南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2022年第7期

• VIPR1启动子甲基化促进转录因子AP-2α下调VIPR1的表达并促进肝细胞癌的生长

  宁诗雨, 何春梅, 郭泽皓, 张 豪, 莫之婧

  目的 探讨血管活性肠肽受体1（VIPR1）在肝细胞癌（HCC）组织中低表达的转录调控机制和生物学功能。方法 肝癌细胞系Hep3B和Huh7常规培养，实验分为VIPR1启动子野生型组、启动子突变载体1组、启动子突变载体2组和启动子突变载体1+2组。双荧光素酶报告基因实验检测AP-2α表达对VIPR1启动子活性的影响；DNA甲基化转移酶抑制剂（DAC）处理肝癌细胞，焦磷酸测序法检测VIPR1启动子甲基化水平的变化；染色质免疫共沉淀检测AP-2α与VIPR1启动子的结合能力；Western blot检测AP-2α的敲减作用以及VIPR1的表达；Western blot 检测两种细胞株中VIPR1的差异表达；qPCR和Western blot检测VIPR1过表达和敲减效果；流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡；CCK8实验检测细胞增殖。建立裸鼠移植瘤模型，检测LV-NC组和LV-VIPR1组中肿瘤的体积和质量。结果 与VIPR1启动子野生型组相比，启动子突变载体1+2与AP-2α表达质粒共转染后，荧光素酶活性明显恢复（P<0.05）；DAC处理后，VIPR1启动子甲基化水平降低，并且随着甲基化程度减弱，与VIPR1启动子结合的AP-2α显著减少（P<0.01）；敲减AP-2α后，VIPR1表达上升；Huh7细胞株中VIPR1表达低于Hep3B细胞株，在两种细胞株中成功构建了VIPR1过表达和敲减模型，VIPR1过表达增加了G2/M期的细胞数量（P<0.01），凋亡细胞显著增加（P<0.001），细胞增殖受到抑制（P<0.001），而VIPR1敲低则相反。体内实验表明VIPR1过表达组的肿瘤体积减小（P<0.001），肿瘤量降低（P<0.05）。结论 HCC中VIPR1的启动子甲基化促进了转录因子AP-2α的结合，并且抑制了VIPR1表达，而VIPR1过表达可使细胞周期阻滞在G2/M期，促进细胞凋亡，抑制细胞增殖和肿瘤生长。

• 血管抑制素-2通过调控上皮细胞间质化促进宫颈癌细胞的增殖和转移

  王 君, 俞彩仙, 江晓霞, 伍小柳, 贾 岳, 张红平, 李 政

  目的 探讨血管抑制素-2（VASH2）能否促进宫颈癌细胞在体外的增殖和转移及其可能的分子机制。方法 在外源性过表达和干扰内源性flotillin-1表达的宫颈癌细胞中，通过公共数据库结合RNA-seq挖掘分析差异表达基因；在宫颈正常上皮细胞（HcerEpic细胞）和宫颈癌细胞（HeLa、C-33A、Ca ski、SiHa和MS751）以及不同淋巴结转移状态的新鲜宫颈癌组织中检测VASH2的表达；运用慢病毒稳定表达载体构建外源性过表达VASH2和干扰内源性VASH2表达的宫颈癌细胞及对照细胞，并检测其增殖、迁移、侵袭和淋巴管形成的情况；在上述细胞模型中检测上皮细胞间质化（EMT）过程关键分子及TGF-β的表达水平。结果 RNA-seq发现在外源性过表达flotillin-1的宫颈癌细胞中VASH2的表达上调（P<0.05），而在抑制内源性flotillin-1表达的细胞中VASH2表达下调（P<0.05），并在公共数据库中证实VASH2在有淋巴结转移的宫颈癌组织中相对于无淋巴结转移的癌组织呈高表达（P<0.01）。相对于HcerEpic细胞和淋巴结未转移的宫颈癌组织，VASH2在Ca Ski、SiHa、MS751细胞和有淋巴结转移的宫颈癌组织中表达上调（P<0.05）；相对于对照细胞，外源性过表达VASH2的宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和淋巴管形成能力增强，而抑制内源性VASH2表达的宫颈癌细胞上述能力则受到抑制（P<0.05）；相对于对照细胞，外源性过表达VASH2的宫颈癌细胞中EMT过程的关键分子E-cadherin下调，N-cadherin、Vimentin和VEGF-C上调，而抑制内源性 VASH2 表达的宫颈癌细胞中 E-cadherin 上调，N-cadherin、Vimentin 和 VEGF-C 下调（P<0.05）；外源性过表达VASH2的宫颈癌细胞中TGF-β的mRNA表达水平上调，而抑制内源性VASH2表达的宫颈癌细胞中TGF-β的mRNA表达水平下调（P<0.001）。结论 flotillin-1可能通过下游靶基因VASH2参与 TGF-β信号通路诱导EMT过程在体外促进宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭和淋巴管形成。

• 屎肠球菌QH06能减轻溃疡性结肠炎大鼠的结肠黏膜损伤

  库尔班乃木·卡合曼, 赵健锋, 穆凯代斯·艾合买提, 王汉铭, 朱稷蔚, 潘文涛, 卡思木江·阿西木江

  目的 探讨屎肠球菌QH06对溃疡性结肠炎（UC）大鼠肠道菌群与肠道免疫的影响及其机制。方法 36只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、UC模型组和屎肠球菌组（12只/组）。除正常对照组外，其余2组以5% TNBS/乙醇灌肠法建立UC模型。造模成功后屎肠球菌组用屎肠球菌QH06灌胃干预，剂量为0.21 g/kg，正常对照组和UC组用等体积的蒸馏水灌胃干预。干预14 d后用HE染色法观察各组大鼠结肠病理改变并评分，用RT-qPCR和ELISA法检测细胞因子IL-4、IL-10、IL-12和IFN-γ 的mRNA和蛋白表达水平，用免疫组化和ELISA法检测TLR2蛋白表达量。利用Illumina Miseq 平台对各组大鼠肠道菌群测序同时进行生物信息学分析。最后肠道菌群和TLR2蛋白表达量、细胞因子等指标进行相关性分析。结果 与正常对照组相比，UC组大鼠体质量下降（P<0.01），结肠组织损伤严重，病理学评分显著升高（P<0.01）；ELISA 和RT-qPCR结果显示，IFN-γ （P<0.01），IL-12（P<0.01），TLR2（P<0.01）的蛋白表达水平和IFN-γ（P<0.05），IL-12（P<0.05），IL-10（P<0.05）的mRNA表达水平上调。Illumina Miseq测序和分析显示，UC组大鼠肠道菌群多样性Shannon指数（P<0.05）、Ace指数（P<0.01）和Chao指数（P<0.05）降低。Enterobacteriaceae（P<0.01）增多，Burkholderiaceae（P<0.05）减少。与UC组相比，屎肠球菌组大鼠体质量增加（P<0.05），损伤减轻，病理学评分下降（P<0.05），结肠组织中IFN-γ（P<0.01），IL-12（P<0.05）、TLR2蛋白表达量（P<0.01）下调，IL-4蛋白表达量上调（P<0.05），IFN-γ（P<0.05）、IL-12（P<0.05）的mRNA表达量下调，肠道菌群多样性Shannon指数（P<0.05）、Ace指数（P<0.05）和Chao指数（P<0.05）升高。Enterobacteriaceae（P<0.05）减少，Burkholderiaceae（P<0.05）和Rikenellaceae（P<0.01）增多；肠道菌群、细胞因子含量和TLR2蛋白表达量相关性分析结果显示，IFN-γ与Enterobacteriaceae呈正相关、而与Prevotellaceae，Desulfovibrionaceae、norank_o__Mollicutes _RF39，Clostridiales _vadinBB60 _group呈负相关；TLR2表达水平与 Clostridiales_ vadinBB60_ group，norank_o__Mollicutes_RF39 和 Prevotellaceae 呈负相关。结论 屎肠球菌QH06能减轻TNBS诱导的UC大鼠的结肠黏膜损伤，其机制可能与普氏菌科等短链脂肪酸产生菌丰度的升高，TLR2介导的异常免疫反应的抑制有关。

• 低频脉冲电磁场通过 PC2/sAC/PKA/CREB 信号途径促进大鼠颅骨成骨细胞的矿化和成熟

  何玥颖, 陈克明, 魏 朋, 谢高倩, 陈 卓, 秦 昆, 高玉海, 马慧萍

  目的 研究低频脉冲电磁场（PEMFs）促进成骨细胞矿化成熟作用是否与初级纤毛及定位于初级纤毛的多囊蛋白2（PC2）和sAC/PKA/CREB信号通路有关。方法 检测新生大鼠颅骨成骨细胞（ROBs）经50 Hz 0.6 mT PEMFs分别处理0、5、15、30、60、90、120 min后PC2、sAC、PKA、CREB及其磷酸化蛋白的表达水平；用盐酸阿米洛利阻断PC2功能，检测sAC/PKA/CREB信号通路活性变化及ROBs矿化成熟是否受到影响；用RNA干扰法敲低PC2表达水平后做同上检查；用免疫荧光染色法观察PC2、sAC、PKA、CREB及其磷酸化蛋白与初级纤毛的共定位情况；用RNA干扰法抑制初级纤毛发生后检测PC2和sAC/PKA/CREB信号途径相关蛋白的表达情况。结果 ROBs经PEMFs处理0、5、15、30、60、90、120 min后，PC2、sAC、p-PKA和 p-CREB表达水平均增加（P<0.01）。阻断PC2功能或敲低PC2表达水平后，sAC/PKA/CREB信号通路未被激活，成骨细胞的矿化成熟受阻（P<0.01）。PC2、sAC、p-PKA和 p-CREB可被定位于整根初级纤毛或其根部，但PKA和CREB在初级纤毛内没有分布。干扰初级纤毛后，PEMFs处理未提高PC2表达量（P<0.01），未激活sAC/PKA/CREB信号通路，也不再能促进成骨细胞矿化成熟。结论 存在于ROBs初级纤毛表面的PC2可感知并传递PEMFs发出的物理信号，通过激活PC2/sAC/PKA/CREB信号途径促进成骨细胞的矿化成熟。

• 改良Mayo内镜评分对溃疡性结肠炎有较高的评估价值

  宋泽军, 张明君, 任渝棠, 姜 泊

  目的 探讨改良Mayo内镜评分（IMES）对溃疡性结肠炎的评估价值。方法 回顾性分析2015年1月~2021年11月在北京清华长庚医院诊断为溃疡性结肠炎患者临床及内镜资料，共纳入167位患者。内镜病变严重程度采用Mayo内镜评分法（MES，0~3分），及溃疡性结肠炎镜下严重程度指数（UCEIS，0~8分）进行评分，内镜下病变范围采用Montreal分型。将MES评分同Montreal分型结合得出改良Mayo内镜评分。结果 IMSE与改良Truelove和Witts疾病严重程度分型、Mayo评分（MS）以及部分Mayo评分（pMS）相关性（r=0.712、0.784、0.703），优于单独MES（r=0.642、0.754、0.604）、Montreal分型（r=0.598、0.628、0.603）以及UCEIS（r=0.670、0.767、0.677）。ROC曲线显示IMES对诊断重度、中-重度UC的临界值为4.5、3.5，曲线下面积（AUC）优于单独的MES、Montreal以及UCEIS。IMES与各项临床化验指标均有相关性，r值为C反应蛋白（0.583），白细胞（0.235），血红蛋白（-0.280），血小板（0.352），血清白蛋白（-0.396），红细胞沉降率（0.471），相关系性均优于单独的MES或Montreal分型。ROC曲线显示IMES=5分较MES=3分、E3、UCEIS≥6分预测患者近期接受全身激素、免疫抑制剂或手术的价值更高。结论 IMES能更好地反映UC临床严重程度，与临床化验指标具有良好的相关性。

• 凝血相关的实验室指标对急性胰腺炎患者的病情和预后有较高预测价值

  李 勤, 刘超男, 凌莉琴, 黄珣钡, 陈 思, 周 静

  目的 探讨凝血功能相关指标与急性胰腺炎患者病情严重程度和预后相关性，寻找可以用于早期预测和/或动态监测急性胰腺炎预后的实验室指标。方法 回顾分析2017年12月1日~2018年11月30日在四川大学华西医院就诊的急性胰腺炎患者（入院距发病时间<72 h）的临床资料，分析患者入院时和住院期间的凝血功能相关指标的变化与急性胰腺炎预后的相关性。结果 共收录1260例急性胰腺炎患者，根据纳入和排除标准，最终有175例纳入本研究，其中52例为重症急性胰腺炎，12例患者死亡。Logistic回归分析提示，入院时检测vWF:Ag、PT、PC、AT Ⅲ和D-dimer指标可作为预测重症急性胰腺炎和/或死亡的独立危险因素；但是动态监测病程中的各指标能提高预测价值，尤其是vWF: Agmax、PTmax、APTTmax、TTmax、FIBmin、D-dimermax、PLTmin、PCmin、PLGmin、AT Ⅲmin以及以上各指标的变化值（△）是预测重症急性胰腺炎和/或死亡的独立危险因素。ROC分析提示，动态监测各指标的变化值，尤其是△vWF:Ag、△PT、△APTT、△FIB、△TT、△D-dimer、△PLT、△PC、△AT Ⅲ、△PLG可作为预测重症急性胰腺炎和/或死亡的有效实验室指标（AUC0.63-0.84）。结论 急性胰腺炎患者存在血管内皮损伤、凝血功能紊乱。入院时检测vWF:Ag、PT、PC、AT Ⅲ和D-dimer指标可作为预测重症急性胰腺炎和/或死亡的独立危险因素，在患者病情中动态监测vWF:Ag、PT、APTT、TT、FIB、D-dimer、PLT、PC、AT Ⅲ、PLG以及各指标的变化情况会进一步提高预测价值。

• 表达工程化剪接因子腺病毒的构建及其在调控乳鼠心肌细胞中的YAP1可变剪接中的应用

  李 阳, 赵 倩, 宋晓伟, 宋金超

  目的 构建人工剪接因子，实现调控心肌细胞YAP1的可变剪接。方法 本研究根据Pumilio1的序列特异性，针对YAP1的Exon6构建不同序列的剪接因子。实验分为3组：野生型PUF-SR作为阴性对照组、人工化的PUF-SR腺病毒转染组、质粒转染组。实验流程：使用同源重组的方法构建腺病毒，将人工化的PUF-SR的PCR片段克隆到pAd-Track质粒中，再将重组质粒转化到大肠杆菌DH5α中进行质粒扩增。扩增后的质粒经PacⅠ酶切后，转染到293A细胞，进行腺病毒包装。将得到的腺病毒载体转染到培育的乳鼠心肌细胞中。选用Ad-Track质粒用于对照转染组，通过载体转染法将其转染到乳鼠心肌细胞中。定量和半定量PCR法检测YAP1的可变剪接，Western blot法检测融合蛋白Flag的信号，并使用GAPDH抗体检测GAPDH作为加载对照。结果 腺病毒转染组对心肌细胞的转染效率接近100%，质粒转染组中并没有发现荧光蛋白。在Western blot实验中，阴性对照和靶向YAPExon6XULIE 序列的Flag-SR-NLS-PUF都能够检测到融合Flag的蛋白的表达。在反转录PCR和PCR检测YAP1的可变剪接实验中，结果都显示YAP1的第4个target序列所构建的人工剪接因子能够有效调控YAP1 Exon 6的剪入（P<0.05）。结论 本实验成功构建出能够调控YAP1可变剪接的腺病毒，并且在SD大鼠的心肌细胞中得到了验证。

• 基于多模态MRI脑影像的超分辨率重建

  曹泽红, 刘高平, 张志强, 石 峰, 张 煜

  目的 探讨基于多模态脑影像数据的超分辨率合成模型将低分辨率的厚层数据重建成为高分辨率的薄层数据。方法 使用真实成对的多模态低-高分辨率MRI数据（2D-T1，2D-T2 FLAIR和3D-T1）设计结构约束的图像超分辨率重建网络，从不同模态的低分辨率MRI提取重要特征重建更高分辨率的T1图像。将T1作为主要模态使用图像全部信息，T2 FLAIR作为补充模态选取皮层下核团为关键区域进行信息增强。通过比较超分辨率重建图像与真实的高分辨率图像之间的灰度和结构相似性来确定网络的学习方向，同时通过脑分割工具获取重建图像和金标准图像的大脑解剖学结构信息，并将其作为重要约束条件来让重建模型自适应的学习大脑的组织结构特征，从而有效提升模型的重建性能。结果 在整体图像质量评价方面，该模型在149例测试集上的重建图像的平均PSNR值为33.11，SSIM为0.996，质量优于本文的其余对比方法生成的结果。在大脑解剖结构方面，我们的方法可以重建出较为清晰的脑沟、脑回以及皮层下核团，可视化结果显示了根据医学图像特性加入解剖学结构信息的有效性。分别使用单模态T1和多模态T1、T2 FLAIR进行图像重建的结果说明了有效选择第二模态关键区域的可行性。同时，在高分辨率图像作为金标准的情况下，使用本文提出的方法重建得到的超分辨率图像与使用低分辨率图像相比，在大脑灰质、白质和脑脊液上的体积测量平均精度有了较大的提升，灰质体积平均误差从3%降到1%，白质从18%降为了2%，脑脊液从35%降为了8%。结论 基于多模态的MRI脑影像超分辨率模型加入了同一组织的不同模态信息与解剖学信息，相比现有的方法，可以重建出更为接近真实高分辨率的图像，有望将其应用于临床诊疗流程中。

• 胡桃醌通过促进c-Myc泛素化降解抑制宫颈癌细胞的生长和促进凋亡

  赵行宇, 杨 昆, 宋梓桐, 何 涵, 张 巍

  目的 观察c-Myc蛋白在宫颈癌HeLa细胞中的表达，探讨胡桃醌通过影响c-Myc蛋白泛素化降解进而影响HeLa细胞的增殖与凋亡。方法 培养人宫颈癌HeLa细胞，分为对照组：正常培养；10、20、50 μmol/L胡桃醌组：培养液中分别加入对应浓度的胡桃醌。以Western blot方法分析胡桃醌处理后c-Myc蛋白的表达。HeLa细胞分为对照组和20 μmol/L胡桃醌组，在培养0、2、4、8 h分别用Western blot检测c-Myc蛋白表达的变化；放线菌酮（CHX）法检测c-Myc蛋白半衰期的变化；CoIP方法检测c-Myc蛋白降解影响。HeLa细胞分为空白对照组：正常培养；胡桃醌组：20 μmol/L胡桃醌培养液培养；0.5、1.0、2.0 μmol/L MG132组：分别与0、1.0、2.0 μmol/L蛋白酶体抑制剂MG132加20 μmol/L胡桃醌培养，检测c-Myc蛋白表达的水平。将si c-Myc转染入HeLa细胞后，将细胞分siNC组：空载体组；si-NC；胡桃醌组：空载体加20 μmol/L胡桃醌处理；si-cMyc组：转染Myc RNA；si-cMyc20 μmol/L胡桃醌组：转染Myc RNA加20 μmol/L胡桃醌处理。MTT及流式细胞术检测20 μmol/L胡桃醌处理后对敲除及未敲除c-Myc基因的细胞增殖及凋亡的影响。结果 与对照组相比，不同浓度胡桃醌可下调c-Myc蛋白表达且曾时间及剂量依赖性（P<0.05；P<0.01）；胡桃醌可缩短c-Myc蛋白的半衰期，加入不同浓度的MG132后，即可明显上调c-Myc蛋白水平（P<0.05； P<0.01）。未用胡桃醌组相比，胡桃醌可明显增加c-Myc蛋白的泛素降解水平。未敲除c-Myc组相比，敲除组在胡桃醌处理后吸光度值明显增加（P<0.05）和早期凋亡率明显下降（P<0.05）。结论 胡桃醌通过影响c-Myc蛋白的泛素化降解过程，进而抑制HeLa细胞增殖并促进其凋亡的发生。

• Mibefradil可改善肥胖小鼠骨骼肌的质量、功能和结构

  吴江豪, 吴永鑫, 杨韵菲, 余 靖, 傅 饶, 孙 悦, 肖 谦

  目的 探讨mibefradil对肥胖小鼠骨骼肌质量、功能及结构的影响。方法 将15只6周龄C57BL/6小鼠随机分为普通饮食组（Con组，n=5）、高脂饮食组（HFD组，n=5）和高脂饮食+mibefradil干预组（HFD+Mibe组，n=5）。电子抓力仪测量小鼠前肢抓力，DXA分析小鼠后肢肌肉含量，GPO-PAP法测定甘油三酯和总胆固醇，HE染色观察小鼠腓肠肌肌纤维横截面积，Westernblot和免疫荧光技术检测自噬水平变化，Western blot检测Akt/mTOR信号通路的激活情况。结果 与Con组相比，HFD组体质量增加，相对抓力、后肢肌肉比率降低（P<0.05），给予mibefradil干预后体质量减轻，相对抓力升高、后肢肌肉比率升高（P< 0.05）；HE染色结果显示，与Con组相比，HFD组平均肌纤维横截面积降低，给予mibefradil干预后平均肌纤维横截面积得到改善（P<0.05）；免疫荧光结果显示，HFD组和HFD+Mibe组的LC3多均匀分布于细胞浆，呈浅淡红色荧光；而在HFD组检测到不同程度的明亮斑点状红色荧光；Western blot结果显示，与Con组相比，HFD组LC3Ⅱ蛋白表达水平升高，P62蛋白表达水平降低，AKT和mTOR的磷酸化表达降低，给予mibefradil干预后LC3Ⅱ蛋白表达水平降低，P62蛋白表达水平升高，AKT和mTOR的磷酸化表达升高（P<0.05）。结论 给予mibefradil干预可以抵抗高脂诱导的体质量增加，改善肥胖小鼠的肌肉质量和功能，这可能与其改善脂代谢和通过激活AKT/mTOR信号通路来抑制肥胖诱导的过度自噬有关。

• 我国围绝经期女性抑郁症状变化及影响因素分析：基于CHARLS面板数据

  李佳欣, 肖 艳, 廖 娟, 杨春霞

  目的 了解我国围绝经期女性抑郁症状变化情况及影响因素，从而为制定防治策略提供依据。方法 利用CHARLS数据选取年龄45~60岁关键变量值完整的围绝经期女性作为调查对象，去除缺失值，得出4年的截面数据，分别为4318、4200、3930和4147份。通过截面数据匹配面板数据，得到4期完整的追踪数据5040份，构成n=1260，T=4的平衡短面板数据集。利用面板数据分析围绝经期女性抑郁症状检出率及变动情况，采用面板二值选择模型的随机效应Logistic回归模型分析围绝经期女性抑郁症状的影响因素。结果 不同年份追踪样本的围绝经期女性的抑郁症状检出率分别为35.9%，33.1%，36.7%，43.7%，追踪数据检出率的变化趋势不具有统计学意义（APC=3.25%，P=0.183）。回归结果显示：城镇地区OR=0.570（0.457，0.710）、文化程度越高 OR=0.759（0.655，0.879）、有配偶 OR=0.363（0.236，0.558）是围绝经期女性抑郁症状的保护因素；自评健康差 OR=2.704（2.152，3.396）、有残疾 OR=1.457（1.087，1.954）、有慢性疾病 OR=1.407（1.179，1.680）、最近两年有摔倒 OR=2.028（1.613，2.550）、睡眠时长不正常OR=2.249（1.898，2.664）、生活较不满意OR=4.803（3.757，6.140）是围绝经期女性抑郁症状的危险因素。结论 我国围绝经期女性抑郁症状检出水平较高，应加强对农村地区，文化程度低，无配偶，自评健康差，有残疾，有慢性疾病，最近两年有摔倒，睡眠时长不正常，生活较不满意等人群的心理保健和控制措施。

• 超声S-Detect技术在乳腺肿块诊断中的价值

  程扬眉, 夏 群, 王 俊, 解红娟, 余 奕, 刘海华, 姚志正, 胡金花

  目的 探讨超声S-Detect 技术在乳腺肿块病灶诊断中的应用价值。方法 采用S-Detect 技术及常规超声对62例女性患者总计85个乳腺肿块进行诊断，以术后病理结果为金标准，对比分析常规超声与S-Detect技术的诊断效能。结果 低年资医师常规超声诊断效能低于S-Detect技术（P0.05）。S-Detect技术与高年资医师诊断结果呈正相关（r=0.97）。S-Detect技术长轴切面和长轴垂直切面的诊断效能无显著差异（P>0.05）。中年资医师常规超声诊断直径≤20 mm乳腺肿块的效能优于S-Detect技术（P20 mm乳腺肿块的效能低于S-Detect技术（P<0.05）。结论 S-Detect技术可用于乳腺良恶性肿块的鉴别诊断，其诊断效能可达到中、高年资医师BI-RADS分类的诊断水平，但在诊断直径不足20mm乳腺肿块时的效能并不十分理想。

• HMGB1下调的作用：通过抑制神经元细胞自噬和凋亡减轻大鼠脑出血后的神经元损伤

  张 列, 苗树船, 杨中鑫, 李宗喜, 范英俊, 余 凯, 黄可阳, 黄庆喜, 夏 勋

  目的 探讨高迁移率族蛋白1（HMGB1）在大鼠脑出血后对神经元细胞自噬和凋亡的作用机制。方法 将20只Wistar大鼠随机分为4组（5只/组）：假手术组（Sham组）、脑出血组、HMGB1中和抗体治疗（anti-HMGB1）组、control IgG组。模型组选择颅内纹状体注射0.2 U/mL胶原酶Ⅳ建立脑出血大鼠模型。Sham组颅内注射2 μL生理盐水，术后尾静脉注射PBS，6 h后再次注入等量PBS；anti-HMGB1组术后尾静脉注射1 mg/kg anti-HMGB1单克隆抗体，6 h后再次注入等量抗体；control IgG组术后尾静脉1 mg/kg anti-IgG单克隆抗体，6 h后再次注入等量抗体。采用改良神经损害程度（mNSS）评分评估大鼠神经功能和损伤程度。TUNEL染色检测纹状体神经元凋亡。Western blot检测血肿周围脑组织神经元细胞HMGB1、自噬蛋白（Beclin-1、LC3-II和LC3-I）和凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3）的表达。免疫组化检测纹状体组织中HMGB1阳性表达。ELISA检测血清HMGB1含量变化。结果 造模成功后，脑出血组中mNSS评分增加（P<0.05），给予anti-HMGB1单克隆抗体后，mNSS评分减少（P<0.05）。与 Sham 组相比，脑出血组大鼠纹状体神经元凋亡率增加（P<0.001），Beclin-1、LC3-II、Bax 和 cleavedcaspase-3的表达增加（P<0.05），而LC3-I和Bcl-2的表达减少（P<0.05），HMGB1含量增加（P<0.05）。给予anti-HMGB1单克隆抗体后，大鼠纹状体神经元凋亡率减少（P<0.05），Beclin-1、LC3-II、Bax和cleaved caspase-3的表达减少（P<0.05），而LC3-I和Bcl-2的表达增加（P<0.05），HMGB1含量减少（P<0.05）。结论 anti-HMGB1单克隆抗体下调HMGB1水平改善大鼠脑出血后的神经功能，其机制可能是抑制大鼠脑出血后的神经元细胞自噬和凋亡。

• 11号染色体三体嵌合体病例的遗传学检测及分析

  谢潇潇, 赵青冬, 付玉荣, 张文玲, 孟元光, 卢彦平

  11号染色体三体嵌合体临床罕见，决策困难。本研究综合运用非侵入性产前检测、染色体核型分析、染色体微阵列分析、染色体拷贝数变异测序、荧光原位杂交等技术，对2例11号染色体三体嵌合体病例进行检测及遗传咨询。2例病例获得不同的妊娠结局，11号染色体三体的限制性胎盘嵌合胎儿表现为严重生长受限，孕25+3周终止妊娠，胎盘嵌合比例达44%；而11号染色体三体的胎儿真性低比例嵌合体，排除了单亲二倍体且超声无异常，经慎重的产前咨询后，选择继续妊娠至足月分娩，新生儿随访一年余，发育未见异常，妊娠结局良好。非侵入性产前检测对限制性胎盘嵌合具有一定的检测效能，但也可能漏诊胎儿真性嵌合体病例，非侵入性产前检测结果阳性而侵入性产前检测未发现异常的病例，需重视咨询并加强妊娠期管理。

• 钠碘转运体报告基因共表达对嵌合型受体T细胞体外增殖及杀伤能力的影响

  田川卉子, 黄普凤, 何雨佳, 王 亮, 彭志平

  目的 探讨钠碘转运体（NIS）报告基因的共表达对嵌合型受体T（CAR-T）细胞体外增殖和杀伤活性的影响。方法 慢病毒感染法制备CAR-T细胞（仅表达CD19 CAR的T细胞）、NIS-T细胞(仅表达NIS报告基因的T细胞)和NIS-CAR-T细胞（共表达NIS和CD19 CAR的T细胞），然后按T细胞蛋白表达情况分为4组∶T细胞组（未转染的T细胞）、CAR-T组、NIS-T组、NIS-CART组。流式细胞术检测各组NIS和CAR转染率。各组细胞常规培养24、48、72 h，CCK-8法检测增殖能力。各组T细胞为效应细胞，Nalm6肿瘤细胞为靶细胞，按效靶比0.5∶1、1∶1、2∶1、4∶1共培养24、48、72 h，乳酸脱氢酶细胞毒性检测法（LDH）检测各组细胞对肿瘤细胞的杀伤率，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测共培养上清液中各组细胞因子人干扰素-γ（IFN-γ）和人肿瘤坏死因子-β（TNF-β）释放水平。摄碘实验检测表达NIS蛋白各组细胞的NIS功能。结果 CAR-T细胞、NIS-CAR-T细胞的CAR转染率分别为91.91%、99.41%，NIS-T细胞、NIS-CAR-T细胞的NIS转染率分别为47.83%、50.24%。常规培养24、48、72 h CAR-T细胞与NIS-CAR-T细胞增殖率差异无统计学意义（P>0.05）。0.5∶1、1∶1、2∶1和4∶1效靶比作用24 h时CAR-T细胞杀伤率（%）均高于NIS-CAR-T细胞（P0.05）。CAR-T细胞与NIS-CAR-T细胞均存在IFN-γ和TNF-β释放现象，释放水平均高于对照组（P0.05），但均高于对照组T细胞（P<0.05）。结论 NIS报告基因的共表达不影响CAR-T细胞中CAR转染率，对细胞增殖和杀伤活性无抑制现象。

• 经鼻高流量预充氧可保障老年患者全麻气管插管诱导期的安全

  蔡清香, 马武华, 吴财能, 刘慧慧, 王姝晨, 张广防

  目的 评估经鼻高流量预充氧在老年患者全麻气管插管诱导期的安全性研究。方法 56例非困难气道老年患者，采用随机数字表法分为经鼻高流量吸氧组（HF组）和传统面罩经口鼻吸氧组（M组），28例/组。全麻气管插管诱导给药前预充氧5 min，HF组喉镜检查期间维持给氧，M组通气持续到喉镜检查。观察并记录两组患者基本资料，预充氧前（T1）、预充氧5 min（T2）及插管成功即刻（T3）的超声下胃窦横截面积（CSA）和动脉血气分析指标：PaO2、PaCO2、cSO2，窒息安全时间，插管时间，面罩通气的次数及术后并发症。结果 两组患者的基本资料差异无统计学意义。预充氧5 min，两组患者的PaO2和cSO2均明显升高，且HF组PaO2较M组明显（F=118.108 vs 9.511，P0.05）。结论 经鼻高流量吸氧是一种安全简单有效的预充氧方式，与传统的面罩预充氧相比，能提高老年患者的动脉氧分压，延长患者窒息安全时间，可保障老年患者全麻诱导插管时气道管理的安全。

• 基于时空图卷积神经网络的蛋白质复合物识别方法

  盛江明, 薛 娟, 李 鹏, 伊 娜

  目的 探讨利用时空图卷积神经网络在动态蛋白质网络中挖掘复合物的新方法。方法 文中首先定义了边强度、节点强度和边存在概率等指标对动态蛋白质网络进行建模，然后结合图上的时间序列信息和结构信息，基于希尔伯特-黄变换、注意力机制和残差连接等技术设计了2种卷积算子来对网络中蛋白质的特征进行表示学习，构建得到动态蛋白质网络特征图。最后采用谱聚类来识别复合物。结果 在多个公开生物数据集上的仿真实验结果表明，所提算法在DIP数据集和MIPS数据集上的F值都达到了90%以上，相比于DPCMNE、GE-CFI、VGAE和NOCD等4种识别算法而言，识别效率分别平均提高了约34.5%、28.7%、25.4%和17.6%。结论 运用深度学习技术来处理动态蛋白质网络的性能表现良好，具有普适意义。

• 下调SIK2可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤：基于mTOR-ULK1信号通路的下调与细胞自噬的减少

  刘秀秀, 许 乐, 吴敬医, 张一帆, 吴 超, 张 霞

  目的 探究盐诱导激酶2（SIK2）对大鼠心脏缺血再灌注损伤的影响及机制。方法 建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型，随机分为假手术组、缺血再灌注组、SIK2抑制剂组，5只/组（造模前24 h左股静脉注射博舒替尼10 mg/kg）。超声检测大鼠心功能，HE染色观察大鼠心肌组织病理变化，透射电镜观察心肌细胞自噬情况，蛋白免疫印迹法检测各组大鼠心肌组织中SIK2和LC3B、Beclin-1、p62等自噬相关蛋白以及p-mTOR、mTOR、p-ULK1、ULK1相关通路蛋白含量。结果 与假手术组比较，缺血再灌注组心肌组织病理损伤严重，自噬小体数量增加（P<0.05），同时SIK2蛋白表达增多（P<0.01）；与缺血再灌注组相比，SIK2抑制剂组SIK2蛋白表达减少（P<0.01），心肌组织病理损伤较轻，自噬小体数量减少（P<0.05）。与假手术组相比，缺血再灌注组LVEF、FS值降低（79.33±3.40 vs 38.67±2.49，59.33±5.25 vs 19.33±1.25，P<0.001）；与缺血再灌注组相比，SIK2抑制剂组LVEF、FS值升高（38.67±2.49 vs 59.33±3.40，19.33±1.25 vs 30.67±3.40，P0.05）。与假手术组相比，缺血再灌注组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达增多，p62蛋白表达减少（P<0.01）；与缺血再灌注组相比，SIK2抑制剂组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达减少，p62蛋白表达增多（P<0.05）。与假手术组相比，缺血再灌注组p-ULK1（Ser757）蛋白表达增多（P<0.01），p-mTOR蛋白表达减少（P<0.0001）；与缺血再灌注组相比，SIK2抑制剂组p-ULK1（Ser757）蛋白表达减少（P< 0.01），p-mTOR蛋白表达增多（P0.05）。结论 SIK2可能通过mTOR/ULK1信号通路促进细胞自噬，对SIK2进行抑制，可以减少异常自噬，缓解心肌缺血再灌注损伤。

• 准直器叶片到位精度对宫颈癌容积调强计划验证的影响

  梁 健, 余凤姿, 朱金汉, 宋 婷

  目的 探讨加速器多叶准直器（MLC）叶片到位精度对宫颈癌容积调强放疗计划剂量验证通过率的影响。方法 在加速器常规质控基础上，选用Mapcheck和Arccheck两种半导体探测器矩阵在校准MLC叶片到位精度前后，分别测量30例宫颈癌容积调强放疗计划的二维和三维剂量分布。采用3%、3 mm和2%、2 mm标准，计算二维和三维剂量验证的Gamma通过率；并通过3DVH软件进一步将三维剂量分布误差与患者解剖结构建立起相互关系，评估加速器MLC叶片到位精度对宫颈癌容积调强放疗计划通过率的影响。结果 MLC校准前后，3%、3 mm标准下Mapcheck测得的Gamma通过率分别为（88.80±1.81）%和（99.25±0.53）%，平均提高10.45%；Arccheck测得的Gamma通过率分别为（87.61±1.98）%和（98.13±0.99）%（P<0.05），平均提高了10.52%。3DVH测得的Gamma通过率分别为（89.87±2.28）%和（98.30±1.15）%（P<0.05），平均提高了8.43%。结论 MLC叶片到位精度是影响加速器宫颈癌容积调强放疗计划执行准确性的主要因素之一。通过使用Autocal软件，可以快速、准确的完成多叶准直器的校准工作。

• 开颅动脉瘤夹闭术患者的术后心血管不良事件及预后:一项回顾性队列研究

  陈 娜, 李仁华, 王 锷, 胡德华, 唐朝辉

  目的 探讨开颅动脉瘤夹闭术患者术后严重心血管不良事件对于其预后的影响。方法 本研究为回顾性队列研究，收集2016年12月~2017年12月在中南大学湘雅医院行开颅动脉瘤夹闭术的患者，根据患者术后是否发生Clavien-Dindo分级Ⅱ级及以上的心血管不良事件，将患者分为CAE组和非CAE组。收集其围术期临床资料、住院期间不良事件和入出院时的神经系统相关功能评估，并随访患者术后1年的神经系统功能情况和死亡率。主要结局指标是术后1年的死亡。次要结局指标为术后1年格拉斯哥预后评分（GOS）、术后住院时间、术后重症监护病房住院时间、出院前格拉斯哥昏迷评分（GCS）。结果 共有361例患者纳入本研究，其中CAE组20例（5.5%）、非CAE组341例。2组患者的人口统计学资料、临床病史或其他术后不良事件差异均无统计学意义（P>0.05）。CAE组术后1年死亡率（20.0%；95% CI：0.8%~39.2%）高于非CEA组（5.6%；95% CI：3.1%~8.0%；P=0.010）。多因素logistics回归分析显示在调整了年龄、性别、急诊入院、合并蛛网膜下腔出血、出血量、手术时间、动脉瘤部位和术前心血管病史后，术后Clavien-Dindo分级≥Ⅱ的CAEs仍与术后1年死亡率独立相关（OR=3.670；95% CI：1.037~12.992；P=0.044）。CAE组术后1年GOS也更低（P=0.002）。但两组在其他不良事件发生率、术后住院时间、ICU住院时间、出院时GCS等方面差异无统计学意义（P>0.05）。结论 颅内动脉瘤夹闭术患者术后发生心血管不良事件可能是术后1年死亡率和致残率的危险因素。

• JAG1影响血管生成并促进三阴性乳腺癌细胞的迁移、侵袭和粘附

  刘俊平, 石宇彤, 吴敏敏, 徐梦岐, 张凤梅, 何志强, 唐 敏

  目的 探究JAG1对三阴性乳腺癌（TNBC）恶性表型的影响，并研究乳腺癌微环境血管生成的机制。方法 体外培养人TNBC细胞231和231B，Q-PCR实验检测Notch相关分子的表达水平。动物实验将雌性裸鼠分为231组和231B组，5只/组，乳腺脂肪垫分别注射231和231B细胞1×106/只。4~6周取肿瘤组织进行免疫组化和免疫荧光实验。使用JAG1重组蛋白处理231细胞和DAPT处理231B细胞，实验分4组：231空白对照组；rJAG1处理231组；231B空白对照组；DAPT处理231B组。用CCK-8法、Hoechst 33258染色实验、划痕愈合实验、Transwell小室实验和内皮细胞粘附实验检测TNBC的生物学特性变化。使用Western blot检测231和231B生物学特性相关蛋白的水平。接下来体外培养血管内皮细胞HUVEC，TNBC条件培养基处理HUVEC，实验分5组：（1）HUVEC阴性对照组；（2）231空白条件培养基处理组；（3）rJAG1处理231的条件培养基处理组；（4）231B空白条件培养基处理组；（5）DAPT处理231B的条件培养基处理组。CCK-8实验和基质胶成管实验分别检测HUVEC的增殖与成管能力。结果 与231细胞相比，231B表达更高的JAG1（P<0.05）。231B肿瘤表达更高的VEGFA和CD31。与231空白组相比，rJAG1处理组中231细胞的迁移、侵袭和粘附能力明显受到促进（P<0.05）。Twist1和Snail的蛋白水平均增加（均P<0.01），抗凋亡蛋白Bcl-2表达量增加（P<0.05），而DAPT明显抑制231B的相关现象和指标。JAG1过表达的条件培养基增加了HUVEC的细胞数以及成管数量（P<0.05）。结论 JAG1可能影响TNBC的恶性表型，并促进微环境的血管生成。