南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2021年第11期

• 老年阻塞性睡眠呼吸暂停与代谢综合征各组分的相关性及其对远期不良心血管事件发生风险的影响

  苏小凤, 韩继明, 高莹卉, 何子君, 赵 哲, 林俊岭, 郭静静, 陈开兵, 高 燕, 刘 霖

  目的 探讨老年阻塞性睡眠呼吸暂停（OSA）与代谢综合征（MetS）各组分的相关性及其对远期主要不良心血管事件（MACE）发生风险的影响。方法 本研究为多中心前瞻性队列研究。2015年1月~2017年10月，多中心连续纳入1157例年龄≥60岁，基线无MACE病史且MetS指标完整的OSA患者作为随访队列，OSA由整夜多导睡眠监测记录的睡眠呼吸暂停低通气指数（AHI）≥5次/h定义。研究收集了所有患者的基线人口学数据、临床特征、生化指标、睡眠参数，按基线AHI的四分位水平分为4组，中位随访42个月，随访结局为MACE及其组成事件[心血管死亡、心肌梗死、需住院的心绞痛或心力衰竭]。采用多元线性回归和Cox 比例风险回归模型分析MetS各组分与OSA的主要客观预判指标AHI和最低氧饱和度（LSpO2）的相关性及其远期的MACE发生风险。结果 AHI和LSpO2四分位组均与MetS各组分[空腹血糖、腰围、收缩压、甘油三酯]存在正剂量效应关系，与高密度脂蛋白水平呈负剂量反应关系。中位42月随访期内，119例（10.3%）OSA患者发生了MACE。Cox回归分析结果显示，高甘油三酯、收缩压及腰围增加是MACE及其部分组成事件的独立危险因素（P<0.05，P<0.01），高高密度脂蛋白水平是MACE和心肌梗死的保护性因素（P<0.05，P<0.01），且独立于AHI；相比之下，独立于LSpO2的MetS各组分未表现出与MACE及其组成事件发生风险的相关性。结论 老年OSA患者的主要诊断指标AHI和LSpO2与MetS各组分存在剂量效应关系，MetS中的部分组分与AHI相互作用可增加MACE及其组成事件的发生风险。

• 高甘油三酯-葡萄糖乘积指数是慢性肾脏病发生的独立危险因素：基于3439例40~75岁人群的前瞻性队列研究

  许晓双, 汤旭磊, 车红霞, 关聪会, 赵 楠, 傅松波, 刘丽娟, 叶 月, 郭梦然, 闵 行, 甄东户

  目的 探讨兰州市中老年人甘油三酯-葡萄糖乘积（TyG）指数与慢性肾脏病（CKD）的相关性。 方法 于2011年5月~2011年9月选取兰州市3个社区非CKD人群3868人建立队列研究人群，于2014年6月~2015年8月进行了平均3.1年的随访，排除随访资料缺失的人群后，共纳入3439人。根据TyG指数四分位数分为Q1组（TyG≤8.47）、Q2组（TyG 8.48~8.84）、Q3组（TyG 8.85~ 9.20）和Q4组（TyG>9.20）。用估计肾小球滤过率（eGFR）和尿白蛋白/尿肌酐（UACR）评价肾功能。 结果 高TyG指数的人CKD发生率较高（P<0.05）。随访后发生CKD的患者TyG指数高于非CKD人群（P<0.05）。 Logistic回归分析显示：TyG指数是异常eGFR及CKD发生的独立相关因素（P<0.05）。结论 高TyG指数是CKD发生的独立危险因素。

• 肾交感神经射频消融术可降低高血压犬血压并改善动脉硬度

  叶 飞, 史桂霞, 王晓艳, 涂 珊, 张志辉, 曾丽雄

  目的 了解肾交感神经射频消融术（RDN）对高血压犬血压和动脉硬度的影响并探讨RDN对动脉硬度影响的相关机制。方法 将16条比格犬按2∶1∶1的比例随机分为RDN组（n=8，高盐高脂饲养构建高血压大动物模型+RDN治疗）、假手术组（n=4，高盐高脂饲养构建高血压大动物模型+肾动脉造影）和对照组（n=4，普通配方犬粮饲养）。比较3组血压、动脉硬度、内皮功能及交感活性相关指标的变化，并进行相关性分析。结果 高血压犬模型全部构建成功，术后3月，3组收缩压（SBP）变化差异显著（P=0.006），RDN组SBP降幅显著大于假手术组与对照组（P0.05），建模成功后RDN组血清NE浓度显著高于对照组（P=0.014）而与假手术组无统计学差异（P=0.560），术后RDN组血清NE浓度降幅大于假手术组（P=0.032）而与对照组差异不明显（P=0.080）；RDN组比格犬RI的变化与SBP、DBP、NO浓度、NE浓度的变化存在显著相关性（P<0.05）。结论 RDN可显著降低高血压犬的血压及改善动脉硬度，对动脉硬度的改善可能与交感活性和血压降低及促进NO合成有关。

• 基于激活层前置压缩激励残差网络的早期胃癌筛查算法

  张晓玥, 王永雄, 张佳鹏, 孙洪鑫, 王 东, 陈 羽, 周 志

  目的 研究基于激活层前置压缩激励残差网络（PASE-ResNet）的快速和准确的早期胃癌筛查算法。方法 构建一个基于激活层前置压缩激励残差网络的早期胃癌筛查算法。为聚焦任务相关的图像区域，提升模型的特征表达能力，将压缩激励模块（SE）与激活层前置残差网络（PreAct-ResNet）中的残差模块相结合，提高与任务相关的特征通道权重。此外，为提高早期胃癌的筛查性能，提出“局部筛查+全局滑窗”的策略，经数据扩充后得到数据集子图18 400幅。利用PASE-ResNet模型通过滑动窗口的方式对胃镜图像进行检测，获得了精细的筛查结果。结果 本文提出的模型在早期胃癌筛查中取得了98.03%的准确率、98.96%的灵敏度和96.52%的特异性值。结论 本文提出的基于激活层前置压缩激励残差网络，达到了较好的筛查精度，有望在临床中辅助医生快速诊断。

• 从心论治方改善ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化及上调ACE2蛋白表达

  顾毓艳, 蒋 晶, 张雅心, 陈育尧, 陈奕澔, 江伟豪, 黄志勇, 周凤华

  目的 探讨从心论治方（CXLZF）对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化（AS）损伤的作用机制。方法 采用高脂饮食喂养ApoE-/-小鼠12周建立AS模型，随机分为模型组，CXLZF低（4.5 g·kg-1·d-1）、中（9 g·kg-1·d-1）、高（18 g·kg-1·d-1）剂量组，辛伐他汀（5 mg·kg-1·d-1） 组，同时以普通饮食喂养C57BL/6小鼠作为对照组，6只/组。各组小鼠给予相应药物灌胃，对照组、模型组灌胃等体积生理盐水，干预12周。分别采用油红O、Masson、HE染色法观察斑块及肝脏病变情况，检测血脂、血糖及肝功指标；Western blotting法检测血管紧张素转换酶2（ACE2）、E-选择素（E-selectin）蛋白表达，免疫荧光法对ACE2蛋白表达进行定位。在体外，以CXLZF灌胃SD大鼠制作含药血清、生理盐水灌胃大鼠制作对照血清后，采用100 μg/m L ox-LDL干预人脐静脉内皮细胞（HUVECs）建立细胞损伤模型，CXLZF含药血清（5%、10%、20%）干预人脐静脉内皮细胞，对照组、模型组细胞给予10%对照血清。检测细胞ACE2表达。结果 CXLZF低、中、高剂量干预均有效缩小AS小鼠主动脉斑块面积，增加斑块稳定性；同时，CXLZF干预显著降低AS小鼠血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平（P<0.05），高剂量组降脂效果最佳；CXLZF干预还可降低AS小鼠血清天门冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶含量（P<0.05）、改善肝脏脂肪变性。CXLZF干预显著上调AS小鼠主动脉ACE2、下调E-selectin表达（P<0.05）。细胞实验中，CXLZF含药血清（5%、10%、20%）显著上调氧化低密度脂蛋白干预人脐静脉内皮细胞的ACE2表达（P<0.05）。结论 CXLZF可有效减轻小鼠AS损伤，可能与调控ACE2蛋白有关。

• 加权基因共表达网络挖掘并验证调控前列腺癌转移的枢纽基因

  张河元, 陈南辉, 王晓红, 高白云, 凌木安, 陈 果, 吴志明, 李宇同, 钟伟枫, 潘 斌

  目的 通过加权基因共表达网络分析（WGCNA）挖掘并验证前列腺癌转移的关键枢纽基因。方法 对前列腺癌全基因组芯片GSE6919进行主成分分析（PCA），通过R语言分析差异表达基因（DEGs）；利用WGCNA构建基因共表达网络并筛选关键基因；在 TCGA 公共数据中分析基因表达量及其与患者预后的关系；设计和验证针对转移相关的关键基因HNRNPA2B1的小分子干扰片段，通过MTT、流式细胞术、克隆形成、Transwell等实验验证其对前列腺癌细胞系生长、凋亡、克隆形成、迁移和侵袭的影响。结果 PCA分析显示癌转移组和原位及癌旁组明显分开聚类，基因表达差异显著。WGCNA分析得到与癌转移组密切相关的模块，与干细胞分化、氨基酸代谢及免疫反应密切相关。进一步筛选得到与前列腺癌发生相关的（BDH1、PAK4、EXTL3）和转移相关的（NKTR、CTBP2、HNRNPA2B1）6个枢纽基因，在TCGA数据库中有表达差异，且与患者的总生存期相关。Western blotting结果显示HNRNPA2B1小分子干扰成功；干扰片段转染PC3及LNCap细胞，MTT实验结果显示沉默HNRNPA2B1可抑制前列腺癌细胞的生长，流式细胞术结果显示沉默HNRNPA2B1可诱导细胞凋亡，克隆形成实验显示沉默HNRNPA2B1可抑制其克隆形成，Transwell实验显示沉默HNRNPA2B1显著抑制前列腺癌细胞的迁移和侵袭（P<0.05）。结论 发现前列腺癌发生相关的BDH1、PAK4、EXTL3和转移相关的NKTR、CTBP2、HNRNPA2B1 6个枢纽基因，为前列腺癌调控机制的研究提供了新思路。

• 帕金森病模型中α-突触核蛋白对干扰素调节因子1的调控及其机制

  牟斐斐, 陈 曦, 杜希恂, 焦 倩, 毕明霞, 姜 宏

  目的 研究α-突触核蛋白（α-Syn）对干扰素调节因子1（IRF-1）表达的影响及其分子机制。方法 选用α-Syn过表达的SH-SY5Y细胞以及3月龄、6月龄A53T α-Syn转基因小鼠，应用Real-time PCR和Western blot技术检测IRF-1表达的变化，免疫荧光染色和核浆蛋白分离技术观察IRF-1亚细胞定位情况。不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG132（0、0.01、0.05、0.1、0.2、 0.5、1、2 μmol/L）以及溶酶体抑制剂氯喹（0、5、10、30、50、100、150、200 μmol/L）处理SH-SY5Y细胞24 h，检测细胞存活率。选用不引起细胞损伤的最大浓度0.2 μmol/L MG132和30 μmol/L氯喹处理SH-SY5Y细胞24 h，检测IRF-1蛋白水平的变化。观察α-Syn对MDM2蛋白水平的影响，并进一步通过泛素化实验检测IRF-1泛素化水平的变化。结果 α-Syn过表达不影响IRF-1mRNA水平，却可显著上调其蛋白水平（P<0.01），并且IRF-1在胞核表达的比例升高，发生核移位现象（P<0.001）。不同浓度的MG132和氯喹处理后细胞存活率随浓度升高而逐渐降低，不引起细胞损伤的最大浓度分别为0.2 μmol/L和30 μmol/L。0.2 μmol/LMG132处理后可加剧α-Syn引起的IRF-1蛋白水平的升高（P<0.01），而30 μmol/L氯喹处理后IRF-1蛋白表达无明显变化。α-Syn过表达导致MDM2蛋白水平降低（P<0.01），进而抑制IRF-1的泛素化修饰。结论 α-Syn通过泛素-蛋白酶体途径，抑制MDM2介导的IRF-1泛素化修饰，进而上调IRF-1蛋白表达。

• GH/tPA双转基因小鼠的制备及其表达分析

  宋绍征, 李 丹, 何正义, 张 婷, 成 勇, 周鸣鸣

  目的 旨在获得GH/tPA双转基因小鼠，并比较分析小鼠乳腺中人组织纤溶酶原激活剂（tPA）的表达水平和个体生长发育状况。方法 利用2只tPA单转基因雄性小鼠（P03、P05）与经超数排卵处理的正常非转基因雌性小鼠交配，受精卵显微注射线性化的GH质粒、胚胎移植而获得后代小鼠，PCR检测基因整合情况，ELISA和Western blotting检测比较单、双基因表达tPA水平，监测转基因小鼠不同生长阶段的体质量来分析GH基因对小鼠生长发育的影响。结果 P03系小鼠共获得286枚受精卵，移植受体母鼠后，顺利产仔77只，经PCR检测获得16只tPA单转基因小鼠（7♂，9♀），13只GH/tPA双转基因小鼠（8♂，5♀），双基因整合率为16.9%；P05系小鼠共获得175枚受精卵，移植受体母鼠后，顺利产仔34只，经PCR检测获得12只tPA单转基因小鼠（5♂， 7♀），7只GH/tPA双转基因小鼠（3♂，4♀），双基因整合率为20.6%。单、双转基因小鼠乳腺中表达tPA的最高量分别为82.5 μg/mL、674 μg/mL，GH/tPA双转基因小鼠乳腺中表达tPA的量明显高于tPA单转基因（P0.05）。结论 本实验成功地制备了GH/tPA双转基因小鼠，结果表明GH基因导入小鼠体内能够显著地提高目的基因tPA的表达水平，且不会对转基因小鼠的生长发育造成任何明显的影响，这为将来制备高表达转基因动物生产医药蛋白及其育种奠定了基础。

• 蛙皮肤来源抗菌肽Brevinin-2GHk的抗菌作用机制

  熊唯琛, 柴金为, 吴洁娜, 田茂林, 卢万成, 徐学清

  目的 探讨Brevinin-2GHk（BR2GK）的二级结构、理化性质及抗菌活性，并揭示其抗菌作用机制。方法 合成并鉴定BR2GK；圆二色谱测定BR2GK的二级结构和理化性质；二倍稀释法测定BR2GK的抗菌活性；共聚焦激光扫描显微镜（LSCM）和扫描电子显微镜（SEM）研究BR2GK的杀菌方式；小鼠红细胞检测BR2GK的溶血活性；等温滴定量热实验和表面等离子共振成像检测BR2GK与脂多糖的结合；生化试剂盒检测BR2GK的抗氧化能力。结果 合成的BR2GK经高效液相色谱（HPLC） 纯化，纯度≥95%，并通过质谱进行确定。圆二色谱分析显示BR2GK具有阳离子抗菌肽的基本特征，在SDS溶液中以α-螺旋结构为主。抗菌活性测定显示BR2GK对多种菌株均具有抑制和杀灭活性，对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度（MIC）达到2.76 μmol/L。LSCM和SEM观察到BR2GK使细菌细胞膜受损，细菌肿涨、收缩和变形，并渗出大量内容物，但在具有抗菌活性的浓度下对红细胞无溶血作用。等温滴定量热实验显示BR2GK与脂多糖的结合亲和力KD为18.2±0.8 μmol/L。抗氧化测试结果显示，BR2GK以浓度依赖的方式清除NO（P<0.01）。BR2GK对ABTS和DPPH自由基清除的反应快速，当浓度为40 μmol/L时，在 1 min内分别清除了73.51%的ABTS和90.32%的DPPH。结论 BR2GK具有良好的广谱抗菌活性，且不会导致溶血，此外还能结合脂多糖，并具有较强的抗氧化能力；BR2GK对设计合成具有更强抗菌活性和更低细胞毒性的抗菌肽具有重要的指导意义。

• 核外p53通过AMPK/mTOR信号抑制自噬并促进热打击诱导的血管内皮细胞损伤

  李 莉, 邹志敏, 李 琴, 张 堃, 苏 磊, 古正涛

  目的 阐明核外p53通过调控蛋白激酶（AMPK）/雷帕霉素靶体（mTOR）信号通路介导自噬抑制在热打击后血管内皮细胞（VECs）损伤的分子机制。方法 实验分为：对照组、热打击组、热打击组+Compound C组、热打击组+rapamycin组、热打击组+PFT组，并分别使用AMPK抑制剂Compound C、mTOR抑制剂（自噬激活剂）rapamycin、p53线粒体转位抑制剂PFT预处理细胞或C57BL/6小鼠，通过CCK8法检测细胞活力，Western blot观察p53线粒体移位、自噬关键蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1和P62以及AMPK/mTOR信号通路的激活情况，HE染色观察各组小鼠主动内皮血管病理改变，TUNEL染色观察各组小鼠动内皮血管凋亡情况。结果 与对照组相比，热打击后主动脉内皮细胞（MAECs）活力显著下降（P<0.05），热打击后小鼠主动脉血管内皮细胞肿胀、脱落，内弹力膜断裂，平滑肌排列紊乱，可见大量凋亡细胞；热打击后随着复温时间（0、3、6、9 h）延长，MAECs胞浆中p53表达逐渐减弱，而线粒体p53表达逐渐增强；热打击后（6 h）LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达被抑制，p62蛋白表达增加（P<0.05）；热打击后（6 h）AMPK的磷酸化被抑制，mTOR、4EBP1和p70S6K的磷酸化表达增加（P<0.05）。AMPK抑制剂Compound C明显抑制了热打击后MAECs中LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达，促进了p62蛋白表达，并加重了热打击后小鼠主动脉血管的损伤以及促进了凋亡的增加，而mTOR抑制剂rapamycin均呈现相反作用。p53线粒体转位抑制剂PFT促进了AMPK的磷酸化激活，并抑制mTOR、4EBP1和p70S6K的磷酸化（P<0.05）；使用PFT后促进了LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达，抑制了P62的表达（P<0.05）；使 用PFT后明显提高了MAECs的细胞活力（P<0.05），也减轻了热打击后小鼠主动脉血管的损伤和凋亡的发生。结论 核外p53主要通过抑制AMPK活性，激活mTOR信号，继而介导细胞自噬抑制，参与热打击诱导的MAECs损伤。

• 背景噪声对清醒小鼠初级听皮层神经元听觉响应特征的影响

  宋长宝, 赵 岩, 柏 林

  目的 探究不同强度持续噪声背景对清醒小鼠初级听皮层神经元听觉反应特征的影响。方法 以清醒小鼠初级听皮层（A1）第4层神经元为研究对象，采用细胞外贴附式记录方式，研究清醒状态下A1神经元在不同强度背景噪声下对声刺激发生响应的声强调谐、频率调谐和时间调谐特征的变化。总计44例神经元均进行5种目标声刺激序列扫描，根据神经元的声强响应特征和目标声序列扫描完成情况，将神经元分为4组：单调性-声强组20例、非单调性-声强组6例，完成声强-噪声强度序列扫描；单调性-频率组25例，完成频率-噪声强度序列扫描；单调性-延时组15例完成延时-噪声强度序列扫描。 结果 给予持续宽带白噪声刺激，44例A1听神经元仅在给声后10~40 ms内出现瞬态的尖峰响应，不同强度的背景噪声对A1神经元的发放率无明显影响（P>0.05）；单调性和非单调性-声强组，给予不同声强的目标声叠加持续背景噪声时，当背景噪声增强到一定程度，26例神经元对目标声刺激发生响应的声强阈值随背景噪声强度变化表现出线性增大（线性回归R2值均>0.90，P值均0.05）；A1非单调性神经元的最佳声强也随背景噪声增强而增大，其变化斜率与该神经元声强阈值的变化趋势呈正相关（相关系数0.944，P<0.001)；单调性-频率组，给予不同频率的目标声叠加持续背景噪声时，随背景噪声强度增大，神经元频率响应带宽减小（P<0.001），平均发放率减小（P<0.001），而最佳频率基本不变（P<0.001）；单调性-延时组，噪声背景的增强使得神经元对同一声刺激的响应延时增大（P0.05）。结论 在不断增强的噪声背景中，清醒小鼠A1神经元的声强响应阈值表现出线性升高，其变化斜率存在较大的个体差异，但与神经元的声强响应特征（单调或非单调）无关。增强的背景噪声压缩了A1神经元的频率响应范围，延长了神经元对目标声的响应时间，但神经元的频率选择性和对同一目标声发生反应的时间精确性不受噪声背景的干扰而保持稳定。

• 隧道技术在前牙区连续牙龈退缩伴非龋性牙颈部缺损治疗中的临床疗效

  谢成婕, 廖阳阳, 童方丽, 方静娴, 王 勤, 余慧敏

  目的 探讨隧道技术在上前牙区牙龈退缩伴非龋性牙颈部缺损中的临床疗效。方法 收集2019年1月~2021年1月间因上前牙牙龈退缩（GR）伴根面非龋性牙颈部缺损（NCCL）而接受隧道技术的21名患者共79颗患牙的临床资料，根据GR高度（GRD）和NCCL深度（LD）将患牙分成4组：第1组GRD≤3 mm，LD≤1 mm，第2组GRD≤3 mm，LD>1 mm，第3组 GRD>3 mm，LD≤1 mm，第4组GRD>3 mm，LD>1 mm；统计分析各组术后的平均根面覆盖率（MRC），完全根面覆盖率（CRC），角化龈宽度和厚度等临床指标的改善情况。结果 各组术前术后的角化龈宽度及厚度的增加均有统计学差异（P3 mm时，第3组和第4组MRC分别为86%和72%，且CRC较第1组和第2组明显下降，其中第4组与其他3组比较时MRC和CRC均有统计学差异（P<0.01）。结论 隧道技术对改善角化龈的厚度和宽度具有较好的临床疗效，而对于根面覆盖的效果，GRD较NCCL的影响作用更大，提示根面覆盖术前NCCL的充填可能并非必要，需要综合评价GRD和NCCL的共同影响。

• 抑制转化生长因子β表达可以减少纤连蛋白的形成并促进小鼠脊髓损伤的修复

  李夏林, 潘大宇

  目的 探讨抑制转化生长因子β（TGF-β）表达对小鼠脊髓损伤的修复作用。方法 将12只小鼠分为3组:治疗组、对照组和阴性对照组，4只/组，重复实验2次。治疗组通过对脊髓损伤半切模型小鼠进行腹腔注射TGF-β中和抗体（1D11）来抑制TGF-β的表达量；对照组小鼠注射载体抗体（13C4）作为对照，损伤后3次/周，每次25 μL/只；阴性对照组未做半切损伤，4周后心脏灌注取材，选取损伤部位上下1~2 cm脊髓进行包埋，损伤区域的免疫荧光染色通过FSP1观察成纤维细胞募集，通过Fibronectin来观察纤连蛋白沉积以及通过PGP9.5来观察神经学恢复情况。最后选择脊髓损伤钳夹模型来进一步验证，使用免疫荧光染色通过5-HT来观察轴突存活情况以及通过GFAP来观察星形胶质细胞分布情况。结果 在脊髓损伤半切模型中，与对照组相比，治疗组损伤区域中成纤维细胞募集减少（P<0.05），纤连蛋白沉积减少（P<0.05），神经学功能PGP9.5染色有所恢复（P<0.05）。在脊髓损伤钳夹模型中，1D11组与13C4组相比，5-HT阳性的轴突存活增加且下行距离延伸，GFAP阳性星形胶质细胞在损伤区域内分布数量增加（P<0.05）。结论 抑制脊髓损伤后TGF-β的表达量可以减少成纤维细胞的募集和纤连蛋白的沉淀，从而促进脊髓损伤后神经学功能恢复来修复脊髓损伤。

• 吡非尼酮通过下调TGF-β/Smad通路中TGF-β3的表达抑制兔Tenons囊成纤维细胞增殖

  陈 旭, 申 颖, 赵海霞, 郭文奇

  目的 探讨吡非尼酮在抗青光眼滤过术后抑制瘢痕形成的可能机制。方法 体外培养兔眼Tenons囊成纤维细胞(RYTF)；设计6组不同浓度的吡非尼酮作为实验组、1组未加入吡非尼酮的作为对照组及1组调零组，采用CCK-8检测法初步确定吡非尼酮的起始作用浓度及最适作用浓度；采用免疫荧光法检测经起始、最适作用浓度吡非尼酮作用后RYTF中TGF-β3，Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白与对照组相比的荧光染色表达情况；通过 Western blot 法检测经起始、最适作用浓度吡非尼酮作用后 TGF-β3，CollagenⅠ、CollagenⅢ 因子与对照组相比的蛋白表达情况；通过 RT-PCR 法检测经起始、最适作用浓度吡非尼酮作用后TGF-β3、CollagenⅠ、CollagenⅢ与对照组相比的mRNA表达变化。结果 吡非尼酮抑制RYTF增殖的起始作用浓度和最适作用浓度分别为 0.1 mg 和 0.27 mg；与对照组相比，经起始、最适作用浓度吡非尼酮作用 24 h 后，实验组 RYTF 中 TGF-β3、CollagenⅠ、Collagen Ⅲ 的荧光表达均少于对照组（P<0.05）；与对照组相比，经起始、最适作用浓度吡非尼酮作用24 h后，实验组RYTF中TGF-β3、CollagenⅠ、CollagenⅢ 的蛋白表达量均少于对照组（P<0.05）；与对照组相比，经起始、最适作用浓度吡非尼酮作用24h后，实验组RYTF中TGF-β3、CollagenⅠ、Collagen Ⅲ 的基因相对表达量均少于对照组（P<0.05）。结论 吡非尼酮对体外培养RYTF增殖有明显抑制作用，且呈浓度依赖关系；吡非尼酮抑制RYTF增殖的机制可能是通过影响RYTF中TGF-β/Smad途径上TGF-β3效应因子的基因和蛋白表达。

• 芦荟苷通过下调HMGB1的表达抑制乳酸诱导的胃癌细胞增殖和迁移

  蔡田雨, 陈雪雷, 程 锦, 程振宇, 吴晓明, 齐世美, 戚之琳

  目的 探讨芦荟苷对乳酸诱导胃癌细胞增殖和迁移的抑制作用及可能的分子机制。方法 胃癌BGC-823细胞常规培养，实验分为对照组、乳酸组、不同浓度芦荟苷和乳酸联合组，分组处理后的BGC-823细胞，EdU实验检测胃癌细胞的增殖；克隆形成实验检测细胞克隆形成能力；划痕实验和tranwell 实验检测细胞迁移能力；Western blot检测CyclinD1、CyclinE1、PCNA、N-cadherin、E-cadherin、MMP-2、MMP-9和HMGB1的表达；ELISA检测HMGB1的释放。HMGB1干扰质粒和阴性对照质粒分别转染BGC-823细胞，转染48 h后用乳酸刺激细胞24 h，EdU和划痕实验分别检测细胞的增殖和迁移能力。结果 EdU结果表明，芦荟苷明显抑制乳酸诱导的胃癌细胞增殖；克隆形成结果表明，芦荟苷和乳酸联合处理的胃癌细胞，细胞克隆数目显著少于乳酸处理组（P<0.05）；划痕和transwell结果均表明，芦荟苷能够抑制乳酸诱导的胃癌细胞迁移（P<0.05）；Western blot结果表明，芦荟苷能够下调乳酸诱导的Cyclin D1，E1，PCNA，N-cadherin，MMP-2，MMP-9和HMGB1的表达；逆转乳酸对E-cadherin表达的抑制作用；ELISA结果发现，芦荟苷有效阻止了乳酸诱导的HMGB1释放（P<0.05）。EdU和划痕结果表明，敲除HMGB1的BGC-823细胞，乳酸诱导的增殖和迁移与阴性质粒转染组相比明显下降。结论 芦荟苷通过下调乳酸诱导的HMGB1表达、释放以及增殖和迁移相关蛋白的表达，抑制乳酸诱导的胃癌细胞的增殖和迁移。

• 基于磁共振脂肪定量技术IDEAL-IQ的列线图模型在预测早期骨量丢失中的价值

  成东亮, 冯红梅, 文 戈, 刘健萍, 洪居陆, 高明勇

  目的 探讨基于MRI迭代最小二乘法水脂分离定量技术（IDEAL-IQ）序列的列线图模型在预测早期骨量丢失中的诊断效能。方法 收集同时行双能X线骨密度仪（DXA）测定和腰椎MRI IDEAL-IQ序列检查的被试59例，应用DXA分别测定L1~4椎体的骨密度值，利用IDEAL-IQ序列中FF图测量相应的FF值。根据DXA结果将59例分为骨量正常组（n=23）和低骨量组（n=36）。应用两样本t检验比较2组椎体的FF值，通过ROC曲线评估诊断效能；使用多因素logistic回归筛选预测骨量丢失的独立因素，构建可视化列线图预测模型并评估其预测效能。结果 骨量正常组和低骨量组椎体FF值分别为（38.84±6.75）%、（51.96±7.65）%，经ROC曲线分析FF值鉴别骨量正常组和低骨量组的AUC为0.797，敏感度、特异度分别为73.91%、80.56%；多因素logistics回归分析显示FF值、年龄以及BMI指数是预测早期骨量丢失的独立因素。列线图模型AUC为0.954（95%CI：0.806-0.957），校正曲线显示预测概率与实际概率具有良好的一致性。决策曲线分析（DCA）显示列线图模型较之于单一的FF值鉴别模型，体现出更高的净获益。结论 IDEAL-IQ序列能够反映椎体骨髓脂肪含量，而联合FF值、年龄以及BMI的列线图模型可进一步提高预测效能，并为临床早期骨量丢失的预测提供一种可视化手段。

• 听觉响应信噪比在上行听觉通路中的演变

  王敬敬, 宋长宝, 梁妃学

  目的 探究上行听觉通路各级脑区听觉响应信噪比的特征演变规律、不同大脑状态对各级脑区听觉响应信噪比的调节，以及编码声音特征的有效指标。方法 以SPF级C57BL/6J清醒小鼠的下丘、内侧膝状体、初级听皮层的神经元为研究对象，以能够表征3个脑区群体响应为目的记录大量神经元信号，实验结束后统计共使用小鼠80只，其中下丘和内侧膝状体各20只，初级听皮层40只。采用玻璃微电极贴附式方法分别记录3个脑区神经元的最佳频率听觉响应，通过计算神经元的自发与诱发建立分布模型，并对听觉响应信噪比的演变规律进行统计分析；通过监测小鼠跑动速度判断小鼠的运动状态，分析在安静和跑动状态下不同脑区神经元的自发与诱发的变化以及听觉响应信噪比变化的情况。结果 上行听觉通路中不同脑区自发均符合泊松分布，诱发均符合对数正态分布；听觉响应信噪比在下丘脑区显著比内侧膝状体和听皮层大，3个脑区两两之间具有显著差异（IC与MGB：P<0.001，IC与A1：P<0.001，MGB与A1：P<0.001）；多个脑区的听觉响应信噪比在不同运动状态下都维持稳定，即IC、MGB、A1听觉响应信噪比在安静状态下和跑动状态下均没有显著性差异（IC：P=0.537，MGB：P=0.383，A1：P=0.126）。结论 听觉响应信噪比可能是编码声音特征的更有效指标。

• 中国社区老年人衰弱发病及影响因素分析

  王 琴, 代雪梅, 刘嘉琳, 陈梓萱, 余雨珂, 刘秀秀, 袁 萍

  目的 了解我国社区60岁及以上老年人衰弱的发病情况，探讨其衰弱发生的主要影响因素。方法 利用中国健康和养老追踪调查2011~2015年的数据，以2011年基线调查时60岁及以上非衰弱的老年人建立研究队列，评估随访至2015年队列人群的衰弱发生情况；采用巢式病例对照研究方法，分析老年人衰弱发生的影响因素。结果 本研究队列人群共计随访14 351人年，随访期内共有248人发生衰弱，衰弱的发病密度为17.28/1000人年，男性（14.63/1000人年）低于女性（20.14/1000人年），年龄越大衰弱的发病密度越高（60~64、65~69、70~74、75~79、80岁及以上老年人衰弱的发病密度分别为：8.90/1000、16.77/1000、24.04/1000、35.27/1000、64.67/1000人年）。多因素条件logistic回归结果显示，有抑郁症状（OR=2.534，95% CI：1.714~3.748）、吸烟（OR=1.713，95% CI：1.081~2.715）、生活自理能力有困难（OR=1.684，95% CI：1.155~2.456）等因素是老年人衰弱发生的危险因素。未婚/离婚/丧偶（OR=0.432，95% CI：0.278~0.673）、认知功能得分高（OR=0.919，95% CI：0.870~0.970）、小学毕业（OR=0.453，95% CI：0.254~0.806）、饮酒（OR=0.520，95% CI：0.323~0.837）等因素是老年人衰弱发生的保护因素。 结论 我国60岁及以上社区老年人衰弱的发病率低于全球发病水平，不同性别、年龄之间老年人衰弱发病存在差异。有抑郁症状、吸烟、生活自理困难是我国社区老年人衰弱发生的主要危险因素。

• Srn821798在变异链球菌变链素IV形成中的作用

  徐 丽, 刘姗姗, 王 敏, 刘 芳, 张容秀, 张 凯

  目的 分析 srn821798 对变链素Ⅳ的影响，探索变链素Ⅳ转录后的规律。方法 用靶基因预测软件 RNAhybrid、RNAPredator和IntaRNA对srn821798进行靶基因预测，继而采用抑菌圈实验筛选了高表达变链素Ⅳ的变异链球菌菌株和不表达变链素Ⅳ的变异链球菌菌株各10株，并采用qPCR技术检测了这些菌株中srn821798和候选靶基因的表达水平。体外合成srn821798模拟物和抑制剂，采用电转化的方法在变异链球菌UA159标准株中构建了srn821798高表达株和低表达株，分析和比较这些菌株中srn821798和候选靶基因的表达水平。最后通过电泳和双荧光素酶报告基因实验检测了srn821798和候选靶基因sepM预测作用位点的结合能力。采用SPSS20.0软件包对数据进行统计学分析。结果 变异链球菌临床菌株中高表达变链素Ⅳ组中的候选靶基因sepM，comD，comE，nlmA及nlmB的表达水平均显著高于无表达变链素Ⅳ组，而高表达变链素Ⅳ组srn821798的表达水平显著低于无表达变链素Ⅳ组（P<0.05）。虽然标准株中srn821798上调组和下调组中候选靶基因的表达水平差异不大，但 sepM 的表达水平存在差异分布的趋势，并且预测的 srn821798 与 sepM 作用位点的结合能力较高。结论 srn821798可能在变链素Ⅳ的形成中起着一定的调控作用，但机制有待进一步探索。

• 全乳切除术后放疗对化生性乳腺癌患者的生存影响

  蔡文娟, 庄 严, 陈建辉, 王宏梅

  目的 通过对比化生性乳腺癌（MpBC）与浸润性导管癌（IDC）的预后因素，明确全乳切除术后放疗（PMRT）对MpBC患者的总生存（OS）及乳腺癌特异性生存（BCSS）影响。方法 从SEER数据库筛选1998~2016年符合病理诊断、≥18岁并行乳腺癌根治术的女性MpBC和IDC 患者，且无远处转移及第二原发癌, 共纳入31 982例患者。研究终点是OS和BCSS，亚组包括MpBC/PMRT组（308例）、MpBC/No PMRT组（629例）和IDC/PMRT组（31 045例）。比较组间基线特征，并通过Kaplan-Meier生存分析和Cox回归模型分析比较MpBC的预后影响因素及各亚组的OS和BCSS。结果 在所有MpBC患者中，年龄≥50岁（81.2%）、病理分级Ⅲ级（68.0%）、ER阴性（75.9%）、PR阴性（79.8%）、T2~3（71.3%）、N0~1（85.6%）患者占比大。年龄、肿瘤T分期、N分期、PMRT、是否化疗与MpBC的OS显著相关（P0.05）。Kaplan-Meier生存分析显示，MpBC/PMRT组OS（HR 1.394，95%CI：1.125~1.727，P<0.05）、BCSS（HR 1.390，95% CI：1.074~1.800，P<0.05）优于MpBC/No PMRT组，而其OS（HR 1.626，95%CI：1.386~1.908，P<0.001）、BCSS（HR 1.710，95% CI：1.418~2.062，P<0.001）显著劣于IDC/PMRT组。结论 MpBC具有独特的临床病理特点，年龄、肿瘤T分期、N分期、放疗及化疗是其预后影响因素；PMRT可改善MpBC患者的OS及BCSS。

• 基于开端同轴探头技术的人体正常食管和食管癌介电特性比较

  黄 强, 卢 笛, 韩继钧, 于洪峰, 董 文, 蔡开灿, 余学飞

  目的 研究食管癌手术中切除的人体正常食管组织和食管癌组织的介电特性（相对介电常数εr和电导率σ）差异，为临床食管癌手术中快速鉴别提供一种新的理论依据。方法 采用开端同轴探头法在50 MHz~4 GHz频率范围内，对51名食管癌患者手术切除的标本正常部分及肿瘤部分进行介电测量。在全频段分析其介电特性差异，并且对6个特定频率点（64、128、298、433、915、2450 MHz）的数据进行统计学分析，此外采用Cole-Cole模型在整个频段内对数据进行拟合并且将测量值与文献值进行对比。结果 在50 MHz~4 GHz频率范围内食管癌组织的介电特性值高于正常食管组织；在6个频率点正常食管组织和食管癌组织介电特性存在显著性差异（P<0.01）；Cole-Cole模型对测量的数据有较好的拟合结果；本研究的测量值低于文献值。结论 正常食管组织与肿瘤组织介电特性存在显著性差异，有望为临床食管癌术中快速鉴别提供一种新的理论依据。

• 登革病毒IgG抗体的检测：基于登革病毒E蛋白的荧光素酶免疫吸附法

  刘金月, 李晓霞, 王海鹰, 唐时幸, 万成松

  目的 建立基于登革病毒E蛋白特异性抗原的荧光素酶免疫吸附法（DENV-LISA），用于检测DENV IgG抗体。方法 分别构建DENV1-E1、DENV2-E2与荧光素酶的融合表达质粒，转染293T细胞后获得含特异性抗原与荧光素酶的融合蛋白，建立DENV-LISA，评价其特异度和灵敏度，并与商用登革病毒IgG抗体检测试剂盒比较。结果 DENV-LISA阳性检出率32.4%，特异度96.6%，商用检测试剂盒阳性检出率35.3%，差异无统计学意义（P>0.05）；阳性样本稀释6400倍可判断阳性，灵敏度高；同批板间、板内检测值差异无统计学意义（P>0.05）；重复性良好。结论 建立基于登革病毒E蛋白的荧光素酶免疫吸附法，对登革病毒IgG抗体有较高特异度和灵敏度，可用于登革病毒感染的早期筛查、监测预警、流行病学调查等。