南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2019年第06期

• 人重组蛋白PDCD5抑制胶原诱导性关节炎大鼠来源的淋巴细胞增殖和炎性细胞因子分泌并促进活化的淋巴细胞凋亡

  王万林,毛春,肖娟

  目的研究腹腔注射人重组蛋白PDCD5（rhPDCD5）对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠脾脏来源的活化淋巴细胞的作用，探讨rhPDCD5对活化的脾细胞发挥免疫抑制作用的机制。方法将雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组，CIA动物模型+卵白蛋白（OVA）治疗组，CIA动物模型+rhTNFR:Fc治疗组，CIA动物模型+ rhPDCD5治疗组。第0天建立胶原诱导性类风湿性关节炎大鼠模型，第2 天到26 天腹腔注射给药。第28 天取脾脏制成单细胞悬液，体外用CII (20 μg/mL)和anti-CD3 (1 μg/mL)+anti-CD28（2 μg/mL）分别刺激活化48 h和72 h。ELISA检测细胞上清中细胞因子干扰素-γ（IFN-γ）和白介素-17A（IL-17A）的水平；[3H]掺入法检测活化脾细胞的增殖；流式细胞技术检测活化的CD4+ T淋巴细胞的凋亡。结果rhPDCD5处理的CIA大鼠来源的脾细胞经CII和anti-CD3+anti-CD28分别刺激活化之后，分泌的细胞因子IFN-γ 和IL-17A水平下降，增殖能力下降，CD4+ T淋巴细胞凋亡百分比上调。结论rhPDCD5通过抑制活化的脾细胞分泌炎性细胞因子，抑制活化的脾细胞增殖，促进活化的CD4+ T淋巴细胞凋亡多条途径发挥免疫抑制作用。

• 抗病毒联合抗肝纤维化治疗慢性乙型肝炎肝纤维化降低肝细胞癌发生：144周的前瞻性队列研究

  周宇辰,胡承光,袁国盛,刘俊维,任彦瑜,唐淬蓉,杨淑玲,戴琳,李园,杨定华

  目的比较不同抗病毒和抗肝纤维化联合方案治疗慢性乙型肝炎（CHB）-肝纤维化的疗效、安全性及肝细胞癌（HCC）的发生率。方法2010年6月~2018年6月在南方医科大学南方医院接受抗病毒治疗的CHB肝纤维化患者840例构成随访队列。性别、年龄（相差≤5岁）、HBeAg状态、肝脏硬度值测定（LSM）基本匹配后按1∶1分别进入3个队列的单用抗病毒药组（恩替卡韦、替诺福韦酯及阿德福韦酯3个抗病毒药，为对照组）和联合用药组（3个抗病毒药分别与复方鳖甲软肝片组联合，为观察组）。比较3 个队列6 组患者各随访时间点HBV DNA累积转阴率、丙氨酸转氨酶复常率、肝纤维化逆转程度及HCC的发生率等。结果随访满144周纳入分析的病例共749例。随着治疗时间的延长，与基线时比较，6组患者的HBV DNA累积转阴率均逐渐增加（均P<0.001）；丙氨酸转氨酶复常率也随着治疗时间的延长而逐渐升高（均P<0.001）。联合用药组均比单用药组显示出更好的逆转肝纤维化效果（χ2ETV队列=11.345，χ2TDF队列=10.160，χ2ADV队列=6.358，均P<0.05）。观察到144周访视点，单用恩替卡韦组、恩替卡韦联合复方鳖甲软肝片组、单用阿德福韦酯组以及阿德福韦酯联合复方鳖甲软肝片组的HCC发生率分别为2.2%、1.7%、1.7%、3.3%，替诺福韦酯队列的2组均无HCC病例发生，各组间的差别无统计学意义（χ2=6.813，P=0.138）；与文献报道的未抗病毒治疗的CHB随访3年7.2%的HCC发生率比较，本研究3年积累HCC发生率（1.3%，P<0.05）明显较低。结论抗病毒联合抗纤维化治疗能有效逆转CHB-肝纤维化，降低HCC发生率；替诺福韦酯可能在降低HCC发生方面更有优势。

• 转录组数据分析肺腺癌和肺鳞状细胞癌中基因的差异表达

  彭淑贤,李浔,刘琴,张颖恒,邹黎明,龚小莉,王苗淼,马晓冬

  目的对非小细胞肺癌两种亚型肺腺癌和肺鳞状细胞癌的基因差异表达进行生物信息学分析，寻找非小细胞肺癌潜在的生物学标志物运用于临床诊断，进而提高患者生存率。方法获取肺腺癌和肺鳞状细胞癌的基因表达谱分析数据集，使用R语言处理，t检验分析鉴定肺腺癌和肺鳞状细胞癌之间的转录组差异，并通过维恩图显示所鉴定的基因差异表达。从GEO获得差异表达的基因，用DAVID及IPA进行分析，进一步确定潜在可用于鉴别肺腺癌和肺鳞状细胞癌的几种信号通路和生物标记。利用TCGA数据和临床肺癌样本中的生物标记表达，验证Osteoarthritis pathway和LXR/RXR分别在肺腺癌和肺鳞状细胞癌的基因差异表达；挑选miR-181b-5p及其靶基因WNT5A和MBD2进行验证，收集23例肺鳞癌患者的肺肿瘤组织（23例肿瘤组织，实验组）及其邻近肺组织（23例癌旁肺组织，对照组），检测miR-181b-5p和其靶基因WNT5A和MBD2的表达差异用于鉴别肺腺癌和肺鳞状细胞癌。结果GEO数据分析结果揭示肺腺癌和肺鳞状细胞癌的差异表达基因：肺腺癌中有851个DEGs（276个上调，575个下调），而肺鳞状细胞癌中有885个DEGs（406个上调，479个下调）。DAVID和IPA分析差异表达基因结果显示，白细胞迁移和炎症反应在肺腺癌中比肺鳞状细胞癌富集程度更高，Osteoarthritis pathway在肺腺癌中是抑制状态，而在肺鳞状细胞癌中显示是激活状态。IPA对重要转录因子、细胞因子和miRNA的分析结果显示肺腺癌和肺鳞状细胞癌之间的区别主要是：转录因子（GATA4，RELA，YBX1，TP63 和MBD2）；细胞因子（WNT5A和IL-1A）和microRNA（miR-34a，miR-181b 和miR-15a）。其中miR-34a 和IL-1A、miR-15a 和YBX1、miR-181b 和WNT5A和MBD2 可作为鉴别非小细胞肺癌亚型的成对microRNA和mRNA靶点。临床样本实验结果支持miR-181b-5p 的表达上升和WNT5A的表达下调可视为诊断肺鳞状细胞癌的分子标记物。结论通过对转录组数据分析，发现了肺腺癌和肺鳞状细胞癌的候选基因、成对的microRNA鉴别肺腺癌和肺鳞状细胞癌，为其鉴别诊断和治疗提供了新的思路。

• 中链酰基辅酶A脱氢酶增强乳腺癌细胞的侵袭和转移能力

  俞殷珏,赵林丰,李荣

  目的探讨中链酰基辅酶A脱氢酶（ACADM）对乳腺癌细胞侵袭和转移能力的影响及潜在作用机制。方法采用大型癌症基因组数据库分析ACADM在乳腺癌组织及正常组织中表达量。上调及沉默乳腺癌细胞（MCF-7及T47D）中ACADM的表达，进行体外功能实验（噻唑蓝增殖实验、EdU实验、Transwell小室实验、Boyden体外侵袭实验），探究ACADM对乳腺癌细胞体外增殖、迁移及侵袭能力的影响，通过Western blot检测相关信号通路蛋白表达量，建立裸鼠尾静脉转移模型验证ACADM功能，利用苏木精-伊红染色法诊断肿瘤组织。结果Oncomine样本集提示ACADM的表达水平在乳腺癌组中显著高于正常乳腺组（P<0.05），过表达ACADM可提高乳腺癌细胞（MCF-7、T47D）的迁移和侵袭能力且促进了乳腺癌细胞上皮-间质转化过程，而沉默ACADM后乳腺癌细胞迁移和侵袭能力下降，动物实验进一步验证了ACADM能促进乳腺癌细胞侵袭及迁移能力。结论ACADM可促进乳腺癌细胞上皮-间质转化过程并提高其迁移、侵袭能力，在乳腺癌中扮演促癌基因的角色。

• 饮食中钠摄入量对腹透患者残余肾功能的影响：33例前瞻性研究

  胡剑霞,胡丽萍,龚妮容,张镭,田建伟,蒋建平

  目的探讨腹膜透析患者摄钠量与残余肾功能之间的关系。方法对33例稳定透析、规律随访的腹膜透析患者进行12月的随访观察。以3 d饮食记录计算患者的日摄盐量，以平均日摄钠量为依据，将患者分为低盐组（摄钠量≤3.0 g/d，19例）和高盐组（摄钠量>3.0 g/d，14例）。记录患者基线资料，检测患者残余肾功能、腹膜功能等指标。按1次/3月进行规律随访。记录尿量、腹透超滤量等临床指标，检测患者生化指标，评估患者残余肾功能、腹膜功能的变化情况。结果钠排泄总量与腹透患者钠摄入量呈正相关（r=0.536，P=0.0013）；腹透清除钠的总量与腹透患者钠摄入量呈正相关（r=0.901，P=0.000），而残余肾的钠排泄量与腹透患者钠摄入量无明显相关关系。回归分析发现，钠排泄总量、腹透液钠的排泄均与钠的摄入相关（β=0.416，95%CI：0.170~0.666，P<0.0018；β=0.489，95%CI：0.395~0.582，P<0.001）。腹透患者残余肾功能的下降值，低盐组为17.48±11.22 L/（w· 1.73 m2），高盐组为30.20±18.30 L/（w· 1.73 m2），差异有统计学意义（P=0.032）。患者残余肾功能的下降与摄钠量之间存在相关关系（r=0.409，P=0.018），多因素回归分析显示摄钠量是残余肾功能下降的独立影响因素（β=14.646，95%CI：7.426~21.866，P<0.001）。结论腹透患者腹透清除钠的总量与患者钠摄入量呈正相关；腹透患者残余肾功能的下降和摄钠量相关，高钠饮食可使残余肾功能下降更快。

• 炎症指标对缺血性脑卒中卒中后抑郁的预测价值

  胡佳,周伟,周志明,杨倩,韩剑,颜燕,董万利

  目的探讨患者入院时静脉血白细胞与淋巴细胞比值（NLR）和血小板和淋巴细胞比值（PLR）值以及发病后2周外周血细胞因子IL-17、IL-6水平与急性缺血性脑卒中卒中后抑郁发生的相关性。方法贯序性纳入2015年3月~2017年9月就诊于皖南医学院弋矶山医院神经内科卒中病房首次诊断急性脑梗死的患者，记录患者入院时的人口学资料、临床基线资料、影像学资料，并与入院14 d后抽取静脉血，随访3个月时根据患者临床症状按照美国精神病治疗协会发布的美国心理疾病诊断标准第五版DSM-IV（SCID-I-R）诊断标准诊断抑郁，分为卒中后非抑郁障碍组和卒中后抑郁障碍组；并根据Hamilton抑郁量表（HAMD-17）行抑郁程度的评价采用多元logistic回归分析法，探讨缺血性脑卒中患者PSD与入院时NLR和PLR值、以及病后2周外周血细胞因子IL-17、IL-6的相关性。结果单因素分析显示：性别、受教育年限、BMI、独居、卒中功能缺损程度（NIHSS评分）、认知功能障碍（MMSE评分）、神经功能恢复程度（mRS评分）、实验室指标（NLR、PLR、IL-17、IL-6）与卒中后抑郁PSD的发生具有显著相关性（P均<0.05）。多因素Logistic 回归分析显示：对相关因素进行调整后，NLR第三四分位数（即NLR≥4.02）（P<0.001）、PLR第三四分位数（即PLR≥203.74）（P=0.002）、IL-17（P=0.025）、IL-6（P=0.016）与缺血性卒中后抑郁症状的发生具有独立相关性。对重度抑郁患者（HAMD≥24）的亚组分析中，调整相关因素后发现此4组实验室指标仍是其独立预测因素。结论入院时静脉血NLR、PLR水平、发病2周后外周静脉血IL-17、IL-6是缺血性脑卒中后3个月PSD的独立预测因素。

• 辛伐他汀通过NFATc1通路促进破骨细胞的凋亡

  于冬冬,赵丹阳,杨鸫祥,杨关林

  目的探索辛伐他汀（SIM）调节破骨细胞凋亡机制的实验研究。方法细胞分A组（Control 组）、B组（sRANKL+M-CSF组）、C组（SIM+sRANKL+M-CSF组）、D组（VIVIT peptide+sRANKL+M-CSF组）、E组（SIM+VIVIT peptide+sRANKL+ M-CSF组）；WST-1 检测不同浓度的辛伐他汀对破骨细胞增殖活性影响；流式细胞仪检测SIM 及加入NFATc1 通路抑制剂VIVITpeptide后对破骨细胞凋亡的影响；免疫荧光检测NFATc1向细胞核的转位情况；Western blot检测SIM对细胞核内NFATc1磷酸化的影响。结果WST-1 显示，与对照组相比，SIM（10-6mol/L）作用24 h、48 h 明显抑制破骨细胞的增殖活性（P=0.039<0.05，P=0.022<0.05）。与对照组相比，SIM 处理后破骨细胞G0/G1 期受到抑制（P=0.041<0.05），SIM 增加了Sub-G1 期的细胞数（P=0.028<0.05）。倒置显微镜显示SIM促进破骨细胞凋亡，凋亡的细胞漂浮于培养基中。细胞核的DAPI染色和流式细胞仪检测结果显示SIM促进破骨细胞凋亡（P=0.002<0.01），VIVIT peptide单独处理组（P=0.015<0.05），或SIM+VIVIT peptide组的细胞凋亡数与SIM 组相似（P=0.08>0.05）。免疫荧光显示SIM 抑制NFATc1 的细胞核内转位，免疫印迹结果显示，SIM 抑制NFATc1通路蛋白的磷酸化（P=0.013<0.05）。结论SIM通过NFATc1信号通路促进破骨细胞凋亡。

• 长链非编码RNA-UFC1通过GSK-3β/β-catenin信号轴促进肝癌细胞的侵袭和转移

  王剑,曹传辉,曾钦,董忠谊

  目的探讨长链非编码RNA-UFC1在肝癌侵袭和转移中的作用及机制。方法应用lincRNA-UFC1慢病毒载体转染人肝癌细胞株Huh7 构建lincRNA-UFC1 过表达组和对照组；应用lincRNA-UFC1 干扰载体转染人肝癌细胞株BEL-7402 构建lincRNA-UFC1 干扰组和干扰对照组（scramble），通过实时定量PCR实验分析两种肝癌细胞中lincRNA-UFC1 的表达水平。Transwell 及划痕实验检测lincRNA-UFC1 过表达组及干扰组相比对照组侵袭迁移能力的变化。Western blot 检测lincRNAUFC1过表达组及干扰组相比对照组中GSK-3β/β-catenin蛋白的表达变化。利用GSK-3β/β-Catenin信号通路抑制剂XAV939阻断后，观察Transwell 及划痕实验中lincRNA-UFC1 过表达对肝癌细胞侵袭迁移能力的影响。结果在肝细胞癌中，过表达lincRNA-UFC1 相较于对照组，肝癌细胞的侵袭转移能力明显增加（P<0.001），而沉默lincRNA-UFC1 的表达相较于scramble组，肝癌细胞侵袭转移能力明显减弱（P<0.001）。Western blot结果显示，过表达lincRNA-UFC1与对照组相比较，侵袭转移相关蛋白β-catenin和p-GSK-3β表达明显上调（P<0.001），而lincRNA-UFC1沉默表达后，结果相反。利用GSK-3β/β-Catenin信号通路抑制剂XAV939 处理肝癌细胞可以逆转lincRNA-UFC1 促进肝癌细胞侵袭转移的功能（P<0.001）。结论在肝细胞癌中lincRNA-UFC1通过上调磷酸化GSK-3β及β-catenin促进肝癌细胞侵袭转移。

• 大鼠脑损伤运动障碍模型中移植脂肪干细胞来源的施旺细胞后细胞缝隙连接在神经功能修复中的作用

  杨幼萌,杨靓,王知非

  目的证明移植脂肪干细胞及其诱导分化而来的施旺细胞有利于急性脑损伤动物模型的功能恢复。探索细胞移植后缝隙连接在脑损伤修复过程中的作用机制。方法在运动皮层损伤偏瘫大鼠模型中，将培育分化得到的脂肪干细胞及施旺细胞以及RNAi技术沉默Cx43基因的施旺细胞移植损伤灶处行原位培养，术后观察大鼠运动功能恢复情况并予评分。移植7 d后处死取鼠脑组织，RT-PCR和Western blot验证神经生长因子（NGF）的表达水平。结果在建立的运动皮层损伤的偏瘫大鼠模型，细胞移植组大鼠优于对照组运动评分。WB结果中对照组NGF表达明显低于各移植组，Cx43基因沉默的施旺细胞移植后组织NGF表达低于未沉默组，Cx43基因未沉默组与脂肪干细胞移植组无显著性差异。RT-PCR法测得对照组NGF mRNA水平明显低于各移植组，施旺细胞组水平高于脂肪干细胞组、高于Cx43基因沉默施旺细胞组。结论移植脂肪干细胞和其经诱导分化而来的施旺细胞，都有利于动物模型的脑损伤后功能恢复。在脑损伤修复期功能性缝隙连接形成过程中，缝隙连接蛋白Cx43发挥了重要作用，可能通过促进神经生长因子NGF的表达有关。

• 非交联染色质免疫共沉淀及其二代测序技术建库方法的优化

  彭昂惠,李昭强,张燕,冯德龙,郝冰涛

  目的优化非交联染色质免疫共沉淀及其二代测序（Native ChIP-seq）技术，简化操作步骤，得到高质量ChIP-seq数据。方法裂解细胞，MNase切割DNA释放核小体，用组蛋白修饰的特异性抗体将组蛋白与DNA的复合物进行免疫共沉淀，蛋白酶K消化后进行DNA纯化，染色质免疫共沉淀（ChIP）产物用Tn5转座酶建库与传统建库两种方法进行文库构建并测序。结果与传统建库方法相比，Tn5转座酶建库经过Tn5片段化后直接进行目的DNA的扩增，操作简单，更加省时，效率更高；IGV可视化信号分布峰图显示两种建库方式获得的富集峰基本相同；两种建库方法获得的测序数据中，Tn5转座酶建库比传统建库获得更多的富集峰；Tn5转座酶建库后结果显示重复性良好，信噪比达到50%以上。结论Tn5转座酶建库能提高建库效率并得到更好的数据质量，适用于组蛋白修饰的检测，为表观遗传研究提供更好的技术选择。

• 非包被ELISA可检测寨卡病毒包膜蛋白

  柳红妙,周炜烽,廖晖,胡正阳,邹敏,刘叔文

  目的建立一种基于寨卡病毒包膜蛋白（Envelope protein, E）的非包被ELISA方法，检测被感染的细胞内E蛋白的表达情况，用于抗寨卡病毒药物筛选。方法将寨卡病毒感染的贴壁细胞固定在孔板上，加入抗体与之结合，并确定抗体浓度，建立E蛋白的非包被ELISA方法；用该方法检测木脂素类化合物C1的抗病毒活性；用实时荧光定量PCR实验（RT-PCR）验证这种非包被ELISA方法的准确性；并排除该方法对登革病毒的交叉反应。结果经过优化，未感染的细胞的背景OD450降低到0.20左右，采用该方法检测的抗病毒活性结果，与实时荧光定量PCR实验的结果基本一致，且该方法对登革病毒不存在交叉反应。结论建立了一种寨卡病毒E蛋白的非包被ELISA方法，可用于抗寨卡病毒药物筛选。

• 非小细胞肺癌早期诊断的潜在生物标志物：血浆miRNA-23a和miRNA-451

  崔胜金,曹朝鹏,郭伟权,余蕙君,黄荣,吴云风

  目的研究血浆中miRNA23-a及miRNA-451 作为潜在生物标志物在非小细胞肺癌（NSCLC）中早期诊断的价值。方法选取本院50例NSCLC病例和50例健康对照，通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）测定组织和血浆中miRNA23-a及miRNA-451的表达水平，分析miRNA23-a及miRNA-451在组织和血浆中的表达差异及相关性。同时使用受试者工作特征曲线（ROC曲线）和线下面积（AUC）评估miRNA23-a、miRNA-451及CEA在NSCLC中的诊断能力。通过瞬时转染技术，在NSCLC细胞系A549 中分别抑制miRNA-23a 和miRNA-451 的表达，使用qRT-PCR 检测SPRY2 mRNA及MIF mRNA的表达水平。结果miRNA-23a及miRNA-451在NSCLC组织中的表达与吸烟状态、肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期显著相关（P<0.05）。与对照组相比，miRNA-23a在NSCLC患者的肿瘤组织和血浆中显著升高，而miRNA-451明显低于对照组。这2种miRNA的水平在肿瘤组织与血浆中表现出相同的表达趋势，呈高度相关。ROC分析显示，miRNA-23a和miRNA-451较之传统的肿瘤标志物CEA，AUCROC、灵敏度和特异度均显著高于后者（P<0.05）。当miRNA23-a及miRNA-451联合检测时，AUCROC/灵敏度/特异度均得到改善，分别为0.900/78%/86%。在NSCLC细胞系A549中分别抑制miRNA-23a和miRNA-451的表达后，SPRY2 mRNA及MIF mRNA表达水平显著升高。结论miRNA-23a和miRNA-451可用作NSCLC早期诊断的候选标志物，这2种标志物联合检测对NSCLC诊断更有效。

• 长脉冲1064 nm Nd：YAG激光联合特比萘芬治疗Fonsecaea nubica所致着色芽生菌病及其对大鼠模型作用

  罗娟,冯佩英,胡永轩,杨烨玫,周思彤,黄松根,Jadad Abdullah,钟泽敏,郑雨诗,刘康兴,卢艳,胡燕卿,周冼苡

  报道长脉冲1064 nm Nd：YAG激光联合特比萘芬成功治疗Fonsecaea nubica所致着色芽生菌病1例，并探讨F.nubica的真菌学、体外药敏试验和动物实验特点。患者，男，60岁，右手背约30 mm×40 mm暗红色斑块10个月，无痒痛。皮损KOH直接镜检、组织病理见特征性的硬壳小体；沙堡培养基26 ℃培养2周见灰黑色绒毛状菌落，小培养镜下见着色霉属特征性枝孢样产孢结构。对所分离的致病菌株进行ITS序列测序鉴定为F.nubica。采用M38-A2方案对该致病菌进行9种抗真菌药物的体外药敏试验，结果显示特比萘芬MIC值最小（0.125 μg/mL）。我们应用该F.nubica菌株成功构建了模拟临床的着色芽生菌病Wistar大鼠模型，并使用长脉冲1064 nm Nd ：YAG激光（脉宽3.0 ms、能量24 J/cm2、光斑直径3 mm，频率4 Hz，间隔30 s，照射共3轮）治疗，2 次/周连续8 次后停用，结果显示经过8 次照射可诱导病变组织局部大量淋巴细胞聚集，促进病变恢复，但不能杀灭真菌。临床上，患者经长脉冲1064 nm Nd ：YAG激光照射（1次/周，剂量同上）联合口服特比萘芬0.25 Bid治疗共8周后皮损明显好转，复查真菌学阴性，随访20月无复发。

• 丙戊酸钠诱导小鼠自闭症模型的改良

  郑文霞,胡宇玲,陈笛,李英博,王莎莉

  目的通过改良丙戊酸钠（VPA）小鼠自闭症模型，提高建模成功率，缩短实验周期，更好地模拟临床自闭症发病情况。方法将实验小鼠分为3组，对照组在小鼠孕12.5 d时腹腔注射等体积生理盐水；传统组在小鼠孕12.5 d时一次性腹腔注射VPA600 mg/kg；改良组在小鼠孕10、12 d时，分别腹腔注射VPA 300 mg/kg。观测3组孕鼠给药后反应和6 h死亡率、流产率、临产子宫；观测仔鼠的形态与生长发育；观察仔鼠社会行为学，包括三腔实验、社交实验、青年玩耍实验和旷场实验等反映仔鼠自闭症样行为。结果改良组孕鼠死亡率和流产率低于传统组（P<0.01）；与正常组相比，传统组和改良组仔鼠均存在发育障碍（P<0.05），但是改良组新生鼠死亡率明显低于传统组，弯尾高达100%（P<0.001）。与正常组相比，改良组和传统组均出现了自闭症样行为，即社交障碍和重复刻板行为（P<0.05）。结论改良后的给药方法，能更好的模拟人类自闭症发生的过程，同时降低了孕鼠和新生鼠的死亡率、流产率，缩短了实验周期，提高了实验效率。

• 健康人群CDKN2A和CDKN2B基因甲基化水平与衰老的相关性

  郑中华,季慧慧,陈楚嘉,李银,段世伟

  目的在正常人群中寻找细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子（CDKN）2A、CDKN2B基因甲基化水平与衰老之间的关系。方法我们收集了284名男性和246名女性体检者的外周血，采用甲基化特异性实时定量聚合酶链技术（qMSP）检测CDKN2A、CDKN2B基因甲基化水平。使用Pearson直线相关系数或Spearman秩相关系数来分析CDKN2A和CDKN2B基因甲基化水平与衰老的关系。结果两个基因甲基化水平之间呈正相关（P<0.05）。在总体样本组和女性组中，均发现CDKN2A基因甲基化水平与年龄呈负相关（P<0.05）。在总体样本组中，CDKN2A、CDKN2B基因甲基化水平与甘油三酯（TG）、载脂蛋白E（ApoE）、脂蛋白（a）[Lp(a)]、谷草转氨酶（AST）均呈负相关（P均<0.05）。性别分层分析后发现，女性组和男性组中两个基因甲基化水平均与Lp(a)呈负相关（P<0.05）。男性组中CDKN2A基因甲基化水平与AST呈负相关（P<0.05），而CDKN2B基因甲基化水平与高密度脂蛋白（HDL）、ApoE 呈负相关（P 均<0.05）。女性组中CDKN2A 基因甲基化水平与低密度脂蛋白（LDL）呈正相关，ApoE、AST呈负相关（P均<0.05）。结论CDKN2A、CDKN2B基因甲基化水平与年龄以及多种蛋白指标密切相关。

• 经牙槽嵴顶上颌窦底二次提升术可改善上颌后牙区骨高度严重不足

  周震,王亚敏,孟文霞,杨熙,刀俊峰

  目的评价上颌后牙区骨高度严重不足即上颌窦底剩余牙槽嵴垂直骨高度（RBH）≥1 mm且≤3 mm时行经牙槽嵴顶上颌窦底二次提升术的长期临床效果。方法选取南方医科大学口腔医院种植中心2012年3月~2014年12月就诊的上颌后牙缺失拟行上颌窦提升种植修复的患者78例，符合RBH≥1 mm且≤3 mm，牙槽嵴宽度≥5 mm，采用经嵴顶二次提升法，共植入种植体148枚，术后6个月行上部结构修复，随访1~5年，行临床及影像学检查，评价患者满意度、种植体稳定性、种植体存留率、软组织情况、窦底骨高度变化及种植体周边缘骨吸收情况。结果术中发生3 例上颌窦底黏膜破裂，穿孔率为3.85%（3/78）。23 例（30.67%）存在轻微疼痛，52例（69.33%）无头痛发热，无明显疼痛及肿胀反应。种植体稳定性系数ISQ值术后即刻和术后半年分别为58.39±1.39，81.88±1.22，两组差异有统计学意义（P<0.05）。随访率100%，愈合期及随访过程中无一种植体脱落，种植体存留率为100%。比较随访时间1年和5年的种植体周探诊深度，改良龈沟出血指数，差异均无统计学意义（P>0.05）。平均上颌窦底提升高度及种植体周边缘骨吸收术后1年和术后5年差异均有统计学意义（P<0.05）。结论与侧壁开窗式上颌窦提升术相比, 经牙槽嵴顶上颌窦底二次提升术植骨手术创伤小、患者不适感明显减轻，有效解决上颌后部牙槽骨高度严重不足的问题并取得良好的长期临床效果。

• 竖脊肌平面阻滞与后路椎板阻滞对后路腰椎手术术后镇痛效果的比较

  陶涛,周全

  目的回顾性分析竖脊肌平面阻滞（ESPB）与后路椎板阻滞（RLB）对后路腰椎手术术后急性疼痛的影响。方法回顾性分析2018年01月~2018年12月于我院行择期后路腰椎手术患者89例。其中，对照组30例，采用全凭静脉麻醉；ESPB组28例，采用全凭静脉复合ESPB麻醉；RLB组31例，采用全凭静脉麻醉复合RLB麻醉。分别于术前和术后2、8、12、24、48 h对患者进行VAS评分，记录患者术中和术后静脉镇痛舒芬太尼消耗量及术后48 h内恶心呕吐、瘙痒和呼吸抑制等并发症发生情况。结果ESPB组和RLB组患者VAS评分在术后2、8和12 h 3个时间点显著低于对照组，而RLB组又低于ESPB组，差异具有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比，ESPB组和RLB组术中和术后静脉镇痛舒芬太尼消耗均显著减少，并且RLB组少于ESPB组，差异具有统计学意义（P<0.05）。对照组出现2例恶心呕吐和1例瘙痒，ESPB组出现1例镇静过度和1例尿潴留，RLB组出现1例尿潴留。结论在后路腰椎手术围术期疼痛管理中，超声引导下RLB较ESPB具有更好的镇痛效果。

• 共轭亚油酸改善肥胖糖尿病小鼠的糖脂代谢

  夏珺,郑明月,李灵杰,侯旭峰,曾位森

  目的分析共轭亚油酸（CLA）对肥胖糖尿病（db/db）小鼠糖脂代谢的改善效果。方法将db/db 小鼠分为生理盐水组和CLA实验组分别给予生理盐水，CLA混合物灌胃处理，测量小鼠体质量、饮食摄入量、饮水量、口服糖耐量、甘油三酯、总胆固醇水平。HE染色和油红“O”染色检测肝脏病理学改变和脂肪酸含量。荧光定量PCR和Western blot 实验检测PPARα、PPARγ、CD36、CHREBP和SREBP-1c 等基因表达水平。分别用共轭亚油酸和亚油酸处理HepG2 细胞，检测PPARα、ACC、P-ACC、CD36等基因的表达。同时检测细胞上清中乙酰辅酶A的含量。结果共轭亚油酸能减少db/db小鼠饮食、饮水量，有效减轻小鼠体重，降低血清甘油三酯和胆固醇水平（P<0.05）。共轭亚油酸能降低db/db小鼠空腹血糖，提高糖耐量。肝脏病理学切片和油红“O”染色结果表明共轭亚油酸能减少肝脏里脂滴累积，有效改善脂代谢。共轭亚油酸能上调肝脏组织PPARα表达（P<0.05），下调CD36表达（P<0.001）。细胞实验显示共轭亚油酸能上调PPARα（P<0.001），上调P-ACC，同时下调CD36（P<0.01）表达；ELISA结果显示CLA处理后细胞中乙酰辅酶A显著上调（P<0.01）。结论两种共轭亚油酸同分异构体混合物能够明显改善db/db小鼠糖脂代谢，降低空腹血糖，提高糖耐量，对肥胖、糖尿病动物模型产生综合性的治疗效果。其作用机制可能是通过上调转录因子PPARα，下调脂质转运蛋白CD36，促进ACC磷酸化来调控糖脂代谢。

• 血管翳并非类风湿关节炎的专利—膝骨关节炎血管翳病理形态观察

  陈永,邱富娟,朱兴旺,莫海月,吴自勍,肖长虹

  目的比较类风湿关节炎（RA）与骨关节炎（OA）滑膜组织病理学差异。方法回顾性分析72例RA、24例OA患者经关节腔镜手术获得的滑膜标本病理苏木精-伊红（HE）染色切片，经两位高年资病理医师对滑膜细胞（FLS）增生程度、血管增生程度、纤维组织增生程度、淋巴细胞浸润程度几个方面进行量化评分，对有无浆细胞浸润采用计数统计。并结合临床分析RA、OA滑膜病理形态学的差异。结果OA滑膜也存在着血管翳形成，但OA-FLS增生程度、纤维组织增生程度和淋巴细胞浸润程度，及浆细胞浸润比例明显低于RA血管翳；血管增生程度低于RA血管翳，但无统计学差异。OA血管翳在显微镜下可表现的与RA难以区分。结论OA滑膜存在着血管翳病理变化，FLS增生程度、纤维组织增生程度和淋巴细胞浸润程度，及浆细胞浸润比例明显低于RA血管翳；OA与RA血管翳的差异给诊断和治疗提示了一定潜在的价值。