南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2021年第3期

• 乙型肝炎肝硬化合并糖尿病时发生肝细胞癌的风险：一项随访5年的前瞻性队列研究

  唐淬蓉, 胡承光, 周宇辰, 宋杨达, 李 孟, 廖敏君, 孙家润, 钟春秀, 周 琳, 林志昭, 周元平

  目的 阐明乙型肝炎肝硬化（CHB-Cir）合并2型糖尿病（T2DM）时发生肝细胞癌（HCC）的风险及其协同因素。方法 以2010年6月~2019年6月在南方医院肝病中心随访的CHB-Cir患者为研究对象，依性别、年龄、HBeAg状态、HBV DNA水平基本匹配后，构成CHB-Cir合并T2DM队列（观察组）和CHB-Cir无T2DM队列（对照组），半年随访1次。取已完成2年或以上随访且数据完整的病例纳入统计分析。采用Kaplan-Meier法比较两组HCC累积发生率；以Cox比例风险回归模型分析CHB-Cir合并T2DM时发生HCC的风险及其协同因素。结果 纳入分析的467例研究对象平均随访时间为4.4±1.62年。观察组（n=203）和对照组（n=264）新发HCC病例分别为69例和48例，观察组HCC发病密度明显高于对照组（P<0.001）。观察组HCC累积发生率明显高于对照组（P<0.001），相对危险度为2.096（P<0.01）。调整年龄（≥40岁）、肝癌家族史、既往抗病毒治疗、胆固醇升高、低密度脂蛋白胆固醇升高等因素后，T2DM仍是CHB-Cir患者发生HCC的独立危险因素（P=0.000）。结论 T2DM是HCC的独立危险因素；CHB-Cir患者合并T2DM时HCC的发生风险增加2倍左右，提示及早控制糖尿病对降低CHB-Cir患者发生HCC的风险具有重要临床意义。

• 滋阴方治疗排卵障碍性不孕症的机制及价值：基于网络药理学方法

  罗倩倩, 谈 勇, 胡荣魁, 夏 云, 夏桂成

  目的 基于网络药理学分析滋阴方治疗排卵障碍性不孕症的作用机制并设计临床对照试验观察滋阴方对该病的治疗疗效。方法 利用TCMSP、PubChem、Genecards、STRING、Swiss Target Prediction、UniProt等数据库，获得滋阴方所有作用靶点和排卵障碍性不孕症相关的靶点。构建靶点蛋白质相互作用网络，进行GO生物学过程与KEGG通路富集分析，使用Cytoscape3.6.0构建滋阴方治疗排卵障碍性不孕症的“中药-有效成分-靶点-通路”网络。同时设计临床对照试验，试验组及对照组均以克罗米芬联合人绝经期促性腺激素进行促排卵治疗，试验组在此基础上添加滋阴方，通过观察两组HMG用量、卵泡发育天数、扳机日单个优势卵泡雌二醇水平（E2）水平、周期排卵率、未破裂卵泡黄素化综合征发生率、周期妊娠率等指标，验证滋阴方的临床有效性。结果 滋阴方共有22个活性成分，354个作用靶点，排卵障碍性不孕症靶点791个，取交集获得滋阴方治疗排卵障碍性不孕症作用靶点 96 个。根据 Degree 找出关键靶点为 SRC、MAPK1、HSP90AA1、MAPK3、PTPN11、ESR1、AKT1、EGFR、NR3C1、KNG1。GO生物学过程富集分析显示，滋阴方治疗排卵障碍性不孕症主要集中在类固醇激素介导的信号通路、氧化、还原、凋亡等过程。KEGG通路富集分析表明富集最显著的信号通路PI3K-Akt信号通路、Rap1信号通路、HIF-1信号通路、雌激素信号通路、卵巢类固醇生成、类固醇激素生物合成。临床试验显示滋阴方能减少人绝经期促性腺激素用量，缩短卵泡发育天数，提高扳机日单个优势卵泡E2水平、周期排卵率及妊娠率。结论 滋阴方中多种有效活性成分可以通过不同的途径发挥其促进卵泡发育的作用，从而提高排卵障碍不孕症患者排卵率及临床妊娠率，具有良好的临床应用前景。

• m6A修饰调控的LDB2抑制肺腺癌细胞增殖

  翟东凤, 王 鸽, 李 蕾, 贾小婷, 郑国沛, 尹 江

  目的 研究LIM域结合蛋白2（LDB2）在肺腺癌中的表达模式及作用。方法 从mRNA和蛋白表达数据库中分析在肺腺癌中表达下调基因的交集。通过qRT-PCR、Western blot和免疫组化的方法验证LDB2在肺腺癌中的表达模式。在GEO和TCGA数据库中分析LDB2与肺腺癌患者预后的相关性。在H1299细胞中过表达LDB2，通过细胞计数实验、软琼脂克隆实验及流式细胞术证明LDB2在肺腺癌中的作用。生信预测结合后期MeRIP-qPCR实验证实LDB2转录本上存在m6A结合位点。通过qRT-PCR和Western blot实验检测YTHDC2对LDB2的转录调控。RIP实验验证YTHDC2能否与LDB2转录本结合。结果 通过分析TCGA、GEO及CPTAC 3个数据集中在肺腺癌中低表达的差异基因，最终聚焦于LDB2基因。免疫组化结果证实该基因在80例肺腺癌组织中的表达量也显著低于17例正常癌旁组织的表达量。与正常肺上皮细胞16HBE相比，LDB2在肺腺癌细胞中的表达量亦明显降低。生信分析提示高表达的LDB2与肺腺癌患者良好的预后正相关。在H1299细胞中过表达LDB2后，发现LDB2可诱导H1299细胞发生S期阻滞，从而抑制该细胞的增殖能力和软琼脂克隆形成能力。生信预测结合后期MeRIP-qPCR实验证实LDB2 转录本上存在m6A位点。GEPIA数据库提示YTHDC2在肺腺癌组织中低表达，且与LDB2在肺腺癌中表达正相关（r=0.22，P<0.0001）。在H1299细胞中过表达YTHDC2，可明显增加LDB2的表达。最后，在过表达YTHDC2的H1299细胞中开展RIP实验，定量结果显示LDB2在YTHDC2组的含量是其在IgG组含量的19.35倍，YTHDC2可结合在LDB2转录本上调控其表达。双荧光素酶报告基因实验证实YTHDC2可上调野生型而不是缺失型报告基因载体活性。结论 m6A编码器 YTHDC2在肺腺癌中上调LDB2的表达。过表达LDB2可明显诱导肺腺癌细胞发生S期阻滞，抑制肺腺癌细胞增殖能力。

• 雌二醇通过ERβ调控ERK磷酸化影响细胞增殖和凋亡

  张梦颖, 杨玉有, 刘 敏, 梁 利, 罗 瑞, 尹丹旸, 郭风劲

  目的 探究雌二醇（E2）结合其重组人雌激素受体β（ESR2）对C28I2细胞增殖和凋亡的效应。方法 PCR扩增ESR2序列并构建腺病毒重组质粒pAd-ESR2，在HEK293细胞中包装重组腺病毒Ad-ESR2。用Ad-ESR2和ESR2-siRNA处理人正常软骨细胞C28I2，分别设置对照组（C28I2+DMSO）、E2组（C28I2+E2）、Ad-ESR2组（C28I2+DMSO+ Ad-ESR2）、E2+Ad-GFP组（C28I2+ E2+Ad-GFP）、E2+Ad-ESR2组（C28I2+E2+Ad-ESR2）、E2+sicontrol组（C28I2转染sicontrol+E2）、E2+ESR2-si1组（C28I2转染ESR2-si1+E2）、E2+ESR2-si3组（C28I2转染ESR2-si3+E2）。免疫印迹测定ER Stress和细胞凋亡相关蛋白表达，qRT-PCR检测增殖相关标志基因的表达，借助EdU试剂盒和流式细胞术测定细胞增殖和凋亡情况。使用ERK通路抑制剂U0126分别设定E2 组、E2+U0126组（C28I2+E2+U0126）、E2+Ad-ESR2组、E2+Ad-ESR2+U0126组（C28I2+E2+Ad-ESR2+U0126）。通过免疫印迹实验探究C28I2细胞中E2通过ERβ调控ERK信号通路影响ER stress和凋亡。结果 成功构建过表达腺病毒Ad-ESR2和靶向ESR2的siRNA；过表达Ad-ESR2能够促进E2处理后IRE1α[1.20±0.06 vs 0.95±0.05，P<0.05]、PERK[1.29±0.04 vs 1.03±0.02，P< 0.05]和XBP1s[1.17±0.03 vs 0.82±0.02，P<0.05]的表达，促进凋亡Cleaved Caspase12（P<0.05）、抑制增殖相关标志基因PCNA（P<0.05）、CyclinB1（P<0.05）、CyclinD1（P<0.05）的表达，且ERK磷酸化激活降低（P<0.05）；转染ESR2-siRNA后，细胞的内质网应激相关蛋白和细胞凋亡相关蛋白的表达降低，与细胞增殖相关的基因被上调，且细胞内pERK/ERK比值相对增加。经特异性ERK通路抑制剂U0126处理后，雌二醇结合ERβ促进的内质网应激蛋白及细胞凋亡蛋白的表达被拮抗。结论 雌二醇靶向ERβ通过激活ERK通路磷酸化调控内质网应激及凋亡，进而抑制软骨细胞增殖。

• 穗花杉双黄酮激活PPAR-α/γ抑制THP-1源性巨噬细胞向M1型极化

  邱 峰, 张 琳, 郑介婷, 操龙斌, 张子康, 邓屹琪

  目的 探讨穗花杉双黄酮调节体外诱导的M1型巨噬细胞极化的相关机制。方法 设实验组、溶媒对照组和无药对照组，实验组：不同浓度的（5、10 μmol/L）穗花杉双黄酮干预用联合脂多糖及重组人干扰素-γ诱导的M1型巨噬细胞；溶媒对照组：溶媒3‰DMSO；无药对照组：不加穗花杉双黄酮处理。显微镜下观察细胞形态学；通过ELISA检测干预后细胞上清液L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β各自的表达水平；通过CCK-8法检测计算出穗花杉双黄酮对细胞的安全浓度；通过分子对接建模确定穗花杉双黄酮的靶蛋白，利用RT-qPCR、Western blot检测L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β、PPAR-α/γ、Arg-1、Fizz1基因和蛋白表达。结果 穗花杉双黄酮干预后可以阻止被诱导引起的THP-1细胞向M1极化；穗花杉双黄酮可下调M1极化时高表达的IL-6、TNF-α的mRNA，上调M2型主要标志细胞因子IL-8和TGF-β的mRNA表达（P&lt;0.05），同时上调M1极化状态下的细胞内Arg1和Fizz1蛋白的表达（P&lt;0.05）。随着穗花杉双黄酮浓度的增加和作用时间的延长，其抑制细胞的增殖效果增强（P&lt;0.05），且高浓度具有杀伤作用。穗花杉双黄酮可与PPAR-α/γ关键靶点蛋白活性位点非共价结合并激活该蛋白。结论 穗花杉双黄酮可通激活PPAR-α/γ，恢复Arg-1、Fizz1基因表达，抑制巨噬细胞向M1型分化。

• 表皮生长因子受体抑制剂相关皮疹动物模型的构建

  张 旭, 薛崇祥, 李 嘉, 张静怡, 谭可欣, 姜雪娇, 郑舒月, 董慧静, 俞仪萱, 胡紫馨, 崔慧娟

  目的 复制表皮生长因子受体抑制剂相关皮疹动物模型并进行进一步优化和探索。方法 应用西妥昔单抗注射液，按照20、40、80 mg/kg对雌性SCID小鼠进行腹腔注射，给药频次为每周一、三、五，共干预28 d。实验过程中持续关注小鼠皮肤形态学变化，在实验结束后对小鼠皮肤进行切片，观察HE染色表现。应用吉非替尼、厄洛替尼、卵清蛋白分别按照按照37.5 mg/kg、23.5 mg/kg、1 mg/只进行灌胃口服，1次/d，共给药45 d。实验过程中持续观察大鼠皮肤形态学变化，实验结束后对大鼠皮肤进行切片，观察HE染色表现。并应用ELISA法对大鼠血清中TNF-α、IL-6、IgE等因子进行测定。结果 西妥昔单抗腹腔注射后，SCID小鼠未出现典型的皮疹、结痂表现；皮肤病理未显示出明显的炎症表现。吉非替尼组大鼠皮肤可见明显的皮疹、结痂、渗出等表现，且皮肤HE染色可见大量的炎症细胞浸润、角化不全、棘层松解、表皮增厚等表现；空白组、卵清蛋白组、厄洛替尼组大鼠皮肤形态学观察及病理切片未见明显的炎症表现。在IgE、TNF-α浓度方面，各组间均未见明显差异（P=0.061，P=0.057）；而 在 IL-6 方面，吉非替尼组较空白组明显升高，差异具有统计学意义（P=0.016），而厄洛替尼组较空白组未见明显差异（P= 0.910）。结论 应用西妥昔单抗不能在SCID小鼠中建立表皮生长因子受体抑制剂相关皮疹模型。应用吉非替尼可以在BN大鼠中建立表皮生长因子受体抑制剂相关皮疹模型；应用厄洛替尼不能在BN大鼠中诱发皮疹。

• 2型糖尿病与肠道核心菌群的相关性

  肖 瑶, 牛 玥, 毛明慧, 林 涵, 汪佰丽, 乌恩奇, 赵焕虎, 李树春

  目的 分析2型糖尿病(T2D)患者和正常人群肠道菌群种类、丰度和结构差异，探讨肠道菌群变化与T2D的相关性。方法 收集133例临床粪便样本(健康样本78例，T2D病例样本55例)，应用Hiseq2500对16 s rRNA基因的V3+V4区进行高通量测序，下机数据用Usearch、QIIME进行数据的拼接过滤，分类并进行物种注释。利用R语言数据包进行样品Alpha多样性指数，样品Beta多样性指数分析，比较样本菌群丰富度和多样性。比较正常组与T2D组的菌群差异，并在矫正相关因素后筛选疾病标志菌群。采用PICRUST软件进行差异菌群功能预测。结果 两组菌群在多样性上存在显著差异。聚类分析表明厚壁菌门和拟杆菌门是门分类上的差异优势物种。LefSe分析表明，两组在2个门、3个纲、3个目、4个科、10个属的相对丰度存在显著差异。在校正相关因素影响后，筛选出T2D相关菌群标志物可能为Bifidobacterium、Bifidobacteriales、Bifidobacteriaceae、Actinobacteria、Bacilli、Lactobacillales、Lactobacillaceae、Lactobacillus。在此基础上，通过差异菌群进行KEGG代谢通路分析发现组间36条KEGG代谢通路存在显著差异，T2D组的柠檬酸循环、脂多糖生物合成等代谢途径均有上调。结论 T2D组和正常组肠道菌群在组成和丰度上都存在差异，T2D组明显显示出生态失调的特点。

• 艾塞那肽促进肥胖糖尿病大鼠胰腺组织的胆固醇流出

  赵 磊, 张晓宁, 冯聚玲, 肖忠盛, 刘 泳, 龙 泓, 陈向恒, 唐卫平

  目的 利用肥胖糖尿病大鼠模型研究艾塞那肽对胰腺组织ABCA1表达及胆固醇代谢的影响。方法 SD雄性大鼠48只，选取部分大鼠通过高脂饮食和STZ药物诱导建立肥胖合并2型糖尿病大鼠模型，所有大鼠分为4组：正常大鼠注射生理盐水组（A组，12只），正常大鼠注射艾塞那肽组（B组,12只），肥胖糖尿病大鼠注射生理盐水组（C组,9只），糖尿病模型大鼠艾塞那肽组（D组，9只），10周后通过real-time PCR、Western blot、油红“O”染色、组织胆固醇含量测定、HE染色等检测艾塞那肽对大鼠胰腺组织ABCA1表达、胆固醇代谢、胰岛功能的影响。结果 通过real-time PCR、Western blot等发现较之SD大鼠，肥胖糖尿病大鼠胰腺组织ABCA1表达降低，油红“O”染色显示胰腺组织出现明显脂质沉积，组织胆固醇含量测定发现胰腺组织胆固醇含量增加，HE染色显示胰岛体积显著缩小，结构紊乱（P<0.05）。艾塞那肽可上调肥胖糖尿病大鼠胰腺组织ABCA1表达，减轻胰腺组织脂质沉积，降低胰腺组织胆固醇含量，胰岛数目、体积增多，排列更为规则（P<0.05）。结论 糖脂毒性可导致大鼠胰腺组织ABCA1表达降低，胆固醇流出受阻，胰腺组织胆固醇蓄积。艾塞那肽可上调肥胖糖尿病大鼠胰腺组织ABCA1介导的胆固醇流出，明显降低胆固醇含量，改善胰岛功能。

• 鸟苷酸环化酶C在重症急性胰腺炎大鼠相关性肠损伤中的变化

  王 冰, 黄启林, 李 帅, 吴 俊, 原小惠, 孙红玉, 汤礼军

  目的 探讨鸟苷酸环化酶C（GC-C）在重症急性胰腺炎（SAP）相关性肠损伤中的变化规律及作用。方法（1）36只成年雄性SD大鼠用随机数字表法分为假手术组（n=18，SO组，开腹后仅翻动胰腺数次后关腹）和重症急性胰腺炎组[n=18，SAP组，开腹后经胰胆管逆行微量泵入5%牛磺胆酸钠（0.1 mL/100 g）制备SAP模型]。各组根据用药时间再次随机分为12 h组，24 h组和48 h 组（n=6）。于建模后12、24、48 h分批处死大鼠收集结肠组织进行免疫蛋白印迹、免疫组织化学和RT-PCR实验明确GC-C在SAP相关性肠损伤中的变化规律，选取GC-C表达最低的时间点作为肠损伤最严重的大概时间点，即作为干预时间点进行后续实验；（2）18只成年雄性SD大鼠用随机数字表法分为SO组（n=6，处理方法同前）、SAP组（n=6，处理方法同前）和Linaclotide组 [n=6，诱导SAP后立即用GC-C激动剂利那洛肽（Linaclotide）水溶液（10 μg/kg/d）灌胃1次]。根据第一部分实验结果，选取12h节点进行检测。以HE染色评估胰腺与结肠病理改变；ELISA法测定血清中淀粉酶（AMY）、二胺氧化酶（DAO）、D-乳酸（DLac）和TNF-α浓度；通过RT-PCR、免疫蛋白印迹法、免疫组织化学染色法和透射电镜检测结肠组织中GC-C和紧密连接蛋白Claudin-1的表达。结果 GC-C在SAP组大鼠结肠中表达显著降低，于SAP建模后12 h表达最低（P<0.05），但随着时间推移GC-C表达逐渐升高。而结肠中Claudin-1表现出相似的趋势。与SO组相比，SAP组和Linaclotide组结肠表现为不同程度的粘膜不连续、间质水肿及炎性细胞浸润，病理学评分均升高（P<0.05）；血清淀粉酶、二胺氧化酶、D-乳酸和TNF-α均显著升高（P< 0.05）；结肠中GC-C和Claudin-1表达下降。与SAP组相比，Linaclotide组结肠组织病理评分降低，血清中上述各因子水平降低，而结肠组织中GC-C和Claudin-1表达水平升高。结论 GC-C在SAP相关性肠损伤中呈现出先降低后升高的表达趋势，于诱导SAP后12 h表达最低；通过激活GC-C可以提高GC-C和Claudin-1的表达水平并缓解肠道损伤，表明GC-C或许通过调节紧密连接蛋白的表达来维持肠屏障功能的完整性。

• Angiotensin II通过氧化应激引起巨噬细胞AMPK/SIRT1能量信号紊乱

  肖 珊, 马郁文, 李 婧, 张彦红, 何 泓, 方春香, 王万铭

  目的 探讨Angiotensin II诱导巨噬细胞氧化应激反应与 AMPK/SIRT1通路活化关系的机制。方法 RAW264.7细胞正常培养后给予不同浓度的Angiotensin II（0、0.5、1、3、10、20 μmol/L）处理24 h后，Western blot 检测AMPK，p-AMPK和SIRT1的表达水平变化，和用 DCFH 探针检测 ROS 水平的变化，试剂盒检测细胞上清液中 SOD 活性和 MDA 表达量；同时采用基因编辑技术将 Angiotensin II的受体 AT1R成功沉默后给予Angiotensin II刺激，检测对AMPK，p-AMPK 和SIRT1蛋白水平的影响以及使用ROS 的抑制剂来观察细胞AMPK和SIRT1的变化情况。结果 20 μmol/L的Angiotensin II的刺激能显著抑制蛋白AMPK的磷酸化（P<0.05），抑制SIRT1 的表达；同时增加了细胞ROS的释放（P0.05），20 μmol/L 的 Angiotensin II 明显抑制SOD 活性（P<0.05），能显著增加 MDA 的产生。沉默了AT1R后，Angiotensin II不能抑制AMPK蛋白磷酸化以及对SIRT1的表达无明显下调作用；使用ROS 抑制剂后，Angiotensin II处理无法降低细胞磷酸化AMPK 和SIRT1的表达。结论 Angiotensin II通过诱导巨噬细胞发生氧化应激反应从而引起AMPK/SIRT1信号通路的紊乱。

• 基于Adaptive Elastic Net与加速失效时间模型的亚组识别方法的应用拓展

  韦红霞, 康 佩, 刘颖欣, 黄福强, 陈 征, 安胜利

  目的 针对适应性设计下的Adaptive Elastic Net与加速失效时间模型亚组识别方法进行更多适用条件下的研究，以获得该方法最佳应用效果所对应的参数。方法 基于前期所提出的亚组识别方法，进一步探讨协变量间相关性、二阶段显著性水准([α1]和[α2])、协变量与样本量比例对该方法的影响。通过模拟研究，探讨含/不含协变量主效应的惩罚模型在不同情形下的亚组识别效果。结果 协变量间的相关性r=0、0.3、0.5时，检验效能（power）表现稳定；在二阶段自适应设计中，当[α1]和[α2]分别为0.035和0.015时，模型的power最高；固定样本量n的情况下，power随着待选协变量个数与n比例的上升而下降，比例升到1之后power呈现平稳趋势；对于不同生存时间的参数分布，单变量模型表现出不同的模式，而惩罚AFT模型相对稳定。结论 协变量间的相关性不影响检验power；（0.035，0.015）可作为自适应设计显著性水准的参考设置；获益亚组与非获益亚组间的治疗效果差异较小时，含协变量主效应的惩罚性AFT模型（Penalized，Eq_in）优于不含协变量主效应的单变量AFT模型（Univariate，Eq_ex）；当协变量数量与样本量的比值小于1时，“Univariate，Eq_ex”的power更高；否则，“Penalized，Eq_in”的效果会更好；生存数据的参数分布对单变量模型的影响较大，但对惩罚模型的影响较小。

• 柴胡桂枝汤通过sirt1-p53信号通路产生抗抑郁作用

  葛鑫宇, 郭 芳, 范 俊, 陈宝田, 于 林, 任 静, 李纪强, 卢成林, 莫嘉文, 李树基, 袁乐欣, 胡号应, 刘 赟, 周 晓, 崔 娟, 朱志敏, 曹 雄

  目的 探讨柴胡桂枝汤的抗抑郁效应和作用机制。方法 设两组成年雄性C57BL/6J小鼠：柴胡桂枝汤组（CGD，n=12）接受连续7 d的柴胡桂枝汤灌胃给药，药物浓度为17 g·kg-1·d-1；溶剂对照组（Vehicle，n=14）接受连续7 d的药物溶剂灌胃给药。采用强迫游泳实验（FST）、高架十字迷宫实验（EPM）、新环境压抑进食实验（NSF）以及旷场实验（OFT），检测两组小鼠的抑郁样行为、焦虑样行为和运动能力。进一步使用慢性社会挫败应激模型（CSDS）和社会交互实验（SI）明确柴胡桂枝汤在动物抑郁模型中的抗抑郁作用；造模和对照小鼠连续接受柴胡桂枝汤或溶剂7 d灌胃处理，具体分组为：造模鼠+柴胡桂枝汤组（CSDS+CGD，17 g·kg-1·d-1，n=8）、造模鼠+溶剂组（CSDS+vehicle，n=11）、对照鼠+柴胡桂枝汤组（Con+CGD，17 g·kg-1·d-1，n=8）、对照鼠溶剂组（Con+vehicle，n=6）。此外，采用蛋白质免疫印迹（Western blot）、实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测柴胡桂枝汤给药组及溶剂对照组小鼠海马组织中的sirt1、p53、乙酰化p53蛋白水平和海马神经元突触可塑性相关基因synapsin I（Syn1）、Rab4B、SNAP25和Tubulin beta4b的表达。结果 柴胡桂枝汤组小鼠在FST中的不动时间显著性减少（P<0.05）；两组动物在EPM、NSF和OFT实验中无显著性差异；在SI行为实验中，CSDS+vehicle组小鼠与其他3组相比，在交互区的停留时间有显著性差异（P<0.05）。与溶剂对照组相比，柴胡桂枝汤组小鼠海马区sirt1蛋白水平上升，乙酰化p53蛋白水平下降（P<0.05），突触可塑性相关蛋白Syn1 mRNA表达上调（P<0.05），Rab（P=0.813），SNAP（P=0.820），Tubb（P=0.864）的mRNA表达没有显著性差异。结论 柴胡桂枝汤在FST和CSDS动物模型中都具有抗抑郁样作用；可能通过sirt1-p53通路及突触可塑性机制发挥其抗抑郁效应。

• 胺碘酮促进小鼠HL1心房肌细胞热处理诱导的凋亡、炎症及氧化应激

  赵海玉, 谭振林, 何利伟, 朱世杰, 颜如玉, 寇宏强, 彭 健

  目的 探讨热处理对心房肌细胞的损伤作用及胺碘酮对心房肌细胞热处理损伤的影响。方法 先测定不同温度和不同胺碘酮浓度下的细胞活力，确定最适合的加热温度和胺碘酮浓度，将细胞分为空白对照组、热处理组、胺碘酮组，空白对照组将体外培养小鼠HL1心房肌细胞置于37 ℃恒温水浴箱，热处理组将心房肌细胞置于高温水浴箱，胺碘酮组将加入胺碘酮溶液的心房肌细胞培养皿置于高温水浴箱。通过MTS法检测细胞活力，通过流式细胞术检测细胞凋亡，利用酶联免疫法检测白介素-6 （IL-6）、白介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平，通过分光光度计检测丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平，观察热处理后心房肌细胞损伤类型及胺碘酮对热处理诱导的心房肌细胞凋亡、炎症、氧化应激水平的影响。结果 与空白组比较，热处理后心房肌细胞存活率与SOD活性减少（P<0.001），热处理组的IL-1β及MDA水平增加（P<0.01）、凋亡率及IL-6增加极其显著（P<0.001）；与热处理组相比，胺碘酮组心房肌细胞存活率降低（P<0.01）、SOD活性下降（P<0.05）、凋亡率增加（P< 0.05），而IL-1β、IL-6及MDA水平增加（P<0.01），TNF-α水平增加显著（P<0.001）。结论 热处理可导致小鼠HL1心房肌细胞发生凋亡、炎症、氧化应激导致细胞损伤，胺碘酮溶液可促进热处理诱导后的细胞凋亡、炎症、氧化应激反应从而进一步加重小鼠HL1心房肌细胞损伤。

• 卵泡发育中晚期添加HMG可改善妊娠结局：基于682例高龄卵巢储备减退患者

  吴晓敏, 陈映雪, 周星宇, 张 俊, 黎 莹, 李 欣, 张笑菲, 陈士岭

  目的 探讨促性腺激素释放激素拮抗剂（GnRH-ant）方案中添加人绝经期促性腺激素（HMG）的时机对高龄卵巢储备减退（DOR）不孕患者妊娠结局的影响。方法 行体外受精-胚胎移植（IVF-ET）治疗的≥35岁的DOR患者682例，采用拮抗剂方案，均于月经周期2~3 d启动卵泡刺激素（FSH）促排卵治疗，根据添加HMG的时机分为无添加组371例（不添加HMG）、早期添加组139例（每日加用HMG直至扳机日）、中晚期添加组172例（主导卵泡直径达到10~14 mm时每日加用HMG直至扳机日），比较3组的妊娠结局。结果 3组扳机日雌二醇、孕酮水平、扳机日子宫内膜厚度、扳机日直径≥14、16、18 mm的卵泡个数、受精率、卵裂率差异均无统计学意义（P>0.05），Gn用量早期添加组和中晚期添加组高于无添加组，中晚期添加组获卵数高于早期添加组，成熟卵子数及可利用胚胎数中晚期添加组高于无添加组及早期添加组（P0.05）。结论 高龄DOR患者应用GnRH-ant方案时，在卵泡发育的中晚期添加HMG能改善促排卵结局和新鲜周期临床妊娠率。

• 前列环素和血栓素A2在机械通气致兔肺通透性增加中的作用机制

  李丽莎, 李 江, 杨 泳, 刘 娜, 郭 欣, 邹 曦, 马文婕, 刘星玲, 朱晓燕, 刘 睿

  目的 探讨前列环素（PGI2）和血栓素A2（TXA2）在机械通气（MV）致肺通透性增加中的作用机制。方法 48只健康日本大耳白兔随机分为：溶剂治疗组（V组）；反苯环丙胺（PGI2合酶抑制剂）治疗组（T组）；达唑氧苯（TXA2合酶抑制剂）治疗组（D 组）；溶剂治疗+MV组（VM组）；反苯环丙胺治疗+MV组（TM组）和达唑氧苯治疗+MV组（DM组）。运用ELISA检测实验动物肺组织TXA2和PGI2含量，并测定肺组织和支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α含量；以肺湿/干重（W/D）比值、肺通透性指数（PPI）和肌球蛋白轻链激酶（MLCK）蛋白及mRNA表达水平作为反映肺通透性的指标，并通过肺组织学评分对肺损伤的严重程度进行评价。结果 单纯药物或溶剂治疗不影响非MV实验动物各检测指标。VM组实验动物肺组织PGI2和TXA2含量明显增加（P<0.05），PGI2/TXA2比值显著上调（P<0.05），伴有BALF和肺组织内TNF-α的大量生成（P<0.05）和明显的肺通透性（肺W/D比值、PPI和MLCK表达水平）增加及肺损伤（P<0.05）；运用反苯环丙胺显著抑制MV实验动物肺组织PGI2生成（P<0.05）可下调PGI2/TXA2比值（P<0.05），进一步增加实验动物BALF和肺组织内TNF-α的生成（P<0.05），并加重肺的高通透性和肺损伤（P<0.05）；用达唑氧苯显著抑制 MV 实验动物肺内 TXA2 生成（P<0.05）会进一步上调 PGI2/TXA2 比值（P< 0.05），降低BALF和肺组织内TNF-α含量（P<0.05），减轻肺高通透性和肺损伤的严重程度（P<0.05）。结论 PGI2具有抗MV致肺通透性增加保护作用，其机制与下调TNF-α/MLCK信号通路有关；TXA2可通过上调TNF-α/MLCK信号通路引起MV实验动物肺通透性增加。

• 静息态功能磁共振成像分析原发性失眠患者大脑的小世界网络

  黄伟康, 李志铭, 吴水天, 洪静静, 文 戈

  目的 基于静息态功能磁共振成像（rs-fMRI）研究原发性失眠患者脑功能网络小世界属性的变化。方法 采集65名患者和60名相匹配的健康对照者rs-fMRI数据以及神经量表数据，通过GRENTA软件构建脑网络，统计分析采用SPSS软件及基于网络的统计分析方法。结果 两组在年龄、性别和受教育程度方面差异均无统计学意义（P>0.05），在匹兹堡睡眠质量指数，汉密尔顿抑郁量表、汉密尔顿焦虑量表数据差异有统计学意义（P<0.05）。两组均符合小世界网络属性，与对照组相比患者组小世界网络全局属性表现出更低的Cp、γ、Eloc、λ、连通性、σ（P<0.05）。结论 原发性失眠患者较对照者表现出聚类系数等网络参数的减低，表明网络信息整合能力受损，为原发性失眠患者神经病理机制提供了客观的影像学证据，有利于加深对其神经病理机制的了解。

• 基于有限元法分析钝力性脾损伤的机制

  胡文虎, 邵 煜, 李正东, 邹冬华, 王慧君, 陈忆九

  目的 采用有限元法对钝力性脾损伤进行损伤生物力学机制分析和损伤重建。方法 利用拳头有限元模型分别以4~8 m/s的速度从左季肋区前侧、左侧腋前线处及后侧肩胛线处击打THUMS 4.0人体模型的脾区，观察脾脏在不同条件下应变分布及损伤情况，将模拟结果和真实案例中脾破裂部位相比较，以分析脾损伤机制。结果 不同条件下，脾脏易损伤部位和应变分布不同，由于脾脏特殊的解剖学位置，4~8 m/s速度下，前侧钝性暴力不易造成脾损伤，应变主要出现在脾前端和脾门区；左侧钝性暴力易导致脾膈面损伤，脾脏面受到其内侧组织器官的挤压和脾蒂的牵拉而出现损伤，应变分布在脾膈面和脾脏面；后侧钝性暴力易造成脾后端和脾门区损伤，应变主要集中在损伤部位。结论 拳击所致脾脏损伤机制多为遭受肋骨的直接撞击、与周围组织器官发生挤压碰撞以及脾蒂的牵拉。

• 6种蛋白质构建的预测模型在结直肠癌预后预测中的作用：基于TCPA数据库

  温贺新, 史维俊, 葛思堂, 李 静, 左芦根, 刘牧林

  目的 通过生物信息学方法，分析多种蛋白质联合预测结直肠癌（CRC）预后的作用及潜在的分子机制。方法 从癌症蛋白质组图集（TCPA）数据库下载CRC蛋白质表达数据及临床数据，应用Perl及R软件对数据进行整理后筛选出预后相关的蛋白质；进一步通过多因素Cox分析筛选出可作为CRC预后独立风险因子的蛋白质并据此构建预测模型。对模型中每一个蛋白质及模型风险评分进行生存分析，并对风险评分与患者生存状态绘制风险曲线验证预测模型对预后的预测作用。独立预后分析及ROC分析可反映预测模型在预后预测中的价值及优势。对模型蛋白质与CRC所有的相关蛋白质进行相互作用分析并在mRNA水平分析关键蛋白相关基因的差异表达。结果 通过单因素及多因素Cox分析筛选出了6个蛋白质用于预测模型的构建；生存分析发现与单个基因相比，预测模型表现出更强大的预后价值。单因素及多因素独立预后分析均提示预测模型风险评分与预后显著相关（P<0.001），预测模型可作为评估患者预后的独立风险因子；ROC分析显示预测模型在预后预测中表现出更加稳定的特异性和灵敏度（AUC=0.734）。蛋白质相互作用关系显示，蛋白质BID、SLC1A5及SRC_pY527与其他蛋白质表现出较明显的相关性（P<0.001），蛋白质SLC1A5及SRC_pY527与其他CRC相关的蛋白质间的相互作用最显著（SLC1A5与11种蛋白质间存在显著相关性；SRC_pY527与12种蛋白质间存在显著相关性，P<0.001）；除INPP4B外，各蛋白相关基因在mRNA水平均呈差异表达（P<0.05）。结论 6 种蛋白质构建的预测模型对 CRC 具有较好的预后预测作用，同时蛋白质 SLC1A5 及SRC_pY527在CRC的预后中起关键的作用，尤其是蛋白质SRC_pY527可能通过SRC/ AKT/MAPK信号轴调节CRC的发生发展并有望为CRC的治疗提供新的靶标。

• SPOP上调c-Jun蛋白表达并促进肾癌细胞的增殖和侵袭

  吴林慧, 余 珂, 崔 悦, 朱雪莲, 杨 正, 马 佳

  目的 探讨SPOP对肾癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等的影响及潜在的作用机制。方法 体外培养肾癌细胞株786-O、 A704、Caki-2，对照组（EV）和过表达组（SPOP）质粒采用脂质体法转染至上述肾癌细胞株；分别利用克隆形成实验及MTT法检测SPOP基因对肾癌细胞株增殖的影响；采用TUNEL法检测SPOP基因对肾癌细胞株凋亡的影响；利用创伤愈合实验和Transwell实验检测SPOP基因对肾癌细胞株迁移和侵袭能力的作用；运用Real-time PCR和Western blotting技术检测转染后肾癌细胞株SPOP和c-Jun的 mRNA水平以及相关蛋白的表达情况。结果 在786-O、A704、Caki-2细胞上调 SPOP的表达能促进肾癌细胞的增殖、迁移和侵袭（P<0.05）；与对照组相比，SPOP组的肾癌细胞株786-O、Caki-2的凋亡率较对照组相对减少（P< 0.05）；Real-time PCR结果显示，c-Jun mRNA的表达水平未发生改变，但Western blotting结果显示，SPOP组肾癌细胞株786-O、Caki-2的SPOP蛋白表达明显高于对照组（P<0.05），c-Jun蛋白的表达也明显高于对照组（P<0.05）。结论 SPOP能促进肾癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力，抑制肾癌细胞的凋亡，潜在的机制可能为促进c-Jun的表达。

• 血清淀粉样蛋白A、降钙素原、超敏C反应蛋白检测对肺结核合并肺炎的诊断价值

  江颖仪, 李德宪, 劳穗华, 肖 芃

  目的 探讨血清淀粉样蛋白A（SAA）、降钙素原（PCT）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）水平在肺结核合并肺炎患者中的表达及诊断预测价值。方法 收集2019年4月~2020年4月入住广州市胸科医院重症结核科的肺炎、肺结核、肺结核合并肺炎、肺结核合并脓毒症的患者血清，检测血清中SAA、PCT、hs-CRP水平，应用受试者工作特征（ROC）曲线评估SAA、PCT、hs-CRP预测肺结核合并肺炎的效能；评估以SAA、PCT、hs-CRP鉴别肺结核合并肺炎与脓毒症的可能性。收集2020年5月~7月的肺结核、肺结核合并肺炎患者的血清，检测SAA、PCT、hs-CRP水平，验证其联合预测肺结核并发肺炎的准确性。结果 与肺结核组患者相比，肺炎组患者血SAA、hs-CRP水平明显升高；肺结核合并肺炎组患者血SAA、PCT、hs-CRP水平均较肺结核组患者明显升高，差异均有统计学意义（P均<0.05）。血SAA与hs-CRP、白细胞、中性粒细胞比率、D二聚体、纤维蛋白原、APTT水平存在正相关（P均<0.05）。ROC分析显示，血SAA、PCT、hs-CRP诊断肺结核合并肺炎的曲线下面积（AUC）分别为0.762、0.781、0.800；三者联合后AUC值为0.849（P均<0.001）。验证结果显示，以SAA联合PCT预测肺结核患者发生肺炎的敏感度为53.85%，特异度为90.48%；与SAA、PCT、hs-CRP三者联合相同。肺结核合并肺炎与结核合并脓毒症患者的血SAA、PCT水平差别无统计学意义。结论 联合检测血SAA、PCT水平对诊断肺结核患者合并肺炎具有一定的临床价值。但不能以血SAA或PCT水平来鉴别患者合并肺炎与脓毒症，可能与血SAA、PCT水平受凝血功能的影响有关。

• 2型糖尿病患者血清CTRP9水平与糖尿病视网膜病变的相关性

  周鹏鹏, 刘丽燕, 高卫萍

  目的 探讨2型糖尿病（T2DM）患者血清C1q肿瘤坏死因子相关蛋白9（CTRP9）水平与糖尿病视网膜病变(DR)的关系。方法 根据纳入标准收集 291 例 T2DM 患者临床资料，按照眼底检查结果分为 DR 组与非 DR (NDR)组，ELISA 法检测血清CTRP9、脂联素及胰岛素水平。统计分析血清CTRP9水平与T2DM患者、T2DM并发DR患者临床资料的相关性，探讨血清CTRP9水平与T2DM患者并发DR的关系。结果 与NDR组相比，DR组血清CTRP9水平显著升高（P<0.001）；血清脂联素水平显著降低（P<0.001）。Pearson相关性分析显示T2DM并发DR患者中，血清CTRP9水平与DR严重程度呈显著正相关（P<0.05）；与血清脂联素水平呈负相关（P=0.017）。多元Logistic回归分析校正年龄、性别、体重指数、糖尿病病程、糖化血红蛋白、空腹血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR、高血压病史、收缩压、低密度脂蛋白、甘油三酯等混杂因素，随着血清CTRP9水平的升高，T2DM并发DR的风险显著升高（P<0.001）。结论 T2DM并发DR患者血清CTRP9水平升高可能是糖尿病视网膜微血管病变的代偿反应。

• 腔镜手术与传统手术对腮腺良性肿瘤的治疗效果的meta分析

  冯铁军, 谢 宇, 林雅琪, 龚 薇, 孟子璐, 王玉栋

  目的 通过比较腔镜手术与传统手术在治疗腮腺良性肿瘤效果的系统评价，比较两种手术方式的效果。方法 检索CNKI、PubMed、Web of Science、Embase、万方医学网等数据库在2021年1月以前发表的所有文章。对文章进行筛选及提取，使用Review Manager 5.3软件进行meta分析。结果 纳入8篇文章，4篇RCT研究，共532名患者，meta分析结果显示，在切口长度[加权平均差（WMD）=-5.73；95%CI：-6.84~-4.62]、术中预估出血量（WMD=-34.50；95%CI：-49.09~-19.91）、术后引流量（WMD=-21.72；95%CI：-29.31~-14.12）、切口满意度（WMD=2.23；95%CI：1.11~3.34）、短暂性面瘫（OR=0.37；95%CI：0.17~0.78）腔镜组优于传统组，在手术时间、涎瘘、Frey综合征以及肿瘤复发，两组手术差异无统计学意义。结论 腔镜下良性腮腺肿瘤切除在切口长度、术中预估出血量、术后引流量、切口满意度、短暂性面瘫方面优于传统组，但是在手术时间、唾液腺、Frey综合征以及肿瘤复发，两组手术差异不明显。因此腔镜下腮腺良性肿瘤切除优于传统手术，是一种安全的手术方式。

• 多糖调控糖脂代谢的作用及其机制研究进展

  丁孟汝, 王国栋, 袁平川, 何曙光, 邵太丽, 柳春燕, 孔 祥

  多糖是由多个相同或不同结构的单糖通过糖苷键结合的化合物，广泛存在于动植物体内和微生物细胞壁中，具有安全性高、毒副作用小的特点。近年研究发现多糖在免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、降低血糖与血脂等方面有着广泛的生物活性。其中，多糖改善胰岛素敏感性，调节糖、脂代谢的功效备受研究者的关注。很多多糖能够通过修护胰岛细胞，改善胰岛素抵抗、调节肠道菌群，增强抗氧化能力，调节糖脂代谢中关键酶的活性等作用机制来发挥降血糖降血脂作用。本文综述了多糖调控糖脂代谢的作用及其相关机制，如多糖调节糖代谢的作用机制包括修护胰岛细胞，增加胰岛素的含量；增加胰岛素的敏感性，改善胰岛素抵抗；调节糖代谢中关键酶的活性；增加肝糖原的合成；调节肠道菌群；多糖还能够通过改善机体免疫调节，拮抗升高血糖素来调节糖代谢。多糖对脂代谢的作用机制包括：通过调节脂质的吸收分布代谢排泄；调节体内PPAR-α等相关基因的表达；调节脂代谢酶的活性；提高抗氧化能力；多糖还可以通过调节肠道菌群以及调节信号通路来调节脂代谢。