南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2022年第10期

• SOX2-OT/SOX2轴通过Gli1介导的上皮间质转化调控肺鳞癌H520细胞的迁移

  董洪亮, 曾莉莉, 武 艳, 苗 双, 倪 娜, 刘乃国, 陈微微, 杜 静

  目的 探讨SOX2-OT在肺鳞癌细胞H520迁移能力调控中的作用并阐明其机制。方法 选用肺癌细胞株中SOX2-OT高表达的肺鳞癌细胞H520，敲低其SOX2-OT转录水平，通过细胞划痕实验和穿膜实验对细胞迁移能力进行检测，qRT-PCR和免疫印迹方法检测上皮间质转化（EMT）相关因子的表达。通过过表达Gli1进一步分析SOX2-OT的作用机制；用miR-200c抑制剂或类似物转染细胞，分析SOX2-OT对Gli的正向调控机制。结果 敲低SOX2-OT抑制了H520细胞的侵袭和迁移能力，同时伴随着细胞EMT表型的变化。SOX2-OT能够正向调控转录因子Gli1，Gli1过表达可逆转SOX2-OT敲低对细胞迁移能力的抑制作用。miR-200c抑制剂可有效逆转SOX2-OT敲低导致的SOX2下调。结论 SOX2-OT/SOX2轴通过Gli1介导的EMT过程来调控肺鳞癌细胞H520的迁移和侵袭能力。

• CircPCSK5在胃癌中高表达并促进胃癌细胞的增殖、侵袭和上皮间质转化

  左学良, 蔡 娟, 陈志强, 李艳娜, 张斗峰

  目的 探讨circPCSK5在胃癌中的表达情况和对胃癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的影响。方法 通过高通量测序构建胃癌组织和癌旁正常胃粘膜组织的circRNA差异表达谱。选取在皖南医学院第一附属医院行胃癌根治术的患者共62例作为研究对象，利用RT-qPCR检测circPCSK5在胃癌组织和细胞系中的表达情况。采用χ2检验分析circPCSK5表达水平与胃癌临床病理资料相关性，利用Kaplan?Meier法绘制患者的总生存和无病生存曲线，Cox比例风险回归模型分析影响胃癌患者预后的独立危险因素。通过RNase R和actinomycin D实验检测circPCSK5的稳定性。利用荧光原位杂交和细胞核质分离实验检测circPCSK5的亚细胞定位。通过CCK-8和EdU实验检测circPCSK5对胃癌细胞增殖能力的影响，通过transwell实验检测circPCSK5对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。利用Western blot和RT-qPCR检测敲低或过表达circPCSK5后胃癌细胞上皮-间质转化标记物的表达变化。结果 在胃癌组织和细胞中，circPCSK5的表达明显升高（P<0.001，P<0.01）。CircPCSK5表达水平与患者的肿瘤大小、脉管侵犯、淋巴结转移和AJCC分期存在明显正相关性（P<0.05）。CircPCSK5高表达患者的总生存和无病生存时间明显低于circPCSK5低表达患者（P<0.001），且circPCSK5高表达是影响胃癌患者预后的独立危险因素（P<0.05）。敲低circPCSK5表达能明显抑制HGC27细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P<0.01），并导致上皮间质转化标记物E-cadherin表达升高，N-cadherin和Vimentin表达降低（P<0.01）。过表达circPCSK5能促进MKN45细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P<0.01），降低E-cadherin表达，升高N-cadherin和Vimentin表达（P<0.01）。结论 CircPCSK5在胃癌中高表达，并能促进胃癌细胞的增殖、侵袭和上皮间质转化，可作为胃癌预后预测指标和潜在的分子治疗靶点。

• 参白解毒方显著抑制小鼠结直肠腺瘤的形成及癌变： 基于PTEN/PI3K/AKT通路

  刘见荣, 沈卫星, 程海波, 范旻旻, 肖 君, 徐长亮, 谭佳妮, 赖岳阳, 余成涛, 孙东东, 李 柳

  目的 探讨参白解毒方（SBJDF）对结直肠腺瘤形成及癌变的影响及其对PTEN/PI3K/AKT信号通路的调控作用。方法 将4周龄的雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组（10只）、AOM/DSS模型组（20只）、参白解毒方低剂量组（14 g/kg，10只）和参白解毒方高剂量组（42 g/kg，10只）。除对照组外，其余各组采用AOM/DSS诱导小鼠结直肠腺瘤癌变模型，处理组于造模中给予参白解毒方灌胃干预。比较各组小鼠的生存率、体质量和生存状态，观察肠道组织腺瘤形成及癌变等病理情况，免疫组化检测肠道组织PTEN/PI3K/AKT信号通路相关分子的表达。结果 参白解毒方干预后小鼠的肿瘤发生率、数量和体积均显著低于AOM/DSS模型组，且高剂量的参白解毒方抑制效果更佳。HE病理切片结果显示模型组已形成腺癌，而参白解毒方可以抑制腺瘤的形成及癌变，参白解毒方低剂量组小鼠肠道同时存在腺瘤低级别瘤变和高级别瘤变，参白解毒方高剂量组小鼠肠道以正常粘膜组织为主，仅发现局部少量腺瘤低级别瘤变。机制研究发现模型组血浆中miRNA-222表达高于空白组（P<0.05），用药各组miRNA-222的表达量较模型组下调（P<0.01）；小鼠肠道组织免疫组化结果显示，与AOM/DSS模型组相比，参白解毒方处理后PTEN、p-PTEN、GSK-3β表达上调，且在低剂量组、高剂量组表达有依次递增趋势；p-GSK-3β、PI3K、AKT、p-AKT、β-catenin、c-myc、CyclinD1、Survivin表达下调，且在低剂量组、高剂量组表达呈递减趋势。结论 参白解毒方可以显著抑制小鼠结直肠腺瘤形成及癌变，其作用机制可能与调控miRNA-222及影响PTEN/PI3K/AKT信号通路有关。

• Numb通过上调V1G1的表达激活近端肾小管细胞mTORC1信号通路

  刘 泽, 尤 达, 李 勇, 何咏梅, 李阿芳, 李 潘, 李春艳

  目的 探讨Numb对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）复合物1（mTORC1）信号通路活性的影响及潜在的分子机制。方法 建立Numb-siRNA转染和/或顺铂诱导的雄性BALB/c 小鼠急性肾损伤模型，分为4组：NC-siRNA、Numb-siRNA、NCsiRNA+顺铂、Numb-siRNA+顺铂。免疫组化检测肾脏Numb、Megalin的表达与分布；Western blot检测各组动物肾脏中Numb、S6、p-S6、S6K1、p-S6K1、4EBP1、p-4EBP1的蛋白表达。分离培养Numb-siRNA转染的小鼠原代近端肾小管上皮细胞。体外建立Numb-siRNA转染和/或氨基酸刺激的大鼠肾小管上皮NRK-52E细胞模型，分为NC-siRNA组、Numb-siRNA组、NC-siRNA+氨基酸刺激组和 Numb-siRNA+氨基酸刺激组。Western blot检测各组细胞Numb、S6、p-S6的蛋白表达，检测沉默Numb表达前后的NRK-52E细胞、小鼠肾脏及原代近端肾小管上皮细胞中AMPK、p-AMPK的蛋白表达。V1G1过表达及空白对照慢病毒感染、Numb-siRNA转染和/或氨基酸刺激NRK-52E细胞，分为NC-siRNA+空载慢病毒+氨基酸刺激组、Numb-siRNA+空载慢病毒+氨基酸刺激组及Numb-siRNA+V1G1过表达慢病毒+氨基酸刺激组；Western blot检测V1G1、S6、p-S6的蛋白表达。结果 与NC-siRNA组相比，Numb-siRNA组小鼠肾脏近端肾小管上皮细胞Numb及p-S6的蛋白表达均下调（P<0.05），但不影响近端小管标记蛋白Megalin的表达与分布；与对照组小鼠相比，顺铂处理组小鼠肾脏p-S6K1及p-4EBP1的蛋白表达均上调（P<0.05），而Numb-siRNA处理组小鼠抑制顺铂介导的p-S6K1及p-4EBP1的蛋白表达水平的上调（P<0.05）。在NRK-52E细胞中，与氨基酸饥饿组相比，氨基酸刺激组细胞p-S6的蛋白表达上调（P<0.05），而转染Numb-siRNA的细胞中Numb及p-S6的蛋白表达较对照组均下调（P<0.05）；在Numb表达水平下调的NRK-52E细胞、小鼠肾脏及小鼠原代近端肾小管上皮细胞中，p-AMPK的蛋白表达均下调（P<0.05）；在Numb表达水平下调的NRK-52E细胞中，V1G1的蛋白表达下调（P<0.05），上调NRK-52E细胞中V1G1的蛋白表达，可以逆转Numb沉默介导的p-S6的降低（P<0.05）。结论 Numb可通过上调V1G1的蛋白表达促进近端肾小管上皮细胞mTORC1信号通路的活化。

• 过敏史减弱呼出气一氧化氮对慢性咳嗽患者痰嗜酸性粒细胞的预测作用

  叶艳梅, 胡大鹏, 黄淑榆, 赵文驱, 梁健鹏, 黄俊文, 韩惠珊, 杨淑銮, 蔡绍曦, 赵海金

  目的 探讨过敏史对呼出气一氧化氮预测慢性咳嗽患者痰嗜酸粒细胞价值的影响。方法 收集南方医科大学南方医院呼吸科门诊2016年11月~2021年10月超过3周主诉为咳嗽的病人共868例，包括亚急性咳嗽119例，慢性咳嗽749例，排除肺部感染，3~8周之间的咳嗽定义为亚急性咳嗽，超过8周定义为慢性咳嗽。应用受试者工作特性曲线（ROC）分析呼出气一氧化氮（FENO）的预测值，应用曲线下面积评价FENO的预测准确性。采用患者就诊记录中所记载的过敏史、花粉过敏、动物（皮毛）过敏史或食物过敏史来确定患者的过敏状态。结果 共纳入868名患者，其中173名患者（19.9%）患有嗜酸性气道炎症。所有患者的中位FENO水平为18[12, 35]ppb，范围为5~300 ppb。慢性咳嗽伴过敏史患者的中位FENO水平高于无过敏史患者（Z=2.25，P= 0.029）。FENO水平与诱导痰嗜酸粒细胞显著相关（r=0.281，P<0.001）。FENO诊断有过敏史患者和无过敏史患者嗜酸性气道炎症的 AUC 分别为 0.677（95% CI，0.548~0.806）和 0.708（95% CI，0.660~0.756）。有过敏史患者预测嗜酸性气道炎症的FENO临界值明显高于无过敏史患者（72 ppb vs 28.5 ppb）。结论 过敏史可减弱FENO对慢性咳嗽患者痰中嗜酸性气道炎症的预测作用，值得临床重视。

• miR-16-5p通过靶向YWHAQ调控乳腺癌耐药细胞的凋亡与迁移能力

  朱海涛, 毛慧兰 , 陶 爽, 王文锐, 陈昌杰, 杨清玲

  目的 探究miR-16-5p对乳腺癌紫杉醇耐药细胞生物学活性的影响及分子机制。方法 以人乳腺癌亲本细胞（SKBR-3）与乳腺癌紫杉醇耐药细胞（SKBR-3/PR）为研究对象。实验设空白对照组、阴性对照组、miR-16-5p类似物组（miR-16-5p mimics）、miR-16-5p抑制剂组（miR-16-5p inhibitor），YWHAQ干扰组（si-YWHAQ），以及联合组（miR-16-5p mimics+si-YWHAQ）。利用qRT-PCR检测乳腺癌组织与癌旁组织、SKBR-3与SKBR-3/PR间miR-16-5p的表达水平。使用生信数据对miR-16-5p的靶基因做预测，双荧光素酶实验验证靶向结合。免疫印迹检测细胞YWHAQ、Bcl-2和Bax表达。CCK-8和Transwell检测细胞增殖迁移能力。流式细胞术检测耐药细胞周期凋亡改变。结果 qRT-PCR显示乳腺癌组织中miR-16-5p水平低于癌旁组织（-1.19±1.90 vs 1.59±1.76，P<0.01）。生物信息预测YWHAQ是miR-16-5p的靶基因，荧光素酶实验证实miR-16-5p能够靶向调节YWHAQ（P<0.01）。相对于 SKBR-3 细胞，SKBR-3/PR 细胞中 miR-16-5p 表达水平降低（P<0.01），YWHAQ 表达水平增高（P<0.05）。Western blot 结果显示 miR-16-5p 类似物能够抑制 YWHAQ 表达，miR-16-5p 抑制剂能够促进 YWHAQ 表达（P<0.01）。相对于对照组，miR-16-5p类似物能够将耐药细胞阻滞在G0/G1期（[ 55.61±1.99）% vs（43.06±1.53）%，P<0.01]，抑制细胞增殖和迁移能力（P<0.01），促进细胞凋亡 （[ 10.37±0.23）% vs（3.81±0.88）%，P<0.01]，YWHAQ干扰组细胞迁移能力下降，凋亡率升高，miR-16-5p类似物组与YWHAQ干扰组细胞的Bax蛋白表达增加，YWHAQ与Bcl-2蛋白水平降低。相对于miR-16-5p 类似物组，联合组细胞迁移能力被抑制（75.75±29.85 vs 181.11±11.71，P<0.01），凋亡率显著升高（[ 24.20±2.43）% vs （14.10±4.47）%，P<0.01]。结论 miR-16-5p能够通过靶向调节YWHAQ调控Bcl-2/Bax的表达，从而改变乳腺癌紫杉醇耐药细胞的生物学活性。

• 微囊藻毒素-LR长期低剂量暴露诱导小鼠肾脏结构和功能损伤：基于激活PI3K/AKT信号通路

  梁小芳, 杨 越, 徐帅帅, 刘 映, 褚晗玉, 唐 艳, 杨 飞

  目的 探讨微囊藻毒素-LR（MC-LR）长期低剂量暴露对肾脏的毒性作用及其潜在的分子机制。方法 构建MC-LR慢性染毒体内模型，将20只C57BL/6小鼠随机分成4组，分别给予含0、1、60、120 μg/L MC-LR的饮用水染毒12月。构建MC-LR染毒体外模型，将HEK293细胞分为对照组，MC-LR染毒组，PI3K抑制剂LY294002组，LY294002+MC-LR组。在体内模型中监测小鼠体质量和肾脏质量，观察小鼠肾脏组织损伤。在体内外模型中检测小鼠肾脏和HEK293细胞的肾功能指标，炎症因子IL-6、TNF-α和IL-10的mRNA表达水平以及PI3K/AKT通路蛋白的相对表达水平。结果 体内模型中：各组小鼠体质量变化的总体趋势一致，肾脏绝对质量和肾脏指数也无明显改变。与对照组相比，60和120 μg/L染毒组小鼠出现肾结构损伤，BUN和SCr水平显著上升，且差异有统计学意义（P<0.05）。促炎因子IL-6和TNF-α水平在60和120 μg/L染毒组中上调，抗炎因子IL-10在所有染毒组中下降，且差异有统计学意义（P<0.05）。p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT的蛋白相对表达量均在60和120 μg/L染毒组上升，且差异有统计学意义（P<0.05）。体外模型中：在HEK293细胞中，BUN和Cr水平在MC-LR组呈升高趋势而在MC-LR+LY294002组中显著下降，且差异有统计学意义（P<0.05）。促炎因子IL-6和TNF-α 的mRNA表达水平在MC-LR组呈升高趋势而在MC-LR+LY294002组中显著下降，抗炎因子IL-10的mRNA表达水平在MC-LR组呈下降趋势而在MC-LR+LY294002组中显著升高，且差异均具有统计学意义（P<0.05）。p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT的表达水平也同样在MC-LR组上调而在MC-LR+LY294002组中显著下调，且差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 MC-LR可通过调控PI3K/AKT信号通路，激活炎症反应，诱导小鼠肾脏结构和功能损伤。

• P2X7受体通过激活AKT信号通路促进小鼠Lewis肺癌细胞的迁移和侵袭

  唐怡青, 赵荣兰, 乔翠翠, 李新雨, 白 雪, 彭效祥

  目的 探究P2X7受体（P2X7R）对小鼠Lewis肺癌（LLC）细胞迁移和侵袭能力的影响及其作用机制，同时探究体内P2X7R对荷LLC小鼠成瘤能力的影响。方法 体外实验：RT-PCR检测LLC细胞P2X7R表达。将LLC细胞分别给予P2X7R激动剂三磷酸腺苷（ATP）、2'-3'-O- （4-苯甲酰-苯甲酰）ATP（BzATP）干预或预先给予P2X7R拮抗剂oxATP、A438079然后再给予激动剂干预，共分为7组。使用细胞划痕实验和Transwell实验检测LLC细胞的迁移和侵袭能力；Western blot检测蛋白激酶B（AKT）信号通路关键蛋白的活化水平。将LLC细胞给予BzATP、A438079、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/AKT信号通路抑制剂LY294002干预，共分为5组。利用Transwell实验检测LLC细胞的迁移和侵袭能力。体内实验：构建荷LLC细胞的皮下移植瘤的野生（WT）型和 P2X7R 基因敲除（P2X7-/-）型小鼠模型，比较两组肿瘤的体积及质量。结果 LLC 细胞中表达 P2X7R。划痕实验和Transwell实验结果显示：与对照组相比，激动剂组迁移和侵袭能力增强；与激动剂组相比，拮抗剂可以抑制激动剂促进LLC细胞的迁移及侵袭（P<0.001）。Western blot显示：BzATP 组 p-AKT 蛋白表达水平相比于对照组增加；与BzATP组相比，拮抗剂组p-AKT蛋白表达水平降低（P<0.01）。Transwell实验结果显示：与BzATP组相比，拮抗剂组均可抑制BzATP促进的LLC细胞的迁移及侵袭（P<0.001）。小鼠荷瘤显示：与WT小鼠相比，P2X7-/-小鼠瘤体体积和瘤体重量均降低（P<0.05）。结论 P2X7R通过激活AKT信号通路促进LLC细胞的迁移及侵袭，P2X7-/-小鼠降低LLC细胞的体内成瘤能力。

• 文冠果花提取物对良性前列腺增生具有抑制作用

  王文晴, 马 飞, 王帆均, 杨志远, 范 珊, 窦桂芳, 甘 慧, 冯素香, 孟志云

  目的 探究文冠果花提取物对良性前列腺增生的抑制作用及可能的机制。方法 通过MTT法检测文冠果花提取物对良性前列腺增生细胞（BPH-1）增殖能力的影响、Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡、流式细胞仪测定细胞周期、免疫印迹法检测BPH-1细胞Bcl-2/Bax/Caspase3、PI3K/AKT蛋白表达水平。通过皮下注射丙酸睾酮建立大鼠良性前列腺增生（BPH）模型，文冠果花提取物给药28 d后取大鼠前列腺组织，通过HE染色观察组织病理变化，免疫印迹法检测前列腺组织中Bcl-2/Bax/Caspase3、PI3K/AKT的蛋白表达水平。结果 文冠果花提取物在125~1000 μg/mL的浓度范围内抑制BPH-1细胞的增殖（P<0.05）；在G0/G1期产生周期阻滞，细胞的凋亡率与文冠果花提取物给药浓度正相关；文冠果花提取物处理后的细胞Bcl-2蛋白表达水平明显下调，Bax和Caspase3蛋白表达水平显著提升，PI3K/AKT蛋白磷酸化水平显著下调（P<0.05）；在动物实验中，与模型组相比，文冠果花提取物中剂量组和高剂量组p-AKT、Bcl-2表达水平降低，Bax表达水平升高，低剂量组p-AKT表达水平下降（P<0.05）。结论 通过BPH-1细胞和BPH动物模型，验证了文冠果花提取物对良性前列腺增生具有抑制作用。

• 羟尼酮可阻止大鼠肝星状细胞活化： 基于抑制TGF-β1通路蛋白的磷酸化

  赵治彬, 董 辉, 李兵航, 沈 波, 郭悦承, 顾天翊, 曲 颖, 蔡晓波, 陆伦根

  目的 探讨羟尼酮对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的作用及相关机制。方法 66只雄性SD大鼠按随机数字法分为对照组10只、模型组20只、羟尼酮（100 mg/kg）组12只、羟尼酮（250 mg/kg）组12只、吡非尼酮（250 mg/kg）组12只，采用CCl4皮下注射进行肝纤维化造模，羟尼酮、吡非尼酮予以灌胃给药，处死大鼠后，留取血清检测肝功能，利用肝脏组织检测羟脯氨酸的含量，肝组织进行HE染色和Sirius Red染色，对炎症和纤维化程度进行评分。将人肝星状细胞系LX-2分组：对照组、TGF-β1组、羟尼酮组、吡非尼酮组，经过TGF-β1刺激和羟尼酮、吡非尼酮处理后，Western blot分别检测α-SMA、I型胶原蛋白和磷酸化Smad3、磷酸化p38、磷酸化Erk1/2、磷酸化Akt等磷酸化蛋白。 结果 动物实验显示羟尼酮组大鼠肝功能值有改善，肝组织羟脯氨酸含量明显减少，肝组织纤维化程度显著降低，且均具有统计学意义（P<0.05）。细胞实验发现随羟尼酮浓度的增高，ɑ-SMA和I型collagen蛋白表达水平降低；TGF-β1刺激细胞后，TGF-β信号转导通路中Smad3、P38、ERK、Akt等蛋白的磷酸化水平随着作用时间的延长而增加，但在相同作用时间下，羟尼酮组细胞TGF-β信号转导通路蛋白磷酸化的表达水平低于TGF-β1组细胞（P<0.05）。结论 羟尼酮可抑制TGF-β信号转导通路蛋白的磷酸化，从而阻止TGF-β1介导的肝星状细胞活化，可能是其缓解CCl4诱导的大鼠肝纤维化机制之一。

• miR-4324与Talin2在乳腺癌中高表达

  高 鹏, 朱海涛, 裴文浩, 许培海, 丁勇兴

  目的 探讨miR-4324对踝蛋白2（Talin2）调控和乳腺癌细胞的影响及临床意义。方法 利用免疫组化法检验Talin2在乳腺癌组织（BCT）和对应癌旁乳腺组织（PCBT）的表达，结合病理资料分析Talin2与乳腺癌预后及病理特征间的关联；qRT-PCR法测定miR-4324在BCT和PCBT的表达；人乳腺癌细胞株（SKBR-3）体外培养，分为Control对照组（正常培养)及相关转染组（转染相关片段）：miR-4324 mimics组；miR-4324 inhibitor组；miR-4324 NC组；si-Talin2组；miR-4324 inhibitor+si-Talin2组。通过细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭实验，检测SKBR-3的生物学活性改变；通过qRT-PCR及Western-blot实验测定Talin2的表达；利用荧光素酶活性实验验证miR-4324对Talin2靶向表达；利用Transwell回复实验验证miR-4324调控Talin2影响SKBR-3细胞的迁移能力。结果 Talin2在BCT中的表达高于PCBT，并与淋巴结转移、HER-2的高表达有关（P0.05）；miR-4324在BCT中表达较PCBT降低（P<0.01）；与Control组比较，miR-4324 mimics组SKBR-3细胞增殖降低，凋亡增多（P<0.01），迁移和侵袭能力降低（P<0.05）；双荧光素酶报告基因检测证实，相对于Control组，miR-4324 mimics共转染可显著降低Talin2-3'-UTR WT报告质粒的荧光素酶活性（P<0.05）；miR-4324 mimics组中Talin2的Mrna和蛋白表达较Control组降低（P<0.05）；Transwell迁移实验结果显示，相对于Control组，SKBR-3细胞的迁移能力在miR-4324 inhibitor组中上升（P<0.01）；si-Talin2组中下降（P<0.01）；miR-4324 inhibitor+si-Talin2组中居中（P<0.05）。结论 Talin2高表达与乳腺癌患者淋巴结转移及HER-2过表达相关，下调miR-4324能抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭与迁移，并诱导凋亡，其中抑制迁移可能是其靶向抑制Talin2表达实现的。

• 胸椎旁阻滞可改善肺癌切除术患者的预后

  麦冬梅, 饶 艳, 陈东泰, 李 强, 何 雯, 曾维安, 邢 蔚

  目的 探索胸椎旁阻滞（TPVB）对肺癌切除术患者预后的影响。方法 选取本中心2017年1月~2018年5月接受单纯全身麻醉（GA）或全身麻醉联合TPVB（TPVB+GA）下肺癌切除术的初治肺癌患者，并通过对基线特征行倾向性评分匹配，最终以1∶2分别纳入47例TPVB+GA行肺癌切除术的患者和94例GA行肺癌切除术的患者进行回顾性分析，比较胸椎旁阻滞对肺癌切除术患者5年总生存时间（OS）、无复发生存时间（PFS）、术中阿片类药物用量等的影响。结果 生存分析显示TPVB+GA组患者PFS较GA组显著延长（log-rank P=0.034），其中TPVB+GA组优势比OR 0.45（95%CI，0.33~0.89）；进一步对各临床参数作单因素与多因素Cox回归分析，再次验证了上述结果，TPVB 是肺癌手术患者的独立预后因素（P=0.002，OR=0.33，95%CI，0.16~0.66）。Cox回归生存分析还发现术中瑞芬太尼使用剂量较低与肺癌患者预后较好有显著相关（P=0.017，OR=0.47，95%CI，0.25~0.87），卡方检验则表明TPVB明显降低术中瑞芬太尼剂量。结论 胸椎旁阻滞可延长肺癌切除术患者无复发生存时间，改善预后。

• 利用导管损伤制备钙化性主动脉瓣疾病小鼠模型的最优时间选择

  曾婧欣, 苏舒文, 冼高鹏, 曾庆春, 许顶立

  目的 探讨利用导管损伤制备钙化性主动脉瓣疾病小鼠模型的最优时间。方法 通过向8周龄小鼠右颈总动脉插入导管，在超声引导下将导管送至主动脉瓣口处损伤主动脉瓣膜，对导管损伤主动脉瓣膜后不同时间段的C57BL6小鼠主动脉瓣膜进行比较，将小鼠分为对照组、造模后4周、造模后8周与造模后16周组，从适应性喂养至造模结束取材均给予普通饲料饮食。使用超声检测小鼠心脏短轴缩短率、主动脉瓣膜峰值流速及主动脉瓣口面积，使用苏木素-伊红染色观察小鼠主动脉瓣膜厚度变化及瓣膜组织结构变化，利用茜素红染色检测小鼠主动脉瓣膜钙盐沉积情况，使用免疫荧光方法检测瓣膜成骨相关蛋白碱性磷酸酶表达。结果 小鼠从造模8周后开始出现心脏短轴缩短率明显下降。导管损伤4周、8周、16周后小鼠主动脉瓣膜明显增厚（P=0.002），4周、8周和16周比较无统计学差异；导管损伤4周、8周、16周后钙盐沉积明显增多（P<0.0001），4周、8周和16周比较无统计学差异；4周、8周、16周后成骨相关蛋白ALP指标表达量明显升高（P=0.0016）。导管损伤4周、8周和16周ALP表达量相比无统计学差异。结论 在保证小鼠生存率的情况下，导管损伤主动脉瓣膜4周后的小鼠模型即可模拟钙化性主动脉瓣膜疾病病理生理改变。

• 肝癌晚期患者转化治疗前后心理痛苦及生活质量的调查

  潘立茹, 张雯雯, 胡丙洋, 李俊锋, 冯 宇, 邓 芬, 杨 莉, 周 静, 马微微, 姜翠翠, 徐 艳, 卢实春

  目的 观察并分析晚期肝癌患者在转化治疗前后心理痛苦及生活质量变化情况，以期为临床开展心理干预等提供参考，同时为序贯外科手术治疗做好前期准备。方法 选取2019年7月~2022年3月的60例进行转化治疗的患者，治疗前及治疗2~10个周期后，采用心理痛苦温度计及其问题列表测定心理痛苦程度变化，采用肝胆肿瘤治疗功能评定量表测定患者生活质量。结果 转化治疗后，患者心理痛苦的分值与转化治疗前比较明显降低（P<0.01）；转化治疗后心理痛苦情绪因素紧张、担忧、睡眠问题、记忆力下降和注意力不集中，身体因素疼痛、疲乏、进食问题、消化不良比例明显下降，差异有统计学意义（P<0.05）；转化治疗后，生活质量总分及其中的身体状况、社交/家庭状况、情感状况、功能状况及肝胆特异板块评分较治疗前明显下降（P<0.05）。结论 晚期肝癌患者心理痛苦因素主要集中于情绪因素和身体因素，转化治疗可以明显降低患者心理痛苦程度和提高患者生活质量。

• CCBE1在舌鳞癌癌旁组织中的表达与癌周淋巴管增生及患者预后的相关性

  钟江龙, 王洁琪, 叶秀华, 范 松, 王友元, 陈伟良

  目的 探究CCBE1在舌鳞癌癌旁组织中的表达与癌周淋巴管增生、颈淋巴结转移及患者预后间是否存在相关性。方法 对44例cT1-2N0舌鳞癌癌旁组织病理切片标本进行淋巴管密度定量分析，采用D2-40作为淋巴管内皮标记物标定淋巴管并进行计数。将淋巴管密度低的22例纳入A组，淋巴管密度相对高的22例纳入B组。同时对两组标本中胶质和钙结合表皮生长因子域 1（CCBE1）的表达情况通过免疫组化、免疫荧光和Western blot进行测定。免疫组化检测90例舌鳞状细胞癌病理标本中CCBE1的表达情况，并完善相关随访资料，进行统计分析。结果 免疫组化及Western blot结果显示A组中CCBE1的高表达率明显低于B组，差异有统计学意义（P<0.05）。免疫荧光实验显示CCBE1与D2-40存在“共定位”现象。90例舌鳞癌患者中发生颈淋巴结转移者CCBE1的高表达率较之无淋巴结转移者明显更高（P<0.05），死亡组CCBE1的高表达率也明显高于存活组（P<0.05）。结论 CCBE1在舌鳞癌组织中的表达量与癌周淋巴管增生、颈淋巴结转移及患者的5年生存率有关，可作为判断舌鳞癌患者预后的独立预测因子。

• MC1R在食管鳞癌细胞和组织中高表达

  周笑世, 常 江, 彭立雄, 柳溪林, 尉发正, 徐健峰, 章沙沙, 胡 盼, 柳增善, 张国军

  目的 通过分析MC1R在食管鳞癌细胞和组织中的表达水平及其与相关临床病理参数的相关性，探讨MC1R在食管鳞癌中的临床意义。方法 通过生物信息学分析MC1R在食管癌中的表达情况；以RT-PCR和Western blotting方法比较分析人食管上皮细胞BAr-T、人食管鳞癌细胞ECA109、KYSE30、KYSE150、KYSE510、TE-1、TE-13、EC9706、人胃癌细胞SGC7901及19对食管鳞癌组织和对应癌旁组织中 MC1R的表达水平；以IHC方法比较分析32对食管鳞癌组织切片和对应癌旁组织切片中MC1R的表达水平；使用t检验进行组间MC1R表达量的差异比较，使用Fisher 's精确检验分析MC1R表达水平与临床病理特征之间的关系。结果 生物信息学分析显示MC1R在食管癌组织中显著高表达（P<0.05）；食管鳞癌细胞ECA109、KYSE30、KYSE510、TE-13、EC9706和胃癌细胞系SGC7901中MC1R表达量高于食管上皮细胞（P<0.05）；食管鳞癌组织切片中MC1R相对表达量显著高于癌旁组织（P<0.05）。MC1R高表达现象主要存在于老年、胸中段和中分化食管鳞癌患者中，其与肿瘤T分期有关（P0.05）。结论 MC1R在食管鳞癌细胞系和组织中表达量显著升高，可能作为食管鳞癌诊断的辅助分子标志物。

• NLRC4在具核梭杆菌诱导巨噬细胞焦亡中发挥调控作用

  江伟艺, 邓子龙, 赵望泓

  目的 探讨具核梭杆菌感染引起巨噬细胞焦亡的作用及机制。方法 巨噬细胞RAW264.7与具核梭杆菌共同培养，设置未感染组和具核梭杆菌感染组（以MOI和感染时间设置梯度）。乳酸脱氢酶和荧光双染检测细胞坏死率；Western blot检测焦亡相关蛋白caspase-1、GSDMD和IL-1β的活化情况；qRT-PCR分析NLRP3、NLRC4、AIM2、NLRP1炎症小体激活情况，采用siRNA敲低可能参与调控的关键分子，分为siRNA敲低组与阴性对照组，比较两组细胞在具核梭杆菌感染时的焦亡和坏死率，验证其调控作用。结果 具核梭杆菌感染组的细胞肿胀破碎、胞内出现空泡，乳酸脱氢酶释放增加，PI阳性细胞数增多，坏死率升高（P<0.05）；Western blot结果显示caspase-1、GSDMD和IL-1β被活化且呈MOI和时间依赖性升高（P<0.05）；qRT-PCR筛选出NLRC4可能参与调控，siRNA敲低NLRC4可抑制具核梭杆菌引起的caspase-1/GSDMD通路的激活，减少细胞坏死率和炎症因子IL-1β的表达（P<0.05）。结论 具核梭杆菌感染能够诱导巨噬细胞RAW264.7经caspase-1/GSDMD信号通路发生焦亡并释放炎症因子，且NLRC4炎症小体发挥关键的调控作用。

• 12导联穿戴心电设备在院前诊断急性ST段抬高型心肌梗死中的应用

  沈 娟, 陈 韬, 赖杰伟, 阳 维, 修建成, 韩宝石, 石亚君, 陈韵岱, 郭 军

  目的 探索12导联穿戴心电设备在院前诊断急性ST段抬高型心肌梗死（STEMI）的应用价值。方法 选取2019年1月~2021年8月“全国心电一张网”中使用12导联穿戴心电设备危急值预警ST改变的441例患者心电图，回顾性分析STEMI病例的基本特点、响应时间及被检者主诉；分析院前穿戴心电图人工判读的STEMI病例、穿戴设备AI智能诊断的STEMI病例的诊断准确性。结果 院前穿戴心电图医生判读为STEMI的患者共89例，其中58例线上预警后去医院就诊，转诊率为65.17%。心电图诊断评估平均用时为153.02 s，心电图诊断审核平均用时为178.06 s。院前穿戴心电图人工判读STEMI、院前穿戴心电设备AI诊断STEMI的敏感度分别为100%、88.37%，特异度分别为95.40%、79.31%。院前穿戴心电图人工判读STEMI、穿戴心电设备AI智能诊断STEMI与临床确诊STEMI具有较高的一致性。结论 12导联穿戴心电设备能够在医院外场景准确记录STEMI患者的心电图，并实现短时间内上传且快速获得诊断。院前穿戴心电图无论是人工判读还是AI诊断STEMI的准确性率均较高。

• MAL蛋白调控肺动脉平滑肌细胞增殖与凋亡对肺动脉高压的作用和机制

  刘进军, 李晴晴, 曾超超, 王月祥, 胡擎天, 王洪巨, 吴士礼

  目的 探讨髓磷脂和淋巴细胞蛋白（MAL）在肺动脉高压（PAH）中的作用和机制。方法 收集PAH患者（PAH组）及同期健康体检者（HC组）各50例，采用ELISA检测各组血浆中MAL蛋白的表达水平；根据超声心动图将PAH患者分为中重度组（n=18）和轻度组（n=32），分析MAL蛋白水平与肺动脉高压疾病程度的关系；采用缺氧诱导的肺动脉平滑肌细胞（PAMSCs）异常增殖的PAH体外模型，体外敲除和过表达mal基因，观察MAL对PAMSCs生长状态、细胞增殖能力、抗饥饿诱导的凋亡能力等的影响；另采用NK-κB信号通路抑制剂，探讨MAL调控PAMSCs增殖和凋亡的可能分子机制。结果 PAH患者血浆中MAL的水平显著高于HC组（P<0.05），且中重度组患者显著高于轻度组患者（P<0.001）；体外研究中，缺氧组PASMCs中MAL的mRNA及蛋白表达水平显著高于常氧组（P<0.05）；抑制MAL可显著抑制缺氧诱导的PAMSCs增殖能力，促进饥饿诱导的PAMSCs凋亡（P<0.05）；机制研究证实，下调mal可抑制NK-κB通路激活参与调控PAMSCs增殖（P<0.05）。结论 PAH患者血浆中高水平MAL与疾病程度正相关，抑制MAL通过靶向NF-κB通路抑制PAMSCs异常增殖并促进其凋亡参与改善PAH血管重塑过程。

• 微波消融术前甲状腺良性结节的风险分级有临床价值

  吴凤林, 吴巧至, 吴方竞, 周 琳, 许文伟, 谢国勇, 刘乐融, 刘 颖, 薛耀明

  目的 探讨甲状腺良性结节微波消融术前的风险分级方法及临床意义。方法 根据甲状腺结节的毗邻关系，术前将结节消融风险分为低风险、中风险、高风险和极高风险4级。记录术后严重并发症发生率及结节残留发生率。结果 527例甲状腺结节患者微波消融术后低、中、高和极高风险组的严重并发症的发生率为0%、0.88%、2.41%和6.78%，各组差异均无统计学意义（P>0.05）。术后低、中、高和极高风险组的结节残留发生率分别为1.59%、6.14%、14.43%和71.19%，其中低风险与中风险组差异无统计学意义（P>0.05）；但低风险、中风险组与高风险、极高风险组差异有统计学意义（P<0.001）。结论 甲状腺结节术前风险分级有助于术中严重并发症的预防及术后结节残留发生率的预估。

• 小剂量艾司氯胺酮在小儿外科全麻术中的应用

  陈启忠, 廖艺聪, 李志勤

  目的 探讨术中持续小剂量输注艾司氯胺酮对小儿全麻术术中阿片类药物使用量和患者苏醒质量的影响。方法 选取100例全身麻醉下小儿外科手术患者，按照随机数表法分为A组（观察组）、B组（对照组），50例/组；A组于全身麻醉诱导前10 min静脉注射0.1 mg/kg艾司氯胺酮，后静脉泵注艾司氯胺酮 2 μg/ （kg·min）至术毕；B组同时泵注等容量生理盐水。记录术中瑞芬太尼使用量；记录所有患者自主呼吸恢复时间、苏醒时间和拔管时间；记录患者拔管后15、30、60 min时VAS评分，若VAS评分≥4分，静脉注射纳布啡0.3 mg/kg，可重复使用，并记录纳布啡总用量；记录所有患者不良事件发生情况。结果 A组术中使用瑞芬太尼量总量低于B组（P<0.05）；两组患者自主呼吸恢复时间、苏醒时间和拔管时间无统计学意义；A组患者拔管后15、30、60 min时VAS评分优于B组（P<0.05），且A组使用纳布啡总剂量低于B组（P<0.05）。结论 在小儿外科手术术中持续输注小剂量艾司氯胺酮，可有效降低术中阿片类药物使用量，降低苏醒期疼痛程度，且不影响患者苏醒质量。