南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2022年第5期

• 持续释放CA4P和阿霉素的可注射水凝胶/短纤维复合物用于小鼠乳腺癌异种移植瘤联合化疗

  王 婷, 杨 铃, 谢雨涵, 程思宇, 熊 敏, 罗晓明

  目的 制备释放CA4P和阿霉素（DOX）的可注射性凝胶/短纤维复合物，并研究其用于局部注射的抗肿瘤效果。方法 采用电纺和冷冻切割法制备负载阿霉素的PELA短纤维（FDOX），荧光显微镜观察药物在纤维表面的分布，荧光分光光度计测定包封率和载药量。室温下将纤维分散到载CA4P的PLGA-PEG-PLGA三嵌段聚合物（GCA4P）溶液中，以获得载药水凝胶/短纤维复合材料GCA4P/FDOX。采用试管倒置法测定复合材料的温敏性。紫外分光光度计和荧光分光光度计分别检测CA4P和DOX的释放。体外采用CCK-8试剂检测GCA4P/FDOX复合物对MCF-7和4T1细胞的毒性。建立小鼠4T1异种移植瘤模型，通过监测30 d内肿瘤的生长情况评价局部注射GCA4P/FDOX复合物的抗肿瘤效果。在治疗后第21天，对肿瘤切片进行HE染色、免疫组化（Ki67）和免疫荧光（TUNEL）检测。结果 FDOX的平均长度为4.0±1.3 μm，载药量为（2.69±0.35）%，包封率为（89.70±0.12）%；DOX在纤维表面分布均匀，当温度升高到37 ℃时，复合材料可以在体外快速固化形成凝胶。复合材料的释放行为显示，CA4P在5 d内可完全释放，87%的DOX在30天内释放。在与GCA4P/FDOX共同孵育72 h后，仅有30.6%的MCF-7和28.9%的4T1细胞存活。动物实验结果显示，治疗30 d后，GCA4P/FDOX治疗组小鼠的肿瘤体积约771.9±76.9 mm3，肿瘤坏死组织和凋亡细胞明显增多，增殖细胞减少。结论 该凝胶短纤维复合药物控释体系可为肿瘤局部联合化疗提供新的策略。

• ALDH3B1的表达与肿瘤组织病理学和远期预后相关

  李晴晴, 邱权威, 张乐乐, 张小凤, 王月月, 耿志军, 葛思堂, 左芦根, 宋 雪, 李 静, 胡建国

  目的 探究乙醛脱氢酶3B1（ALDH3B1）在胃癌组织中的表达情况，明确其与胃癌病理参数和远期预后的关系。方法 纳入分析我院行胃癌根治术患者101例，治疗时间范围在2013年1月~2016年11月，采用免疫组织化学法检测胃癌和癌旁组织中ALDH3B1的表达，统计学分析ALDH3B1与病理组织学参数的关系以及对胃癌术后远期生存的预测评估价值；对MGC-803胃癌细胞系采用慢病毒特异性干扰和过表达ALDH3B1，经免疫印迹法验证基因调控效果，实验分为正常对照组（NC），干扰组（Si-ALDH3B1）和过表达组（LV-ALDH3B1），探究ALDH3B1作用于胃癌细胞恶性行为的影响。结果 胃癌组织中ALDH3B1 和Ki67的表达显著增加（P<0.05）；胃癌组织中ALDH3B1表达量与外周血CEA及CA19-9间均存在正相关关系（P<0.01）。ALDH3B1高表达组患者CEA≥5 μg/L、CA19-9≥37 kU/L、T分期为3~4期及N分期为2~3期的比例显著高于ALDH3B1低表达组（P<0.05）。K-M生存分析结果显示ALDH3B1高表达组患者5年生存率显著降低（P<0.01）。经单因素及Cox多元回归模型分析得出ALDH3B1高表达（P<0.05，HR=0.231，95% CI：0.064~0.826）、CEA≥5 μg/L（P<0.01，HR=4.478，95% CI：1.530~13.110）、CA19-9≥37 kU/L（P<0.01，HR=3.877，95% CI：1.625~9.247）、T 分期为 3~4 期（P<0.01，HR=4.953，95% CI：1.768~13.880）及N分期为2~3期（P<0.05，HR=2.152，95% CI：1.152~4.022）为影响胃癌根治术后5年生存期的独立危险因素。此外，以ALDH3B1相对表达量4.66为截点值，预判术后5年死亡的敏感性为76.47%，特异性为76%（P<0.01）；细胞学实验证明ALDH3B1高表达可促进胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力。结论 ALDH3B1在胃癌组织中高表达与肿瘤病理学参数相关，是胃癌根治术后5年生存率的独立危险因素，可能促进肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移等生物学过程。

• 二氢杨梅素通过抑制HMGB1改善糖尿病大鼠心功能不全

  刘思妤, 刘 青, 彭群龙, 张远芳, 王俊杰

  目的 探讨二氢杨梅素（DHM）对糖尿病大鼠心功能不全的影响及其作用机制。方法 24只SPF级雄性SD大鼠随机等分为正常对照组（Control组，n=6）、2型糖尿病组[T2DM组，n=6，高糖高脂饲料喂养6周加小剂量链脲佐菌素（STZ）]、二甲双胍组（MET组，n=6，构建T2DM模型大鼠后，给予MET 150 mg/kg灌胃 8 周）、二氢杨梅素组（DHM组，n=6，构建T2DM模型大鼠后，给予DHM 250mg/kg灌胃 8 周）。检测各组大鼠空腹血糖、低密度脂蛋白（LDL-C）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL-C）及糖化血红蛋白（HbA1c）含量，ELISA法检测血浆中胰岛素、高迁移率族蛋白-1(HMGB1)的含量，心脏彩色超声仪检测大鼠心功能，生物信号采集系统测定大鼠心电图，HE染色观察大鼠心肌组织形态，Western blot法检测大鼠心肌组织HMGB1、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）蛋白的表达水平。结果 与Control组比较，T2DM组造模后出现心律失常，心率减慢，左室射血分数（EF）、左室短轴缩短率（FS）、每搏输出量（SV）显著下降（P<0.05或0.01），大鼠的心室舒张末期内径（LVIDd）、左心室收缩期内径（LVIDs）、心脏肥厚指数、血浆中HMGB1的含量、心肌组织中的HMGB1、NF-κB p65磷酸化蛋白表达水平显著升高（P<0.05或0.01）；与T2DM组比较，DHM组能显著改善大鼠各项心功能指标（P<0.05或0.01），并且能显著降低血浆中HMGB1的含量、下调心肌组织中的HMGB1及NF-κB p65磷酸化蛋白的表达（P<0.05或0.01）。结论 DHM改善糖尿病大鼠心功能可能与下调HMGB1表达及抑制NF-κB p65磷酸化有关。

• 黄芪四君子汤治疗乳腺癌癌因性疲乏的疗效及机制：基于94例临床随机对照试验和网络药理学

  崔艺馨, 米继伟, 冯 宇, 李灵生, 王雨佳, 呼 健, 王海明

  目的 探讨黄芪四君子汤治疗乳腺癌化疗后致脾胃气虚型癌因性疲乏（CRF）患者的临床疗效及作用机制。方法 94例脾胃气虚型癌因性疲乏的乳腺癌化疗患者随机分为化疗组47例和中药+化疗组47例。化疗组常规行多柔比星+环磷酰胺或表柔比星+环磷酰胺（AC/EC）方案化疗及心理疏导等非药物性干预，中药+化疗组是在化疗组基础上加用黄芪四君子汤口服治疗，21 d 为1个疗程，观察服药1个疗程后疲乏情况（Piper疲乏修订量）。依托中药系统药理学分析平台（TCMSP）、GeneCards、NCBI基因以及OMIM数据库检索得到黄芪四君子汤的活性成分和靶点蛋白以及CRF、乳腺癌相关疾病靶点，构建蛋白互作（PPI）网络，并对靶标进行基因本体（GO）功能富集分析、京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析，运用AutoDock软件预测主要药物化合物与CRF关键靶点的结合度。结果 中药+化疗组对CRF患者的躯体疲乏、情感疲乏、认知疲乏3个维度评分及疲乏总评分情况明显好于化疗组（P<0.001）；本研究共筛得黄芪四君汤250个靶标、癌因疲乏相关基因2653个、乳腺癌相关基因15 329个，方药与疾病交集靶标161个，构建PPI网络，拓扑分析筛得最可能的关键靶点66个，GO及KEGG富集分析预测出与疾病相关的多条作用通路；分子对接研究提示黄芪四君子汤的核心成分均与AKT1、CASP3、IL6、JUN、VEGFA关键靶点有较好的亲和力， 且AKT1可能是黄芪四君子汤治疗癌因性疲乏的最重要核心靶点。结论 黄芪四君子汤可明显改善乳腺癌癌因性疲乏，其作用机制可能主要通过AKT1调控 PI3K-Akt等信号通路相关基因的表达，进而发挥抗CRF的药理效应。

• 干扰肿瘤相关巨噬细胞的P2X4受体表达可抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭

  杨学智, 沈 红, 李 群, 代自超, 杨荣强, 黄国宾, 陈 蕊, 王 芳, 宋精玲, 华海蓉

  目的 研究P2X4受体在小鼠胶质瘤中肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）的表达对胶质瘤细胞侵袭迁移的影响及分子机制。方法 将16只健康C57BL/6小鼠随机分为肿瘤组、对照组（8只/组），利用小鼠胶质瘤GL261细胞接种于小鼠大脑尾状核，建立小鼠脑胶质瘤模型。术后第21天处死小鼠，取荷瘤小鼠及正常小鼠脑组织，采用HE染色观察小鼠胶质瘤形态，利用免疫荧光检测Iba-1、 P2X4受体的表达情况；应用GL261条件培养基将RAW264.7细胞诱导为TAMs，采用RT-qPCR检测巨噬细胞极化相关标志物及P2X4受体在TAMs的mRNA表达情况；采用Western blot检测P2X4受体在TAMs的蛋白表达情况；采用siRNA P2X4，下调TAMs中P2X4受体的蛋白表达，RT-qPCR、Western blot检测siRNA P2X4转染后TAMs中IL-1β、IL-18的mRNA及蛋白表达；利 用transwell侵袭及迁移实验检测siRNA P2X4 转染后TAMs对GL261细胞侵袭迁移能力的影响。结果 与对照组相比，荷瘤小鼠脑胶质瘤组织中有较高数量的Iba-1阳性细胞（P<0.0001），且P2X4受体在Iba-1阳性细胞中的表达增高（P=0.001）；使用GL261条件培养基刺激RAW264.7细胞转化为TAMs后，M2型巨噬细胞标志基因Arg-1、IL-10表达上调（P=0.0001、0.001），M1型巨噬细胞标志基因iNOS、TNF-α表达也上调（P=0.006、0.001），但以M2型巨噬细胞标志基因Arg-1、IL-10表达上调更为显著，同时TAMs中P2X4受体蛋白表达水平及mRNA水平均增高（P=0.005、0.014）。干扰TAMs中P2X4受体表达引起其IL-1β、IL-18的mRNA（P<0.01）及蛋白表达水平（P<0.01，P<0.05）降低，并抑制TAMs促进胶质瘤细胞侵袭和迁移的能力（P=0.004、0.017）。结论 降低肿瘤相关巨噬细胞P2X4受体表达可能通过IL-1β、IL-18影响胶质瘤细胞的迁移和侵袭。

• P4HA2通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进肝癌的发生和发展

  商 玲, 姜雯迪, 张俊丽, 武文娟

  目的 探讨脯氨酸4-羟化酶II（P4HA2）在肝癌细胞发生发展中的作用及相关机制。方法 利用GEPIA、Human Protein Atlas数据库预测P4HA2在肝癌中的表达情况，利用K-M plotter在线数据库分析P4HA2的表达情况与肝癌预后的关系，采用qRT-PCR和Western blot检测肝癌细胞和正常肝细胞中P4HA2的表达。构建慢病毒载体，用携带P4HA2 shRNA和Con shRNA的慢病毒载体分别转染肝癌SNU-449和Hep-3B细胞系，建立沉默表达P4HA2的细胞株（shP4HA2组）和对照组细胞株（NC组）。采用CCK-8、集落形成试验、划痕实验和Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。采用Western blot实验检测上皮-间质转化和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达情况。结果 在线数据库分析结果显示，肝癌组织中P4HA2表达高于正常肝组织（P<0.05）。同时，肝癌细胞系中P4HA2 mRNA和蛋白表达水平也高于正常肝细胞（P<0.01）。慢病毒干扰后，与NC组相比，shP4HA2组中mRNA和蛋白表达水平下降（P<0.05）。P4HA2基因表达沉默后，细胞的增殖、迁移和侵袭受到抑制。Western blot显示，相对于NC组，shP4HA2组的E-cadherin蛋白表达上升，N-cadherin、Snail蛋白表达下降（P<0.05），在PI3K/AKT/mTOR通路中，磷酸化的PI3K（P-PI3K）、AKT（P-AKT）和mTOR（P-mTOR）显示出较低的水平（P<0.05）。结论 P4HA2通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路影响肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭，促进肝癌的发生发展。

• 金丝桃苷通过激活Keap1/Nrf2/HO-1通路保护小鼠GC-2细胞的氧化损伤

  朱妍妍, 王桐生, 戴 宁, 邓梦云, 刘红娟, 童小慧, 李 莉

  目的 从Keap1/Nrf2/HO-1通路角度研究金丝桃苷（Hyp）对H2O2所诱导的小鼠精母细胞（GC-2）氧化损伤的保护作用。方法 将GC-2细胞随机分为正常组、模型组、氮乙酰半胱氨酸组（阳性组，NAC，2.5 mmol/L)以及金丝桃苷组（50、100、200 μmol/L），各组按剂量孵育48 h后，除正常组外其余各组细胞加入H2O（2 150 μmol/L）处理2 h，正常组给予等容量培养基。采用CCK-8法检测细胞的活力，流式细胞仪检测细胞凋亡水平，酶联免疫法检测超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、过氧化氢酶（CAT）活力以及丙二醛（MDA）含量，Western blot和RT-qPCR检测Nrf2、Keap1、HO-1蛋白及mRNA的相对表达水平，免疫荧光法检测Nrf2核转位水平。结果 150 μmol/L H2O2干预2 h可制备GC-2细胞氧化损伤模型。与正常组比较，模型组GC-2细胞增殖率以及SOD、GSH、CAT活力显著降低，MDA含量、细胞凋亡率，Keap1和Nrf2 mRNA表达显著升高（P<0.05）以及Keap1蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较，NAC组和金丝桃苷200 μmol/L组细胞增殖率和SOD、GSH-PX、CAT活力显著升高，MDA含量、细胞凋亡率显著下降（P<0.05）；金丝桃苷200 μmol/L组Keap1 mRNA表达显著下降，HO-1 mRNA表达显著升高（P<0.01）；金丝桃苷200 μmol/L组Nrf2核蛋白（NEs-Nrf2）以及HO-1的蛋白表达显著升高（P<0.05），Keap1蛋白表达显著下降（P<0.01）；金丝桃苷组出现了明显的核转位现象（P<0.05）。结论 金丝桃苷可能通过激活Keap1/Nrf2/HO-1信号通路，对H2O2诱导的GC-2细胞氧化损伤具有保护作用。

• m7G相关lncRNAs是影响结肠癌患者预后和肿瘤微环境的潜在生物标志物

  陈曙冉, 董 锐, 李 艳, 吴华彰, 刘牧林

  目的 探讨m7G-lncRNAs能否作为结肠癌患者预后及肿瘤微环境的生物标志物。方法 TCGA数据库筛选m7G-lncRNAs（|Pearson R|>0.4，P<0.001），多因素Cox分析构建m7G-lncRNAs风险模型。使用ROC和C-index曲线对风险模型进行验证。构建诺莫图和诺莫图的校准曲线用于预测结肠癌患者的预后。点柱图和K-M生存曲线评估风险打分对患者临床分期和预后的影响。CIBERSORT和ESTIMATE探究高低风险组患者肿瘤微环境和免疫细胞浸润程度的联系，同时分析风险打分对结肠癌患者微卫星不稳定性，干细胞指数和免疫检查点表达的影响。使用相互作用基因搜索工具（STRING）构建蛋白质-蛋白质相互作用网络，挖掘m7G-lncRNAs调控的关键靶点。最后，使用蛋白印迹实验在4对结肠癌组织与癌旁正常组织中验证这些关键靶点的表达。结果 从TCGA数据库鉴别出1722个m7G-lncRNAs。多因素Cox分析筛选出12个lncRNAs用于构建风险模型，其中AC003101.2、AC005014.2、AC008760.1、AC092944.1、AL1161729.4、AL301422.4、AP001619.1、AP003355.1和ZEB1-AS1为高风险lncRNAs，AC025171.4、AC073957.3及TNFRSF10A-AS1为低风险lncRNAs。ROC曲线显示风险模型对患者1年、3年、5年生存预测的AUC值分别为0.727、0.747、0.794。诺莫图预测患者预后的AUC值为0.794，校准曲线显示诺莫图对患者生存的预测与患者实际的生存基本一致。高风险组患者的T分期（T1~T2 vs T3~T4：P=0.034）、N分期（N0 vs N2：P=7.8e-08； N1 vs N2：P=0.00081）以及M分期（M0 vs M1：P=0.007）均高于低风险组患者。低风险组患者常伴随高微卫星不稳定状态（MSS vs MSI-H：P=0.034）。肿瘤干性指数与风险得分呈负相关（r=-0.19；P=7.3e-05）。高风险组患者基质细胞打分（P=0.0028）以及总打分（P=0.007）明显高于低风险组患者较高，激活的肥大细胞（r=-0.11；P=0.045）和静息CD4+T细胞（r=-0.14；P=0.01）的表达也较低。多数免疫检查点在高风险患者中高表达（P<0.05）。蛋白印迹实验表明m7G-lncRNAs调控的关键靶点ATXN2 （P=0.006）and G3BP1（P=0.007）在4对结肠癌组织中表达均高于配对的癌旁正常组织。结论 12个m7G-lncRNAs构建的风险模型对结肠癌具有重要的预后价值，同时也能反映结肠癌患者肿瘤微环境及免疫治疗的疗效。

• t(8;21)急性髓系白血病中RNA N6-甲基腺嘌呤（m6A）的修饰特征

  温亚男, 方 姝, 杨晶晶, 王 昊, 焦一帆, 王 楠, 魏 岩, 王莉莉, 窦立萍

  目的 研究（t8；21）急性髓系白血病（AML）中AML1-ETO（AE）融合基因与细胞内N6-甲基腺嘌呤（m6A）修饰的关系。方 法 利用RNA-蛋白免疫共沉淀和高通量测序技术（MeRIP-Seq）在AE（+）和敲除AE的AML细胞系中进行RNA m6A测序，分析整个转录组m6A修饰的变化。利用高通量测序技术进行转录组测序（RNA-seq）。进一步通过GO分析、KEGG通路富集分析对差异修饰的 mRNA 进行功能注释。实时荧光定量PCR检测m6A相关酶表达量变化。结果 RNA m6A甲基化测序在敲除AE和表达AE的AML细胞系中共检测到26 441个基因，包含了72 036个m6A peak。AE敲除后细胞内m6A peak的数目由37 042个变成34 994个，其中有1278个m6A peak升高，1225个下降。AE敲除后新出现了1316个m6A修饰的基因，1830个基因失去了m6A修饰。差异的peak主要在癌症、人类T淋巴细胞白血病病毒Ⅰ等通路中富集。RNA-seq结果显示，AE敲除后有2483个基因表达上调，3913个基因表达下调。MeRIP-Seq和RNA-Seq联合分析结果显示，与非m6A修饰的基因相比，m6A所修饰的基因表达水平均相对较高（SKNO-1:0.6116±1.263 vs 2.010±1.655，P<0.0001；SKNO-1 siAE:0.5528 ±1.257 vs 2.067± 1.686，P<0.0001）。m6A修饰位于3'UTR或5'UTR的基因较位于外显子区的基因表达量更高（SKNO-1:2.177±1.633 vs 1.333± 1.470 vs 2.449±1.651，P<0.0001；SKNO-1 siAE:2.304±1.671 vs 1.336±1.522 vs 2.394±1.649，P<0.05）。RNA-seq结果显示，有3 种m6A相关酶METTL14、WTAP、ALKBH5的mRNA表达升高（WTAP:5.36±0.5657 vs 13.19±0.3253，METTL14:2.850±0.1556vs 8.815±1.761，ALKBH5:13.70±0.4596 vs 39.84±6.067，P<0.05）。实时荧光定量PCR检测METTL14、WTAP、ALKBH5的表达量变化发现敲除AE后WTAP、ALKBH5的表达量升高，而METTL14的表达量降低（P<0.05）。结论 AE敲除造成m6A相关酶差异，推测AE融合基因或许可以调控一种或多种m6A相关酶的表达控制细胞内的甲基化水平，影响m6A修饰模式。

• 非甾体抗炎药对原发性肝癌抗PD-1疗效的影响

  李芮宁, 黄超艺, 洪 畅, 王家仁, 李绮美, 胡诚毅, 崔 浩, 董忠谊, 朱红波, 刘 莉, 肖芦山

  目的 评估非甾体抗炎药（NSAIDs）对接受免疫治疗的肝癌患者临床结局的影响。方法 回顾性分析2018年6月~2020年10月期间接受过免疫治疗的215例原发性肝癌患者。通过倾向性匹配评分，筛选出基线特征基本平衡的病例，根据 1∶3的比例将33例使用NSAIDs的患者与78例未使用NSAIDs的患者匹配成功。统计比较使用NSAIDs组与未使用NSAIDs组的总生存率（OS）、无进展生存率（PFS）、疾病控制率（DCR）的差异。结果 使用 NSAIDs 的患者（29.7%）与未使用 NSAIDs 的患者（70.2%）OS 没有显着差异。单因素与多因素分析未显示 NSAIDs 使用与DCR（单因素分析：优势比（OR），0.602；95%置信区间（CI），0.299~1.213；P=0.156；多因素分析：OR，0.693；95% CI，0.330~1.458；P=0.334）、PFS（单因素分析：风险比（HR），1.230；95% CI，0.789~1.916；P=0.361；多因素分析：HR，1.151；95% CI，0.732~1.810；P=9.544）或 OS（单因素分析：HR，0.552；95%CI，0.208~1.463；P=0.232；多因素分析：HR，1.085；95% CI，0.685~1.717；P=0.729）之间的关联。结论 NSAIDs药物对晚期原发性肝癌患者免疫治疗的效果无有利影响。

• TSPAN8参与小鼠非酒精性脂肪性肝病的脂质代谢

  张 佳, 薛 薇, 章述军, 朱雅莉, 阳 成, 高 月, 石凌枫, 黄文祥

  目的 探讨四跨膜蛋白8（TSPAN8）在非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）发生发展中的变化及其在脂质代谢中的作用。方法 将30只C57BL/6J 雄性小鼠随机分为普通饲料组（ND，n=15）和高脂饲料组（HFD，n=15）。Western blot检测1、3、6月末各组小鼠肝脏组织中TSPAN8的表达水平。HepG2细胞分成6组：完全培养基培养，无其他处理的命名为对照组（CON）；游离脂肪酸（FFA）处理以构建NAFLD细胞模型的命名为FFA组；TSPAN8过表达细胞命名为PCDNA-TSPAN8组，其对照为PCDNA3.1 组；FFA处理后的PCDNA-TSPAN8命名为PCDNA-TSPAN8+FFA组，其对照为PCDNA3.1+FFA组；qRT-PCR及Western blot检测CON组和FFA组细胞中TSPAN8表达水平；油红O染色法和全自动生化仪检测PCDNA-TSPAN8+FFA和PCDNA3.1+FFA组细胞内脂质蓄积情况。qRT-PCR检测与脂质代谢相关基因mRNA的表达情况。结果 Western blot显示，与同喂养时间ND组相比，HFD喂养3、6月的小鼠肝组织中TSPAN8的表达下降（P<0.05）。qRT-PCR与Western blot显示，与CON组比较，TSPAN8在FFA组中的表达下降（P<0.01）。与PCDNA3.1+FFA组相比，PCDNA-TSPAN8+FFA组中细胞内甘油三酯（TG）水平下降（P<0.001）。qRT-PCR示，与PCDNA3.1组比较，脂肪酸转运蛋白 5（FATP5）在PCDNA-TSPAN8组中表达降低（P<0.01），与CON组相比，FATP5在FFA组表达上调（P<0.001）。结论 TSPAN8参与NAFLD的脂质代谢，细胞过表达TSPAN8可能通过降低FATP5的表达来抑制细胞内脂质的沉积，可能具有潜在的临床价值。

• MiR-744-5p通过靶向 CCND1 抑制肾透明细胞癌细胞的增殖、侵袭和迁移

  雷坤阳, 谢文杰, 孙 庭, 刘贻富, 王 旭

  目的 探讨miR-744-5p/CCND1轴在肾透明细胞癌(ccRCC)中的作用及机制。方法 qRT-PCR检测ccRCC组织和细胞系中miR-744-5p 的表达水平。实验分组：miR-744-5p 模拟物（miR-744-5p mimic）、阴性对照（NC mimic）、CCND1 模拟物（CCND1 mimic）及其阴性对照（NC mimic）。CCK-8实验、划痕愈合实验和transwell实验验证miR-744-5p对ccRCC细胞增殖、迁移及侵袭功能的影响。通过生物信息学预测miR-744-5p的下游靶分子，qRT-PCR和Western blot验证CCND1在786-O及OSRC2细胞中的表达水平，双荧光素酶报告基因实验进一步验证miR-744-5p和CCND1的关系，最后通过回复实验验证miR-744-5p/CCND1轴在ccRCC中的作用。结果 MiR-744-5p在ccRCC组织和细胞系中显著下调（P<0.05），过表达miR-744-5p可以抑制ccRCC细胞的增殖、迁移和侵袭（P<0.05）。生物信息学分析结果和双荧光素酶报告基因实验结果显示，CCND1是miR-744-5p的下游靶标。回复实验结果显示，上调CCND1可以部分逆转上调miR-744-5p对ccRCC细胞增殖、迁移以及侵袭的抑制作用（P<0.05）。结论 miR-744-5p通过靶向CCND1抑制ccRCC细胞的恶性表型，miR-744-5p/CCND1轴可能是ccRCC诊断和治疗的一个新的靶点。

• 丹参酮IIA通过介导PI3K/Akt-eNOS信号通路改善野百合碱所致大鼠肺动脉高压

  张喜民, 刘思佳, 孙亚彬, 李国锋

  目的 探究丹参酮IIA治疗野百合碱所致大鼠肺动脉高压（PAH）的作用机制。方法 选取100只SD雄性大鼠，按随机数字表法分为5组（20只/组）：模型组（MCT）、丹参酮IIA组（TIIA）、丹参酮IIA+PI3K抑制剂组（TP）、PI3K抑制剂组（PI）、对照组。除对照组颈背部注射等体积生理盐水外，剩余大鼠均颈背部注射野百合碱（MCT）诱导肺动脉高压模型。2周后，丹参酮IIA组腹腔注射丹参酮IIA10 mg/kg进行治疗，丹参酮IIA+PI3K抑制剂组注射丹参酮IIA10 mg/kg+PI3K抑制剂1 mg/kg，PI3K抑制剂组注射PI3K抑制剂1 mg/kg，对照组和模型组均腹腔注射等体积生理盐水。治疗2周后，采用苏木精-伊红（HE）染色实验和α-SMA免疫荧光染色实验评估大鼠肺血管形态；Western blot实验评估大鼠肺组织中磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（PKB/Akt）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的磷酸化水平；ELISA法测定eNOS、NO水平。结果 HE染色实验和α-SMA免疫荧光染色证实丹参酮IIA能有效抑制PAH大鼠肺血管中膜厚度和血管肌化水平（P<0.01）；Western blot实验结果显示丹参酮IIA能够显著提高PAH大鼠肺组织中PI3K、Akt和eNOS蛋白的磷酸化水平；ELISA 实验结果显示模型组eNOS、NO水平降低（P<0.01）。结论 丹参酮IIA能够通过介导PI3K/Akt-eNOS信号通路改善野百合碱所致大鼠肺动脉高压。

• 基于非局部能谱相似特征的基物质分解方法用于双能CT图像去噪

  王 蕾, 王永波, 边兆英, 马建华, 黄 静

  目的 提出一种非局部能谱相似特征引导的双能CT基物质分解方法（NSSD-Net）以抑制低剂量能谱CT基物质图像的相关性噪声。方法 首先构建模型驱动的双能CT迭代分解模型，采用迭代软阈值算法（ISTA）优化分解模型目标函数的求解过程，并利用深度学习技术将此过程展开为迭代分解网络的形式。然后构建非局部能谱相似特征引导的代价函数，约束网络的训练过程。利用双能CT真实病人数据所建立的基物质分解数据集进行评估。将NSSD-Net与2种传统模型驱动的基物质分解方法、1种基于数据驱动的基物质分解方法以及1种基于数据-模型耦合驱动的监督分解方法进行对比实验。结果 与传统模型驱动的基物质分解方法以及数据驱动的基物质分解方法相比，NSSD-Net方法在水和骨基物质分解结果中均获得最高的PNSR指标（31.383和31.444）、最高的SSIM指标（0.970和0.963）以及最低的RMSE指标（2.901和1.633）；与数据-模型耦合驱动的监督分解方法相比，NSSD-Net方法在水和骨基物质分解结果中均获得最高的SSIM指标；临床影像专家的主观图像质量评估结果显示，NSSD-Net方法在水和骨基物质分解结果中图像质量评分均最高（8.625和8.250），与其他4种对比方法分解性能之间的差异具有统计学意义（P<0.001）。结论 本方法可以获得高质量的基物质分解结果，有效避免训练数据质量问题和模型不可解释问题。

• 类风湿关节炎血清学标志物的筛选：基于细胞因子蛋白芯片

  韩奕芃, 卢小希, 赖伟男, 梁人戈, 杨 敏, 欧阳晴晴

  目的 探讨多项血清中细胞因子及可溶性细胞因子受体蛋白在类风湿关节炎临床诊断中的应用价值。方法 选择2015年~2019年在本院确诊为类风湿关节炎（RA）的患者59例作为RA组，并以在我院接受定期体检的年龄和性别匹配的健康受试者46例作为健康对照组。通过人细胞因子蛋白芯片检测其中5例RA组及5例健康对照组血清样本，选取4种差异表达细胞因子LIMPII、ROBO3、Periostin、IGFBP-4及可溶性受体蛋白2B4、Tie-2，于另外54例RA组及41例健康对照组血清样本中，对其六者血清水平进行 ELISA验证。Spearman 相关分析检测细胞因子及可溶性细胞因子受体蛋白与临床指标（包括：类风湿因子（RF）、红细胞沉降率（ESR）、C反应蛋白（CRP）、疾病活动评分（DAS28）及健康评估问卷（HAQ））的关系；受试者工作特征曲线（ROC）分析评估其诊断价值。结果 与健康对照相比，2B4、LIMPII、Tie-2、ROBO3、Periostin和IGFBP-4在RA血清中的表达显著升高（P<0.01）。同时，RA血清中LIMPII、ROBO3和Periostin血清水平与类风湿因子、C反应蛋白、疾病活动评分及健康评估问卷等反映疾病活动程度评价指标正相关（P<0.01）。血清2B4、LIMPⅡ、Periostin、ROBO3、IGFBP-4和Tie-2表达水平均对RA的诊断有显著意义（P<0.05），其中2B4曲线下面积为最大（AUC：0.861，P<0.001），其次依顺序LIMPII、ROBO3、Periostin、Tie-2、 和IGFBP-4。结论 血清LIMPII、ROBO3和Periostin的表达水平可反映RA的疾病活动度，此外血清2B4、LIMPⅡ、Periostin、ROBO3、IGFBP-4和Tie-2可能作为RA的诊断的生物标记物。

• 二甲双胍可能通过Hippo-YAP通路抑制HER-2阳性乳腺癌细胞的增殖和促进凋亡

  徐 钰, 徐 婷, 熊远锋, 黄佳祎

  目的 观察二甲双胍对HER-2阳性乳腺癌细胞株SKBR3增殖、凋亡的影响，并探讨其可能的机制。方法 分别用0、20、40、60、80、100、120 μmol/L二甲双胍处理乳腺癌细胞株SKBR3，CCK-8法检测其对细胞增殖的影响；结晶紫染色观察其对细胞集落形成的影响；计算IC50值。以该浓度二甲双胍处理细胞，与空白对照相比，流式细胞术检测细胞凋亡和周期的改变；实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）检测 YAP、TAZ、EGFR、CTGF、CYR61、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin 及 Fibronectin 等关键基因的mRNA水平表达；Western blotting 实验检测YAP、TAZ蛋白水平的表达；免疫荧光观察二甲双胍对SKBR3细胞中YAP/TAZ核易位的改变。结果 CCK-8和细胞克隆实验显示二甲双胍对SKBR3细胞增殖活力具有明显的抑制作用（P<0.05），呈浓度和时间依赖性。与对照组相比，二甲双胍处理后的SKBR3细胞凋亡明显增加；G1期细胞比例增多，而G2/M期细胞比例减少。N-cadherin、Vimentin和Fibronectin的表达降低，而E-cadherin的表达上调（P<0.05）。qRT-PCR和Western blotting检测结果显示，二甲双胍处理后YAP、TAZ、EGFR、CTGF和CYR61的表达明显下调（P<0.05）。免疫荧光实验显示：实验组较对照组的YAP或TAZ，其荧光的定位更多地聚集于胞浆，而细胞核中荧光的量明显的减少。结论 二甲双胍能抑制HER-2阳性乳腺癌细胞SKBR3的增殖，促进其凋亡和上皮－间质转化，其机制可能与抑制YAP/TAZ的表达和核定位有关。

• 儿童急性呼吸道感染与其气质类型、母亲情绪状态的关系

  晏 琼, 陶 婷, 王利刚, 樊春雷, 高文斌

  目的 探讨儿童急性呼吸道感染与其气质类型和母亲情绪状态之间的关系，为临床对儿童急性呼吸道感染开展生物-心理-社会因素综合诊疗提供重要参考。方法 在广州市及衡阳市便利选取2家幼儿园200名3~6岁儿童开展问卷调查，由儿童母亲完成一般资料调查问卷表、抑郁-焦虑-压力量表、儿童气质量表。结果 难养型儿童急性呼吸道感染总比例较易养型儿童高（P<0.05），急性鼻炎、急性咽炎、急性喉炎和急性支气管炎的比例更高（P<0.05）；儿童急性呼吸道感染总次数与母亲的压力和焦虑都存在显著正相关（P<0.01），其中急性鼻炎和急性气管炎与母亲的压力得分呈正相关（P<0.05），急性咽炎和急性喉炎与母亲的焦虑得分呈正相关（P<0.05），急性支气管炎则与母亲的压力和焦虑得分均呈正相关（P<0.05）；以影响儿童不同急性呼吸道感染类型的相关因素为自变量进行多元线性回归分析，气质易养型是儿童急性鼻炎的保护因素（P<0.05），母亲焦虑是儿童急性喉炎的危险因素（P<0.05），母亲压力是儿童急性气管炎的危险因素（P<0.05）。结论 儿童急性呼吸道感染发生率因患儿不同气质类型有所差异、患儿母亲焦虑和高压力是该病的危险因素。临床诊疗应注重调整患儿母亲压力与负性情绪的调节，根据不同气质类型患儿有针对性开展。

• 褐藻素通过调控Nrf2/Keap1通路缓解糖尿病大鼠心肌肥大

  郑冬晓, 陈琳琳, 韦其慧, 朱梓然, 刘子略, 金 琳, 杨观玉, 谢 曦

  目的 探索褐藻素（FX）对糖尿病心肌病的保护效应和作用机制。方法 腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型，进行分组：糖尿病组（DM）、褐藻素干预糖尿病组（DM+FX）和二甲双胍干预糖尿病组（DM+Met），另取正常大鼠给予正常喂养作为正常组（Con）。造模成功后连续12周每日灌胃给药，褐藻素组每日给予200 mg/kg褐藻素灌胃，二甲双胍组每日给予230 mg/kg灌胃，糖尿病组同步灌胃生理盐水。HE染色观察各组大鼠心脏细胞肥大情况；Western blot法检测大鼠心脏中纤维化蛋白TGF-β1和FN蛋白表达水平。H9C2细胞分为3组：正常糖组（NG，5.5 mmol/L葡萄糖）、高糖组（HG，45 mmol/L葡萄糖）和褐藻素干预高糖组（HG+1 μmol/L FX）。FITC标记的鬼笔环肽检测大鼠心肌细胞H9C2表面积变化；qRT-PCR法测定各组细胞肥大因子ANP、BNP和β-MHC基因表达变化；Western blot法检测各组大鼠心脏组织和H9C2细胞中Nrf2、Keap1、HO-1、SOD1蛋白表达水平；DCFH-DA探针检测细胞内活性氧水平变化。结果 褐藻素改善糖尿病大鼠心肌纤维化和心肌细胞肥大，同时上调心脏组织中Nrf2和HO-1蛋白表达，抑制Keap1蛋白表达（P<0.05）。褐藻素可抑制高糖诱导H9C2心肌细胞表面积增加，降低ANP、BNP和β-MHC的mRNA表达水平（P<0.05）。褐藻素可促进高糖诱导的H9C2细胞中Nrf2入核，上调下游靶蛋白SOD1和HO-1蛋白表达（P<0.05）来增强细胞抗氧化能力，降低细胞内活性氧的水平。结论 褐藻素具有良好的抗糖尿病心肌纤维化和心肌细胞肥大作用，同时上调Nrf2信号通路并促进下游抗氧化蛋白SOD1和HO-1的表达，降低活性氧水平。

• 三维重建技术在腹腔镜右半结肠癌D3根治术中的应用

  陈建新, 袁燕文, 彭伟谦, 唐煜欣, 陈新岐, 王毅钧, 沈海平, 李瑞平

  目的 探讨三维重建技术对右半结肠癌患者施行腹腔镜D3根治术的临床应用价值。方法 对2019年5月~2021年3月接受腹腔镜右半结肠癌D3根治术的73例患者的临床资料进行回顾性分析，按术前检查将患者分为实验组（41例）和对照组（32例）。实验组术前行薄层增强CT检查后运用重建软件进行三维重建并指导实际手术，对照组术前只行常规增强CT检查，观察实验组术中探查血管变异、肿瘤动脉供血、肿瘤定位等情况与三维可视化重建模型符合率、根据三维模型术前拟定的结直肠癌D3根治术手术方案与实际手术方案符合率、两组病例的手术时间、术中出血量、血管意外损伤比例、淋巴结清扫数量、肛门通气时间、并发症比例、术后住院时间、腹腔总引流量等指标。结果 实验组比对照组手术耗时更短（P0.05）。实验组利用三维重建技术术前清晰显示结肠形态和走向、肿瘤位置、各主要血管的解剖与变异以及癌肿供血血管，与实际手术探查符合率100%，根据三维模型术前拟定的右半结肠癌D3根治术手术方案与实际手术方案符合率100%。结论 三维重建技术可以直观地显示右半结肠癌的血管解剖和变异、以及肿瘤与供血动脉的关系，能更安全有效地从肿瘤学角度施行腹腔镜右半结肠癌D3根治手术。

• 运动调控纹状体听觉响应的神经机制

  黄威龙, 梁妃学

  目的 研究动物处于不同行为状态时，纹状体听觉神经元对声音信息的特征表达是否被调控。方法 以SPF级C57BL/6J清醒小鼠纹状体的听觉神经元为研究对象，通过搭建同步的在体电生理和运动记录系统，采用玻璃微电极贴附式记录方法长时间记录纹状体听觉神经元对噪声的听觉响应，并通过分析小鼠跑动速度将小鼠的行为状态分为安静状态和运动状态，分析动物处于两种行为状态下纹状体听觉神经元的自发活动和诱发响应。结果 相对于安静状态，当动物处于运动状态时，纹状体听觉神经元的自发活动增高（37.06±12.02 vs 18.51±10.91，P<0.001），而诱发响应下降（噪声强度=60 dB，3.45±2.99 vs 3.04±2.76，P<0.001）。结论 运动状态对纹状体的听觉响应具有显著的抑制作用，这可能是导致运动状态时声音信息的识别能力下降的重要原因。

• IL-17A与自发性高血压大鼠肾上皮间质转化密切相关

  向茂翠, 王 瑜, 梅仁彪, 付计锋, 陈 静, 都昌乐

  目的 探究IL-17A在原发性高血压大鼠肾上皮间质转化（EMT）中的作用。方法 4周龄的SPF级自发性高血压大鼠（SHR）（实验组）、京都维斯塔尔大鼠（WKY）（对照组）各20只，分别随机分为4组，每组5只，在4、6、10、30周龄进行实验观察。采用无创尾动脉血压测量仪动态检测大鼠的血压情况；流式细胞技术分析大鼠脾淋巴细胞中Th17细胞的频数；RT-PCR法及免疫组化技术检测大鼠肾脏IL-17A、iNOS、Arg-1、E-cadherin、α-SMA mRNA和蛋白的表达水平；ELISA法检测大鼠血浆中IL-17A的水平。结果 从6周龄始SHR大鼠血压显著高于同期的WKY组（P<0.05或P<0.01），SHR大鼠Th17细胞频数以及肾脏和血浆中IL-17A的表达亦显著高于同期WKY组（P<0.05或P<0.01）；在30周龄时SHR大鼠肾脏中E-cadherin mRNA及蛋白的表达显著低于WKY组（P<0.01），而Arg-1 mRNA及蛋白的表达显著高于WKY组（P<0.01）；iNOS mRNA及蛋白的表达在6、10周龄时显著高于WKY组（P<0.05或P<0.01），α-SMA mRNA及蛋白从10周龄始显著高于WKY组（P<0.05或P<0.01）。SHR大鼠肾脏中IL-17A mRNA及蛋白表达水平从10周龄始与E-cadherin mRNA及蛋白表达水平呈显著负相关（r=-0.731，P<0.05； r=-0.827，P<0.01），而与α-SMA mRNA及蛋白表达水平呈显著正相关（r=0.658，P<0.05；r=0.968，P<0.01）。结论 IL-17A与SHR大鼠肾EMT的过程密切相关，可能是通过介导肾脏浸润的巨噬细胞M1/M2极化发挥作用。

• 儿童小克银汉毛霉病的临床特征分析：1例报告并文献复习

  吴飞凤, 田继东, 佘 周, 刘 瑛, 万伍卿, 文 川

  目的 探讨儿童小克银汉毛霉病的临床特征及诊治方法，提高对该病的认识。方法 报道某院1例宏基因组学二代测序技术（mNGS）临床诊断的小克银汉毛霉病患儿，经两性霉素B及卡泊芬净治疗有效；检索Pubmed、Embase、知网、万方数据库，纳入儿童小克银汉毛霉病病例，分析该病的临床特征及诊治。结果 该例急性淋巴细胞白血病患儿在化疗后出现发热、呼吸道症状，临床诊断侵袭性真菌病，采用mNGS对外周血DNA序列进行分析，通过与PMDB病原学数据库对比，鉴定出小克银汉霉属，序列数514，接受两性霉素B联合泊沙康唑治疗有效。纳入文献分析小克银汉毛霉病临床特征：22例患者中男性12例，中位年龄13.5（3~18）岁，最常见的基础疾病为血液系统恶性肿瘤（19/22）。大部分患者急性起病，快速进展，最常见的首发症状为呼吸症状（14/20）及发热（16/20）。肺部CT表现以单侧病变多见，影像学表现多样，可出现肺结节/肿块、浸润改变、胸腔积液等。22例中确诊18例，临床诊断4例，最常见受累的器官为肺脏及皮肤；确诊手段仍依赖于组织病理学及真菌培养，分子诊断技术如PCR、mNGS等也渐显露头角。诊断后几乎所有病例都接受了抗真菌治疗（21/22），其中13例联合手术治疗，最终，22例患者中死亡9例，总体死亡率42%，症状/体征出现至死亡的平均时间为19（4~54）天。抗真菌治疗联合手术者生存率（9/13，69%）高于单独抗真菌治疗者（3/8，37%）。结论 侵袭性真菌病是血液肿瘤患者常见并发症，但小克银汉毛霉感染少见，死亡率较高，当临床高度怀疑侵袭性真菌病时，应积极诊断，早期启动治疗，以提高其生存率。