南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2022年第8期

• MYBL2在前列腺癌患者组织中高表达并与不良预后相关

  杨 明, 朱旭东, 沈 炀, 何 麒, 秦 远, 邵轶群, 袁 琳, 叶和松

  目的 探索骨髓母细胞增生症病毒癌基因同源物样2（MYBL2）基因对前列腺癌（PCa）患者临床预后和生物学行为的影响。方法 采用qRT-PCR检测MYBL2在45例PCa与癌旁前列腺组织的表达水平，根据MYBL2表达中位数，分为高（23例）低（22例）表达，采用非参数检验、Kaplan-Meier、单因素和多因素Cox法，并分析MYBL2高低表达与PCa的临床病理特征及预后相关性，利用癌症基因组图谱（TCGA）基因芯片数据库PCa数据集进行验证。基因集富集分析（GSEA）MYBL2高低表达可能参与调控的分子通路，CIBERSORT算法研究MYBL2与肿瘤免疫微环境的相关性。最后，体内实验中，通过建立阴性对照组（shCtrl）、敲减MYBL2组（sh-MYBL2）用细胞增殖毒性检测试剂盒（CCK8）和Transwell法检测各组细胞增殖和侵袭能力。qRT-PCR和Western blotting检测肿瘤细胞中MYBL2基因和蛋白的表达。在体内实验中，检测2组荷瘤小鼠瘤重和免疫组织化学方法观察荷瘤组织Ki-67的表达水平。结果 两组数据均显示：MYBL2在PCa组织中高表达，与Gleason评分、临床和病理分期正相关（P<0.01），与年龄无相关性；Kaplan-Meier分析MYBL2高表达与无生化复发生存期显著负相关（P<0.05），与总生存期无关。Cox回归分析：TCGA数据集中临床和病理分期，我们的数据中临床分期和Gleason评分是PCa无复发生存期的独立预后因素（P<0.05）。GSEA结果显示高表达MYBL2与免疫、细胞粘附、细胞因子等通路有关。CIBERSORT分析：MYBL2表达与B cells memory和Mast cells resting有关（P<0.05）。体外研究显示，与shCtrl组相比，shMYBL2组能显著抑制LNCaP、PC-3细胞增殖和侵袭（P<0.01）。体内研究显示，shMYBL2组PC-3荷瘤小鼠体内肿瘤的平均重和Ki67阳性表达率显著低于shCtrl组（P<0.01）。结论 MYBL2是一种致癌基因，与PCa多个病理指标相关，可以作为潜在的诊疗PCa患者预后的标志物和治疗肿瘤的靶标。

• 敲低WDSUB1通过抑制NF-κB通路减轻实验性小鼠结肠炎

  王少鑫, 崔立红, 刘新尧, 罗 哲, 李 辉, 浦 江

  目的 采用体内转染小干扰RNA（siRNA）和口服葡聚糖硫酸钠（DSS）的方法构建小鼠结肠炎模型，研究WDSUB1对小鼠结肠炎症损伤的影响并探讨可能的机制。 方法 在小鼠成纤维细胞L929中转染不同的WDSUB1 siRNA序列，采用Western blotting (WB)检测的方法，选择WDSUB1敲低效果最佳的siRNA序列进行小鼠体内转染实验。选择12只雄性C57BL/6小鼠随机进行尾静脉注射siRNA（siWDSUB1/siControl），口服2.5% DSS饮用水，构建两组DSS诱导的结肠炎小鼠模型，根据siRNA不同，分为WDSUB1敲低组和对照组，6只/组。通过WB和RT-PCR方法验证两组小鼠结肠组织中WDSUB1的表达水平，记录实验过程中结肠炎小鼠的体质量及粪便性状，并进行临床症状评分。采用RT-PCR和WB方法，分别检测两组结肠炎恢复期小鼠结肠组织中炎性因子IL-6，COX-2，TNFα的mRNA表达水平，以及NF-κB通路中IκBα和P65的表达变化。结果 L929细胞中转染不同WDSUB1 siRNA 序列后，选择敲低效果最佳的WDSUB1 2#完成体内转染，构建结肠炎小鼠模型。RT-PCR和WB结果均表明，WDSUB1敲低组小鼠的结肠组织中WDSUB1 mRNA和蛋白表达均明显低于对照组（P<0.05）。在分析两组小鼠结肠炎症状时，WDSUB1 敲低组结肠炎小鼠的体质量丢失明显少于对照组，腹泻和便血程度较对照组也明显减轻（P<0.05）。WDSUB1敲低组小鼠结肠组织中COX-2，IL-6和TNFα mRNA均明显低于对照组（P<0.05），且IκBα表达明显受抑制，而p65表达无明显变化。结论 敲低WDSUB1能够减轻实验性小鼠结肠炎症程度，此过程可能是通过抑制NF-κB通路和炎性因子表达实现的。

• 干扰CTPS基因促进川楝素诱导的人胃癌MKN-45细胞凋亡

  罗海静, 潘 阳, 陈 雯, 张伟伟, 邵淑丽, 杨清竹, 李 铁

  目的 探讨干扰CTPS基因对川楝素诱导的胃癌MKN-45细胞凋亡的影响。方法 通过生物信息学分析CTPS基因在人胃癌组织中的表达情况以及CTPS基因高表达的胃癌患者的总生存期。以人胃癌MKN-45细胞为实验材料，构建CTPS基因干扰载体，转染MKN-45细胞48 h后，采用qRT-PCR和Western blot检测CTPS基因mRNA和蛋白表达情况。用80 nmol/L的川楝素处理干扰CTPS基因的MKN-45细胞48 h，使用MTT实验法检测细胞存活率，激光共聚焦显微镜观察细胞形态，免疫荧光法检测γH2AX的表达。结果 生物信息学分析发现CTPS在人胃癌组织中高表达，CTPS基因高表达的胃癌患者总生存期短。向MKN-45细胞中分别转染Sh-ctrl空载体和Sh-CTPS干扰载体，qRT-PCR和Western blot检测显示，与转染Sh-ctrl空载体相比，转 染Sh-CTPS干扰载体的MKN-45细胞中CTPS mRNA和蛋白表达均降低，其中转染ShCTPS-3干扰效果最显著，分别降低了85.21%和53%（P<0.001）。检测细胞存活率及形态变化显示，与Sh-ctrl组相比，ShCTPS-3组细胞存活率降低（P<0.01），细胞皱缩，形态不规则，呈现凋亡特征，细胞凋亡率升高（P<0.05）；在此基础上用80 nmol/L的川楝素处理转染Sh-ctrl和ShCTPS-3的MKN-45细胞48 h，与Sh-ctrl+川楝素组相比，ShCTPS-3+川楝素组细胞存活率降低（P<0.001），细胞出现凋亡小体，细胞凋亡率升高（P<0.05）。结论 干扰CTPS基因促进川楝素诱导的胃癌MKN-45细胞凋亡。

• 长链非编码RNA ZEB1-AS1通过HMGB1/TLR-4信号轴加剧大鼠脑缺血/再灌注损伤

  王 静, 陈雪祎, 孙 丽, 陈雪梅, 李 慧, 熊彬睿, 王海华

  目的 探讨长链非编码RNA ZEB1-AS1在脑缺血/再灌注损伤（CI/RI）中的作用及其机制。方法 通过脑中动脉闭塞构建雄性SD大鼠局灶性CI/RI模型，实时定量PCR和Western blot分别检测ZEB1-AS1和HMGB1的时序表达并确定了CI/RI最佳时间（2 h/24 h）。将大鼠分为Sham组、CI/RI组、CI/RI+si-NC组、CI/RI+si-ZEB1-AS1组、CI/RI+OE-NC组、CI/RI+OE-ZEB1-AS1 组。向CI/RI大鼠侧脑室注射ZEB1-AS1沉默/过表达载体及对照载体后，通过神经功能缺损评分和转盘实验分析认知功能；干湿重法分析脑水含量；Western blot检测白蛋白水平以评价血脑屏障完整性；ELISA法分析脑脊液和血清IL-1β和TNF-α水平。分别用FJC和TUNEL法检测CI/RI大鼠皮层中神经元丢失和细胞凋亡情况，Western blot分析HMGB1和TLR-4水平。此外，体外建立SH-SY5Y细胞氧-糖剥夺/复氧模型来模拟缺血/再灌注微环境，TUNEL法、Hoechst 33258染色、流式细胞术检测ZEB1-AS1 沉默对神经元凋亡的影响；Western blot 分析 HMGB1 和 TLR-4 水平。结果 qPCR 和 Western blot 结果显示，ZEB1-AS1和HMGB1在CI/RI大鼠脑组织中的表达随着再灌注时间的延长升高（24 h达到峰值），而后逐渐降低。神经功能缺损评分和转盘试验结果显示，与OE-NC组相比，ZEB1-AS1过表达加重了CI/RI大鼠认知功能受损（P<0.05）；而si-ZEB1-AS1组大鼠的认知功能则好于 si-NC 组（P<0.01）。OE-ZEB1-AS1 组大鼠的脑水含量高于 OE-NC 组（P<0.05）；而与 si-NC 组相比，si-ZEB1-AS1组大鼠的脑水含量减少（P<0.01）。血脑屏障渗漏检测数据提示，si-ZEB1-AS1组大鼠脑脊液中白蛋白的含量低于si-NC组（P<0.01）；OE-ZEB1-AS1组大鼠脑脊液中的白蛋白含量则高于OE-NC组（P<0.05）。ELISA结果显示，si-ZEB1-AS1组大鼠脑脊液和血清IL-1β和TNF-α水平低于si-NC组（P<0.01）；而OE-ZEB1-AS1组大鼠脑脊液和血清IL-1β和TNF-α含量高于OE-NC 组（P<0.01）。OE-ZEB1-AS1 组大鼠皮层 FJC 阳性神经元数量高于 OE-NC 组（P<0.01）；与此相反，si-NC 组相比，ZEB1-AS1敲减则降低了FJC阳性神经元数量（P<0.01）。Western blot结果显示，与OE-NC组相比，ZEB1-AS1过表达促进了HMGB1和TLR-4水平（P均<0.01）；而ZEB1-AS1敲减则产生相反的结果（P<0.01）。细胞水平上，与si-NC组相比，ZEB1-AS1敲减降低了 TUNEL阳性细胞数（P<0.01）；流式细胞术检测结果进一步证实该现象。此外，Western blot结果进一步证实，ZEB1-AS1敲减下调了HMGB1和TLR-4水平（P均<0.01）。结论 长链非编码RNA ZEB1-AS1通过HMGB1/TLR-4信号轴加剧脑缺血/再灌注损伤。

• 68Ga-PSMA-I&T PET/CT评估初诊前列腺癌原发灶的肿瘤负荷

  谢 彦, 李 澄, 张露露, 俞 飞, 臧士明, 王书奎, 王 峰

  目的 探讨68Ga标记的前列腺特异性膜抗原（PSMA）PET/CT原发灶肿瘤负荷在预测初诊前列腺癌（PCa）危险分层和转移风险中的价值。方法 回顾性纳入2018年6月~2019年7月行68Ga-PSMA-I&T PET/CT检查的36 例初诊PCa患者，年龄56~89岁，平均年龄71.3±8.6 岁。测量出PCa患者原发病灶最大标准化摄取值（SUVmax）和平均标准化摄取值，分析病灶组织对68Ga-PSMA-I&T的摄取程度。采用三维体积分割技术自动测量出所有PCa患者原发病灶PSMA肿瘤体积（PSMA-TV）并计算出病灶PSMA代谢（TL-PSMA），分析原发灶SUVmax、PSMA-TV、TL-PSMA与血清前列腺特异性抗原(PSA)、Gleason评分(GS)的相关性。所有患者分别根据PSA水平、GS、是否转移和危险程度进行分组，包括PSA≤20 ng/mL组（22例）和PSA>20 ng/mL组 （14例），GS≤7组（18例）和GS≥8（18例），非转移组（23例）和转移组（13例）、低-中危组（16例）和高危组（20例），比较不同亚组间PCa的原发病灶SUVmax、PSMA-TV、TL-PSMA之间的差异。用spearman等级相关分析不符合正态分布的定量数据之间的相关性，用Pearson相关系数分析正态分布的定量数据之间的相关性。结果 PCa原发灶SUVmax、PSMA-TV和TL-PSMA和PSA都有相关性（r分别为 0.463，0.550和0.638，P均<0.05），SUVmax、PSMA-TV和TL-PSMA和GS都有相关性（r分别为 0.467， 0.437，0.540，P均<0.05）。PCa亚组分析显示：PSA>20 ng/mL组的SUVmax、PSMA-TV和TL-PSMA均显著高于PSA≤20 ng/mL组（z分别为 -3.606，-4.035和 -4.265，P均<0.001）。GS≥8组的SUVmax、PSMA-TV和TL-PSMA均显著高于GS≤7组（z分别为 -3.512，-4.145和 -3.987，P均<0.001）。转移组的PSMA-TV和TL-PSMA均显著高于非转移组（z分别为 -2.734，-2.421，P均<0.001），而非转移组和转移组SUVmax的差异无统计学意义。高风险组的SUVmax、PSMA-TV和TL-PSMA均高于低-中风险组，差异有统计学意义（z分别为-3.273，-4.155和 -4.298，P分别为0.002，<0.001，<0.001）。结论 68Ga-PSMA-I&T PET/CT肿瘤负荷体积参数PSMA-TV和TL-PSMA在预测初诊PCa危险分层和转移风险中具有一定的潜在优势。

• 基于系统性炎症指标构建的列线图可预测心力衰竭患者的不良结局

  刘昭君, 周晓莉

  目的 基于系统性炎症指标，构建列线图评估心力衰竭患者不良结局的风险。方法 回顾性分析2017年6月~2019年6月在重庆医科大学附属第一医院心血管内科住院的430例心力衰竭患者的临床资料。将患者按照7∶3比例随机分为建模组（n=286）和验证组（n=144），采用COX回归分析筛选心力衰竭预后的危险因素，并构建列线图。使用校准曲线评估列线图的预测准确性，使用决策曲线分析（DCA）和 Kaplan-Meier 曲线评估列线图的临床实用性。结果 多因素COX回归分析结果显示，年龄（P=0.03）、体质量指数（BMI，P=0.002）、纽约心功能分级（NYHA分级，P<0.001）、高血压（P=0.004）、淋巴细胞计数（P<0.001）、血小板淋巴细胞计数（PLR，P=0.007）、中性粒细胞淋巴细胞计数（NLR，P<0.001）和系统炎症反应指数（SIRI，P<0.001）是心力衰竭的独立预后因子。利用这些预后危险因素构建列线图，结果显示其预测性能良好：在建模组和验证组中，列线图C指数分别为0.719 (95% CI: 0.680~0.758)和0.732 (95% CI: 0.693~0.771)。校准曲线显示，该模型在预测HF患者的不良结局方面（心血管再入院或全因死亡）具有较好的一致性。结论 联合系统性炎症指标和传统危险因素构建的列线图在HF患者不良结局预测方面性能良好。

• 寒冷胁迫可降低秀丽隐杆线虫的寿命和活动能力：通过介导脂代谢紊乱和应激反应异常

  石 皓, 张 超, 赵嘉敏, 李逸文, 李允家, 李俊杰, 曾志云, 高 磊

  目的 探究秀丽隐杆线虫成虫在低温环境下的脂代谢、应激反应变化。方法 将同步化后的野生型及基因修饰型秀丽隐杆线虫成虫随机分为对照组和实验组，分别在20 ℃适宜条件和4 ℃低温暴露培养，观察其生存率、活动能力，评估非冷冻性极端低温对秀丽隐杆线虫成虫的寿命和活动能力影响；通过油红O染色和脂代谢相关基因表达检测，评价低温状态下秀丽隐杆线虫成虫脂代谢变化；通过线粒体荧光染色，应激相关基因、蛋白，抗氧化相关基因、蛋白的表达水平变化评估低温对秀丽隐杆线虫应激水平的影响。结果 4 ℃低温环境显著降低秀丽隐杆线虫成虫寿命（P<0.0001）和活动能力（P<0.0001）；同时，降低虫体脂质累积（P<0.05），降低脂肪酸合成和代谢相关基因fat-5，fat-6，fat-7，fasn-1，nhr-49，acs-2，aco-1表达 (P<0.01）；低温增强了热休克蛋白hsp-70，hsp-16.2表达(P<0.05），但是降低了线虫线粒体数目（P<0.0001）和线粒体未折叠蛋白反应相关蛋白atfs-1的表达(P< 0.05），降低了抗氧化酶sod-2，sod-3，gpx-1表达（P<0.01）。敲除秀丽隐杆线虫fat-5基因，或nhr-49基因，或同时敲除fat-5和fat-6基因能够加重寒冷导致的活动能力抑制（P<0.05），并显著降低虫体24 h生存率（P<0.0001）。结论 4 ℃非冷冻性低温使得秀丽隐杆线虫线虫成虫转变为低物质代谢和低能量代谢的状态，出现脂肪代谢水平降低，线粒体数量和质控能力降低，进一步诱发应激相关基因高表达和抗氧化酶含量降低，导致秀丽隐杆线虫活动能力和寿命降低。

• FUT8调控TGF-β1介导的肺成纤维细胞纤维化的机制

  高崴崴, 刘待见, 张晓萍, 冯青青, 刘 颖

  目的 探讨α-1，6岩藻糖基转移酶（FUT8）对人胚肺成纤维细胞（MRC-5）增殖、迁移和纤维化的作用及可能机制。方法 将24只C57/BL6小鼠随机分为对照组、博莱霉素组、sh-NC组和sh-FUT8组，应用Masson染色观察肺纤维化情况。细胞实验分别设置对照组：MRC-5正常培养；TGF-β1组：TGF-β1处理MRC-5；si-NC组：si-NC转染MRC-5后TGF-β1处理；si-FUT8组：si-FUT8转染MRC-5后TGF-β1处理；Gal-3组：si-FUT8和pcDNA3.1-Gal转染MRC-5后TGF-β1处理。CCK-8和BrdU方法检测细胞增殖；划痕实验检测细胞迁移；RT-qPCR和Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SM A）、I型胶原蛋白（COLIA1）和细胞外基质纤维连接蛋白（FN）的表达水平。同时，免疫共沉淀检测了FUT8与半乳糖凝集素-3（Gal-3）的作用及沉默FUT8对FAK/Akt信号通路的调节。结果 沉默FUT8显著降低博莱霉素诱导的小鼠肺组织细胞外胶原沉积。沉默FUT8抑制TGF-β1介导的细胞增殖（186.81±6.29 vs 118.09±9.48，P<0.05）和迁移。FUT8缺失下调α-SMA、COLIA1和FN的mRNA和蛋白表达水平（P<0.05）。此外，FUT8可直接与Gal-3作用。沉默FUT8下调Gal-3的表达并抑制FAK/Akt信号通路，过表达Gal-3逆转FUT8对细胞增殖、迁移和纤维化的作用（P<0.05）。结论 FUT8通过调控Gal-3调控TGF-β1介导的MRC-5细胞增殖、迁移和纤维化，FAK/Akt信号通路可能参与了这个过程。

• 肾细胞癌与乏脂肪肾血管平滑肌脂肪瘤的鉴别分类模型：基于随机投影的多分类器分层融合框架

  莫天澜, 吴煜良, 杨蕊梦, 甄 鑫

  目的 研究基于随机投影的多分类器分层融合的分类模型对良性肾小肿块乏脂肪肾血管平滑肌脂肪瘤（<4 cm）（AMLwvf）和恶性肾小肿块肾细胞癌（RCC）的鉴别能力。方法 回顾性收集163例经病理证实存在肾小肿块的患者，其中118例为肾细胞癌，45例为乏脂肪肾血管平滑肌脂肪瘤，对平扫CT图像中病灶面积最大的代表性切片进行目标感兴趣区域（ROI）勾画，利用放射组学特征构建一个层次型的融合框架。在投影域水平上对同质分类器进行融合，然后在分类器水平上对融合结果进行进一步融合，最终得到基于随机投影的多分类器分层融合的AMLwvf和RCC鉴别分类模型。采用五折交叉验证方法和特异性（SPE）、灵敏度（SEN）、准确率（ACC）、ROC曲线下面积（AUC）评价AMLwvf与RCC鉴别分类模型的性能。将本研究所提模型与使用单一基分类器算法以及几种传统的集成模型对AMLwvf和RCC的鉴别分类能力进行定量比较，验证本研究所提鉴别模型的可行性和有效性。结果 投影数设置为10时，本文提出的分层融合鉴别模型在所有指标上获得最好的结果。基于投影数为10的前提，五折交叉验证结果显示本研究所提出的基于多分类器分层融合的AMLwvf和RCC鉴别分类模型的SPE、SEN、ACC、AUC分别为：0.853、0.693、0.809、0.870。结论 基于随机投影的多分类器集成分类系统构建的AMLwvf和RCC鉴别模型可以很好地对 AMLwvf 和 RCC 进行鉴别分类。同时与基于单一分类器算法以及其他多分类器集成系统构建的AMLwvf和RCC的鉴别模型相比，本文所提出鉴别模型在AMLwvf和RCC的鉴别分类任务中具有较大优势。

• FNDC1在肺腺癌中高表达并与不良预后相关

  洪海宁, 朱浩楠, 李 超, 臧 超, 桑海威, 陈力维, 王安生

  目的 研究Ⅲ型纤连蛋白结构域1（FNDC1）蛋白在肺腺癌组织中的表达及临床意义。 方法 采用GEO数据库及GEPIA预 测FNDC1在肺腺癌的表达水平，进一步对92例肺腺癌组织及配对的相邻正常组织进行免疫组化染色，验证FNDC1的表达。分析FNDC1表达与肺腺癌患者临床特征之间的关系，使用Cox生存分析进一步研究其预后价值。 结果 GEO数据库及GEPIA结果显示，肺腺癌组织中FNDC1的表达水平高于其配对的正常组织（P<0.05）。Kaplan-Meier生存分析显示，FNDC1蛋白表达量较高的患者的总生存期较短（P=0.035，0.036，0.00029）。免疫组化结果显示，与正常肺组织相比，肺腺癌组织FNDC1蛋白表达水平升高（P<0.001）。FNDC1蛋白的高表达与临床分期（P=0.044）、T分期（P=0.047）、N分期（P=0.003）存在相关性。Cox单变量及多变量回归生存分析结果显示，FNDC1表达水平增加是肺腺癌患者预后不良的独立危险因素（P<0.05）。结论 FNDC1蛋白在肺腺癌患者中高表达且与肺腺癌的发生发展及预后密不可分，有可能成为判断肺腺癌患者生存预后的标志物。

• miR-372-5p促进结直肠癌细胞的转移：通过靶向PTEN调控PI3K/AKT/CXCL12信号通路

  时秀茹, 魏 可, 吴雨伦, 王文锐, 杨清玲, 陈昌杰

  目的 探讨miR-372-5p通过靶向PTEN调控PI3K/AKT/CXCL12信号通路对结直肠癌细胞迁移能力的影响及机制。 方法 qRT-RCR检测miR-372-5p在结直肠癌和癌旁组织及结直肠癌细胞和正常肠上皮细胞中的表达；生物信息学和双荧光素酶实验验证miR-372-5p与PTEN的靶向关系；Western blotting检测转染inhibitor-NC/mimics-NC（miR-372-5p抑制剂/类似物的阴性对照）、miR-inhibitor（miR-372-5p抑制剂）、miR-mimics（miR-372-5p类似物）以及共转染miR-inhibitor+si-PTEN（PTEN干扰）、miR-mimics+PI3K抑制剂对PTEN、CXCL12表达和PI3K/AKT信号通路激活水平的影响；Transwell实验、划痕实验检测以上各组、共转染miR-mimics+si-CXCL12（CXCL12干扰）以及转染mimics-NC、miR-mimics后的HCT116条件培养基对细胞迁移能力的影响。结果 结直肠癌组织中miR-372-5p较癌旁组织表达升高，相对于NCM460，HCT116较SW620中miR-372-5p表达上调更显著（P<0.01）；双荧光素酶实验证实PTEN是miR-372-5p的潜在靶基因（P<0.05）。相较于NC组，miR-mimics可降低PTEN蛋白表达水平，增加CXCL12蛋白表达水平和AKT磷酸化水平，提高HCT116迁移能力；而miR-inhibitor则导致相反的结果（P<0.05），si-PTEN可中和miR-inhibitor的作用（P<0.01）；PI3K抑制剂可降低CXCL12的蛋白表达水平，并抑制HCT116迁移能力（P<0.05），而miR-mimics可中和这一作用（P<0.01）；miR-mimics转染HCT116的条件培养基可提高NCM460的迁移能力（P<0.01），联合si-CXCL12可逆转miR-mimics对HCT116转移的促进作用（P<0.01）。结论 miR-372-5p通过靶向PTEN激活PI3K/AKT信号通路，上调CXCL12的表达，从而促进结直肠癌细胞的迁移能力。

• CENPU在结直肠癌组织中高表达并对患者的远期预后有评估价值

  张小凤, 杨 子, 胡秋子, 左芦根, 宋 雪, 耿志军, 李 静, 王月月, 葛思堂, 胡建国

  目的 分析着丝粒蛋白U（CENPU）在结直肠癌组织中的表达及对远期预后的评估价值。方法 2005年1月~2011年12月，纳入我院结直肠癌根治术患者102例，免疫组化分析CENPU在结直肠癌组织中的表达水平；以CENPU相对表达量的中位数为界将患者分为CENPU低表达组（n=51）和CENPU高表达组（n=51），并进一步分析其对术后患者远期预后的评估价值；在体外采用慢病毒转染的方式将结直肠癌细胞株分为正常对照组、CENPU低表达组及CENPU高表达组，并通过CCK-8和Transwell实验分析其对结直肠肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 结直肠癌组织中CENPU在蛋白水平上较癌旁组织显著高表达（t=30.45，P<0.05），且CENPU表达量与Ki67（r=0.569，P<0.05）及VEGF-C间均呈显著正相关关系（r=0.629，P<0.05）；结直肠癌组织中CENPU表达水平与患者肿瘤进展及临床病理分期密切相关（P<0.05）；K-M生存分析显示CENPU高表达组患者术后总生存期（Log-rank χ2=11.155，P<0.05）显著降低；多因素Cox回归分析显示CENPU表达水平是影响结直肠癌患者术后总生存期的独立危险因素（HR=1.848，P<0.05）。此外，体外实验显示CENPU可促进结直肠肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。结论 CENPU在结直肠癌组织中高表达，且与肿瘤进展密切相关，有望成为评估根治术后结直肠癌患者远期预后的潜在分子标志物。

• 和厚朴酚可体外减轻阿霉素诱导的心肌毒性：基于激活AMPK/Nrf2信号通路抑制细胞焦亡

  熊凤梅, 刘瑞萍, 李 洋, 孙 娜

  目的 探讨和厚朴酚（HKL）改善阿霉素（DOX）诱导的H9c2心肌细胞毒性的作用及机制。方法 采用DOX处理H9c2细胞心肌毒性模型，随机分为4组：正常对照组、DOX处理组（DOX）、HKL和DOX共处理组（DOX+HKL）以及HKL、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）抑制剂和DOX共处理组（DOX+HKL+AMPK抑制剂）。24 h后观察细胞形态变化，用CCK-8法检测细胞活力，RT-PCR检测炎性因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-1β（IL-1β）的mRNA水平，Western blot检测裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）、细胞色素c和细胞焦亡分子NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（Caspase-1）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）以及p-AMPK、红系衍生核因子相关因子2（Nrf2）的表达，免疫荧光染色观察NLRP3和p-AMPK的表达。结果 和正常对照组相比，DOX组H9c2细胞变得肿胀且细胞活力明显降低（P< 0.05），TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA水平显著增加（P<0.05），同时裂解的caspase-3、细胞色素c、NLRP3、Caspase-1和ASC表达增加（P<0.05），p-AMPK和Nrf2表达降低（P<0.05），NLRP3荧光染色强度增加，p-AMPK荧光强度降低；和DOX组相比，DOX+HKL组细胞肿胀减轻，细胞活力明显增加（P<0.05），TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA水平显著降低（P<0.05），裂解的caspase-3、细胞色素c、NLRP3、Caspase-1和ASC表达降低（P<0.05），而p-AMPK和Nrf2表达增加（P<0.05），另外NLRP3荧光染色强度降低，p-AMPK荧光强度增加；和DOX+HKL组相比，AMPK抑制剂可以逆转HKL对DOX心肌的保护作用。结论 HKL可通过抑制细胞焦亡减轻DOX引起的H9c2心肌细胞毒性损伤，这一作用与激活AMPK调控Nrf2信号有关。

• 初级听觉皮层对声音刺激的听觉响应模式

  郑钦洪, 宋长宝, 梁妃学

  目的 通过在体电生理和神经网络建模来探讨初级听觉皮层的不同听觉响应模式及其特性。方法 以SPF级C57BL/6J小鼠的初级听觉皮层（A1）神经元为研究对象，采用玻璃微电极细胞贴附式记录和神经网络建模方法，研究清醒状态下A1神经元在不同时长噪声刺激下对声音刺激产生响应模式的变化。以表征A1脑区听觉响应模式多样性为目的记录大量A1神经元信号，实验结束后统计共使用20只清醒小鼠，总计有216例A1神经元进行目标声音刺激序列扫描，通过计算神经元信号的刺激时间直方图完成对A1神经元响应模式的分类及响应特性分析。以仿真A1神经元响应模式多样性为目的，基于威尔逊-考恩（Wilson-Cowan）模型和积分-发放（IF）模型进行建模，通过分析A1脑区中锥体神经元、小清蛋白神经元和生长激素抑制素神经元的微环路结构以确定模型中神经元连接权重参数，从而构建A1神经网络信息编码模型。结果 给予持续时间噪声刺激后，122例给声开始型神经元仅在给声开始后10~40 ms内产生快速尖峰响应；26例给声持续型神经元在给声过程中持续产生尖峰响应；40例给声开始-结束型神经元在给声开始后和结束后均产生快速尖峰响应；22例给声结束型神经元仅在给声结束后10~40 ms内产生快速尖峰响应；本研究的A1神经网络模型中，在100 ms声音刺激下锥体神经元、小清蛋白神经元和生长激素抑制素神经元的给声开始型电活动峰值分别为0.7483、0.5236和0.9427，响应半峰宽分别为18.5 ms、12 ms和31 ms；当改变模型中锥体神经元、小清蛋白神经元和生长激素抑制素神经元的前馈兴奋时间常数和突触抑制时间常数时，神经元可以产生多种不同的尖峰响应类型。结论 A1神经元对声音刺激主要有给声开始型、给声持续型、给声开始-结束型和给声结束型等听觉响应模式。

• 奥氮平连续处理后大鼠中缝背核组织差异表达蛋白的生物信息学分析

  黄 平, 朱 晶, 李 华, 王艳召, 汤益民, 刘 强

  目的 分析奥氮平连续处理的大鼠中缝背核蛋白的差异表达，探究奥氮平使用早期导致代谢障碍可能的中枢5-HT机制。方法 将40只SD大鼠随机分配到奥氮平组[灌胃奥氮平1.2 mg/(kg·d）]和对照组（灌胃等量0.9%氯化钠溶液），两组各分配10只雌性大鼠、10只雄性大鼠。给药1次/d，连续28 d。最后一次给药1 h后处理大鼠，并取大脑中缝背核样本。利用绝对和相对定量同位素标记技术联合液相色谱-串联质谱技术对大鼠中缝背核组织进行蛋白质组学分析，进一步对差异表达蛋白进行GO、KEGG通路、COG、蛋白互作网络分析。另将24只大鼠随机分为4组：2个奥氮平组和2个对照组（6只/组），类似方法得到大鼠中缝背核样本，根据蛋白质组学数据选择目标基因的表达进行qRT-PCR和Western blot验证。结果 筛选出奥氮平组与对照组大鼠中缝背核差异表达蛋白有72种上调、142种下调。GO注释分析显示，涉及奥氮平的差异表达蛋白参与细胞过程、生物调节、代谢过程、应激反应、多细胞生物过程以及结合、催化活性、分子功能调节、转录调节活性等分子功能。KEGG富集分析显示，涉及奥氮平的差异表达蛋白主要参与流体剪切应力与动脉粥样硬化、5-羟色胺能突触 、丁酸代谢、甲状腺激素合成 和IL-17信号通路等；PPI分析显示，涉及奥氮平的差异表达蛋白Hmgcs2、Cav1、Hsp90b1、Canx、Gnai1、MAPK9和LOC685513(Gng14）位于蛋白质互作网络的节点。qRT-PCR和Western blot结果显示，丁酸代谢和5-羟色胺(5-HT）能突触通路4个基因及其蛋白，其中丁酸代谢的关键调节基因Hmgcs2及其蛋白在药物处理组明显下调（P<0.01），5-羟色胺2受体调控的Slc6a4、Gnai1基因及其蛋白在药物处理组均出现显著高表达（P<0.05）。结论 奥氮平使用早期可能主要通过调控中缝背核组织Hmgcs2、Cav1、Hsp90b1、Canx、Gnai1、Slc6a4、MAPK9和Gng14等差异表达蛋白以及5-HT能突触通路等，参与大鼠机体代谢障碍的中枢5-HT作用机制。

• 治疗方式对中晚期人乳头状瘤病毒阴性口咽癌患者的生存率和生存质量的影响

  李建成, 郭 蕴, 崔文静, 孙 悦, 杨东昆, 刘 亮, 吴志刚

  目的 探讨中晚期人乳头状瘤病毒阴性口咽癌治疗方式和方法的改变对患者生存率和生存质量状况的影响，为口咽癌的治疗提供合适的治疗方案。方法 回顾分析我院2015年1月~2020年12月住院的口咽癌患者，通过病例分析及影像学资料、病理资料补充，共筛选出符合纳入和排除标准的405例患者，建立患者个人治疗资料信息库，按治疗方式对研究对象分类；通过随访采用Kaplan-meier、Log-rank计算和对比分析总生存率以及各种治疗方式的生存率；通过UW-QOL（4）问卷对无瘤生存者行生存质量自评，并通过统计学分析比较各种治疗方式的生存质量。结果 该研究对象按治疗方式共分为3类：化疗+手术+放疗（CSRT）146例、手术+放疗（SRT）138例、放疗+化疗（RCT）121例。1、3、5年的总体生存率85.1%、67.1%、56.9%，CSRT、SRT、RCT三种治疗方式生存率无统计学意义（P>0.05）。共发放UW-QOL（4）问卷280份，实收202份，回收率为72.14%，3种治疗方式生存质量问卷平均总分值比较顺序CSRT>SRT>RCT，统计学分析CSRT与SRT、RCT之间有统计学意义（P0.05）。结论 CSRT、SRT、RCT均可作为局部中晚期口咽癌治疗方式的选择，CSRT较SRT、RCT有较好的患者治疗后生存质量。

• 邻苯二甲酸二乙基己酯可能通过损伤血脑屏障诱导小鼠焦虑样行为和学习记忆障碍

  李 帆, 朱艳艳, 孙晓明, 胡慧娟, 周苗苗, 白怡雪, 胡 浩

  目的 探讨邻苯二甲酸二乙基己酯（DEHP）对小鼠焦虑样行为和学习记忆能力的影响及机制。方法 将40只雄性ICR小鼠随机分为对照组（0 mg/kg）和DEHP暴露组（10、50、100 mg/kg）。通过灌胃暴露DEHP 4周，再进行开场实验、高架十字迷宫实验和Morris水迷宫实验。取小鼠海马组织检测丙二醛（MDA）含量，取大脑进行HE切片观察海马组织形态学变化，检测海马组织紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的分子表达。结果 与对照组相比，4周DEHP暴露对各组小鼠体质量未造成明显的影响（P>0.05）。行为学实验表明，DEHP暴露组小鼠在开场中心区域的运动距离（P<0.05）和停留时间（P<0.05）少于对照组；在高架十字迷宫开臂区的运动距离和停留时间少于对照组（P<0.05）。在Morris水迷宫实验中，和对照组小鼠相比，DEHP暴露组小鼠找到平台的潜伏期明显延长（P<0.05），且穿越平台位置的次数减少（P<0.05）。HE染色可以观察到海马CA1至CA3区出现明显的椎体细胞坏死，海马组织中MDA含量增加（P<0.05），且与血脑屏障完整性相关的ZO-1和Occludin在基因（P<0.01）、蛋白（P<0.05）水平的表达也显著降低。此外，多元线性回归分析显示，DEHP诱导的小鼠焦虑样行为与学习记忆能力之间有密切的关联性。结论 DEHP暴露可能通过破坏血脑屏障，损伤海马椎体神经细胞，进而诱导小鼠焦虑样行为和学习记忆能力下降。

• 硬膜外分娩镇痛时间对分娩镇痛中转剖宫产麻醉方式的影响

  朱思颖, 魏大源, 张 丹, 贾 飞, 刘 波, 张 健

  目的 探索硬膜外分娩镇痛时间对分娩镇痛中转剖宫产麻醉方式的影响。方法 回顾性收集2019年7月~2020年6月于四川省妇幼保健院、成都市锦江区妇幼保健院接受硬膜外分娩镇痛并中转剖宫产的孕妇临床资料，根据剖宫产麻醉方式分组：硬膜外导管位置正确且镇痛良好则行硬膜外麻醉（硬膜外组），脊髓麻醉在麻醉医生综合判断后实施（脊髓组），即刻剖宫产以及硬膜外麻醉或脊髓麻醉失败选择全身麻醉（全麻组）。多因素Logistic逐步回归分析用于寻找影响中转剖宫产麻醉方式的风险因素。使用镇痛时间构建受试者工作曲线，通过Youden指数确定镇痛时间临界值，按临界值将孕妇分为两组，利用交叉表计算各组的相对危险度。结果 研究共纳入820例孕妇，其中硬膜外组615例（75.0%）、脊髓组186例（22.7%）、全麻组19例（2.3%）均为即刻剖宫产，无硬膜外麻醉或脊髓麻醉失败改为全身麻醉病例。硬膜外组镇痛时间8.2±4.7 h，脊髓组镇痛时间10.6±5.1 h，全麻组镇痛时间6.7±5.2 h。Logistic回归分析显示：镇痛时间每延长1 h（OR=1.094，95% CI 1.057~1.132，P<0.001）、术前宫口每开大1 cm（OR=1.066，95% CI 1.011~1.124，P=0.017）是硬膜外麻醉失败的独立风险因素。镇痛时间临界值为9.5 h，镇痛时间超过临界值的孕妇接受脊髓麻醉的相对风险度为1.204（95% CI 1.103~2.341，P<0.001）。结论 镇痛时间延长会增加硬膜外麻醉失败的风险，对镇痛时间超过9.5 h的非即刻剖宫产建议选择脊髓麻醉。

• 血清HBV RNA预测恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎患者疗效的价值

  朱 莹, 罗园香, 郭凤霞, 杨可立, 范慧敏, 刘翠珏, 黄 波, 唐小平, 关玉娟

  目的 探讨HBV RNA在乙肝抗病毒治疗过程中可能存在的预测价值。方法 研究59例恩替卡韦（ETV）治疗96月（或108月）的慢性乙型肝炎（CHB）患者的血清样本。在基线、3月、6月、9月、12月、36月、72月和96月（或108月）时检测HBV RNA水平、HBV DNA水平和血清学指标（HBeAg）。结果 在接受ETV抗病毒治疗12月、36月后，HBV RNA虽然有所下降，但HBV RNA转阴率变化无统计学意义（P>0.05），治疗72月后，甚至96（或108）月时，有33例患者的HBV RNA水平低于100 copies/mL，其中29例患者的HBV RNA低于检测下限，HBV RNA转阴率差异有统计学意义（P<0.05）。HBV RNA水平越低，HBeAg转阴率越高（P<0.05），年龄、HBV RNA与HBeAg转阴率呈正相关（P<0.05）。结论 随着ETV抗病毒治疗时间延长，HBV RNA的清除越彻底，其转阴率越高。本研究证实抗病毒时间、年龄与HBV RNA转阴率呈正相关，越早抗病毒治疗效果越好。HBV RNA可作为ETV治疗预测HBeAg是否转阴的指标。

• 氙气后处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤起保护作用：基于下调mTOR通路和抑制内质网应激介导的神经元凋亡

  罗 兰, 佟家祺, 李 璐, 金 沐

  目的 基于哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路和内质网应激（ERS）-凋亡通路探讨氙气后处理治疗大鼠脊髓缺血再灌注损伤（SCIRI）的作用机制。方法 将50只雄性SD大鼠随机分为5组：假手术组（Sham组），脊髓缺血再灌注组（I/R组），氙气后处理组（Xe组），脊髓缺血再灌注+雷帕霉素组（I/R+Rapa组），氙气后处理+雷帕霉素组（Xe+Rapa组）（10 只/组）。通过夹闭腹主动脉85 min，再灌注4 h建立大鼠SCIRI模型。手术前3 d，I/R+Rapa组和Xe+Rapa组的大鼠每天予以腹腔注射雷帕霉素（Rapa， 4 mg/kg），其余3组大鼠注射等体积的溶剂。缺血再灌注后1 h时，Xe组和Xe+Rapa组的大鼠经呼吸机吸入50%氙气+50%氧气混合气1 h。其余3组的大鼠予以50% 氮气+50%氧气混合气1 h。于再灌注4 h观察记录大鼠后肢运动功能后收集标本，进行HE染色、尼氏染色计数正常神经元数量，Western blot和RT-PCR方法分别检测脊髓组织中内质网应激通路［葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、激活转录因子6（ATF6）、肌醇需要酶1α（IRE1α）、RNA依赖的蛋白激酶样ER激酶（PERK）］、mTOR通路（mTOR和磷酸化mTOR（p-mTOR））以及凋亡信号（Bax、Bcl-2和Caspase-3）蛋白和mRNA表达。结果 与 Sham组相比，其余各组大鼠后肢运动功能评分显著降低（P<0.01），正常神经元数量减少；I/R组的GRP78、ATF6、IRE1α、PERK mRNA含量和蛋白水平明显升高（P<0.05或0.01），p-mTOR/mTOR比值、Bax/Bcl-2的比值及Caspase-3 mRNA含量和蛋白水平显著升高（P<0.01）。与I/R组相比，Xe组的GRP78、ATF6、IRE1α、PERK mRNA含量和蛋白水平明显降低（P<0.01），p-mTOR/ mTOR比值、Bax/Bcl-2的比值及Caspase-3 mRNA含量和蛋白水平显著下降（P<0.05或0.01）；I/R+Rapa组的GRP78、ATF6 mRNA含量和蛋白水平明显降低（P<0.01），p-mTOR/mTOR蛋白的比值、Bax/Bcl-2 mRNA的比值及Caspase-3含量和蛋白水平显著下降（P<0.01）。与Xe组相比，I/R+Rapa组和Xe+Rapa组的BBB评分和Tarlov评分明显降低（P<0.01）；Xe+Rapa组Caspase-3蛋白表达和Bax/Bcl-2 mRNA的比值显著见下降（P<0.05或0.01）。结论 氙气后处理通过抑制内质网应激和神经元凋亡对大鼠脊髓缺血再灌注损伤起保护作用，而mTOR通路部分介导了氙气后处理的脊髓保护作用。

• 聚集性林奇综合征家族一例报告

  朱秀君, 蔡林儿, 肖 静

  林奇综合征（LS）是一种常染色体显性遗传疾病，由于DNA错配修复（MMR）基因MLH1、MSH2、MSH6、PMS2等出现缺失，导致MMR基因功能缺失，最终导致基因组中高度重复DNA序列不稳定，最终导致肿瘤的发生。本文报道了1例LS相关子宫内膜癌患者，通过遗传咨询和基因检测，发现其背后的聚集性LS家族。临床上对评估有LS相关肿瘤家族史的患者，应考虑LS并进行MMR免疫组化检测，甚则行LS基因检测。诊断LS对个体和家庭成员有重要的临床意义，筛查和预防措施可最大限度地降低其罹患LS相关癌症的总体风险。