南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2020年第11期

• 高血压对COVID-19患者临床结局的影响

  胡诚毅, 肖芦山, 朱红波, 张艳培, 张文峰, 刘 莉, 朱 宏

  目的 确定高血压对COVID-19患者预后的影响。方法 我们对2020年1月1日~3月18日间就诊于洪湖市人民医院和南昌大学第一附属医院的共442例COVID-19患者（包括61例高血压患者和381例非高血压患者）进行了配对队列研究。为最大程度地减少年龄、性别和其他合并症等混淆因素的影响，我们排除了患有除高血压外其他合并症的患者，并将高血压和非高血压患者以1∶1的比例按相同年龄和性别进行配对，最终对32对（64例）患者的临床特征、实验室检查结果和临床结局进行了分析。结果 与非高血压患者相比，高血压患者更容易发生细菌感染（P=0.002），中性粒细胞计数（P=0.007）、中性粒细胞/淋巴细胞比值（P=0.023）以及乳酸脱氢酶水平（P=0.035）更高。高血压患者更容易在胸部CT扫描中出现双侧斑片状阴影（P=0.012），使用抗生素（P=0.035）和皮质类固醇激素（P=0.035）的频率更高。结论 高血压增加了COVID-19患者细菌感染的风险。患有高血压的COVID-19患者中性粒细胞计数和中性粒细胞/淋巴细胞比例更高，更加需要抗生素治疗，因此患有COVID-19的高血压患者应更加谨慎，避免细菌感染。

• 快充式经鼻湿化高流量通气对肥胖患者全麻诱导期胃进气的影响： 基于超声评估的90例前瞻性临床试验

  蒋卫清, 石 莉, 赵 倩, 张文文, 徐 漫, 汪婉玲, 王晓亮, 鲍红光, 冷 静, 蒋 力

  目的 通过超声实时监测胃窦进气情况，评估快充式经鼻湿化高流量通气（THRIVE）在全身麻醉诱导时对肥胖患者胃进气的影响。方法 纳入90例于全麻下行腹腔镜胆囊手术的肥胖患者，BMI：30~39.9 kg/m2，随机分为面罩组（M组）、快充式经鼻湿化高流量通气（THRIVE）组（T组）、面罩复合THRIVE组（M+T组），30例/组。全麻诱导期，M组经面罩预给氧并在诱导给药后行面罩辅助通气（FMV）；T组经THRIVE给氧；M+T组经面罩复合THRIVE预给氧，于诱导给药后行FMV复合THRIVE给氧。气管插管期，T组及M+T组患者接受THRIVE持续给氧。超声监测各患者胃窦部，超声图像出现“彗尾征”则定义为胃进气阳性（GI+）。测量预给氧前后以及插管后的胃窦部横截面积（CSA-GA），记录T（1 入室）、T（2 预充氧5 min后）、T（3 诱导给药5 min后）、T（4 插管后即刻）各时点脉搏氧饱和度（SpO2）、血氧分压（PaO2）、二氧化碳分压（PaCO2）及术后恶心呕吐等不良事件发生率。结果 与T组比较，M和M+T组胃进气发生率显著增加（P<0.05）。与T1时间点比较，M组和M+T组CSA-GA在T4时间点显著增加；与T1时间点比较，M组和M+T组的GI+亚组CSA-GA在T4时间点均显著增加；在T4时间点，M组和M+T组的GI+亚组CSA-GA大于本组GI-亚组（P<0.05）。T组各时间点的CSA-GA无统计学差异（P>0.05）。腔镜直视下胃胀分级结果提示，与T组比较，M组和M+T组腔镜直视下胃胀分级Ⅰ°患者占比例显著减少，Ⅱ°患者占比例显著增加（P<0.05）。窒息插管期（即T3~T4），M组PaO2变化值（ΔPaO2）显著大于T组和M+T组（P<0.05）。结论 超声监测观察胃窦部“彗尾征”及CSA-GA变化是一种可行、可靠的胃进气检测方法；而THRIVE用于肥胖病例的麻醉诱导能够在保证患者氧合的情况下不会进一步增加胃进气。

• IL-17A/IL-17RA通过上调自噬降低卵巢癌SKOV3细胞对顺铂敏感性

  王丽华, 张 璇, 王亮亮, 王蓓蓓, 张 競, 李玉芝

  目的 探讨白细胞介素（IL）17A通过调控细胞自噬对卵巢癌细胞顺铂（DDP）化疗敏感性的影响。方法 体外培养卵巢癌SKOV3细胞并分别用不同浓度DDP（1、2、4、6、8、10、15、20 μg/mL）处理，MTT法测定细胞增殖活性以及IL-17A（100 ng/mL，处理24 h）对DDP 诱导SKOV3细胞凋亡的影响；流式细胞术检测人卵巢癌细胞SKOV3中IL-17A受体（IL-17RA）的表达水平；Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡；线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）检测细胞早期凋亡情况；IL-17RA 中和抗体（IL-17RA mAb）进行IL-17RA阻断实验；合成针对IL-17RA基因的siRNA片段（siRNA-IL-17RA），转染SKOV3细胞，沉默IL-17RA表达；3-甲基腺嘌呤（3-MA）抑制细胞自噬水平；Western blot检测细胞凋亡相关蛋白（Bcl2、Bax、Cleaved Caspase3）、自噬相关蛋白（P62、Beclin-1）表达。结果 DDP可以增加卵巢癌SKOV3细胞IL-17RA表达水平；IL-17A降低SKOV3细胞对DDP的敏感性（P<0.05）；DDP诱导SKOV3细胞内自噬相关蛋白Beclin-表达增强，自噬降解底物P62蛋白减少；IL-17A/IL-17RA增强了DDP自噬诱导作用（P<0.05）；3-MA 阻断自噬后，SKOV3细胞凋亡率较干扰前明显升高，细胞抗凋亡蛋白Bcl2表达水平降低、凋亡蛋白Bax表达水平升高，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 IL-17A/IL-17RA可能通过上调DDP诱导的自噬水平降低人卵巢癌SKOV3细胞化疗敏感性。

• 机器人辅助与胸骨正中切开二尖瓣置换术的生活质量及远期疗效比较

  赵海智, 张华军, 杨 明, 肖苍松, 王 瑶, 高长青, 王 嵘

  目的 总结并对比分析机器人二尖瓣置换和常规开胸二尖瓣置换相关手术指标和术后的生活质量、伤口满意度及术后恢复时长。方法 回顾性收集 2007 年 1 月~ 2015 年 12 月我院47例接受 da Vinci 机器人二尖瓣置换术的患者的资料，并以此47例患者作为机器人组。2002 年3 月~2014 年6 月正中开胸二尖瓣置换手术患者共286 例，依据7 个指标从正中开胸患者中抽取 47 例作为开胸组进行1∶1配对。通过收集围术期相关资料，随访患者出院后临床资料，使用生活质量调查量表（SF-12）调查术30 d、半年的生活质量，同时对比两组患者术后恢复工作时间和对手术切口的满意度。结果 机器人组和开胸组的患者均成功完成二尖瓣置换手术，术中未见患者死亡。机器人组术后并发症仅有 1 例为胸腔积液。开胸组患者中1 例因术后引流过多接受二次开胸止血，1 例患者术后死于感染性休克。在手术输血量、术后引流量、术后监护时间、呼吸机时间及术后住院时间上，机器人组均优于正中开胸组，差异有统计学意义（P<0.05）。两组患者术后并发症的发生率无明显区别。术后30 d生活质量调查（SF-12）显示机器人组有明显的优势，但在半年后两组趋于一致。术后患者对于切口的满意程度，机器人组明显优于开胸组（P<0.001）。术后半年随访患者工作生活恢复情况，机器人组明显快于开胸组。结论 机器人二尖瓣置换手术效果可靠，机器人组对比开胸组手术创伤更小，术后恢复更快，对于生活质量及伤口恢复更满意，是可供选择的良好微创手术方式。

• 垂体肿瘤转化基因1在系统性硬化症中的表达及作用

  杨安桥, 黄 炎, 张玉婷, 杨 凯, 王久存, 刘庆梅

  目的 研究垂体肿瘤转化基因（PTTG1）在系统性硬化症（SSc）中的表达及其对成纤维细胞的作用。方法 收集皮肤活检组织，其中SSc患者组21例，正常组22例。分别应用实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-time PCR）检测皮肤组织中PTTG1基因表达水平；应用免疫组化方法检测皮肤组织中PTTG1蛋白表达水平；应用小干扰RNA（siRNA）降低成纤维细胞中PTTG1基因表达，通过 Real-time PCR 方法检测细胞中 PTTG1 及与细胞纤维化密切相关的几个基因α-SMA、COL1A1、COL1A2、COL3A1的表达变化；通过细胞实时增殖检测系统检测细胞增殖。结果 与正常对照相比，SSc患者皮肤组织中PTTG1的表达水平明显升高，差异具有统计学意义（P<0.05）；与正常对照相比，SSc患者皮肤组织中阳性细胞增多，PTTG1蛋白表达明显升高；原代皮肤成纤维细胞中PTTG1表达水平和α-SMA、COL1A1、COL1A2、COL3A1均存在正相关，差异具有统计学意义（R2=0.8192，P<0.05；R2=0.6398，P<0.05；R2=0.316，P<0.05；R2=0.3723，P<0.05）；同时，原代皮肤成纤维细胞中PTTG1干扰后，细胞增殖被显著抑制，纤维化相关基因（COL1A1、COL1A2、PAI-1）表达下降，胶原蛋白的基因表达降低。结论 SSc患者中存在PTTG1过度表达，干扰PTTG1可降低成纤维细胞活性，提示PTTG1与SSc纤维化程度密切相关。

• miR-324-5p通过抑制Syk/Ras/c-fos通路降低脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖

  王 晶, 祝晓丽, 秦秀娟, 姜 辉, 高雅晨, 高家荣

  目的 探讨miR-324-5p调控Syk/Ras/c-fos信号通路对大鼠肾小球系膜（HBZY-1）细胞增殖能力的影响。方法 体外培养HBZY-1 细胞；设计并合成 miR-324-5p mimics，miR-324-5p mimics-NC 片段；采用 Lipo3000 试剂盒瞬时转染 miR-324-5pmimics，miR-324-5p mimics-NC片段至脂多糖（LPS）诱导的HBZY-1细胞内，RT-qPCR验证转染效率；将HBZY-1细胞分为对照组（生理盐水），LPS 组（LPS 0.5 μg/mL），LPS+mimics 组（LPS 0.5 μg/mL+miR-324-mimics），LPS+mimics-NC 组（LPS 0.5 μg/mL+miR-324-mimics-NC）；MTT法检测各组HBZY-1细胞增殖活性；RT-qPCR法检测各组细胞miR-324-5p及Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-fos mRNA的表达；Western blot和免疫荧光法检测各组细胞p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白的表达。结果 MTT结果显示，LPS组细胞增殖水平较正常组显著升高，与LPS组及LPS+mimics-NC组相比，LPS+mimics组细胞增殖能力降低；RT-qPCR结果显示，LPS+mimics组中miR-324-5p表达明显高于LPS组及LPS+mimics-NC组，且LPS+mimics组中Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-fos mRNA的表达显著低于LPS组及LPS+mimics-NC组,差异具有统计学意义（P<0.05）；Western Blot结果显示，与LPS组及LPS+mimics-NC组相比LPS+mimics组中p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白表达显著降低，差异具有统计学意义（P<0.05）；免疫荧光结果显示，与LPS组及LPS+mimics-NC组相比，LPS+mimics组p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白标记细胞数目明显减少。结论 miR-324-5p可通过抑制Syk/Ras/c-fos信号通路降低LPS诱导的慢性肾小球肾炎细胞的增殖活性，miR-324-5p有望成为慢性肾小球肾炎诊断和治疗的潜在靶标。

• 基于自适应Unet网络的鼻咽癌放疗危及器官自动分割方法

  杨 鑫, 李学妍, 张晓婷, 宋 凡, 黄思娟, 夏云飞

  目的 探讨鼻咽癌放射治疗中的危及器官（OARs）的自动分割的准确性。方法 在自动分割模型研究中，经CT扫描和医生手动分割后，选取147例鼻咽癌患者的CT图像及其对应勾画的OARs结构，并对其进行完全随机化分组，分成训练集（115例）、验证集（12例）、测试集（20例）。采用自适应直方图均衡化对CT图像进行预处理。利用端到端训练提高建模效率，实现一种基于三维Unet的改进网络（AUnet），将器官大小作为先验知识引入卷积核大小设计中，使网络能自适应地提取不同大小器官的特征，从而提高模型的性能。比较自动与手动分割的DSC（Dice Similarity Coefficient）系数和豪斯多夫（HD）距离以验证AUnet网络的有效性。结果 测试集的平均DSC和HD分别为0.86±0.02和4.0±2.0 mm。除视神经、视交叉外，AUnet与手动分割结果无统计学差异（P>0.05）。结论 引入自适应机制后，AUnet能较为准确地实现基于CT图像对鼻咽癌的危及器官的自动分割，临床应用中可大幅度提高医生的工作效率及分割的一致性。

• 无心血管合并症的老年阻塞性睡眠呼吸暂停综合征患者心功能变化及其影响因素分析

  高莹卉, 温永飞, 钱小顺, 赵力博, 徐 虎, 徐伟豪, 孔晓萱, 车贺宾, 王亚斌, 刘 霖

  目的 评估心血管并发症出现前老年阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（OSA）患者的心脏结构和功能改变及其影响因素。方法 入选82名无心血管疾病的老年OSA患者，根据睡眠呼吸暂停低通气指数（AHI）分为轻度组（AHI<15次/h）和中/重度组（AHI≥15次/h）。记录患者人口统计学资料及一般基础资料，PSG监测结束的当天早上空腹状态下抽取静脉血，检测血常规与生化指标。在整夜多导睡眠监测完成1周内完成超声心动图检查，分析两组间心脏结构、功能及血生化指标等的差异。结果中重度OSA组患者血小板比积（0.22±0.08 vs 0.17±0.04，P=0.032）、血肌酐水平（70.94±27.88 vs 54.49±34.22，P=0.022）高于轻度OSA组。两组患者的左室射血分数、室间隔厚度、左室后壁厚度、左房内径、左室舒张末内径均无显著差别。两组二尖瓣舒张早期血流速度峰值（E）相似，但中重度OSA组的舒张晚期二尖瓣血流速度峰值（A）高于轻度OSA组（70.35±6.87 vs 64.09±8.31，P=0.0001)，其E/A比值显著低于轻度OSA组（0.98±0.06 vs 1.08±0.05，P=0.0001）。多元线性回归显示，E/A比值与AHI呈负相关（β=-0.645，P=0.0001）。结论 在没有高血压和任何其他心血管疾病的情况下，老年中重度OSA患者可出现心脏舒张功能受损，其程度与AHI正相关。

• 乳腺浸润性导管癌中JMJD3、 MMP-2和VEGF的表达及其与临床病理特征的关系

  徐小艳, 王建君, 闫 琛, 门颖丽, 姜 黄, 方会娟, 徐宪伟, 杨金花

  目的 观察乳腺浸润性导管癌中JMJD3、MMP-2和VEGF蛋白水平的表达，研究过表达JMJD3对乳腺癌细胞增殖以及MMP-2 和 VEGF 表达的影响。方法 用免疫组织化法和 RT-PCR 检测乳腺浸润性导管癌及相对应的癌旁组织中 JMJD3、MMP-2和VEGF蛋白和mRNA的表达情况，分析蛋白表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系及上述蛋白的相关性，采用Kaplan-Meier法来评估JMJD3、MMP-2和VEGF蛋白的异常表达与乳腺癌患者生存期之间的关系。通过重组质粒在乳腺癌MDA-MB-231细胞中过表达JMJD3，用CCK-8和免疫组化检测Ki67表达分析其对增殖的影响，用RT-PCR方法检测MMP-2和VEGFmRNA水平表达的变化。结果 免疫组化结果显示，乳腺癌组织中JMJD3阳性强度低于相应癌旁组织（P<0.05），乳腺癌组织中MMP-2和VEGF阳性强度高于相应癌旁组织（P<0.05）；RT-PCR结果显示，乳腺癌JMJD3 mRNA水平低于癌旁组织，MMP-2和VEGF mRNA水平高于癌旁组织（P<0.05）。JMJD3的表达在乳腺癌直径较小、高分化、TNMⅠ+Ⅱ期、淋巴结无转移及分子分型Luminal A型和Luminal B型表达率较高（P<0.05），MMP-2和VEGF的表达在乳腺癌肿瘤直径较大、低分化、TNM Ⅲ+Ⅳ期、淋巴结有转移、Luminal B 型和 Her-2 过表达型表达率较高（P<0.05）。Kaplan-Meier 分析结果显示，JMJD3蛋白表达水平较高者的无病生存期高于低表达者（P<0.05），MMP-2和VEGF蛋白表达水平较高者的无病生存期低于低表达表达者（P<0.05）。Cox 回归模型分析显示，JMJD3、MMP-2 和 VEGF、分化程度是乳腺癌预后的独立危险因素。Spearman 相关分析结果显示，JMJD3与MMP2和VEGF均呈负相关（r=-0.569，-0.533，P<0.05），MMP2和VEGF呈正相关（r=0.923，P<0.05）。过表达JMJD3能够抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、MMP-2和VEGF的表达。结论 JMJD3、MMP-2和VEGF在乳腺浸润性导管癌中的异常表达与肿瘤的增殖、浸润、转移及预后密切相关，三者可作为判断乳腺癌预后不良的重要指标之一。

• RUNX1基因突变对成人急性髓细胞白血病的预后有不良影响

  杨艳丽, 李甜甜, 耿英华, 李 骏

  目的 了解Runt相关的转录因子1（RUNX1）在急性髓系白血病（AML）中的突变率及分布情况；探索RUNX1基因突变与临床特征的相关性及其对患者预后的影响。方法 收集158例初发AML患者的骨髓标本，提取骨髓基因组DNA，采用聚合酶链式反应技术（PCR）扩增目的基因片段，应用基因测序分析RUNX1基因突变情况。同时检测ASXL1、DNMT3A、TET2、FLT3、CEBPA、NPM1、IDH2、NRAS及c-KIT突变情况，分析其突变与RUNX1突变的关系。用Kaplan-Meier方法进行生存分析，并行Log-rank检验比较生存时间差异。结果 158例初发急性髓系白血病患者中，共发现RUNX1突变19例，突变率为12.0%，其中A166G 9例，A142T 6例，A162L 4例。RUNX1基因突变组与野生型组的年龄差异有统计学意义（P<0.01），突变组患者年龄偏大，在M4和M5型中的发生率较高，较野生型组更易表达CD36、CD7。RUNX1突变发生于正常核型或预后中等风险核型的患者中，但差异均无统计学意义（P>0.05）。突变组的完全缓解率和生存率均低于野生型组（P<0.05），而两组在性别、初诊时白细胞计数、血红蛋白、血小板计数、骨髓原始细胞比例以及乳酸脱氢酶水平的差异无统计学意义（P>0.05）。结论 RUNX1基因突变对AML患者的预后具有不良影响。

• 19例喀什地区维吾尔族居民的主动脉疾病基因突变分析

  于长江, 李 莹, 阿地力江·阿布都热苏力, 闫纪忠, 姑丽扎尔努尔·艾尔肯, 阿不都沙拉木·阿不都拉, 艾米 热拉·依马木, 范瑞新

  目的 探讨喀什地区少数民族的主动脉疾病基因突变类型，分析其与临床表型的相关性。方法 利用二代测序技术对包含马凡综合征在内的19例新疆维吾尔族主动脉疾病家系的37个相关致病基因进行基因检测|、分析，并对其近亲家属完成sanger验证。结果 本研究纳入19个主动脉疾病家系，共检测出23个突变位点，有11例先证者（57.89%）存在一个或以上的基因突变。其中有1例（5.26%）为明确的致病性突变；8例（42.11%）检测出意义未明性突变；7例（36.84%）检测出良性/可能良性突变。23个突变位点中包括有1个（5.26%）明确的致病性突变位点，14个（60.87%）意义未明的基因突变，8个（34.78%）良性/可能良性突变。对14个意义未明突变位点采用SIFT及Polyphen2 HDIV软件预测，发现6个（42.86%）为有害性/可能有害性 突变。对8个良性/可能良性突变位点进行上述软件预测，结果均为有害性/可能有害性突变。结论 本研究发现了23个突变位点，其中22个尚待以后更多的患者数据进行验证。基因诊断有助于患者及其近亲属的早期诊断及鉴别诊断。

• 沉默长链非编码RNA HIF1A-AS2可抑制宫颈癌细胞的增殖、侵袭及迁移

  邓 蓉, 张福云, 雷福珍, 刘文涓, 刘丝荪, 王文华

  目的 探究长链非编码RNA HIF1A-AS2诱导宫颈癌细胞的上皮间质转换和肿瘤干细胞样特性的机制。方法 设计3种可以沉默HIF1A-AS2的shRNA转染caski细胞株，选出干扰效果最好的shRNA进行后续研究；将caski细胞分为：Control组、shRNA-NC组和Sh-HIF1A-AS2组；检测各组细胞活力、侵袭能力、上皮间质转换及相关蛋白表达情况、肿瘤细胞成球情况和干细胞标记物情况；结果 各组细胞活性差异无统计学意义（P>0.05）；干扰结果确认使用HIF1A-AS2-shRNA1为shRNA；相比Control组，shRNA-NC组所有指标均无显著改变（P>0.05）；相比shRNA-NC组，Sh-HIF1A-AS2组单位面积侵袭细胞数目、Vimrntin和N-cadherin、细胞成球数目、成球细胞直径、ABCG2阳性细胞率、Nanog、OCT4、SOX2蛋白和mRNA相对表达均显著降低，E-cadherin相对表达显著升高（P<0.05）。结论 沉默长链非编码RNA HIF1A-AS2可以抑制宫颈癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力。

• 细胞周期蛋白25A在非小细胞肺癌中的表达及与Let-7关系

  李殿明, 柳兆飞, 宁国兰

  目的 明确细胞周期蛋白25A（CDC25A）在NSCLC组织中的表达及与临床病理特征的关系，并探讨其与miRNA let-7a1、let-7c表达的相关性。方法 收集53例肺组织手术标本，其中包括NSCLC组织44例，收集其癌组织和癌旁正常组织（病理证实），和良性肺疾病组织9例。免疫组化Elivision法检测CDC25A蛋白的表达；用Trizol法提取总RNA，采用荧光定量RT-PCR检测CDC25A mRNA的表达，加尾法荧光定量RT-PCR检测let-7a1和let-7c mRNA的表达。结果 CDC25A蛋白表达的阳性率在NSCLC组织明显高于癌旁正常组织和良性肺疾病组织（P<0.05）。NSCLC组织中CDC25A蛋白的表达与年龄、性别、病理类型、肿瘤分化程度、临床分期无关（P>0.05），与吸烟、淋巴结转移相关（P<0.05）。CDC25A mRNA在NSCLC组织中的表达量明显高于癌旁正常组织和良性肺疾病组织（F=6.33，P<0.05），在癌旁正常组织和良性肺疾病组织中表达无明显差异（P>0.05）。Pearson 相关分析显示CDC25A与let-7c在NSCLC组织和癌旁正常组织中表达均呈明显负相关（r 癌组织=-0.42，r 癌旁正常组织=-0.40），与let-7a1之间无明显相关。结论 CDC25A在NSCLC组织表达水平明显增高，且与let-7c表达呈明显负相关，推测CDC25A可能是let-7c的下游靶基因。

• 迷迭香酸激活Parkin介导的线粒体自噬并抑制高糖诱导的心肌细胞肥大

  刁佳宇, 赵宏谋, 宁玉洁, 韩稳琦, 王 毅, 程 功, 寿锡凌, 尤红俊

  目的 评估迷迭香酸对高糖培养下心肌细胞线粒体自噬水平以及细胞肥大的影响。方法 体外培养H9c2大鼠心肌母细胞，分为对照组（葡萄糖5.5 mmol/L）、高糖组（葡萄糖25 mmol/L）、高糖+迷迭香酸组（葡萄糖25 mmol/L+迷迭香酸50 μmol/L）、高糖+迷迭香酸+Parkin-siRNA组（葡萄糖25 mmol/L+迷迭香酸50 μmol/L+Parkin-siRNA转染）；Western blot法测定PINK1、Parkin、LC3II/LC3I蛋白表达水平，透射电子显微镜下观察线粒体自噬体形成情况，流式细胞术检测活性氧物质（ROS）与凋亡水平，分光光度法检测细胞线粒体呼吸链复合酶活性，荧光酶标法检测线粒体膜电位水平，3H-亮氨酸标记法检测细胞蛋白质合成速率，光学显微镜下检测心肌细胞表面积。结果 迷迭香酸可提高高糖培养下心肌细胞内PINK1、Parkin、LC3-II/LC3-I蛋白表达水平（P<0.05），增多线粒体自噬体数量，并抑制高糖诱导的ROS生成、恢复线粒体呼吸链复合酶活性与线粒体膜电位水平（P<0.05），抑制高糖诱导的细胞凋亡（P<0.05），并降低心肌细胞表面积与蛋白质合成速率（P<0.05）。利用Parkin-siRNA抑制心肌细胞线粒体自噬，则阻断了迷迭香酸对高糖培养下心肌细胞氧化应激与心肌细胞肥大的保护作用（P<0.05）。结论 迷迭香酸可通过激活Parkin介导的线粒体自噬，对高糖诱导心肌细胞的氧化应激损伤有保护作用，并改善心肌细胞肥大。

• 七叶皂苷通过诱导自噬缓解化疗引起的外周神经病理性疼痛

  闫 芳, 陈东泰, 谢敬敦, 曾维安, 李 强

  目的 探讨七叶皂苷对大鼠化疗所致外周神经病理性疼痛的作用及可能作用机制。方法 将18只实验SD大鼠分为3组：七叶皂苷预处理组、七叶皂苷后处理组和对照组，6只/组。七叶皂苷预处理组的SD大鼠在CIPN造模前按照4 mg/kg予腹腔内注射七叶皂苷，注射7 d，注射1次/d；第8、10、12、14天腹腔内注射紫杉醇（2 mg/kg）。七叶皂苷后处理组的SD大鼠则先按照2 mg/kg腹腔内注射紫杉醇进行CIPN造模，于第1、3、5、7天注射；第8~14天按4 mg/kg予腹腔内注射七叶皂苷，注射1次/d。对照组的SD大鼠于第1、3、5、7天予紫杉醇腹腔内注射2 mg/kg，从第8天开始注射等体积的生理盐水，注射1次/d，连续注射至第14天。分别于第4、7、10、14天检测大鼠机械痛撤足阈值和热痛撤足潜伏期；采用Western blot检测大鼠脊髓组织中自噬相关蛋白LC3Ⅱ和p62的表达量。结果 与对照组相比，预处理组大鼠机械痛和热痛阈值均升高（P<0.01）；后处理组大鼠机械痛和热痛阈值较对照组升高（P<0.05）。Western blot结果显示，预处理组大鼠脊髓LC3Ⅱ的表达量较对照组升高，p62与对照组相比降低（P<0.05）；后处理组大鼠脊髓LC3Ⅱ的表达量高于对照组，p62的表达量低于对照组（P<0.05）。结论 七叶皂苷可能通过调节自噬相关蛋白的表达进而缓解化疗外周神经病理性疼痛。

• 免疫表型及非髓系分化抗原表达分析： 对急性髓细胞白血病的诊断和预后判定有应用价值

  王伟伟, 徐元宏

  目的 探讨急性髓细胞白血病（AML）免疫表型和非髓系分化抗原表达特征及其临床应用价值。方法 采用 BDFACSCalibur流式细胞仪对109例AML患者进行免疫表型检测，分析AML免疫表型、非髓系分化抗原表达的特点及与预后疗效完全缓解（CR）率的关系。结果 免疫表型显示AML细胞髓系分化抗原阳性率由高到低依次为CD13、CD117、CD33、MPO、CD15，其中CD117、CD13、CD33、MPO阳性率差异无统计学意义（P>0.05），并且均高于CD15阳性率（P<0.05）；AML细胞非髓系分化抗原CD9、CD200、CD56、CD7阳性率依次降低，均高于CD25、CD19、CD2、CD10、CD4、CyCD79a、CyCD3阳性率（P<0.05）；109例AML中CD7、CD34、CD56、CD25呈阳性的患者CR率均低于阴性患者（P<0.05）；MPO、CD19呈阳性的患者CR率均高于阴性患者（P<0.05）；伴AML1-ETO阳性表达的15例AML-M2b患者中CD56阳性组1疗程CR率低于CD56阴性组，CD56阳性组1年内复发率高于CD56阴性组（P<0.05）。结论 免疫表型和非髓系分化抗原表达分析对AML的诊断及预后判定有重要临床意义，是AML诊疗的主要依据之一。

• 微卫星不稳定性类型及临床病理特征： 基于1394例结直肠癌患者的标本检测

  黎相照, 刘焕娇, 梁敏仪, 陈慧慧, 梁 莉

  目的 研究微卫星不稳定性（MSI）结直肠癌病人错配修复（MMR）基因突变的类型和临床病理特征。方法 收集南方医科大学南方医院2016~2018年1394例结直肠癌病人石蜡标本，采用免疫组化染色技术检测MMR蛋白；MSI基因检测106例dMMR病例，46例肿瘤细胞呈异质性表达的pMMR病例和147例随机选择的pMMR病例；分析错配修复蛋白缺失与结直肠癌临床病理特征参数的关系；比较两种方法检测结果的一致性。结果 MMR蛋白缺失发生率占总结直肠癌病人的7.6%，缺失类型主要为MLH1、PMS2双缺失，占总缺失的55.7%；MMR蛋白缺失与结直肠癌患者的年龄、发生部位、大体分型、肿瘤大小、组织学分型、分化程度和临床TNM分期均有关（P<0.05），而与患者的性别无关（P=0.47）；dMMR结直肠癌病人具有典型的临床病理特征：MMR蛋白缺失在年龄<50岁、右半结肠、肿瘤直径>6 cm、腺癌伴粘液腺癌或粘液分泌的混合型癌、低分化腺癌和TNM分期Ⅰ/Ⅱ期组的发生率高；免疫组化和PCR-毛细管电泳法在结直肠癌微卫星不稳定性检测结果一致性为98.7%。结论 微卫星不稳定性错配修复蛋白表达缺失（dMMR）在结直肠癌的主要类型为MLH1、PMS2双缺失，具有典型的临床病理特征，其发生率低于西方报道；免疫组化和PCR毛细管电泳法的检测结果显示高度的一致性。

• siRNA干扰BIRC6对肾癌786-O细胞凋亡和自噬的影响

  钟凯华, 陈 东, 吴志明, 王晓红, 潘 斌, 陈南辉, 钟伟枫

  目的 研究杆状病毒IAP重复序列蛋白6（BIRC6）在肾癌组织中的表达，并探讨BIRC6沉默对786-O细胞凋亡和自噬的影响。方法 收集2016年2月~2018年12月梅州市人民医院肾癌手术切除标本20例，通过免疫组化检测BIRC6蛋白在肾癌组织中的表达水平。将肾癌786-O细胞分为两组，对照siRNA组和BIRC6 siRNA组；通过lipofectamine 2000将BIRC6小干扰RNA（BIRC6-siRNA）及其对照siRNA（con-siRNA）转染到肾癌786-O细胞，Western blot检测转染后BIRC6蛋白表达水平，CCK8和流式细胞术分别检测BIRC6-siRNA和5-FU人肾癌786-O细胞活力和凋亡的影响，Western blot检测细胞自噬相关蛋白Beclin和LC3A/B的表达水平。结果 免疫组化结果显示BIRC6蛋白在肾癌组织中的表达显着高于正常肾组织，转染BIRC6-siRNA后786-O细胞的BIRC6蛋白表达水平显著降低。12.5、25、50、100和200 μg/mL的5-FU诱导786-O细胞后，BIRC6-siRNA组细胞增殖抑制率显著高于con-siRNA组，差异具有统计学意义（P<0.01）；流式检测结果显示，BIRC6-siRNA组肾癌786-O细胞凋亡率显著高于con-siRNA组，差异具有统计学意义（P<0.01）；BIRC6-siRNA组肾癌786-O细胞Beclin和LC3A/B蛋白表达显著低于con-siRNA组。结论 siRNA干扰BIRC6能够抑制肾癌786-O细胞自噬，促进5-FU诱导的细胞凋亡，促进肾癌786-O细胞对5-FU的敏感性。

• 银染法和鬼笔环肽染色观察不同发育阶段小鼠骨细胞突触

  冯舒皓, 包良笑, 邱耿涛, 廖哲霆, 邓仲豪, 陈纳淳, 楚玉豪, 骆梓恒, 金 昱, 李啸宇, 杨英姿, 赵 亮

  目的 采用银染法和鬼笔环肽染色方法探究骨细胞突触在不同发育阶段的组织形态并探讨两种染色方法在观察小鼠骨细胞不同发育阶段形态中应用价值。方法 取出生后0 d（P0）、5 d（P5）、15 d（P15）、21 d（P21）、28 d（P28）、35 d（P35）野生型小鼠的肱骨、股骨，制备冰冻切片及石蜡切片。对P35小鼠的股骨切片进行H&E染色，作为观察骨小梁和皮质骨中骨细胞的参照。对其他时期的肱骨组织切片采用银染法染色观察骨细胞和骨小管的形态，并记录各时期小鼠肱骨骨皮质和骨小梁中骨小管的长度。选取P10、P15两个时期小鼠肱骨的冰冻切片进行鬼笔环肽 iFlour-488染色，观察骨细胞的形态，并记录骨皮质中骨细胞突触的长度。结果 通过银染法染色，在P0~P15时期的小鼠肱骨骨小梁中，我们仅能观察到骨细胞轮廓，无法观察到骨小管的形态。在P21后，通过银染法可以观察到骨小梁骨细胞及骨小管的形态，且骨细胞周围骨小管的长度随年龄逐渐变长，P21 vs P28（P<0.05），P21 vs P35（P<0.05），排列整齐。在P15时期的小鼠肱骨骨皮质中，通过银染法即可以观察到骨细胞及骨小管的形态，且骨细胞周围骨小管的长度随年龄逐渐变长，P15 vs P21（P<0.005），P15 vs P28（P<0.0001），P15 vs P35（P<0.0001），排列整齐。采用鬼笔环肽iFlour-488染色，可以观察到P10和P15时期骨细胞的完整形态，骨细胞突触随着年龄增加逐渐变长，P10 vs P15（P<0.01），与周围骨细胞连接。结论 小鼠骨细胞突触随骨骼发育长度逐渐加长、排列逐渐整齐。银染法可以观察成年后骨细胞及骨小管的形态，对生长发育早期的骨小管形态显像不足。鬼笔环肽染色标记细胞骨架的方法适用于生长发育各时期的骨细胞染色，可以实现在发育早期对骨细胞的形态的检测。

• 电针刺激通过JAK1/STAT3通路减轻脓毒症大鼠的急性肺损伤

  谢璨灿, 吴双华, 李峥嵘, 黄 冰, 曾维忠

  目的 探讨电针对脓毒症大鼠急性肺损伤的影响及作用机制。方法 采用SPF级SD大鼠60 只，用随机数字表法分组。假手术组（SHAM）15 只：只开腹而不结扎盲肠；脓毒组共45 只，采用盲肠结扎穿孔制术（CLP）脓毒症肺损伤模型制备，制备成功后随机分为脓毒症急性肺损伤组（ALI）15 只：不做进一步处理；脓毒症急性肺损伤+电针非穴位组（ALI+SEA）15 只、脓毒症急性肺损伤+电针穴位组（ALI+EA）15 只：针刺双侧内关穴及足三里，电刺激的频率、强度与时间与ALI+SEA组保持一致。于CLP后12 h后处死大鼠，称量大鼠肺组织，测定大鼠肺组织湿/干重比值（W/D），HE 染色检测肺组织病理变化，Tunel染色计算肺组织凋亡细胞比例，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测大鼠肺组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的浓度，蛋白质免疫印迹试验（Western blot）检测凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3表达以及核转录因子JAK1/STAT3信号通路中重要蛋白JAK1、STAT3的表达。结果 ALI与SHAM相比呈现出明显的肺损伤病理表型，表现为肺湿/干重比值增加（P<0.01），血清中TNF-α和IL-6水平显著上升（P<0.01），组织内JAK1、STAT3、Caspase-3、Bax表达水平显著上调（P<0.01）；ALI+SEA与ALI相比以上指标无显著性变化（P>0.05）；ALI+EA与ALI+SEA组比，能显著的减轻脓毒症诱发的肺部病理变化，表现为肺湿/干重比值升高受到抑制（P<0.01），血清中TNF-α和IL-6上升得到缓解（P<0.01），组织中JAK1、STAT3、Caspase-3、Bax的表达升高显著下调（P<0.01）。结论 电针可关联JAK1/STAT3通路的机制，抑制脓毒症大鼠炎性介质的释放及细胞凋亡，减轻脓毒症大鼠的肺损伤。

• 体质量管理联合腭咽成形术治疗肥胖相关性阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征的疗效观察

  谭 健, 崔前波, 顾 翔, 许淑芳, 薛 莎, 袁 琨, 陈 伟

  目的 探讨体质量管理联合腭咽成形术治疗肥胖相关性阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）的策略及其临床效果。方法 将60例OSAHS伴肥胖患者随机分入联合治疗组和对照组，每组30例；联合治疗组予以悬雍垂腭咽成形术（UPPP）治疗联合认知-行为-心理干预模式的家庭延续体质量管理，主要包含：术前健康知识宣教、心理辅导、术后延续家庭的运动与饮食调整相结合的体质量管理等措施；对照组予以悬雍垂腭咽成形术及传统管理模式治疗。于治疗3月、6月后观察比较2组患者治疗前后体质量指数（BMI）、颈围、腰围、日间 Epworth 嗜睡量表（ESS）评分，呼吸暂停低通气指数（AHI）、最低血氧饱和度（LSaO2）、血氧饱和度低于90%的累积时间占总监测时间的百分比（CT90）的变化情况；分析两组患者治疗后显效率、有效率及治愈率，判断两种方案的临床疗效。结果 随访治疗6月后，联合治疗组 BMI、颈围、腰围与对照组比较，差异均有统计学意义（P<0.01），联合治疗组体质量变化显著；对照组在治疗3月时与治疗前有统计学差异（P<0.05），而在治疗后6月与治疗前比较差异无统计学意义（P>0.05）；联合治疗组中，患者BMI、颈围、腰围在治疗6月后与治疗前比较均差异有统计学意义（P<0.01）。睡眠相关指标ESS，CT90，AHI，LSaO2在治疗后6月后，联合治疗组患者优于对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。联合治疗组中，患者ESS，CT90，AHI，LSaO2在不同时间比较差异均有统计学意义（P<0.01），治疗6月后效果更显著；对照组中AHI、ESS评分在治疗3、6月后与治疗前比较差异有统计学意义（P<0.01），CT90，LSaO2治疗3、6月后与治疗前比较有统计学差异（P<0.05），治疗后3月与6月比较差异无统计学意义（P>0.05）。6月后联合治疗组与对照组中治愈率分别为6.6%、7.1%（χ2=1.66，P>0.05），显效率分别为：60%、35.7%（χ2=8.71，P<0.01），有效率分别为：83.3%、53.6%（χ2=10.62，P<0.01），显效率、有效率组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论 体质量管理联合腭咽成形术治疗能有效改善肥胖相关性阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者临床治疗效果，患者在接受手术治疗的同时应该强化家庭延续的体质量管理。

• 五线分区法在鞍区及其毗邻区域占位病变的手术入路选择过程中的应用

  余成伟, 宋振华, 刘承勇, 魏大年

  目的 探讨“五线分区法”在鞍区及其毗邻区域占位病变的手术入路选择过程中的应用。方法 利用天然解剖结构，在经过鞍区正中的颅脑轴面和正中矢状面的影像学图像上分别标出α、β、θ线和λ、ε线（即“五线”），从而在轴面和矢状面上将鞍区及其毗邻范围分别分为6个区域（1、2、3、1'、2'、3'区）和4个区域（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ区），综合考虑后对鞍区及毗邻区域的巨大占位进行分类，并结合各类常用的鞍区手术入路特点及临床经验，对应出各占位相应的手术入路；随机收集2014年9月~2017年8月期间南方医科大学第三附属医院116例典型的鞍区及其毗邻区域占位病变的患者，用上述方法分析各占位情况在“五线分区法”中所对应的手术入路，并分析比较对应的手术入路与各病例在临床实际中选取的手术入路的一致性。结果 以上116例病例的实际手术入路均在我院专家指导下选取，入路选择具有一定的权威性。利用“五线分析法”对应出的手术入路与临床上实际选取的手术入路具有较高的一致性、良好的客观性。结论“五线分区法”可对常见的鞍区及其毗邻区域占位病变的空间位置进行分类并能在其手术入路选取过程中提供较客观的参考价值。

• 小乌桂汤治疗小鼠胶原诱导性关节炎的作用机制

  单文君, 朱晓煜, 齐杰莹, 胡 芳, 李长征, 聂晓莉

  目的 以胶原诱导性关节炎（CIA）小鼠为模型，探讨小乌桂汤治疗类风湿关节炎的免疫学机制。方法 构建DBA/1小鼠CIA模型，将关节炎指数（AI）评分相近的30只CIA小鼠随机分为正常对照组、模型组（CIA）、甲氨蝶呤组、小乌桂汤低剂量组（0.975 g/mL）、小乌桂汤中剂量组（1.95 g/mL）、小乌桂汤高剂量组（3.9 g/mL），5只/组。其中，正常对照组和CIA组给予生理盐水，甲氨蝶呤组给予0.1 mg/mL甲氨蝶呤溶液，3个小乌桂汤处理组按照规定剂量分别给予小乌桂汤药液（0.2 mL/10 g体质量）连续灌胃28 d处理。使用AI评分和HE染色评价小乌桂汤对CIA模型小鼠关节的影响。利用流式细胞术观察小乌桂汤对CIA小鼠脾脏Th1、Th17、MDSC、G-MDSC、M-MDSC细胞亚群的影响。结果 甲氨蝶呤和不同剂量组小乌桂汤治疗后小鼠AI评分降低，炎症程度比其他组明显缓解，踝关节损伤得到有效修复，且随着小乌桂汤剂量增高，其治疗效果呈现出逐渐增强的趋势（P<0.05）。与模型组相比，甲氨蝶呤组和不同剂量组小乌桂汤组脾脏中Th1、Th17和M-MDSC细胞比例降低（P<0.05），GMDSC细胞比例显著增加，且随着小乌桂汤剂量增高，细胞比例变化呈现逐渐明显的趋势（P<0.01）。相关分析结果显示，Th1、Th17细胞比例与M-MDSC细胞比例呈正相关，而与G-MDSC细胞比例呈负相关（P<0.01）。结论 小乌桂汤可通过调节MDSC细胞亚群水平，升高G-MDSC细胞比例和降低M-MDSC、Th1、Th17细胞比例改善CIA小鼠关节损伤，高剂量小乌桂汤其作用与甲氨蝶呤等效，且安全性更高。

• 心理健康与自杀行为的影响因素： 基于对三所高校10 340名医学生的调查

  陈 君, 耿仁文

  目的 了解并探讨医学生的心理健康及自杀行为的影响因素，为提高医学生的心理健康水平、降低自杀行为提供科学依据。方法 以某省南部、北部和中部三个地区的省属医学院校的一、二年级11270名在校大学生为调查对象，经过对回收的问卷进行核查并摒弃填写质量较差的问卷后保留10 340份有效问卷，并采用多因素Logistic回归分析焦虑、抑郁和自杀行为的影响因素，尤其是家庭环境因素对医学生心理健康状况的影响。结果 女生、二年级医学生、对所学专业不满意、家庭经济状况差、父母间有暴力打斗行为、家庭功能存在障碍的医学生更容易发展出抑郁和焦虑情绪；被父母/监护人殴打、儿童时期有留守经历的医学生也更易出现焦虑情绪（P<0.05）。同时，女性、被父母/监护人殴打、存在焦虑情绪、存在抑郁情绪、家庭功能存在障碍的医学生更容易出现自杀未遂和自杀意念；对所学专业不满意、父母间有暴力打斗行为、儿童时期有留守经历者也更易出现自杀意念（P<0.05）。结论 医学生的心理健康与自杀行为受家庭关系、成长经历等多方面的影响，因此应加强父母和相关部门对医学生心理健康与自杀行为的重视。