南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2020年第04期

• 52周英夫利西疗程中第14周中性粒细胞与淋巴细胞比值可预测克罗恩患者是否对治疗产生失应答

  高 倩,董红霞,李 瑾

  目的 探索英夫利西（IFX）疗程中第14周时获得的中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR）能否预测克罗恩患者中失应答的发生。方法 2012年1月~2016年12月，54名克罗恩患者在武汉市中南医院接受了IFX治疗。所有患者在诱导治疗后均得到了缓解，并且在治疗开始后52周内定期回医院接受治疗。我们回顾性分析了这些病人的资料，以了解14周时的NLR值与IFX失应答的相关性。结果 54名克罗恩患者中，15（27.8%）名在接下来的疗程中出现了IFX失应答。相较于持续应答的患者，失应答患者第14周时的NLR值更高[3.51（2.90~6.25）vs 1.77（1.2~2.56），P=0.00]，受试者工作特征曲线分析发现在52周的治疗中，14周 时NLR值预测克罗恩患者发生IFX失应答的最佳截点是2.75。该截点对应的敏感性为93.331%，特异性为84.62%，曲线下面积为0.903（0.731~0.959）。单因素分析发现14周时NLR值与无复发生存率相关（P=0.00），多因素分析发现14周时NLR值对克罗恩患者发生IFX失应答有独立预测作用，其风险比（OR）为1.851（95% CI: 1.096~3.026，P=0.021）。结论 IFX疗程第14周时所获得的NLR值是预测克罗恩患者发生IFX失应答的一项有效指标。

• 大面积大脑中动脉脑梗死取栓后弥散加权成像高信号逆转1例 报告

  潘 越,王冬梅,林镇洲,吴永明,姬 仲

  弥散加权成像（DWI）被认为是诊断早期缺血性脑梗死最敏感的技术，DWI高信号区域通常被认为是不可逆的梗死核心区域。然而，最近的研究表明在小的栓塞病变上，DWI高信号是可逆的。本文报告1例63岁老年男性，因“突发左侧肢体无力伴意识障碍”转入我院急诊。转入我院约6.8 h前，患者突然出现左侧肢体无力。急诊头颅磁共振（MRI）及磁共振血管成像（MRA）显示右侧大脑中动脉（MCA）阻塞，DWI提示大面积脑梗死。尽管基线DWI病变体积达91.5 mL，评估后仍进行了血管内取栓手术。在发病后8.5 h，右侧的MCA开通。术后1周，DWI病变体积减少到了11.58 mL。大面积前循环病变中DWI异常信号的逆转，提示DWI高信号的含义应该被谨慎解读。此外基线DWI上的大面积病变可能不是取栓手术的禁忌，但是还需要大的随机对照研究来证实这一结论。

• 线粒体融合与裂变在右美托咪定减轻小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及其机制

  刘 刚,门运政,童旭辉,王雪如,胡 淼,姜牧君,孙志鹏,董淑英

  目的 探讨右美托咪定（DEX）对小鼠脑缺血/再灌注（I/R）损伤的影响及线粒体融合与裂变在其中的作用。方法 将雄性ICR小鼠随机分为假手术（sham）组、缺血/再灌注（I/R）组、缺血/再灌注+右美托咪定（I/R+DEX）组、缺血/再灌注+右美托咪定+dorsomorphin（I/R+DEX+dorsomorphin）组。采用改良线栓法制备小鼠大脑中动脉栓塞模型，于缺血前30 min 腹腔注射DEX50 μg/kg，缺血1 h，再灌注24 h；采用Longa五分法对小鼠进行神经行为学评分；TTC染色法检测小鼠脑梗死体积，并计算脑梗死体积百分率；透射电镜法观察线粒体形态变化；免疫印迹法检测磷酸化AMP蛋白激酶、线粒体融合蛋白2、线粒体裂变相关蛋白的表达变化。结果 DEX 预处理降低了 I/R 组小鼠神经行为学评分和脑梗死体积百分率，在使用 DEX 的基础上加用dorsomorphin后，小鼠神经行为学评分和脑梗死体积百分率升高（P<0.01）；电镜结果显示，DEX减轻了缺血再灌注导致的线粒体损伤（P<0.01），线粒体形态有所恢复。免疫印迹检测结果显示，DEX预处理增加了磷酸化AMP蛋白激酶、线粒体融合蛋白2表达，降低了线粒体裂变相关蛋白表达，而加用dorsomorphin后，磷酸化AMP蛋白激酶、线粒体融合蛋白2表达明显降低，线粒体裂变相关蛋白表达显著增加（P<0.01）。结论 DEX预处理可以减轻I/R损伤，其机制可能与激活AMPK从而促进线粒体融合及抑制线粒体裂变有关。

• 胸苷酸合成酶在涎腺肌上皮细胞中的表达和临床意义

  郭 睿,田 怡,朱明明,黄 莺,强 磊,金雪媛,杨 军

  目的 研究胸苷酸合成酶（TS）在涎腺肌上皮细胞中的表达及临床意义。方法 应用免疫组化 EnVision 法检测TS、p63、Calponin、CK5/6、S-100在32例不同类型涎腺病变组织中的表达，包括非肿瘤性和涎腺炎性样本10例、混合瘤样本11例、基底细胞癌样本5例和腺样囊性癌样本6例。评估TS作为涎腺肌上皮细胞特异性分子标志的特异性、敏感性。结果 TS在各种涎腺组织中的表达模式与P63的表达完全一致，均能在涎腺肌上皮细胞中呈清晰的胞核型强阳性表达；同时，Calponin、CK5/6、S-100在涎腺肌上皮细胞中呈质/膜型阳性表达；此外，TS在少数涎腺腺上皮细胞、癌细胞和散在的少数间质细胞胞浆中呈弱阳性或中等强度阳性表达，但在细胞核中呈阴性表达。统计学分析结果显示TS在涎腺肌上皮细胞中的表达与p63、Calponin、CK5/6、S-100具有高度一致性（P>0.05），除与CK5/6在涎腺炎和涎腺组组表达比较之外，Kappa>0.75，且具有100%的特异性和敏感性。结论胸苷酸合成酶可作为一种新的特异性涎腺肌上皮细胞标志物，并用于涎腺肿瘤的诊断和鉴别诊断。

• 条件推断森林在生存分析中的应用

  刘颖欣,康 佩,许 军,安胜利

  目的 探讨条件推断森林在生存分析中的应用与优势。方法 通过模拟研究和实例应用比较比例风险模型、加速失效时间模型、随机生存森林、条件推断森林4种方法的预测能力，用Brier score进行评价。结果 模拟研究显示两类森林模型比其他2种回归模型预测更准确稳定，其中条件推断森林在数据存在多分类变量、共线性、交互作用等情况下预测效果优于其余3种模型，且在大样本、高删失率数据中更容易体现该优势；实例说明条件推断森林预测效果最优。结论 条件推断森林可用于生存分析，且当存在多分类变量、共线性、交互作用时，与其他常见生存分析方法相比，具有更高的准确性和稳定性。

• 基于MRI平扫的影像组学模型鉴别软骨肉瘤与内生软骨瘤

  潘洁琳,姜云萍,占颖莺,左盼莉,方义杰,李绍林,洪国斌

  目的 探讨基于MRI平扫构建的影像组学模型用于鉴别诊断软骨肉瘤与内生软骨瘤的价值。方法 回顾性分析68例软骨源性肿瘤（软骨肉瘤27例，内生软骨瘤41例），将其随机分配到训练组（n=46）与验证组（n=22）。首先由2名放射科医师独立提取平扫T1WI和T2WI-FS序列中肿瘤所有层面的影像组学特征，采用组内相关系数（ICC）评价2名医师提取组学特征的一致性；然后使用方差选择法、单变量特征选择、最小绝对收缩与选择算子算法（LASSO）对组学特征进行筛选和降维，使用多因素逻辑回归分析构建基于T1WI和T2WI-FS序列的组学模型，采用受试者工作特征曲线（ROC）评估组学模型的诊断效能, 并与放射科医师采用常规MR序列的诊断效能进行对比。结果 2名放射科医师独立提取患者T1WI和T2WI-FS序列影像组学特征的一致性良好（ICC值范围为0.779~0.923）。在T1WI序列筛选出10个组学特征，在T2WI-FS序列筛选出11个组学特征，两个序列的组学模型在训练组中AUC分别为0.990和0.925；在验证组中AUC分别0.915和0.855，模型之间的诊断效能差异均无统计学意义（P>0.05）。在所有病例中，T1WI、T2WI-FS序列组学模型与常规MRI诊断的AUC分别为0.955、0.901、0.569，基于两个序列的组学模型诊断准确性均高于放射科医生的诊断效能（P<0.001）。结论 基于MRI平扫T1WI和T2WI-FS序列构建的影像组学模型能用于鉴别诊断软骨肉瘤与内生软骨瘤。

• 基于多尺度三维卷积神经网络的头颈部危及器官分割方法

  慕光睿,杨燕平,高耀宗,冯前进

  目的 研究一种基于三维卷积神经网络的CT图像头颈部危及器官分割算法。方法 本文构建了一个基于V-Net模型的头颈部危及器官自动分割算法。为了增强分割模型的特征表达能力，将SE（Squeeze-and-Excitation）模块与V-Net模型中残差卷积模块相结合，提高与分割任务相关性更大的特征通道权重；采用多尺度策略，使用粗定位和精分割两个级联模型完成器官分割，其中输入图像在预处理时重采样为不同分辨率，使得模型分别专注于全局位置信息和局部细节特征的提取。结果 我们在头颈部22个危及器官的分割实验表明，相比于已有方法，本文提出的方法分割平均精度提升了9%，同时平均测试时间从33.82 s降低至2.79 s。结论 基于多尺度策略的三维卷积神经网络达到了更好的分割精度，且耗时极短，有望在临床应用中提高医生的工作效率。

• 奥美沙坦酯通过上调 miR-3133 抑制衰老相关血管平滑肌细胞的迁移和侵袭

  张 艺,盛 帅,梁庆阳,张 莉

  目的 探讨奥美沙坦酯（OMST）抑制衰老相关人主动脉血管平滑肌细胞（HA-VSMCs）迁移和侵袭能力的作用及微小RNA（miRNA）参与的机制。方法 HA-VSMCs体外培养，分别经博莱霉素（BLM）诱导衰老、OMST干预及瞬时转染miR-3133 NC/miR-3133 inhibitor。分别设置对照组：HA-VSMCs 正常培养；BLM 组：HA-VSMCs+BLM；OMST 组：HA-VSMCs+BLM+OMST；OMST+miR-3133 NC组：HA-VSMCs转染miR-3133 NC+BLM+OMST；OMST+miR-3133 inhibitor组：HA-VSMCs转 染miR-3133 inhibitor+BLM+OMST。划痕实验和Boyden小室侵袭实验分别测定HA-VSMCs迁移和侵袭力。明胶酶谱分析测定HA-VSMCs中金属基质蛋白酶-2（MMP-2）分泌。MiRNA生物芯片测定差异表达miRNA并行qRT-PCR验证。结果 与对照组相比，BLM组划痕实验和侵袭实验显示细胞迁移和侵袭力增加（[ 78.43±12.76）% vs（42.47±7.22）%；33.33±5.51 vs 13.00± 4.36，P<0.05]，MMP-2分泌水平增加[1.66±0.27 vs 0.87±0.13，P<0.05]；而OMST干预可抑制增加的细胞迁移/侵袭力和MMP-2分泌。生物芯片检测显示，以上3组存在差异miRNAs表达。qRT-PCR证实BLM组miR-3133表达下调，而OMST组miR-3133表达上调。与OMST组相比，OMST+miR-3133 inhibitor组HA-VSMC迁移和侵袭能力增加（[ 85.87±7.39）% vs（49.77±3.05）%；34.67±2.31 vs 20.00±4.58，P<0.05]；MMP-2分泌水平也增加（1.76±0.19 vs 0.94±0.10，P<0.05）。结论 OMST能抑制衰老HAVSMC的迁移和侵袭能力，这一过程可能是通过上调miR-3133表达实现的。

• 丝氨酸羟甲基转移酶对小鼠肝脏缺血再灌注的影响

  蒋 禹,王安康,白 赫,叶明新

  目的 探索丝氨酸羟甲基转移酶2（SHMT2）在小鼠肝脏缺血再灌注损伤的表达及作用。方法 SPF级C57BL/6小鼠60只，分为正常组（sham）、生理盐水对照组（NS）、空载腺相关病毒组（AVV-GFP）、及腺相关病毒沉默组（AAV-SHMT2），每组15只。建模前2周尾静脉给予注射腺相关病毒及生理盐水，建立小鼠肝脏70%缺血再灌注模型。收集缺血再灌注模型小鼠的血清及肝组织。采用qPCR、Western blot、免疫荧光和免疫组化检测各组AST/ALT的浓度、SHMT2、JNK、NF-κB、Caspase-3及下游炎症因子表达水平的变化。并利用HE染色观察各组肝组织病理损伤，TUNEL法检测细胞凋亡。结果 肝脏缺血再灌注后SHMT2表达随时间升高，在24 h达最高（相对表达量为1.5，P<0.05）。肝脏缺血再灌注24 h后，AAV-SHMT2组AST/ALT水平含量（588/416 U/L）均明显高于对照组（416/345 U/L），空载组（387/321 U/L）（P<0.05）。AAV-SHMT2组与对照组和空载组相比，SHMT2水平明显降低（相对表达量为0.24，P<0.05），p-JNK，p-p65水平明显升高（相对表达量为0.80，0.97，P<0.05），炎症因子水平TNF-α、IL-1β与其保持一致升高（相对表达量为1.6，1.2，P<0.05）。空载组和对照组比较无统计性差异（P>0.05）。结论SHMT2在肝脏缺血再灌注中有可能通过抑制JNK通路激活来缓减肝细胞的凋亡以及抑制NF-κB通路过度激活来减轻肝脏缺血再灌注的损伤。

• 四种评分系统对脓毒症患者ICU死亡风险的预测价值比较

  胡 畅,胡 波,李志峰,杨 晓,宋慧敏,李建国

  目的 评价序贯器官衰竭评分（SOFA）、简化急性生理评分（SAPS-Ⅱ）、牛津急性疾病严重程度评分（OASIS）、Logistic器官功能障碍系统（LODS）评分系统预测ICU脓毒症患者死亡风险的价值。方法 通过MIMIC-Ⅲ数据库提取2001年至2012年共计2470例脓毒症患者的临床资料，收集入ICU首日内SOFA评分、SAPS-Ⅱ评分、OASIS评分以及LODS评分。根据患者ICU存活情况分为存活组和死亡组，分析比较两组间不同评分系统的差异性，计算4种评分系统ROC曲线下面积进行差异性分析，对脓毒症患者ICU死亡情况进行二项Logistic回归分析，以综合比较4种评分系统对脓毒症患者ICU死亡的预测价值。结果2470例脓毒症患者中ICU内存活1966例（79.6%），死亡504例（20.4%）。其中死亡组年龄、机械通气使用率、初始乳酸、肌酐、尿素氮、SOFA、SAPS-Ⅱ、OASIS和LODS评分明显高于存活组（P<0.05），体质量及血小板明显低于存活组（P<0.05）。SOFA评 分、SAPS-Ⅱ评分、OASIS 评分以及 LODS 评分的 ROC 曲线下 AUC 值分别为 0.729（P<0.001），0.768（P<0.001），0.757（P< 0.001）, 0.739（P<0.001）。其中SAPS-Ⅱ评AUC值明显高于SOFA评分和LODS评分（Z=3.679，P<0.001；Z=3.698，P<0.001），SAPS-Ⅱ与OASIS评分无明显差异（Z=1.102，P=0.271）；OASIS评分明显高于LODS评分（Z=2.172，P=0.030），但与SOFA评分无明显差异（Z=1.709，P=0.088）。按照是否合并脓毒性休克将患者分为两组，在单纯脓毒症组中，SAPS-Ⅱ评分预测患者死亡的AUC值明显高于其他3种评分，为0.769（0.743-0.793），在合并脓毒性休克组中，SAPS-Ⅱ与OASIS评分预测患者死亡的AUC值明显高于其他两种评分，分别为0.768（0.745-0.791）、0.762（0.738-0.785）。二项Logistic回归多因素分析后发现SOFA、SAPS-Ⅱ、OASIS评分系统均与脓毒症患者死亡相关（OR：1.08，95% CI：1.03-1.14，P=0.001；OR：1.04，95% CI：1.02-1.05，P<0.001；OR：1.04，95% CI：1.01-1.06，P=0.001），但LODS评分与脓毒症患者发生ICU死亡无明显关系（OR：0.96，95%CI：0.89-1.04， P=0.350）。结论 SOFA、SAPS-Ⅱ和OASIS评分均能预测脓毒症患者ICU死亡风险，但SAPS-Ⅱ评分和OASIS评分预测价值优于SOFA评分及LODS评分。

• Vimentin基因敲除HIV-1 gp120转基因小鼠模型的构建

  何肖龙,彭 亮,张 宝,李 莉, 吴春华,肖汉森,杨伟军,曾志节,杨 枭,龙 敏,曹 虹,黄胜和

  目的 构建波形蛋白（VIM）基因敲除和gp120转基因（gp120 Tg）小鼠模型。方法 将VIM基因敲除小鼠（VIM-/-）和gp120Tg小鼠杂交（F0代），然后在产生的子代（F1）中，取分组为VIM+/-/gp120Tg的小鼠一公一母杂交，得到基因型分别为VIM+/+、VIM+/-、VIM-/-和VIM+/+/gp120 Tg、VIM+/-/gp120 Tg、VIM-/-/gp120 Tg的6组小鼠。其中VIM+/+、VIM-/-、VIM+/+/gp120Tg和VIM-/-/gp120这4组小鼠互为对照。用PCR法鉴定这上述6组小鼠的基因型，免疫印迹法检测小鼠脑组织中VIM和gp120的表达情况。结果 4组基因型VIM+/+、VIM-/-、VIM+/+/gp120Tg和VIM-/-/gp120Tg小鼠的PCR结果符合预期，免疫印迹结果显示VIM-/-/gp120Tg小鼠VIM无表达，gp120过表达（P<0.001），符合预期结果。结论 成功构建了VIM基因敲除gp120转基因小鼠模型，为深入研究波形蛋白在gp120神经毒性作用中的作用机制提供了坚实的研究基础。

• 丙泊酚抑制内毒素血症中巨噬细胞发生焦亡的分子机制

  纪雪霞,郭远波,邱倩琪,王志鹏,王 研,吉锦泉,孙 强,蔡宇晶,周国斌

  目的 探讨丙泊酚抑制巨噬细胞发生焦亡的分子机制。方法 提取小鼠骨髓来源巨噬细胞，分为对照组、脂多糖（LPS）+三磷酸腺苷（ATP）刺激组以及丙泊酚+LPS+ATP组。对照组不给予任何处理；LPS+ATP组先给予脂多糖(LPS) 1 μg/mL刺激4 h，再加三磷酸腺苷（ATP）4 mmol/L刺激1 h；丙泊酚+LPS+ATP组先同时给予50 μmmol/L丙泊酚+LPS 1 μg/mL刺激4 h，再加ATP刺激1 h。处理完毕则收集细胞培养上清液和细胞。分别通过CCK8、流式分析检测细胞活力，酶联免疫吸附测定法法检测细胞上清炎症因子IL-1β、IL-18含量；用免疫印迹检测细胞caspase-1蛋白表达及细胞膜Toll样受体-4（TLR4）表达；流式分析及免疫组化荧光检测细胞焦亡情况。结果 LPS+ATP可导致小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）活力显著降低（P<0.05）；炎症因子IL-1β、IL-18升高（P<0.05）；活化的caspase-1蛋白增加，细胞膜表面TLR-4表达升高（P<0.05）；予丙泊酚处理后，可改善LPS+ATP诱导的上述指标变化。结论 LPS+ATP可诱导BMDM发生焦亡，丙泊酚有效抑制这种细胞死亡，提示丙泊酚麻醉有益于临床脓毒症患者的手术，有效调节患者免疫状态。

• 基于耦合的卷积-图卷积神经网络的阿尔茨海默病的磁共振诊断方法

  李青峰,邢潇丹,冯前进

  目的 针对已有方法未利用大脑拓扑信息的问题，提出基于耦合的卷积-图卷积神经网络的疾病诊断模型，以实现对阿尔茨海默病及其前驱症状的精确诊断，为临床提供可靠的辅助诊断信息。方法 根据ADNI数据库提供的信息，将MMSE评分在20~26分、同时CDR评分为0.5或1的被试的疾病标签标记为AD组；将MMSE评分在24~30分且CDR评分为0、无抑郁症状、无认知障碍、无焦虑症状的被试疾病标签标记为NC组。本文提出一种耦合的卷积-图卷积神经网络（CCGCN）模型，以组间比较获取的疾病相关区域作为输入，利用卷积神经网络，从大脑磁共振图像的不同区域提取疾病相关的特征，再使用图卷积网络，结合提取到的特征，对区域间拓扑结构进行建模，并在图卷积网络中嵌入图池化操作，从而自适应地学习大脑拓扑结构与疾病诊断任务之间的内在联系。利用ADNI数据集，获得CCGCN模型对阿尔茨海默病及其前驱症状的疾病诊断准确率、灵敏度和特异度，并进行模型结构的消融实验。结果 该模型在阿尔茨海默病的诊断任务上取得了92.5%的准确率、88.1%的灵敏度和96.0%的特异度，诊断精度优于目前最先进的方法；同时在区分进行型轻度认知障碍患者和稳定型轻度认知障碍患者的任务上取得了79.8%的准确率、55.3%的灵敏度和83.7%的特异度；消融实验的结果显示了CCGCN模型各组成成分的有效性。结论基于耦合的卷积-图卷积神经网络的疾病诊断模型利用了原始图像的结构和拓扑信息，相比现有方法可以提供更加精确的阿尔茨海默病诊断结果，有望将其应用于临床的辅助诊断中。

• 免疫抑制剂在常染色体显性遗传性多囊肾患者肾移植术后的应用

  李 琼,李江涛,杨 帆,刘燕娜,邓文锋,刘如敏,胡杨澄,夏仁飞,徐 健,苗 芸

  目的 探究常染色体显性遗传性多囊肾（ADPKD）患者肾移植术后免疫抑制剂合理血药浓度。方法 收集2000年3月~2018年1月首次肾移植的68例ADPKD患者和68名性别、年龄和移植日期相匹配的其他肾移植受者(对照组）的临床资料，分析两组患者人、肾存活率、术后并发症以及术后1年内不同时期免疫抑制剂浓度的差异。同时根据术后是否发生泌尿道感染将ADPKD患者分为泌尿道感染组与非泌尿道感染组，分析两组患者术后1年内不同时期免疫抑制剂浓度的差异。结果 ADPKD组与对照组患者1、5、10年移植受者存活率分别为96.6%、94.1%、90.6%和96.0%、93.9%、93.9%；ADPKD组与对照组患者肾存活率分别为95.2%、90.8%、79.0%和96.0%、87.2%、82.3%，差异无统计学意义（P>0.05）。在术后急性排斥反应、胃肠道症状、心血管事件、肺部感染以及肿瘤的发生率上的差异无统计学意义（P>0.05）。术后9月，ADPKD组比对照组的他克莫司、霉酚酸血药谷浓度更低（P<0.05）；ADPKD组比对照组更容易发生泌尿道感染，且在ADPKD中泌尿道感染组较非泌尿道感染组的霉酚酸血药谷浓度要高（P<0.05）。结论 ADPKD患者移植术后长期维持需要的免疫抑制浓度可能要低于其他肾移植患者，且较高剂量的霉酚酸血药谷浓度与泌尿道感染的发生相关。

• 临床药师的抗凝监护可提高住院患者华法林治疗的有效性和安全性

  黄珈雯,张志东,黄成锋,李小辉,张晓慎,陆 华

  目的 通过对住院接受华法林抗凝治疗的病例进行回顾性分析，考察临床药师抗凝监护在华法林临床安全合理应用方面的作用。方法 本研究共纳入2016年4月~2017年12月期间住院接受华法林抗凝治疗的患者421例。其中监护组316例在抗凝期间接受临床药师抗凝监护，包括凝血酶原时间国际标准（INR）等抗凝指标、运行医嘱审核及体征监护等。对照组患者105例，在院接受华法林治疗期间无临床药师进行抗凝监护。通过回顾性分析，对比监护组和对照组患者在院抗凝治疗过程中抗凝指标达标情况、预警值出现率与及时处理率、患者出血或栓塞事件发生率等方面的差异。结果 在院服用华法林抗凝治疗期间，经临床药师进行抗凝监护的监护组患者INR在目标范围内的时间百分比（TTR）明显高于对照组［（73.20±9.46）% vs（46.32±17.11）%，P<0.001］，其中患者出院前INR值达标率显著高于对照组（98.42% vs 60.95%，P<0.001），INR监测时机合理率也明显高于对照组（97.15% vs 66.67%，P<0.001）。同时，监护组患者INR预警值出现的比例远低于对照组（8.23% vs 20.00%，P< 0.001），且及时处理率显著优于对照组（96.15% vs 33.33%，P<0.001）。另外，本研究监护组患者在院抗凝治疗过程中除了小出血事件的发生率显著低于对照组（2.53% vs 9.52%，P=0.005），其他临床事件发生率未见明显差异。结论 临床药师的抗凝监护可有效提高住院患者华法林抗凝治疗的有效性和安全性。

• 木犀草素通过逆转OPCML基因甲基化抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖

  董欣敏,郑 媞,张子英,白喜玲,李 华,张 剑

  目的 观察木犀草素对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖以及对OPCML基因表达的影响。方法 体外培养MDA-MB-231细 胞，加入终浓度为0（对照组）以及5、10和20 μmol/L的木犀草素处理孵育24 h或48 h后，MTT法检测细胞的增殖，流式细胞术检测细胞凋亡；并提取胞内总mRNA和蛋白，以实时定量PCR和Western blot检测OPCML的mRNA及蛋白变化；同时采用甲基化特异性PCR（MSP）检测OPCML启动子区域的甲基化水平，并分析细胞内甲基化酶的活性。结果 MTT结果显示，MDAMB-231细胞经5、10 以及20 μmol/L木犀草素孵育24 h后，随着浓度的递增，细胞活性逐渐降低（P<0.05）。流式细胞术结果也显示，不同浓度木犀草素可不同程度诱导MDA-MB-231细胞凋亡（P<0.05）。此外，木犀草素能以剂量依赖性方式诱导MDAMB-231细胞表达OPCML mRNA和蛋白（P<0.05）。MSP结果也显示，木犀草素可显著下调OPCML启动子的甲基化状态，上调非甲基化OPCML的水平，并能降低细胞内甲基化酶的活性（P<0.05）。结论 木犀草素可抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的增殖，其机制可能与影响OPCML基因的表达以及甲基化水平有关。

• 血栓弹力图评估慢性肾脏病患者凝血功能及其高凝状态的危险因素

  吴思弦,袁 浩,周毅峰,龙贞亦,彭亚梦,彭 芳

  目的 应用血栓弹力图分析慢性肾脏病患者凝血变化特征及影响CKD患者高凝状态的危险因素。方法 选取2018年8月 ~2019年5月本院收治的慢性肾脏病患者128例作为观察组，在本院体检的未患肾脏疾病的21名健康成年人作为对照组。比较不同阶段患者与对照组的常规凝血试验和血栓弹力图指标。根据血栓弹力图最大振幅（MA）将慢性肾脏病患者分为高凝组（MA>68 mm，n=66）和非高凝组（MA≤68 mm，n=62），比较两组间实验室指标，分析慢性肾脏病患者高凝状态影响因素。结果 与对照组相比，慢性肾脏病不同阶段患者纤维蛋白原 、D-二聚体水平明显增高（P<0.05），慢性肾脏病3~4期、慢性肾脏病5期未透析及慢性肾脏病5期血液透析患者反应时间、K-时间降低（P<0.05），而MA、α-角和凝血指数均升高（P<0.05）。高凝组与非高凝组在估算的肾小球滤过率、糖尿病比例、脑卒中史、中性粒细胞百分比、中性粒细胞淋巴细胞比值、红细胞计数、血红蛋白、血小板计数、血清肌酐、血清胱抑素-C、血清白蛋白、脂蛋白等方面差异均有统计学意义（P<0.05）。其中肾小球滤过率、血小板计数和血红蛋白水平是慢性肾脏病患者高凝状态的独立影响因素（P<0.05）。结论 随着病程的进展，慢性肾脏病患者的高凝状态逐渐加剧。肾小球滤过率、血小板计数和血红蛋白是慢性肾脏病患者高凝状态的危险因素。

• Kaiser评分在乳腺非肿块强化病变诊断中的可行性研究

  张 冰,冯琳琳,王 琳,陈 欣,李晓会,杨全新

  目的 评价Kaiser评分对乳腺非肿块强化病变的诊断效能。方法 收集2014年1月~2019年6月术前行乳腺3.0 T MRI检查的非肿块强化患者资料，所有病例均经术后病理或穿刺活检证实。以病理结果为金标准，计算并比较Kaiser评分及BI-RADS分类对乳腺非肿块强化病变的诊断效能，比较2种方法诊断结果与病理结果的一致性。结果 88例患者共90个非肿块病灶，良性病变28个（31.1%），恶性病变 62个（68.9%）。Kaiser评分诊断的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确性分别为100%、75%、89.9%、100%和92%；BI-RADS分类诊断的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和准确性分别为93.5%、46.4%、9.5%、76.5%和78.9%。Kaiser评分诊断特异性（75%）明显高于BI-RADS分类诊断（46.4%），差异有统计学意义（P= 0.021）。结论 Kaiser评分系统可以为乳腺非肿块强化病变的BI-RADS分类提供诊断策略，对乳腺非肿块强化病变的诊断效能优于单纯应用BI-RADS分类。对于经验尚浅的影像科医师使用Kaiser评分能够明显提高乳腺非肿块病变的诊断特异性。

• METTL14在肝细胞癌中的表达及临床意义

  周腾飞,任子夫,陈超爽

  目的 探究RNA甲基转移酶METTL14在肝细胞癌（HCC）中的表达，及其临床意义。方法 采用免疫组织化学染色的方法，检测METTL14在147对肝癌、癌旁肝组织中的表达，根据病理医师的评分，把147例肝癌组织表达分为METTL14高表达组与METTL14低表达组，通过卡方检验分析其表达量高低与临床病理指标的相关性；应用Kaplan-Meier方法分析METTL14表达水平与肝癌患者术后预后生存的关系，包括总生存期与无瘤生存期；运用COX回归模型对METTL14表达与肝癌患者术后的总生存期与无瘤生存期进行单因素分析以及多因素分析，以探索METTL14的表达水平是否可作为肝癌患者术后预后的独立预后危险因素。结果 与癌旁组织相比，METTL14在HCC组织中表达明显降低（P<0.001）；HCC组织中METTL14表达与HCC患者肿瘤大小（P=0.044）及TNM分期（P=0.046）相关；HCC组织中METTL14的低表达与患者的不良预后显著相关，其术后总生存期及无瘤生存期明显缩短（P<0.05），且是影响HCC患者术后总生存期及无瘤生存期的一个独立危险因素。结论 METTL14可能成为一种原发性肝癌切除术后的新的预后指标。

• 晚期糖基化终末产物对破骨细胞分化不同阶段的影响

  丁晓倩,胡 赟,罗 丹,唐 宇,李彩玉,郑雷蕾

  目的 探究晚期糖基化终末产物（AGEs）对破骨细胞分化不同阶段的影响。方法 利用核因子κB受体活化因子配体（RANKL）于体外诱导小鼠巨噬细胞系Raw264.7细胞进行破骨细胞向分化，通过抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色确定破骨细胞分化的不同阶段，并将细胞随机分为对照组、分化早期阶段干预组、分化晚期阶段干预组；用CCK-8法检测AGEs作用下的细胞活性；破骨细胞向诱导完成后进行TRAP染色，以RT-PCR 检测RANK、NFATC-1、TRAF-6、TRAP、CTSK的mRNA表达，以Western blot检测CTSK及RANK的蛋白表达。结果 将Raw264.7细胞破骨细胞向分化的前3 d划分为细胞分化早期阶段，之后为细胞分化晚期阶段；100 mg/L的AGEs对Raw264.7细胞的生长无明显影响；早期阶段干预组及晚期阶段干预组的TRAP染色阳性细胞数量均多于对照组，早期阶段干预组与对照组的差异具有统计学意义（P<0.05）；早期阶段干预组及晚期阶段干预组的RANK、NFATC-1、TRAF-6、TRAP、CTSK的mRNA表达均多于对照组，早期阶段干预组与对照组的差异具有统计学意义（P< 0.05）；CTSK及RANK的蛋白表达趋势与相关mRNA表达变化趋势一致。结论 AGEs可能对破骨细胞分化的不同阶段产生不同影响，AGEs于破骨细胞分化早期阶段加入对其分化的促进作用比在晚期阶段加入更明显。

• 和厚朴酚对人舌癌CAL-27细胞增殖、迁移及凋亡的影响

  汤凯淇,张 瑜,陈丽竹,屈 直

  目的 探讨和厚朴酚（HNK）对人舌鳞癌CAL-27细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法 采用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养CAL-27细胞。并将其分为对照组和3个实验组，实验组分别加入20、40、60 μmol/L的HNK进行处理。用MTT法检测不同浓度和厚朴酚对CAL-27细胞增殖的影响；划痕实验观察CAL-27细胞迁移能力；Hoechst33342荧光染色法和Annexin VFITC/PI法检测CAL-27细胞凋亡数及凋亡率；Western blot检测CAL-27细胞内p-Pi3k、p-Fak、Fak、MMP2、MMP9、p-Akt、Akt、Bax、Bcl-2和Cleaved-Caspase-3的蛋白表达量。结果 HNK（0、20、40、60 μmol/L）处理24 h后CAL-27细胞增殖、迁移能力减弱；且随HNK浓度增大细胞凋亡数升高，凋亡率分别为（6.53±1.80）%、（15.24±2.06）%、（35.03±2.42）%、（48.13±4.61）%，细胞内p-Pi3k、p-Fak、p-Akt、MMP2、MMP9和Bcl-2蛋白表达量减少而Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白表达量增加（P<0.01）。结论 HNK能抑制CAL-27细胞体外增殖及迁移，同时还能诱导其凋亡，作用机制可能与调控细胞内p-Pi3k、p-Fak、p-Akt、MMP2、MMP9、Bax、Bcl-2和Cleaved-Caspase-3的蛋白表达量有关。

• 新型冠状病毒肺炎治疗药物：磷酸氯喹

  莫立乾,郑 萍

  2019年新型冠状病毒肺炎（COVID-19）爆发以来，多种抗病毒药物先后试用于临床一线，我国《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第六版）》首次将磷酸氯喹纳入抗冠状病毒治疗的试用药物。作为抗击疟疾与风湿病的经典老药，磷酸氯喹在临床已应用80余年，而其在各种抗病毒治疗中，也表现出良好的效果。在COVID-19治疗中，氯喹在体内外均表现出抗病毒作用，个别临床研究的初步结果表明，其效果可能优于洛匹那韦/利托那韦。氯喹主要通过在寄生虫食物泡内和细胞溶酶体中积聚，提高其pH值而发挥抗寄生虫和抗病毒作用。在COVID-19的治疗中氯喹可能影响血管紧张素转化酶-2（ACE2）的糖基化，而抑制SARS-CoV-2表面的S蛋白与ACE2受体结合进入宿主细胞。在氯喹长年的临床应用中，发现其药代动力学特征表现也较为特异，半衰期长（2.5 d~10 d），表观分布容积巨大，在肝、脾、肾、肺中的浓度高于血浆浓度达200~700倍，而其在全血、血浆和血清中浓度也存在较大的差异，不同种族和个体间亦是如此。因此，氯喹稳态血药浓度范围与疗效间的关系目前尚不明确。氯喹毒性主要与超剂量使用相关，而且治疗剂量与毒性剂量和致死剂量十分接近。一般认为，氯喹单次剂量（基质）超过20 mg/kg就会有毒性，而超过30 mg/kg就能致死。因此，本文就磷酸氯喹在COVID-19治疗中的一些研究现状，及其药代动力学特点，抗病毒治疗与机制，以及氯喹的安全性作一综述。

• 肠道菌群——肝脏疾病的重要参与者

  王芳昭,崔茜如,曾雨浓,陈 鹏

  肠道菌群是一个复杂且多样化的生态系统，各类菌群之间存在着特定的共生关系，同时，胃肠道与肝脏之间通过门脉循环形成紧密的解剖、功能双向联通网络，进而相互维持稳态。“肠-肝轴”理论在肝脏疾病的发病机制中具有深远意义，越来越多的研究证实肠道菌群与肝脏疾病密切相关，它们可以通过多种方式和通路影响肝脏病理生理学进程。在病理情况下，由于各种原因导致菌群生态失调、功能紊乱时，肠道菌群则会与宿主免疫系统及其他类型细胞产生多种相互作用，进而导致肝脏脂肪变性、炎症、纤维化，继而引发各类肝脏疾病，如酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病、原发性硬化性胆管炎、急性肝衰竭、肝细胞癌等。越来越多关于益生元/益生菌改善肝病的报道逐渐打开了以菌治病的新世界。因此，肠道微生物群落里隐藏的潜在信息和价值是无穷的。为了更加全面地探究各类复杂疾病的病理生理机制，我们仍需继续深入了解某些特定的肠道微生物在参与肝脏损伤进程、改善疾病进程方面的重要作用，为找寻科学有效的临床治疗方法奠定基础。现有综述报道很少同时阐述肠道菌群与急性及慢性肝脏疾病的密切关系。本文以此为出发点，探讨近年来关于急性及慢性肝损伤的研究成果，并得出结论：肝脏的解剖结构促成其与肠道菌群形成彼此沟通的紧密网络，而肠道菌群则是调节肝脏生理、病理功能的重要参与者。

• SARS-Cov-2实验室检测技术的应用及展望

  肖 斌,周 泉,雷 婷,何咏茵,李林海

  新型冠状病毒肺炎疫情爆发以来，我国的病毒检测能力不断提高，检测技术也在不断地发展和创新。以实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和宏基因组测序为代表的病毒检测技术在辅助疾病确诊、监测病毒变异等方面发挥了关键作用；基于血清/血浆IgM/IgG抗体的检测技术是辅助确诊的重要方法；高特异性的逆转录环介导等温扩增技术、能够核酸定量的数字PCR和灵敏度更高的SHERLOCK技术也极具特色与发展潜力。以上检测技术代表了病原微生物检测技术的现在及未来发展方向。本文对新型冠状病毒检测技术的基本原理、技术特点及应用现状进行探讨。

• 临床实验室检测新型冠状病毒感染防控预案的制定及疫情后时代应对策略的思考

  杭建峰,孙朝晖,李林海

  2019年底爆发的新型冠状病毒（SARS-CoV-2）肺炎疫情在国内已经得到有效遏制，但感染已呈全球扩散之势。结合《2019 新型冠状病毒肺炎临床实验室生物安全防护指南（试行第二版）》和《2019 新型冠状病毒肺炎临床实验室生物安全防护专家共识》，我们制定了临床实验室检测新冠感染防控预案并对其执行现状和暴露出的问题进行了分析，认为在应对重大疫情时大部分临床实验室（包括临床基因扩增实验室）的设计布局不合理，不能达到相应的生物安全防护要求，无法开展相应的病原学及血清学检测；实验室人员的生物安全防护意识严重弱化；医院发热门诊检验室的检测能力不足，其功能和地位急需加强；而军队人员聚集程度高，其临床实验室设备自动化程度低，甚至没有相应的生物安全柜和足够的个人防护用品，无法满足军队遂行多样化及海外重大任务的需要。针对这些问题和现状，我们也提出相应的对策和建议供大家参考：临床实验室可以参照P2实验室的标准来规范设计布局和人员管理；而发热门诊检验室的检测能力和人员配备需要加强，有条件时可以配备单独的临床基因扩增实验室；对于不达标的临床基因扩增实验室，可按照相应的生物安全防护要求进行改建和升级；军队医疗系统的临床实验室除了加强人员的生物安全防护外，更要保证医疗物资和生物安全装备的供给充足，并尽可能常规配置生物安全柜等设备。