南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2021年第5期

• 强直性脊柱炎患者减停TNF-α抑制剂后的复发情况及预测因素：52周前瞻性临床随访

  唐翠萍, 陈飞龙, 郑松塬, 吴利生, 陈世贤, 朱俊卿, 李 娟

  目的 观察经标准剂量阿达木单抗（ADA）治疗缓解的强直性脊柱炎（AS）患者减停肿瘤坏死因子-α抑制剂（TNFi）后病情复发情况及预测因素。方法 前瞻性纳入经ADA（40 mg/2周）连续治疗12次以上，达到ASAS20改善且Bath疾病活动指数（BASDAI）<4后并维持8周以上，减停TNFi的AS患者63例。每隔12周随访1次，共随访52周，记录患者的年龄、性别、骶髂关节X片分级、病程等基线资料及治疗情况，记录并分析病情复发情况及BASDAI、强直性脊柱炎疾病活动评分（ASDAS）、腰背痛评分（LBP）、Bath强直性脊柱炎测量指数（BASMI）、C反应蛋白（CRP）、血沉（ESR）等变化情况。通过Cox回归模型及绘制ROC曲线分析复发的危险因素。结果 共57例患者完成随访，52周内有22例（38.6%）复发，复发中位时间31周。完全停药患者复发率（89.0%）高于TNFi减量、TNFi停药患者（P<0.001）；而TNFi停药患者与减量患者复发率比较，差异无统计学意义（χ2=0.071，P=0.791）。Cox回归模型分析结果示基线期LBP高（HR=1.438，P=0.027）、BASMI评分高（HR=1.29，P=0.049）是减停TNFi后复发的危险因素，随访期维持药物治疗是复发的保护因素（HR=0.209，P=0.001）。复发ROC曲线结果显示基线LBP、BASMI评分及随访期治疗情况三者的联合因素对复发具有高预测能力（AUC=0.819，敏感度0.772，特异度0.718）。结论 经TNFi治疗缓解的AS患者减停TNFi后复发率较高。基线高LBP和BASMI评分及无药维持治疗是减停TNFi后复发的危险因素。

• 金属有机纳米粒的制备及其在高强度聚焦超声治疗小鼠肝癌中的增效作用

  叶合敏, 黄 楠, 孙廷宇, 侯 伟, 白 晋, 李桦楠

  目的 制备一种金属有机纳米粒，并探究其在高强度聚焦超声（HIFU）治疗肿瘤中的增效作用。方法 制备二氧化锰（MnO2）纳米粒，利用物理吸附法将葡萄糖氧化酶（GOD）、MnO2、三价铁离子（Fe3+）与抗癌药物阿霉素（DOX）自组装形成GOD-MnO2-Fe3+-DOX纳米粒（GMFD NPs）并进行表征。建立HepG2肝癌细胞荷瘤裸鼠模型，随机分为生理盐水+HIFU和GMFD NPs+HIFU组。HIFU治疗声功率为90 W，治疗总时间为3 s。观察HIFU辐照前后肿瘤灰度值变化。HIFU辐照结束24 h后观察肿瘤组织凝固性坏死情况，收集肿瘤组织，苏木精-伊红染色法（HE染色）观察各组织的形态结构变化。结果 成功制备GMFD NPs，其粒径为131.23±0.84 nm，表面电位为+21.87±1.72 mV。其中DOX的载药率为40.18%，在酸性环境中，DOX在4 h内释放的药物超过77.2%。体内动物实验结果表明HIFU辐照后，GMFD NPs组灰度增强（25.5±4.50）明显高于生理盐水组（18.7±3.85），差异具有统计学意义（P=0.04）、凝固性坏死体积GMFD NPs组（105.80±1.21 mm3）明显大于生理盐水组（38.02± 0.34 mm3）、能效因子（EEF）GMFD NPs组（1.79）明显低于生理盐水组（4.97），差异具有统计学意义（P<0.001）。结论 制备的GMFD NPs可增强HIFU对瘤鼠肿瘤组织的消融效果并释放抗癌药物DOX以治疗残留的肿瘤组织。

• 表达气体囊泡的大肠杆菌能安全地增强高强度聚焦超声的消融效果

  蒋富杰, 杨海燕, 王 璐, 汪瑶台, 唐 瑜, 王狄森, 王 琦, 邹建中

  目的 探讨表达气体囊泡（GVs）的大肠杆菌增效高强度聚焦超声（HIFU）消融荷瘤小鼠肿瘤的作用及相关安全性。方法 常规饲养雌性BALB/c小鼠136只，随机选择32只构建4T1荷瘤小鼠模型，按体质量随机分为GVs组（大肠杆菌BL21(AI)-pET28a-ARG1）和对照组（PBS），检测凝固性坏死体积和肿瘤组织病理变化验证增效HIFU消融的作用。104只BALB/c小鼠，也按体质量随机分为GVs组和对照组（n=52），检测小鼠体质量变化，于静脉注射后第1、4和15天，测定白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板计数，检测肝功ALT、AST和肾功CREA、BUN生化指标，ELISA检测TNF-α、IL-1β，检测肝、脾组织病理学变化，以评价其安全性。结果 HIFU消融效果显示GVs组凝固性坏死体积大于对照组（P<0.001），肿瘤组织病理切片显示GVs组损伤程度比对照组更高。体质量结果显示，GVs组体质量与对照组无明显差异，血常规结果显示，GVs组白细胞、红细胞、血小板和血红蛋白含量与对照组无明显差异（P1=0.59，P2=0.27，P3=0.76，P4=0.81）；肝、肾功生化指标结果显示，GVs组ALT、AST、CREA和BUN与对照组均无明显差异（P1=0.12，P2=0.46，P3=0.62，P4=0.86）；ELISA结果显示，GVs组TNF-α、IL-1β与对照组相比无明显差异（P1=0.48，P2=0.56），肝、脾组织病理切片显示GVs组与对照组相比无明显异常变化。结论 表达GVs的大肠杆菌通过自身稳定表达GVs，能够安全、有效地增强HIFU的消融效果。

• 沉默ATG5及ATG7可抑制顺铂介导的耐顺铂睾丸癌细胞的自噬和增殖

  朱晨露, 杜家如, 姚言雪, 武丹丹, 苑 敏, 干 露, 童旭辉

  目的 观察顺铂作用后，耐顺铂睾丸癌I-10/DDP细胞自噬水平的变化；探讨沉默ATG5、ATG7对顺铂作用后的自噬及细胞增殖的影响。方法 顺铂（15 μmol/L，12 h）作用I-10/DDP细胞后，免疫印迹法检测LC3、p62的表达水平；透射电子显微镜和mCherry-GFP-LC3B双标法检测自噬水平。实验分为转染试剂对照组（Mork组）、阴性对照质粒组（NC组）、转染shRNA-ATG5质粒组（shRNA-ATG5组）、转染shRNA-ATG7质粒组（shRNA-ATG7组），免疫印迹法检测ATG5、ATG7的表达。顺铂（15 μmol/L，12 h）作用转染组细胞后，免疫印迹法检测LC3、p62的表达；透射电子显微镜、mCherry-GFP-LC3B双标法检测自噬水平；MTT法检测细胞存活率；集落克隆实验检测细胞增殖情况。结果 顺铂处理后，I-10/DDP细胞中LC3Ⅱ的表达水平明显增加（P=0.001），p62的表达水平降低（P=0.01），自噬体数量增加。与NC组相比，shRNA-ATG5组、shRNA-ATG5组中ATG5、ATG7的表达量明显降低（P=0.005，P<0.001）。与单用顺铂组相比，shRNA-ATG5组与shRNA-ATG7组细胞用顺铂处理后LC3Ⅱ表达水平明显降低（P<0.001），p62的表达水平明显增加（P<0.001），自噬体数量减少、细胞存活率（P<0.001）及克隆形成能力均降低。结论 沉默ATG5、ATG7后抑制顺铂介导的自噬，增强顺铂抑制细胞增殖的作用。

• 华支睾吸虫来源的分子伴侣rCsHscB对小鼠慢性溃疡性结肠炎有治疗作用

  华 慧, 董 昕, 张雨钊, 方 凡, 张蓓蓓, 李向阳, 于 倩, 郑葵阳, 颜 超

  目的 研究华支睾吸虫来源的分子伴侣rCsHscB对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的小鼠慢性溃疡性结肠炎的作用。方法 诱导大肠杆菌表达体外获得高纯度重组rCsHscB蛋白。将C57BL/6雄性小鼠随机分为NC组（n=10）、rCsHscB组（n=10）、DSS组 （n=15）和DSS+rCsHscB组（n=15），采用2%的DSS常规建立小鼠慢性溃疡性结肠炎模型。rCsHscB组和DSS+rCsHscB组在给予DSS同一周的第4、7天腹腔注射125 μg/mL rCsHscB，NC组和DSS组注射无内毒素PBS。第84天处死小鼠后对结肠组织进行HE和Masson染色，并采用流式细胞术检测外周血和小肠固有层淋巴细胞中CD4+T细胞、CD8+T细胞的表达，ELISA检测结肠匀浆上清中IL-6、IL-10和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）含量，Western blot 检测结肠组织中MAPK信号通路相关蛋白ERK1/2、JNK和P38的磷酸化和非磷酸化水平。结果 与NC组相比，rCsHscB组小鼠未出现不良反应。DSS组小鼠结肠组织病理损伤显著，胶原纤维沉积加重，外周血及小肠固有层淋巴细胞中CD4+T细胞比例升高、CD4+T/CD8+T细胞比值明显上升。结肠匀浆上清中IL-6和MCP-1水平显著升高，IL-10分泌没有明显变化（P=0.11），ERK1/2、JNK和P38的磷酸化水平显著升高；与DSS组比较，DSS+rCsHscB组小鼠结肠组织病理损伤缓解、胶原纤维沉积减少，外周血及小肠固有层淋巴细胞中CD4+T/CD8+T细胞比值明显降低，结肠匀浆上清中IL-6及MCP-1水平显著下降，IL-10水平显著上升（P=0.003），ERK1/2、JNK和P38磷酸化水平显著降低。结论 rCsHscB对小鼠慢性溃疡性结肠炎具有一定的预防改善作用，其可能是通过MAPK抑制促炎因子产生并调控CD4+T/CD8+T细胞平衡来发挥作用的。

• 槟榔多酚对急进高原大鼠具有抗缺氧作用

  霍 妍, 赵安鹏, 宋晶燕, 李加忠, 王 荣

  目的 研究槟榔多酚的抗高原缺氧活性以及在高原缺氧条件下对大鼠各组织的保护作用。方法 将Wistar大鼠按随机数字表法分为6组：平原组、高原组、高原+红景天组、高原+槟榔多酚低剂量组（400 mg/kg）、高原+槟榔多酚中剂量组（800 mg/kg）、高原+槟榔多酚高剂量组（1600 mg/kg），6只/组。各组动物按剂量预防给药3 d后急进海拔4010 m的高原，连续5 d缺氧暴露。取各组大鼠腹主动脉血，测定其动脉血气；完整摘取各组大鼠肝组织、肺组织、脑组织和心肌组织，HE染色观察期病理变化；使用试剂盒测定肝组织、肺组织、脑组织和心肌组织中SOD活力、MDA含量和GSH含量；并使用蛋白质芯片技术，测定血清中差异性表达的炎症因子。结果 与平原组相比，高原组大鼠血氧饱和度明显降低，肝组织、肺组织、脑组织和心肌组织均出现不同程度的损伤，肝、肺组织MDA含量升高，肝、肺、心肌及脑组织中SOD活力降低，肝、肺和心肌组织GSH含量降低，血清中炎症因子MCP-1，TIMP-1，ICAM-1，L-Selectin水平升高（P<0.05）。预防给药红景天及槟榔多酚后，缺氧大鼠的血氧饱和度显著增加（P<0.05），HE染色结果显示各脏器的损伤得到不同程度的缓解，主要组织中MDA含量降低、SOD活力升高、GSH含量升高，血清中差异性表达的炎症因子MCP-1，TIMP-1，ICAM-1，L-Selectin水平明显降低（P<0.05）。结论 槟榔多酚具有抗高原缺氧的活性，并对急进高原大鼠的各脏器具有保护作用，可能是通过提升机体抗氧化能力，减轻机体炎症反应来发挥其抗高原缺氧活性。

• DJ-1通过Nrf2信号通路减轻大鼠脑缺血-再灌注引起的氧化应激损伤

  李 莉, 彭 莉, 朱 进, 巫静娴, 赵 涌

  目的 探讨DJ-1（Park7）在脑缺血再灌注损伤中的抗氧化作用及相关机制。方法 构建SD大鼠大脑缺血再灌注损伤模型，将SD大鼠随机分为假手术组、MCAO 组、Scramble组和 DJ-1 siRNA组、NC组和 Overexpression组。通过DJ-1 siRNA干扰片段干扰DJ-1的表达，以及DJ-1过表达腺相关病毒载体过表达DJ-1的表达。通过测定MCAO/R后各组神经功能学评分和脑含水量，同时应用HE和Nissl 染色法评估脑组织的形态学变化和皮层梗死区神经元的损伤情况，评价 DJ-1 对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。用超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）分析脑组织氧化应激状态。免疫印迹法检测脑组织中 DJ-1，Nrf2，HO-1以及NQO1的表达水平，以及免疫荧光染色法观察Nrf2的表达及核转位情况，探讨DJ-1减轻大鼠脑缺血再灌注氧化应激损伤的可能机制。结果 与 MCAO 组相比，DJ-1 siRNA 组的神经功能学评分（P?0.001）、脑含水量（P?0.001）均明显增加；HE 和Nissl 染色显示脑缺血区神经元损伤进一步加重；SOD 含量进一步降低，MDA 含量进一步增加（P?0.001）；干扰DJ-1后，其蛋白水平明显降低（P=0.003），同时Nrf2及其下游的HO-1和NQO1也明显降低（P?0.001）。而过表达DJ-1以后，其DJ-1 （P=0.006）、Nrf2（P=0.006）及其下游的HO-1（P=0.004）和NQO1明显增加（P=0.014）。结论 DJ-1作为体内重要的神经保护因子，可以减少大鼠脑缺血再灌注氧化应激损伤，并可能是通过激活Nrf2信号通路来实现的。

• 莪术醇通过蛋白激酶信号通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和胶原合成

  袁巍巍, 孙 辉, 于 丽, 王京波

  目的 研究莪术醇（curcumol）对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡和胶原合成的影响及潜在机制。方法 用不同浓度的莪术醇（10、20、40、80、160 mg/L）处理瘢痕疙瘩成纤维细胞（KF）作为不同浓度莪术醇组；用20 μmol/L 蛋白激酶（ERK）信号通路激活剂异丙肾上腺素盐酸盐（ISO）和160 mg/L莪术醇处理KF细胞，记为curcumol 160 mg/L+ISO组，Western blot检测KF细胞中增殖蛋白（Cyclin D1、PCNA）、纤维化标记蛋白（Col1A1、Col3A1、α-SMA）、凋亡蛋白（Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3）、ERK信号通路蛋白（p-ERK1/2、p-MEK、p-c-Raf）表达水平，MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡率。结果 不同浓度的莪术醇（10、20、40、80、160 mg/L）均可降低细胞Cyclin D1、PCNA、Bcl-2蛋白含量，抑制纤维化标记蛋白Col1A1、Col3A1、α-SMA蛋白表达，抑制细胞外调节ERK信号通路蛋白p-ERK1/2、p-MEK、p-c-Raf表达，提高Bax、cleaved caspase-3表达量，抑制KF细胞增殖、胶原合成，促进细胞凋亡，抑制ERK信号通路（P<0.05）。ERK信号通路激活剂ISO（20 μmol/L）可逆转莪术醇（160 mg/L）对KF细胞增殖、凋亡、胶原合成和ERK信号通路的作用。结论 莪术醇通过ERK信号通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡和胶原合成。

• Orexin-A通过激活OX1R、OX2R和非Ca2+依赖的PKC抑制新生大鼠脊髓腹角神经元的γ-氨基丁酸电流

  杨鑫宇, 朱苏月, 靳 娜, 李 妍, 甄 骋, 张环环, 徐爱萍, 汪萌芽, 郑 超

  目的 研究orexin-A对脊髓腹角神经元促离子型γ-氨基丁酸（GABA）受体功能的影响及其机制。方法 选取7~12 d的新生SD大鼠，麻醉后分离出含腰骶膨大的脊髓节段并切片。使用木瓜蛋白酶（Papain，0.18 g/30 mL人工脑脊液）消化切片并孵育40~60 min。显微镜下保留腹角，使用抛光的不同口径的巴斯德吸管急性机械分离单个细胞，待细胞贴壁后，应用膜片钳记录联合药理学方法对状态良好的神经元开展研究。在电压钳模式下记录，结合预处理给药方式，应用GABA受体激动剂γ-氨基丁酸记录在脊髓腹角神经元诱发的电流，给予orexin-A观察其对GABA电流的调制作用，先后给予OX1R选择性拮抗剂SB334867、OX2R选择性拮抗剂TCSOX229、PKC抑制剂Bis-IV、PKC激动剂PMA、PKA抑制剂Rp-cAMP、Ca2+螯合剂BAPTA等药物分析orexin-A对GABA电流调制的作用机制。结果 分离的脊髓腹角神经元形态良好，胞体形状多样，表面光洁，立体感较强且突起较长；给予orexin-A后，GABA诱发的电流幅值被显著制抑（P<0.001，n=49），抑制率为（67.48±12.50）%；同时给予SB334867和TCSOX229可完全取消orexin-A对GABA电流的抑制作用（P=0.93，n=6）；单独应用SB334867（P=0.001，n=8）或TCSOX229（P=0.02，n=8）均部分解除orexin-A对GABA电流的压抑作用；给予Bis-IV后，orexin-A不再压抑GABA电流（P=0.31，n=5）；PMA可模拟orexin-A的作用，显著抑制GABA电流，抑制率为（60.79±10.94）%，在此基础上，orexin-A不能进一步压抑GABA电流（P=0.15，n=6）。给予Rp-cAMP后，orexin-A仍可显著压抑GABA电流（P=0.001，n=5）。在无Ca2+细胞外液（P=0.004，n=8）或胞内应用BAPTA（P=0.04，n=7）时，orexin-A对GABA电流的压抑作用不受影响。结论 Orexin-A抑制脊髓腹角神经元的GABA电流，该效应可能经由OX1R和OX2R共同介导以及非Ca2+依赖的PKC信号通路的参与。

• 热打击可通过调控内质网应激通路促进神经细胞凋亡

  高经华, 刘亚伟, 吉晶晶, 刘志锋

  目的 研究内质网应激通路在热打击导致神经元细胞凋亡的作用。方法 体外培养神经元SH-SY5Y细胞，设置正常对照组和实验组。正常对照组：始终37 ℃培养，实验组：细胞培养箱设置43 ℃，热打击2 h后，置回37 ℃细胞培养箱复温0、3、6 h。光学显微镜观察细胞形态变化；CCK8法检测细胞活力；流式细胞术检测热打击后细胞凋亡情况;流式细胞术和免疫荧光共聚焦显微镜检测和观察细胞内钙离子水平；qRT-PCR检测Caspase-12、BIP和XBP-1的RNA表达水平；Western blot检测内质网应激通路相关蛋白Caspase-12、BIP、P-JNK、JNK和XBP-1的蛋白表达；利用4-苯基丁酸(4-PBA)预处理后，检测热打击后细胞凋亡水平。结果 热打击后复温0 h，细胞收缩明显，随着复温时间延长，细胞逐渐伸展；热打击后细胞活力明显下降（P=0.001）；热打击后细胞内钙离子显著上调并随复温时间延长而恢复；热打击后细胞Cleaved-caspase3蛋白水平增加，内质网应激通路相关蛋白Caspase-12（P=0.002）和BIP（P=0.008）蛋白水平和mRNA水平增加并有时间依赖性，P-JNK/JNK蛋白水平在复温0 h显著增加（P=0.003），并随着复温时间延长而逐渐减少。XBP-1蛋白和mRNA水平在热打击后逐渐减少（P=0.005，P=0.002），而4-PBA处理组，细胞中Cleaved-caspase3表达水平明显降低。结论 热打击可通过诱发内质网应激及促进胞内钙离子稳态失衡而促进神经细胞发生凋亡。

• 血清 ADAMTS13、TSP1 与急性冠脉综合征患者心肌损伤和临床预后的相关性

  姚卓亚, 包炳蔚, 钱少环, 李 正, 路 桥, 闵生萍, 李妙男, 王洪巨

  目的 观察血清血管性血友病因子裂解蛋白酶（ADAMTS13）及凝血酶敏感蛋白1（TSP1）在不同类型急性冠脉综合征（ACS）患者中的水平及与临床预后之间的相关性。方法 入选405例我院行冠状动脉造影患者，根据病史、造影结果和临床生化指标分为：不稳定型心绞痛组（UAP组，n=215）、急性心肌梗死组（AMI组，n=96）和造影正常组（N组，n=94）。检测患者的血清ADAMTS13、TSP1水平；对两组患者进行约15月的随访，评估两组患者远期主要心脏不良事件（MACE）的发生情况。结果AMI组、UAP组患者血清ADAMTS13水平显著低于N组（P<0.001），TSP1水平显著高于N组（P<0.001）；相关性分析显示，ACS患者血清ADAMTS13与TSP1呈显著负相关（R=-0.577，P<0.001）。随访平均15月后发现MACE组患者血清TSP1水平与非MACE组有显著差异（P<0.05）；Cox比例危险回归显示TSP1是影响ACS患者发生MACE的风险因素；K-M生存曲线显示高TSP1组较低TSP1组远期MACE发生率更高。结论 血清ADAMTS13水平的降低、TSP1水平的升高对ACS的诊断具有一定参考价值；TSP1可预测患者发生MACE的风险。

• 芳香烃受体通过介导Th17/Treg分化调控蟑螂过敏原诱导的哮喘

  许 婷, 崔 壮, 王俊洁, 冯 媛, 谢 仁, 李丹青, 彭 婧, 黄 蓉, 李涛平

  探讨芳香烃受体（AhR）是否能够通过介导肺内Th17/Treg细胞的分化来调控蟑螂过敏原（CRE）诱导的哮喘。方法 通过蟑螂过敏原激发和致敏，建立哮喘小鼠模型。部分哮喘小鼠给予 AhR 激动剂（TCDD）(10 μg/kg)或 AhR 拮抗剂（CH223191）（10 mg/kg）刺激。实验小鼠分为4组：对照组、哮喘组（CRE）、AhR激活组（CRE+TCDD）及AhR拮抗组（CRE+TCDD+CH223191）。通过RT-PCR检测哮喘小鼠肺内AhR及其下游Cyp1a1和Cyp1b1基因的表达；免疫组化染色观察哮喘小鼠肺内炎症变化；酶联免疫吸附试验（ELISA）监测炎症细胞因子的表达；采用流式细胞术检测肺及纵膈淋巴结中Treg的表达。结果 TCDD和CH223191能够调控哮喘小鼠肺内AhR及其下游基因Cyp1a1和Cyp1b1的表达（P<0.002）；AhR激活后肺内炎症细胞及粘液分泌较CRE组减少，促炎因子IL-4、IL-13和Th17A表达减少（P<0.001），而抑炎因子IL-10、IL-22和TGFβ1表达增加（P0.05）；AhR激活后肺及纵膈淋巴结中Treg细胞及其转录因子FOXP3表达明显增加（P<0.001），Th17细胞转录因子RORγt基因表达水平明显降低（P<0.001），而拮抗AhR后，与激活组相比，肺及纵膈淋巴结中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞及其转录因子FOXP3表达减少（P<0.001），RORγt基因表达水平增加（P0.05）。结论 AhR通过介导Th17/Treg细胞分化来调控哮喘小鼠肺部炎症。

• 姜黄素通过 Wnt/β-catenin 信号通路诱导人晶状体上皮细胞的凋亡和细胞周期阻滞

  朱梦云, 崔双慧, 郝泽宇, 王文锐, 杨清玲, 陈昌杰, 王剑锋, 周 琦

  目的 探讨姜黄素对人晶状体上皮细胞株SRA01/04（HLEC-SRA01/04）细胞周期和凋亡的影响及其相关分子机制，为姜黄素治疗和预防后发性白内障提供理论依据。方法 体外培养HLEC-SRA01/04细胞，加入终浓度分别为0 μmol/L（对照组）以 及20、40和60 μmol/L的姜黄素处理孵育24 h或48 h后，MTT法检测各组细胞的增殖抑制率；流式细胞仪检测HLEC-SRA01/04细胞周期、线粒体膜电位和细胞凋亡率；Western blot法检测姜黄素对HLEC-SRA01/04细胞中caspase-9、caspase-3、Bcl-2、Bax、Cyclin B1、CDK1、β-catenin、c-myc、Cyclin D1蛋白水平表达的影响。结果 MTT显示：随着姜黄素的浓度逐渐增加，HLEC-SRA01/04细胞较对照组抑制率逐渐增高（P<0.001）；随着作用时间的延长，各实验组HLEC-SRA01/04细胞增殖抑制率均逐渐增高（P<0.001）；流式细胞仪结果显示：各组中HLEC-SRA01/04细胞凋亡率和细胞G2/M期比例随姜黄素浓度增加逐渐增高，而线粒体膜电位随着姜黄素浓度增加逐渐下降（P<0.001）。Western blot 实验显示：随着姜黄素浓度的增加，HLEC- SRA01/04细胞中caspase-3、caspase-9和Bax的表达量逐渐增高，Bcl-2、Cyclin B1、CDK1和β-catenin的表达量逐渐降低，同时Wnt/β-catenin信号通路下游靶蛋白Cyclin D1和c-myc表达量也逐渐降低。结论 姜黄素可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路进而抑制HLEC-SRA01/04细胞增殖，并将细胞周期阻滞在G2/M期，从而诱导其凋亡。

• 木犀草素显著减轻镉诱导的肺上皮Beas-2B细胞的损伤

  储 娜, 张 璇, 陈思远, 甄 泉, 王 允

  目的 研究木犀草素（LUT）对镉（Cd）诱导的人肺上皮Beas-2B细胞损伤的保护作用。方法 用不同浓度的木犀草素（0~160 μmol/L）或镉（0 ~40 μmol/L）处理Beas-2B细胞24 h，用MTT法检测细胞活性。用木犀草素（0.25、0.50和0.75 μmol/L）和/或 镉（5 μmol/L）处理Beas-2B细胞24 h，用MTT法检测细胞活性；用LD-L 微板法检测细胞乳酸脱氢酶（LDH）活性；用Hoechst荧光染色法观察细胞核形态变化；用DCFH-DA法测定细胞ROS水平；用WST-8法测定细胞SOD水平；用TBA法测定细胞GSH水平；用DTNB法测定细胞MDA水平，用Western blot检测细胞Akt、p-Akt和核因子E2相关因子2（Nrf2）蛋白的表达水平。结果 木犀草素在一定浓度范围内（0~80 μmol/L）不影响Beas-2B细胞的存活率（P>0.05），镉在5 μmol/L浓度水平时即可显著抑制Beas-2B细胞的生长（P<0.05），半数抑制浓度为24.6 μmol/L。木犀草素干预可不同程度地减轻镉处理引起的Beas-2B细胞活力的降低（P<0.05），减少镉处理组细胞LDH的释放量（P<0.05），改善镉处理组细胞的凋亡情况，抑制镉处理组细胞ROS水平的升高（P<0.05），增强镉处理组细胞SOD活性（P<0.05）和GSH含量（P<0.05），减少镉处理组细胞MDA的产生（P<0.05）。此外，木犀草素（0.5和0.75 μmol/L）干预可上调镉处理组细胞p-Akt和Nrf2的蛋白表达水平（P<0.05）。结论 木犀草素可显著减轻镉诱导的Beas-2B细胞的损伤，其机制可能与p-Akt和Nrf2蛋白表达水平的上调有关。

• 靶向卵巢癌细胞的miR-16/多肽纳米递释系统的制备及其功能验证

  黎权辉, 岑柏宏, 黄 文, 陈佳扬, 陈章浦, 庞建新, 付卫明, 贺 帅, 季爱民

  目的 研制增强顺铂敏感性的miR-16/多肽纳米递释系统，实现miRNA的卵巢癌靶向给药并验证其功能。方法 合成R9-SS-R9及cRGD-R9-SS-R9多肽，并与miR-16 mimic分子自组装形成纳米递释系统。利用琼脂糖凝胶电泳技术、粒径电位仪及透射电镜，测定纳米粒的稳定性、粒径、电位及形态等表征结果。利用CCK-8检测多肽对细胞的毒性。利用茎环qRT-PCR技 术、活细胞成像技术验证纳米粒的摄取效率及细胞内分布。利用流式细胞术及Western blot技术，验证纳米粒增强卵巢癌细胞顺铂敏感性的作用及其机制。结果 成功制备R9-SS-R9/miR-16、cRGD-R9-SS-R9/miR-16纳米粒，以5∶1的多肽/miRNA重量配比制得的纳米粒粒径在150 nm以下，分散指数小于0.1，电位约为40 mV，血清稳定性良好。多肽材料无明显的细胞毒性。miR-16/多肽纳米粒可被人卵巢癌细胞充分摄取并分布在细胞质中，且显著提高细胞内miR-16分子的表达水平（P<0.001），降低细胞中Bcl-2、Chk-1蛋白表达，实现miR-16的促细胞凋亡以及增强细胞对顺铂敏感性的作用。结论 成功制备了miR-16/多肽纳米递释系统，且该系统具有增强卵巢癌顺铂敏感性的功能。

• 沉默FASN基因对肝母细胞瘤HepG2细胞的脂质代谢及增殖、迁移和凋亡的影响

  黄慧敏, 魏 英, 王靳琎, 冉凤英, 陈琴华

  目的 研究FASN基因沉默对肝母细胞瘤HepG2细胞脂质代谢及生物学行为的影响。方法 以脂质体包裹siRNA的方法沉默FASN基因，实验分为Control组、NC-siRNA组和FASN-siRNA组，FASN-siRNA组转染75 nmol/L的FASN-siRNA片段，NC-siRNA组转染等剂量的NC-siRNA片段，Control组只加入等体积的转染试剂。通过实时荧光定量PCR和Western blot法检测FASN基因和蛋白水平的相对表达；通过酶联免疫吸附法检测HepG2细胞甘油三酯水平；通过油红O染色法检测细胞内脂滴数目；利用CCK-8实验检测HepG2细胞增殖活性的改变；通过annexinV-FITC/PI双染色法检测HepG2细胞凋亡情况；采用划痕愈合实验及transwell实验检测HepG2细胞迁移能力的改变。结果 FASN-siRNA组的FASN基因表达、蛋白表达低于NC-siRNA组（P<0.001）。油红O染色显示，FASN-siRNA组细胞内脂滴较NC-siRNA组减少（P<0.001）、甘油三酯水平降低（P< 0.01）；CCK-8实验、annexinV-FITC/PI双染实验及划痕愈合实验结果显示，转染48、72、96 h后，FASN-siRNA组HepG2细胞增殖被显著抑制，FASN-siRNA组细胞总凋亡率与NC-siRNA组相比增加、FASN-siRNA组发生迁移的HepG2细胞数量低于NC-siRNA组（P<0.001）。结论 沉默FASN基因可抑制肝母细胞瘤HepG2细胞的增殖及迁移，并诱导HepG2细胞凋亡，该作用可能与FASN基因抑制后HepG2细胞内脂质合成降低有关。

• 旋髂深动脉穿支的解剖与旋髂深动脉穿支嵌合髂骨皮瓣修复下颌骨复合缺损

  陈永锋, 洪 虓, 刘 亮, 展昭均, 李孝亮, 蒲春华, 陈士文, 廖圣恺

  目的 探讨旋髂深动脉（DCIA）穿支血管的解剖与如何提高以旋髂深动脉穿支嵌合髂骨皮瓣(DCIAPF)修复下颌骨复合缺损的临床应用效果。方法 对6具12侧乳胶灌注动脉血管的成人标本进行解剖，显露DCIA及其穿支血管，观察穿支血管的起始部位、分布、数量及走向，并测量其起始处血管外径。结合解剖学结果和影像学检查，并在数字化手术导板辅助下，设计及切取DCIAPF，修复4例下颌骨体部及软组织复合缺损。结果 DCIA穿支血管分为腹壁肌支、肌骨支和肌皮穿支。腹壁肌支全由DCIA的腹股沟段发出的占66.7%，腹股沟段和髂骨段均有穿支发出的占33.3%。肌骨支全由髂嵴内段发出占75%，腹股沟段和髂嵴内段均有穿支发出的占25%，且发自腹股沟段的穿支均为1支。肌皮穿支为1支的占58.3%，为2支的占41.7%。临床应用4例DCIAPF均成活，供区伤口恢复良好。术后1月，患者面部外形及口腔形态恢复满意，咬合关系良好，供区无明显功能障碍，影像学检查示下颌骨缺损重建效果好。结论 熟悉DCIA穿支血管的解剖特点，结合影像学检查，在数字化外科技术辅助下，有助于更好的切取DCIAPF和修复下颌骨（体部或下颌角）及口腔软组织缺损。

• 稳定过表达XAF1基因对A2780卵巢癌细胞生物学功能的影响

  刘 娟, 刘星辰, 魏宝宝, 刘 洁, 王悦华, 刘 辉

  目的 构建稳定过表达XAF1基因A2780卵巢癌细胞株，并观察XAF1基因对卵巢癌细胞增殖、凋亡、细胞周期及对紫杉醇敏感性的影响。方法 分别将质粒pcDNA3.1（+）和pcDNA3.1（+）-XAF1转染至卵巢癌细胞A2780，通过质粒抗性标记（遗传霉素G418）筛选得到阴性对照细胞株（A2780/Negative control, A2780/NC）和稳定表达XAF1的细胞株（A2780/XAF1）；通过行细胞克隆形成实验和CCK8实验检测细胞增殖及对紫杉醇的敏感性，流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡。结果 成功构建了稳定表达XAF1的卵巢癌细胞A2780/XAF1，细胞形态无明显变化；与A2780/NC相比，A2780/XAF1克隆形成能力能力更低（P= 0.0016），细胞贴壁后第1天和第3天增殖活性更低（P=0.009，0.0035），两组细胞的细胞周期分布差异存在统计学意义（P< 0.0001），两两比较结果显示A2780/XAF1组G2-M期细胞百分比显著增加（P<0.001）。在无凋亡刺激、无血清培养及紫杉醇诱导下，A2780/XAF1的凋亡率均比A2780/NC更高（P<0.001）；在不同紫杉醇浓度作用下，A2780/XAF1的增殖活性均显著低于A2780/NC（P<0.001），且A2780/XAF1的紫杉醇半数抑制浓度显著低于A2780/NC。结论 成功构建稳定表达XAF1的卵巢癌细胞A2780/XAF1；XAF1调控卵巢癌细胞A2780的增殖、凋亡及细胞周期，并增加了卵巢癌对紫杉醇的敏感性。

• 触发采集式三维超声成像系统的设计与实现

  许程耀, 李赣萍, 黄庆华, 杨豪豪, 王 青, 冯前进

  目的 实现基于VerasonicsTM Vantage128开放式超声平台的触发采集式三维超声成像系统，验证该系统的三维超声成像可行性。方法 触发采集式三维超声成像系统由探头运动控制、图像采集存储以及三维重建显示三部分组成。为提升图像采集的精度，该系统通过采集脉冲控制超声平台外部触发，配合探头机械扫描，完成图像采集；并采用基于体素的三维重建方法进行图像重建与显示；最后，自编超声平台的用户控制界面，直接调控系统各部分功能，并进行标准体模扫描测试以及人体颈动脉扫描，进而评估体模与颈动脉的三维重建效果。结果 本研究构建了触发采集式三维超声成像系统，标准体模扫描测试及颈动脉三维成像实验结果显示，该系统的各部分具备应有功能，可通过自编用户控制界面控制系统软件，对待测物体进行扫描、图像采集和重建显示，得到完整清晰的三维视图和三方向切面图。结论 本文所设计和实现的三维超声成像系统能够实现对体模与生物组织的三维超声成像，为后续相关研究和临床应用奠定了良好基础。

• 富血小板血浆可减轻大鼠急性心肌缺血-再灌注损伤

  王德奖, 李 挺, 徐颖怡, 杨雪雯, 何铭垣, 张智勇, 吴 炜, 燕 翼

  目的 探讨富血小板血浆（PRP）对急性缺血-再灌注损伤心肌的保护作用及其机制。方法 制备PRP并测量PDGF-BB和TGF-β1的浓度；SD大鼠乳鼠心肌细胞缺氧3 h后，在复氧条件下分别用1%、5%、10%、20%体积的PRP共培养细胞12 h，检测细胞活力，同时对心肌细胞进行免疫荧光染色，提取蛋白检测AMP依赖的蛋白激酶（AMPK）及其磷酸化水平；检测PRP对大鼠主动脉内皮细胞增殖及迁移的影响；以SD大鼠建立心肌缺血-再灌注损伤模型，在恢复灌注后立刻在结扎部位周围四个部位注射100 μL的PRP（PRP组，n=20）或生理盐水（Control组，n=20），1 d后各组随机选6只大鼠取材心脏行TTC染色并测量肌钙蛋白I的浓度，其余动物1周后通过超声心动图检测心功能，并取材心脏进行HE染色；体外对RAW264.7细胞缺氧3 h，分别给予PRP或生理盐水作用24 h后行流式细胞仪检测M1和M2型巨噬细胞的极化情况。结果 PRP中PDGF-BB和TGF-β1的浓度显著高于全血，1%体积PRP可以显著减少缺氧-复氧所导致的心肌细胞死亡，其保护作用与AMPK的激活密切相关；PRP促进内皮细胞的增殖与迁移；动物实验中PRP组梗死面积和肌钙蛋白I浓度均小于生理盐水组（P<0.001），超声显示PRP组心功能明显改善，HE染色示缺血区域炎症反应较生理盐水组明显减轻；RAW264.7细胞经PRP处理M1型巨噬细胞减少，M2型巨噬细胞增多。结论 PRP通过促进AMPK磷酸化及巨噬细胞免疫调节作用来改善大鼠心肌急性缺血-再灌注损伤区域的炎症微环境，从而起到心肌保护的作用。

• 1H-MRS、Dixon水脂分离与Z谱成像技术在大鼠棕色脂肪上的量化比较

  蔡子萌, 易佩伟, 陶 泉, 冯衍秋

  目的 比较1H-MRS、Dixon水脂分离与Z谱成像技术在体模以及大鼠棕色脂肪上的脂肪量化结果。方法 首先，制作6个脂肪含量分别为0%、20%、40%、60%、80%、100%的油水混合体模，共同放置于50 mL离心管内。依次采用ZS-MRI、1H-MRS和Dixon水脂分离技术对体模的脂肪含量进行定量评估，其结果与体模脂肪真实值相比较。其次，使用ZS-MRI和Dixon水脂分离技术分别采集了六只大鼠肩胛间的数据，并计算出水脂分布图，并将结果与1H-MRS定量结果进行比较。结果 ZS-MRI可以很好地准确定量并区分出各个不同脂肪含量的体模（Y=0.95*X+1.48）；能较好地区分棕色脂肪与白色脂肪，并与Dixon方法得到的脂肪含量在空间分布上高度一致。在棕色脂肪的量化上，ZS-MRI结果 与1H-MRS结果相比无显著性差异（P=0.35）。结论 ZS-MRI作为一种新的脂肪定量方法，可以生成无伪影的脂肪分布图，用于定量测量大鼠体内棕色脂肪的含量以及分布。

• 表现型为视神经萎缩的NDUFV1基因新移码突变

  张智科, 袁慧君, 张水馨

  目的 对一个视神经萎缩的儿童进行致病基因研究，并分析其对蛋白结构的影响。方法 收集该患儿及家属病历资料，进行视力、视野、眼底、OCT、VEP等眼科检查，及神经科查体、头颅MRI等全身检查，并随访1年。采集患儿及家长外周血，提取DNA进行全外显子的二代基因测序，并对突变基因进行致病性分析和蛋白结构分析。结果 患儿表现为双眼视力下降、视神经萎缩，VEP呈低振幅，无明显感觉及、肌张力异常，头颅MRI未发现明显脑白质病变。DNA测序显示编码线粒体复合物I（complex I）的核基因NDUFV1基因外显子1中出现杂合的移码突变c.53_54delTG，缬氨酸变为丙氨酸，引起新读码框在20位置过早形成终止编码（p Val18AlafsX20）；内含子8中存在杂合的点突变（c.1162+4A>C）。蛋白结构分析显示complex I的NDUFV1亚单元重要结构缺失。结论 在儿童视神经萎缩且无脑白质异常的病例中，发现新的NDUFV1基因突变，有助于拓宽对NDUFV1基因表现型和基因型关系的认识。

• 体外膜肺氧合对抗菌药物药代动力学影响的研究进展

  章 媛, 曾振华, 张 庆, 欧 庆, 陈仲清

  体外膜肺氧合（ECMO）技术是一种为严重呼吸或心力衰竭的重症患者提供生命支持的有效辅助手段。较多研究报道ECMO可能通过对药物的吸附、增大药物的表观分布容积及改变药物的清除率等方式来影响部分药物的代谢过程。本文总结了ECMO对抗细菌药物和抗真菌药物药代动力学影响的现有体内及体外研究。在抗细菌药物中，当前研究建议ECMO期间需要增加替考拉宁、亚胺培南和利奈唑胺的常规用药剂量，而暂可沿用阿奇霉素、环丙沙星、替加环素的常规用药剂量。目前对于抗真菌药物在ECMO期间药代动力学变化的研究较为有限，伏立康唑因其高亲脂性被ECMO大量吸附，建议使用更高剂量；米卡芬净在儿童ECMO患者中需要增加剂量；而卡泊芬净和氟康唑目前研究有限，尚不明确是否需要常规调整剂量。