南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2020年第05期

• 神经性厌食症大鼠伏隔核与延髓头端腹外侧区的神经通路联系

  魏雯雯,吴琼波,郑 超,汪萌芽,张环环

  目的 探讨中枢伏隔核（NAc）与延髓头端腹外侧区（RVLM）之间是否存在神经通路联系，为进一步阐明神经性厌食症（AN）患者心血管功能的中枢调节机制提供新的理论依据。方法 采用饮食-运动模拟法建立神经性厌食症大鼠模型，使用荧光金逆向示踪法并结合多通道同步记录技术，探究NAc与 RVLM间是否存在通路联系并参与AN模型大鼠心血管功能的调节。结果 与正常对照组相比，AN模型组大鼠收缩压、平均动脉压和心率显著降低，RVLM神经元放电频率显著增加。在正常组和AN模型组大鼠RVLM核团微量注射荧光金0.5 μL后，观察到NAc有荧光金逆行标记神经元分布。400 µA电刺激正常组和模型组大鼠NAc时，大鼠收缩压、心率均显著性降低，RVLM神经元放电频率显著增加，而电刺激后模型组的舒张压、平均动脉压明显低于正常组。结论 应用饮食-运动模拟法能成功建立神经性厌食症大鼠模型。大鼠NAc与RVLM间存在神经通路联系，该神经通路可能参与了AN模型大鼠心血管功能的调节。

• 基于网络药理学和分子对接技术分析清肺排毒汤治疗COVID-19的机制

  鄢海燕,邹 妍,邹纯才

  目的 基于网络药理学和分子对接技术分析清肺排毒汤治疗COVID-19的作用靶点、信号通路和生物学功能。方法 利用TCMSP、SwissTarget Prediction、CooLGeN、GeneCards、DAVID等数据库，分析清肺排毒汤中麻黄、半夏等21味药所含的活性成分及其靶点蛋白，筛选与COVID-19疾病共有的靶点蛋白及其信号通路与生物学功能，采用Gephi软件构建清肺排毒汤药味-活性成分-作用靶点-生物学功能网络图。结果 清肺排毒汤中麻黄、半夏、甘草、冬花、紫菀、枳实等18味药的MOL000519、MOL000554、MOL004798、MOL004824、MOL010428、MOL013443等163个活性成分通过调控ACE、ACE2、AGTR1、FURIN、TNF、CASP3、CASP6、DPP4、MCL1、POLD1等10个蛋白靶点激活肾素-血管紧张素系统信号通路和细胞凋亡信号通路，发挥肾素-血管紧张素对血容量的调节、肾素-血管紧张素对全身动脉血压的调节等42种生物学功能治疗COVID-19。初步分子对接结果显示，核心活性成分MOL000519（来自半夏）、MOL000554（来自冬花）、MOL004798（来自麻黄）、MOL004824（来自甘草）、MOL010428（来自紫菀）、MOL013443（来自枳实）等与SARS-CoV-2 3CL水解酶有较好的亲合力，可形成稳定构象，具有较好结合活性（结合能≤-5 kJ/mol）。结论 清肺排毒汤以多药味、多靶点、多信号通道和多生物学功能发挥治疗COVID-19作用，该研究可为深入阐释清肺排毒汤治疗COVID-19的药理作用及机制提供参考。

• 从CXCL12/CXCR4轴探析空瓶诱导的慢性情绪应激对急性心肌梗死大鼠炎性因子的影响

  侯季秋,陈雅丽,马 迪,王 超,靳会会,安 莹,赵海滨

  目的 探析空瓶刺激诱导的慢性情绪刺激对急性心梗大鼠CXCL12/CXCR4介导的炎性反应影响。方法 采用21 d不确定空瓶饮水刺激法建立焦虑模型，冠状动脉左前降支结扎方法建立心肌梗死模型，于焦虑造模的第15天进行心梗手术造模建立复合模型。随机分为假手术组（只穿线不结扎，n=6）、心肌梗死组（结扎冠脉左前降支，n=6）、复合模型组（结扎冠脉左前降支结合不确定空瓶饮水刺激，n=6），抑制剂组（复合模型组基础上经腹腔注射AMD3100（1 mg·kg-1·d-1），给药6 d，n=7）。超声心动检测左室射血分数（LVEF）、左心室缩短分数（LVFS）等评价大鼠心脏功能，高架迷宫试验、旷场试验评价大鼠行为学，ELISA、免疫组化检测CXCL12、CXCR4、IL-1β、IL-18、NE的表达情况。结果 复合模型组大鼠LVEF、LVFS均低于假手术组及心梗组（P<0.05），抑制剂组LVEF、LVFS均高于复合模型组（P<0.05），抑制剂组LVID;d、LVID;s均低于复合模型组（P<0.05）；高架十字迷宫试验中复合模型组大鼠停留在开臂时间及进入开臂的次数均明显低于假手术组及心梗组（P<0.05），抑制剂组大鼠在开臂上的时间及进入开臂的次数比复合模型组明显增加（P<0.05），旷场试验中复合模型组大鼠的水平运动和垂直运动较假手术组与心梗组减少（P<0.05），而抑制剂组大鼠垂直运动较复合模型组增加（P<0.05）；复合模型组大鼠心梗边缘区CXCR4表达均高于假手术组、心梗组和抑制剂组（P<0.05）；抑制剂组IL-1β、IL-18、中性粒细胞活性蛋白酶的表达均低于复合模型组（P<0.05）；与假手术组相比，复合模型组尼氏体的数量明显减少（P<0.01）。结论 空瓶刺激诱导的慢性情绪应激可导致CXCL12/CXCR4轴功能失调，造成心梗后炎性级联反应，恶化心梗后心肌细胞坏死、心功能及海马神经元的损伤。

• 内质网应激介导的Kupffer细胞源性TNF-α经TNFR/caspase 8途径诱导肝星状细胞凋亡

  高 宏,文 楠,徐雪松,洪国庆,赖 星

  目的 探讨Kupffer细胞（KCs）内质网应激以及KCs细胞源性肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在肝星状细胞凋亡中的作用。方法建立大鼠肝纤维化模型，按随机数字表法分为4组，15只/组：对照组：腹腔注射生理盐水（2 mg/kg）；肝纤维化组：腹腔注射40%CCl4溶液（花生油制成，2 mg/kg）；内质网应激组：腹腔注射40% CCl4溶液（2 mg/kg）和衣霉素（1 mg/kg）；KCs封闭组：腹腔注射40% CCl4溶液（2 mg/kg）和衣霉素（1 mg/kg）后，经腹腔注射氯膦酸脂质体（50 mg/kg）。以上4组注射处理均为2次/周，共8周。在动物模型基础上，建立KCs、LX2共培养细胞系，随机分为4组：对照组：分离培养对照组大鼠肝脏KCs，与LX2细胞共培养；肝纤维化组：分离培养肝纤维化组大鼠肝脏KCs，与LX2细胞共培养；ER-stress组：分离培养ER-stress组大鼠肝脏KCs，与LX2细胞共培养；肿瘤坏死因子受体（TNFR）阻断组：在ER-stress大鼠基础上，经门静脉注射anti-rat TNFR mAb（0.35 mg/kg）后，按照分离大鼠肝脏KCs，与LX2细胞共培养，收集细胞和上清液。运用肝功能检测、天狼星红染色、ELISA、免疫荧光、RTPCR，检测各组大鼠肝功能水平、肝纤维化程度、KCs极性、炎症因子表达以及活化肝星状细胞数量。运用ELISA、RT-PCR、Western blot，检测各组细胞极性、炎症因子表达、LX2凋亡程度、TNFR/caspase 8通路蛋白表达。结果 体内实验结果显示，与对照组相比，肝纤维化组的谷氨酸转氨酶（AST）、天冬氨酸转氨酶(ALT)水平、天狼星红染色阳性区域、结蛋白阳性细胞（活化肝星状细胞）数量均显著增多（P<0.05），CD16阳性细胞、TNF-α表达和mRNA水平显著下降（P<0.05）；与肝纤维化组相比，ER-stress组ALT和AST水平、天狼星红染色阳性区域、结蛋白阳性细胞数量均明显降低（P<0.05），CD16阳性细胞、TNF-α表达和mRNA水平均明显增多（P<0.05）；与ER-stress组相比，KCs封闭组ALT和AST水平、天狼星红染色阳性区域、结蛋白阳性细胞数量均显著增多（P<0.05），CD16阳性细胞、TNF-α表达和mRNA水平均显著下降（P<0.05）。体外实验结果显示，与对照组相比，肝纤维化组内TUNEL阳性的LX2细胞、CD16阳性细胞、KCs内TNFR、cleaved-caspase 8、cleaved-caspase 3的表达均明显降低（P<0.05），但结蛋白阳性的LX2细胞显著增加（P<0.05）；与肝纤维化组相比，ER-stress组内TUNEL阳性的LX2细胞、CD16阳性细胞、KCs内TNFR、cleaved-caspase 8、cleaved-caspase 3的表达均明显增加（P<0.05），但结蛋白阳性的LX2细胞显著减少（P<0.05）；同时，在阻断TNFR后，与ER-stress组相比，虽然TNFR表达未见明显变化，但下游cleaved-caspase 8、cleaved-caspase 3的表达均显著下降（P<0.05）。结论 KCs内质网应激促进了其M1型极化，并增加了KCs源性TNF-α的表达。KCs源性TNF-α经TNFR/caspase 8途径诱导了肝星状细胞的凋亡。

• 二甲双胍抑制大鼠胆管成纤维细胞胶原生成的分子信号机制

  卢家美,张晶晶,吕 毅,王 博,贾丽娜,师建华

  目的 探讨二甲双胍是否通过活化腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）抑制转化生长因子-β1（TGF-β1）刺激的大鼠胆管成纤维细胞胶原生成并揭示其分子信号机制。方法 取雌雄各半的SD大鼠共50只（体质量150~200 g），CO2窒息法处死后，无菌条件下分离并培养大鼠胆管成纤维细胞，倒置显微镜观察所培养的细胞，发现不同体质量及性别的大鼠所获取的细胞形态及活性无差异。采用随机数字表法进行随机分组，分别设置对照组、TGF-β1组、Smad3 siRNA干预组、结缔组织生长因子（CTGF）siRNA干预组、二甲双胍干预组、Compound C干预组，每组3个样本。设置对照组：大鼠胆管成纤维细胞正常培养；TGF-β1组：10 ng/mLTGF-β1孵育细胞；Smad3 siRNA干预组：Smad3 siRNA转染24 h后＋10 ng/mL TGF-β1孵育细胞；CTGF siRNA干预组：CTGF siRNA 转染 24 h 后＋10 ng/mL TGF-β1 孵育细胞；二甲双胍干预组：10 mmol/L 二甲双胍＋10 ng/mL TGF-β1 孵育细胞；Compound C干预组：10 μmol/L Compound C＋10 mmol/L二甲双胍＋10 ng/mL TGF-β1孵育细胞。以TGF-β1刺激大鼠胆管成纤维细胞分泌胶原，以Smad3 siRNA或CTGF siRNA转染细胞以抑制Smad3或CTGF蛋白的表达，以二甲双胍孵育细胞以激活AMPK，以Compound C预处理细胞以抑制AMPK的活性。采用ELISA或Western-blot的方法检测CTGF、胶原（I Col I）蛋白水平；Western-blot的方法检测p-Smad3/t-Smad3、p-AMPK/t-AMPK、CTGF水平。结果 TGF-β1以时间和剂量依赖的方式刺激胆管成纤维细胞胶原I生成，二甲双胍激活的AMPK也剂量依赖性抑制TGF-β1诱导的胶原I生成；AMPK抑制剂Compound C预孵育细胞，可显著逆转二甲双胍激活的AMPK抑制胶原I生成的作用（P<0.01）。进一步发现，二甲双胍激活的AMPK对TGF-β1刺激的Smad3磷酸化无抑制作用，却可抑制其下游的CTGF蛋白表达（P<0.01）及胶原I生成（P<0.01），而AMPK抑制剂可逆转二甲双胍对CTGF及胶原I的上述作用。结论 二甲双胍通过激活AMPK抑制TGF-β1/Smad3信号通路诱导的CTGF蛋白表达，进而抑制胆管成纤维细胞胶原I生成。

• 胆碱能抗炎通路对脓毒症大鼠早期炎症与免疫反应具有负向调控作用

  李红兵,李 媛,王武石,彭宗爽,吴 芳

  目的 通过对特异性胆碱能受体α7nAChR进行干预，探讨胆碱能抗炎通路（CAP）在脓毒症早期对炎症与免疫的调控。方法 采用SPF级SD大鼠64只，用随机数字表法分组，对照组8只：正常饲养，不做任何处理；假手术组8只：大鼠剖腹但不进行盲肠结扎穿刺法（CLP）制备脓毒症模型，并予哌拉西林（50 mg/kg，腹腔注射，3次/d，连续3 d）；脓毒症组共48只，采用CLP脓毒症模型制备，制备成功后随机分为模型组16只：予哌拉西林（50 mg/kg，腹腔注射，3次/d，连续3 d）及生理盐水（1 mL/100 g，腹腔注射，3次/d，连续3 d）；GTS-21组16只，哌拉西林使用同脓毒症组，并以GTS-21（4 mg/kg，腹腔注射，1次/d，连续3 d）进行干预；甲基牛扁亭（MLA）组16只：哌拉西林使用同脓毒症组，并以MLA（4.8 mg/kg，腹腔注射，1次/d，连续3 d）进行干预。记录各组大鼠MSS评分并进行短程HRV分析，3 d后处死大鼠采集血液，采用ELISA测定血清TNF-α、IL-1α、IL-10、IL-6、HMGB1、sCD14等细胞因子、采用细胞流式方法测定淋巴细胞CD4+CD25+ Treg与TH17阳性细胞比例。结果 与对照组比较，脓毒症大鼠MSS评分明显升高，HRV指标（SDNN, RMSSD, HF, SD1, SD2）明显下降（P<0.05）；GTS-21明显改善了脓毒症MSS评分（P<0.05），MLA较GTS-21明显增加MSS评分（P<0.05），二者对HRV指标无显著影响（P>0.05）；脓毒症大鼠血清TNF-α、IL-1α、IL-10、IL-6、HMGB1、sCD14浓度、淋巴细胞CD4+CD25+ Treg与TH17淋巴细胞明显升高（P<0.05），Treg/TH17较对照组明显降低（P<0.05），GTS-21能明显降低脓毒症血清TNF-α、IL-1α、IL-6、HMGB1、sCD14浓度及TH17淋巴细胞百分比（P<0.05）；MLA增加脓毒症大鼠血清TNF-α、IL-1α、IL-10、IL-6、HMGB1、sCD14浓度与CD4+CD25+ Treg，TH17淋巴细胞百分比、降低模型组大鼠Treg/TH17，与GTS-21组相比有显著差异（P<0.05）。结论 CAP对脓毒症早期炎症与免疫反应具有明显的负向调控作用，HRV部分指标能较好的反应CAP对炎症与免疫的调控效能。

• β-arrestin1过表达抑制Molt-4细胞异种移植小鼠急性T淋巴细胞白血病进展

  张 佳,舒 逸,张虹洋,蒋婷婷,宫茂源,朱 丹,王皓飚,邹 琳

  目的 探讨β-arrestin1对Molt-4细胞异种移植急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）NCG小鼠模型疾病进展的影响。方法 建立稳定表达荧光素酶的人Molt-4细胞系，酶标仪检测其荧光素酶强度；构建稳定过表达或敲低β-arrestin1和空载体的Molt-4细胞系，设为β1组、Siβ1组和Scram组并分别接种于亚致死计量辐射后NCG小鼠体内；记录小鼠移植后体质量及生存时间；利用活体荧光成像系统检测移植小鼠模型体内肿瘤进展；移植后16 d处死小鼠，取肝和脾做切片染色，检测肿瘤细胞浸润。结果 成功构建稳定表达荧光素酶Molt-4细胞系（Molt4-Fluc）。在Molt4-Fluc基础上成功构建过表达β-arrestin1（β1）、敲低β-arrestin1（Siβ1）或空载体（Scram）的Molt-4细胞系。NCG小鼠T-ALL异种移植模型显示，β1组、Siβ1组及Scram组Molt4-Fluc细胞在受体NCG小鼠中进展，导致NCG小鼠在移植后体质量降低。小鼠生存时间显示，β1组细胞受体小鼠生存时间（43 d）显著长于Scram组细胞受体小鼠（33 d），P<0.001；Siβ1组细胞受体小鼠生存时间（20 d）显著短于Scram组细胞受体小鼠（33 d），P<0.001；活体荧光成像结果显示，β1组细胞受体小鼠体内T-ALL细胞荧光强度显著弱于Scram组细胞受体小鼠，Siβ1组细胞受体小鼠体内T-ALL细胞荧光强度强于Scram组细胞受体小鼠；处死移植后16 d小鼠，组织染色结果显示，β1组细胞受体小鼠肝、脾内肿瘤细胞浸润较Scram组细胞受体小鼠少。结论 β-arrestin1过表达可抑制Molt-4细胞异种移植后小鼠T-ALL进展。

• 食管鳞癌患者血清中lncRNA-TUSC7的表达及与细胞侵袭转移的关系

  赵 珂,郭玉刚,霍 正,马国辉,张 桂,邢雨欣,徐 茜

  目的 探究长链非编码 lncRNA-TUSC7在食管鳞癌患者血清中表达的临床意义并进一步评估其对食管癌细胞侵袭和转移能力的影响。方法 选取 2017年1月~2019年5月南阳市第二人民医院和南阳市中心医院收治的60例食管鳞癌患者的血清，同时选取60例年龄、性别匹配的健康体检者血清作为对照组。采用RT-qPCR方法检测血清中TUSC7的表达，分析其与临床病理特征的关系。同时以正常食管上皮细胞为对照，检测4种食管鳞癌细胞系中TUSC7的表达，进一步通过体外过表达或抑制TUSC7，进行MTT，划痕实验和细胞侵袭实验分析 TUSC7对细胞迁移及侵袭的影响。Western blot检测过表达或抑制TUSC7对食管鳞癌细胞上皮间质转化（EMT）的标志物（MMP-9、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin）蛋白表达的影响。结果 食管鳞癌患者血清中LncRNA TUSC7的表达低于正常健康对照组（P<0.05）；TUSC低表达与肿瘤分期、淋巴结转移及组织浸润程度相关（P<0.05）。细胞水平上实验组TUSC7表达水平低于对照组（P<0.05）；过表达TUSC7可显著抑制食管癌细胞的迁移和侵袭能力（P<0.05）；并提高KYSE-30细胞EMT相关蛋白E-cadherin，而降低MMP-9、N-cadherin和Vimentin蛋白表达量（P<0.05）；而抑制TUSC7后结果相反。结论 TUSC7在ESCC血清和细胞系中表达下调，与食管鳞癌淋巴结转移相关，且具有通过EMT促进肿瘤细胞迁移和侵袭的功能。因此血清中TUSC7具有成为食管鳞癌诊疗和转移监测的分子标记物的可能。

• 异氟醚预处理通过抑制caspase-11相关的非经典细胞焦亡途径减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤

  王小莹,刘作金,申丽娟

  目的 研究异氟醚预处理通过抑制用随机数字表法肝脏缺血再灌注损伤（HIRI）过程中细胞焦亡非经典途径而对HIRI产生保护作用。方法 建立肝脏缺血再灌注损伤小鼠模型，将30只C57BL/6小鼠分成假手术组（n=10）、异氟醚组（n=10）和手术组（n=10），其中异氟醚组经1.4%异氟醚预处理30 min后行肝脏缺血再灌注手术。用组织HE染色切片观察及病理评分和检测血清中ALT/AST水平的方法评估异氟醚预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。用ELISA法检测血清中IL-1β和IL-18，用Western Blot法检测肝脏组织中GSDMD的蛋白表达，以评价异氟醚预处理对细胞焦亡的抑制作用。用Western Blot法和免疫荧光法检测肝脏组织中caspase-11的蛋白表达，评价异氟醚预处理对细胞焦亡非经典途径的抑制作用。结果 HE染色切片的Suzuki’s评分结果显示手术组分数较假手术组显著增高（P<0.05），而异氟醚组的分数较手术组显著降低（P<0.05）；ALT/AST检测结果显示假手术组血清中ALT/AST显著增高（P<0.05），而异氟醚组的检测结果较手术组显著降低（P<0.05）；ELISA结果提示血清中IL-1β与IL-18在手术组中表达明显高于假手术组（P<0.05），异氟醚组中IL-1β与IL-18均明显低于手术组（P<0.05）。Western blot检测肝组织中手术组GSDMD的表达明显高于假手术组，而异氟醚组的表达较手术组明显降低（P<0.05）；Western blot和免疫荧光结果均提示I/R组小鼠肝脏组织中caspase-11表达显著高于假手术组（P<0.05），而异氟醚组小鼠肝脏组织中的caspase-11表达较手术组明显降低（P<0.05）。结论 异氟醚预处理对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用，而这种作用与其对细胞焦亡非经典途径的抑制相关。

• 依托咪酯降低新生大鼠离体脊髓腹角神经元的兴奋性及抑制nAChR的功能

  朱苏月,黄 艳,靳 娜,杨鑫宇,张环环,徐爱萍,汪萌芽,郑 超

  目的 研究依托咪酯（ET）对脊髓腹角神经元电生理特性及烟碱型乙酰胆碱受体（nAChR）的影响。方法 选用19只7~12 d新生SD大鼠，麻醉后，将含有腰骶膨大的脊髓分离并切片，用木瓜蛋白酶（0.18 g/30 mL人工脑脊液）消化切片并孵育40 min，显微镜下选取腹角，用抛光的巴斯德吸管进行急性机械分离神经元，对贴壁的健康神经元结合药理学方法进行穿孔膜片钳记录实验。在电流钳模式下，先记录脊髓腹角神经元自发动作电位（AP），然后结合预处理给药方式，分别记录不同浓度的ET对脊髓腹角神经元自发AP影响。在电压钳模式下，先应用尼古丁在脊髓腹角神经元诱导出内向电流，然后结合预处理给药方式，记录在不同浓度的ET、不同钳制电位以及不同使用时间的情况下，ET对尼古丁在脊髓腹角神经元诱导的内向电流的影响。结果 急性分离的脊髓腹角神经元状态良好，具有形状多样的胞体和完整的突起；共记录到21例脊髓腹角神经元有自发AP，经0.3、3.0、30.0 μmol/L（3.0 μmol/L相当于临床浓度）不同浓度的ET持续灌流2 min后，与给药前比较，结果12例神经元的AP幅度、锋电位幅度及超射分别被浓度依赖性抑制（P<0.01）；自发放电频率降低（P<0.01）。另外9例神经元的AP被3.0或30.0 μmol/L的ET完全取消；在相同钳制电位下（VH=-70 mV），分别经0.3、3.0和30.0 μmol/L的ET预处理2 min后，对0.4 mmol/L尼古丁诱导的电流幅度显示出浓度依赖性压抑作用（P<0.01, n=7）。将钳制电位分别设定为-30、-50、-70 mV，应用30.0 μmol/L的ET预处理2 min后，对0.4 mmol/L尼古丁诱导的电流幅度呈电压依赖性压抑作用（P<0.01，每个钳制电位下n=6）。在30.0 μmol/L的ET预处理6 min过程中，分别于0、2、4、6 min时先后4次暴露于0.4 mmol/L的尼古丁（每次暴露时间为2 s），随着暴露次数增多，尼古丁电流幅度逐渐减小；但若在6 min的预处理过程中，仅在开始（0 min）和结束（6 min）时两次暴露于相同浓度尼古丁，则6 min时，电流幅度抑制率较4次暴露尼古丁时的抑制率明显降低（P<0.01, n=6）。结论 ET以浓度依赖的方式降低脊髓腹角神经元的兴奋性，并且以浓度依赖、电压依赖和使用依赖的方式压抑nAChR功能。

• BUB1基因在胃癌组织中高表达： 基于Oncomine数据库及生物信息学方法

  李小燕,何 杰,余 觅,张 维,孙 建

  目的 探讨细胞周期有丝分裂纺锤体检测点丝/苏氨酸激酶（BUB1）基因在胃癌（STAD）中的表达及临床价值。方法 分别运用Oncomine、GEPIA、BioGPS和Kaplan-Meier Plotter等数据库分析BUB1基因在胃癌组织和正常胃组织的表达差异，并且分析BUB1表达水平与胃癌患者生存预后之间的关系；利用癌症细胞系全科百科全书（CCLE）分析BUB1分别在胃癌组织T细胞和B细胞中的表达，利用String数据库绘制BUB1相关蛋白网络图及基因本体（GO）功能注释，并对京都基因和基因组百科全书（KEGG）相关通路进行分析。采用肿瘤免疫评估资源（TIMER）数据库分析BUB1在免疫浸润物中的表达及对胃癌患者生存预后的影响。为进一步验证Oncomine数据库基因芯片的结果，我们选择成都医学院第一附属医院2018年3月~2019年7月收治的胃癌患者30例，经外科手术获得胃腺癌组织30份，同时获取的癌旁正常组织30份作为对照组，通过PCR和免疫组化技术对Oncomine数据库中BUB1基因表达的数据进行验证。结果 Oncomine、GEPIA、BioGPS分析显示：与正常胃组织相比，BUB1在胃癌组织中呈现高表达（P<0.05）。通过Kaplan-Meier生存分析发现，BUB1基因高表达的胃癌患者无进展生存期（HR=0.52，95%CI=0.41~0.67，P<0.05）、总生存期（HR=0.67，95%CI=0.55~0.82，P<0.05）均有所延长。通过string数据收集到与BUB1相关蛋白主要富集于13类细胞学组分、4类分子功能和12类生物学过程，并参与了4条信号通路。TIMER数据库分析显示在免疫微环境中高表达BUB1 mRNA的CD4+T细胞和巨噬细胞对胃癌患者5年生存预后较好。实时定量PCR结果提示胃癌组织样本BUB1的表达水平（4.345±0.421）明显高于配对的癌旁正常胃粘膜组织（1.583±0.122）（t=34.63，P<0.05）；免疫组化结果提示胃癌组织BUB1染色成阳性。结论 胃癌组织中BUB1基因呈现高表达，BUB1可能具有减少肿瘤免疫抑制作用可协助评估胃癌患者的预后情况。

• 超声引导下细针穿刺细胞学检测不同大小可疑甲状腺癌结节的阳性率及准确率

  赵美丽,杨 炜,李金凤,王自正,邵国强

  目的 对不同大小可疑甲状腺癌结节行超声引导下细针穿刺（US-FNA）细胞学检测的结果进行阳性率、准确率、阳性预测值、阴性预测值统计分析，为临床医生选择US-FNA目标结节提供参考。方法 对591个患者的594个甲状腺可疑恶性结节进行US-FNA细胞学检测，按结节大小将其分为4~5 mm组（Ⅰ组），6~10 mm组（Ⅱ组），>10 mm组（Ⅲ组），以术后病理为标准，统计出3组FNA细胞学检测结果阳性率（结果为甲状腺癌表示为阳性）、准确率、FNA取材病理诊断不能确诊率、阳性预测值、阴性预测值，比较其组间统计学差异。结果 Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组阳性率分别是39.2%（40/102），48.2%（172/357），65.2%（88/135），Ⅰ组与Ⅱ组比较无统计学差异（P=0.107），Ⅰ组与Ⅲ组、Ⅱ组与Ⅲ组比较有明显统计学差异（P分别0.000，0.001）；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组准确率、病理不能确诊率、阳性预测值、阴性预测值分别为95.5%（21/22），97.1%（100/103），94.4%（51/54）；2.9%（3/102），2.8%（10/357），1.5%（2/135）；100%，100%，98%；66.7%，57.1%，33.3%，组间两两比较均未见统计学差异。结论 超声引导下FNA细胞学诊断甲状腺癌，结节大小对阳性率有一定影响，但对准确性、FNA取材细胞学不能确诊率、阳性预测值及阴性预测值均没有明显影响。

• 长链非编码RNA MALAT1靶向miR-485-3p调控乳腺癌细胞对紫杉醇的耐药性

  艾尼·沙塔尔,闫焕英,丁 伟,阿迪力江,苏鹏程

  目的 研究长链非编码RNAMALAT1对乳腺癌细胞紫杉醇耐药性的影响机制。方法 运用紫杉醇浓度梯度诱导法检测紫杉醇耐药乳腺癌细胞SK-BR-3；将si-NC组（转染si-NC）、si-MALAT1组（转染si-MALAT1）、pc DNA组（转染pc DNA）、pcDNAMALAT1组（转染pc DNA-MALAT1）、miR-NC组（转染miR-NC）、miR-485-3p组（转染miR-485-3p mimics）、si-MALAT1+antimiR-NC组（共转染si-MALAT1和anti-miR-NC）、si-MALAT1+anti-miR-485-3p组（共转染si-MALAT1和anti-miR-485-3p），均用脂质体法转染SK-BR-3/PR细胞；MTT法检测细胞IC50；Western blot检测细胞中P-gp、Bax、Bcl-2的蛋白表达；双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中MALAT1与miR-485-3p的结合力。结果 与紫杉醇敏感SK-BR-3细胞相比， SK-BR-3/PR细胞的IC50、MALAT1均上调，miR-485-3p下调，差异具有统计学意义（P<0.05）。沉默MALAT1或过表达miR-485-3p均可下调SK-BR-3/PR细胞的IC50，下调P-gp和Bcl-2表达，上调Bax表达，差异具有统计学意义（P<0.05）。miR-485-3p是MALAT1的靶标。抑制miR-485-3p可逆转沉默MALAT1对SK-BR-3/PR细胞的IC50、P-gp、Bcl-2和Bax表达的影响，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 长链非编码RNAMALAT1可调控乳腺癌细胞对紫杉醇的耐药性，其机制可能与靶向miR-485-3p下调P-gp、Bcl-2，上调Bax有关。

• 老年阻塞性睡眠呼吸暂停综合征严重度与红细胞体积分布宽度的相关性

  武淑萍,高莹卉,钱小顺,赵力博,徐 虎,徐伟豪,孔晓萱,杨 阳,车贺宾,王亚斌,袁熹娜,刘 霖

  目的 探讨老年阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（OSAS）严重度与红细胞体积分布宽度（RDW）的关系。方法 采取横断面调查，纳入2015年1月~2016年10月在解放军总医院鼾症门诊确诊为OSAS患者311例(年龄≥65岁)为观察组，其中男性213例，女性98例。同期入选体检人群排除OSAS的老年人120例为对照组。根据OSAS患者睡眠呼吸暂停低通气指数（AHI）再将观察组分为3组：轻度 OSAS 组（AHI为5.0~14.9，n=90），中度OSAS 组（AHI 为15.0~29.9，n=113），重度 OSAS 组（AHI≥30，n=108）。对照组的AHI<5。收集研究对象的一般资料，进行多导睡眠监测、静脉抽血查常规、血生化全套指标，并采用多元线性回归分析，分析OSAS严重度与RDW的相关性。结果 重度OSAS组的RDW、甘油三酯水平高于其他各组（P<0.01）；重度OSAS组和中度OSAS组的空腹血糖水平、体质量指数高于轻度OSAS组和对照组（P<0.05或P<0.01）。多元线性回归分析显示，AHI与体质量指数（Beta=0.111，P=0.032）、RDW（Beta=0.106，P=0.029）呈正相关。RDW预测OSAS的严重程度的ROC曲线下面积为0.687（P=0.0001）。结论 RDW可随着老年OSAS程度的加重而增高，可能作为老年OSAS患者严重度评估的潜在辅助指标。

• 痰瘀同治法对糖尿病大鼠肾脏TGF-β1/Smad3信号通路的影响

  储全根,蔡正银,储 俊,轩 云,程 婕,王 盼

  目的 观察痰瘀同治法通过调节TGF-β1/Smad3信号通路对糖尿病大鼠肾脏病变的影响。方法 选取SD大鼠随机分为：空白组（NC）、模型组（MC）、痰瘀同治组（RPDBS）、化痰组（RP）、化瘀组（DBS），予以单次注射链脲佐菌素溶液制备糖尿病模型，喂养4周后，RPDBS组、RP组和DBS组分别予以相应的药物干预8周，麻醉状态下取材。采用HE染色法观察肾脏组织病理学变化；Western blot法和实时荧光定量PCR法检测肾脏组织转化生长因子-β1（TGF-β1）及其信号蛋白Smad3蛋白和基因表达水平。结果 与MC组比较，光镜下各治疗组肾小球和肾小管结构和排列改善明显；各治疗组TGF-β1、Smad3和p-Smad3蛋白和基因表达水平均明显下调（P<0.05）；其中RPDBS组TGF-β1、Smad3和p-Smad3蛋白和基因表达水平较RP组和DBS组下调更明显（P<0.05）。结论 痰瘀同治可能通过抑制 TGF-β1/Smad3信号通路激活，延缓糖尿病肾病纤维化，发挥肾脏保护作用。

• 定量资料非平衡设计下各组样本量对检验效能的影响

  梁绮红,余晓琳,安胜利

  目的 探究非平衡设计下在单因素方差分析和Kruskal-Wallis H检验中各组样本量与检验效能的关系。方法 通过SAS程序估计出两种方法在给定参数下所需的样本量，利用蒙特卡罗模拟，分别研究总样本量固定及不固定时，组间样本量比值对检验效能的影响。结果 单因素方差分析中，总样本量固定时，增加均方误较大组的样本量可使检验效能提高，组间样本量差异过大会导致检验效能降低；总样本量不固定时，所增加样本量组的均方误越大，其检验效能增幅越高。Kruskal-Wallis H检验中，总样本量固定时，即便在组间样本量差异较大情况下，增加均方误较大组的样本量仍可提高检验效能；总样本量不固定时，结果 与单因素方差分析类似，且其增幅与总样本量固定时增加均方误较大组的样本量近似。结论 检验效能与组间样本量比值的关系受均方误的影响，增加均方误较大组的样本量能够提高检验效能；对于Kruskal-Wallis H检验，相较于增加总样本量，通过仅增加均方误较大组的样本量亦能获得较高检验效能，且更具有成本优势。

• 单孔胸腔镜手术术前定位技术的应用价值：基于54例孤立性肺结节的临床观察

  廖 明,何 哲,徐恩五,吴德华

  目的 探讨不同结节定位技术在孤立性肺结节（SPN）单孔胸腔镜手术术前定位中的应用价值及临床效果。方法 选取中国人民解放军南部战区总医院胸外科自2018年1月~2019年6月间收治的54例诊断为SPN并采取单孔胸腔镜手术进行治疗的患者为研究对象进行回顾性分析，其中男30例，女24例；年龄17~78岁，平均年龄41岁。依据结节定位方法将上述患者分为2组：A组34例，采取术前CT导下Hook-wire定位（Hook-wire采用乳腺常用定位针）；B组20例，采取术前CT引导下亚甲蓝定位（以心内注射针穿刺至结节表面肺组织注射少量亚甲蓝染色）。结果 A组定位成功率为94.18％（32/34），B组定位成功率为85%（17/20，其余3例于术中通过手指触摸定位后切除），两组差异有统计学意义（P<0.05）；A组患者术中未出现中转开胸，B组中转开胸率为10%（2/20），两组差异有统计学意义（P<0.05）；A组定位费用为1715±109元，B组定位费用为1021±86元，两组差异有统计学意义（P<0.05）；A组住院总费用为50114±3788元，B组住院总费用为47871±5902元，两组差异无统计学意义（P>0.05）；A组住院天数为6.71±1.23 d，B组住院天数为8.19±2.61 d，两组差异有统计学意义（P<0.05）。结论 采用单孔胸腔镜手术进行SPN的切除有助于将患者的创伤降至最低，合理选择术前定位技术可提高肺结节切除的精确率，对于SPNs的鉴别诊断及治疗具有很好的临床应用价值。Hook-wire定位法相比较于传统亚甲蓝定位法可显著增加定位成功率，可作为单孔胸腔镜肺结节切除手术，特别是结节位置距脏层胸膜较深的患者术前的标准定位方法。

• 超声龈下刮治联合手工根面平整治疗老年慢性牙周炎

  霍文艳,王海锋,刘思思,刘亚男

  目的 评价超声龈下刮治联合手工根面平整治疗老年慢性牙周炎的临床疗效。方法 选择40例老年慢性牙周炎患者，随机分为两组（n=20），分别使用超声龈下刮治联合手工根面平整（试验组）和超声龈下刮治（对照组）进行治疗，在治疗前及治疗后6周、12周记录菌斑指数（PLI）、出血指数(BI) 、探诊深度（PD）和附着丧失（AL）。结果 治疗两组患者的牙周指标PLI、BI、PD 和AL与治疗前相比均显著下降（P<0.05），其中PD减少量和AL减少量试验组高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。PLI减少量和BI减少量两组差异无统计学意义（P>0.05）。结论 超声龈下刮治联合手工根面平整治疗老年慢性牙周炎疗效优于单独超声龈下刮治。

• 弓形虫感染导致DC2.4细胞外泌体特征差异的研究

  李东亮,杨淑君,彭鸿娟

  目的 分析小鼠树突状细胞（DC2.4）感染弓形虫后所分泌的外泌体及其富集的小RNA与piRNA的变化，为外泌体在弓形虫-宿主互作中的作用提供必要的信息。方法 DC2.4细胞分为2组（未感染组与感染组），用含无外泌体血清的培养基培养。待细胞长满，感染组用弓形虫RH株速殖子感染28 h，未感染组则培养28 h。收集两组细胞的培养上请，采用超速离心法分别提取外泌体，通过透射电镜检测外泌体形态，并用纳米颗粒追踪仪检测外泌体的粒径大小以及颗粒密度。对外泌体进行小RNA高通量测序分析，用生物信息学方法分析感染组与对照组差异显著的piRNA，对并其靶基因及功能进行预测。结果 对弓形虫感染与未感染的DC2.4细胞分泌的外泌体进行形态学鉴定以及粒径大小和密度的比较，发现弓形虫感染会导致DC2.4分泌的外泌体密度增加；而通过外泌体小RNA测序，发现弓形虫感染会导致外泌体中 miRNA及piRNA数目增加，其中感染后显著升高的piRNA包括piR-mmu-159、piR-mmu-1526、piR-mmu-9082、piR-mmu-17405、和piR-mmu-25576。对上述piRNA靶基因的预测和KEGG分析，显示这些靶基因显著富集到MAPK、Ras、cAMP、actin细胞骨架调节、粘着斑形成、轴突导向等信号通路上。结论 弓形虫感染导致DC2.4细胞分泌的外泌体粒径尺寸峰值增大和密度增加，miRNA及piRNA数目增加，提示外泌体在弓形虫-宿主细胞互作中起着重要作用。

• 疫情严重地区居民对COVID-19的知识、态度、行为调查

  胡友坤,张高强,李志浩,杨佳妮,莫丽君,张希如,熊莉莉,吴炜亮,毛 琛,杨杏芬

  目的 分析疫情严重地区居民新型冠状病毒肺炎（COVID-19）相关的知识、态度和行为现况，以期为政府部门制定相关措施提供科学依据。方法 通过网络邀请湖北省及河南省等疫情严重地区居民作为研究对象，进行现况调查研究，调查时间为2020年2月21日12∶00时~2月23日12∶00时，调查内容包括居民的基本情况，对COVID-19的认知、态度和防控行为等，以及心理状态和生活状况。结果 问卷填写有效应答率为98.9%，调查对象的年龄M（P25，P75）为19（16，40）岁，学生占比为54.3%，调查对象最主要的疫情信息来源渠道是网络社交工具。调查对象对COVID-19可以在人际间传播和经呼吸道/飞沫传播的知晓率较高，但对COVID-19人群普遍易感及其具体症状知晓率相对较低，多因素分析结果显示，女性、学生和本科（大专）及以上学历群体对COVID-19的认知更为良好（P<0.05）；调查对象感到不同程度的担心、焦虑、恐慌等心理不适的比例达77.2%，表示需要心理干预的占比为16.7%；认为社会上对疫情严重地区人员返程存在偏见的调查对象达63.6%，而认为自己因身处疫情严重地区会受到偏见的调查对象占22.4%；调查对象感到疫情防护用品（口罩、75%酒精、84消毒液等）短缺的比例为69.4%；咳嗽或打喷嚏时遮掩口鼻、按照规范正确使用口罩、按照规范正确进行手部卫生、减少亲友聚会、减少前往公共场所这5种防护行为，执行率分别为 92.4%、95.9%、93.5%、88.8%、和93.1%，女性及认知良好的群体在防护行为方面表现更为良好（P<0.05）。结论 疫情严重地区居民对COVID-19相关的知识、态度和行为情况总体较好，网络平台对防控疫情相关信息的传播有着积极的作用。需加强防疫相关物资的保障，重视疫情期间居民的心理健康状态，并为有需要的人士提供心理疏导和心理防护工作。

• 广东境外输入性COVID-19病例入境至确诊间隔时间的影响因素分析

  程 琳,徐慧兰

  目的 了解广东境外输入性新型冠状病毒肺炎（COVID-19）病例入境至确诊间隔时间的分布特征及影响因素，为科学防控疫情提供参考依据。方法 收集广东省市两级卫健委官网公布的2020年3月1日~4月10日境外输入性COVID-19疫情资料，采用描述性统计学方法对入境至确诊间隔时间分布特征进行分析，采用Mann-Whitney U检验和Kruskal-Wallis H检验进行统计学差异分析，采用多因素logistic回归分析广东境外输入COVID-19病例入境至确诊间隔时间的影响因素。结果 截至4月10日，广东累计报告179例境外输入病例，入境到确诊平均间隔时间为4.21 d，中位间隔2 d，69.8%集中在1~3 d；多因素logistic回归分析显示，初次核酸检测阴性（OR=5.205，95% CI：1.100~24.640，P=0.038）、入境到检出阳性的间隔时间T>2 d（OR=85.654，95% CI：24.569~298.615，P<0.001）是境外输入性病例晚发现的风险因素。结论 初次核酸检测结果、入境到检出阳性的间隔时间是病例发现间隔时间的主要影响因素。研究提示应该对入境人员执行严格的隔离和检测措施，以准确快速识别病例，阻断境外疫情向本土扩散。

• 中文版手机依赖性问卷在大学生群体的信度和效度分析

  林连虹,许晓珩,方乐琴,谢丽凯,林晓敏,陈燚林,郑馥盈,贝燕柔,张 璐,张 斌

  目的 评价中文版手机依赖性问卷（MPIQ）在大学生中的效度和信度。方法 选取在校大学生2122 名，使用中文版MPIQ评定被试者手机依赖情况。1 个月后，随机选取其中的60 名测评中文版MPIQ以评定重测信度，并应用ROC曲线评估不同划界值的的真阳性率（灵敏度）和假阳性率（1-特异度），寻求最佳划界分。结果 98.9% 的受试者完成中文版MPIQ的所有条目填写。中文版MPIQ总分呈正偏态分布，中文版MPIQ得分性别无统计学差异，探索性因子分析趋向于单因子结构，方差解释值为49.01%。各条目载荷在0.54~0.77；Chronbach α系数和Spearman Brown分半信度为0.84和0.83，条目与总分的相关系数为0.54~0.76，重测信度为0. 48（P<0.001），ROC曲线下面积0.707，最佳截断点32.5，敏感度为0.634，特异值为0.652，中文版MPIQ总分在32以上为手机依赖组。结论 中文版MPIQ有较好的效度和信度，初步探讨最佳划界分为32 分。

• 痛风患者超声心动图参数的相关性分析

  孙广瀚,刘 健,万 磊,龙 琰,鲍丙溪,张 颖

  目的 基于回顾性分析探究痛风患者超声心动图参数的相关性分析。方法 通过安徽省中医院数据库中检索到2012年1月~2019年6月的住院数据和医疗记录，研究其超声心动图参数和临床实验室指标：超敏C-反应蛋白（hs-CRP）、血沉（ESR）、同型半胱氨酸（Hcy）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、补体C3、补体C4、甘油三脂（TG）、总胆固醇（TC）、尿酸（UA）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）；室间隔厚度（IVST）、左室后壁厚度（LVPWd）、左室舒张末期内径（LVDd）、左室收缩末期内径（LVDs）、左房内径（LAD）、最大P波时限（Pmax）、射血分数（EF）、每搏输出量（SV）。运用 SPSS 22.0、SPSS Clementine 11.1 Aprior 等统计学软件对指标进行关联规则、相关性分析、热图分析、多因素Logistics回归分析。结果 （1）热图分析显示：EF、SV表达最为显著，其次是AODd、LADs、LVDd、FS。根据聚类分析可以将AODd、EF、FS、LADs、LVDd、SV为聚1类，IVSTd、LVPWTd、MPAD、Pmax、RVDd为聚2类；（2）相关性分析显示，383例患者的EF与LVDd成负相关（P<0.05），与FS、SV成正相关（P<0.05）；AODd与IVSTd、LADs、LVDd、LVPWTd、RVDd、SV、ESR成正相关（P<0.05）；FS与EF、SV成正相关（P<0.05），与LVDd成负相关（P<0.05）；IVSTd与AODd、LADs、LVPWTd、补体C4、成正相关（P<0.05）；LADs与AODd、IVSTd、MPAD、RVDd、SV成正相关（P<0.05）；LVDd与AODd、IVSTd成正相关（P<0.05），与LVDd、补体C3成负相关（P<0.05）；MPAD与LADs、HDLC、TC成正相关（P<0.05），与Pmax成负相关（P<0.05）；Pmax与LVDd、RVDd、SV成正相关（P<0.05），与FS、MPAD成负相关（P<0.05）；RVDd与AODd、LADs、LVDd、Pmax、SV成正相关（P<0.05）；SV与AODd、EF、LADs、LVDd、Pmax、RVDd成正相关（P<0.05）；补体C3与补体C4、CRP成正相关（P<0.05），与LVPWTd成负相关（P<0.05）；补体C4与IVSTd、补体C3、CRP、ESR成正相关（P<0.05），CRP与补体C3、补体C4、IgA、IgG成正相关（P<0.05），与TC、HDLC、TG 成负相关（P<0.05）；TG 与 HDLC、IgM、TC 成正相关（P<0.05），与 CRP 成负相关（P<0.05）；HDLC 与 MPAD、HDLC、TC成正相关（P<0.05），与CRP成负相关（P<0.05）；IgA与CRP、IgG、IgM成正相关（P<0.05）；IgG与CRP、IgA、IgM成正相关（P<0.05）；IgM与TG、IgA、IgG、UA成正相关（P<0.05），与CRP成负相关（P<0.05）；UA与IgM成正相关（P<0.05）；ESR与AODd、补体C4成正相关（P<0.05）；HCY与RVDd成负相关（P<0.05）；TC与MPAD、TG成正相关（P<0.05），与CRP成负相关（P<0.05）；（3）经关联性分析，Pmax升高与LDL-C、UA、补体C4、TG、HCY、HDL-C、IgG、ESR、CRP、补体C3升高有明显关联性；SV升高与UA、LDL-C、补体C4、HDL-C、CRP、IgG、HCY、TC、ESR、TG、补体C3升高有明显关联性；（4）多因素Logistics回归分析分析结果提示：FS与LDL-c呈正相关（P<0.05），Pmax与IgM呈负相关（P<0.05），SV与ESR呈负相关（P<0.05），其余与其他指标不相关（P>0.05）。结论 痛风患者的超声心动图参数的变化与炎症、免疫、代谢指标的升高具有相关性，具有吸烟史和饮酒史患者并不对心功能变化产生影响，代谢指标的变化是超声心动图参数变化的危险因素。

• 牙周致病菌与系统性疾病的相关性研究进展

  杜 芹,马歆茹

  牙周致病菌是牙周炎主要的致病因素，其具有多种毒力因子，可以感染牙周组织并刺激机体炎症细胞因子产生，介导全身性慢性炎症；牙周致病菌还能侵入循环系统，免疫系统等多个人体系统并定植于组织器官，引起多种系统性疾病。近年来大量研究提示，牙周致病菌与全身多种系统性疾病如心血管疾病、糖尿病、类风湿性关节炎、癌症等的发生发展息息相关。牙周致病菌如牙龈卟啉单胞菌等能够定植于动脉粥样硬化斑块中，破坏血管内皮功能，促进其发生发展。牙龈卟啉单胞菌等也能升高炎症因子如TNF-α的水平，促进胰岛素抵抗及糖尿病的发展。类风湿性关节炎患者的关节滑膜液中能检测到牙龈卟啉单胞菌，福赛坦氏菌和中间普氏菌等多种牙周致病菌，也提示牙周致病菌参与了类风湿性关节炎的发病；具核梭杆菌能够改变小鼠肠道微生物构成，形成肠道炎性微环境，促进肠道肿瘤的进程等等。本文从牙周致病菌促进系统性疾病的机制及牙周致病菌与系统性疾病的相关性方面作一综述。

• miR-144通过影响TLR/MyD88通路抑制肝癌SMMC-7721细胞侵袭

  易青松,柳久久,艾热夏提·库尔班,李 竞,罗宏武,孙吉春

  目的 探讨miR-144基因过表达对肝癌SMMC-7721细胞侵袭及Toll样受体（TLR）/髓样分化因子88（MyD88）免疫通路的影响。方法 培养人正常肝细胞HL-7702，肝癌细胞系SMMC-7721，采用荧光实时定量PCR法检测两组细胞miR-144基因表达差异，将SMMC-7721细胞分为空白组、miR-144 NC组、miR-144 mimics组，倒置荧光显微镜检测转染效率，qRT-PCR法检测转染后各组miR-144基因表达情况，通过细胞计数试剂盒（CCK8）法各组SMMC-7721细胞存活情况，通过Transwell法检测各组SMMC-7721细胞侵袭情况，应用免疫印迹法检测各组侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）以及TLR/MyD88通路相关蛋白表达情况，观察添加40 μmol/L MyD88抑制剂TJ-M2010-2组对SMMC-7721细胞TLR/MyD88通路相关蛋白表达情况。结果 与正常组相比，SMMC-7721组miR-144基因相对表达量显著降低（P<0.05）；与空白组、miR-144 NC组相比，miR-144 mimics组miR-144基因表达显著升高（P<0.05）；CCK-8实验显示，与对照组、miR-144 NC组相比，miR-144 mimics组转染48、72、96 h后细胞存活率显著降低（P<0.05）；与空白组、miR-144 NC组相比，miR-144 mimics组侵袭细胞数、MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低（P<0.05）；与空白组、miR-144 NC组相比，miR-144 mimics组、TJ-M2010-2组Toll样受体4（TLR4）、MyD88、磷酸化核因子-κB（p-NF-κB）/核因子-κB（NF-κB）蛋白表达显著降低（P<0.05），miR-144 mimics组与TJ-M2010-2组TLR4、MyD88、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论 miR-144过表达可能通过抑制TLR/MyD88通路转导降低SMMC-7721细胞存活、抑制SMMC-7721细胞侵袭。