南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2023年第9期

• miRNA-128-3p通过下调KLHDC8A的表达抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为

  于正涛, 李佳梦, 蒋俊文, 李 由, 林 珑, 夏 鹰, 王 磊

  目的 探讨miRNA-128-3p在胶质瘤细胞中的作用，并确定其是否能够调控KLHDC8A介导恶性生物学行为，为寻找胶质瘤患者潜在的分子生物标志物和治疗靶点提供理论支持。方法 采用双荧光素酶报告基因、qRT-PCR和Western blotting实验验证miRNA-128-3p与KLHDC8A的调控关系。通过Edu实验 、流式细胞术、Transwell和划痕实验验证miRNA-128-3p和KLHDC8A对胶质瘤细胞恶性行为的影响。利用挽救实验验证miRNA-128-3p靶向KLHDC8A调控胶质瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移。结果 KLHDC8A在高级别胶质瘤组织中的表达水平显著升高，与恶性胶质瘤患者的生存状况密切相关。功能验证实验表明，高表达KLHDC8A可促进胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，而miRNA-128-3p高表达抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移等恶性生物学行为。miRNA-128-3p靶向调节胶质瘤细胞中KLHDC8A的表达，miRNA-128-3p高表达通过靶向KLHDC8A抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为。结论 miRNA-128-3p 负向调控其下游靶基因KLHDC8A的表达，抑制胶质瘤细胞恶性生物学行为，因此miRNA-128-3p/KLHDC8A是判断胶质瘤预后及治疗的分子靶点。

• 高表达CAMSAP2通过上调TGF-β信号促进胃癌细胞的侵袭和转移

  左芦根, 王 炼, 杨 子, 李骏杰, 王文锋, 李 静, 王月月, 宋 雪, 张小凤, 耿志军

  目的 阐明钙调蛋白调控的光谱相关蛋白2（CAMSAP2）在胃癌中的表达及其对疾病进展和预后的影响，并分析可能的机制。方法 利用公共癌症数据初步分析CAMSAP2的表达和胃癌进展及预后的关系，另纳入2013年10月~2017年10月在我院完成胃癌根治术的106例患者进行验证。利用生物信息学预测CAMSAP2的生物学功能。采用CAMSAP2过表达质粒、特异性干扰分别处理胃癌细胞系（MGC803）分为CAMSAP2上调组、CAMSAP2下调组，将未经处理的MGC803设为空白对照组，体外观察CAMSAP2对胃癌细胞上皮-间质转化（EMT）和侵袭的影响，并建立裸鼠胃原位种植瘤模型进行在体验证，同时分析CAMSAP2调控胃癌的分子机制。结果 CAMSAP2在胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织（P<0.05），并和外周血CEA、CA19-9水平正相关（P<0.001）。Cox回归分析显示CAMSAP2高表达是影响胃癌患者术后5年生存率的独立危险因素（HR：2.969；95% CI：1.031-8.548）。富集分析提示CAMSAP2的作用可能与EMT和TGF-β信号有关。免疫印迹、划痕和Transwell实验发现：体外上调CAMSAP2可促进胃癌细胞表达Vimentin和N-cadherin，同时抑制E-cadherin的表达，并促进胃癌细胞迁移和侵袭（P<0.05）；下调CAMSAP2则结果相反（P<0.05）。在体上调CAMSAP2可促进裸鼠胃原位种植瘤的转移（P<0.05），促进胃癌组织中Vimentin和N-cadherin的表达，同时抑制E-cadherin的表达（P<0.05）；下调CAMSAP2则结果相反（P<0.05）。体内外实验中上调CAMSAP2可升高胃癌组织或胃癌细胞中TGF-β和p-Smad2/3的水平（P<0.05），而下调CAMSAP2则结果相反（P<0.05）。结论 CAMSAP2在胃癌中高表达并和肿瘤恶性进展以及预后不良相关，其可能通过上调TGF-β信号参与了胃癌的EMT过程。

• 长链非编码RNA H19促进血管钙化：基于抑制Bax抑制因子1/视神经萎缩蛋白1通路

  陈韦任, 杜 辉, 沙 媛, 周玉杰, 梁 静, 陈韵岱, 马 茜, 吴雪萍, 钱 赓

  目的 探讨长链非编码RNA H19（lncRNA H19）是否通过抑制Bax抑制因子1/视神经萎缩蛋白1（BI-1/OPA1）通路促进钙沉积、细胞骨型分化和细胞凋亡，进而诱导血管钙化。方法 β磷酸甘油和氯化钙药物诱导大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）建立细胞钙化模型，将细胞分为5组：对照组（普通培养基培养14 d）、钙化组（钙化培养基培养14 d）、钙化+siH19组（敲低lncRNA H19表达后钙化培养基培养14 d）、钙化+siH19+BI-1-/-组（敲低lncRNA H19和BI-1表达后钙化培养基培养14 d）和钙化+siH19+OPA1-/-组（敲低lncRNA H19和OPA1表达后钙化培养基培养14 d）。另ApoE-/-糖尿病小鼠使用高脂饲料喂养32周建立动物钙化模型。通过茜素红S染色和von Kossa染色检测钙沉积，通过Western blotting测定Runt相关转录因子2（Runx-2）、骨形态发生蛋白2（BMP-2）观察细胞骨型分化，通过TUNEL染色和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3检测观察细胞凋亡情况。结果 血管钙化后，lncRNA H19表达明显上升，BI-1和OPA1表达明显下降，而siRNA敲低lncRNA H19表达后，BI-1和OPA1蛋白表达明显上升；抑制BI-1后，OPA1再次下降（P<0.001）。 siRNA敲低lncRNA H19表达后，钙化结节消失，钙含量、Runx-2、BMP-2、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达和细胞凋亡率均显著降低（P<0.001）。siRNA敲低lncRNA H19基础上再抑制BI-1或OPA1蛋白，钙化结节出现，钙含量、Runx-2、BMP-2、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达和细胞凋亡率均显著增加（P<0.001）。结论 LncRNA H19通过抑制BI-1/OPA1蛋白通路诱导血管钙化，其可能机制和促进钙沉积、细胞骨型分化和细胞凋亡有关。

• 川藏香茶菜丙素抑制NLRP3炎症小体活化并缓解小鼠脓毒性休克

  曹海若, 张 玮, 李明远, 杨燕青, 李玉云

  目的 探究中草药提取物川藏香茶菜丙素（Iso C）对NLRP3炎症小体活化的影响以及对脂多糖（LPS）诱导的小鼠脓毒性休克是否具有缓解作用。方法 体外实验：利用LPS预刺激小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）以及人急性单核细胞白血病（THP-1）细胞系。通过加入多种NLRP3炎症小体激动剂活化经典NLRP3炎症小体。利用胞内转染LPS活化非经典NLRP3炎症小体。利用转染聚脱氧腺苷酸（poly A：T）活化AIM2炎症小体。通过蛋白质印迹法（Western blot）检测NLRP3炎症小体活化产物caspase-1的剪切，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测上清中NLRP3依赖与非依赖的多种促炎细胞因子分泌情况。利用电感耦合等离子体发射光谱仪检测细胞内钾离子含量。体内实验：挑选SPF级C57BL/6J小鼠随机分为空白对照组（Control组），脓毒性休克组（LPS组），Iso C治疗组（LPS+Iso C组）。ELISA分析小鼠血清和腹腔灌洗液中促炎细胞因子白细胞介素 1β（1L-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素 6（IL-6）的分泌情况，并观察注射LPS后小鼠48 h内生存时间，绘制小鼠生存曲线。结果 体外实验表明，在BMDM细胞中Iso C 以剂量依赖的方式抑制多种激动剂引起的经典NLRP3炎症小体活化以及胞内转染LPS诱导非经典NLRP3炎症小体的活化（P0.05）。Iso C对AIM2炎症小体的活化无显著影响（P>0.05）。Iso C不影响NLRP3炎症小体活化上游信号钾离子外流（P>0.05）。在人THP-1细胞中Iso C抑制NLRP3炎症小体活化（P<0.05）。体内实验结果表明，与脓毒性休克组相比，Iso C治疗组小鼠血清和腹腔灌洗液中IL-1β的水平显著下降（P<0.05）且生存时间更长（P<0.05）。结论 中草药来源的Iso C可以特异性抑制NLRP3炎症小体的活化从而缓解小鼠脓毒性休克，是潜在的治疗炎症性疾病的小分子化合物。

• 长链非编码RNA ABHD11-AS1促进胃癌细胞糖酵解并加速肿瘤恶性进展

  冯 雯, 赖跃兴, 王 静, 徐 萍

  目的 探讨长链非编码RNA ABHD11-AS1对胃癌细胞糖酵解的影响及其作用的分子机制。方法 分别将空载质粒pcDNA-Vector和过表达质粒pcDNA-ABHD11-AS1转染入ABHD11-AS1低表达的MKN45和MGC803胃癌细胞中，构建过表达组（pcDNA-ABHD11-AS1）和空载质粒对照组胃癌细胞株。运用CCK-8法检测细胞的增殖活性并绘制生长曲线，克隆形成实验检测细胞克隆形成能力，Transwell检测细胞迁移、侵袭能力，葡萄糖摄取实验及乳酸生成实验检测细胞糖酵解水平的变化；LncMAP 数据库分析查找 ABHD11-AS1 可能调控的转录因子，查阅文献进行分析挑选候选转录因子，Western blot 明确ABHD11-AS1是否影响候选转录因子的表达量。结果 与对照组相比，转染pcDNA-ABHD11-AS1后，MGC803和MKN45胃癌细胞中ABHD11-AS1基因表达量明显上升（P<0.01），CCK8和成克隆实验表明细胞增殖加快（P<0.05），克隆形成能力增强，Tanswell实验结果证实细胞迁移（11±2 vs 27±3；17±4 vs 28±3，P<0.01）、侵袭（15±3 vs 26±2；10±1 vs 35±2，P<0.01）作用增强；上调ABHD11-AS1后，胃癌细胞葡萄糖摄取及乳酸生成增多（P<0.05）。分析数据库结果显示ABHD11-AS1可能调控经典糖酵解相关基因c-Myc，Western blot结果证实上调ABHD11-AS1后，c-Myc表达量随之升高。结论 ABHD11-AS1通过上调c-Myc促进胃癌细胞内的糖酵解，并加速胃癌进展。

• 阿美替尼具有较好的抗神经母细胞瘤作用：基于下调MMP2和MMP9的表达

  刘雪柔, 杨玉梅, 蔡 慧, 张耀帅, 范方田, 李 娴, 李姗姗

  目的 探究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂阿美替尼对神经母细胞瘤SH-SY5Y的作用。方法 CCK-8法、集落克隆法和流式细胞术检测不同浓度阿美替尼（0、2、4、8 μmol/L）对SH-SY5Y细胞增殖、细胞存活和细胞凋亡的影响；透射电镜观察阿美替尼处理后SH-SY5Y细胞亚显微结构；Transwell小室实验检测阿美替尼对SH-SY5Y细胞侵袭及迁移的作用；Western blot实验检测阿美替尼对SH-SY5Y细胞凋亡和侵袭迁移相关蛋白Bax、Bcl-2、E-Cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9表达的影响；SH-SY5Y细胞注射到5周龄BALB/C裸鼠皮下，建立裸鼠皮下瘤动物模型，每组6只，设置空白对照组、阿美替尼处理组（15 mg/kg）、阳性药环磷酰胺处理组（20 mg/kg），测量裸鼠肿瘤体积及体质量变化，HE染色观察阿美替尼对荷瘤裸鼠心、肝、脾、肺、肾的毒副作用。结果 CCK-8结果表明，相比于对照组，阿美替尼能够抑制SH-SY5Y细胞增殖（P<0.05），其作用24、48、72 h的IC50分别为5.004、3.728、3.228 μmol/L；集落克隆结果表明阿美替尼能够抑制SH-SY5Y细胞存活；流式细胞术结果表明阿美替尼诱导 SH-SY5Y 细胞发生凋亡（P<0.05），透射电镜下观察到阿美替尼处理后具有典型的细胞凋亡形态学特征；Transwell小室实验结果表明阿美替尼能够抑制SH-SY5Y细胞的侵袭迁移能力（P<0.01）；Western blot实验结果表明阿美替尼处理后SH-SY5Y细胞中E-Cadherin、Bax蛋白表达水平上调，Bcl-2、Vimentin、MMP2、MMP9蛋白表达水平下调（P<0.05）；动物实验结果表明阿美替尼能够抑制神经母细胞瘤的生长，HE染色结果表明阿美替尼没有对小鼠脏器产生明显毒性。结论 阿美替尼能够抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖并诱导细胞发生凋亡，通过下调 MMP2、MMP9 蛋白表达，从而抑制神经母细胞瘤侵袭和迁移。

• 参芪温肺方减轻慢性阻塞性肺疾病大鼠的肺气虚证：基于调节NLRP3/GSDMD细胞焦亡通路

  吴 迪, 王小乐, 高雅婷, 童佳兵, 杨勤军, 丁焕章, 张 璐, 李泽庚

  目的 探讨参芪温肺方（SQWF）对香烟烟雾联合脂多糖（LPS）诱导的慢性阻塞性肺疾病（COPD）肺气虚证模型大鼠NLRP3/GSDMD 信号通路的影响。方法 将 SD 大鼠随机分为空白组（10 mL/kg，8 只）、模型组（10 mL/kg，8 只）、SQWF低（2.835 g/kg，8只）、中（5.67 g/kg，8只）、高（11.34 g/kg，8只）剂量组、玉屏风组（1.35 g/kg，8只），建立COPD肺气虚证大鼠模型。观察大鼠体质量、抓力、肺功能、肺组织病理改变、检测外周血中炎性细胞和BALF中炎症因子水平；Q-PCR及免疫组化法检测肺组织NLRP3/GSDMD信号通路相关分子的表达。结果 与空白组相比，模型组大鼠体质量、抓力及肺功能均降低（P<0.01）、肺组织病理损伤较重；外周血中WBC、NEU%、MON%水平升高（P<0.01），LYM%降低（P<0.01），BALF中TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18含量均升高（P<0.01）；肺组织中NLRP3、ASC、GSDMD、IL-1β、mRNA及其蛋白表达水平升高（P<0.01），与模型组相比，SQWF各组及玉屏风组的体质量、抓力、肺功能及肺组织病理明显改善（P<0.05）；WBC、NEU%及MON%水平降低（P<0.01），LYM%升高（P<0.01），TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18含量均降低（P<0.01）；肺组织NLRP3、ASC、GSDMD及IL-1β的mRNA和蛋白阳性表达水平下调（P0.05），且SQWF呈浓度依赖性。结论 参芪温肺方可能通过调节NLRP3/GSDMD通路抑制肺组织细胞焦亡，缓解COPD肺气虚证大鼠炎症反应，减轻肺组织炎性损伤。

• 基于C肽的胰岛素抵抗指数可准确评估健康体检者的胰岛素抵抗与血尿酸水平的相关性

  方福生, 王 宁, 刘星宇, 王 薇, 孙 菁, 李 红, 孙般若, 谷昭艳, 傅晓敏, 闫双通

  目的 探讨基于C肽的胰岛素抵抗指数在评估健康体检人群胰岛素抵抗与血尿酸（Ua）水平关联中的作用。方法 回顾性收集2017年1月~2021年12月在解放军总医院第二医学中心进行健康体检的资料46 017例，根据Ua水平分为两组：Ua≤420 μmol/L和Ua>420 μmol/L，比较两组胰岛素抵抗指数（HOMA2-IR）、基于C肽的胰岛素抵抗指数（HOMA2 IR-CP）水平的差异，采用Pearson相关分析、线性回归分析HOMA2-IR、HOMA2 IR-CP与Ua的相关性，分层交互分析不同亚组间HOMA2-IR、HOMA2IR-CP与Ua的关联是否存在差异，利用ROC曲线评价HOMA2-IR、HOMA2 IR-CP对Ua升高的预测能力。结果 Ua≤420 μmol/L组HOMA2-IR、HOMA2 IR-CP水平均显著低于Ua>420 μmol/L（P<0.001）。单因素Pearson相关分析显示HOMA2-IR与Ua（r=0.262，P<0.001）弱相关，HOMA2 IR-CP与Ua（r=0.409，P<0.001）中等强度相关。多因素线性回归分析提示在调整相关混淆因素后HOMA2-IR（R2=0.445，P<0.001）或HOMA2 IR-CP（R2=0.461，P<0.001）均是Ua水平的影响因素。分层交互分析发现不同性别、年龄、糖代谢亚组间胰岛素抵抗指数与Ua的关联均存在差异（P<0.001）。ROC曲线显示HOMA2-IR、HOMA2 IR-CP预测Ua升高的曲线下面积分别为0.662、0.722。结论 HOMA2 IR-CP更为准确地评估胰岛素抵抗与血尿酸水平关联。

• Hsa-miR-148a-3p通过下调DUSP1基因促进乳腺癌细胞的恶性行为

  许家铭, 林 龙, 陈琼慧, 李 兰

  目的 通过生信分析结合体内外实验验证Hsa-miR-148a-3p调控双特异性磷酸酶1（DUSP1）对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法 TCGA数据库下载数据并鉴定差异微小RNA（miRNA)和信使RNA（mRNA）；数据库筛选差异miRNA靶基因；String和Cytoscape构建蛋白质互作网络及筛选TOP10 hub基因；TCGA数据库验证TOP10hub基因的表达；Cytoscape构建miRNA-TOP10hub基因网络。定量逆转录 PCR（RT-qPCR）实验检测Hsa-miR-148a-3p和DUSP1在人乳腺癌组织和细胞中的表达。采用Hsa-miR-148a-3p mimic、Hsa-miR-148a-3p inhibitor及对照NC转染MCF-7细胞。分为NC组，NC mimics组，Hsa-miR-148a-3p mimics组，NC inhibitor组，Hsa-miR-148a-3p inhibitor组；荧光素酶报告基因实验验证Hsa-miR-148a-3p和DUSP1的结合；CCK-8，划痕实验，Transwell和细胞凋亡实验验证Hsa-miR-148a-3p对乳腺癌细胞增殖，迁移，侵袭和凋亡的影响。建立裸鼠成瘤模型，测量小鼠肿瘤质量和体积；Kaplan-Meier生存曲线分析小鼠生存情况；免疫组化检测DUSP1的表达水平。结果 获得乳腺癌差异miRNA 54个（8个下调，46个上调），差异mRNA 799个（509个下调，290个上调）；54个差异miRNA预测靶基因3716个，与差异mRNA取交集，得到150个交集基因；蛋白-蛋白互作网络图中的TOP10hub基因为MET，LPAR1，LAMC1，FOS，EGFR，PIK3R1，DUSP1，GNAI1，LAMA4，NR3C1，这些基因在乳腺癌组织中均显著下调；双荧光素酶报告基因实验证实Hsa-miR-148a-3p能与DUSP1结合；RT-qPCR结果表明，Hsa-miR-148a-3p在乳腺癌组织和细胞中显著上调（P<0.01），而DUSP1则显著下调（P<0.01）。细胞实验结果表明，Hsa-miR-148a-3p促进乳腺癌细胞增殖，迁移和侵袭，抑制细胞的凋亡（P<0.01）。动物实验结果表明，Hsa-miR-148a-3p促进小鼠体内肿瘤质量和体积的增长（P<0.01），缩短小鼠的存活时间（P<0.01），免疫组化结果显示，Hsa-miR-148a-3p 抑制DUSP1的表达水平（P<0.01）。结论 Hsa-miR-148a-3p通过抑制DUSP1的表达而作为癌基因发挥作用，这有助于开发针对乳腺癌的新型治疗靶点。

• JAG1影响单核-巨噬细胞重塑三阴性乳腺癌转移前微环境：基于外泌体中的LncRNA MALAT1

  徐梦歧, 石宇彤, 刘俊平, 吴敏敏, 张凤梅, 何志强, 唐 敏

  目的 探讨JAG1对单核-巨噬细胞在三阴性乳腺癌（TNBC）中肿瘤转移前微环境（PMN）中作用的影响及其可能的调控机制，以期为TNBC诊疗提供新的思路和靶点。方法 人TNBC细胞MDA-MB-231，MDA-MB-231B体外培养，qRT-PCR检测JAG1的表达。动物实验将雌性裸鼠分为MDA-MB-231组和MDA-MB-231B组，5只/组，分别往乳腺脂肪垫注射细胞5×106，6周取肿瘤组织进行免疫组化分析。人源单核细胞THP-1为研究对象，分别经人源JAG1重组蛋白（rhJAG1）直接处理或经TNBC条件培养基（CM）处理，通过单核-内皮粘附、Transwell、qRT-PCR和Western blot实验检测JAG1对单核细胞的直接作用和在PMN中的影响。实验分为5组：Control组：THP-1正常培养；231-CM组：THP-1+231-CM；231-JAG1-CM组：THP-1+rhJAG1处理后231-CM；231B-CM组：THP-1+231B-CM；231-DAPT-CM组：THP-1+DAPT处理后231-CM。透射电镜（TEM）、纳米颗粒跟踪分析（NTA）检测JAG1对TNBC外泌体分泌影响。生物信息学筛选与LncRNA MALAT1相互作用的miRNA并行qRT-PCR验证。结果 与MDA-MB-231相比，侵袭株MDA-MB-231B的JAG1表达更高（P<0.01），肝转移面积更大；rhJAG1直接处理和TNBC条件培养基处理均能促进单核细胞的黏附、迁移，并影响其分化（均P<0.05）；透射电镜和NTA检测显示JAG1能促进MDA-MB-231外泌体分泌数量增多（P<0.01），外泌体中LncRNA MALAT1含量升高（P<0.0001）。生物信息学分析得到与 LncRNA MALAT1 和 JAG1 相关的 5 个候选 miRNA，实验证实 miR-26a-5p 在 TMN 中的单核-巨噬细胞中受到MALAT1的靶向调控（P<0.0001）。结论 JAG1能促进TNBC的外泌体分泌并影响其中Lnc MALAT1的表达，从而靶向PMN中单核-巨噬细胞miR-26a-5p的表达，从而使单核-巨噬细胞中JAG1表达升高，进而影响单核-巨噬细胞在PMN中的黏附、迁移和破骨分化作用。

• 六味酸枣汤治疗围绝经期失眠的作用机制：基于网络药理学与动物实验

  张 倩, 张梅奎, 刘颖璐, 王 妍, 吕菲菲, 王毓国

  目的 基于网络药理学探索六味酸枣汤治疗围绝经期失眠的作用机制，并运用分子对接和动物实验进行验证。方法 借助TCMSP 和 Batman-TCM 数据库检索六味酸枣汤的活性成分和作用靶点，并构建“中药-活性成分-靶点”网络。以“Perimenopausal Insomnia”为关键词在OMIM、Genecards和Gene数据库获取疾病靶点。将共同靶点导入STRING 数据库和Cytoscape软件筛选核心治疗靶点，借助DAVID数据库进行GO富集分析和KEGG通路分析。利用AutoDock对六味酸枣汤主要活性成分与核心靶点进行分子对接实验，同时以动物实验验证结果。取48只大鼠随机分为假手术组（8只）和造模组（40只），采用双侧卵巢切除术和对氯苯丙氨酸腹腔注射建立PI模型。将造模组大鼠随机分为模型组、阳性对照组和中药低、中、高剂量组，分别予以生理盐水10 mL/kg、唑吡坦10 mg/kg以及六味酸枣汤9.0、18.0、36.0 g/kg灌胃，连续8 d。末次给药后进行戊巴比妥钠协同的翻正反射实验，记录各组睡眠潜伏期和睡眠时长，ELISA法测定血清雌激素、卵泡刺激素、黄体生成素等激素水平，WB和PCR法分别检测下丘脑组织中ESR1与SIRT1的蛋白及mRNA水平。结果 共筛选出六味酸枣汤活性成分99个，药物靶点389个，PI相关靶点187个，药物与PI共同靶点15个；核心活性成分主要为亚美异粟碱、酸枣仁环肽、白桦脂酸等，核心靶点包括ESR1、SIRT1、SERPINE1、COMT和CCL2等。GO分析结果主要包括RNA聚合酶II启动子对转录的正向调节、对药物的反应和转录的正向调节等生物学过程；KEGG富集通路包括多巴胺能突触途径和酪氨酸、色氨酸代谢等。分子对接结果显示六味酸枣汤主要活性成分与ESR1、SIRT1和SERPINE1有较好的结合能，与酒石酸唑吡坦相当。动物实验表明，六味酸枣汤可有效改善大鼠失眠症状（P<0.01），调节雌激素等HPO轴相关激素水平（P<0.05），促进ESR1和SIRT1的蛋白与mRNA表达（P<0.01）。结论 六味酸枣汤可能通过亚美异粟碱、酸枣仁环肽、白桦脂酸等多种活性成分协同调控ESR1、SIRT1和SERPINE1等基因表达，进而达到治疗围绝经期失眠的效果。

• 中医药治疗可降低类风湿关节炎合并血小板升高患者再入院的风险：一项匹配队列研究

  王帆帆, 刘 健, 方妍妍, 文建庭, 贺明玉, 韩 琦, 李 旭

  目的 确定中医药治疗是否与类风湿关节炎合并血小板升高患者（RA-PLT）再入院的风险相关。方法 回顾性收集了安徽中医药大学第一附属医院2013年~2021年诊断为类风湿关节炎（RA）的住院患者资料，并进一步筛选出伴有血小板升高的患者。采用倾向评分匹配法，将RA-PLT患者分为中医药（TCM）组和非中医药（Non-TCM）组，按1-TCM：1-Non-TCM的比例进行匹配，对性别、年龄 、中成药、外敷药等因素进行调整，以减少选择偏倚和混淆。采用Cox比例风险模型评估RA-PLT患者再入院风险的危险比（HR）；采用Kaplan-Meier曲线评估RA-PLT患者再入院的发生率。结果 本研究最终纳入1176例RA-PLT患者，其中TCM组842例，Non-TCM组334例。经过1∶1倾向评分匹配，每组纳入334人。COX比例风险模型结果示：TCM组的再入院率明显低于Non-TCM组[风险比（HR）=0.59，95% CI=0.48，0.73，P<0.001]。TCM是RA-PLT患者低再入院风险的保护因素。Kaplan-Meier 曲线结果显示：长期服用中药有助于降低再入院风险（Log-rank P<0.001）。关联规则显示，部分中草药与临床指标的改善具有较强的相关性，如类风湿因子、血沉、C反应蛋白等。结论 本研究提示TCM的使用可能与RA-PLT患者较低的再入院有强关联，并存在长程关联。中医药是这些患者低再入院风险的保护因素。

• 高表达MRPL13促进胃癌细胞增殖并影响患者预后：基于抑制p53信号

  王 炼, 夏勇生, 张 震, 刘馨悦, 施金冉, 王月月, 李 静, 张小凤, 耿志军, 宋 雪, 左芦根

  目的 明确线粒体核糖体蛋白L13（MRPL13）在胃癌中的表达情况及对预后的影响，并分析其可能的作用机制。方法 利用公共肿瘤数据库，对胃癌中MRPL13的表达及对预后的作用及发生机理进行初步分析。进一步纳入我院2014年1月~2017年10月开展胃癌根治术的100例患者，分析MRPL13表达量对肿瘤进展及术后5年生存期的影响。体外采用慢病毒转染的方式调控胃癌细胞系（MGC-803和SGC-7901）中MRPL13的表达，分析其对细胞增殖和周期的影响。通过裸鼠皮下移植瘤模型进一步验证MRPL13在体内对肿瘤生长的影响。结合体内外研究分析MRPL13影响胃癌细胞的分子机理。结果 生物信息学和本机构的病例分析发现，胃癌组织中MRPL13的水平均显著高于癌旁组织（P<0.05）。相关性分析表明，MRPL13的表达与Ki67、外周血CEA和CA19-9均呈正相关（P<0.05）。单因素结合Cox多因素分析，证实MRPL13高表达是影响胃癌5年生存率的独立危险因素（HR：3.284；95% CI：1.537~7.016）。富集分析提示MRPL13的功能可能和细胞周期、p53信号有关。体外CCK-8、克隆形成、流式细胞术和免疫印迹检测显示：上调MRPL13促进胃癌细胞增殖、G1/S期转化和细胞周期蛋白（CyclinD1和CDK6）表达（P<0.05），下调MRPL13的结果则与之相反（P<0.05）。在体研究显示：上调胃癌细胞MRPL13表达显著促进裸鼠移植瘤的生长（P<0.05），而下调则抑制（P<0.05）。机制分析显示，上调MRPL13抑制胃癌细胞和裸鼠移植瘤中p53和p21的表达（P<0.05），而下调则反之（P<0.05）。结论 MRPL13在胃癌中表达升高且影响长期预后，其可能通过抑制p53信号促进胃癌细胞增殖和细胞周期进程。

• 胰腺癌细胞的异质性和肿瘤细胞分子亚型鉴定：基于CEACAM5、LGALS1和CENPF基因表达

  孙敬杰, 卢 鹏, 管莎莎, 刘淞淞

  目的 探讨胰腺癌的异质性和肿瘤细胞分子亚型鉴定新方法，鉴定胰腺癌发展过程中的特征基因。方法 分析GSE155698数据集中16例胰腺癌组织单细胞测序数据，初步聚类后，根据各细胞EPCAM基因的表达情况分离胰腺癌细胞，再聚类、分群后鉴定特征基因，进行通路GO和KEGG通路富集分析，并进行拟时序分析。提取癌症基因组图谱179例胰腺癌患者和正常胰腺组织基因表达库中171例正常人基因表达数据、临床信息及预后情况，结合人类蛋白表达图谱蛋白表达情况对各亚型关键基因进行验证。最后通过细胞功能实验验证CEACAM5、LGALS1、CENPF对胰腺癌细胞的增殖、侵袭与迁移等功能的影响。结果 对16例胰腺癌样本48 570个细胞进行分析后发现，细胞总共被聚类为22群，其中包含5群胰腺癌细胞。这些胰腺癌细胞被分为3群：亚型1、亚型2和亚型3，分别具有完全不同的基因表达模式和功能。亚型1胰腺癌细胞的特征基因主要富集于蛋白代谢过程的负调节、铁死亡和抗原提呈相关通路；亚型2胰腺癌细胞的特征基因主要于肽合成过程、翻译和核糖体相关通路；亚型3胰腺癌细胞的特征基因主要富集于ATP代谢过程、糖酵解/葡萄糖生成和细胞周期相关通路。亚型2和亚型3可能是由亚型1发展而来，亚型3可能是胰腺癌细胞发育的最终状态。各亚型的关键特征基因CEACAM5、LGALS1、CENPF的表达情况也在发育轨迹中展现了不同状态。基因和蛋白表达层面均显示各亚型的关键特征基因CEACAM5、LGALS1、CENPF在胰腺癌中高表达，且与患者的不良预后相关，当下调CEACAM5、LGALS1、CENPF的表达后，胰腺癌细胞的增殖（P<0.05）、迁移（P<0.05）和侵袭（P<0.05）能力均被抑制。结论 胰腺癌细胞有较强的异质性，基于CEACAM5、LGALS1、CENPF基因表达可鉴定肿瘤细胞发展过程中的不同分子亚型，且影响胰腺癌细胞的增殖、侵袭和转移。

• 去铁胺促进亚致死剂量X射线辐照小鼠的骨髓造血功能恢复

  张小敏, 吴泽彬, 蓝惠璇, 陈姗姗, 吴 杰, 朱玲玲, 肖 扬

  目的 探讨去铁胺（DFO）对亚致死剂量X射线辐照C57小鼠骨髓造血功能的影响。方法 将C57小鼠随机分成空白对照组、全身亚致死剂量辐照组（TBI组）、DFO治疗组（DFO组），每组10只。经5.4 Gy、1.0 Gy/min X射线全身辐照后，DFO组小鼠每天经皮下注射给予100 mg·kg-1 DFO溶液，其余各组小鼠皮下注射等量的生理盐水。每隔2 d称小鼠体质量，给药10 d后每组随机处理5只小鼠，检测血细胞计数、骨髓有核细胞计数、骨髓CD34+细胞比例及骨髓有核细胞中凋亡、铁死亡相关蛋白cleavedPARP-1、cleaved caspase-3、血管内皮生长因子（VEGF）、GPX4及SLC7A11的表达；给药20 d后处理每组剩余的5只小鼠，分别检测血细胞计数、骨髓有核细胞计数、骨髓病理学等。结果 与空白对照组相比，TBI组和DFO组小鼠体质量在第3天明显降低（P<0.05），第6天TBI组小鼠体质量降至最低（P<0.01）。与空白对照组相比，在辐照后第10、20天TBI组小鼠血细胞计数、骨髓有核细胞计数明显降低（P<0.01或P<0.001），骨髓病理显示TBI组小鼠骨髓造血组织及有核细胞明显减少、出现脂肪空泡等，并且在辐照后第10天TBI组小鼠骨髓有核细胞中cleaved PARP-1和cleaved caspase-3蛋白表达明显增加（P<0.01），而GPX4、SLC7A11蛋白表达明显减少（P<0.05）。与TBI组相比，在辐照后第10天DFO组小鼠骨髓中CD34+细胞比例明显增加（P<0.001）；骨髓中cleaved PARP-1和cleaved caspase-3蛋白表达明显降低（P<0.05），GPX4、SLC7A11蛋白表达明显增加（P<0.05），及骨髓微环境中VEGF表达增加（P<0.05）；与TBI组相比，在辐照后第20天DFO组白细胞、红细胞、血小板、骨髓有核细胞计数明显升高（P<0.05或P<0.01），并且骨髓病理显示骨髓造血组织及有核细胞增加。结论 DFO可能通过抑制骨髓有核细胞凋亡、铁死亡，并促进骨髓微环境中VEGF表达及CD34+细胞增殖来改善亚致死剂量辐照小鼠骨髓造血功能。

• 基于糖尿病视网膜病变的诊断模型对糖尿病肾病有较好诊断效能

  李 莹, 王 倩, 陈小鸟, 席 悦, 杨 建, 刘晓敏, 王远大, 张 利, 蔡广研, 陈香美, 董哲毅

  目的 验证和比较基于糖尿病视网膜病变（DR）的糖尿病肾病（DN）无创诊断模型的效能。方法 收集1993年1月~2014年12月在解放总医院肾脏病科行肾活检的2型糖尿病患者565例，以肾脏病理诊断为依据分为DN组及非糖尿病肾病（NDRD）组。将22年间的数据按时间先后分为早期1993年~2003年，中期2004年~2012年4月，晚期2012年5月~2014年12月。明确22年间肾活检2型糖尿病患者的临床特征和病理诊断变迁。对国际已发表的基于DR的DN无创诊断模型（DNT模型和JDB模型）进行诊断效能的验证并比较优劣，分析误判病例的特点。结果 DN组高血压、DR的发生率及糖化血红蛋白（HbA1c）、肌酐、24 h尿蛋白定量均高于NDRD组（P<0.05），血红蛋白、甘油三酯、低于非糖尿病肾病组（P<0.01）。NDRD的比例逐渐上升，主要的病理类型为IgA肾病和膜性肾病。JDB模型AUC为0.946，NDT模型AUC为0.925，但两者差异无统计学意义（P=0.198）。糖尿病病史、血尿和DR发生率是影响模型误判的重要临床特征。结论 DN的临床特征和病理诊断随时间发生变迁，基于DR的无创诊断模型对DN具有良好的诊断效能。

• 近红外光照射可显著改善大鼠抑郁所致的肠功能紊乱

  郑轶珺, 侯宇月, 李 帆, 史欣可, 陶雅雯, 赵欣宇, 胡 浩, 杨 林

  目的 探究近红外光对抑郁所致肠功能紊乱的影响及其可能的机制。方法 32只SPF级雄性SD大鼠，随机分为对照组（Control）、模型组（Model）、近红外光低剂量组（Low NIR）、近红外光高剂量组（High NIR），8只/组。除对照组外，其他组进行慢性束缚应激4周，近红外光低、高剂量组给予头部近红外光照射。以悬尾及强迫游泳实验来评价大鼠抑郁水平，结直肠扩张反射测试、肠道推进测试以及粪便含水量、粒数衡量大鼠肠道功能改变。大鼠海马、结肠的HE染色检测组织病理变化情况，Western blotting检测大鼠海马体脑源性神经生长因子（BDNF）、Nrf2、PGC-1α蛋白水平的表达。结果 与对照组相比，模型组悬尾及强迫游泳实验不动时间和内脏敏感性增加，粪便粒数与含水量下降；海马体内BDNF、Nrf2、PGC-1α表达降低，差异均有统计学意义（P<0.05，P<0.01）；海马体锥体细胞排列疏松，神经元损伤率升高，结肠有明显炎性细胞浸润，黏膜腺体排列欠整齐，病理损伤评分较高。与模型组相比较，高剂量近红外光组悬尾及强迫游泳实验不动时间和内脏敏感性下降，粪便粒数与含水量上升，差异均有统计学意义（P<0.05）；海马体锥体细胞排列紧密，神经元损伤率下降，结肠炎性细胞浸润明显减少，腺体排列整齐，病理学损伤评分降低；大鼠大脑海马体内BDNF、Nrf2、PGC-1α表达增强（P<0.05，P<0.01）。 结论 近红外光照射可显著改善大鼠抑郁样行为和肠道功能，其机制可能与PGC-1α/Nrf2信号通路抗氧化应激作用并升高大鼠大脑海马体内BDNF水平有关。

• THRIVE联合i-gel喉罩在经输尿管软镜碎石术中延长无通气氧合时间

  张 晨, 廖宏森, 李浩甲, 徐亚杰, 张 桂, 王晓亮, 鲍红光

  目的 探究THRIVE联合i-gel喉罩对输尿管软镜碎石术的无通气状态下氧疗的安全性及手术精准性的影响。方法 纳入喉罩全身麻醉下行输尿管软镜碎石术的患者120例，随机分为3组：对照组（C组）、高频小潮气量组（H组）、THRIVE组（T组），每组40例。待输尿管软镜进入肾盂寻找到结石后，C组采用呼吸机APPV模式辅助通气，H组切换为小潮气量高呼吸频率模式，T组断开呼吸机，改用THRIVE联合喉罩供氧。记录3组碎石操作所用时间及手术者满意度、膈肌动度、输尿管黏膜损伤次数；记录3组患者入室、置入喉罩即刻、碎石开始、碎石开始10、20、30 min、出PACU各时刻的动脉血压、心率、SpO2、PaO2、PaCO2和pH值的变化情况。结果 相较于其他两组，T组外科医生碎石操作时间显著缩短，满意度显著提高，患者膈肌动度显著减少，术中黏膜损伤次数显著减少；3组患者之间动脉血压、心率、SpO2无显著差异；与碎石开始时相比，H组及T组碎石20 min及30 min时间点PaO2均下降，T组碎石10、20及30 min各时间点PaCO2均显著升高，T组碎石10、20及30 min各时间点pH均显著降低；3组患者出PACU时氧合指标无显著差异。结论 THRIVE联合i-gel喉罩用于输尿管软镜碎石术无通气期间氧疗可提高手术精准性，且在30 min内维持患者氧合指标于可控制范围内。

• 槲皮素可改善大鼠肺动脉高压：基于调控 HMGB1/RAGE/NF-κB通路

  张宁宁, 邱 奇, 陈永锋, 孙正宇, 卢国庆, 王 磊, 康品方, 王洪巨

  目的 研究槲皮素是否通过HMGB1/RAGE/NF-κB改善肺动脉高压（PAH）。方法 构建缺氧性肺动脉高压大鼠模型，分别设置对照组（CON组）、缺氧组（Hypoxia组）、缺氧+槲皮素组（Hypoxia+Que），治疗组每日以槲皮素100 mg/kg灌胃处理。以生物信号采集系统监测并测定右心室压力（RVSP）作为肺动脉收缩压，右心室肥厚指数（RVHI）评估右室肥厚程度。HE染色观察肺小动脉重构情况。通过小动物超声仪评估各组大鼠右心功能，通过蛋白质免疫印迹检测各组大鼠肺组织的HMGB1、RAGE、NF-κB，凋亡标志物Bax、Bcl-2和Cleved-caspase3的蛋白水平。结果 与CON组相比，Hypoxia组RVHI增加和RVSP升高（P<0.01），槲皮素干预后降低RVHI和RVSP（P<0.01）。HE染色观察到Hypoxia组肺动脉血管壁明显增殖增厚和管腔狭窄，Hypoxia+Que组管壁增厚减轻和管径增大。小动物超声显示 Hypoxia 组 RVFW 增加和 PAT/PET 比值降低（P<0.01），Hypoxia+Que 组较Hypoxia组RVFW降低和PAT/PET比值升高（P<0.01）。Western blot结果显示，与CON组相比，Hypoxia组HMGB1蛋白表达升高（P<0.01），RAGE、NF-κB、Bcl-2 蛋白表达升高（P<0.01），Bax、Cleved-caspase3 蛋白表达减少（P<0.01），Hypoxia+Que组HMGB1 蛋白和 NF-κB 蛋白表达降低（P<0.05），RAGE 蛋白表达降低（P<0.01）、Bcl-2 蛋白表达降低（P<0.05），Bax 蛋白和Cleved-caspase3蛋白表达升高（P<0.01）。结论 槲皮素可能通过HMGB1/RAGE/NF-κB通路促进凋亡改善肺动脉高压。

• SLC12A8通过JAK/STAT途径促进膀胱癌细胞的增殖、侵袭与迁移并触发上皮间充质转化

  张晓林, 吴浩松, 汪 盛

  目的 探究溶质载体家族12成员8（SLC12A8）在膀胱癌中的表达及作用机制。方法 利用TCGA数据库分析SLC12A8在膀胱癌中的表达、预后及其与临床病理特征关系。细胞通过瞬时转染siRNA，将实验分为siNC组和siSLC12A8组，各组终浓度为50 nmol/L。利用qRT-PCR检测干扰效率，CCK-8、Transwell及划痕实验检测各组膀胱癌细胞增殖、侵袭与迁移能力。GSEA对通路富集分析；分析SLC12A8与EMT标志物相关性。Western blot检测通路蛋白及EMT相关蛋白表达。通过应用Colivelin将实验分为siSLC12A8+NC组和siSLC12A8+Colivelin组，药物浓度为0.5 μmol/L，利用cck-8及Transwell检测各组细胞生物学行为。结果 SLC12A8在膀胱癌中高表达（P<0.05）、与不良预后及病理分期相关（P<0.05），并可作为独立预后因素。CCK-8、Transwell及划痕实验结果表明，与siNC组相比，siSLC12A8组细胞增殖、侵袭与迁移能力降低（P<0.05）。GSEA表明富集在JAK/STAT信号通路上（P=0.008）。相关性分析表明，SLC12A8与E-cadherin负相关（r=-0.183，P<0.001），而与N-cadherin正相关（r=0.302，P<0.001）、vimentin正相关（r=0.342，P<0.001）。Western blot结果显示，与siNC组相比，siSLC12A8组p-Jak2、p-Stat3蛋白水平降低，E-cadherin表达增加、N-cadherin和vimentin蛋白表达水平下降。应用Colivelin后，与siSLC12A8+NC组相比，siSLC12A8+Colivelin组细胞增殖、侵袭与迁移能力增加（P<0.05）。结论 SLC12A8通过激活JAK/STAT信号通路促进膀胱癌进展，且与不良预后密切相关。

• 生命潮生物反馈技术干预2型糖尿病的先导观察

  刘 泽, 何汶霞, 房睿哲, 肖 钢, 言 芳, 邱祁广, 方会龙, 王俊杰

  目的 探讨生命潮生物反馈技术对2型糖尿病（T2DM）的治疗效果，为T2DM的临床治疗提供新技术。方法 分析5例T2DM患者经生命潮生物反馈技术干预治疗后平均血糖、预估糖化血红蛋白（HbA1c）、空腹血糖及HbA1c的变化情况，干预期间联合瞬感血糖监测系统进行减药管理。结果 与干预前使用降糖药相比，经干预治疗停用降糖药物后，其平均血糖、空腹血糖及HbA1c的差异无统计学意义（P>0.05），但预估HbA1c较干预前使用降糖药时明显降低（P<0.05）；干预治疗后2例患者实现完全缓解，2例患者实现部分缓解，1例患者血糖得到明显改善；有1例患者经干预后其手足末端温度升高（P0.05），但心率变异性指数升高（P<0.05）。结论 生命潮生物反馈技术可通过促进自主神经系统调控平衡及改善微循环，在不改变原有生活方式下，帮助T2DM患者停用降糖药，维持血糖稳定，实现疾病缓解，降低并发症的发生。

• 宫颈癌放疗后癌因性失眠患者的大脑功能网络与个体-经颅磁刺激干预的相关性：基于图论分析

  刘 欢, 饶 阳, 孙传铸, 王洋涛, 齐 顺, 李 想, 田 萌, 禹 汛, 穆允凤

  目的 基于图论分析探讨宫颈癌放疗后癌因性失眠患者脑功能网络小世界和节点属性的变化，并明确功能网络与个体-靶向经颅磁刺激（IT-TMS）治疗失眠效果的相关性。方法 采集30名患者和30名相匹配的健康对照者的静息态功能磁共振（rs-fMRI）数据，患者接受加速智能神经调节TMS疗法治疗；使用图论分析，通过GRETNA软件提取失眠中小世界网络的属性特征和构建功能连通性矩阵；收集患者IT-TMS治疗前后的和健康对照者的匹兹堡睡眠质量指数（PSQI）、失眠严重程度指数（ISI）、焦虑自评量表（SAS）和抑郁自评量表（SDS）等量表，研究失眠改善与功能网络的相关性；统计分析采用SPSS软件及基于网络的统计分析方法。结果 两组在年龄和受教育程度方面差异均无统计学意义（P>0.05），在PSQI、ISI、SAS和SDS量表数据差异有统计学意义（P<0.05）；两组均符合小世界网络属性，与对照组相比，在基线时患者组小世界网络全局属性表现出σ、EI、Cp和Lp显著减少（P<0.05），Eg显著增加（P<0.05），这些特征在IT-TMS治疗后均有所改善，且失眠症状显著改善；经IT-TMS治疗后节点网络功能连接减少，且右侧岛叶和左侧额上回之间的功能连通性减少与ISI评分的改善相关。结论 宫颈癌放疗后癌因性失眠患者大脑网络信息整合能力受损，IT-TMS通过降低默认网络和突显网络的超连通性，显著改善了失眠症状。

• 基于正交视角X线图像重建的3D/2D配准方法

  弥 佳, 周宇佳, 冯前进

  目的 研究一种用于脊柱外科手术导航中术前CT图像与术中X线图像的3D/2D配准方法。方法 本文构建了一个基于3D图像重建的3D/2D配准算法。该算法对2D正交视角X线图像进行3D图像重建，将问题转换为了3D/3D配准；结合了重建和配准两个任务构建端对端的框架，并最终在3D流形空间中度量测地距离完成配准。结果 我们在公开数据集CTSpine1k上进行了实验。在两个具有不同大小初始配准误差的测试集上进行测试，对于较小初始误差的数据，达到了0.115°±0.095°的旋转估计误差和0.144±0.124 mm的平移估计误差；对于较大初始误差的数据，达到了0.792°±0.659°的旋转估计误差和0.867±0.701 mm的平移估计误差。结论 本文提出的方法能在满足实时需求的同时，实现鲁棒、精确的3D/2D配准，有望进一步提高脊柱外科导航性能。

• 心脏祖细胞来源的外泌体可减轻心肌梗死小鼠的心肌损伤：基于mTOR途径诱导Treg细胞分化

  何艳娟, 李卓颖, 申 琳, 石丁华, 李申堂

  目的 研究心脏祖细胞来源的外泌体（CPCs-Exos）对心肌梗死（MI）小鼠调节性T细胞（Treg）分化的影响及其作用机制。方法 结扎小鼠左冠状动脉前降支制备MI动物模型。所有小鼠随机分成3组，即对照组（只开胸，不结扎）、MI组（结扎左冠状动脉前降支）和CPCs-Exos组（结扎左冠状动脉前降支后尾静脉注射CPCs-Exos）。收集小鼠血清与心脏组织，流式细胞术与全自动生化仪检测Treg细胞、CD4+IL-10+T细胞百分比及LDH、CK-MB含量，TTC染色检测小鼠心肌梗死面积。收集小鼠脾脏naive CD4+T细胞，并将细胞分成对照组、CD4+T细胞活化组（CD3+CD28）、CPCs-Exos处理活化CD4+T细胞组（CD3+CD28+CPCs-Exos）、mTOR 激活剂（CD3 + CD28 + CPCs- Exos + mTOR activator）与抑制剂组（CD3 + CD28 + CPCs- Exos + mTORinhibitor）。Western blotting法检测细胞中mTOR、p-mTOR表达水平，流式细胞术检测Treg、CD4+IL-10+T细胞百分比。结果 整体动物实验结果显示，与对照组相比，MI组小鼠心肌梗死面积显著增加，血清中CK-MB（P=0.0002）、LDH（P<0.001）显著增多，Treg、CD4+IL-10+T细胞有增加趋势。与MI组相比，CPCs-Exos组小鼠梗死面积降低，CK-MB（P=0.003）、LDH（P=0.003）含量减少，Treg 细胞（P=0.001）、CD4+IL-10+T（P=0.004）细胞百分比显著增加。离体细胞水平结果显示，与Control组相比，CD3+CD28组Treg细胞（P=0.03）、CD4+IL-10+T细胞百分比（P=0.004），mTOR（P=0.04）、p-mTOR（P=0.04）表达水平有增加趋势；与 CD3+CD28 组相比，CD3+CD28+CPCs-Exos 组 Treg 细胞（P=0.01）、CD4 +IL-10+T 细胞百分比（P=0.004），mTOR（P=0.009）、p-mTOR（P=0.009）表达水平显著增加。与CD3+CD28+CPCs-Exos组相比，CD3+CD28+CPCs-Exos+mTOR activator组Treg细胞（P=0.04）、CD4+IL-10+T细胞（P=0.01）百分比显著增加，而CD3+CD28+CPCs-Exos+mTOR inhibitor组Treg细胞（P=0.04）、CD4+IL-10+T细胞百分比（P=0.04）显著降低。结论 CPCs-Exos能够诱导Treg细胞分化，其机制与mTOR途径有关。