南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2023年第1期

• 中国老年人群促甲状腺激素水平的多中心调查

  王科宇, 李海侠, 邓新立, 闫双通, 裘宇容, 丛玉隆

  目的 调查中国表观健康老年人群血清促甲状腺激素（TSH）水平及其变化特征，对比罗氏电化学发光免疫分析仪和新产业全自动化学发光免疫分析仪检测TSH水平的差异。方法 收集中国具有地域代表性的10个中心共5451例表观健康老年人（>60岁）一般临床资料及冻存空腹血清样本，通过罗氏电化学发光免疫分析仪和新产业全自动化学发光免疫分析仪检测TSH等甲状腺功能指标。使用中位数（P2.5，P97.5）表示老年人群TSH水平。分析不同地域、性别、年龄组（组距为5）TSH水平差异，探索各因素对TSH水平的影响。结果 罗氏电化学发光法和新产业全自动化学发光法调查TSH参考区间分别为0.42~9.47 mU/L；0.36~7.98 mU/L，两种方法检测TSH结果有差异（P<0.001）。2个西部地区中心TSH水平显著高于其他中心（P75岁男性女性TSH水平无显著差异。结论 TSH水平受地区、性别、年龄因素影响，但老年人群无需再根据地区、性别、年龄再分组建立参考区间。TSH结果解读应注意不同检测方法之间的差异。

• 高级别浆液性卵巢癌复发相关的潜在功能性关键 miRNA-mRNA：基于生物信息学方法

  张攀扬, 何明敏, 曾园媛, 蔡雄伟

  目的 探讨在高级别浆液性卵巢癌（HGSOC）中的潜在功能性miRNA-mRNA调控网络与复发的相关性及其生物学意义。方法 使用来自癌症和肿瘤基因图谱（TCGA）数据库的HGSOC患者样本表达数据，根据基因本体论生物过程（GO_BP）将HGSOC患者分成不同的亚型，分析不同亚型与复发的相关性；通过基因表达综合（GEO）数据库找到两个与复发相关的数据集，与TCGA数据取交集，获得共同差异表达的miRNAs；预测miRNAs的靶基因，构建与HGSOC复发相关的关键miRNA-mRNA网络；通过RT-qPCR及Western blot检测miR-506-3p与SNAI2的表达水平；双荧光素酶实验验证miR-506-3p与SNAI2的靶向结合；划痕实验及Trans well实验检测miR-506-3p对卵巢癌细胞迁移与侵袭的影响。结果 共筛选出与HGSOC相关通路活性的303个GO 通路，确定两个亚型C1和C2。亚型与复发相关，C1患者的复发概率显著高于C2患者。C1和C2亚型之间的差异表达基因主要富集在上皮间质转化（EMT）通路，GSE25204、GSE73582及TCGA 3个数据集中有5个共同差异表达的miRNAs，共有41个靶基因能在C1和C2亚型之间差异表达的EMT通路中找到，利用这5个miRNAs及41个mRNAs构建与HGSOC复发相关的关键miRNA-mRNA网络。MiR-506-3p与SNAI2靶向结合，上调miR-506-3p抑制了SNAI2表达及降低SKOV3和CAOV3的迁移及侵袭（P<0.05）；而敲低miR-506-3p显著上调SNAI2表达水平及增强SKOV3和CAOV3的迁移及侵袭（P<0.05）。结论 miR-506-3p和SNAI2是与HGSOC复发相关的关键分子，miR-506-3p可能通过SNAI2调控卵巢癌细胞的迁移和侵袭影响EMT，对HGSOC的复发有预测价值。

• 癫痫发作预测模型：斯托克韦尔变换的生成对抗与长短时记忆网络半监督方法

  廖家慧, 李涵懿, 詹长安, 杨 丰

  目的 提出一种半监督癫痫发作预测模型（ST-WGAN-GP-Bi-LSTM预测模型），从脑电（EEG）信号的时频分析、无监督特征模型稳定性以及后端分类器设计三个方面提升发作预测性能。方法 对癫痫EEG信号进行斯托克韦尔变换（ST变换）得到时频输入，通过自适应调节分辨率和保留绝对相位，定位癫痫EEG信号的时频成分；当生成数据分布和真实EEG数据分布无重叠时，为了避免JS散度均为常数而导致特征学习失效的问题，采用Wasserstein生成对抗网络作为特征学习模型，以EM距离结合梯度惩罚策略（WGAN-GP）引导的代价函数，约束模型的无监督训练过程，进而生成高阶特征提取器；构建基于双向长短时记忆网络（Bi-LSTM）的时序预测模型，在获取高阶EEG时频特征间时序相关性基础上提升癫痫分类（预测）性能。利用公开数据集CHB-MIT头皮脑电数据集对本文提出的ST-WGAN-GP-Bi-LSTM预测模型进行评估。结果 本文的ST-WGAN-GP-Bi-LSTM预测模型在AUC、灵敏度和特异性指标上分别达到90.40%，83.62%和86.69%。与现有半监督方法相比，将原有的性能指标分别提升17.77%，15.41%和53.66%，并与基于CNN的有监督预测模型性能持平。结论 本方法有效地改善半监督深度学习模型预测性能，在癫痫发作预测中发挥无监督特征提取的优化作用。

• 登革病毒-2感染人脐静脉内皮细胞的磷酸化蛋白质组学分析

  胡 盼, 程 瑶, 王远迎, 苟小琴, 刘 华, 左 丽, 吴 宁

  目的 对登革病毒-2（DENV-2）感染人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的差异磷酸化蛋白质进行分析以及初步探究DENV-2感染的可能致病机制。方法 实验设置DENV-2感染HUVEC组和HUVEC空白对照组，每组3个重复。收集细胞沉淀后，利用SDT裂解法获取蛋白质，通过串联质谱标签（TMT）法对磷酸化蛋白质进行定性与定量分析，对鉴定到的差异磷酸化蛋白质进行氨基酸保守基序分析、亚细胞定位分析、蛋白质结构域分析、GO富集分析、KEGG通路分析和蛋白质互作（PPI）等生物信息学分析。利用Western blot检测JUN、MAP2K2和AKT1磷酸化蛋白的表达。结果 共检测到1385个差异蛋白质上的2918个修饰肽段，其中有1346个修饰肽段显著上调（FC>1.2，P<0.05），1572个修饰肽段显著下调（FC<0.83，P<0.05）。氨基酸保守基序分析共获得49个磷酸化保守基序。蛋白质结构域分析中富集到的差异磷酸化肽段最多是RNA识别基序、蛋白激酶结构域和PH结构域。通过亚细胞定位分析发现差异的修饰肽段主要定位在细胞核和细胞质中。GO富集和KEGG通路分析结果显示差异肽段主要在刺激反应的调节、含核碱基的小分子生物合成过程、吞噬体和白细胞跨内皮迁移处富集。对上调和下调的差异磷酸化蛋白分别进行蛋白质互作—KEGG联合分析，结果发现上调和下调的差异磷酸化蛋白质共富集到15条通路，且通过Western Blot检测与自噬途径相关的3个差异磷酸化蛋白质即JUN、MAP2K2和AKT1的表达，结果显示DENV-2组与空白组相比，p-JUN表达显著下调（1.48±0.01 vs 1.23±0.01，P<0.0001）；p-AKT1表达显著上调（0.87±0.02 vs 1.01±0.01，P<0.001）；p-MAP2K2表达显著上调（1.10±0.02 vs 1.29±0.05，P<0.01）。结论 DENV-2感染HUVEC存在较多差异表达蛋白，p-JUN的下调、p-MAP2K2和p-AKT1的上调提示3个能够调节自噬的磷酸化蛋白可能与DENV-2感染机制有关。

• 特立帕肽通过cAMP/PKA/CREB信号通路调控高糖微环境下的成骨细胞分化

  侯 甜, 秦雅芝, 张 妍, 温国琛, 戚孟春, 董 伟

  目的 探讨特立帕肽对高糖微环境下小鼠胚胎成骨细胞（MC3T3-E1）分化的影响及作用机制。方法 将MC3T3-E1细胞分为正常糖组（NG，5.5 mmol/L葡萄糖）、NG+特立帕肽组（5.5 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽）、高糖组（HG，25 mmol/L葡萄糖）、HG+特立帕肽组（25 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽）和HG+特立帕肽+PKA抑制剂组（25 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽+20 μmol/L H-89）。CCK-8法检测细胞增殖；ELISA实验检测各组cAMP水平；试剂盒检测碱性磷酸酶（ALP）活性；茜素红染色检测细胞矿化结节生成情况；鬼笔环肽染色后观察细胞骨架；Real-time PCR检测细胞中PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达水平。结果 各组细胞增殖能力差异无统计学意义（P>0.05）。与NG组相比，NG+特立帕肽组细胞cAMP水平升高（P<0.05），ALP活性增强（P<0.05），茜素红矿化结节生成能力增强（P<0.05），细胞骨架清晰程度有所提升，PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达上调（P<0.05）；与NG组相比，HG组的上述检测结果则呈减弱趋势。与HG组相比，HG+特立帕肽组细胞cAMP水平上升（P<0.05），ALP活性增强（P<0.05），茜素红矿化结节生成能力增强（P<0.05），细胞骨架清晰程度有所提升，PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达上调（P<0.05）。与HG+特立帕肽组相比，HG+特立帕肽+H-89组细胞cAMP水平下降（P<0.05），ALP活性减弱（P<0.05），茜素红矿化结节生成能力减弱（P<0.05），细胞骨架清晰程度下降，PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达下调（P<0.05）。结论 特立帕肽可通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路有效改善高糖微环境对MC3T3-E1细胞分化的抑制作用。

• 环状RNA circRSF1结合HuR促进辐射诱导的肝星状细胞炎性表型

  周佩涛, 程炳霖, 孙一宁, 吴德华, 陈宇翰

  目的 探讨环状RNA circRSF1能否通过结合HuR蛋白并阻遏其功能发挥，进而调控辐射诱导的肝星状细胞（HSC）炎性表型。方法 在人HSC细胞株LX2过表达或敲低HuR后给予8 Gy X射线照射。通过qRT-PCR检测炎性因子（IL-1β、IL-6和TNF-α）的表达，采用Western blot检测IκBα表达和NF-κB磷酸化。采用RNA pull down和RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)验证circRSF1与HuR的结合。改变circRSF1和HuR的作用水平后检测炎性因子和IκBα的表达以及NF-κB的磷酸化。结果 敲低HuR可明显上调受照的LX2中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达，并减少IκBα表达和促进NF-κB磷酸化，而过表达HuR则相反（P<0.05）。过表达或敲低circRSF1对HuR的表达无影响。RNA pull down和RIP实验证实了两者存在相互结合。过表达circRSF1减少HuR与IκBα结合并下调IκBα的表达（P<0.05）。过表达circRSF1联合过表达HuR可部分逆转过表达circRSF1所致的LX2受照后炎性因子表达上调、IκBα表达下调以及NFκB磷酸化增加，而敲低circRSF1联合敲低HuR的效应则相反（P<0.05）。结论 circRSF1通过结合HuR降低IκBα表达，促进NF-κB通路激活，从而促进辐射诱导的HSC炎性表型。

• ANP32A沉默体外抑制结直肠癌的生长、侵袭和迁移：基于AKT信号通路活性的下降

  丁虹芳, 李肖娟, 周璐炜, 崔 智, 蒙海德, 王 娟

  目的 探讨ANP32A基因下调对结直肠癌细胞侵袭迁移的作用与AKT 信号通路活性的相关性。方法 采用慢病毒转染技术构建结直肠癌细胞 HCT116和SW480 sh-NC和 sh-ANP32A的稳定细胞株，MTT检测24、48及72 h时ANP32A敲低对细胞增殖的影响，Western blot检测ANP32A敲低对 AKT的活性的影响；应用AKT的激活剂（SC79）和抑制剂（MK2206）干预HCT116及 SW480 细胞，MTT 检测 24、48、72 及 96 h 时 SC79 和 MK2206 对结直肠癌细胞增殖的影响，Transwell 小室观察 SC79 和MK2206对结直肠癌细胞侵袭迁移的作用；然后用SC79和MK2206干预上述两种结直肠癌细胞的sh-NC 和 sh-ANP32A稳定细胞株，将每种细胞分为 sh-NC 对照组，sh-NC SC79，sh-NC MK2206，sh-ANP32A 对照组，sh-ANP32A SC79，sh-ANP32AMK2206 六个组，细胞划痕分析细胞迁移能力，Transwell 小室分析细胞侵袭能力，WB 检测SC79和MK2206对shANP32A细胞侵袭迁移相关因子metadherin（MTDH）的影响。结果 与对照组（sh-NC）相比，24、48及72 h检测的sh-ANP32A组结直肠癌细胞的增殖活力均被明显抑制（P<0.01），同时 ANP32A 的下调能抑制 HCT116 和 SW480 细胞内 AKT 的活性（P<0.01）；AKT抑制剂MK2206能抑制大肠癌细胞的增殖及侵袭迁移（P<0.05），而AKT激活剂SC79 虽然对细胞增殖影响较小，但是能显著促进大肠癌的侵袭转移（P<0.01）；在ANP32A下调的细胞中，与sh-ANP32A对照组相比，AKT抑制剂MK2206能加强ANP32A下调对结直肠癌细胞增殖和侵袭的抑制作用（P<0.05），同时增强ANP32A表达下调对MTDH表达的抑制作用，AKT激活剂SC79能部分恢复大肠癌细胞因ANP32A下调导致的侵袭迁移抑制（P<0.01），且减弱ANP32A表达下调对MTDH表达的抑制作用。结论 ANP32A表达下调抑制结直肠癌细胞的侵袭迁移作用可能与AKT 信号通路活性抑制有关。

• 槟榔碱通过促进巨噬细胞分泌含miR-155-5p外泌体诱导人口腔成纤维细胞的活化

  黄永祺, 喻 伟, 游月华

  目的 探讨槟榔碱（ARE）通过调控巨噬细胞外泌体内miR-155-5p水平诱导人口腔黏膜成纤维细胞向成纤维表型转化的作用机制。方法 以人单核细胞系（THP-1）与人口腔黏膜成纤维细胞系（HOMF）为研究对象。实验设为空白对照组、阴性对照组、ARE刺激组、ARE刺激后THP-1培养上清刺激组（CS）、ARE刺激后THP-1外泌体刺激组（EXO）、ARE刺激后THP-1无外泌体上清刺激组（NES）、miR-155-5p过表达组（miR-155-5p mimics）、ARE刺激后EXO处理对照组（NC+EXO-ARE）和miR-155-5p抑制联合ARE刺激后EXO处理（miR-155-5p inhibitor EXO-ARE）组。以流式细胞术检测THP-1细胞极化情况。Transwell细胞迁移实验检测HOMF细胞迁移能力。DCFH-DA检测细胞氧化应激水平。qRT-PCR检测细胞α-SMA、I型胶原和SOCS1的mRNA转录水平。免疫印迹实验检测细胞α-SMA、I型胶原与SOCS1蛋白表达。结果 流式检测显示，相较于对照组，ARE组THP-1细胞由M0趋向M1极化。ARE对THP-1和HOMF细胞的刺激结果显示，相较于对照组，CS组与EXO组HOMF细胞迁移能力增强；细胞内氧化应激水平上调；细胞内miR-155-5p水平升高；细胞内α-SMA、I型胶原mRNA转录增多（1.90±0.08 vs 3.17±0.08；3.19±0.05 vs 5.65±0.01，P<0.05），SOCS1的mRNA转录减少（1.08±0.06 vs 0.34±0.02，P<0.05）；α-SMA、I型胶原蛋白表达上调，SOCS1蛋白表达下调。miR-155-5p操纵实验显示，与阴性对照组相比，miR-155-5p mimics组HOMF细胞迁移能力增强，细胞内α-SMA和I型胶原蛋白表达上调；而与NC+EXO-ARE组相比，miR-155-5p inhibitor组HOMF细胞迁移能力减弱，细胞内α-SMA和I型胶原mRNA转录减少（5.84±0.08 vs 2.00±0.98；7.32±0.51 vs 2.33±0.43，P<0.05）；α-SMA、I型胶原蛋白表达下调。结论 ARE可上调THP-1胞内miR-155-5p并经外泌体途径转导和抑制HOMF胞内SOCS1蛋白表达，促进HOMF细胞的纤维化表型转化。

• miR-125b-5p通过负调控RAB3D基因表达抑制骨肉瘤细胞增殖与迁移

  谈秋瑜, 吴 旭, 纪 方, 吴少云, 颜 亮

  目的 探讨 miR-125b-5p 调控 RAB3D 在骨肉瘤增殖与迁移中的作用机制。方法 通过 qRT-PCR 检测正常骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞系（MG63、HOS）中miR-125b-5p的表达水平。骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达，通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化；通过生物信息学软件预测miR-125b-5p可能调控的靶基因为RAB3D；通过Western blot检测正常骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞系（MG63、HOS）中RAB3D的表达水平；骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达，通过Western blot及qRT-PCR实验检测骨肉瘤细胞中RAB3D mRNA及蛋白表达水平；并在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染升高或降低RAB3D的表达，通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤增殖和迁移的变化；随后在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染同时升高miR-125b-5p和RAB3D的表达量，通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化。结果 qRT-PCR结果表明在骨肉瘤细胞（MG63、HOS）中miR-125b-5p的表达明显下调（P<0.05）。3种生物信息学软件预测RAB3D是miR-125b-5p可能调控的靶基因。qRT-PCR、Western blot结果显示，miR-125b-5p 表达量升高，骨肉瘤细胞（MG63、HOS）中 RAB3D 的蛋白表达量下降（P<0.05）；miR-125b-5p 表达量降低，骨肉瘤细胞（MG63、HOS）中RAB3D的蛋白表达量下降（P<0.05），而RAB3D的mRNA水平没有发生变化。细胞增殖及迁移实验结果显示，miR-125b-5p与RAB3D对细胞增殖及迁移的影响相反，而同时在骨肉瘤细胞内升高miR-125b-5p与RAB3D的表达量，RAB3D对骨肉瘤细胞增殖及迁移的影响在重新升高miR-125b-5p表达量时被阻断（P<0.05）。结论 miR-125b-5p在转录后水平通过调控RAB3D的表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖和迁移。

• 扩展Cox模型在非线性生存资料分析中的预测能力比较

  陈雨轩, 韦红霞, 潘建红, 安胜利

  目的 系统性地比较两类扩展Cox模型的预测能力，观察它们应用于非线性生存数据中的预测能力优劣。方法 通过蒙特卡罗模拟和实证研究从预测能力方面研究比较限制性立方样条Cox模型（Cox_ RCS），深度生存神经网络Cox模型（Cox_DNN）这两种方法的优劣；并以传统Cox模型（Cox）和随机生存森林（RSF）作为参照。其中预测的区分度评价指标采用一致性指数（C-index），该指标越大，模型预测能力越好；预测的校准度评价指标采用积分布莱尔评分（IBS），该指标越小，模型预测能力越好。结果 在数据满足比例风险的情况下，无论样本量和删失率大小，Cox_RCS的预测能力都是最好的。在数据不满足比例风险的情况下，Cox_DNN的预测能力在大样本（本文中≥500）、低删失（本文中<40%）时是最优的，其余情况Cox_RCS的预测能力优于其他模型。在实例数据中，Cox_RCS 的表现是最优。结论 在含有非线性关系的低维生存数据中，Cox_RCS 和Cox_DNN在预测能力上各有优劣。因此可根据实际数据条件选择合适的分析方法，传统的生存分析方法在特定条件下并不差于机器学习以及深度学习方法。

• 过表达CLEC5A基因抑制肝细胞癌增殖和转移并逆转上皮-间质转化

  林 杰, 区活辉, 王卫东, 马 靖, 张伟杰, 刘清波

  目的 研究C型凝集素结构域家族5成员A（CLEC5A）对肝细胞癌（HCC）增殖、迁移和侵袭能力以及上皮-间质转化（EMT）特性的影响，探索CLEC5A在HCC发生发展过程中的作用及机制。方法 采用免疫组化实验检测CLEC5A在50例HCC组织和癌旁组织中的表达特点，并分析其与HCC肝癌临床病理参数的相关性；通过慢病毒转染构建CLEC5A过表达HCC细胞，分别采用细胞增殖实验（CCK-8法、EdU法）、细胞迁移和侵袭实验（Transwell法）和Western blot实验检测CLEC5A对HCC细胞增殖、迁移及侵袭能力以及EMT标志物表达水平的影响。结果 CLEC5A蛋白在HCC癌组织中的表达低于癌旁组织，其表达水平与患者的肿瘤大小（P=0.008）、肿瘤数量（P=0.010）、肿瘤分化程度（P=0.016）、BCLC分期（P=0.040）和微血管侵犯（P=0.024）等相关；过表达CLEC5A能够抑制HCC细胞的增殖、迁移及侵袭能力，并逆转HCC细胞的EMT特性。结论 CLEC5A是HCC潜在的抑癌基因，有望成为该疾病新的治疗靶点。

• 紫草素通过抑制PKM2/PHD3/HIF-1α通路诱导肝癌细胞凋亡

  张换换, 陈 卓, 赵想弟, 霍 强, 程 秀

  目的 探讨紫草素诱导人肝癌细胞SMMC-7721死亡的可能机制。方法 体外培养人肝癌细胞（SMMC-7721）和正常肝细胞（L-02），实验分为对照组和紫草素给药组（4、8、16 μmol/L）。 采用3（-4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐 3（-4,5-二甲基噻唑-2-yl）-2,5-二苯基四氮唑溴盐，MTT法检测细胞活力，试剂盒检测三磷酸腺苷（ATP）和乳酸水平，免疫共沉淀和免疫荧光双染实验明确M2型丙酮酸激酶（PKM2）、脯氨酰酸羟化酶3（PHD3）、缺氧诱导因子1α（HIF-1α）三者之间的作用关系及蛋白表达情况；Annexin V/PI检测细胞凋亡；Western blot观察PKM2、PHD3、HIF-1α 及凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3、Bcl-2表达水平；采用小干扰核糖核酸（siRNA）干扰法建立 PKM2低表达的人肝癌SMMC-7721细胞，Western blot检测 PKM2低表达对人肝癌SMMC-7721细胞中的 PHD3、HIF-1α 蛋白表达水平的影响。结果 紫草素对SMMC-7721和L-02细胞的半抑制浓度（IC50）分别是8.041 μmol/L与31.75 μmol/L，与对照组相比紫草素能抑制肝癌SMMC-7721 细胞中 PKM2、HIF-1α和PHD3蛋白表达及PKM2、HIF-1α入核（P<0.05）。免疫共沉淀和免疫荧光双染实验证实，紫草素可以抑制PKM2/PHD3/HIF-1α复合体形成（P<0.05），并且抑制有氧糖酵解产物乳酸和ATP含量（P<0.05）。与对照组相比，PKM2敲低后PHD3和HIF-1α表达明显降低（P<0.05）；与未处理组相比，紫草素处理后凋亡率明显升高且凋亡蛋白Bax和cleaved caspase-3表达升高，Bcl-2表达下降（P<0.05）。结论 紫草素靶向PKM2调控PHD3/HIF-1α复合物，从而抑制肝癌细胞的有氧糖酵解，破坏其供能途径，导致肝癌细胞凋亡。

• 水缸评分法：可靠的大鼠脊髓损伤后运动功能评定方法

  张 钰, 洪淑娥, 刘家明, 刘志礼, 肖世宁, 颜金祥, 周 扬

  目的 分析水缸评分法评估大鼠脊髓损伤（SCI）后运动功能恢复的准确性。方法 选用成年雌性SD大鼠36只，采用数字表将大鼠随机分为脊髓损伤组和假手术组（n=18/组）。大鼠SCI后第1、3、5、7、14、21天分别采用水缸评分方法、BBB评分法和运动诱发电位（MEP）评估大鼠后肢功能恢复情况，并以运动诱发电位（MEP）作为金标准，分析比较两种评分方法的差异及验证水缸评分法的准确性。结果 与BBB评分方法相比，大鼠SCI后第3天，水缸评分法得分高于BBB评分法得分（0.22±0.43分vs0±0分，P<0.05），并在第5、7、14天的得分均高于BBB评分法得分(0.67±0.49分vs 0.11±0.32分，4.33±1.19分vs 2.83±1.04分，8.61±1.20分vs 7.06±1.0分，P0.05）。神经电生理监测结果显示，水缸评分法得分与BBB评分法得分均与MEP 潜伏期呈显著相关，但水缸评分法与MEP 潜伏期的相关系数更高（r= -0.90，P<0.05）。结论 水缸评分法与BBB评分法相比，能够在大鼠SCI早期更客观、准确的反映脊髓损伤后的功能恢复过程，可作为大鼠急性脊髓损伤模型后肢功能恢复的一种可靠的评估方法。

• 7种单组率的置信区间所需样本量的估计方法比较

  于米铼, 石晓彤, 邹碧清, 安胜利

  目的 在不同样本率和精度水平下，比较不同计算单组率的置信区间样本量估计方法。方法 基于Wald法、ADD4法、ADDZ2法、Wilson Score法、Clopper-Pearson法、Mid-p法和Jeffreys法这7种单组率置信区间的估计方法，在两种精度ω（0.05，0.1）、不同事件发生率p下，用“搜索法”计算出样本量，并通过Monte Carlo模拟，以估计出的样本量计算相应置信区间并比较其宽度、覆盖率和尾侧不覆盖率比值。结果 当精度要求较高时（ω=0.05），Mid-p法和Clopper-Pearson法在事件发生率较低（p<0.15）时综合表现较优，其余情况，除Wald法对称性不好外，所有其他方法表现差异不大。在ω=0.1，且事件发生率极低p=（0.01-0.05）时，除Clopper-Pearson法外，其余方法都存在无法迭代的情况。结论 针对不同的预计发生率和精度要求，建议选择相对合适的样本量估计方法。

• 甘草查尔酮A通过调控PI3K/AKT信号通路诱导肺鳞癌细胞周期阻滞

  范晓丽, 王 娟, 王梨明

  目的 探究甘草查尔酮A（LCA）对肺鳞癌细胞增殖和周期的影响及相关分子机制。方法 通过MTT实验检测不同浓度LCA处理48 h对H226细胞增殖的影响并计算半数抑制浓度（IC50）；不同浓度LCA（0、10、20及40 μmol/L）处理H226细胞48 h，通过流式细胞术检测LCA对细胞周期的影响，通过Western blot检测LCA对细胞周期相关蛋白CyclinD1，以及细胞周期蛋白依赖性激酶CDK2和CDK4表达的影响，并探究PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达情况；选取雄性BALB/c-nu裸鼠构建皮下移植瘤模型，随机分为两组（对照组和LCA处理组），腹腔注射LCA 24 d后取肿瘤测量瘤体体积及质量，从体内水平探究LCA的抗肿瘤作用。结果 MTT实验结果表明，与空白组比较，随着LCA浓度的增加，细胞存活率明显降低，48 h的IC50为28.3 μmol/L；流式细胞术的结果表明LCA处理可以使细胞周期阻滞在G1期（P<0.05），Western blot的结果显示，LCA处理后，CyclinD1、CDK2和CDK4的表达均降低（P<0.05）；PI3K和Akt的表达无明显变化，但是它们的磷酸化水平（p-PI3K和p-Akt的表达）显著降低（P<0.05）；裸鼠荷瘤实验表明，LCA可使肿瘤体积和质量明显减小（P<0.05）。结论 LCA可以抑制肺鳞癌的增殖并诱导细胞周期阻滞，其作用机制可能与调控PI3K/AKT信号通路有关。

• 白兔局部动脉粥样硬化不稳定斑块对其余血管斑块形成的影响

  陆 琦, 鲍迎春, 陈旭姣, 王春明

  目的 分析局部动脉粥样硬化不稳定斑块对其余动脉粥样硬化斑块形成的影响。方法 选取体质量年龄适合的新西兰白兔30只，按照随机数字表法将其随机分为3组（n=10）。实验组和对照组予以高脂饲料喂养，空白组予以普通饲料喂养。喂养4周后，对实验组采用颈动脉球囊损伤术进行动脉粥样硬化建模，12周后杀死兔子，取颈动脉、腹主动脉进行病理组织学检测，利用图像分析软件测量各部位平均内膜厚度、斑块面积与管腔面积之比，同时抽取兔子静脉血行血脂分析。结果 4周末、8周末、12周末时，实验组、对照组体质量较0周时明显升高（P0.05），且空白组体质量明显低于实验组、对照组（P0.05）；实验组平均内膜厚度明显大于对照组、空白组（P<0.05），且实验组手术侧颈动脉平均内膜厚度、斑块面积与管腔面积明显大于对侧颈动脉、腹主动脉（P<0.05）；12周末时，实验组、对照组甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度胆固醇（LDL-C）、高密度胆固醇（HDL-C）、超敏C反应蛋白（CRP）水平明显高于空白组（P0.05），实验组CRP水平明显高于对照组（P<0.05）。结论 局部动脉粥样硬化不稳定斑块可使机体CRP水平升高，进而促进其余动脉粥样硬化斑块的形成。

• 预防甲状腺良性结节微波消融热损伤并发症的有效方法：“杠杆撬离法”

  吴凤林, 吴巧至, 许文伟, 巫志红, 刘乐融, 周 琳

  目的 探讨“杠杆撬离法”预防甲状腺良性结节微波消融过程中热损伤并发症的安全性、有效性。方法 348例甲状腺良性结节行超声引导下微波消融治疗，其中174例采用“液体隔离带法”预防热损伤，即“液体隔离带”组；另174例采用“杠杆撬离法”预防热损伤，即“杠杆撬离法”组，术后随访1~12月，观察严重并发症的发率及结节残留发生率。结果 348例甲状腺良性结节均在超声引导下完成微波消融治疗，手术严重并发症均为声音改变，其中“液体隔离带”组3例，发生率为1.7%“；杠杆撬离法”组4例，发生率为2.3%，两组严重并发症的发生率比较差异无统计学意义（P>0.05）。术后随访1~12月，“液体隔离带”组17例结节边缘有少量残留组织，残留发生率为9.8%“；杠杆撬离法”组19例结节边缘有少量残留组织，残留发生率为10.9%，两组间结节残留发生率比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论“杠杆撬离法”是预防甲状腺良性结节微波消融过程热损伤并发症的简便有效方法。

• 拓展现实技术在临床手术中的应用

  李 然, 娄 岩

  为了探究拓展现实技术（XR）在临床手术中的应用和发展，促进XR技术高质量辅助临床手术。本研究针对基于二维图像的微创手术导航，医生难以准确判断病灶的位置、大小和几何形状且具有潜在辐射危险等问题，使用CT数据进行三维建模，依托XR技术实现术中导航，采用改进的四元数法提升电磁定位精度，系统定位精度的误差小于2 mm；针对远程手术网络数据传输卡顿、延迟等现象，依托5G网络优化服务器GPU编程算法、视频流实时编码策略和网络设计，实现了数据传输低延迟，平均延迟小于60 ms；采用高斯分布变形模型模拟碰撞检测和组织的应力形变，实现触觉感知效果。研究表明，基于XR技术的术中导航，能够更准确地确定病灶的位置，有效地降低了手术风险，且避免了术中辐射；5G网络低延迟、高保真特性使手术中实时交互成为可能，为多终端远程协同手术提供了技术基础；将力反馈技术与XR技术结合，实现具有触感的体验，使医生能够进行深度沉浸式的术前规划和虚拟手术，提高了手术成功率，缩短医生的学习曲线。XR技术赋能临床手术，对提高我国临床手术领域的源头创新能力具有积极意义，对推动手术模式创新的研究具有重要价值。

• 135例肾移植受者移植物丢失的原因分析

  刘炎忠, 柏宏伟, 钱叶勇, 李 超, 肖 璐, 朱 润

  目的 探讨肾移植术后受者移植肾丢失的原因。方法 回顾性分析 2002年1月1日~2022 年1月1日在中国人民解放军总医院第八医学中心肾移植术后移植物发生丢失的135例受者临床资料。结果 受者移植肾丢失135例，移植肾丢失原因包括排斥反应70例（51.8%）、受者带功能死亡37例（27.4%）、外科并发症12例（8.9%）、药物毒性4例（3.0%）、耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌感染4例（3.0%）、多瘤病毒相关性肾病3例（2.2%）、原发性无功能肾2例（1.5%）、原发病复发2例（1.5%）、肾前性急性肾衰1例（0.7%）。结论 肾移植术后受者移植物丢失原因主要原因是排斥反应，次要原因是受者带功能死亡，其他原因少见。

• 湖南某三级甲等综合医院护士人文执业能力现状及影响因素：基于1196例问卷调查

  张 玲, 李 君, 杨 名, 张 琼, 吴秀颖, 王青霞

  目的 了解湖南省某三级甲等综合医院护士人文执业能力现状，分析其影响因素，为进一步进行人文执业能力干预提供依据。方法 应用自制一般资料问卷及护士人文执业能力测评量表问卷调查1196名护士人文关怀实践能力、心理调适能力、人际沟通能力、自我管理能力、伦理与法律实践能力5个维度的人文执业能力现状，并采用描述性分析、单因素及多因素分析方法分别探讨影响人文职业能力可能的影响因素。结果 1196名护士人文执业能力总分均分为105.69±16.45（量表满分为130分），人文关怀实践能力、心理调适能力、人际沟通能力、自我管理能力、伦理与法律实践能力各维度均分分别为40.95±6.46、16.41±2.66、16.41±2.66、11.32±2.05、12.43±2.00分。单因素分析及多元线性回归分析结果显示，性别（P=0.033）、年龄（P<0.001）、科室（P=0.015）、工作年限（P<0.001）、职称（P<0.001）、第一学历（P<0.001）、最高学历（P<0.001）、家庭所在地（P=0.010）、婚姻状况（P=0.023）、照顾患者数量（P=0.022）、子女数（P=0.001）、是否接受人文相关培训（P<0.001）、培训次数（P<0.001）、家人（P<0.001）及同事关心（P<0.001）均是护士人文执业能力的影响因素，其中年龄、妇产科、急诊科、职称、人文培训、家人关心、同事关心进入回归方程，能解释20.7%的变异。结论 湖南省三级甲等综合医院护士人文执业能力处于中等偏上水平，但自我管理能力相对薄弱。护理管理者应针对影响护士人文执业能力的相关因素，制定有效的干预措施，如关注重点人群、重点科室，加强人文执业能力培训，完善晋升考核制度等。

• 45例嗜酸性筋膜炎的临床特征、超声诊断及治疗随访的单中心回顾性研究

  杨金水, 万月华, 张江林, 朱 剑

  目的 回顾嗜酸性筋膜炎（EF）的临床症状、化验、检查、治疗及预后，并探讨超声在EF中的应用价值。方法 回顾2006年1月1日~2022年2月28日在我中心就诊的EF患者的临床资料，并进行统计描述、分析，评估超声及磁共振成像（MRI）结果间的一致性。结果 45例EF患者，男女比例3.5∶1，发病年龄16~64岁，平均病程22.6个月，从出现症状到确诊的平均时间为16个月。最常见的诱因是剧烈运动诱发，占22%（10/45例）。EF以对称性四肢受累为主，前臂（86.7%）及小腿（80%）最常见。临床表现包括：皮下肿胀/紧硬（95.6%）、关节痛/炎（55.6%）、沟征（42.2%）、手关节屈曲挛缩（42.2%）、色素沉着（37.8%）、橘皮样皮肤病变（13.3%）等。31例（68.9%）患者嗜酸性粒细胞升高，52.3%（23/44例）的患者IgG升高，9例（20%）抗核抗体阳性。21例患者接受了≥200 mg/d（3~5 d）的大剂量激素治疗，与未接受大剂量激素治疗的患者相比，虽未达到统计学差异，但患者入院前曾复发的比例更高、受累部位更广、IgG升高的比例更多，且没有发热。共有31例（68.9%）患者完成了随访，12/31例（38.7%）患者完全缓解，随访的中位时间为3.2年（0.2~15.9年），5.5年时完全缓解的累积发生率为44.1%。未发现与治疗反应相关的特殊基线特征及免疫抑制剂种类。共26例患者同时进行了超声及MRI检查，超声与MRI在确定筋膜增厚/炎症方面一致性很好（Kappa=0.91）。结论 EF的临床特征为对称性四肢皮下肿胀、紧硬，伴嗜酸性粒细胞、IgG升高，激素治疗效果好。超声识别皮下筋膜增厚是诊断EF的一个早期最有效的工具。

• 家族性高胆固醇血症的诊断及治疗研究进展

  郑 华, 姜思捷, 林立龙

  家族性高胆固醇血症(FH)是脂蛋白代谢异常所导致的遗传性疾病，通常为常染色体显性遗传，由于长期暴露于高水平低密度脂蛋白下，FH患者发生冠状动脉疾病的风险显著升高。基因检测对FH的诊断至关重要，除此之外，低密度脂蛋白受体功能检测对FH的治疗也具有重要意义。本文将从FH的诊断筛查、治疗方案及低密度脂蛋白受体功能检测等方面进行综述。