南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2020年第12期

• SBi4211通过抑制S100B/RAGE表达减轻gp120诱导的中枢神经损伤

  杨少杰, 邓小燕, 张铁松, 肖 仪, 彭 亮, 李 莉, 何肖龙, 魏 轶, 刘利群, 曹 虹, 龙北国, 黄胜和

  目的 研究S100B 抑制剂SBi4211（heptamidine）在人类免疫缺陷病毒-1（HIV-1）包膜蛋白gp120损伤中枢神经系统的作用。方法 通过U251细胞和SH-SY5Y细胞建立非接触式星形胶质细胞-神经元共培养体系，由gp120蛋白处理U251细胞激活神经炎症反应造成神经元损伤，体外水平探讨SBi4211在gp120诱导的中枢神经毒性中的作用；体内实验中，以8月龄gp120转基因小鼠模拟HIV相关神经认知障碍（HAND）模型，实验分为对照组、gp120组以及gp120+SBi4211组（SBi4211处理组）。采用CCK-8、流式细胞术检测神经元活性及凋亡情况，ELISA检测S100B及炎症因子IL-6、TNF-α表达水平，Western blot和免疫组织化学染色分析RAGE、GFAP、NeuN、Syn、MAP-2蛋白表达情况。结果 体外实验结果显示SBi4211可以显著抑制gp120刺激后U251细胞S100B、RAGE的表达（P<0.001），降低炎症因子iNOS、IL-6和TNF-α的表达水平（P<0.001），维持神经元相关标记蛋白NeuN、Syn的表达（P<0.001）。体内实验结果显示SBi4211显著降低gp120转基因小鼠S100B、RAGE表达及炎症水平（P<0.05），并且抑制脑内星形胶质细胞活化，保护神经元的完整性（P<0.05）。结论 SBi4211可能通过下调S100B/RAGE表达，抑制gp120引发的神经炎症反应，继而阻断gp120的中枢神经毒性作用。

• 阳和平喘颗粒通过上调miR-139-5p和下调Notch1/Hes1通路促进哮喘大鼠BMSCs归巢

  朱慧志, 王 坤, 杨 磊, 徐晴雯, 任冯春, 刘向国

  目的 观察阳和平喘颗粒对哮喘miR-139-5p、Notch1/Hes1信号通路及骨髓源性间充质干细胞（BMSCs）归巢的影响。方法 50 只 SD 大鼠随机均分为 5 组：正常对照（NC）组、模型对照（MC）组、BMSCs 移植（BMSCs）组、BMSCs+地塞米松（BMSCs+DXM）组[地塞米松 0.0625 mg/ （kg·d）]、BMSCs+阳和平喘组[阳和平喘颗粒3.5 g/ （kg·d）]。采用卵清蛋白致敏激发建立大鼠哮喘模型，BMSCs组、BMSCs+DXM组、BMSCs+阳和平喘组大鼠在激发最后1 d经尾静脉移植入1×106/mL BMSCs悬液。NC组、MC组以生理盐水灌胃，药物干预组分别予相应药物灌胃，灌胃量为1 mL/100 g，均持续1周。HE染色观察肺组织病理形态学，流式细胞术检测肺组织中CXCR4蛋白表达，酶联免疫吸附法检测肺组织γ干扰素（IFN-γ）、白介素-4（IL-4）表达。免疫荧光观察支气管上皮细胞CXCR4、Notch1、Hes1表达。RT-PCR法检测肺组织miR-139-5p、Notch1、Jagged1、RBP-J、Hes1基因表达，免疫印迹法检测肺组织 Notch1、Jagged1、Hes1 蛋白表达。结果 （1）与 NC 组比较，MC 组肺组织 CXCR4、IL-4、Notch1mRNA、Jagged1mRNA、RBP-JmRNA、Hes1mRNA及Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达升高，INF-γ、miR-139-5p mRNA表达降低（P<0.05）；（2）与MC组比较，BMSCs组、BMSCs+DXM组、BMSCs+阳和平喘组CXCR4、IFN-γ、miR-139-5pmRNA升高，IL-4、Notch1mRNA、Jagged1mRNA、RBP-JmRNA、Hes1mRNA及Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达降低（P<0.05）；（3）与BMSCs组比较，BMSCs+阳和平喘组CXCR4、IFN-γ、miR-139-5pmRNA表达升高，IL-4、Notch1mRNA表达量降低（P<0.05）。结论 阳和平喘颗粒通过上调miR-139-5p，下调Notch1/Hes1通路，强化BMSCs归巢对Th2炎症反应的抑制作用。

• MiR-4443通过抑制PEBP1的表达促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭

  王金焱, 王晋秋, 顾 诠, 杨 艳, 马亚军, 朱 静, 张全安

  目的 探讨miR-4443对乳腺癌转移的影响。方法 使用高通量测序技术测定检测3例乳腺癌患者原位癌组织及其配对的癌旁组织中miR-4443的表达。使用TCGA数据库验证miR-4443在乳腺癌组织以及正常乳腺组织中的表达水平。以MCF-7细胞（低侵袭性乳腺癌细胞）和MDA-MB-231细胞（高侵袭性乳腺癌细胞）为研究对象，采用RT-qPCR验证miR-4443在这两种细胞株中的表达水平。通过电转染法将miR-4443 mimics（miR-4443模拟物）、mimics-NC（miR-4443模拟物的对照物）或miR-4443inhibitors（miR-4443抑制物）、inhibitors-NC（miR-4443 抑制物的对照物）转染至不同的细胞株，利用RT-qPCR检测miR-4443在转染前后的表达水平，使用流式细胞分析仪分析 miR-4443 表达水平的变化对乳腺癌细胞凋亡的影响，使用划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-4443表达水平的变化对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。使用生物信息学软件预测miR-4443潜在的靶基因，并进一步使用双荧光素酶报告基因系统验证。采用RT-qPCR和Western blot分别检测不同细胞株中PEBP1（重组人磷脂酰乙醇胺结合蛋白1）在mRNA和蛋白水平的表达。结果 高通量测序技术检测发现在乳腺癌组织中miR-4443的表达远高于癌旁组织（P<0.01）。TCGA数据分析显示，与正常乳腺组织想比，miR-4443在乳腺癌组织中的表达升高（P<0.01）。RT-qPCR显示，与MCF-7细胞相比，MDA-MB-231细胞中miR-4443的表达升高（P<0.01）。与转染mimics-NC相比，MCF-7细胞转染miR-4443 mimics后，miR-4443的表达上调（P<0.01）；而转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞，其表达下调（P<0.01）。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照差异无统计学意义（P>0.05），并且转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照亦差异无统计学意义（P>0.05）。划痕实验及Transwell侵袭实验显示转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的迁移及侵袭能力减弱（P<0.01）。相反的，转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞迁移及侵袭能力加强（P<0.01）。生物信息学软件预测发现PEBP1可能是miR-4443的潜在靶基因且与转移的相关程度最高。进一步行双荧光素酶报告基因实验，验证PEBP1是miR-4443的靶基因（P<0.01）。RT-qPCR和Western blot显示，MDA-MB-231细胞中PEBP1在mRNA及蛋白中的水平均低于MCF-7细胞（P<0.01）。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞中，PEBP1 在mRNA及蛋白水平均低于对照（P<0.01）；转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞中，PEBP1 在mRNA及蛋白水平均高于对照（P<0.01）。结论 miR-4443通过抑制PEBP1的表达水平促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力，而抑制乳腺癌细胞中miR-4443的表达可能是未来潜在的治疗方法。

• ALKBH5通过抑制上皮-间质转化降低人滋养细胞的迁移和侵袭能力

  何建萍, 李晓娟, 吕梦欣, 王 珏, 唐 健, 罗胜军, 钱 源

  目的 探讨去甲基酶ALKBH5对滋养细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭功能及对上皮-间质转化（EMT）过程的影响。方法 将ALKBH5高表达、抑制及其阴性对照NC质粒转染人滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞，采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及Westen boltting（WB）实验检测各组细胞中ALKBH5 mRNA及ALKBH5蛋白的表达水平。并通过Transwell实验检测转染后滋养细胞迁移、侵袭功能变化，同时通过 WB 实验检测各组细胞中上皮-间质转化（EMT）相关蛋白：Vimentin、Fibronectin、E-cadherin、N-cadherin、MMP9及MMP2的表达水平。结果 ALKBH5组与未转染组（Control）和无意义序列组（NC）相比，ALKBH5 mRNA及蛋白高表达效果显著（P<0.05）；shALKBH5组与未转染组（Control）和无意义序列组（NC）相比，ALKBH5 mRNA及蛋白抑制效果显著（P<0.05）。ALKBH5高表达后HTR-8/Svneo细胞迁移、侵袭功能降低（P<0.05），EMT相关蛋白中上皮标记物E-cadherin蛋白表达上调，间质标记物Fibronectin、N-cadherin、MMP2蛋白表达下调，差异有统计学意义（P<0.05）。ALKBH5表达抑制后HTR-8/Svneo细胞迁移、侵袭功能增强（P<0.05），EMT相关蛋白中上皮标记物E-cadherin蛋白表达下调，间质标记物Fibronectin、N-cadherin、MMP2蛋白表达上调，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 ALKBH5通过抑制EMT过程降低滋养细胞迁移、侵袭能力，从而参与子痫前期的发病机制。

• Fractalkine 通过激活 Wnt/β-catenin 信号通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞M1型极化

  巩奇明, 姜 艳, 卢俊玲, 尤燕舞

  目的 研究Fractalkine（CX3CL1，FKN）对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞免疫应答的作用机制。方法 体外培养RAW264.7细胞，使用慢病毒技术构建过表达FKN的稳定细胞珠。细胞分为8组：（1）空白对照组；（2）LPS组，细胞给予脂多糖（1 μg/mL，12 h）；（3）ICG-001组，细胞给与Wnt/β-catenin信号通路抑制剂ICG-001（10 μmol/mL，48 h）；（4）过表达FKN组；（5）ICG-001+LPS组，细胞给与ICG-001（10 μmol/mL预处理36 h）后，加入脂多糖（1 μg/mL，12 h）；（6）过表达FKN+LPS组，过表达FKN细胞给与脂多糖（1 μg/mL，12 h）；（7）过表达FKN+ICG-001组，过表达FKN细胞给予ICG-001（10 μmol/mL，48 h）；（8）过表达 FKN+ICG-001+LPS 组，过表达 FKN 细胞给与 ICG-001（10 μmol/mL 预处理 36 h）后，加入脂多糖（1 μg/mL，12 h）；应用CCK-8细胞增殖实验检测ICG-001作用于巨噬细胞中的安全浓度；应用酶联免疫吸附（ELISA）实验检测巨噬细胞上清液中M1型极化因子TNF-α和IL-6的含量；应用蛋白质免疫印记（WB）实验检测巨噬细胞中FKN、Wnt/β-catenin通路关键因子Wnt-4和β-catenin、M1型极化因子iNOS、TNF-α和IL-6的蛋白表达水平；应用免疫荧光（IF）实验检测巨噬细胞中M1型极化因子IL-6蛋白的定位。结果 过表达FKN的RAW264.7细胞中FKN的蛋白水平较空白对照组明显升高（P<0.01）。CCK-8实验显示ICG-001作用于RAW264.7细胞48 h的IC50为10 μmol/mL。与LPS组相比，ICG-001+LPS组上清液中TNF-α和IL-6的分泌量以及细胞内TNF-α、IL-6和iNOS蛋白含量均升高（P<0.05），而细胞内FKN、Wnt-4和β-catenin蛋白含量均显著降低（P<0.01）；EXFKN+LPS组上清液中TNF-α和IL-6的分泌量以及细胞内TNF-α、IL-6和iNOS蛋白含量均显著降低（P<0.01），而细胞内FKN、Wnt-4和β-catenin蛋白含量均显著升高（P<0.01）。与LPS组相比，ICG-001+LPS组中IL-6在细胞质中的定位增强，而EXFKN+LPS组中IL-6在细胞质中的定位受到抑制。结论 过表达FKN通过激活Wnt/β-catenin信号通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞M1型极化。

• 锌指蛋白ZNF652在乳腺癌组织和细胞中的高表达可促进乳腺癌的发生发展

  雷 婷, 肖 斌, 何咏茵, 孙朝晖, 李林海

  目的 揭示锌指蛋白ZNF652在乳腺癌组织和细胞中的表达水平及其对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 利用TCGA数据库挖掘ZNF652在乳腺癌组织与癌旁组织中的表达差异，分析ZNF652的表达与分子分型、病理类型、TNM分级和临床分期等临床病理特征的相关性；RT-qPCR和Western blot鉴定ZNF652在MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR-3、UACC-812和BT-474乳腺癌细胞系中的表达；通过慢病毒系统构建稳定表达ZNF652的乳腺癌细胞株，利用siRNA敲低ZNF652的表达；通过CCK-8实验和克隆形成实验分析过表达及敲低ZNF652对乳腺癌细胞增殖和集落形成能力的影响；通过Transwell细胞迁移、侵袭实验以及伤口愈合实验阐明过表达及敲低ZNF652对乳腺癌细胞体外迁移和侵袭的影响；采用免疫荧光实验明确ZNF652的亚细胞定位。结果 ZNF652在乳腺癌组织中表达显著上调（P<0.001）；对于不同乳腺癌分子分型，ZNF652在TNBC型乳腺癌组织中表达下调，而在HER2+型、Luminal A型及Luminal B型乳腺癌组织中表达升高（P<0.01或P<0.001）；除粘液癌外，ZNF652在不同病理类型乳腺癌组织中的表达均较癌旁组织升高（P<0.05）；高表达ZNF652与乳腺癌远处转移、恶性程度显著相关（P<0.01或P<0.001）；ZNF652在5种乳腺癌细胞系中的mRNA和蛋白表达水平均高于正常乳腺细胞（P<0.05或P<0.001）；过表达ZNF652促进乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移，而敲低ZNF652后作用相反；ZNF652定位于细胞核。结论 ZNF652在乳腺癌组织和细胞中高表达，促进乳腺癌发生发展，有望作为乳腺癌诊断和治疗的潜在分子靶标。

• 长腹膜透析龄患者首次腹膜炎的临床特征及治疗转归：基于4家医院625例患者数据

  赵 晶, 杨立明, 朱学研, 张晓暄, 李忻阳, 刘师辰, 庄小花, 周文华, 罗 萍, 崔文鹏

  目的 探讨长腹膜透析龄患者首次发生腹膜透析相关性腹膜炎（PDAP）的临床特点及治疗转归。方法 回顾性收集2013~2019年期间在吉林省4家三甲医院首次发生PDAP的所有患者资料。根据发生首次PDAP时的透析龄是否大于36个月，将研究对象分为长透析龄组（≥36个月）和短透析龄组（<36个月）。比较两组患者首次PDAP的临床资料、治疗结果及转归。结果 本研究共纳入625例PDAP患者，长透析龄组93例，短透析龄组532例。在发生首次PDAP时，长透析龄组患者血红蛋白明显高于短透析龄组，而肾小球滤过率明显低于短透析龄组（P<0.05）；长透析龄组较短透析龄组更易感染革兰阴性菌（P<0.05）。长透析龄组的初始治疗有效率（P=0.009）及完全治愈率（P=0.018）均低于短透析龄组，而拔管率高于短透析龄组（P=0.017）。多因素Logistic回归提示，长透析龄导致首次PDAP拔管及治疗失败的风险分别是短透析龄的3.05倍（95%CI：1.35-6.91，P=0.008）和2.81倍（95%CI：1.45-5.44，P=0.002）。真菌及混合菌感染是长透析龄患者首次PDAP治疗失败的独立危险因素（OR：45.40，95%CI：1.488-1385.5，P=0.029；OR：16.50，95%CI：1.106-246.123，P=0.042）。而两组患者在维持PD、技术失败和全因死亡方面无统计学差异，进一步进行多因素Cox回归发现，长透析龄并不是PDAP患者技术失败（OR：1.36，95%CI：0.84-2.19，P=0.206）或全因死亡（OR：1.51，95%CI：0.97-2.35，P=0.068）的独立危险因素。结论 长透析龄患者首次发生PDAP时易发生革兰阴性菌感染，并且治疗效果较短透析龄患者差，但对于长期转归方面无明显影响。长透析龄是首次PDAP拔管和治疗失败的独立危险因素。真菌及混合菌感染是长透析龄患者首次PDAP治疗失败的独立危险因素。

• 线粒体基因位点G12630A与冠心病患者他汀类药物诱导的肌痛相关

  周小红, 王子贤, 秦 敏, 钟诗龙

  目的 探索确定与瑞舒伐他汀诱导的肌痛相关的线粒体基因变异位点。方法 对403例服用瑞舒伐他汀及双联抗血小板药物（DAPT）的冠心病患者进行GSA基因芯片检测，其中341人具有完整的肌痛相关随访信息，389人测得肌酸激酶（CK）水平。首先采用logistic回归模型评估69个线粒体基因变异位点与341名肌病患者的相关性，最后通过线性回归模型依次评估这些变异位点对389名患者肌酸激酶水平的影响。结果 线粒体G12630A变异与肌痛风险增加有关（OR：8.689；95%CI：1.586-47.6；P=0.01），但不同G12630A基因型患者肌酸激酶水平无显著性差异（P>0.05）。而CK水平与T12285C、A13105G的相关性有统计学意义（P<0.05）。结论 线粒体基因位点G12630A与他汀类药物诱导的肌痛相关，这为临床上对于携带该风险等位基因的患者采取不同的治疗策略提供了理论基础。

• 乳酸杆菌GR-1&RC-14对妊娠晚期生殖道B族链球菌定植及阴道菌群微生态的影响

  刘映玲, 黄郁馨, 蔡 蔚, 李点杰, 郑婉婷, 肖苑玲, 刘映平, 赵胡英, 潘石蕾

  目的 探讨乳酸杆菌GR-1&RC-14对妊娠晚期生殖道B族链球菌（GBS）阳性患者GBS定植、妊娠结局及阴道菌群微生态的影响。方法 选取2019年3月~2019年11月于南方医科大学珠江医院门诊行妊娠晚期GBS检测且结果阳性患者符合纳排标准155例，剔除乳酸杆菌干预<2周或产后复查32例，根据有无乳酸杆菌干预，分为干预组（60例）、无干预组（63例）；干预组60例根据再次检测GBS结果分为转阴组（18例）、持续阳性组（42例）；计算GBS转阴率，比较各分组妊娠结局；从干预组60例患者中随机选取配对乳酸杆菌干预前后阴道分泌物5对行扩增子测序及生物信息分析。结果 干预组GBS转阴率为30%（18/60），无干预组GBS转阴率为23%（3/13）；乳酸杆菌干预降低胎膜早破发生率（P<0.05），并降低抗生素应用（P<0.05）。阴道分泌物OTU分析提示乳酸杆菌干预后总序列数、GBS序列数减少及物种组成增加。乳酸杆菌干预后链球菌属物种丰度降低，差异有统计学意义（P<0.05）。MetaStat提示乳酸杆菌干预后肠球菌、葡萄球菌属、链球菌属物种丰度均减少且差异有统计学意义（P<0.05）。结论 乳酸杆菌对妊娠晚期生殖道GBS定植、妊娠结局有一定的改善作用，乳酸杆菌降低链球菌属物种相对丰度及致病菌物种丰度，对阴道菌群微生态有一定改善作用。

• IEAC或CEAC预处理方案用于淋巴瘤自体造血干细胞移植的疗效与安全性比较

  熊艺颖, 陈建斌, 刘 林, 罗小华, 唐晓琼, 王 欣, 肖 青, 张红宾, 王 利

  目的 评价IEAC或CEAC方案预处理在自体造血干细胞移植（ASCT）治疗淋巴瘤的疗效与安全性。方法 回顾性分析了2013年~2018年在我院以IEAC方案（去甲氧柔红霉素+依托泊苷+阿糖胞苷+环磷酰胺）和CEAC方案（洛莫司汀+依托泊苷+阿糖胞苷+环磷酰胺）预处理后行ASCT的106例淋巴瘤患者资料，其中IEAC组43例，CEAC组63例患者，两组患者的临床特征无显著差异。通过对两组的造血重建时间、不良反应以及生存情况进行比较分析来评价预处理方案的疗效与安全性。此外，对可能影响生存的因素进行了单因素以及多因素的分析。结果 104例患者移植后造血重建，2例患者出现治疗相关死亡，两组的造血重建时间无显著差异。移植后中位随访27.4月（4.3~74.3月），患者的5年无进展生存率和总生存率分别为72.9%和81.9%，主要的2级以上的不良反应为感染、口腔黏膜炎、恶心呕吐、肝功能损害、心脏毒性、低钾血症以及腹泻，两组的生存和不良反应无显著差异。T细胞淋巴瘤和移植前未获得完全缓解是无进展生存率（P值分别为0.015和0.007）和总生存率（P值分别为0.038和0.031）的危险因素，移植后3个月能获得完全缓解的患者可以获得更好的进展生存率（P=0.007）和总生存率（P=0.003）。结论IEAC或CEAC预处理联合ASCT治疗淋巴瘤是安全有效的，可作为淋巴瘤ASCT预处理的备选方案。

• 生育晚期各级别宫颈病变患者宫颈微生态的特征

  翟青枝, 任腾杰, 付玉荣, 张 哲, 李立安, 李亚里, 孟元光

  目的 探讨生育晚期宫颈病变患者宫颈微生态特征，寻找阻断宫颈病变的新途径。方法 根据入组及排除标准，纳入健康女性25例，高危型人乳头瘤病毒感染者24例，低级别宫颈上皮内瘤变（LSIL）27例，高级别宫颈上皮内瘤变（HSIL）36例，宫颈癌35例，合计147例。通过对所取的宫颈分泌物进行核酸提取，针对16S rRNA的V3+V4区域进行PCR扩增及测序。样本稀释曲线及物种箱型图证明本研究测序深度充分，样本合格。对有效数据进行OTUs分析，了解物种表达情况，并以此为基础进行α和β多样性分析。α多样性分析主要采用Chao1、Simpson和Shannon指数。β多样性分析主要采用T检验条形图、基于Weighted Unifrac Beta多样性的箱形图以及MetaStat分析。结果 5组受试者OTUs分析显示，宫颈菌落属水平丰度均以乳酸杆菌、加德纳菌、普氏菌为主，随着病变的加重乳酸杆菌丰度降低，加德纳菌属和普氏菌属丰度增高。Chao1、Simpson和Shannon指数差异均无统计学意义（P>0.05）。T检验条形图中，与健康组相比，其余各组中差异具有统计学意义的菌属为9~15个。除LSIL组外，差异菌种丰度最高的3个菌属为乳酸杆菌属（P1-2=0.025，P1-3=0.025，P1-4<0.001）、加德纳菌属（P1-2=0.01，P1-3=0.001，P1-4<0.001）和普氏菌属（P1-2=0.047，P1-3=0.023，P1-4=0.048）。LSIL组与健康人群比较差异菌属丰度最高的3个菌属分别为加德纳菌属（P1-3=0.021）、依格纳季氏菌属（P1-3=0.015）、链球菌属（P1-3=0.041）。MetaStat综合分析5组数据，其中差异具有统计学意义的菌属中丰度最高的为乳酸杆菌属（P 1-4=0.025）、加德纳菌属（P 1-2=0.004、P1-4=0.002、P1-5=0.001）及普氏菌属（P3-5=0.005）。结论 宫颈群落属水平表达均以乳酸杆菌、加德纳菌属、普氏菌属为主，并随疾病进展而变化；α多样性分析无明显差异，证实除病理因素外，生理因素也可导致α多样性的差别。LSIL组是所有病变中与健康人群最为相近的一组，这符合其疾病预后，进一步证实宫颈菌群表达与疾病预后相关，有望成为良好预后的生物学评估指标。

• EBV 阳性人鼻咽癌细胞外泌体促进淋巴管新生与鼻咽癌淋巴结转移

  陈星睿, 李登科, 黄仲曦, 钟水生, 蔡林波

  目的 探讨EB病毒（EBV）阳性鼻咽癌细胞外泌体对淋巴管新生与鼻咽癌淋巴结转移的影响。方法 利用超速离心获得细胞外泌体，对外泌体进行Western blot与纳米颗粒追踪分析（NTA）鉴定。利用Dio染料吞噬实验，验证外泌体可以被淋巴管内皮细胞摄取。离体条件下，分别利用等体积培养基以及20 μg/mL 鼻咽上皮细胞（NP69）、HK1-EBV、C666-1细胞外泌体和除去外泌体的HK1-EBV与C666-1上清蛋白预处理淋巴管内皮细胞，检测淋巴管内皮细胞成管与迁移情况；在体实验，首先建立裸鼠腘窝淋巴结转移模型，负瘤裸鼠被随机分成4组，3只/组。对照组：腘窝处注射生理盐水（30 μL）；NP69外泌体组：10 μg/30 μL NP69外泌体；HK1-EBV除去外泌体上清组：10 μg/30 μL HK1-EBV除去外泌体上清蛋白；HK1-EBV外泌体组：10 μg/30 μL HK1-EBV外泌体。每2 d注射1次，共4次。结果 超速离心获得外泌体富含外泌体特异性蛋白，同时NTA鉴定表明其粒径范围正常；鼻咽癌细胞与NP69外泌体可以被淋巴管内皮细胞摄取；HK1-EBV与C666-1外泌体较空白对照组与NP69外泌体可显著促进淋巴管内皮细胞成管与迁移（P<0.05），HK1-EBV与C666-1外泌体组与对应除去外泌体上清蛋白组间无显著性差异（P>0.05）；腘窝淋巴结转移实验发现：HK1-EBV外泌体较空白对照组、NP69外泌体以及除去外泌体的HK1-EBV上清蛋白可显著促进鼻咽癌细胞淋巴结转移以及局部淋巴管新生（P<0.05）。结论 EBV阳性鼻咽癌细胞外泌体能促进鼻咽癌淋巴管新生与淋巴结转移。

• Palbociclib可诱导人肾小管上皮细胞周期阻滞及衰老

  黄柳维, 沈燕婷, 刘崇斌, 李彩珍, 王 骏

  目的 探讨Palbociclib药物对肾小管上皮细胞周期进展及细胞增殖的影响。方法 体外培养肾小管上皮细胞HK-2分别给予不同浓度（0、1、5、10、20 μmol/L）的Palbociclib进行处理，通过细胞计数和CCK8法检测不同浓度及时间下Palbociclib对HK-2细胞增殖及细胞活力的影响。EDU染色检测不同浓度下Palbiciclib对HK-2细胞作用5 d后的细胞增殖情况。流式分析检测Palbociclib对HK-2细胞生长周期分布的影响。采用SA-β-Gal、C12FDG等衰老染色技术检测不同浓度下Palbociclib作用于HK-2细胞5 d后其对衰老表型的诱导情况。RT-PCR检测P16、P21、P53及衰老相关分泌表型的mRNA相对表达水平，Western blot检测P16、P21和P53的蛋白表达情况。结果 Palbociclib抑制HK-2细胞增殖并诱导细胞周期阻滞于G1期。相比于对照组而言，高剂量（10 μmol/L）的 Palbociclib 可明显抑制 HK-2 细胞增殖活性，且在第 5 天时增殖抑制效果最为明显（P<0.01）。Palbociclib诱导HK-2细胞生长周期主要阻滞于G1期，而进入S期的细胞数相比于对照组来说明显减少（P<0.01）。Palbociclib可诱导HK-2细胞发生衰老，通过SA-β-Gal和C12FDG衰老染色检测，结果表明在Palbociclib作用下，HK-2细胞的胞内衰老相关半乳糖苷酶活性明显升高。RT-PCR及Western blot结果显示Palbociclib可明显上调HK-2细胞中P16、P21、P53等衰老相关因子的基因和蛋白表达水平（P<0.01）。与对照组相比，RT-PCR检测Palbociclib作用下的HK-2细胞中衰老相关分泌因子的基因表达水平也升高（P<0.01）。结论 Palbociclib可通过抑制HK-2细胞生长并阻滞其细胞周期进程进而诱导HK-2细胞发生衰老。

• 左侧非小细胞肺癌4L组淋巴结转移的临床病理学特征及危险因素分析

  申磊磊, 云天洋, 郭俊唐, 刘 阳, 梁朝阳

  目的 总结分析左侧肺鳞癌和腺癌4L组淋巴结转移的临床病理学特征及4L组淋巴结转移的危险因素。方法 回顾性纳入2008年1月~2020年4月在解放军总医院第一医学中心胸外科行左侧肺癌切除+4L组淋巴结清扫的患者134例，依据病理学类型不同分为肺鳞癌组（60例）及肺腺癌组（74例），分析两组间围术期临床病理学特征差异，用logistic回归探讨4L组淋巴结转移的危险因素。结果 所有患者4L组淋巴结转移率16.4%（22/134），两组患者在年龄、性别、吸烟史、新辅助化疗、肿瘤大小、肿瘤位置及类型、脏层胸膜侵犯、Ki-67指数、4L组淋巴结转移及病理分期（Ⅱ期）有统计学差异，肺鳞癌患者4L组淋巴结转移率明显低于肺腺癌。单因素分析显示病理类型（鳞癌/腺癌）、肺膜侵犯、脉管癌栓、肿瘤标志物阳性、第5组淋巴结转移、第6组淋巴结转移、第7组淋巴结转移、第8组淋巴结转移、第9组淋巴结转移及第10组淋巴结转移是4L组淋巴结转移的高危因素，多因素分析发现，病理类型（鳞癌/腺癌）（OR=0.120，P=0.025）、第5组淋巴结转移（OR=18.784，P=0.007）及第10组淋巴结转移（OR=5.233，P=0.044）为4L组淋巴结转移的独立危险因素。结论 左侧肺癌出现4L组淋巴结转移并不少见，肺腺癌更易出现，在评估周围结构损伤风险较低，且4L组淋巴结转移可能性较大后应当予以清扫。

• FEV1多元线性回归模型在肺功能测试中的应用

  董泉明, 宋天然, 姜晨宇, 姚 钦, 陈 芳

  目的 构建第1秒用力呼气容积（FEV1）多元线性回归模型，为无法执行肺通气功能测试的、或配合不佳的特殊人群提供接近实测值的FEV1计算参考值。方法 选取符合研究标准的人群，其中建模样本813例，验证样本94例。收集其基本资料，肺通气功能测试测定FEV1、强迫振荡技术（FOT）法测定呼吸阻力（Rrs）。各因素相关性采用Pearson分析，多元逐步回归分析建立模型方程，配对t检验验证每个样本的实测值与计算值差异等。结果 FEV1与体质量指数（BMI）无明显相关关系（r=-0.026，P=0.457），与体质量相关性较差（r=0.382，P=0.000），与身高呈正相关关系（r=0.723，P=0.000），与Rrs呈负相关关系（r=-0.503，P=0.000），性别差异明显（t=18.517，P=0.000），年龄<25岁时FEV1与年龄呈正相关关系（r=0.578，P=0.000），年龄>=25岁时与年龄呈负相关关系（r=-0.589，P=0.000）。建模与验证：年龄>=25岁时，纳入身高、性别、年龄和Rrs，实测值与计算值在建模样本（751例，t=1.293，P=0.196>0.05）、验证样本（83例，t=-1.736，P=0.086>0.05）中差异均无统计学意义，且验证样本两值相关性好（r=0.891，P=0.000）；年龄<25岁时，仅纳入身高，两值在建模样本（62例，t=-0.009，P=0.993>0.05）、验证样本（11例，t=-0.635，P=0.540>0.05）中差异均无统计学意义，验证样本两值相关性较好（r=0.795，P=0.003）。结论 本研究构建的FEV1多元线性回归模型适用于临床。

• 经椎间孔硬膜外阻滞术治疗腰痛伴神经根性疼痛

  何玉宝, 陈 蕾, 徐执扬, 王洁颖, 刘 波

  目的 评价经椎间孔硬膜外阻滞术（LTEB）治疗腰痛伴神经根性疼痛的临床效果。方法 回顾性分析自2017年3月~2019年4月期间北京市垂杨柳医院骨科收治的78例腰痛伴神经根性疼痛患者的临床病例资料，分为LTEB组（n=33）和对照组（n=45）。LTEB组采用LTEB治疗方案，而对照组采用牵引、按摩、针灸、理疗等综合保守治疗方法。记录两组患者的性别构成、年龄、症状、体格检查、病程、住院时间、随访时间。出院后2周、1个月、3个月预约门诊复查随访3~24月，治疗前、出院后2周、1个月及3个月采用数字评定法（NRS）评分及Oswestry功能障碍指数（ODI）评价治疗效果。结果 LTEB手术时间25.7±7.5 min。术后5例患者出现下肢无力感，均在24~72 h内自行恢复。所有患者治疗前后腰痛、下肢痛NRS评分及ODI评分均降低（P=0.001）。尽管术后2周LTEB组治疗后腰痛比对照组明显缓解（t=2.224，P=0.034），但是总体上两组治疗后腰痛对比和NRS评分随着时间变化没有统计学差异。LTEB治疗后下肢疼痛缓解和ODI评分明显下降（P<0.001），并随着时间变化LTEB治疗后下肢疼痛和评分明显下降（P<0.01）。结论 LTEB是一种有效治疗腰痛伴神经根性疼痛的微创方法，短期随访中，在疼痛缓解和功能改善方面效果满意。

• 正常人脑皮层下灰质核团定量磁敏感成像的可重复性分析

  许 欢, 孟庆林, 樊文萍, 王 雪, 刘梦琦, 陈志晔

  目的 探讨正常成人脑部皮层下灰质核团定量磁敏感成像的相同设备内及不同设备间可重复性。 方法 21名成年健康志愿者在不同3.0T磁共振设备上行脑部磁共振定量磁敏感成像，并采用感兴趣法测量左侧皮层下灰质核团（尾状核头、壳核、苍白球、丘脑、黑质及红核）磁化率值。采用组内相关系数（ICC）及相关性分析Bland-Altman法进行可重复性分析。结果 相同设备同一观察者间所测尾状核头、壳核、苍白球及红核磁化率的ICC值均位于0.90-0.99间，Bland-Altman分析显示除黑质外相同设备所测所测皮层下灰质核团磁化率值均位于95%一致性界限内。不同设备同一观察者所测尾状核头、壳核、苍白球、丘脑、黑质及红核的 ICC 值分别为 0.49（0.08，0.75）、0.80（0.57，0.91）、0.77（0.51，0.90）、0.78（0.54，0.91）、0.80（0.56，0.91）及 0.93（0.83，0.97），Bland-Altman分析显示不同设备观察者间壳核及丘脑磁化率值均位于95%一致性界限内的比率为95.2%（20/21）。结论正常人脑皮层下灰质核团定量磁敏感成像证实相同磁共振设备内可重复性优于不同设备间的可重复性。

• 自噬在脂多糖诱导成牙本质细胞凋亡中的作用

  熊华翠, 陈 柯, 李美美

  目的 探讨自噬在脂多糖（LPS）诱导成牙本质细胞（mDPC-23）凋亡中的作用。方法 将5 μg/mL脂多糖作用于成牙本质细胞0、6、12、24 h后，CCK8检测细胞活力，TUNEL染色检测细胞凋亡。5 μg/mL脂多糖作用细胞24 h后，用Western blot检测自噬标志蛋白LC3、Beclin1和Atg5以及自噬相关通路AKT、p-AKT、mTOR和p-mTOR的表达水平。以脂多糖（5 μg/mL）和脂多糖（5 μg/mL）+3-甲基腺嘌呤（3-MA，5 mmol/L）为实验组，不加脂多糖或3-MA为空白对照组，作用细胞24 h后，Western blot检测凋亡蛋白Caspase 3和Bax的表达水平。结果 脂多糖作用mDPC-23细胞6、12 h，细胞增殖能力和凋亡无明显变化；作用24 h后，其增殖能力较对照组显著降低（P<0.05），凋亡水平较作用0 h明显增加（P<0.05）。且脂多糖作用mDPC-23细胞24 h后，自噬标志蛋白LC3、Beclin1和Atg5表达较对照组均明显增加（P<0.05），通路相关蛋白p-AKT和p-mTOR较对照组表达下降（P<0.05）。脂多糖组凋亡蛋白Caspase 3和Bax显著高于对照组（P<0.05）；脂多糖+3-MA组中凋亡蛋白明显低于脂多糖组（P<0.05）。结论脂多糖可通过诱导mDPC-23自噬发生以促进细胞凋亡；而抑制自噬，可减弱脂多糖的促凋亡作用，提示在炎性牙髓组织损伤中，自噬发挥重要作用。

• 术后镇痛策略对老年单肺通气患者术后神经认知功能及早期康复的影响：90例随机对照临床试验

  魏 巍, 郑 曦, 谷 宇, 唐春林, 尧永华

  目的 评价不同术后镇痛策略对老年单肺通气患者术后神经认知功能和早期康复的影响。方法 选择择期拟行胸腔镜手术的老年患者90例，采用随机数字表法将其分为椎旁阻滞镇痛组（TA），硬膜外镇痛组（EA）及静脉镇痛组（GA），每组30例。采用简易智能精神量表（MMSE）对患者术前1 d和术后7 d的认知功能进行评估并记录术后7 d的40项康复质量（QoR-40）评分。结果 TA组和EA组术后7 d的MMSE评分显著高于GA组，而PNCD的发生率低于GA组（P<0.05），前两组间没有统计学差异（P>0.05）；GA组术后7 d的S100-β及MMP-9水平显著高于TA、EA两组（P<0.05），而后两组之间没有统计学差异（P>0.05）；TA和EA组术后7 d的QoR-40评分高于GA组（P<0.05），但TA组评分优于EA组（P<0.05）；与GA组相比，TA和EA两组术后胸管拔出时间及住院时间均缩短（P<0.05），而两组间没有统计学差异（P>0.05）。结论 全身麻醉复合术后持续胸椎旁阻滞或硬膜外镇痛能够明显改善老年单肺通气患者术后神经认知功能和早期康复，但胸椎旁阻滞镇痛在术后早期恢复质量方面更有优势。

• 髋关节三维有限元模型的构建及关节囊修复预后分析

  胡翰生, 王静成, 卢志华, 范卫民

  目的 构建髋关节置换的三维有限元模型，模拟关节囊修复和术后康复活动，比较两种关节囊修复方法的生物力学差异。方法 以骨-囊-骨方式采集6个冷冻髋关节的后关节囊韧带复合体标本，用万能材料试验机测定标本的载荷-应变曲线等力学特性。采集一名志愿者骨盆及下肢薄层CT扫描数据导入Mimics软件，构建髋关节的三维模型，在CATIA软件中建立臼杯、股骨假体、关节囊的三维数字模型导入Mimics，模拟行全髋关节置换手术（THA），装配后数据导入ABAQUS软件中，根据解剖研究、力学结果、本构方程设定关节囊属性，测量、比较屈髋过程中，解剖和传统修复关节囊的生物力学差别。结果 关节囊韧带复合体标本测试平均极限拉伸应变（39.21±5.23）%、极限拉伸强度（1.65±0.38）MPa。有限元模型应力-应变曲线与标本力学测试的结果相似，符合关节囊的力学特征，屈髋活动时解剖修复的关节囊应力分布均匀，均在极限拉伸强度范围内，传统修复关节囊应力分布不均，屈髋90°时下部关节囊的拉伸应力达到关节囊标本的拉伸强度极限。结论 有限元模型可用于动态、量化、可视化分析髋关节囊应力分布，解剖修复比传统修复更符合生物力学特点。

• 焦磷酸测序和 MassARRAY 定量检测 DNA 甲基化在年龄推断中的差异

  王 玲, 彭付端, 赵 慧, 李姗飞, 孙晓萌, 刘天资, 丰 蕾

  目的 利用MassARRAY和焦磷酸测序两种方法检测的DNA甲基化数据在年龄推断中的差异，探讨两种检测方法的年龄推断计算方法。方法 应用MassARRAY和焦磷酸测序，分别对65份和62份外周血样本的9个CpG位点的甲基化水平进行测定，运用多元线性回归模型预测年龄，对比预测年龄与实际年龄之间的差异；对比Z-score转化前后两种方法之间的年龄预测差异。结果 MassARRAY法，65样本集数据Z-score转化前，平均绝对误差（MAD）=2.49岁，Z-score转化后，MAD=2.44岁；62样本集数据Z-score转化前，MAD=3.36岁，Z-score转化后，MAD=3.42岁。焦磷酸测序法，65样本集数据Z-score转化前，MAD=4.20岁，Z-score转化后，MAD=2.76岁；62样本集数据Z-score转化前，MAD=3.92岁，Z-score转化后，MAD=3.63岁。结论 Zscore转化方法能够有效的消除MassARRAY和焦磷酸测序数据之间的系统性批次效应；MassARRAY数据可以直接使用进行样本的年龄预测；使用焦磷酸测序数据进行年龄预测结果误差较大，但可以通过多样本积累进行Z-score转化之后预测年龄。

• SARS-CoV-2溯源新进展

  何文巧, 陈 清

  从2019年12月~2020年11月19日，COVID-19大流行已导致全球55 928 327例确诊病例，造成1 344 003人死亡。但是，我们对这次疫情的病原体-新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的来源仍然未了解清楚。本综述总结和分析SARS-CoV-2溯源研究进展，为进一步的研究提供启示。现有证据表明SARS-CoV-2有可能是在40~70年前由蝙蝠冠状病毒分化而来；该病毒在进化过程中同时存在多种变异及自然选择现象，病毒基因不同区域可能发生不同变异并受到不同的选择压力，这些都增加了病毒溯源的困难性；有多种动物被认为可能是SARS-CoV-2的宿主，包括猫、狮子、老虎、狗、水貂等；SARS-CoV-2可能可由人类传播给动物，且该病毒也可以在动物间互相传播；现有证据不支持该病毒的源头是中国。我们仍未清楚该病毒如何传播到人类，仍然需要更多的研究去探索SARS-CoV-2的来源、宿主、中间宿主及其跨物种传播的机制。