南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2023年第4期

• 原发性中枢神经系统淋巴瘤复发或进展模式的回顾性、单中心分析：是否可以替换全脑放疗？

  秦 悦, 刘蓉萍, 张效楠, 张 湾, 任 陈, 吴德华

  目的 回顾我院未经全脑放疗（WBRT）治疗的原发性中枢性淋巴瘤（PCNSL）患者的复发/进展模式，评估WBRT在PCNSL治疗中的作用。方法 采用回顾性单中心研究，确定了27例符合纳入标准的PCNSL患者。通过比较患者初诊时和复发/进展时强化病灶的解剖位置，分析不同治疗反应和不同病灶初始状态患者的复发/进展模式。结果 基于MRI影像学资料对PCNSL患者化疗后复发模式的探索性分析显示，16例（16/27，59.26%）患者复发/进展部位为野外但在WBRT靶区内，11例（11/27，40.74%）患者的复发/进展部位为野内；所有患者均未出现颅外播散。在未经WBRT但初治后达到完全缓解（CR）的11例患者中，9例（81.82%）复发位于野外但在WBRT靶区内。在13例单个初始病灶的患者中，11例（84.62%）复发/进展出现在野外但在WBRT靶区内。结论 全身治疗联合WBRT仍是PCNSL患者的治疗标准，尤其是对于治疗后达到CR或只有单一初始病灶的患者。有必要进行更大样本的前瞻性研究，进一步探讨低剂量WBRT在PCNSL治疗中的作用。

• 益肺健脾方降低香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞的炎性损伤和黏液高分泌：基于抑制TLR4/NF-κB信号通路

  徐 晨, 李春颖, 王 胜

  目的 探究益肺健脾方通过TLR4/NF-κB信号通路改善人支气管上皮细胞（16HBE）炎性损伤和黏液高分泌的机制。方法 将40只SD大鼠随机分为两组：空白血清组、含药血清组，20只/组，对空白血清组和含药血清组大鼠分别以生理盐水、益肺健脾方药液灌胃，末次灌胃后对大鼠进行麻醉并于无菌状态下腹主动脉采血收集益肺健脾方含药血清；自制气体抽吸泵制备香烟烟雾溶液（CSE），刺激人支气管上皮细胞16HBE，并用CCK8法筛选CSE和益肺健脾方含药血清干预慢性阻塞性肺疾病细胞模型的最佳作用浓度以及最佳作用时间；qRT-PCR法检测TLR4基因沉默和过表达对16HBE中TLR4 mRNA的表达；Western blot法和qRT-PCR法检测益肺健脾方对TLR4沉默和过表达后TLR4、NF-κB、MUC5AC、MUC7、MUC8 mRNA和蛋白表达的影响；ELISA法检测细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的表达。结果 选择20%含药血清作用24 h作为益肺健脾方最佳给药浓度及给药时间；与CSE组相比，CSE+含药血清组的TLR4、NF-κB、MUC5AC、MUC7、MUC8 mRNA及相应蛋白的表达显著降低；与CSE+含药血清组相比，CSE+siRNA-TLR4+含药血清组的TLR4、NF-κB、MUC5AC、MUC7、MUC8 mRNA及相应蛋白的表达降低；与CSE+Lv-TLR4组相比，CSE+Lv-TLR4+含药血清组的TLR4、NF-κB、MUC5AC、MUC7、MUC8 mRNA及相应蛋白的表达显著降低；与CSE+含药血清组相比，CSE+Lv-TLR4+含药血清组的TLR4、NF-κB、MUC5AC、MUC7、MUC8mRNA及相应蛋白的表达显著升高（P<0.05）；与CSE组相比，CSE+含药血清组的TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8炎症因子水平下降（P<0.05）；结论 益肺健脾方可干预TLR4/NF-κB信号通路，作用于COPD细胞模型，降低MUC的分泌抑制COPD气道炎症和黏液高分泌，降低与NF-κB信号通路相关的TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8炎症因子的表达，其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路的基因及MUC蛋白表达有关。

• RT-PCR/CRISPR-Cas12a快速检测和区分SARS-CoV-2Omicron BA.4/5变异株

  马玉楠, 邹丽容, 梁源浩, 刘泉汛, 孙 倩, 庞玉莲, 林洪青, 邓小玲, 唐时幸

  目的 建立一种基于CRISPPR-Cas12a基因编辑技术对新型冠状病毒（SARS-CoV-2）奥密克戎BA.4/5变异株快速检测与鉴别的方法。方法 结合逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）与 CRISPR 基因编辑技术，基于次优原间隔区相邻基序（suboptimal-PAM）设计奥密克戎BA.4/5变异株特异性的CRISPR RNA（crRNA），从而建立RT-PCR/CRISPR-Cas12a快速检测新冠病毒BA.4/5变异株的方法。本研究检测了43例新冠病毒阳性的临床样本（包括新冠病毒野生株以及变异株Alpha、Beta、Delta、奥密克戎BA.1和BA.4/5）以及20例新冠病毒阴性的临床样本（包括11种常见呼吸道病原体），并以测序结果为金标准计算PCR/CRISPR-Cas12a检测方法的ROC 曲线下面积（AUC）以及灵敏度（SEN）、特异性（SPE）、一致性（Kappa）评价检测方法的性能。结果 本研究筛选到两条特异性crRNA-1和crRNA-2，所建立的方法可在30 min内快速特异地检测出SARS-CoV-2奥密克戎BA.4/5变异株，最低检测限为10 copies/μL。此外，在检测感染11种常见呼吸道病原体的临床样本时均未观察到非特异性交叉反应。基于crRNA-1和crRNA-2的检测结果的灵敏度分别为97.83%、100%；特异性均为100%；ROC 曲线下面积分别为 0.9989 和 1.0；与 Sanger 测序方法的一致性分别为 92.83%、96.41%。结论 本研究采用 CRISPPR-Cas12a基因编辑技术与逆转录聚合酶链式反应相结合，成功建立了一种快速检测与鉴别SARS-CoV-2奥密克戎BA.4/5变异株的新方法。其特异性强、灵敏度高、稳定性好，可用于新冠病毒奥密克戎BA.4/5变异株的批量检测与分型，可用于常规监测和跟踪SARS-CoV-2变异的传播。

• 高表达MYH9通过激活AKT/c-Myc通路抑制非小细胞肺癌细胞凋亡

  刘 芳, 彭岚竹, 席菁乐

  目的 探讨肌球蛋白重链9（MYH9）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖、凋亡和对顺铂敏感性的影响并探讨其作用机制。方法 常规培养6株NSCLC细胞系（A549、H1299、H1975、SPCA1、H322、H460）和1株正常支气管上皮细胞系（16HBE）采用Western blot法检测MYH9的表达情况；采用免疫组织化学染色法检测NSCLC患者组织MYH9的表达，实验分为癌组织（49例）和癌旁组织（43例）；常规培养H1299和H1975细胞系，使用CRISPR/Cas9技术构建MYH9敲除的NSCLC细胞系，实验分为sgNC组，sgMYH9组，采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）、克隆形成实验检测敲除MYH9对肺癌细胞增殖的影响；Western blot实验、细胞凋亡流式细胞术检测MYH9对细胞凋亡的影响；通过IC50法检测敲除MYH9的肺癌细胞对顺铂敏感性的影响，实验分为sgNC组、sgMYH9组；培育小鼠肿瘤异种移植物模型验证MYH9体内生物学功能，实验分为sgNC组、sgMYH9组。结果 与癌旁组织相比，MYH9在癌组织中上调（P<0.001），高表达患者具有更短的生存（P=0.023）。敲除MYH9抑制细胞增殖（P<0.001），促进细胞凋亡（P<0.05），增加对顺铂的化学敏感性。此外，MYH9的耗竭显著抑制了体内肿瘤生长（P<0.001）。分子机制表明，敲除MYH9使AKT/c-Myc轴失活（P<0.05），从而抑制BCL-2样蛋白1的表达（P<0.05），促进BH3相互作用结构域死亡激动蛋白和凋亡调节剂BAX的表达（P<0.05），并激活胱天蛋白酶3和胱天蛋白酶9（P<0.05）。结论 MYH9通过AKT/c-Myc轴调节细胞凋亡，从而促进NSCLC进展。

• MicroRNA-431-5p在胃癌组织中低表达：基于线粒体和Bax/Bcl-2/caspase3信号通路

  吴佳明, 邓忠权, 朱 奕, 窦广健, 李 进, 黄立勇

  目的 探究microRNA-431-5p（miR-431-5p）在胃癌细胞的表达特点及其对胃癌细胞凋亡及线粒体功能的影响。方法 荧光定量PCR检测miR-431-5p在50例胃癌组织及癌旁组织中的表达，并分析其与患者临床病理特征的关系。采用脂质体转染技术构建miR-431-5p过表达组细胞（miRNA mimics）及对照组细胞（NC mimics），分别采用CCK-8、流式细胞术、荧光探针标记以及ATP检测试剂盒评估miR-431-5p对MKN-45细胞线粒体数量、膜电位完整性、通透性转换孔开放程度、活性氧生成水平以及ATP含量的影响，Western blot检测MKN-45细胞内凋亡蛋白表达水平的变化。结果 miR-431-5p在胃癌组织中的表达水平较癌旁组织明显下调（P<0.001），其表达水平与患者的肿瘤分化程度（P=0.0227）、T 分期（P=0.0184）、N分期（P=0.0005）、TNM分期（P=0.0414）和血管侵犯（P=0.0107）密切相关。细胞功能实验显示：过表达miR-431-5p抑制MKN-45细胞增殖能力并诱导细胞凋亡，miR-431-5p过表达后MKN-45细胞内线粒体数量减少、膜电位完整性下降、通透性转换孔开放程度增加，ROS生成增多，ATP含量降低。Western bot显示：miR-431-5p过表达后MKN-45细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调，而促凋亡蛋白p53、Bax以及cleaved caspase 3表达上调。结论 miR-431-5p低表达于胃癌组织，其可能通过介导Bax/Bcl-2/Caspase3信号通路，继而抑制胃癌细胞线粒体功能并促进细胞凋亡，是胃癌潜在的治疗靶点。

• HSDL2高表达促进直肠癌细胞增殖：基于激活CDK6/cyclinD1信号通路

  程 阳, 何旭旭, 王 炼, 许轶博, 沈梦迪, 张文静, 夏勇生, 张 婕, 张 敏, 王宜君, 胡建国, 张 军

  目的 明确羟基类固醇脱氢酶样蛋白2（HSDL2）在直肠癌组织中的表达及对癌细胞增殖能力的影响。方法 基于前瞻性临床数据库和生物标本库系统分析2020年1月~2022年6月我院收治的90例直肠癌患者的临床资料。采用免疫组化法检测90例直肠癌组织与癌旁组织中HSDL2的表达水平。根据HSDL2表达中位数分为高表达组（n=45）与低表达组（n=45），分析其与肿瘤临床病理参数间的关系。基于GEO数据库，对HSDL2进行GO功能注释和KEGG通路富集，分析HSDL2在直肠癌中潜在的生物学功能和作用机制；分别采用慢病毒NC、Si-HSDL2与LV-HSDL2转染SW480细胞，CCK8法检测各组细胞增殖能力，流式细胞术检测HSDL2对细胞周期的影响，免疫印迹法检测细胞周期相关蛋白的表达。结果 直肠癌组织中HSDL2的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.05）。Spearman相关性分析显示HSDL2、Ki67蛋白与血CEA、血CA19-9水平均呈正相关（P<0.01）。HSDL2高表达组患者的T3-4期、N2-3期、血CEA≥5 μg/L与血CA19-9≥37 kU/L比例明显高于低表达组（P<0.05）。GO分析显示HSDL2主要富集到DNA复制等生物学过程。KEGG富集显示HSDL2主要参与细胞周期等信号通路。上调HSDL2表达显著促进SW480细胞的体外增殖能力（P<0.05），同时促进S期细胞比例（P<0.05）与细胞周期相关蛋白CDK6、CyclinD1的表达（P<0.05）；下调HSDL2则抑制细胞增殖、S期细胞比例与CDK6、CyclinD1的表达（P<0.05）。结论 HSDL2在直肠癌组织中高表达，与直肠癌恶性进展相关，并促进直肠癌细胞增殖能力，影响细胞周期进程。

• 小檗碱抑制类风湿关节炎患者的成纤维样滑膜细胞的自噬并促进其凋亡：基于下调ROS/mTOR信号通路

  宗世烨, 周 静, 蔡伟伟, 余 芸, 王 颖, 宋宜宁, 程静文, 李宇会, 高 艺, 吴百海, 咸 郝, 魏 芳

  目的 探究小檗碱（BBR）对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLSs）凋亡/自噬失衡的调控作用及机制。方法 CCK-8法检测BBR对RA-FLSs的增殖抑制作用，实验设空白对照组、TNF-α（25 ng/mL）组、TNF-α+BBR（10、20、30、40、50、60、70、80 μmol/L）组，Annexin V/PI双染流式法和JC-1免疫荧光染色检测BBR对RA-FLSs凋亡的影响，Western blot检测BBR对RA-FLSs自噬和凋亡相关蛋白表达水平的影响。进一步增加自噬诱导剂RAPA和自噬抑制剂氯喹（CQ）作为对照，激光共聚焦检测mCherry-EGFP-LC3B观察自噬流变化；并设置活性氧（ROS）模拟物H2O2和ROS抑制剂NAC观察BBR对ROS、mTOR、p-mTOR水平的影响。结果 CCK-8结果显示BBR可呈时间和浓度依赖性抑制RA-FLSs增殖活力，流式和JC-1染色结果显示BBR（30 μmol/L）可显著增加 RA-FLSs 凋亡率（P<0.01），降低线粒体膜电位（P<0.05）。Western blot结果显示BBR处理后Bcl-2/Bax（P<0.05）和LC3B-Ⅱ/Ⅰ（P<0.01）的比值降低，p62 蛋白表达升高（P<0.05）。mCherry-EGFP-LC3B自噬流检测结果也显示，BBR可阻断自噬流。免疫荧光结果证实BBR显著降低TNF-α诱导后ROS水平，上调自噬调控蛋白p-mTOR表达水平（P<0.01），且受ROS水平调控，合用RAPA可显著降低BBR对RA-FLSs的促凋亡作用（P<0.01）。结论 BBR可能是通过调控ROS-mTOR抑制RA-FLSs自噬，促进其凋亡。

• 抑制RAB27a能够抑制三阴乳腺癌细胞的增殖、侵袭和粘附

  王 丽, 严志锐, 夏耀雄

  目的 抑制在外泌体分泌过程中发挥核心作用的RAB27蛋白家族的表达，以探究其对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞生物学功能的影响。方法 利用荧光定量PCR和蛋白印迹法对比3株三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-468、Hs578T和正常乳腺上皮细胞系MCF10A的RAB27家族基因和蛋白表达以及外泌体的分泌情况；使用siRNA干扰技术分别抑制3株三阴性乳腺癌细胞中RAB27a和RAB27b的表达，并采用荧光定量PCR和蛋白印迹法检测抑制效率，随后使用蛋白印迹法检测这3株三阴性乳腺癌细胞RAB27a和RAB27b分别被抑制后外泌体的分泌情况。用细胞增殖、细胞侵袭和细胞粘附实验评价RAB27a和RAB27b分别被抑制后对这3株三阴性乳腺癌细胞生物学功能造成的影响。结果 三阴性乳腺癌细胞和正常乳腺上皮细胞相比外泌体分泌更加旺盛（P<0.001），并且RAB27a和RAB27b的表达在基因和蛋白水平上均显著上升（P<0.01）。分别抑制3株三阴性乳腺癌细胞RAB27a的表达后，外泌体分泌显著下调（P<0.001），抑制RAB27b的表达对外泌体分泌无显著影响。并且外泌体分泌显著下调后，与外泌体分泌未受到显著影响的三阴性乳腺癌细胞相比，癌细胞增殖能力、细胞侵袭能力和细胞粘附能力均显著下调（P<0.01）。结论 在三阴性乳腺癌细胞外泌体分泌过程中起核心作用的是RAB27a，抑制RAB27a能够抑制三阴性乳腺癌细胞的增殖、侵袭和粘附。

• Akt2抑制剂促进大鼠根尖周炎症微环境中巨噬细胞的极化：基于降低miR-155-5p的表达

  李敬怡, 杨思圆, 韩 振, 江天乐, 朱 耀, 周子航, 周静萍

  目的 通过构建大鼠慢性根尖周炎模型，探讨Akt2抑制剂对根尖周组织巨噬细胞极化的影响及其相关因素。方法 随机选取32 只健康SD大鼠，其中28只作为实验组，通过髓腔开放法建立大鼠根尖周炎模型，在模型构建过程中分别在下颌第一磨牙左右侧髓腔内注射生理盐水和Akt2抑制剂。另外4只为健康对照组，不做任何处理。于开髓后第7、14、21、28天随机处死7只实验组和1只健康对照组大鼠后，分离下颌骨获取样本。X线和苏木精-伊红（HE）染色观察根尖周组织炎症浸润情况；免疫组织化学（IHC）染色观察Akt2、巨噬细胞及炎症介质的表达与定位，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）观察Akt2、CD86、CD163、炎症介质（IL-6、IL-10）、miR-155-5p及C/EBPβ的mRNA表达，分析对巨噬细胞极化的影响。结果 X线和苏木精-伊红染色结果显示：髓腔开放21 d后大鼠根尖周表现明显的慢性炎症，确认慢性大鼠根尖周炎模型构建成功。IHC染色和RT-PCR结果表明：与健康对照组相比，髓腔开放21 d后实验组大鼠根尖周炎组织中Akt2、CD86、CD163、miR-155-5p、C/EBPβ、及IL-10表达显著增高（P<0.05），与生理盐水组相比，Akt2抑制剂组大鼠根尖周组织中Akt2、CD86、miR-155-5p和IL-6的表达水平以及CD86+M1型/CD163+M2型巨噬细胞比值显著降低（P<0.05），而CD163、C/EBPβ和IL-10的表达水平明显增高（P<0.05）。结论 抑制Akt2可减缓大鼠根尖周炎症进展，促进大鼠根尖周炎症微环境中巨噬细胞向M2型极化；Akt2抑制剂可能通过降低miR-155-5p表达，激活Akt信号通路中转录因子C/EBPβ的表达，从而影响巨噬细胞极化。

• 槲皮素降低邻苯二甲酸酯类混合物暴露致大鼠睾丸组织的氧化损伤的机制

  刘丽兰, 邓儒雅, 周稳进, 林 敏, 夏玲姿, 高海涛

  目的 研究槲皮素（Que）对3种邻苯二甲酸酯类混合物（MPEs）暴露致大鼠睾丸组织氧化损伤的抑制作用及机制。方法 40只雄性SD大鼠随机分对照组，MPEs组，MPEs联合低、中、高剂量Que组（MPEs+L-Que组、MPEs+M-Que组、MPEs+H-Que组）。MPEs组大鼠灌胃900 mg/（kg·d）MPEs，MPEs联合低、中、高剂量Que组大鼠灌胃900 mg/（kg·d）MPEs及10、30、90 mg/（kg·d）Que；对照组大鼠灌胃等容量的赋形剂；连续灌胃30 d后，麻醉大鼠，进行称重、采血、处死、量肛殖距、解剖、取睾丸和附睾等组织。试剂盒检测血清睾酮、促黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）及睾丸组织丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）；通过H&E染色法观察睾丸组织病理结构；Western blot及免疫荧光检测睾丸组织中Nrf2、Keap1和HO-1的表达水平。结果 与对照组相比，MPEs组大鼠肛殖距、睾丸、睾丸系数、附睾及附睾系数均减小（P<0.05）；血清睾酮、FSH和LH水平下降（P<0.01）；睾丸组织曲细精管萎缩，精细胞发育停滞，睾丸间质细胞增生等；睾丸组织中Nrf2、MDA、SOD、CAT和HO-1均升高（P<0.01），而Keap1降低（P<0.01）；与MPEs组相比，MPEs+H-Que组大鼠睾丸、睾丸系数、附睾、附睾系数，血清睾酮、LH和FSH均升高（P<0.05）；睾丸组织病理结构明显改善；MPEs+M-Que组和MPEs+H-Que组睾丸组织中MDA、SOD、CAT、Nrf2和HO-1水平下降（P<0.05），而Keap1升高（P<0.05）。结论 Que可抑制MPEs暴露所诱导的大鼠睾丸组织氧化损伤，其机制可能与Que直接清除自由基，降低了MPEs诱导的睾丸组织氧化应激，恢复Nrf2信号通路的调节有关。

• NKD1可促进结肠癌细胞的葡萄糖吸收:基于激活YWHAE基因的转录活性

  刘 迁, 戴宇阳, 于华裔, 沈 颖, 邓建忠, 陆文斌, 金建华

  目的 通过研究NKD1与YWHAE调控关系，分析NKD1促进肿瘤细胞增殖的新作用机制。方法 实验分组：（1）对照组：转染pcDNA3.0质粒的HCT116细胞、转染NC-siRNA的SW620细胞、正常HCT116细胞、正常SW620细胞；（2）实验组：转染pcDNA3.0-NKD1 质粒的 HCT116 细胞、转染 NKD1 siRNA 的 SW620 细胞、HCT116-NKD1 细胞、SW620-nkd1-/-细胞、转染pcDNA3.0-YWHAE质粒的SW620-nkd1-/-细胞。采用Western blot及qRT-PCR实验检测结肠癌细胞中过表达或敲除NKD1对YWHAE的蛋白及mRNA水平变化的影响。采用染色质免疫共沉淀（ChIP）技术检测NKD1是否结合YWHAE基因启动子区。通过双荧光素酶报告基因实验分析NKD1对YWHAE基因启动子活性的调控作用。此外，采用免疫荧光实验分析NKD1与YWHAE相互作用情况。葡萄糖检测实验分析NKD1对肿瘤细胞吸收葡萄糖的调控作用。结果 与对照组相比，过表达（或敲除）NKD1不仅在蛋白水平增强（或降低）YWHAE的表达，还在mRNA水平增加（或降低）其表达（P<0.001）。ChIP实验显示NKD1蛋白能够结合YWHAE启动子序列，双荧光素酶报告基因实验表明在结肠癌细胞中过表达（或敲降）NKD1能显著增强（或降低）YWHAE启动子的转录活性（P<0.05）。此外，免疫荧光结果显示NKD1蛋白与YWHAE蛋白在结肠癌细胞内相互结合。葡萄糖水平分析实验表明，敲除NKD1明显降低结肠癌细胞对葡萄糖的吸收水平（P<0.01），而在敲除NKD1的细胞中过表达YWHAE，则细胞对葡萄糖吸收能力得到恢复（P<0.05）。结论 结肠癌细胞中NKD1蛋白通过激活YWHAE基因的转录活性，促进其表达，从而促进肿瘤细胞对葡萄糖的吸收。

• 电针可改善骨关节炎大鼠的关节炎症和运动功能：基于调控Wnt-7B/β-catenin信号通路

  郑 祥, 高颂爱, 尤 浩, 王浩琦, 高彦平, 王金丽, 李 嘉, 李 玲

  目的 探究电针对骨关节炎大鼠的影响及其作用机制。方法 将30只大鼠随机分为模型组、电针组及对照组，10只/组。模型组与电针组大鼠采用改良DMM手术造模法制造骨关节炎模型，电针组造模成功后给予双侧“后三里”和“膝前穴”电针灸治疗，模型组不予干预，对照组为假手术组。根据LequesneMG评分标准，对3组大鼠进行大鼠行为学检测。观察各组大鼠软骨下骨的退变情况。通过ELISA法检测各组大鼠血清中白细胞介素-1β（IL-1β）、聚蛋白多糖酶-7（ADAMTS-7）、基质金属蛋白酶-3（MMP-3）、软骨寡聚基质蛋白的含量；通过Western blot检测各组大鼠膝关节软骨组织IL-1β、Wnt-7B、β-catenin、ADAMTS-7、MMP-3的表达变化；通过RT-PCR检测软骨组织中IL-1β、Wnt-7B、β-catenin、ADAMTS-7，MMP-3的mRNA。结果 行为学检测发现，模型制备后与对照组相比，模型组、电针组 LequesneMG 评分升高（P<0.05）。治疗 20 d 后，与模型组比较，电针组LequesneMG评分降低（P<0.05）。Micro-CT结果显示，与对照组相比，电针组与模型组大鼠软骨下骨均受到损伤，但电针组大鼠的关节软骨下骨损伤程度低于模型组。与模型组比较，电针组大鼠血清中IL-1β、ADAMTS-7、MMP-3、软骨寡聚基质蛋白的含量降低（P<0.05），软骨组织中IL-1β、Wnt-7B、β-catenin、ADAMTS-7、MMP-3含量降低（P<0.05）。RT-qPCR结果显示与模型组比较，电针组大鼠软骨组织中IL-1β、Wnt-7B、β-catenin、ADAMTS-7、MMP-3 mRNA含量降低（P<0.05）。结论 电针能够有效改善关节疼痛等症状，改善关节软骨下骨的损伤，并且可以降低关节软骨组织、血清中IL-1β缓解关节内炎症，同时通过调控Wnt-7B/β-catenin信号通路降低ADAMTS-7、MMP-3等细胞因子，起到保护软骨的作用。

• 子宫腺肌病术前MR T2WI信号特征与HIFU消融疗效密切相关：一项倾向性评分配对队列研究

  喻靖文, 杨美洁, 蒋 莉, 肖智博, 李 霜, 陈锦云

  目的 通过评估子宫腺肌病MR T2WI信号特征，探讨其对高强度聚焦超声（HIFU）消融疗效的影响。方法 分析接受HIFU治疗的子宫腺肌病患者资料，根据术前MR T2WI信号内有无点片状高信号灶将病灶分为均质组和不均质组，再根据病灶信号强度将不均质组进一步分为不均质低信号组和不均质等信号组。将不均质组的患者按照1∶1的比例运用倾向性评分匹配的方法与均质组患者进行匹配；同理，不均质低信号组的患者按照1∶1的比例与不均质等信号组患者进行匹配。以病灶体积消融率（NPVR）和术后痛经评分作为评估四组消融疗效的指标。结果 299例患者入选，术前中位痛经评分为7.0（6.0，8.0），中位NPVR为53.5%（35.4，70.1）%。倾向性评分匹配后，均质组NPVR明显高于不均质组（[ 60.3±21.8）% vs（44.6±21.6）%，P<0.05]。术后3、6、12月随访，均质组痛经缓解率均大于不均质组，其中在术后12个月时两组比较差异有统计学意义（91.1%vs 76.8%，P<0.05）。不均质低信号组NPVR高于不均质等信号组（[ 54.0±22.0）% vs（47.3±22.9）%，P<0.05]。术后6个月不均质低信号组痛经缓解率高于不均质等信号组（91.5% vs 80.9%，P<0.05）。结论 子宫腺肌病MRI T2WI信号特征与HIFU消融密切相关，均质信号病灶的治疗效果优于不均质病灶，不均质病灶中低信号强度的病灶的治疗效果优于不均质等信号病灶。

• 全麻与深度镇静下的儿童口腔治疗：家长接受度、口腔健康相关生活质量及疗效是否有差异？

  冯青波, 骆春梅, 刘向红, 许 婷, 杜 芹

  目的 比较口腔疾病患儿的家长对儿童口腔高级行为管理技术的接受度、比较接受全麻及深度镇静下口腔治疗患儿的治疗前后生活质量变化，并研究两种术式术后疗效差异。方法 对2022年1月~2022年6月在四川省人民医院口腔科就诊的131例患儿家长，进行儿童口腔高级行为管理技术的接受度问卷调查；对2018年1月~2021年12月在四川省人民医院口腔科接受全麻或深度镇静治疗的共83例患儿，进行术前术后生活质量对比问卷调查，比较术前术后生活质量得分；对2018年1月~2021年12月在四川省人民医院口腔科采取全麻或深度镇静手术治疗且1年后复诊的149例患儿，比较术后疗效。结果 儿童口腔高级行为管理技术的接受度问卷调查显示，62.6%的家长优先选择深度镇静麻醉方式，29.01%的家长优先选择全麻麻醉方式，8.4%的家长优先选择强制治疗的方式；全麻及深度镇静术后患儿口腔相关生活质量均得到显著性改善，两者间没有显著性差异。全麻术后患儿疼痛症状改善最为显著；深度镇静术后患儿疼痛症状和家长压力均明显改善。全麻及深度镇静术后1年复查，术后疗效没有显著性差异。结论 家长对深度镇静下儿童口腔疾病治疗的接受程度最高，其次接受全麻下儿童的口腔疾病治疗，对强制治疗的接受程度最低。经全麻及深度镇静口腔治疗后，患儿及家长的生活质量均得到显著改善。经全麻及深度镇静口腔治疗后，患儿均有良好的术后疗效。

• 我国45岁及以上人群认知功能障碍的空间分布及其影响因素

  贺舒凝, 张佳豪, 杨若男, 袁 萍

  目的 了解我国45岁及以上的中老年人认知功能障碍患病现状的空间分布及其影响因素，为区域化制定中老年人群认知功能障碍防控策略和措施提供理论依据。方法 利用中国健康与养老追踪调查（CHARLS）第4期追访数据，选取认知功能数据完整的研究对象进行研究，基于地理信息系统（GIS）技术，以省级作为空间分析单位，采用ArcGis 10.4软件对中老年人认知功能障碍情况进行空间统计分析。结果 2018年，我国45岁及以上人群的认知功能障碍患病率为33.59%（5951/17716），全局空间自相关分析结果显示，患病率的Moran'I值=0.333085，表明认知功能障碍患病率存在空间聚集性，且为正自相关（P<0.001）。局部空间自相关分析结果显示，认知功能障碍患者的聚集区域主要在我国西南部。地理加权回归分析显示，男性、高龄、文盲是认知功能障碍患病的主要危险因素（P<0.05），且存在空间分布异质性，分别对我国北部、西部和西北部影响更大。结论 我国45岁及以上人群认知功能障碍患病率较高，男性、高龄、文盲是认知功能障碍患病的主要危险因素，且空间分布存在差异，重点防控地区集中于我国北部、西部和西北部，不同地区的认知功能障碍防控措施应结合其地域特点，具备一定针对性。

• 基于先验信息感知学习的能谱CT及物质定量智能成像算法

  段 政, 李丹阳, 曾 栋, 边兆英, 马建华

  目的 提出一种基于先验信息感知学习的能谱CT半监督物质定量智能成像算法（SLMD-Net），以提升能谱CT及物质定量成像精度和质量，并降低数据驱动网络对标签数据的依赖性。方法 算法框架包括监督子模块和自监督子模块。在监督子模块中，基于少量标签数据和均方误差损失函数学习构建从低信噪比数据到高信噪比数据的映射关系；在自监督子模块中，针对大量无标签低信噪比基物质图像数据，采用基于图像恢复模型构建损失函数，并纳入基物质图像数据的先验信息，以全变分（TV）模型刻画图像的先验信息。两个子模块合并构成SLMD-Net并通过临床仿真数据评估可行性和有效性。结果 与模型驱动的物质定量成像方法（FBP-DI、PWLS-PCG、E3DTV），数据驱动的物质定量成像方法，如基于监督学习的物质定量成像方法（SUMD-Net和BFCNN），基于无监督学习的物质定量成像方法UNTV-Net以及基于半监督的循环一致性生成对抗网络（Semi-CycleGAN）相比，SLMD-Net在视觉和定量评估上均有明显优势，如在水物质定量成像结果和骨物质定量成像结果中，SLMD-Net获得最高的PSNR指标（31.82和29.06）、最高的FSIM指标（0.95和0.90）以及最低的RMSE指标（0.03和0.02），且图像质量评分与其他7种对比方法分解性能的差异具有统计学意义（P<0.05）。SLMD-Net的物质定量性能可接近于使用两倍数量级标签数据训练的SUMD-Net。结论 少量标签数据和大量无标签低信噪比基物质图像数据可被充分利用训练网络，有效抑制能谱CT基物质分解过程中产生的强噪声伪影，降低数据驱动网络对标签数据的依赖性，具有更广阔的临床应用前景。

• 脓毒症促内质网RyR1受体磷酸化增强导致大鼠膈肌功能障碍

  吴松林, 李学欣, 关发升, 冯建国, 贾 静, 李 京, 刘 力

  目的 研究内质网兰尼碱受体1（RyR1）表达及磷酸化修饰在脓毒症相关膈肌功能障碍中的作用。方法 将30只SPF级成年雄性SD大鼠按随机数字表法随机分成5组：Sham组、CLP-6 h组、CLP-12 h组、CLP-24 h组和CLP-24 h+KN-93组，6只/组。Sham组仅腹腔探查，不进行盲肠结扎穿孔；CLP-6 h组、CLP-12 h组、CLP-24 h组、CLP-24 h+KN-93组通过盲肠结扎穿孔术（CLP）建立脓毒症模型。CLP-24 h+KN-93组于术后立即单次腹腔注射KN-93，各组分别在建模后相应时间点取膈肌标本进行指标检测。采用RM6240生物信息采集系统测量膈肌复合肌动作电位（CMAP），计算离体膈肌疲劳指数，拟合频率收缩曲线；Western blot检测膈肌CaMKⅡ、RyR1及P-RyR1蛋白表达水平。结果 随脓毒症时间的延长，膈肌CMAP幅值下降，时程延长，且在24 h最为明显，CLP-24 h+KN-93组较CLP-24 h组幅值升高，时程缩短，差异有统计学意义（P<0.05）。膈肌疲劳指数随脓毒症时间的延长而逐渐升高（P0.05）。随脓毒症时间的延长，膈肌各组频率收缩曲线逐渐降低，且CLP-24 h组下降最为明显，CLP-24 h +KN-93组较CLP-24 h组明显升高（P<0.05）。随脓毒症病程的发展，RyR1表达水平CLP-24 h组较Sham组明显降低（P<0.05）；各组P-RyR1水平随脓毒症时间的延长而逐渐升高，CLP-24 h +KN-93组较CLP-24 h组明显降低（P<0.05）；CaMKⅡ表达水平CLP-24 h组较Sham组明显升高，CLP-24 h +KN-93组较CLP-24 h组明显降低（P<0.05）。结论 脓毒症提高CaMKⅡ表达促进膈肌内质网RyR1受体磷酸化增强从而导致膈肌功能障碍。

• 溶酶体膜蛋白sidt2介导肝脏细胞的凋亡：不通过抑制自噬溶酶体途径

  许家豪, 耿梦雅, 刘海军, 裴文俊, 顾 静, 漆梦湘, 章 尧, 吕 坤, 宋迎迎, 刘苗苗, 胡 鑫, 余 翠, 何春玲, 王李卓, 高家林

  目的 研究溶酶体膜蛋白Sidt2敲除后在肝脏细胞中调控凋亡的途径。方法 利用Crispr-Cas9技术构建Sidt2敲除的人肝脏（HL7702）细胞模型，检测Sidt2和自噬关键蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白水平，MDC染色观察自噬体形成情况，通过EdU和流式细胞实验观察Sidt2对肝脏细胞增殖活性和凋亡的影响，并且使用0、10、25、50、100、200 μmol/L的氯喹（CQ）摸索肝脏细胞CQ饱和浓度，检测对其自噬流的影响，以及使用CQ进一步探索影响肝脏细胞的增殖活性其凋亡水平的机制。结果 成功构建HL7702细胞Sidt2+/+组及Sidt2-/-组。Sidt2基因缺失可导致肝脏细胞增殖被抑制和凋亡水平的增加，自噬关键蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ和P62在蛋白水平上的表达均增加且自噬体含量增加（P<0.05）。结果显示50 μmol/L CQ作用下肝脏细胞自噬达到饱和状态，50 μmol/L CQ使Sidt2基因缺失时LC3B和P62的表达均增加（P<0.05），且CQ进一步降低肝脏细胞活性，并促进其凋亡水平（P<0.05）。结论 在离体水平上，Sidt2基因剔除后，HL7702细胞可表现自噬通路的异常，并且不通过抑制自噬溶酶体途径介导和调控凋亡。

• 2016~2020年中国猩红热发病的空间聚集性分析

  张佳豪, 杨若男, 贺舒凝, 袁 萍

  目的 探讨我国2016~2020年猩红热的发病率趋势以及空间聚集特征，为合理制定区域性疾病防控策略与措施提供依据。方法 通过《中国卫生健康统计年鉴》和中国疾病预防控制中心牵头负责的公共卫生科学数据中心获取2016～2020年我国31个省份及直辖市（不包括港澳台）的猩红热发病率数据，应用ArcGIS绘制了我国猩红热发病的三维空间趋势图，判断猩红热发病的地区变化趋势，采用GeoDa空间自相关分析探索我国近年来猩红热的空间聚集情况。结果 2016~2020年全国31个省份（直辖市、自治区）累积报告猩红热病例310816例，年平均发病率为4.48/10万。报告发病率从2016年的4.32/10万下降到2020年的1.18/10万（Z=103.47，P0，P0，P=0.16），东西部地区呈“U”型分布，中间低两边高，由南向北逐渐升高。内蒙古、河北以及甘肃等北部地区为我国猩红热发病的高-高（H-H）聚集区域。结论 我国猩红热发病仍有较高的发病率，且发病存在较为明显的空间聚集性，应针对猩红热发病呈现H-H聚集的北部地区，适当地增加卫生资源配置和相应的健康宣传教育力度，制定区域化的猩红热防控政策，防止猩红热热点区域的扩大。

• 逆向肺部分切除术：小儿肺囊肿的外科处理新方法

  杨利博, 周海深, 欧阳学军, 张福伟, 冯 靖, 张家庆

  目的 明确逆向肺部分切除术治疗小儿肺囊肿合并肺脓肿或脓胸的安全性和有效性。方法 回顾性分析2020年6月~2021年6月于我院接受逆向肺部分切除术的复杂性肺囊肿患儿的临床资料。手术体位选择侧卧位，切口选择病灶中心位置肋间，长度3~5 cm，切口近可能接近病灶，以免不必要的分离。进入胸腔后于病灶中心处切开脏层胸膜，尽快清除病灶内的液体或坏死物质，同时嘱麻醉医师气管内吸痰，防止坏死物质进入对侧气管。清除病灶内的坏死物质并分离疱性肺组织至肺门侧健康肺组织处，将病灶内条索样组织近端先用4号丝线双重结扎，远端离断，再用4-0 Prolene线连续缝合加固近端，条索样组织为支配病灶内的肺血管和支气管。后使用能量器械或切割闭合器分离病变肺与健康肺组织平面。清除肺与壁层胸膜之间坏死物质，彻底冲洗胸腔，膨肺检查漏气处，对严重漏气肺组织或裸露的微小支气管破口采用5-0 Prolene线进行缝合加固。无明显脓性物质的肺与胸壁粘连处，无需分离。结果 共入组16例患儿，年龄3 d~2岁，其中3例单纯性肺囊肿，11例肺囊肿合并肺脓肿或脓胸，1例肺囊肿合并张力性气胸和左上肺支气管缺损，1例肺大疱合并脑组织异位。入组患者手术均采用逆向肺部分切除术，术程顺利，手术平均时间129 min，平均住院时间11 d，拔除引流管平均时间7 d。术后各患儿均恢复良好，其中11例合并轻度漏气，均无严重并发症发生。术后随访胸部CT无病灶残留或感染复发。结论 逆向肺部分切除术这一新术式在复杂性小儿肺囊肿或合并感染者的治疗中安全可行，初步判断该技术具有创伤小、操作简单等优势。

• 右美托咪定不能降低腹腔镜下根治性肾切除术后急性和慢性肾脏病的发病率：基于倾向性评分匹配法

  苏雨薇, 孙 闻, 王 迪, 董钰妍, 丁 莹, 徐龙河, 刘永哲

  目的 研究右美托咪定（DEX）对腹腔镜下根治性肾切除术后肾功能的影响。方法 选取2020年11月~2022年6月解放军总医院第三医学中心泌尿外科收治的282例接受腹腔镜下根治性肾切除术（LRN）的肾细胞癌（RCC）患者的临床资料。根据术中是否使用DEX分为右美托咪定组（D组）和对照组（C组），经倾向性评分匹配后，每组最终入组99例，比较两组患者急性肾损伤（AKI）；收集到其中51例患者术后3个月~1年内的血肌酐（sCr），其中D组26例，C组25例，比较两组患者慢性肾脏病（CKD）的发生率。结果 经倾向性评分匹配和显著协变量调整后，两组患者术后sCr、术后胱抑素C（CysC）、术后β2微球蛋白（β2-MG）、术后血红蛋白（Hb）、术后C反应蛋白（CRP）、拔管时间、AKI发生率、住院时间均无统计学意义（P>0.05）；D组的术中尿量显著多于C组，差异有统计学意义（P<0.05）。术后AKI和CKD有关联性，差异有统计学意义（P0.05）。结论 DEX不能降低LRN术后AKI发生率和CKD的发生率。

• 心脏磁共振特征追踪技术可评估心肌淀粉样变性患者的心脏功能

  崔佳宁, 李润霞, 刘学谦, 赵亚男, 张兴华, 刘清波, 李 涛

  目的 应用心脏磁共振特征追踪（CMR-FT）技术定量评估心肌淀粉样变性（CA）与肥厚性心肌病（HCM）患者心脏功能的差异且评估其对CA患者的预后价值。方法 回顾性收集2013年3月~2021年6月在我院接受CMR检查的31例经心外组织活检并经刚果红染色和血清免疫组织化学检查证实其存在系统性淀粉样变性的CA患者，并且随机选取年龄和性别相仿的31例非对称左心室室壁肥厚的HCM患者及31例无器质性及功能性心脏病的健康人（NC）作为CA组的对照组。通过CMR-FT技术得到左心室整体及各水平（基底部、中间部及心尖部）径向、周向和纵向应变及应变率，分析各参数的组间差异。用逐步COX回归模型分析应变及应变率对CA患者全因死亡率的预测价值。结果 3组患者的左心室收缩末期容积、心肌质量、射血分数及心输出量的差异均有统计学意义（P均<0.05）。除了心尖部纵向应变，CA组患者整体及各水平应变均明显低于HCM组（P均<0.05）。CA组患者整体及各水平应变均明显低于NC组（P均<0.05）。CA组患者基底部3个方向的应变率均明显低于NC组（P均<0.05），但是两组心尖部应变率的差异没有统计学意义。多变量逐步COX分析显示，肌钙蛋白（HR=1.05，95% CI:1.01-1.10，P=0.017）和中间部周向舒张期峰值应变率（HR=6.87，95% CI: 1.52-31.06，P=0.012）是死亡的强预测因素。结论 基于电影序列的CMR-FT获得的应变及应变率参数是一种新的无创性成像标志物，可用于评估CA的心功能损伤程度以及与HCM心功能的差异，并为CA患者的全因死亡提供独立的预测信息。