南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2023年第12期

• Leptin循环水平与结直肠腺瘤及结直肠癌的关联性：一项病例对照和孟德尔随机化研究

  赵欢灵, 凌羽晓, 宓 帅, 朱家豪, 范佳耀, 杨 叶, 王 晶, 李迎君

  目的 探究Leptin循环水平与结直肠腺瘤及结直肠癌发生风险的关联，为结直肠腺瘤及结直肠癌的防治提供依据。方法 以浙江大学医学院附属第一医院、浙江省肿瘤医院、浙江省诸暨市人民医院及杭州市临安区第一人民医院为研究现场，共收集结直肠腺瘤患者497例，结直肠癌患者955例，健康对照911例。通过问卷收集研究对象的基本信息，并采集血液样本和提取DNA，选取Leptin的工具变量并进行基因分型检测。采用Logistic回归模型并进行分层分析，评估血清Leptin水平与结直肠腺瘤，结直肠癌以及结直肠腺瘤进展为结直肠癌的关联。进一步将遗传风险评分（GRS）和单核苷酸多态性（SNPs）作为工具变量，采用两阶段最小二乘法和逆方差加权法进行单样本和两样本孟德尔随机化分析，来评估Leptin循环水平与结直肠腺瘤，结直肠癌及结直肠腺瘤进展为结直肠癌风险之间潜在的因果关联。结果 病例对照研究结果显示，与最低四分数的Leptin水平相比，高水平的Leptin与结直肠腺瘤呈正相关（OR=1.63，95% CI：1.16~2.30，P=0.005），高水平的Leptin与结直肠癌呈负相关（OR=0.53，95% CI：0.38~0.74，P<0.001），高水平的Leptin也与结直肠腺瘤患者进展为结直肠癌的风险呈负相关（OR=0.44，95% CI：0.29~0.66，P0.05）。结论 病例对照研究结果提示Leptin可能与结直肠腺瘤，结直肠癌及结直肠腺瘤进展为结直肠癌的风险存在关联，但孟德尔随机化研究尚不支持Leptin与结直肠腺瘤，结直肠癌及结直肠腺瘤进展为结直肠癌风险之间存在因果关联。

• 六味地黄丸减轻绝经后骨质疏松症及疲劳的作用机制:基于抑制表观调控分子BRD4通路

  阮红良, 佘冬梅, 孙绍裘

  目的 基于表观遗传信号分子-溴结构域蛋白4（BRD4）表达探讨六味地黄丸治疗绝经后骨质疏松症（PMOP）及疲劳疗效的可能作用机制。方法 通过双侧卵巢摘除法制备PMOP大鼠模型；将大鼠随机分为假手术组、模型组（生理盐水，10 mL/kg）、中药组（六味地黄丸385.7 mg/kg），15只/组。中药组治疗12周后取股骨标本检测股骨密度强度以及骨组织BRD4蛋白的表达。检测各组鼠模型负重力竭游泳时间；酶联免疫吸附法测定鼠血清环磷酸腺苷（cAMP），环磷酸鸟苷（cGMP）。原代培养成骨细胞，免疫荧光染色方法检测BRD4，MAPK和NF-κB蛋白的表达。结果 Western blot检测结果发现，与假手术组相比较，模型组BRD4蛋白表达水平上调（P<0.05）；与模型大鼠相比较，中药组BRD4蛋白表达水平下调；鼠负重力竭游泳实验发现，中药组明显改善疲劳（P<0.05）。成骨细胞免疫荧光染色方法检测显示，中药组BRD4，MAPK和NF-κB蛋白表达减少。GSE56116数据集分析发现，肾阴虚组BRD4表达明显高于肾阳虚组和非肾虚组（P<0.05）。BRD4表达上调涉及神经配体受体反应、细胞骨架重排及细胞因子相互作用、粒细胞集落刺激因子趋化性等信号通路。结论 六味地黄丸可以减轻PMOP及疲劳表现，可能与BRD4表达减少以及BRD4介导的信号通路有关；BRD4有望成为PMOP潜在治疗靶点。

• CD39小分子抑制剂ARL67156增强NK细胞对胃癌细胞的杀伤作用

  龚 英, 艾丽飞热·艾麦提, 何宗忠

  目的 探讨CD39小分子抑制剂ARL67156增强NK细胞杀伤胃癌细胞的影响及其机制。方法 采用磁珠抗体的方法外周血分离纯化人原代自然杀伤细胞（NK细胞），用100 μmol/L的ARL67156处理NK细胞24 h后，Western blot蛋白印迹检测NK细胞活化的信号通路，ELISA检测NK细胞与胃癌细胞共培养上清中细胞因子IFN-γ分泌情况，通过流式细胞术检测NK细胞的CD107a脱颗粒；流式细胞术体外检测NK细胞与胃癌细胞共培养后的杀伤能力；将12只小鼠随机分为3组（4只/组）：PBS组、NK细胞组、NK细胞+ARL67156组，建立皮下胃癌荷瘤小鼠模型，尾静脉回输NK细胞，腹腔注射ARL67156，采用裸鼠皮下成瘤模型研究人原代NK细胞杀伤胃癌细胞的疗效。结果 健康人外周血NK细胞表达（25.97±5.69）%的CD39分子；与对照组相比，ARL67156处理后的NK细胞上调vav1、Syk等蛋白（P<0.05），同时促进NKG2D、DAP10、CD57、CD16等活化分子的表达（P<0.05），降低TIGIT、KIR等抑制性受体表达，促进NK细胞中IFN-γ、CD107a脱颗粒的分泌（P<0.05）；体内实验中，与对照组相比，ARL67156联合NK细胞组，MKN-45胃癌瘤体体积更小（P<0.05）。结论 ARL67156通过vav1-Syk信号通路激活NK细胞，ARL67156在体外体内均能够增强NK细胞杀伤胃癌细胞的能力，能够为NK细胞在胃癌肿瘤免疫治疗中提供策略和理论指导。

• LncRNA SNHG8通过抑制miR-494-3p表达减轻脑缺血再灌注损伤

  曹天然, 刘青芳, 潘美民, 张雪红

  目的 探究LncRNA SNHG8调控miR-494-3p表达减轻脑缺血再灌注损伤的发生机制。方法 构建小鼠脑缺血再灌注损伤模型，通过 TTC 染色检测梗死面积，ELISA 检测脑组织中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α含量，RT-qPCR检测脑组织中LncRNA SNHG8和miR-494-3p的表达。构建过表达LncRNA SNHG8的OGD/R模型小胶质细胞，细胞分为OGD/R+oe-NC组或OGD/R+oe-SNHG8组，并通过ELISA和流式细胞术检测细胞的炎症反应和凋亡情况。双荧光素酶实验验证 LncRNASNHG8和miR-494-3p的靶向关系。在oe-SNHG8的OGD/R模型小胶质细胞中进一步过表达miR-494-3p，细胞分为OGD/R+oe-SNHG8+mimic NC组或OGD/R+oe-SNHG8+miR-494-3p mimic组，检测细胞炎症反应和凋亡的变化。结果 小鼠脑缺血再灌注损伤模型中，脑组织出现明显的梗死区，炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的含量明显增加（P<0.001），lncRNA SNHG8低表达（P<0.01），而miR-494-3p高表达（P<0.01）。过表达LncRNA SNHG8明显抑制OGD/R模型小胶质细胞的炎症反应和凋亡（P<0.01）。过表达LncRNA SNHG8能抑制miR-494-3p的表达（P<0.01）。在oe-SNHG8的OGD/R模型小胶质细胞中进一步过表达miR-494-3p，部分促进细胞的炎症反应和凋亡（P<0.05）。结论 LncRNA SNHG8通过抑制miR-494-3p表达，抑制炎症反应和细胞凋亡，从而改善脑缺血再灌注损伤。

• UBE2W过表达促进结肠炎小鼠结肠细胞的增殖

  王少鑫, 崔立红, 李 辉, 刘新尧, 李晓伟, 王晓辉

  目的 利用结肠炎小鼠模型，探讨UBE2W对结肠炎粘膜细胞增殖的作用。方法 利用2.5%葡聚糖硫酸钠盐（DSS）喂养C57BL/6小鼠构建结肠炎小鼠模型，采用聚合酶链反应（PCR）和Western blot检测小鼠结肠组织UBE2W的表达水平。将结肠炎小鼠随机进行尾静脉注射腺病毒（AAV2/9 myc-UBE2W或AAV2/9 Control），分为UBE2W过表达组和对照组，5只/组。观察小鼠的体质量变化，实验结束时取结肠组织行病理HE染色及组织学评分，评价小鼠结肠炎症的严重程度。采用免疫组织化学方法检测两组小鼠结肠粘膜细胞的增殖指标Ki67和BrdU表达水平。在293T和HCT116细胞中，采用CCK-8试剂盒检测过表达UBE2W对细胞增殖的影响。结果 成功建立由DSS诱导的实验性结肠炎小鼠模型，UBE2W在结肠组织中mRNA和蛋白水平与正常小鼠比较明显降低；UBE2W过表达组结肠炎小鼠体质量丢失少于对照组，在第9天和第10天差异最明显（P<0.05），其病理组织学结肠炎症指数低于对照组（P<0.05）；UBE2W过表达组小鼠结肠组织细胞中Ki67和BrdU表达水平高于对照组（P<0.05）。在293T中过表达UBE2W后细胞培养72、96 h时的吸光度A450 nm均高于对照组（P<0.05），HCT116细胞呈现类似结果。结论 UBE2W对小鼠结肠炎有保护作用，过表达UBE2W有利于结肠炎症的恢复，可能是通过促进结肠细胞增殖实现的。

• 肌肉质量增加可能导致椎间盘退变：一项两样本孟德尔随机化研究

  苏 超, 田彧潇, 张 清, 万田豪, 夏 迪

  目的 采用两样本孟德尔随机化分析方法研究肌肉减少症（SP）与椎间盘退变（IVDD）之间的因果关系。方法 获取SP（肌肉瘦体质量、左右手握力）和IVDD的全基因组关联研究数据库，并得到与暴露强相关单核苷酸多态性（SNP）作为工具变量。保守去除吸烟、久坐两个混杂因素，通过逆方差加权法（IVW）、加权中位数法、MR-Egger法进行孟德尔随机化分析来评估SP和IVDD的因果关系。通过MR-PRESSO、双重验证、阴性对照、异质性和多样性检验来确保结果的一致性和准确性。结果 有570、97、79个分别与肌肉瘦体质量、左右手握力强相关的SNP被纳入分析，结果显示肌肉瘦体质量和IVDD显著正相关（IVW：OR=1.139，95% CI=（1.076，1.204），P=6.619e-6），和右手握力可能存在正相关关系。在MR-PRESSO和选择新的IVDD数据库重新分析后结果与之前基本保持一致。结论 肌肉质量增加可能提高椎间盘退变的风险。

• 甲基化酶WTAP通过调控FOXO1的表达参与肾缺血再灌注损伤

  赵刚刚, 李华锋, 张鸿毅, 肖克兵, 杨 辉, 李子峰, 傅崇德

  目的 探讨m6A甲基化酶WTAP在小鼠肾缺血再灌注（I/R）损伤中的表达情况及对肾小管上皮细胞生物学行为的影响，阐明其可能的作用机制。方法 C57BL/6小鼠随机分为假手术组（sham组）、I/R组，8只/组，建立急性缺血肾损伤模型；全自动生化分析仪检测血中尿素氮（BUN）及肌酐（Scr）水平评估肾功能；HE染色检测肾组织病理和形态改变；IHC检测肾组织中WTAP和FOXO1蛋白的表达；人肾小管上皮细胞（HK-2）分为Control、H/R、si-NC、si-WTAP、si-NC+H/R、si-WTAP+H/R组；Western blot检测蛋白表达；qRT-PCR检测mRNA水平；CCK8检测细胞活性；TUNEL染色法检测细胞凋亡；试剂盒分别检测LDH的释放水平和Caspase-3活性；SRAMP（http://www.cuilab.cn/sramp/）网站预测FOXO1的m6A修饰位点；RIP实验检测WTAP与FOXO1mRNA的相互作用；MeRIP-qPCR检测m6A修饰FOXO1的水平。结果 与sham组相比，I/R组Scr、BUN水平显著升高（P<0.001），WTAP mRNA和蛋白水平都显著升高（P<0.001）。与正常HK-2细胞相比，H/R组细胞活性显著下降（P<0.01），LDH的释放水平显著升高（P<0.001），WTAP的mRNA和蛋白水平都显著升高（P<0.001）。抑制WTAP表达，上述细胞损伤减弱，FOXO1的mRNA和蛋白水平都显著下降（P<0.01）。WTAP与FOXO1 mRNA结合，抑制WTAP表达能够显著降低FOXO1m6A水平（P<0.001）。结论 WTAP在体内外肾缺血再灌注损伤模型中表达均上调；体外抑制WTAP能够抵抗H/R诱导的凋亡损伤，这可能与其介导的FOXO1 m6A调控有关。

• 肝硬化可疑自发性细菌性腹膜炎患者的预后及发生死亡的危险因素

  唐 巧, 周 超, 张 宁, 何召云, 张晶晶, 付双楠, 李 昕, 刘鹏程, 张田义, 张 瑾, 宫 嫚

  目的 探讨肝硬化可疑自发性细菌性腹膜炎（SBP）患者临床特征及预后情况，并分析其预后的影响因素。方法 回顾性收集解放军总医院第五医学中心2021年6月~2022年5月收治的323例肝硬化失代偿期合并腹水住院患者的临床资料，根据腹水多形核细胞计数（PMN）、常规腹水细菌培养结果及是否伴可疑SBP表现，将患者分为SBP组（腹水PMN计数≥250个/mm3）（n=115）、细菌性腹水（BA）组（PMN计数0.48 ng/mL（HR=1.989, 95% CI: 1.111~3.560, P=0.021）是可疑SBP患者90 d预后的独立影响因素。结论 可疑SBP患者预后差，应进一步优化其临床管理路径，重点关注患者终末期肝病模型评分及降钙素原水平。

• 利格列汀通过激活AMPK/PGC-1α/TFAM通路改善糖尿病肾脏疾病线粒体生物合成

  万 璐, 钱宇池, 倪文静, 卢宇欣, 李 巍, 潘 艳, 陈卫东

  目的 探究利格列汀是否能够通过激活磷酸腺苷活化蛋白激酶/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α/线粒体转录因子A（AMPK/PGC-1α/TFAM）通路，改善糖尿病肾脏疾病（DKD）线粒体生物合成。方法 24只SD雄性大鼠，适应性喂养1周后，随机抽选6只大鼠为正常对照组（NC组）喂养普通饲料；剩下的予以4周高脂高糖饮食+45 mg/kg 1% STZ腹腔注射法造模，总计成功16只，将其随机分为DKD模型组（DKD组）、利格列汀干预组（DKD+Linagliptin组），每组8只，继续予以高脂高糖饲料喂养。DKD+Linagliptin组用5 g/L羧甲基纤维素钠配置2 mg/mL的利格列汀5 mg/（kg·d）给予大鼠灌胃12周，NC组、DKD组大鼠给予等量羧甲基纤维素钠灌胃。干预结束后将大鼠处死，留取腹主动脉血液和肾脏组织进行检测。检测血糖、肝功能及脂代谢情况；行 HE、PAS、Masson、天狼猩红染色及电镜观察肾脏组织损害情况；免疫组织化学法检测转化生长因子β1（TGF-β1）、纤连蛋白（FN）和胶原蛋白Ⅰ（COLⅠ）表达变化；检测组织细胞膜电位变化和ATP酶含量明确线粒体损伤情况；Western blot检测AMPK 、P-AMPK、PGC-1α、TFAM表达变化。结果 与DKD组相比，利格列汀治疗后，血糖水平（P<0.01）、蛋白尿（P<0.05）显著降低，肾脏病理、超微结构损伤明显减轻，TGF-β1、FN、COLⅠ的表达明显下降（P<0.05），线粒体膜电位增加且ATP酶含量上升（P<0.0001），线粒体生物合成相关蛋白 P-AMPK/AMPK、PGC-1α、TFAM表达增加（P<0.05）。结论 在DKD中，利格列汀具有降低尿白蛋白，善肾脏纤维化的作用。这种作用可能是通过激活AMPK/PGC-1α/TFAM通路，促进线粒体生物合成介导的。

• 纳米脂肪联合富血小板血浆治疗大鼠压力性损伤创面的实验研究

  张 铭, 于 浩, 邵 阳, 宋国栋, 陈铭锐, 刘顺利

  目的 探讨同种异体纳米脂肪联合富血小板血浆对大鼠压力性损伤创面的影响及治疗效果。方法 将40只SD大鼠成功建立压力性损伤模型后，随机分为4组（10只/组）：纳米脂肪联合富血小板血浆处理组（NP组）、单纯纳米脂肪处理组（N组）、单纯富血小板血浆处理组（P组）、对照组（C组）。处理后观察创面愈合情况，第1、3、5、7、10、14天拍照，计算创面愈合率；第5、10、14天取创面标本行HE染色，Masson染色，CD31、MCP-1免疫组织化学染色及VEGF蛋白质免疫印迹检测，观察创面炎性细胞浸润，胶原生成、沉积及排列，血管新生、炎性因子表达及VEGF表达情况。结果 压力性损伤模型及纳米脂肪制备成功，PRP内血小板计数约为正常全血的6.2倍。创面表面观察显示，NP组愈合最快，其各观察点的创面愈合率明显高于其余3组（P0.05），第7、14天时明显高于C组（P<0.05）。HE染色显示，NP组第5天炎性细胞浸润增强，真皮及表皮生长快于其他组，第14天基本完全愈合，N组与P组各时间点组织变化相似，且优于C组（P<0.05）。Masson染色显示，NP组各时间点压力性损伤创面相对胶原表达量以及排列顺序明显优于其他组（P<0.05），N组及P组在各时间点也较C组有明显差异（P<0.05）。CD31免疫组化显示不同时间点NP组血管新生数目高于其余3组（P0.05），但两组新生血管数目均高于C组。MCP-1免疫组化结果示，第5天NP组压力性损伤创面MCP-1相对表达强于其他组（P<0.05），N组及P组同时亦高于C组（P<0.05）。VEGF蛋白质免疫印迹检测显示，NP组PI创面3个时间点VEGF表达明显高于其余3组（P<0.05），第5、10天时N组、P组及C组相近，仅在第14天时N组及P组明显强于C组（P<0.05）。结论 纳米脂肪联合富血小板血浆治疗压力性损伤创面可显著促进创面愈合，两者联合具有协同作用，为压力性损伤创面的临床治疗提供一种新的可靠方案。

• 非侵入性产前检测对胎儿罕见染色体三体的检测价值

  谢潇潇, 赵青冬, 胡凌云, 姜淑芳, 王晓萍, 张文玲, 李 珍, 游艳琴, 卢彦平

  目的 探讨非侵入性产前检测对罕见的染色体三体的检测价值。方法 收集2019年1月~2023年4月本院通过非侵入性产前检测检出罕见染色体三体高风险的病例，临床咨询后进行侵入性产前诊断，使用染色体核型分析、染色体微阵列分析、染色体拷贝数变异测序、间期荧光原位杂交等技术进行检测，分析结果并随访妊娠结局，以评价非侵入性产前检测对罕见染色体三体的检测价值。结果 25 282例进行非侵入性产前检测的病例中，血浆游离DNA检出罕见的染色体三体高风险56例（0.22%），以7号染色体病例数最多，占45%（25/56），仅1、4、17、19号染色体未检出病例。46例获得胎儿遗传学检测结果，其中10例为胎儿真性嵌合，总体阳性预测值为22%（10/46），7号染色体阳性预测值10%（2/20）。52例随访到妊娠结局，除胎儿真性嵌合之外，33例（63%）妊娠结局良好，10例发生不良妊娠结局，包括胎儿生长受限、早产以及母体的妊娠期合并症及并发症，胎儿生长受限通常最早发生。随访完整的22例7号染色体非真性嵌合病例中，82%病例妊娠结局良好。结论 非侵入性产前检测在一定程度上增加了罕见染色体三体真性嵌合胎儿的检出，但阳性预测值不高；侵入性产前检测未提示胎儿存在嵌合细胞系的病例大部分预后良好，尤其是7号染色体，咨询时可告知孕妇以缓解焦虑，但仍有发生母儿不良妊娠结局的风险，加强妊娠期监测和管理能够使这部分孕妇获益。未行非侵入性产前检测的孕妇，孕中晚期发现胎儿生长受限，如侵入性产前检测未提示异常，可以补充非侵入性产前检测协助查找胎儿生长受限原因。

• 清肾颗粒含药血清通过miR-23b-5p靶向Nrf2通路减轻NRK-52E细胞转分化

  刘 敏, 金 华, 呼 琴, 陈 诺, 张叶青, 王亿平

  目的 探讨转化生长因子β1（TGF-β1）诱导NRK-52E（大鼠肾小管上皮细胞）细胞转分化模型中miR-23b-5p是否能对Nrf2通路靶向调节，并阐明清肾颗粒含药血清减轻NRK-52E细胞转分化的机制。方法 构建TGF-β1诱导的NRK-52E细胞转分化模型，分别使用miR-23b-5p mimic、inhibitor以及阴性对照（NC）siRNA转染细胞；采用清肾颗粒含药血清进行干预，分为正常组、TGF-β1组、清肾颗粒组、miR-23b-mimic-NC组、miR-23b-mimic组、miR-23b-mimic+清肾颗粒组。采用CCK8法测定NRK-52E细胞活性；双荧光素酶报告基因实验检测miR-23b-5p与Nrf2间的靶向关系；Western blot法检测细胞中Nrf2、Keap1、α-SMA蛋白表达；RT-qPCR法检测细胞中miR-23b、Keap1、Nrf2、α-SMA mRNA表达；流式细胞术检测ROS。结果 根据CCK8结果筛选得出清肾颗粒含药血清的最佳浓度和时间分别为20%和24 h，TGF-β1刺激的最佳浓度和时间分别为10 ng/mL和24 h。转染miR-23b-5p mimic 和 inhibitor 发现，当 miR-23b-5p 过表达后，Nrf2 mRNA 表达量也增加；而 miR-23b-5p 表达沉默后，Nrf2mRNA表达量也减少。双荧光素酶报告显示，Rno-miR-23b-5p能显著下调Rno-Nrf2-wt荧光素酶活性（P0.05）。清肾颗粒含药血清的干预实验发现，与正常组比较，TGF-β1组的miR-23b-5p、Nrf2表达降低，Keap1、α-SMA和ROS表达升高（P<0.05）。与TGF-β1组比较，清肾颗粒组的miR-23b-5p、Nrf2表达升高，Keap1、α-SMA和ROS表达降低（P<0.05）；miR-23b-mimic组miR-23b-5p、Nrf2表达升高，Keap1、α-SMA和ROS降低（P<0.05）。与miR-23b-mimic-NC组比较，miR-23b-mimic组miR-23b-5p、Nrf2表达升高，Keap1、α-SMA和ROS降低（P<0.05）。与miR-23b-mimic组比较，miR-23b-mimic+清肾颗粒组的miR-23b-5p、Nrf2表达升高，Keap1、α-SMA和ROS降低（P<0.05）。结论 清肾颗粒含药血清能通过miR-23b-5p靶向Nrf2通路机制减轻NRK-52E细胞转分化。

• 石胆酸通过上调miR-21表达降低核受体PPARα mRNA的稳定性

  庞碧滢, 黄娜娜, 黄晓霞, 李 馨, 熊文婷, 孔 波, 姚 焱

  目的 探讨石胆酸在转录后水平对PPARα mRNA稳定性的调控。方法 构建PPARα 3'UTR荧光素酶报告基因载体并转染HepG2细胞，比较两种浓度石胆酸处理后荧光素酶活性的变化。结合生物信息学预测，确定石胆酸诱导下差异表达的miRNAs及其在3'UTR上的潜在结合位点，对结合位点进行突变（Mut1、Mut2和Mut1+Mut2），比较石胆酸处理后Mut1、Mut2和Mut1+Mut2荧光素酶活性的变化。利用Western blot和RT-qPCR检测两种浓度石胆酸处理下信号通路的激活及其下游转录因子基因表达水平，比较不转染对照组和瞬时转染过表达转录因子的PPARα 蛋白表达，确定参与石胆酸调控PPARα mRNA稳定性的信号通路和转录因子。结果 与对照组相比，100 μmol/L 石胆酸诱导3'UTR1和3'UTR2片段荧光素酶活力均显著下降超过50%（P<0.01）。miRNA PCR array筛选发现石胆酸诱导miR-21和miR-22差异表达，100 μmol/L 石胆酸诱导miR-21表达上调2.35倍（P<0.05）。定点突变3'UTR1中两个预测的miR-21位点，构建了Mut1、Mut2和Mut1+Mut2报告基因载体。相对于对照组，石胆酸下调3'UTR1荧光素酶活性51%，而Mut1、Mut2和Mut1+Mut2分别被下调37%、39%、13%。Western blot显示石胆酸磷酸化ERK1/2，激活ERK1/2信号通路；100 μmol/L 石胆酸上调转录因子EGR1基因表达水平5.83倍（P<0.01）；瞬时转染过表达EGR1显著下调PPARα 蛋白水平（P<0.05）。结论 石胆酸通过激活肝细胞中ERK1/2信号通路，诱导早期生长应答因子EGR1和miR-21的表达上调，使miR-21作用于3'UTR调控区，降低PPARα mRNA的稳定性，从而减少PPARα基因和蛋白表达水平。

• 3D结核球模型的构建及特性验证：基于人髓系THP-1细胞与卡介苗

  郭佳俊, 邱 燕, 胡 璨, 李岱容, 杜永洪

  目的 为研究体内结核性肉芽肿的形成及特性提供体外实验模型。方法 将人髓系白血病单核细胞（THP-1）和结核分枝杆菌的模式菌卡介苗（BCG）按一定比例混合加入3D细胞培养平板，再加入佛波脂（PMA）共培养3 d。采用倒置荧光显微镜每24 h观察球体的生长情况，在共聚焦激光扫描显微镜下分别观察结核球内BCG的分布、球体内细胞的存活率和单核细胞向巨噬细胞转变情况，并观察荧光标记的纳米粒在细胞球和结核球渗透情况。通过透射电镜观察3D结核球形成后内部细菌和细胞的微观结构。利用Image-iT? 红色缺氧探针，H2O2检测试剂盒和防水笔形PH计检测受BCG感染的3D结核球和未受BCG感染的细胞球微环境的差异。通过平板菌落计数检测3D结核球能否评估利福平或左氧氟沙星抑菌能力。结果 倒置荧光显微镜显示细胞-细菌悬浮液随时间延长缓慢堆积形成稳定的3D结核球，直径50~200 μm。激光共聚焦显微镜可见细胞黏附紧密形成球样结构，大量细菌主要分布于细胞中心，球体内部出现坏死细胞，3D结核球内大量单核细胞成功分化为巨噬细胞。与单纯细胞球比较药物难以渗透入3D结核球中心。透射电镜结果显示结核球内有细胞坏死且坏死程度不一，大量BCG被吞噬于巨噬细胞内部。微环境检测结果显示与未受感染的细胞球比BCG感染的结核球更加缺氧，H2O2含量更高，PH接近中性。平板菌落计数结果显示一线抗结核药物利福平有更强抑菌效果，结核球有评估抗结核药物强弱作用。结论 成功建立了体外3D结核球模型并对其特性进行了验证，有望为研究结核性肉芽肿相关研究奠定基础。

• 金属夹造袋牵引法辅助内镜黏膜下剥离术治疗结直肠肿瘤的临床效果

  钟 俊, 钟嘉敏, 申屠弘田, 鲁竞一, 李玮泽, 李昊朋, 黄骏盛, 韩泽龙, 刘思德

  目的 分析金属夹造袋牵引法辅助内镜黏膜下剥离术（ESD）治疗结直肠肿瘤的临床效果。方法 选取2019年1月~2022年12月该院进行结直肠ESD治疗的结直肠肿瘤244例患者作为研究对象。根据ESD术中是否实施金属夹造袋牵引法，将患者分为金属夹牵引组（M-ESD，n=75）和无牵引组（N-ESD，n=169）。采用倾向性评分匹配法筛选患者，以一般临床资料为协变量进行匹配。比较匹配后两组患者的手术时间、手术切除结果指标、不良事件发生率和病理组织学诊断指标。结果 M-ESD组的手术时间短于 N-ESD 组（分别为 20.0 [15.0，30.0] min 和 30 [20.0，45.0] min，P=0.008）。M-ESD 组与 N-ESD 组的整块切除率（100% vs 98.6%）、完全切除率（97.3% vs 96%）以及根治切除率（97.3% vs 96%）均无统计学差异（P>0.05）。M-ESD和N-ESD组的不良事件发生率较低且无统计学差异（P>0.05）。结论 尽管与无牵引组相比，金属夹牵引组在手术切除率和不良事件发生率无明显差异，但是使用金属夹造袋牵引法可能具有缩短ESD手术时间的临床作用。

• IL-34在舌鳞状细胞癌中的表达及意义

  张伟健, 邹琸玥, 朱永娜, 王 敏, 马彩云, 武峻捷, 石 昕, 刘 茜

  目的 探讨白细胞介素34（IL-34）在舌鳞状细胞癌（TSCC）中的表达及临床病理学意义。方法 使用酶联免疫吸附法（ELISA）检测IL-34在36例TSCC患者和36例正常人群血清中表达水平；通过免疫组织化学（IHC）以及实时荧光定量PCR技术（qRT-PCR）比较41例TSCC患者癌组织和癌旁组织中 IL-34 的表达情况，并进一步分析其表达情况与TSCC患者临床病理特征之间的关系；利用 String数据库，LinkedOmics数据库和GEO数据库获得在TSCC中IL-34相关差异基因，通过Webgestalt数据库对TSCC中IL-34相关基因进行基因本体论（GO）功能分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）信号通路富集分析。结果 ELISA结果显示TSCC患者血清IL-34浓度低于正常人群，差异有统计学意义（P<0.001）；IHC和qRT-PCR结果显示与TSCC患者癌组织相比，IL-34在TSCC患者癌旁组织中高表达，差异有统计学意义（P<0.001），在癌组织中IL-34的表达水平和淋巴结是否转移，TNM分期有关（P0.05）；通过数据库分析发现IL-34与CSF1R，PTPRJ相关性最强，GO功能分析结果显示：在TSCC中IL-34及相关基因在生物学过程（BP）中，主要富集在骨髓细胞分化等；在细胞组成(CC)中，主要富集在含胶原蛋白的细胞外基质等；在分子功能（MF）中，主要富集在细胞因子结合、信号受体激活剂活性等。KEGG信号通路富集显示：IL-34及相关差异基因主要参与破骨细胞分化，癌症中的蛋白多糖，MAPK信号通路等。结论 IL-34在TSCC中低表达且参与TSCC的发生、发展，有望成为TSCC新的诊断标志物和治疗靶点。

• 基于注意力机制和多模态特征融合的猕猴脑磁共振图像全脑分割

  吴雪扬, 张 煜, 张 华, 钟 涛

  目的 提出并探讨一种新的基于注意力机制和多模态特征融合的深度学习算法（DDAM），实现对猕猴脑MRI图像的全脑分割。方法 共收集68例年龄分布在13~36月的多模态猕猴脑MRI图像数据，且均包含对应的真实标签。针对多模态数据信息复杂且互补的特点，采用多编码器结构分别适应不同模态并进行特征提取。在解码器部分引入注意力机制构建多模态特征融合模块（AMFF），利用模态间信息丰富且互补的特点，充分融合不同尺度和复杂度的多模态特征，进而提升分割性能。另外，进行消融实验分析并对结果进行统计学检验。结果 多编码器结构以及注意力机制的引入能够有效地提升模型对多模态特征的融合能力，使得猕猴数据的全脑分割平均DSC达到0.904，ASD低至0.131（P<0.05）。消融实验结果验证了DDAM方法各组成部分的有效性。结论 本文针对多模态数据特点构建深度学习算法模型，提出的DDAM方法，能够更有效地提取并融合多模态特征，从而实现全脑分割精度的显著提高。

• 瑞马唑仑与艾司氯胺酮用于小儿术前镇静的临床效果与安全性对比

  吴美潮, 杨芳芳, 马行军, 蔡 宁

  目的 通过对比瑞马唑仑与艾司氯胺酮用于小儿术前镇静的临床效果，明确瑞马唑仑用于小儿术前镇静的有效性及安全性。方法 选择2022年1月~2023年3月择期全麻下行双侧扁桃体和（或）腺样体切除手术的1~4岁患儿61例随机分为两组，其中瑞马唑仑组（R组）30例，艾司氯胺酮组（S组）31例。R组静脉应用瑞马唑仑0.2 mg/kg进行术前镇静，S组静脉应用艾司氯胺酮0.5 mg/kg进行术前镇静。记录两组患儿镇静后PSAS评分，生命体征（MAP、SpO2、HR），镇静评分，诱导时面罩接受程度评分，镇静起效时间、术后苏醒时间，诱导后MAP、HR，苏醒后Ramsay镇静评分，麻醉期间丙泊酚、瑞芬太尼用量，麻醉苏醒期躁动（EA），术后不良反应（呼吸抑制、恶心、呕吐）及术后第7天、第14天术后不良行为改变（NPOBCs）发生。结果 两组患儿镇静后PSAS评分，镇静评分，诱导时面罩接受程度评分，诱导后MAP、HR，苏醒后Ramsay镇静评分，麻醉诱导丙泊酚用量，麻醉苏醒期躁动发生率，及术后第7 d、第14 d术后不良行为改变发生率对比，差异无统计学意义（P>0.05）。与S组对比，R组镇静起效时间略长，麻醉苏醒时间短，麻醉维持丙泊酚及瑞芬太尼用量多（P0.05）；S组镇静后MAP、HR升高，差异有统计学意义（P0.05）。结论 与0.5 mg/kg艾司氯胺酮相比，静脉注射0.2 mg/kg瑞马唑仑用于1~4岁小儿术前镇静起效时间略长，苏醒时间短，血流动力学更平稳，具有可行性及安全性。

• 莱菔硫烷通过下调MAPK/NF-κB信号通路逆转Aβ纤维介导的M1型小胶质细胞极化和神经炎症介导的神经干细胞程序性坏死

  张嘉发, 杨灿洪, 张淑芬, 曹婷婷, 彭 瑞, 郭蔚泓, 严予苹, 谢淑婷, 彭晓佳, 吕田明, 黄添容

  目的 探讨莱菔硫烷（SFN）和Aβ25-35纤维（fAβ25-35）对BV-2细胞M1/M2极化的影响，及其通过下调MAPK/NF-κB信号通路逆转M1型小胶质细胞极化逆转神经炎症介导的C17.2神经干细胞程序性坏死。方法 以不同浓度Aβ25-35和SFN对BV-2细胞作用后用CCk8试剂盒检测细胞活性。实验分组：溶媒对照组、Aβ组、Aβ+SFN组、Aβ+SB203580组。对BV-2细胞进行IL-6及TNF-α mRNA检测，对细胞上清进行IL-6及TNF-αElisa检测，对BV-2细胞进行CD16/32和CD206标记的流式细胞检测，提取BV-2蛋白后进行Western blotting检测p-p38和p-p65蛋白表达；BV-2与C17.2共培养24 h后提取C17.2蛋白进行进行Westernblotting检测p-mlkl蛋白表达。结果 CCK8结果显示，与溶媒对照组相比，6.25 μmol/L浓度fAβ25-35导致BV-2细胞活力增加（P<0.01），≥50 μmol/L浓度fAβ25-35BV-2细胞活力降低（P0.05）。RT-qPCR、ELISA、流式细胞术以及Western blotting结果显示，在BV-2细胞中，Aβ组与其他三组相比，IL-6和TNF-α mRNA表达升高（P<0.001）、上清中IL-6和TNF-α浓度升高（P<0.001）、CD16/32表达升高（P<0.05）、CD206表达降低（P<0.05）以及p-p38和p-p65表达升高（P<0.01）。Western blotting结果显示，在C17.2细胞中，Aβ组与其他三组相比p-mlkl表达升高（P<0.05）。结论 SFN通过在fAβ25-35激活的BV-2细胞中下调MAPK/NF-κB信号通路逆转M1型小胶质细胞极化逆转神经炎症介导的C17.2神经干细胞程序性坏死。

• PET/CT代谢参数与血液炎症标志物对一线化疗的非小细胞肺癌患者预后列线图的构建及临床意义

  孔德贤, 宋丽萍, 向 阳

  目的 探讨18F-FDG-PET/CT代谢参数与血液炎症标志物，对一线化疗联合免疫治疗的晚期（IV期/IIIB期）非小细胞肺癌患者的预后价值，并建立联合指标，构建诺模图预测模型。方法 回顾性分析2019年3月~2021年6月接受化疗联合免疫治疗前基线18F-FDG-PET/CT检查的105例晚期NSCLC患者的代谢参数（最大标准摄取值SUVmax，肿瘤代谢体积MTV和病灶糖酵解总量TLG）及血液炎症标志物（中性粒细胞/淋巴细胞比值NLR、衍生中性粒细胞/淋巴细胞比值dNLR，血小板/淋巴细胞比值PLR，全身免疫炎症指数SII）。使用ROC曲线计算最佳截断点进行分组，进行单因素和多因素COX回归分析以筛选患者预后的独立预测因子，进行联合诊断分析，最终将有效生物标志物纳入预测模型，使用R语言软件的rms函数包中的cph函数构建模型（列线图nomogram）。结果 105列患者的中位随访时间为17.5个月，PFS中位数为16个月，OS位数为13.6个月。其中高PLR（≥151.050）和高TLG≥（101.940）是多变量分析中PFS的独立预后因素，高SII（941.385）和高TLG≥（101.940）是OS的独立预后因素。结合PET和血液炎症标志物的列线图具有较好的预后优势（PFS和OS的C-index指数分别为0.682和0.727），校准曲线拟合较好。决策曲线表现出良好的临床效用。结论 基线PET/CT代谢参数和血液炎症标志物与晚期一线化疗的NSCLC患者的 PFS和OS相关，且二者结合构建出的列线图具有良好的预后预测效果。

• 雷帕霉素增强RSL3对睾丸癌细胞I-10的增殖、侵袭与迁移的抑制作用

  李 彬, 汪 越, 侯凤伟, 杜家如, 童旭辉

  目的 探究雷帕霉素增强RSL3对睾丸癌细胞I-10的增殖、侵袭与迁移能力的抑制作用。方法 MTT法检测RSL3（Type II）及合用雷帕霉素（RAPA）作用后I-10细胞的存活率。将RSL3（0~16 μmol/L）分别以及联合16 μmol/L雷帕霉素作用于睾丸癌细胞I-10，采用MTT法检测I-10细胞增殖抑制情况，利用集落克隆形成实验检测细胞增殖能力，采用划痕实验和Transwell小室检测I-10细胞的迁移与侵袭能力，采用流式细胞术检测I-10细胞的脂质活性氧水平，采用GSH和MDA检测试剂盒检测细胞中GSH和MDA含量，利用Western blot检测细胞GPX4蛋白表达。结果 随着RSL3浓度的提高，其对I-10细胞的毒性作用逐渐增强。在合用雷帕霉素后，对细胞的毒性进步一增强。与对照组相比，单用RSL3组I-10细胞集落形成数减少（P<0.05）、划痕愈合率降低（P<0.01）、侵袭和迁移细胞数减少（P<0.05）、脂质活性氧水平升高（P<0.0001）、GSH含量降低（P<0.01）、MDA含量升高（P<0.05）、GPX4蛋白表达水平降低（P<0.01）；与单用RSL3组相比，雷帕霉素联用RSL3组集落形成数、侵袭和迁移细胞数进一步减少（P<0.05），划痕愈合率、GSH含量、GPX4蛋白表达水平进一步降低（P<0.01，P<0.05），脂质活性氧水平、MDA含量进一步升高（P<0.05，P<0.01）。结论 雷帕霉素增强RSL3对睾丸癌细胞I-10的增殖、侵袭与迁移的抑制作用，其机制与其能够增强RSL3诱导的铁死亡有关。

• 小细胞肺癌术后长期生存病例1例报告及文献回顾

  吕纯鑫, 朱天仪, 樊姗姗, 吴秀奇, 夏 青

  目的 旨在提高对小细胞肺癌异质性的认知，达到个体化诊治的目的，改善小细胞肺癌患者的生存预后。方法 本研究报道由上海交通大学医学院附属仁济医院肿瘤科收治的1例小细胞肺癌长生存病例，分析其临床病理特点、诊疗过程，并结合文献复习，讨论小细胞肺癌的综合治疗策略、异质性及预后。结果 经过综合治疗，本例患者生存时间超13年。结论 小细胞肺癌长期生存病例罕见，应提高对小细胞肺癌异质性的认知，改善小细胞肺癌患者的生存预后。

• 罕见大体积（223 g）前列腺孤立性纤维性肿瘤腹腔镜下根治性切除术

  廖佳靖, 刘晓华, 杜 伟, 郭 凯, 徐亚文

  目的 报告1例完全腹腔镜下根治性切除净质量223 g的罕见前列腺孤立性纤维性肿瘤，并分享腹腔镜下处理大体积前列腺肿瘤的相关诊疗经验。方法 患者男性，67岁，因“突发排尿困难半天”由社区卫生服务中心转诊我院，经直肠前列腺穿刺活检术确诊为前列腺孤立性纤维性肿瘤，排除手术禁忌症后，行腹腔镜下前列腺根治性切除术，手术过程包括前列腺根治性切除术和膀胱颈尿道吻合术。结果 手术耗时3 h15 min，术中出血量约100 mL，术后视检标本呈球形，大小约11 cm×7.5 cm×6 cm，称量净质量为223 g。术后病理为前列腺孤立性纤维性肿瘤（中危型）。术后5 d拔除盆腔引流管，术后1周拔除尿管，患者夜间控尿好、无失禁，白天活动时偶有漏尿，总体疗效满意，术后随访尿控效果满意，未见肿瘤复发、转移。结论 腹腔镜根治性前列腺切除质量大于200 g的前列腺肿瘤难度大，主刀需要具备丰富的腹腔镜手术经验，熟悉前列腺层面解剖，手术团队配合默契，掌握操作策略与方法，可轻松应对大体积前列腺肿瘤，同样也能达到满意的肿瘤学控制和功能学保护效果。