南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2025年第5期

• Nrf2/HO-1抗氧化通路调控氯氰菊酯诱导的小鼠海马氧化损伤的机制

  周礼华, 张汛, 郁瑛瑛, 张畔畔

  目的 探讨Nrf2/HO-1抗氧化通路在氯氰菊酯（CYP）诱导的C57BL/6小鼠海马氧化损伤中的作用及其机制。 方法 将10周龄C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和CYP低剂量（5 mg/kg）、中剂量（10 mg/kg）、高剂量（20 mg/kg）组，连续3周经口灌胃染毒，检测海马组织丙二醛、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）及过氧化氢酶水平。HE染色观察海马组织细胞形态学变化。免疫荧光双标技术检测Nrf2/HO-1蛋白在海马锥体层神经元细胞中的表达。RT-qPCR及Western blotting检测Nrf2及其下游靶激酶HO-1的mRNA与蛋白表达。 结果 与对照组相比，CYP暴露组脂质过氧化产物丙二醛含量逐渐增加，GSH-PX、T-SOD、过氧化氢酶等抗氧化酶活性逐渐下降，差异具有统计学意义（P<0.01）。HE结果显示，海马CA1、CA3区锥体层神经元受损，且暴露剂量越高损伤越严重。免疫荧光结果显示，CYP暴露引起Nrf2细胞核易位，Nrf2/HO-1蛋白共表达增加。RT-qPCR与Western blotting结果显示，CYP暴露诱导Nrf2及其下游靶激酶HO-1 mRNA与蛋白表达上调（P<0.01）。 结论 抗氧化通路Nrf2/HO-1调控CYP诱导的C57BL/6小鼠海马氧化损伤，且损伤效应与暴露水平呈现剂量效应关系。

• 精胺抑制巨噬细胞中GBP5介导的NLRP3炎性小体活化减轻感染肠道病毒71型的新生小鼠脏器损伤

  田芷华, 杨青青, 陈欣, 张方方, 钟柏茂, 曹虹

  目的 基于巨噬细胞中GBP5调控NLRP3炎症小体活化，探究精胺（Spm）治疗肠道病毒71型（EV71）感染引起的重症手足口病的机制。 方法 体内实验：将3~5 d龄的BALB/c乳鼠随机分为对照组（CON组）、感染组（EV71组）、治疗组（SPM组），感染组和治疗组每只腹腔注射浓度为1×106半数组织培养感染剂量（TCID50）病毒液50 μL，治疗组在注射病毒3 d后注射100 μmol/L 精胺50 μL，对照组腹腔注射无菌PBS 50 μL。观察小鼠状态1周，提取小鼠心、肝、肺及肾组织全蛋白、RNA及组织切片，Western blotting、qPCR检测小鼠组织GBP5、NLRP3、CXCL10、TNFSF10表达水平，HE染色观察小鼠组织损伤及炎症细胞浸润状况，免疫组化法观察组织巨噬细胞浸润情况及GBP5的表达水平。体外实验：分别设置对照组（CON组）、感染组（EV71组）、治疗组（SPM组）、多胺生物合成抑制剂组。提取THP-1及RAW细胞RNA，通过RT-PCR检测细胞GBP5、NLRP3、CXCL10、TNFSF10表达水平。 结果 与对照组相比，小鼠在感染EV71后心、肝、肺及肾组织出现明显损伤，其中心、肺组织中明显观察到巨噬细胞的浸润。心、肝、肺及肾组织中GBP5、NLRP3、CXCL10、TNFSF10表达水平明显升高（P<0.05）；经精胺治疗后，与感染组相比治疗组小鼠组织损伤明显改善，心、肺组织中的巨噬细胞浸润减少。精胺治疗后小鼠心、肝、肺及肾组织中NLRP3、GBP5、CXCL10、TNFSF10表达水平降低（P<0.05）。在THP-1及RAW细胞中发现，感染EV71病毒后GBP5、NLRP3、CXCL10、TNFSF10表达升高（P<0.05），经精胺治疗后细胞中GBP5、NLRP3、CXCL10、TNFSF10表达降低（P<0.05）。在THP-1细胞中使用多胺生物合成抑制剂减少精胺合成可改善由GBP5 siRNA干扰引起的GBP5、NLRP3、CXCL10、TNFSF10表达降低（P<0.05）。 结论 精胺治疗可以降低EV71感染引起的巨噬细胞中GBP5介导的NLRP3炎症小体活化，减少炎症因子释放从而发挥治疗儿童重症手足口病的作用。

• 电针预处理通过调节肠道-大脑轴及Nrf2/HO-1信号通路抑制铁死亡减轻大鼠脑缺血再灌注损伤

  张安邦, 孙秀颀, 庞博, 吴远华, 时靖宇, 张宁, 叶涛

  目的 探讨电针（EA）预处理通过调节肠道微生物群和Nrf2/HO-1信号通路以及抑制铁死亡来减轻脑缺血再灌注损伤（CIRI）的潜力。 方法 诱导CIRI的大鼠接受大脑中动脉堵塞（MCAO）手术，并分为假手术组、模型组和EA治疗组，10只/组。EA治疗在百会穴（DU20）和足三里穴（ST36）于MCAO前3 d进行。评估神经功能缺损和开放场行为，使用TTC、Nissl和HE染色检查脑梗死和海马病理。通过ELISA测定脑组织中丙二醛、活性氧和超氧化物歧化酶水平，利用qRT-PCR和Western blotting分析Bax、Bcl-2、Nrf2、HO-1、GPX4和SLC7A11的表达。免疫组化检测脑组织中GPX4、Nrf2和HO-1的水平，并收集粪便样本以分析肠道微生物群。 结果 EA预处理降低了大鼠的神经功能缺损评分（P<0.05），改善了自愿运动的频率和持续时间（均P<0.05）。TTC染色显示EA组的缺血性梗死面积小于模型组（P<0.05）。Nissl染色结果显示，模型组海马神经元数量减少且Nissl物质丢失，而EA组神经元存活率提高，Nissl物质含量恢复（P<0.05）。HE染色结果显示，模型组海马神经元排列不规则且病理变化明显，而EA组的结构和活力有所改善（P<0.05）。ELISA检测显示，模型组的丙二醛和活性氧水平升高，超氧化物歧化酶水平下降（均P<0.05）；EA组则相反。EA治疗降低了Bax蛋白表达，增加了Bcl-2蛋白表达（均P<0.05），同时上调了铁死亡关键调控蛋白GPX4和SLC7A11的表达，免疫组化结果一致。EA上调Nrf2（P<0.05）和HO-1（P<0.05）的表达，激活Nrf2/HO-1信号通路，并改善肠道微生物群。 结论 电针预处理通过调节肠脑轴、激活Nrf2/HO-1信号通路、抑制细胞凋亡和铁死亡，有效缓解了大鼠脑缺血再灌注损伤，为其在缺血性脑血管疾病中的临床应用提供了科学依据。

• 眼针疗法通过上调METTL3介导的m6A甲基化修饰促进脑皮层血管新生进而改善脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能

  浦延鹏, 王震, 储浩然

  目的 观察眼针对脑缺血再灌注损伤（CIRI）模型大鼠神经功能及缺血侧脑皮层组织血管新生的影响，基于METTL3介导的N6-甲基腺苷（m6A）甲基化修饰，上调HIF-1α/VEGF-A信号轴，促进血管新生，探究眼针改善CIRI模型大鼠神经功能的作用机制。 方法 将50只SD大鼠随机分为正常、假手术、模型、眼针及激动剂组（n=10）。采用改良线栓法制备CIRI模型，分组干预后对大鼠进行神经功能评分，TTC染色比较脑梗死面积，尼氏体染色观察脑神经元损伤，CD31和EDU免疫荧光双标检测脑皮层组织血管新生，采用ELISA检测脑皮层组织m6A甲基化修饰水平，RT-PCR检测METTL3、HIF-1α/VEGF-A的mRNA表达，Western blotting检测METTL3、HIF-1α/VEGF-A的蛋白表达。 结果 与正常组和假手术组比较，模型组大鼠神经功能评分明显升高（P<0.05），脑梗死面积明显增加（P<0.05），尼氏体数量明显减少（P<0.05），CD31和EDU免疫荧光双标的新生血管数量增加，m6A甲基化修饰明显减少（P<0.05），METTL3的蛋白及mRNA表达减少（P<0.05），HIF-1α与VEGF-A的蛋白及mRNA表达增加（P<0.05）；与模型组比较，眼针和激动剂组神经功能评分明显下降（P<0.05），脑梗死面积明显减小（P<0.05），尼氏体数量明显增多（P<0.05），CD31和EDU荧光双标的新生血管数量明显增多，m6A甲基化修饰明显增加（P<0.05），而HIF-1α与VEGF-A、METTL3的蛋白及mRNA表达亦明显增加（P<0.05）。眼针和激动剂组、正常和假手术组比较，各指标差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 眼针能改善CIRI模型大鼠神经功能损伤，其机制可能与上调METTL3介导的m6A甲基化修饰，调节HIF-1α/VEGF-A信号轴，促进脑皮层血管新生有关。

• 调周滋阴方治疗早发性卵巢功能不全的疗效、安全性及作用机制

  唐培培, 谈勇, 殷燕云, 聂晓伟, 黄菁宇, 左文婷, 李玉玲

  目的 基于网络药理学探讨调周滋阴方治疗早发性卵巢功能不全（POI）的作用机制，通过动物实验进行验证，并设计临床对照试验验证调周滋阴方对该病的临床疗效。 方法 利用TCMSP、PubChem、Swiss Target Prediction、Genecards、OMIM等数据库筛选相应靶点，获取核心PPI，进行GO、KEGG富集分析，构建“疾病-通路-靶点-成分-药物”网络，采用AutoDock对核心活性成分和核心靶点进行分子对接验证。通过动物实验，采用Western blotting进一步验证网络药理学结果。设计临床对照试验，对照组予芬吗通治疗，试验组在此基础上加用调周滋阴方，通过观察两组内分泌指标（FSH、LH、E2、AMH）、窦卵泡数、Kupperman评分、不良反应发生率及妊娠率，验证调周滋阴方治疗该病的临床有效性。 结果 通过网络药理学方法，得到调周滋阴方治疗早发性卵巢功能不全的潜在靶点有163个；核心活性成分主要为山奈酚、β-谷甾醇、木犀草素、槲皮素，核心靶点主要为SRC、TP53、STAT3、PIK3CA、MAPK3等；GO功能富集主要包括细胞运动的正调控、蛋白质磷酸化等；KEGG富集通路主要包括癌症通路、PI3K-Akt信号通路等；分子对接结果显示核心活性成分与核心靶点间均有良好的结合能力。利用动物实验对关键通路进行验证，结果显示，与POI模型组大鼠比较，调周滋阴方可升高POI大鼠卵巢组织中p-PI3K和p-Akt蛋白表达（P<0.05），验证了网络药理学的部分预测结果。临床试验显示，两组E2较治疗前升高，FSH、LH较治疗前降低，Kupperman评分较治疗前降低（P<0.05），且试验组优于对照组（P<0.05）；两组窦卵泡数较治疗前均升高（P<0.05），试验组AMH较治疗前升高（P<0.05），试验组与对照组间的差异无统计学意义（P>0.05）；治疗结束4周后，试验组治疗效果优于同期对照组（P<0.05）。 结论 调周滋阴方具有多成分、多靶点、多途径的治疗特点，其中激活PI3K/Akt通路是其作用机制之一，从而改善POI患者卵巢储备功能，缓解临床症状，提高临床疗效，具有良好的临床应用前景。

• Circ_EPHB4通过miR-424-5p/Wnt3信号轴调控胶质瘤细胞对替莫唑胺的化疗敏感性

  廖宇翔, 刘景平, 刘博, 费喜云, 金晨

  目的 探讨Circ_EPHB4通过miR-424-5p/Wnt3信号轴调控胶质瘤细胞替莫唑胺敏感性的机制。 方法 收集我院2019年1月~2021年12月25例原发性胶质瘤患者和25例经替莫唑胺（TMZ）基化疗治愈后的复发性胶质瘤患者组织标本。qRT-PCR检测Circ_EPHB4表达敲低及敲低对照组细胞中circ_EPHB4、miR-424-5p及Wnt3 mRNA的表达水平。Western blotting检测Wnt3蛋白表达水平。细胞活力、克隆形成和细胞凋亡分别通过CCK-8、克隆形成和流式细胞仪检测评估。采用双荧光素酶报告和RNA免疫沉淀（RIP）试验验证circ_EPHB4、miR-424-5p和Wnt3间的靶向调控关系。皮下成瘤实验评估circ_EPHB4对胶质瘤肿瘤形成能力的影响。 结果 胶质瘤组织和细胞中circ EPHB4的表达明显高于正常神经组织和星形胶质细胞（P=0.014）。与si-NC对照组相比，si-Circ_EPHB4降低了TMZ耐药胶质瘤细胞中circ_EPHB4表达水平（A172：P=0.008；SHG44：P=0.009）。circ_EPHB4表达敲低降低了TMZ耐药胶质瘤细胞对TMZ的IC50值（A172：P=0.012；SHG44：P=0.022），抑制了胶质瘤细胞克隆形成（A172：P=0.004；SHG44：P=0.006），并促进胶质瘤细胞凋亡（A172：P=0.002；SHG44：P=0.00）。胶质瘤组织中miR-424-5p和circ_EPHB4表达呈负相关（r=-0.556，P=0.011）。miR-424-5p表达敲低，逆转了circ_EPHB4表达敲低引起的IC50值下降（P=0.001）、克隆形成抑制（P=0.016）和细胞凋亡促进作用（P=0.001）。此外，miR-424-5p表达敲低，还削弱了circ_EPHB4表达敲低对PCNA、P-gp、MRP1和bax表达的影响（P=0.004）。 结论 circ_EPHB4通过“海绵吸附”miR-424-5p调控Wnt3表达，由此调节TMZ耐药胶质瘤细胞克隆形成、细胞凋亡和TMZ敏感性，circ_EPHB4是逆转胶质瘤耐药的潜在靶点。

• 绒毛样蛋白VILL通过与LMO7蛋白相互作用抑制鼻咽癌细胞的增殖

  曾玉梅, 李继科, 黄仲曦, 周毅波

  目的 探索绒毛样蛋白VILL抑制鼻咽癌增殖的分子机制。 方法 收集136例鼻咽癌和67例鼻咽非癌组织，采用免疫共沉淀（CO-IP）、质谱、Western blotting、免疫荧光和GST pull down实验在鼻咽癌细胞株中筛查并验证VILL相互作用丰度最高蛋白。采用转基因实验，在体外（鼻咽癌细胞株）和体内（裸鼠）验证VILL与靶蛋白对鼻咽癌增殖的调控作用。采用免疫组化实验在临床组织标本中验证VILL与靶蛋白表达水平与鼻咽癌临床特征的相关性。 结果 在鼻咽癌细胞（HONE1 EBV、S18）中，VILL与E3泛素连接酶LMO7相互作用的丰度最高，二者共定位于细胞浆，直接相互作用。过表达LMO7部分逆转VILL对鼻咽癌细胞增殖的抑制作用。与67例鼻咽非癌组织比较，VILL表达在136例鼻咽癌组织中下调（P<0.0001）且与临床T分期（P=0.04）、N分期（P=0.01）和M分期（P=0.013）显著相关，而LMO7在鼻咽癌普遍高表达。 结论 VILL可能通过抑制LMO7的促癌功能而抑制鼻咽癌增殖。

• 丰富环境通过调控前扣带回皮层锥体神经元兴奋性缓解束缚应激诱导的小鼠焦虑样行为

  陈昌锋, 方勤, 高银环, 王烈成, 陈磊

  目的 探究前扣带回皮层锥体神经元调控丰富环境缓解束缚应激致焦虑样行为的机制。 方法 C57BL/6J小鼠分为3组：正常组（CON）、束缚组（RS）和丰富环境组（RS+EE），8只/组。CON组正常实验室环境饲养，RS组给与2 h/d连续3 d的束缚应激，RS+EE组在给与2 h/d连续3 d的束缚应激的同时EE下饲养。利用高架十字迷宫实验和旷场实验评估小鼠焦虑样水平，通过免疫荧光实验检测小鼠ACC区c-Fos的变化，采用膜片钳实验检测小鼠PynACC兴奋性的变化，进一步检测PynACC的mEPSC和mIPSC的发放频率和幅度，以评估突触传递的变化。 结果 高架十字迷宫实验中，与CON组比较，RS组小鼠在开臂的停留时间减少（P<0.01），进入开臂的次数减少（P<0.05）；与RS组比较，RS+EE组小鼠在开臂的停留时间增加（P<0.01），进入开臂的次数增加（P<0.05）；旷场实验中，与CON组比较，RS组小鼠在中心区域的移动时间减少（P<0.01），进入中心区域的次数减少（P<0.01）；与RS组比较，RS+EE组小鼠在中心区域的移动时间增加（P<0.01），进入中心区域的次数增加（P<0.05）。免疫荧光实验中，与CON组比较，RS组小鼠ACC区c-Fos表达增加（P<0.001）；与RS组比较，RS+EE组小鼠前扣带回皮层c-Fos表达减少（P<0.01）。膜片钳实验中，与CON组比较，RS组小鼠PynACC动作电位发放增多（P<0.01）；与RS组比较，RS+EE组小鼠PynACC动作电位发放减少（P<0.05）；与CON组比较，RS组小鼠PynACC的mEPSC频率增加（P<0.05）；与RS组比较，RS+EE组小鼠PynACC的mEPSC频率降低（P<0.05），而幅度均没有变化；mIPSC的频率和幅度均没有变化。 结论 丰富环境降低前扣带回皮层锥体神经元兴奋性缓解束缚应激致焦虑样行为。

• 参芪补中方通过激活AMPK/SIRT1/PGC-1α改善COPD肺脾气虚证大鼠线粒体功能障碍

  张璐, 丁焕章, 许浩燃, 陈珂, 许博文, 杨勤军, 吴迪, 童佳兵, 李泽庚

  目的 基于AMP依赖的蛋白激酶（AMPK）/沉默调节蛋白1（SIRT1）/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α（PGC-1α）通路探讨参芪补中方对COPD大鼠线粒体功能障碍的影响。 方法 将60只SD大鼠随机分为正常组（Control）、模型组（Model）、参芪补中方低剂量组（SQBZ-L）、参芪补中方中剂量组（SQBZ-M）、参芪补中方高剂量组（SQBZ-H）、氨茶碱组（APL），10只/组。除正常组外，其余各组通过脂多糖气道滴注、香烟烟熏联合番泻叶浸液灌胃构建COPD模型，参芪补中方组和氨茶碱组分别于第50天进行参芪补中方和氨茶碱灌胃，2次/d，连续灌胃给药4周。检测各组大鼠肺功能，HE染色和透射电镜观察各组大鼠肺组织病理形态和超微结构改变，WST-1法、比色法、TBA法、JC-1法分别检测大鼠肺组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性、三磷酸腺苷（ATP）、丙二醛（MDA）含量及线粒体膜电位，流式细胞术检测大鼠ROS平均荧光强度，Western blotting法检测肺组织中P-AMPKα、AMPKα、SIRTI、PGC-1α蛋白表达水平。 结果 与对照组相比，模型组大鼠肺功能下降、肺组织病理损伤严重（P<0.01），SOD活性、ATP水平及线粒体膜电位下降（P<0.01），MDA水平和ROS平均荧光强度显著提高（P<0.01），线粒体损伤加重，P-AMPKα、SIRTI、PGC-1α蛋白表达水平下降（P<0.01）；与模型组相比，参芪补中方各剂量组与氨茶碱组能有效改善COPD大鼠的肺功能、肺组织病理损伤（P<0.05，P<0.01），提高SOD活性、ATP含量及线粒体膜电位（P<0.05，P<0.01），降低MDA含量和ROS平均荧光强度（P<0.05，P<0.01），上调P-AMPKα、SIRTI、PGC-1α蛋白表达水平（P<0.05，P<0.01）；参芪补中方高剂量组与氨茶碱组相比较，差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 参芪补中方可能通过激活AMPK/SIRT1/PGC-1α通路改善COPD大鼠的线粒体功能障碍。

• 积雪草苷通过抑制NLRP3炎症体介导的细胞焦亡减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤

  卞芬兰, 倪诗垚, 赵鹏, 戚毛男星, 唐碧, 王洪巨, 康品方, 刘进军

  目的 探讨积雪草苷（AS）在保护大鼠心肌缺血再灌注损伤（MIRI）中的保护机制。 方法 将50只SD大鼠随机分为假手术组（sham）、模型组（I/R）、AS处理组。AS处理组在手术前连续2周灌胃，根据给予不同剂量的AS分为低剂量组、中剂量组、高剂量组， 10只/组。检测血清中的乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、白介素-18（IL-18）和白介素-1β（IL-1β）浓度，测量各组大鼠心肌梗死和缺血范围，并观察心肌组织的病理变化。使用Western blotting法检测心肌组织中NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD、GSDMD-N、IL-1β和IL-18的蛋白含量。此外，通过缺氧复氧（H/R）实验在H9C2细胞中模拟缺血再灌注损伤，并进行AS预处理。 结果 与sham组相比，I/R组心肌梗死和缺血范围增加，血清中LDH和CK-MB水平升高，心肌组织中NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD、GSDMD-N、IL-1β和IL-18蛋白含量升高（P<0.05）。与I/R组相比，AS处理组的心肌梗死范围、血清LDH和CK-MB水平降低，心肌组织中上述蛋白含量也降低（P<0.05），且AS的保护作用呈剂量依赖性。体外实验显示，H/R处理导致NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD、GSDMD-N、IL-1β和IL-18蛋白表达增加（P<0.05），而AS预处理可减轻H/R损伤（P<0.05）。分子对接结果表明，AS与NLRP3具有良好的结合活性。 结论 积雪草苷可以减轻大鼠心肌再灌注损伤，其机制可能通过抑制NLRP3炎症体介导的细胞焦亡实现。

• 活血疏风颗粒通过抑制TLR4/NF-κB通路改善慢性偏头痛小鼠的中枢敏化

  梁晓涛, 熊一凡, 刘雪琪, 梁小珊, 朱晓煜, 谢炜

  目的 探讨活血疏风颗粒对慢性偏头痛（CM）小鼠中枢敏化的干预作用及机制。 方法 通过文献检索获取活血疏风颗粒的主要化学成分，使用多重数据库分析预测药理机制。动物实验验证：选用雄性SPF C57BL/6J小鼠，使用腹腔注射硝酸甘油给药（10 mg/kg），隔日注射，连续注射5次，制备偏头痛小鼠模型。以活血疏风颗粒灌胃或托吡酯腹腔注射进行干预，根据干预方式的不同将小鼠分为对照组、慢性偏头痛模型组、托吡酯阳性对照组、活血疏风颗粒低剂量组、活血疏风颗粒高剂量组（HXSFG-H），12只/组。利用Von Frey和热板仪装置评估小鼠中枢敏化程度，RT-qPCR检测炎症相关因子，Western blotting检测TLR4/NF-κB通路表达水平，免疫荧光实验检测c-Fos、CGRP的活化水平。 结果 网络药理学结果显示，活血疏风颗粒改善CM的主要活性成分为芒柄花素、芍药苷、槲皮素、丹参酮等，GO功能富集分析得到共得到492条信号通路，其中生物过程366条，细胞组分46条，分子功能80条；KEGG富集分析显示，活血疏风颗粒改善慢性偏头痛的通路主要涉及Toll样受体和NF-κB信号通路。动物实验成功构建CM小鼠模型，托吡酯阳性对照组和活血疏风颗粒治疗组小鼠中枢敏化减轻，表现为机械痛阈值和热痛阈值下降程度的减小。活血疏风颗粒可降低c-Fos和CGRP的表达（P<0.01），改善炎症相关指标（P<0.01）；下调TLR4、p-NF-κB、IL-1β、TNF-α蛋白表达（P<0.01）。 结论 活血疏风颗粒能有效调节炎症通路，抑制TLR4/NF-κB信号转导，减轻中枢敏化。

• 慢性乙型肝炎病毒感染影响孕妇妊娠中晚期及产后健康相关生活质量：一项前瞻性队列研究

  邓悦滢, 耿雅雯, 彭婷婷, 丘峻朝, 何丽娟, 谢丹, 陈姿任, 欧阳石, 阎升光

  目的 对比分析慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染孕妇与健康对照在妊娠中晚期至产后阶段的健康相关生活质量（HRQoL）差异，系统评估HBV感染对孕妇HRQoL的影响。 方法 运用前瞻性队列设计，纳入2023年4月17日~2023年9月25日在广州医科大学附属第五医院产科门诊就诊、孕周为16~24周的孕妇，每入组1例符合条件的乙肝孕妇，同时期匹配年龄、孕期、胎次相同的健康孕妇1例。最后入组70例乙肝孕妇及70例健康孕妇，分别在孕16~24周、孕32周~分娩和产后5~13周3个时间点进行动态随访及HRQoL评估。两组在各时间点的HRQoL评分比较使用t检验，采用混合线性模型分析其变化趋势，单因素方差分析和多元线性回归模型识别HRQoL降低的预测因子。 结果 在3个随访节点上，乙肝孕妇的HRQoL总评分均低于健康孕妇，同时在孕32周~分娩时两组评估得分均处于最低值。具体表现在孕32周~分娩时，乙肝孕妇组在心理分量表总分（74.27±13.43 vs 80.21±12.9，P=0.009）显著低于健康孕妇组；在产后5~13周，乙肝孕妇组在心理分量表总分（76.52±16.19 vs 85.02±6.51，P<0.001）和生理分量表得分（77.17±14.71 vs 83.09±10.1，P=0.009）显著低于健康孕妇组；乙肝病毒感染是孕妇孕晚期及产后的HRQoL降低的独立风险因子，同时自费支付医药、配偶对此次怀孕的中立态度及孕前合并其他疾病也是产后HRQoL较低的独立风险因子（P<0.05）。 结论 随着孕期负荷的加重，孕妇在孕晚期的HRQoL会出现下降，而乙肝病毒感染负向影响妊娠中晚期及产后HRQoL的生理功能和情感职能维度。在管理妊娠期的乙肝母亲时，应充分重视其HRQoL，进行及时合理的关怀及干预，有效改善其HRQoL。

• 银翘散配方颗粒与传统汤剂在抗炎、抗菌及镇痛药效的差异比较

  郭卓琳, 张智恒, 郭新邓, 杨苇巍, 梁芷晴, 区锦莹, 曹惠慧, 卢子滨, 余林中, 刘俊珊

  目的 比较银翘散颗粒和传统汤剂的抗炎、抗菌、镇痛的药效差异。 方法 采用脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞RAW 264.7构建炎症模型，并给予银翘散（200、400、800 μg/mL），利用实时荧光PCR、Western blotting评价药物抗炎效果；采用3 dpf斑马鱼分别构建硫酸铜、尾鳍横切、LPS和Poly （I∶C）显微注射斑马鱼炎症模型，并给予银翘散（200、400、800 μg/mL），利用中性粒细胞观察和HE染色等评价药物抗炎效果；采用LPS气管滴注构建急性肺损伤小鼠模型，并给予银翘散（10、15、20 g/kg），通过计算肺湿干质量比、HE染色、酶联免疫吸附法、Western blotting等实验评价药物抗炎效果。采用微量肉汤稀释法评价银翘散颗粒及其汤剂的抗菌效果。采用热板和冰醋酸腹腔注射构建小鼠疼痛模型，并给予银翘散（10、15、20 g/kg），通过计算小鼠热板痛阈值和醋酸扭体次数评价药物镇痛效果。 结果 与模型组相比，银翘散能降低细胞内炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的水平（P<0.01）和p-STAT3（Tyr 705）蛋白表达水平；银翘散能抑制斑马鱼中性粒细胞的聚集（P<0.001）；银翘散可改善肺组织损伤，下调肺湿干质量比值、p-STAT3（Tyr 705）蛋白的表达、炎症因子TNF-α、IL-6的含量（P<0.05）；银翘散在15.63、31.25 mg/mL起到抑菌作用；银翘散能减少小鼠的扭体次数，提高痛阈值（P<0.05）。 结论 银翘散配方颗粒和传统汤剂均具有抗炎、抗菌、镇痛的作用，两者除在细胞水平上抑制TNF-α、IL-6、IL-1β的mRNA表达有差异外，在其他体内外多个实验评价中药效无明显差异。

• 靶向E-选择素的工程化脂质体的设计与炎症靶向评价

  叶雨濛, 余波, 陆沙沙, 周于, 丁美红, 程桂林

  目的 设计合成一种纳米药物递送系统，靶向E-选择素，可竞争性地抑制E-选择素与中性粒细胞表面的配体结合，阻断中性粒细胞在血管的黏附，进而抑制中性粒细胞向病变部位的募集和浸润。 方法 采用后插入法开发了基于E-选择素的亲和短肽IELLQARC标记的盐酸多柔比星（DOX）脂质体（IEL-Lip/DOX）。分别制备2-1P配方组［Mol（PC）：Mol（DPI）=100∶1］和2-3P配方组［Mol（PC）：Mol（DPI）=100∶3］，对其修饰密度、体外释放特性进行测定。并且通过脂多糖（LPS）诱导建立体外细胞炎症模型、小鼠急性肺损伤（ALI）模型、大鼠股动脉物理损伤炎症模型、斑马鱼局部炎症模型，尾静脉或躯干定点分别注射不同配方的PEG化DOX脂质体（P、2-1P、2-3P）测定其炎症靶向能力。 结果 不同配方（2-1P、2-3P）IEL-Lip/DOX的表面短肽修饰密度分别为4.76、7.57 pmoL/cm2。与未修饰脂质体相比，IEL-Lip/DOX在pH 5.5条件下的48 h累积释放速率均降低（P<0.05）；在体外细胞炎症模型中，活化炎症内皮细胞对IEL-Lip/DOX的摄取量增加（P<0.0001），且2-1P配方穿过内皮屏障的能力高于2-3P配方（P<0.01）；在小鼠ALI模型中，IEL-Lip/Cy5.5在肺组织中的荧光强度增加（P<0.05），Z-（2-1P）和Z-（2-3P）配方分别提高了53.71%和93.41%，且2-1P配方在肺中的分布相比于正常小鼠增加（P<0.05），提升幅度为24.19%；在大鼠股动脉物理损伤炎症模型中，2-1P配方的损伤侧/健康侧血管荧光强度值升高（P<0.05）；在斑马鱼局部炎症模型中，各配方在炎症部位的聚集程度均增加（P<0.001）。 结论 提出了一种靶向E-选择素的纳米药物递送系统，高效靶向活化炎症内皮细胞，增加药物在炎症部位的蓄积，为中性粒细胞不适当激活引起的炎症性疾病提供了一种新的治疗策略。

• Orexin-A通过调节促离子型谷氨酸受体促进脊髓损伤大鼠运动功能恢复

  何光侣, 储婉玉, 李妍, 盛鑫, 罗浩, 徐爱萍, 卞命杰, 张环环, 汪萌芽, 郑超

  目的 探讨Orexin-A对促离子型谷氨酸受体的调节在大鼠脊髓损伤（SCI）运动功能恢复中的作用。 方法 36只7~14 d新生SD大鼠随机平均分为6组：对照组、假手术组、SCI+生理盐水组、SCI+DNQX组、SCI+Orexin组和SCI+Orexin+DNQX组。除了对照组和假手术组外，其他各组施以SCI手术，术后连续3 d，每天分别向SCI各组鞘内注射对应的药物1次。分别在术前1 d，术后1、3和7 d，应用BBB评分和斜板试验评估各组大鼠运动功能；在膜片钳实验中，将对照组、假手术组、SCI组和SCI+Orexin组大鼠麻醉后，制作脊髓切片，通过酶消化和机械吹打分离出腹角神经元，通过灌流谷氨酸，比较各组大鼠脊髓腹角神经元谷氨酸受体介导电流的翻转电位、动力学指标的差异。 结果 在术后3 d、7 d，SCI+Orexin组的BBB评分和抓握倾斜角度比SCI+生理盐水组、SCI+DNQX组和SCI+Orexin+DNQX组皆升高（P<0.01）。在术后第7天，SCI+Orexin+DNQX组高于SCI+DNQX组（P<0.01）。SCI组脊髓腹角神经元谷氨酸电流的翻转电位高于SCI+Orexin组和假手术组（P<0.01）。在谷氨酸电流动力学指标中，SCI组的上升斜率比SCI+Orexin组和假手术组皆增大（P<0.05）。在衰减时间项，SCI组比SCI+Orexin组、假手术组皆减小（P<0.05）。 结论 Orexin-A可能通过调节（改善）促离子型谷氨酸受体的功能促进脊髓损伤后运动功能的恢复。

• 过表达RGL1通过激活CDC42/RAC1复合体上调运动型黏着斑组装促进结直肠癌转移

  翁诺舟, 谭彬, 曾文涛, 古家宇, 翁炼基, 郑克鸿

  目的 探究Ral鸟嘌呤核苷酸解离激活样因子1（RGL1）在转移性结直肠癌中的作用及机制。 方法 分析GEO数据库中RGL1在结直肠癌转移性和非转移性中的表达差异。收集珠江医院2020年1月~2022年12月50例临床转移性与非转移性结直肠癌患者，采用qPCR和免疫组化分析RGL1与结直肠癌转移的关系。体外构建稳定过表达和稳定干扰RGL1基因的细胞株，分别分组为：过表达对照组（veh）与过表达组（RGL1+），敲低对照组（shNC）与敲低组（shRGL1）。Western blotting实验验证过表达和干扰效率。Transwell实验体外验证细胞表型，明确RGL1对肿瘤细胞侵袭、迁移能力的影响。体内实验采用小鼠盲肠原位种植肝转移模型验证动物表型，明确RGL1对肿瘤转移的影响。细胞-基质黏附检测实验、免疫荧光实验验证RGL1与黏着斑形成的关系，免疫共沉淀实验探究RGL1与GTP酶活化的关系。 结果 与非转移性结直肠癌相比，RGL1在转移性结直肠癌中高表达（P<0.05）。与对照组相比，过表达RGL1细胞中该基因上调（P<0.05），细胞迁移、侵袭能力增强（P<0.05），小鼠出现结直肠癌肝转移；并且加速了结直肠癌细胞运动型黏着斑的组装（P<0.05），促进了运动型黏着斑的形成，上调CDC42/RAC1的活化态与RGL1的结合。 结论 RGL1在转移性结直肠癌中高表达，通过激活CDC42/RAC1复合体上调运动型黏着斑组装，从而促进结直肠癌转移。RGL1有望成为防治结直肠癌转移的新靶点。

• 姜黄素通过下调HIF-1α通路抑制非小细胞肺癌脂质代谢

  李丹丹, 楚佳鑫, 闫妍, 徐文隽, 朱行春, 孙韵, 丁浩峰, 任丽, 朱博

  目的 探讨姜黄素非小细胞肺癌（NSCLC）脂质代谢的作用及其分子机制。 方法 体外培养A549和H1299细胞，采用MTT法检测姜黄素（0~70 μmol/L）的增殖抑制效应，并筛选20、40 μmol/L用于后续实验。通过细胞摄取实验、伤口愈合实验、甘油三酯（TG）/游离脂肪酸（NEFA）测定及油红O染色评估姜黄素对脂质代谢的影响；Western blotting检测PGC-1α、PPAR-α及HIF-1α表达。网络药理学预测代谢通路，并通过Western blotting验证。体内实验采用裸鼠移植瘤模型，比较姜黄素（20 mg/kg）与对照组的肿瘤质量及脂滴变化。 结果 姜黄素浓度依赖性抑制NSCLC细胞增殖（P<0.05），并降低TG、NEFA和脂滴含量（P<0.05）。Western blotting显示姜黄素上调PGC-1α和PPAR-α表达（P<0.05）。KEGG通路富集预测发现HIF-1信号通路在姜黄素治疗NSCLC中被显著富集，HIF-1α与PPAR-α之间可能存在相互作用，Western blotting提示姜黄素下调HIF-1α（P<0.05）。动物实验中，姜黄素组肿瘤重量和脂滴减少。 结论 姜黄素通过HIF-1α通路抑制NSCLC细胞增殖、脂质代谢发生。

• 左肝内血管可视化3D分型及其在精准肝切除术的临床应用

  郑俊, 王志华, 胡小军, 何翔, 范应方

  目的 运用三维可视化技术探索左半肝的门静脉及肝静脉系统的空间解剖，并进行可视化3D分型，为左肝病灶的解剖性肝段、亚肝段切除提供解剖学依据。 方法 筛选244例肝脏增强CT的薄层数据，采用MI-3DV Works软件对左肝内门静脉系统及肝静脉系统进行分割及三维重建，统计左肝门静脉及肝静脉分支的起始位置、数目、空间走行及相对位置关系，分别进行3D分型和肝段划分，指导临床左肝段及亚肝段切除术。 结果 244例肝脏增强CT薄层数据均可清晰重建出左肝门静脉3~4级分支和肝静脉3~4级属支，据其空间分布规律进行左肝内血管3D分型如下：左肝门静脉系统3D特点：242例（99.1%）左肝门静脉单独发出，2例（0.9%）门静脉右前支起自门静脉左支主干，据此将左肝门静脉分为两型。左肝门静脉进一步3D分型如下：II段门静脉据分支数量分为两型；III段门静脉根据分支分布的空间位置细分为三型；而左外叶门静脉根据Ⅱ、Ⅲ段门静脉分支起始点间距离长短进一步分为紧密型和离散型；IV段门静脉根据其分支数量及起始部位分为三型；而第四肝门血管分支（门静脉左支横部血管）据其供应肝段不同分为三型。左肝静脉系统3D分型如下：244例左肝静脉依据其汇入下腔静脉的情况可分为两型；脐裂静脉依据其汇入静脉及其汇入点与该静脉根部的距离可分为三型。基于上述门静脉和肝静脉的分型和肝段划分，分别制定相应部位的不同手术规划。 结论 基于三维可视化技术进行的左肝门静脉和左肝静脉的3D分型，对以肝段或亚肝段为解剖单位的左肝病灶的精准肝切除具有较好的临床指导意义。

• 重症监护病房急性肾损伤患者首次24 h动脉氧分压与死亡率相关：基于MIMIC-IV数据库

  王子皓, 陶丽丽, 邹碧清, 安胜利

  目的 基于MIMIC-IV数据库的回顾性临床数据，旨在评估急性肾损伤（AKI）患者在ICU入院后首个24 h平均动脉氧分压（PaO2）与死亡率的关系，并确定适宜的PaO2阈值以指导氧疗策略。 方法 根据入院后24 h内的平均动脉氧分压（PaO₂），通过受试者工作特征（ROC）曲线分析及约登指数最大化原则确定最佳PaO₂截断值（137.029 mmHg），将患者分为高氧组（PaO₂≥137 Hg）和低氧组（PaO₂<137 Hg）。采用多变量逻辑回归分析和倾向评分匹配方法评估氧水平与住院死亡率之间的关系。 结果 在18 335名患者中，46.7%的患者属于高氧组，且整体死亡率为16.9%。高氧状态与较低的院内死亡率（OR=0.78）和90 d死亡率（OR=0.77）相关，尤其在AKI 1期患者中。研究还发现PaO2与死亡率之间存在非线性关系（P<0.001）。Kaplan-Meier生存曲线显示，高氧组的90 d生存率提高（P<0.001），且高氧组的机械通气时间、血管加压药使用时间及住院/ICU时长均较短。 结论 在AKI患者中维持PaO2≥137 Hg可改善临床预后，强调了ICU治疗中目标导向氧供的重要性。

• WW结构域E3泛素连接酶1调控卵巢癌肿瘤微环境中的免疫浸润

  郭晓娟, 杜瑞娟, 陈丽平, 郭克磊, 周彪, 卞华, 韩立

  目的 探讨WW结构域E3泛素连接酶1（WWP1）表达与卵巢癌肿瘤微环境（TME）免疫浸润调控的关系。 方法 从TCGA获取卵巢癌患者数据，以中位值为截断值分为WWP1高表达和低表达组。生物信息学方法分析WWP1表达与卵巢癌预后关系；TISCH2比较WWP1在卵巢癌转移和化疗后TME不同免疫细胞亚型的差异；TIMER分析WWP1表达对TME免疫细胞浸润和体细胞拷贝数变异的影响；TIGER分析WWP1表达与卵巢癌不同免疫细胞亚型演化的关系；深度学习模型分析TCGA病理染色图像，确定WWP1对卵巢癌患者TME的影响；WWP1高表达前后的SKOV3细胞进行转录组测序，比较差异基因并进行免疫浸润验证分析；在SKOV3和SKOV3/DDP裸鼠肿瘤组织中采用多色免疫荧光比较分析免疫标志物差异。 结果 WWP1高表达卵巢癌患者的整体生存率低于WWP1低表达患者（P=0.0012）。高表达WWP1、Stage IV 等与卵巢癌不良预后相关（P<0.05）。卵巢癌转移或化疗后，TME中恶性肿瘤细胞、肿瘤相关成纤维细胞比例明显升高，WWP1表达比例亦明显增高（P<0.05）。WWP1表达与TME中促肿瘤免疫抑制性细胞正相关（r=0.1323~0.3955，P<0.05），与抑制肿瘤的免疫浸润细胞负相关（r=-0.1949~-0.1333，P<0.05）。CD8+T细胞浸润水平与WWP1的深度缺失和染色体水平缺失有关，中性粒细胞浸润水平与WWP1高度扩增有关（P<0.05）。随着WWP1 表达升高，TME中CD8+、NK T细胞比例逐渐减少，髓样细胞和B细胞逐渐演化为不同细胞亚型。TCGA患者病理标本HE染色、高表达WWP1的SKOV3细胞转录组测序和裸鼠肿瘤组织多色免疫荧光分析确认了与生信分析相似的TME免疫细胞浸润结果。 结论 WWP1可能是卵巢癌的一个预后预测因子和潜在的TME免疫调控靶点。

• 合并急性肾损伤的危重症患者输注白蛋白后血清白蛋白水平与28 d死亡率的相关性

  张柳攀, 石晓彤, 李露兰, 师瑞, 安胜利, 曾振华

  目的 探讨危重症急性肾损伤（AKI）患者输注人血白蛋白后不同血清白蛋白水平与28 d死亡率的关系及其对90 d死亡率、液体出入量、持续肾脏替代治疗、机械通气比例及时间等的影响。 方法 回顾性纳入MIMIC IV数据库（2008~2019年）5918例在ICU内接受白蛋白治疗的AKI患者的资料，根据输注后72 h内血清白蛋白水平将其分为低白蛋白组（LA，<30 g/L）、中等白蛋白组（MA，30~35 g/L）和高白蛋白组（HA，>35 g/L） 3组，采用限制性立方样条回归及多因素Logistic回归分析白蛋白水平与死亡率的关系。另纳入南方医科大学南方医院2017年1月~2022年2月的110例脓毒症AKI患者作为外部验证队列，通过生存分析和多因素校正验证结果。 结果 在MIMIC训练队列中，多因素Logistic回归分析显示不同白蛋白分组与危重症AKI患者28 d死亡率无相关性（P>0.05），但限制性立方样条分析提示白蛋白水平与28 d死亡率呈非线性剂量反应关系（阈值效应：>36 g/L时风险升高）。次要终点分析显示，与LA组相比，HA组机械通气时间更短（P<0.001），但ICU住院时间延长（P<0.001）。外部验证队列中，白蛋白水平≥30 g/L与28 d死亡率降低相关（P<0.05）。 结论 输注人血白蛋白以提高血清白蛋白水平与AKI危重患者28 d死亡率的关系存在队列依赖性，可能受疾病类型及严重程度、输注策略及统计方法等多因素影响。

• AConvLSTM U-Net：基于双向稠密连接和注意力机制的多尺度颌骨囊肿分割模型

  李苏强, 王周阳, 产思贤, 周小龙

  目的 提出一种基于双向稠密连接和注意力机制的多尺度颌骨囊肿分割模型（AConvLSTM U-Net），实现颌骨囊肿图像的准确自动分割。 方法 使用含有2592张颌骨囊肿图像数据集。首先，AConvLSTM U-Net在编码路径上设计移动翻转瓶颈卷积模块（MBC）以增强特征提取能力。其次，采用双路径稠密卷积（DPD）连接编码器和解码器，在跳跃连接中引入双向ConvLSTM以获取丰富的语义信息。然后，解码路径上使用基于空间和通道注意力的解码块（scSE），以提升对重要信息的关注。最后，设计了全尺寸深度监督模块（DS），并结合联合损失函数对模型进行优化，以进一步提高分割精度。 结果 AConvLSTM U-Net在颌骨囊肿病灶分割的实验结果在MCC、DSC和JSC方面分别达到93.8443%、93.9067%、88.5133%，性能均优于所有被比较的分割模型。 结论 所提出的算法在颌骨囊肿数据集上表现出较高的准确性与鲁棒性，优于多种主流方法，展现了AConvLSTM U-Net在颌骨囊肿图像分割的优越性能和辅助诊断的巨大潜力。

• 临床试验中不同转组分析方法的比较

  梁芷玥, 徐利珊, 李柯柯, 于米铼, 安胜利

  目的 通过比较临床试验中处理转组的常用方法，为不同场景下发生转组后分析方法的选择提供参考。 方法 基于肿瘤临床试验中患者转组的数据特征，分别模拟不同场景（样本量、患者预后、转组概率、治疗效果、膨胀因子）中患者的生存时间，比较意向治疗法（ITT）、符合方案法（PP）、删失法（PPcents）、实际治疗法（Treated）、秩保留结构加速失效模型（RPSFTM）、逆概率删失加权法（IPCW）、两阶段估计模型（TSE）、参数迭代法（IPE）所估计的治疗效应误差、均方误差与覆盖率。 结果 样本量对各方法的结果影响不大。相较于传统方法，复杂方法（RPSFTM、IPCW、TSE、IPE）在各种情况下误差均较低。IPCW法在转组概率较高时误差显著增加。TSE法在风险较低且转组概率较高时，误差和均方误差最低。IPE法在转组概率较低时具有明显优势，但在膨胀因子较小时可能会略低估治疗效应。 结论 转组概率较低且膨胀因子较小的情况下优先考虑IPE法或IPCW法；在转组概率较低且膨胀因子较大的情况下选择IPE法；在转组概率较大，膨胀因子较小且风险比较小的情况下选TSE法；其余情况建议选择RPSFTM法。

• 新型桥接钢板治疗RockwoodⅢ型肩锁关节脱位的生物力学性能

  陈燕才, 张高峰, 李树波, 罗念祥, 张翼

  目的 探究新型桥接钢板治疗Rockwood Ⅲ型肩锁关节脱位症的生物力学性能。 方法 基于1名Rockwood Ⅲ型肩锁关节脱位患者的CT数据设计新型桥接钢板结构，并建立桥接钢板-肩锁关节相互作用有限元模型，研究在术后复位状态、正常负载及撞击荷载下的受力变形特征及生物力学适配性，探讨其固定机制及应用优势。 结果 桥接体系刚度为27.78 N/mm，接近肩锁关节韧带刚度（26.05 N/mm），符合柔性变形要求。正常负载下桥接体系最大应力为88.29 MPa，满足生理活动要求；撞击荷载下最大值达480 MPa，钢缆柔性变形进入塑性耗能阶段，可有效缓冲局部应力集中，降低刚性骨折风险。骨骼高应力区主要出现在C1~C4螺栓孔边缘，正常负载下骨骼应力最大值为0.762 MPa，撞击荷载下最大值为5.963 MPa，分别为螺栓应力的2.86%和1.66%。 结论 新型桥接钢板相比传统内固定治疗，更能适配肩锁关节生物力学特性。该固定结构在提供足够稳定性同时，允许一定程度的生理微动，有助于优化术后康复效果。特别是固定环与钢缆连接区的柔性变形显著，应避免采用硬脆性材料作为连接区。此外，C1~C4螺栓孔边应力集中问题也需在临床实践中予以特别关注。