和张力蛋白同源物（PTEN）基因，论证它们在神经元体外氧糖剥夺（OGD）损伤后的功能调控作用。方法 构建并筛选靶向HIF-1α及PTEN基因的shRNA慢病毒载体；提取并将原代神经元分为4组：（1）NC组，仅加空载病毒；（2）NC+OGD组，加空载病毒后缺氧；（3）Si-hif-1α+OGD组，加Si-hif-1α病毒后缺氧；（4）Si-pten+OGD组，加Si-pten病毒后缺氧，均在培养第3天感染病毒，第7天OGD损伤模拟细胞缺氧。缺氧后24 h行荧光实时定量PCR（qRT-PCR）法检测干扰效率，行乳酸脱氢酶（LDH）检测及AnnexinV-FITC/PI检测神经元细胞损伤、凋亡变化，Western blot检测相应蛋白表达变化。结果 慢病毒介导的shRNA能有效沉默目的基因mRNA的表达；HIF-1α沉默后，缺氧细胞的损伤及凋亡加重，PTEN蛋白的表达升高，p-PTEN、p-AKT、NR2A及VEGFa表达降低（P<0.05）；PTEN沉默后，缺氧细胞的损伤及凋亡有所减轻，p-PTEN、p-AKT表达升高（P0.05）。结论 慢病毒介导的shRNA能有效沉默神经元HIF-1α及PTEN的表达，逆转神经元缺氧损伤中HIF-1α升高对PTEN活性的抑制，参与神经元损伤调控。

• 学龄期儿童肉类食品摄入模式对其肠道菌群结构的影响

  林琼希, 伦静娴, 张吉敏, 何肖龙, 龚泽龙, 高雪峰, 曹 虹

  目的 研究不同肉食偏好模式下学龄期儿童的肠道菌群差异。方法 选取深圳地区学龄期健康儿童共44例，年龄范围8~10岁。根据每个儿童白肉和红肉的月均摄入频率的比值将所有儿童分为3组：红肉模式组（15例）、均衡组（16例）、白肉模式组（13例）。采用膳食频率调查问卷进行面访调查及采集晨便，提取粪便DNA后进行扩增并使用 Illumina Miseq 高通量测序技术对儿童肠道菌群测序分析。结果 红肉偏好模式和白肉偏好模式的儿童肠道菌群的丰度和多样性均显著低于均衡饮食模式（P<0.05）。LEfSe分析发现与均衡组相比，红肉组的样本中主要富集埃希-志贺菌属、粪芽孢菌属和嗜冻菌属，白肉组主要富集霍尔德曼氏菌属，而与红肉组和白肉组相比均衡组分别显著富集了31和25个菌属，包括毛螺菌属、瘤胃球菌属等。采用PICRUSt2对细菌功能信号通路预测发现，与均衡组相比红肉组显著激活菌群脂多糖生物合成（P<0.01）、花生四烯酸代谢（P< 0.01）、甲状腺激素合成（P<0.001）和碳水化合物消化吸收功能（P<0.05）；但相比白肉组，红肉组仅显著激活菌群花生四烯酸代谢（P<0.05）和甲状腺激素合成通路（P<0.05）。结论 本研究发现相比均衡模式，红肉和白肉偏好模式均会显著下调肠道菌群丰度及改变菌群结构，并且红肉模式饮食可能会更多富集埃希-志贺菌属，并可能显著上调脂多糖生物合成通路。

• 健康妇女生殖道内格氏乳杆菌的分离鉴定与安全性评价

  苏炳森, 操龙斌, 郑介婷, 张 琳, 张子康, 邱 峰

  目的 对健康妇女生殖道内分离得到的菌株LGV03进行鉴定及安全性评价。方法 通过稀释平板涂布法和划线分离法在MRS固体培养基上对女性生殖道分泌物中的菌株进行分离纯化和菌落形态观察；采用革兰氏染色鉴别分离菌株的形态与革兰氏阴阳性；采用VITEK ANC鉴定卡对菌株LGV03进行生理生化性质的鉴定；采用DNA提取、PCR扩增、16S rDNA和pheS产物测序和数据分析对菌株LGV03进行分子生物学鉴定和系统发育分析鉴定；采用血琼脂平板检测菌株LGV03的溶血性；采用E-test法检测菌株LGV03对青霉素、氨苄西林、美罗培南、万古霉素、红霉素、利奈唑胺、克林霉素的敏感性；菌株LGV03以体积分数5%接种于MRS培养基中，于37 ℃发酵后，运用生化分析仪检测其发酵液中的乳酸浓度；最后，通过小鼠急性毒性试评价菌株LGV03的安全性。结果 菌株LGV03经鉴定，其培养特性为：在MRS固体培养基上，37 ℃厌氧生长良好，菌落呈圆形、白色、表面湿润、不透明、边缘整齐。菌株LGV03革兰氏染色呈阳性，细胞呈杆状，菌体大小为0.4~0.5 μm×0.9~6.3 μm。结合生理生化试验结果可初步鉴定分离菌株LGV03为乳杆菌属。同时，经分子生物学鉴定和系统发育树显示，菌株LGV03被鉴定为格氏乳杆菌。溶血性试验结果显示格氏乳杆菌LGV03在血平板上未产生溶血环。药敏试验结果显示，格氏乳杆菌LGV03对青霉素、氨苄西林、美罗培南、万古霉素、红霉素、利奈唑胺敏感，最小抑菌浓度分别为0.048、0.19、0.38、0.75、0.064、0.75 μg/mL，而对克林霉素耐药最小抑菌浓度为6 μg/mL。菌株LGV03在MRS培养基中可产生乳酸，约18 h后达到饱和浓度，最终乳酸浓度达到1.72 mg/mL。小鼠毒性实验结果显示，与生理盐水组相比，格氏乳杆菌LGV03组小鼠的体质量变化无统计学意义（P> 0.05）。格氏乳杆菌LGV03组小鼠的器官质量和脏器指数与生理盐水组相比差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 从女性生殖道中分离的菌株LGV03被鉴定为格氏乳杆菌，其具有潜在的益生效应和安全性。

• 多重PCR检测唾液标本中的幽门螺杆菌16S rRNA及cagA基因

  王鑫莹, 孙丽媛, 杨志平, 宋顺佳, 李 南, 刘 悦, 田婉佳, 赵云冬

  目的 检测唾液标本幽门螺杆菌（Hp）的16S rRNA基因及cagA基因，了解消化道疾病患者口腔中Hp存在情况及致病情况。方法 利用生物学信息技术，设计Hp 16S rRNA、cagA基因特异性引物，建立检测Hp 16S rRNA、cagA基因的多重PCR方法；重组克隆质粒构建标准阳性对照品；收集156例消化道疾病患者的唾液标本，提取唾液标本中细菌DNA，应用建立的多重PCR方法，检测Hp 16S rRNA基因及cagA基因，并对结果进行分析。结果 建立的检测Hp 16S rRNA基因及cagA基因的多重PCR方法特异性强，灵敏性较高，最低检测线为103 copies· μL-1；重组质粒pGMT-16s和pGMT-cagA，可作为鉴定Hp的标准阳性对照品；检测Hp感染的消化道疾病患者的唾液标本，口腔携带Hp 16S rRNA基因的阳性率为87.2%，cagA基因阳性率为23.1%。结论 Hp感染的消化道疾病患者口腔唾液标本中存在Hp，口腔中存在Hp可能是诱发消化道Hp感染及治疗后复发的一个重要原因。

• 紫色征对肝硬化静脉曲张破裂出血患者内镜治疗后再出血风险的预测作用

  吴 苑, 陈明榆, 黄梦芬, 廖桂彬, 唐舒婷, 郑鸿铭, 李逸婷, 彭 彬, 郑小妹, 潘思敏, 侯江涛, 陈 斌

  目的 研究紫色征对肝硬化静脉曲张破裂出血内镜治疗后再出血的预测作用。方法 研究对97例肝硬化静脉曲张破裂出血患者行内镜下精准贲门胃静脉曲张断流术（ESVD术）治疗进行回顾性分析，根据内镜治疗过程中是否出现了紫色征进行分组，出现紫色征患者为观察组，共32例，未出现紫色征患者为对照组，共65例；通过倾向性匹配评分的方式平衡观察组（紫色征组）与对照组（非紫色征组）患者临床特征的差异，同时减少研究对象的选择偏倚，研究结局为ESVD术后再出血率。结果 匹配前观察组与对照组1年再出血率（27.0% vs 36.7%）与6月再出血率（10.9% vs 26.9%）差异无统计学差异（P=0.2385）；匹配后观察组与对照组1年再出血率（28.2% vs 56.4%）与6月再出血率（5.0% vs 37.0%）差异有统计学意义（P=0.0304）。结论 紫色征可作为预测肝硬化患者胃食管静脉曲张破裂出血后低再出血风险的指标，为此类患者内镜序贯治疗管理提供指导意义。

• 加速康复外科模式下腹腔镜与开腹胃癌根治术的临床效果:基于中国多中心数据分析

  张 越, 季 刚, 陶凯雄, 梁 晖, 雷三林, 钟晓刚, 王小忠, 俞金龙, 陈 超, 赵景林, 郑 权, 王 强, 罗喻文, 李 勇, 王俊江

  目的 比较加速康复外科（ERAS）模式下腹腔镜与开腹手术的治疗效果。 方法 对2015年1月~2017年12月国内12家医疗中心1569例接受胃癌根治术患者的临床病理资料进行回顾性研究分析，其中接受开腹手术患者共522例，腹腔镜手术患者共1004例，腹腔镜中转开腹患者共43例。比较腹腔镜组和开腹组患者术中相关指标及术后并发症等情况，主要研究终点是术后短期并发症发生率，次要研究终点是手术时间、术中出血量、淋巴结清扫数目、术后首次进食全流时间、首次排气时间、排便时间、下床活动时间、术后住院时间及出院后30 d内因并发症再入院情况等。 结果 1569例患者中，男性1037例（66.1%），女性532例 （33.9%），发病年龄58.4±11.3岁。近端胃切除术105例（6.7%），远端胃切除术877例（55.9%），全胃切除术587例（37.4%）。患者手术时间274.7±80.7 min，中位出血量为150（20~1300）mL，淋巴结清扫数目29.9±13.5枚。术后首次下床活动时间2.3±1.2 d，首次排气时间3.4±1.6 d，首次排便时间4.8±1.8 d，首次进食全流时间5.5±3.1 d，术后住院时间11.4±5.0 d。术后按Clavien-Dindo分 级≥Ⅱ级的并发症发生率为6.5%，术后30 d因并发症再入院率为1.1%。按手术方式分为腹腔镜组及开腹组（腹腔镜中转开腹病例归为开腹手术）。两组患者胃切除范围差异无统计学意义（P>0.05）；腹腔镜组淋巴结清扫数目多于开腹组，术中出血量、术后首次下床活动时间、进食全流时间、首次排气时间、排便时间和术后住院时间均少于开腹组（P<0.05）；腹腔镜组手术时间长于开腹组（P0.05）。 结论 腹腔镜手术应用于胃癌加速康复外科，相较于开腹手术能缩短术后首次下床活动、排气、排便、进食全流时间及术后住院时间，并可获得同样的肿瘤学根治效果，且不增加术后并发症的发生率。

• 靶向SF3B1突变型葡萄膜黑色素瘤的药物筛选

  罗 昕, 任重鲁, 刘小莲, 张贵明, 黄思思, 余 乐, 李亦蕾

  目的 构建SF3B1突变等位基因敲除的人葡萄膜黑色素瘤细胞模型，筛选靶向抑制SF3B1突变型葡萄膜黑色素瘤的药物。方法 通过主成分分析法对来自TCGA数据库的葡萄膜黑色素瘤患者分成SF3B1野生型和突变型两组进行转录组可变剪接分析，研究SF3B1突变对可变剪接的影响。通过CRISPR-Cas9技术敲除Mel202细胞株的SF3B1突变等位基因，Sanger测序明确基因编辑的序列。MTT法和克隆形成实验检测Mel202细胞株和基因敲除mut-KO细胞株的增殖，RT-PCR琼脂糖电泳结合Sanger测序检测Mel202细胞株和基因敲除mut-KO细胞株的可变剪接事件。MTT法从上市药物库和生物活性化合物库筛选对SF3B1突变细胞具有选择性抑制活性的药物。结果 选择性敲除Mel202细胞SF3B1突变等位基因促进了细胞的增殖（5.47±0.32 vs 10.17±0.27），改变了ZDHHC16和DYNLL1转录本的可变剪接。化合物库筛选结果显示13个化合物对SF3B1突变的Mel202细胞具有选择性的抑制活性（Fold change≥2），其中上市药物tetrandrine和lapatinib显示了较好的量效曲线。结论 本研究为SF3B1突变的葡萄膜黑色素瘤患者提供了细胞筛选模型和潜在的个体化治疗药物。

• 纳米硫化铜复合物光热治疗对舌鳞状细胞癌的体内外抑制作用

  陈 栋, 陈之锋, 王 邹, 杨雅洁, 蒋艳萍, 胡 琛

  目的 探讨BSA@CuS-PEG纳米复合物的制备、表征、功能及其对舌癌的抗肿瘤效应的作用。方法 采用透射电镜，动态光散射，Zeta电位分析及紫外吸收光谱分析方法分析BSA@CuS-PEG纳米复合物的表征，利用近红外II区激发光（1064 nm）探究其光热性能，同时采用CCK-8实验评估该纳米复合物的细胞毒性，流式细胞学实验分析细胞周期分布水平。最后，构建单侧皮下荷瘤模型探究BSA@CuS-PEG纳米复合物的体内抗肿瘤作用。结果 成功制备BSA@CuS-PEG纳米复合物，在0.5 W/cm2功率的近红外光照射下其变化温度值（ΔT）约为30 ℃，具有优良的光热性能。CCK8实验表明：单纯BSA@CuS-PEG对肿瘤细胞无明显毒性；而相比于纯材料组，BSA@CuS-PEG联合近红外光照射对Cal27及SCC9舌癌细胞具有显著抑制增殖作用（P<0.001）。同时细胞周期分析显示：相比于纯材料组，BSA@CuS-PEG联合近红外光照射使Cal27及SCC9舌癌细胞更多被阻滞于G2/M期（P<0.001）。小鼠单侧皮下荷瘤模型表明：相比于生理盐水联合近红外光照射处理组，BSA@CuS-PEG联合近红外光照射发挥显著的体内抗肿瘤作用（P<0.001）。结论 BSA@CuS-PEG纳米复合物具有良好的光热效应，体内外抗肿瘤效应，为舌癌原发灶无创早期诊断和非手术治疗提供一种潜在思路和手段。

• GnRH激动剂和经血源性干细胞联合治疗对小鼠卵巢功能的影响

  孙 芳, 韦 伟

  目的 探究促性腺激素释放激素（GnRH）激动剂和经血源性干细胞（MenSCs）联合治疗对小鼠卵巢功能的影响。方法 将45只SPF级实验小鼠随机分为Control组（腹腔注射生理盐水）、POF组（腹腔注射120 mg·kg-1·d-1 CTX）、MenSC+POF组（CTX损伤处理后注射移植含2×106 MenSCs的细胞悬浮液）、GnRHa+POF组（造模前14 d注射丙氨瑞林0.1 mg·kg-1·d-1，第15天开始CTX注射）、MenSC+POF+GnRHa组（按MenSC+CTX组和GnRHa+CTX组方案联合用药），每组9只。HE染色观察小鼠卵巢组织病理变化情况，ELISA法检测小鼠血清中黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、抗苗勒管激素（AMH）和雌二醇（E2）的含量水平，Western blot检测小鼠卵巢颗粒细胞中KI-67、Bcl-2、BAX、caspase 9、caspase 3、cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3、p-PI3K、PI3K、p-Akt及Akt蛋白的表达情况。结果 与Control组相比，POF组小鼠卵巢纤维化明显，闭锁卵泡数增多，血清中LH和FSH的含量水平极升高（P<0.01），AMH和E2含量水平降低（P<0.01），BAX、cleaved-caspase 9/caspase 9、cleaved-caspase 3/caspase 3蛋白表达水平升高（P<0.01），KI-67、Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白的表达水平降低（P<0.01）；与POF组比较，GnRH激动剂和经血源性干细胞联合治疗可抑制小鼠卵巢闭锁卵泡的产生，降低小鼠血清中LH和FSH的含量水平（P<0.01），提高AMH和 E2的含量水平（P<0.05或P<0.01），抑制小鼠卵巢颗粒细胞中BAX、cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3蛋白的表达（P<0.05或 P<0.01），促进KI-67、Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白的表达（P<0.05或P<0.01）。结论 GnRH激动剂和经血源性干细胞联合治疗可能通过上调PI3K-Akt信号通路表达，减少卵巢闭锁卵泡的产生，提高小鼠卵巢的储备功能，从而达到对卵巢修复和保护的目的。

• 右美托咪定预处理通过抑制NLRP3炎性小体激活减轻大鼠肠缺血再灌注诱导的急性肺损伤

  韩 冰, 陈梦婷, 杨传铭, 李晓红

  目的 探讨右美托咪定（Dex）对大鼠肠缺血再灌注（II/R）所致急性肺损伤（ALI）的保护作用以及核苷酸结合域样受体蛋白3（NLRP3）炎性小体活性的影响。方法 将32只健康雄性SD大鼠，随机分为4组（8只/组）。假手术组（Sham组）仅暴露肠系膜上动脉（SMA），肠缺血再灌注组（II/R组）阻断SMA 1 h后再灌注2 h，II/R+右美托咪定处理组（Dex+II/R组）右美托咪定干预后行再灌注，Dex假手术组（Dex组）右美托咪定预处理假手术组。Sham组和II/R组腹腔注射等量生理盐水。采取夹闭SMA 1 h再灌注2 h的方法建立肠缺血再灌注损伤模型。测定各组大鼠肺部组织湿/干质量比值（W/D）、髓过氧化物酶（MPO）活性，HE染色评估肺组织病理学变化以及行肺损伤评分；ELISA检测肺部组织中炎性因子TNF-α、IL-18、IL-1β水平；Western blot检测肺部组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、Caspase-1及磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）蛋白的表达水平。结果 相较于Sham组，II/R组肺组织病理损伤明显，W/D值、MPO活性及肺组织中的TNF-α、IL-18、IL-1β表达显著升高（P<0.05），肺组织中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达增加（P<0.05），p-AMPK蛋白表达减少（P<0.05）；相较于II/R组，Dex+II/R组肺组织病理损伤轻微，W/D值、MPO活性及肺组织中的TNF-α、IL-18、IL-1β表达明显下降（P<0.05），肺组织NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达明显下降（P<0.05），p-AMPK蛋白表达明显增加（P<0.05）。结论 右托美咪定通过对NLRP3炎性小体激活的抑制，减轻炎性反应，进而改善大鼠II/R所致的ALI。

• 新冠疫情期间中长跑锻炼完成情况对广州某高校学生心理健康状况的影响

  林哲莹, 张旭东, 陈丽娟, 冯东亮, 刘 宁, 陈哲颖

  目的 分析校园中长跑锻炼完成情况对新冠疫情期间广州市内某高校学生心理健康状况的影响。方法 以滚雪球抽样的方式，利用线上问卷进行数据收集。在剔除异常问卷、与体质测试数据及中长跑锻炼数据匹配后共剩余问卷1022份。问卷按中长跑锻炼完成标准进行分组，其中完成组869份，未完成组153份。问卷中的量表部分按照对应量表的评分标准计分及筛查标准分级。应用t检验、χ2检验、秩和检验及二分类logistic回归对数据进行分析。结果 中长跑锻炼完成组学生体测成绩优于未完成组（P0.05）。二元logistic回归结果表明，中长跑锻炼完成情况对创伤后应激障碍、焦虑、抑郁情况无影响，而体测分数可以降低学生疫情期间发生创伤后应激障碍、抑郁的风险，OR值及95%置信区间分别为0.97（0.95，0.98）与0.98（0.97，0.99）；但却增加了焦虑的发生风险，OR值及95%置信区间为1.02（1.01，1.04）。结论 规律且适量的中长跑锻炼可能通过提升学生的综合身体素质，进而间接促进疫情期间学生的心理健康。

• 亚健康状态人群肠道菌群结构明显失调：基于某医院150例护理人员分析

  张星星, 蔡文文, 廖生武, 何璇昱, 杨秋玉, 白 杨, 阮伟清

  目的 探索亚健康状态人群（SHS）和健康人群之间肠道菌群是否存在差异。 方法 于2020年11月~2021年5月选取南方医科大学南方医院工作的护理人员150例作为研究对象，其中亚健康人群75例为亚健康组（SHS组），选择75例同期健康人群作为对照组（H组）。针对16S rRNA基因的V3-V4区采用高通量测序技术，对测序结果进行多样性和物种组成差异分析。 结果 α多样性分析显示，Chao1指数在SHS组和H组间差异无统计学意义（P=0.619），SHS组的Shannon指数升高且2组之间差异有统计学意义（P<0.001）；β多样性分析显示，2组间肠道菌群组成结构上差异具有统计学意义（R=0.227，P=0.001）；在门水平上2组均主要由拟杆菌门（Bacteroidota）、厚壁菌门（Firmicutes）、放线菌门（Actinobacteriota）组成；在属水平均主要由普雷沃菌属（Prevotella）、拟杆菌属（Bacteroides）、布劳特氏菌属（Blautia）、栖粪杆菌属（Faecalibacterium）组成；物种差异分析表明，2组在4个门3个纲3个目3个科3个属的相对丰度差异有统计学意义（P<0.05）。结论 与健康人群相比，亚健康状态人群肠道菌群结构明显失衡。

• 表达高亲和PD-1突变体和嵌合抗原受体的双效CBNK细胞的构建及其生物学特性评价

  钟慧霖, 邹庆剑, 刘海霞, 王晓民, 杜少茵, 梁海燕, 吴志君, 叶俊杰, 邹清雁

  目的 开发一种共表达PD-L1高亲和受体PD-1（HAPD1）和嵌合抗原受体（CAR）的新型双效 CBNK（HAPD1-CAR-CBNK）细胞，进一步提高肿瘤免疫治疗的疗效。方法 首先构建可同时表达高亲和PD-1（HAPD1）的靶向CD19的CAR的双效慢病毒载体，并包装慢病毒感染从脐血中分离扩增的单个核细胞获得双效脐血CAR-NK细胞。检测分析感染效率、细胞扩增能力、表面标志物表达率；然后通过体外共培养检测细胞在不同效靶比条件下对靶细胞杀伤效率以及不同扩增时期细胞的杀伤效率。最后在免疫缺陷小鼠（24只）体内验证双效CBNK细胞在体内对靶细胞的杀伤能力。结果 HAPD1和CAR基因利用慢病毒载体可高效转导至CBNK细胞（[18.63±1.88）%]，病毒感染对细胞扩增倍数有一定影响（10.97±2.77 vs 24.84±3.17，P<0.05），但对细胞表面标志物表达没有显著影响（P?0.05）；双效NK细胞在效靶比为5:1和10:1时的靶细胞杀伤效力高于普通CAR-CBNK细胞（[ 68.38±8.08)% ,（79.11±7.42）% vs（49.65±13.60）%，（59.78±9.32）%，P<0.05）。病毒感染后第9~12天双效NK细胞具有最强靶细胞杀伤能力。体内实验进一步证实，双效NK细胞移植28 d后动物白细胞中肿瘤细胞比例低于普通CAR-CBNK细胞移植组（[ 19.21±3.07）% vs（29.08±3.15）%，P<0.05]。结论 本研究成功构建了一种共表达HAPD1和CAR双效CBNK细胞，并在体外和体内实验证实其高效的靶细胞杀伤能力，为肿瘤免疫细胞治疗提供了一个新的有效方案。

• 高表达miR-3682-3p是肝细胞癌患者的不良预后因素

  刘绍华, 温莹浩, 全 兵, 蔺 军, 朱泽文, 汤江林, 韩思源

  目的 分析miR-3682-3p在HCC中的表达及其与临床参数和预后的相关性。方法 生物信息学分析miR-3682-3p在HCC中的表达以及与生存相关性；实时荧光定量PCR和原位杂交分别检测miR-3682-3p（miR-3682）在18对HCC与癌旁新鲜肝组织以及90对石蜡包埋HCC及其癌旁组织中的表达差异。统计分析miR-3682-3p在HCC中的表达与患者临床参数和预后之间的关系。利用多因素回归分析探讨miR-3682-3p表达作为肝细胞癌预后独立因素的可能性。结果 生物信息分析显示，miR-3682-3p在HCC组织中高表达，且与HCC患者综合生存时间有统计学关联（χ2=8.793，P<0.001）。实时荧光定量PCR分析18组配对的HCC和癌旁肝组织显示，miR-3682-3p在癌组织中表达明显上调（t=3.073，P=0.007）。原位杂交分析90组配对的HCC和癌旁组织中miR-3682-3p的表达，显示其在癌与癌旁组织的细胞浆中表达，并且在癌组织中表达上调（t=2.659，P=0.009）。miR-3682-3p表达的高低在美国癌症联合委员会（AJCC）第八版分期（χ2=4.272，P=0.039）、HBV表面抗原状态（χ2=5.143，P= 0.023）、复发（χ2=4.593，P=0.032）、肿瘤大小（χ2=4.580，P=0.032）和Edmondson-Steiner分级（χ2=4.068，P=0.044）方面差异存在统计学意义；Kaplan-Meier分析显示，miR-3682-3p表达越高，患者总生存时间（Log rank χ2=4.169，P=0.041）和无病生存时间（Log rank χ2=4.078，P=0.043）越短。多变量分析显示，miR-3682-3p表达是评估HCC患者预后独立因子。结论 miR-3682-3p在HCC组织中表达上调，是促进HCC发病和预后不良的重要因子。

• 数字化设计游离腓骨瓣重建下颌骨缺损的三维有限元分析

  孙 悦, 郭 蕴, 李建成, 刘 亮, 杨东昆, 陈 默, 胡 恺

  目的 通过三维有限元法评价术前数字化设计辅助游离腓骨瓣重建不同类型下颌骨组织缺损的临床应用价值。 方法 回顾性分析48例下颌骨缺损行游离腓骨瓣重建的病例，所有患者均为术后1年且无肿瘤复发。按术前是否行数字化设计分为实验组和对照组，根据HCL分类法将下颌骨缺损分为H、L、LCL型缺损，其中实验组H型缺损8例，L型缺损9例，LCL型缺损7例；对照组 H 型缺损 5 例，L 型缺损 10 例，LCL 型缺损 9 例。追踪随访两组患者，获得腓骨重建后的下颌骨 CT，采用 Mimics、Geomagic、Solidworks、Ansys等软件构建出三维有限元模型，对模型设置约束及载荷条件，得出应力分布结果，采用SPSS23.0软件对两组的应力分布相关指标进行数据分析。 结果 游离腓骨瓣重建下颌骨缺损后应力主要集中在双侧髁突颈部、下颌升支前后缘及腓骨后端与下颌骨连接处，下颌骨缺损越多，健侧髁突的应力越大。L型缺损中实验组健、患侧髁突颈、移植腓骨最大应力值均小于对照组，而健侧下颌角应力值较对照组有所上升，差异均具有统计学意义（P<0.05）；LCL型缺损中实验组健侧髁突颈较对照组最大应力值小，在患侧髁状突区、双侧下颌角区及腓骨区均较对照组大，差异均具有统计学意义（P<0.05）。 结论 数字化设计辅助游离腓骨瓣重建下颌骨缺损，提高了下颌骨重建精确性，达到了均匀下颌骨应力分布的效果，为下颌骨修复重建提供临床指导。

• CDAN1基因突变导致的胎儿期非免疫性水肿的家系遗传学分析

  王燕超, 黎 青, 孙筱放, 李少英, 何健淳, 张敏聪, 黄玲玲, 何文智

  目的 对一例因不明原因胎儿期水肿的流产组织进行临床和遗传学分析，为该家系产前诊断以及遗传咨询提供可靠的理论依据。方法 采集孕妇外周血进行血常规、Rh血型和TORCH检测。采集羊水细胞用于细胞培养和G显带核型分析。提取胎儿引产组织基因组DNA行全基因组拷贝数变异测序；采用Agilent's SureSelect XT Human All Exon V6进行文库制备和外显子捕获,并使用Illumina NovaSeq 6000 对胎儿及其家系成员 DNA 行全外显子组测序（trios-WES），并利用SIFT、I-mutant2、PolyPhen-2 及PROVEAN生物信息学软件对变异位点进行蛋白功能预测。利用Alpha Fold 2和PyMOL软件对CDAN1的结构进行建模和可视化分析；用Sanger测序对先证者及家系成员进行突变检测和验证。结果 胎儿17周超声提示胎儿全身皮下广泛水肿，右侧胸腔大量积液，肝脾增大，胎盘增厚，心包缺损。染色体核型分析检测和染色体拷贝数变异测序结果均正常；全外显子组测序显示CDAN1基因：c.2140C>T（p.Arg714Trp）和c.1264_1265delCT（p.Leu422Glyfs*16）复合杂合突变，分别来自先证者父亲和母亲，生物信息学预测为可能致病性突变，对应的疾病为先天性红细胞生成障碍性贫血1型。结论 全外显子组测序结果显示，该胎儿为先天性红细胞生成障碍性贫血（CDAN1基因突变）导致的胎儿期非免疫性水肿，其中CDAN1基因c.1264_1265delCT为首次报道的突变。