南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2019年第11期

• 阿托伐他汀对高胆固醇血症大鼠侧支血管中LOX-1和eNOS表达的影响

  汤银娟,王建钧,关莹露,蔡维君,唐伟军,罗明英

  目的探讨阿托伐他汀对高胆固醇血症大鼠侧支血管中LOX-1 和eNOS表达的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为4组，即股动脉结扎组（L组）、高胆固醇血症+股动脉结扎组（HL组）、高胆固醇血症+阿托伐他汀+股动脉结扎组（AL组）、高胆固醇血症+生理盐水+股动脉结扎组（NL组）。HL组、AL组和NL组大鼠均喂食可致动脉粥样硬化饲料8周。AL组股动脉结扎后10 mg/kg 阿托伐他汀腹腔注射2 周。采用免疫荧光法观察后肢侧支血管LOX-1 和eNOS的表达。体外实验中，转染LOX-1-siRNA的内皮细胞经oxLDL和阿托伐他汀单独或共同处理后，RT-PCR和Western blotting检测LOX-1和eNOS的表达，Griess法检测NO的产生。结果LOX-1表达于大鼠正常侧支血管中，在高胆固醇血症大鼠中其表达则明显升高，在阿托伐他汀治疗后明显降低。eNOS在正常生长的侧支血管中呈强阳性表达，在高胆固醇血症血管中表达下调，经阿托伐他汀治疗后其表达上调。体外实验中，oxLDL处理使内皮细胞LOX-1 表达升高，eNOS表达降低，而阿托伐他汀处理后细胞中LOX-1 表达下调，eNOS表达上调。此外，在细胞中使用LOX-1 siRNA 干预可消除oxLDL刺激对eNOS表达的影响。结论高胆固醇血症或oxLDL可能通过LOX-1/eNOS通路诱导内皮功能障碍，阿托伐他汀可以改善这一状态，表明阿托伐他汀可作为缺血性疾病诱导侧支血管损害的潜在治疗药物。

• 循环单核细胞和血浆中GDF-15和NT-proBNP对慢性心力衰竭的诊断及心血管事件的预测价值

  乔香瑞,刘军辉,花 蕊,卓小桢

  目的 探讨基础心脏病是扩张型心肌病（DCM）或冠心病的心力衰竭患者血浆中生长分化因子-15（GDF-15）蛋白水平和外周血单核细胞（MNCs）中GDF-15 mRNA水平，并评估它们是否能够成为心力衰竭严重程度和长期心血管事件的预测因子。方法 收集261例DCM患者，251例冠心病患者和132例无心力衰竭的健康对照空腹静脉血标本并对这些患者进行门诊随访。酶联免疫吸附实验（ELISA）检测GDF-15的血浆水平。实时聚合酶链反应检测MNCs中GDF-15 mRNA的表达水平，并对比分析GDF-15在不同NYHA分级患者中的表达情况，用ROC曲线评估GDF-15 mRNA对心血管事件的预测能力。结果 DCM和冠心病患者血浆中GDF-15水平及MNCs中GDF-15 mRNA表达水平显著高于对照组（P<0.01）。心功能Ⅳ级（NYHA）心衰患者的血浆 GDF-15水平显著高于Ⅱ和Ⅲ级患者。心功能Ⅲ级和Ⅳ级心衰患者的 MNCs中 GDF-15 mRNA水平远高于Ⅱ级患者（P<0.01）。此外，心血管事件的ROC曲线分析显示，与单独用NT-proBNP预测相比，加入GDF-15 mRNA后曲线下面积从0.73（95% CI：0.69~0.77，P<0.001）增长为0.83（95%CI：0.79~0.86，P<0.001）。结论 血浆GDF-15水平和MNCs中GDF-15 mRNA水平均可以作为心力衰竭的生物标志物，血浆中GDF-15水平对预测心功能IV级的心衰患者更为敏感，而MNCs中GDF-15 mRNA水平则更能预测心功能II级的心衰患者。NT-proBNP联合GDF-15 mRNA水平能更准确地预测长期心血管事件的发生风险。

• 高尔基体磷蛋白3通过促进细胞自噬抑制紫杉醇诱导的hela细胞凋亡

  王镇南,郑玉菡,黄海丽,何惠娟,贾庆明

  目的 探讨紫杉醇处理hela细胞时，高尔基体磷蛋白3（Golph3）对细胞自噬的调控和对紫杉醇引起的细胞凋亡的影响。方法 通过慢病毒感染的方法上调hela细胞中Golph3的表达；通过转染siRNA方法下调hela细胞中Golph3的表达；使用透射电镜观察细胞中的自噬小体；免疫印记检测自噬标记物LC3II的蛋白表达水平；通过流式细胞仪检测细胞凋亡率；使用自噬抑制剂 3-MA抑制 hela细胞自噬。结果 Golph3慢病毒可上调 hela细胞 Golph3蛋白表达，siRNA可抑制 hela细胞 Golph3蛋白表达。透射电镜观察结果显示，Golph3过表达组细胞自噬小体的数量增多，siRNA组细胞自噬小体的数量减少。免疫印迹结果显示，Golph3组细胞中自噬标记物LC3II表达增强，p62表达减弱；siRNA组LC3II表达抑制，p62表达增强。凋亡检测结果显示，Golph3组紫杉醇诱导的细胞凋亡率下降（P<0.01），siRNA组细胞凋亡率上升（P<0.01）。自噬抑制剂3-MA单独处理不会显著增加hela细胞凋亡率。3-MA处理同时下调Golph3表达可以促进紫杉醇引起的细胞凋亡（P<0.01）。结论 紫杉醇处理hela细胞时，上调Golph3促进hela细胞自噬，抑制细胞凋亡；下调Golph3抑制hela细胞自噬，促进细胞凋亡。Golph3通过调控细胞自噬影响紫杉醇引起的hela细胞凋亡。

• 重构肿瘤克隆单体型的改进生成树算法

  耿 彧 ,赵仲孟,刘建业

  目的 基于三代测序数据重构肿瘤克隆单体型，有效识别肿瘤异质性。方法 该算法提取混合肿瘤数据中的变异位点数据，通过概率函数求解各体细胞突变位点的连接权值；设计了一种基于最大生成树的单体型重构算法，遵循肿瘤克隆间继承原则逐级扩展最大生成树，以确定克隆中各变异位点的连接模式；采用厚度剥离方法估计求得子克隆个数、配比及演化关系。结果 在仿真实验中，分别对测序覆盖度、读段长度、亚克隆数目及体细胞变异率四个指标进行了准确率分析，充分说明了该算法具有良好的鲁棒性；该算法对肿瘤克隆单体型重构精度均值可达到97%以上，与其它工具进行性能比较具有显著优势。结论 所提方法可以较为精确的重构肿瘤亚克隆单体型，明晰肿瘤克隆演化过程，为肿瘤异质性研究和临床决策提供理论依据。

• 体质量指数联合腰围对 2型糖尿病患者新发非酒精性脂肪肝的预测价值

  王 珊,张 健,张卫欢,汪海涛,侯婧悦,张瑞秀,刘红芬,吴寿岭

  目的 探讨体质量指数（BMI）联合腰围对2型糖尿病患者新发非酒精性脂肪肝(NAFLD)的预测价值。方法 采用队列研究方法，以参加2006~2007年度健康体检的开滦集团员工中无NAFLD的2型糖尿病患者3501例作为观察队列，按基线BMI及腰围将观察对象分为A组（BMI、腰围均正常）、B组（BMI正常、腰围升高）、C组（BMI升高、腰围正常）、D组（BMI、腰围均升高），纳入最终统计分析的有效数据为2920例，随访各组2008~2009、2010~2011、2012~2013、2014~2015、2016~2017年度健康体检时NAFLD的发病情况，用Cox比例风险回归模型分析BMI和腰围与NAFLD发病风险的关系。结果（1）A、B、C、D组NAFLD累积发病率逐渐上升，分别为50%、66%、68%、77%，差异有统计学意义（P<0. 01）；（2）影响NAFLD发病的Cox比例风险回归模型分析显示，校正多种混杂因素后，与A组比较，B、C、D组NAFLD的发病风险均增加，HR值分别为1.62、1.98、2.47，差异有统计学意义（P<0.01）。结论 高水平的BMI和腰围均为NAFLD发病的独立危险因素，BMI联合腰围对NAFLD的预测价值高于单一指标。

• 早期胃肠康复治疗机械通气的脓毒症伴急性胃肠损伤患者的有效性和安全性：34例前瞻性、随机对照、先导试验

  刘丹蕾,许卓谦,瞿长春,霍保善,赖汉齐,黎 阳,刘 斌,邓火金,王倩文,李杜娟,常 平,李 沙,王 华

  目的 探讨早期胃肠康复治疗机械通气的脓毒症伴急性胃肠损伤（AGI）患者的疗效和安全性。方法 采用前瞻性、随机、平行对照的研究方法，开放设计，对康复评定人设盲。筛选2017年5月~2018年3月在广州市一家三级甲等教学医院重症监护病房（ICU）住院的脓毒症患者，符合纳入标准则招募入组。以急性生理和慢性健康状况评分Ⅱ（APACHE Ⅱ）等为平衡因素，区组随机化分为干预组和对照组。两组均按脓毒症标准方案治疗，干预组增加早期胃肠康复。主要研究终点为AGI治愈；次要研究终点包括ICU住院病死率、机械通气预后、ICU住院天数等。数据采集时间点定为入组、呼吸机脱机、转出ICU共3个。结果 共招募 60例患者，34例完成研究。干预组 16例，对照组 18例。结果显示，康复治疗后，干预组和对照组 AGI治愈例数的差异无统计学意义（P>0.05）。比较康复治疗前后两组AGI评分的下降值，分别为（-1.9±2.1）分和（0.9±1.6）分，差异有统计学意义（P<0.05）。早期胃肠康复的不良事件发生率为3.33%，无器官损伤或意外死亡等严重不良事件。两组在ICU住院病死率、机械通气预后、ICU住院天数等指标方面，差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 早期胃肠康复不能降低AGI患病率，但降低AGI评分，改善胃肠道症状，安全性好，但需在设计更为合理的大样本多中心临床研究中证实。

• 二甲双胍、沙格列汀、达格列净三联短期强化降糖：54例新诊断2型糖尿病的多中心前瞻性临床试验

  徐玉凤,吴佩丽,温伟恒,陈 宏

  目的 观察二甲双胍、沙格列汀、达格列净三联口服短期强化降糖治疗在9%≤HbA1c≤12%的新诊断2型糖尿病患者中的疗效及安全性。方法 共纳入新诊断的2型糖尿病患者58例，在糖尿病饮食和运动的基础上，给予二甲双胍+沙格列汀+达格列净口服治疗；治疗疗程为12周，记录患者治疗期间的指尖血糖，以及治疗前后下述效应指标改变值：糖化血红蛋白（HbA1c）、空腹血糖（FBG）/餐后2 h血糖（2 hPBG）、空腹胰岛素（FINS）/餐后2 h胰岛素（2 hPINS）、空腹C肽（F-CP）/餐后2 hC肽（2 hP-CP）、体质量（WT），并记录发生低血糖的次数以及不良事件。结果 12周治疗后，所有患者FBG、2 hPBG、HbA1c、HOMA-β、HOMAIR均较治疗前明显改善（P<0.001），HbA1c下降值为（4.19±1.07）%，HbA1c<7.0%的达标率达到83.33%；HbA1c下降的程度与FBG（r=0.487，P=0.000）、2 hPBG（r=0.310，P=0.023）、HOMA-β（r=-0.398，P=0.003）相关。治疗后体质量下降 2.47±3.38 kg（P<0.001），体质量指数（BMI）下降0.90±1.18 kg/m（2 P<0.001），减重效果与患者基础体质量（r=0.678，P=0.000）、BMI （r=0.818，P=0.000）、F-CP（r=0.282，P=0.039）、HOMA-IR（r=0.297，P=0.029）相关。有8人发生低血糖症状10（14.81%），确诊为低血糖症（血糖≤3.9 mmol/L）为3人，发生次数3次，低血糖发生率5.56%；无严重低血糖事件发生；无泌尿系及生殖系感染发生；2例因胃肠道反应不能耐受而退出实验；另2例患者因取药途径不便而退出实验；最后入组人数54例，男34例，女20例。结论 二甲双胍、沙格列汀、达格列净三联口服短期强化降糖方案在治疗新诊断的2型糖尿病患者（9%≤HbA1c≤12%）中可有效降糖，并有减重优势，低血糖风险小，以及有效改善β细胞胰岛素分泌功能，适合血糖较高的新诊断2型糖尿病患者临床应用。

• CircRNA_005647通过结合 miR-27b-3p抑制小鼠心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达

  袁淑菁,梁景南,张 铭,朱杰宁,潘 蓉,李 晖,曾 妮,温艺红,易芷瑶,单志新

  目的 研究环形RNA circRNA_005647对小鼠心肌成纤维细胞（CFs）纤维化表型的影响及分子机制。方法 利用血管紧张素Ⅱ 缓释泵[1.46 mg/ （kg·d），2周]诱导建立小鼠高血压心肌纤维化模型，采用Masson染色观察心肌纤维化程度。实时荧光定量PCR检测发生纤维化的小鼠心肌及血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠CFs中circRNA_005647的表达。利用放线菌素D和RNase R实验检测circRNA_005647的稳定性。利用重组circRNA_005647 腺病毒（rAd-circRNA_005647）感染小鼠CFs，检测CFs中纤维化相关基因Col1a1、Col3a1、Acta2 的mRNA和蛋白表达变化。双荧光素酶报告基因实验、RNA反义纯化实验及RNA Pulldown实验验证circRNA_005647与微小RNA miR-27b-3p的结合作用。结果 RT-qPCR结果显示，circRNA_005647在高血压诱导纤维化的小鼠心肌和Ang-II处理的小鼠CFs中表达增强（P<0.01）。放线菌素D和RNase R实验证实circRNA_005647比其宿主基因 Myo9a mRNA具有更好的稳定性（P<0.01）和抵抗 RNase R的降解作用。过表达 circRNA_005647可显著抑制小鼠CFs中纤维化相关基因 Col1a1、Col3a1和 Acta2表达（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验、RNA反义纯化实验及 RNA Pull down实验一致性地证实了circRNA_005647与miR-27b-3p之间存在特异结合作用，miR-27b-3p具有促进小鼠CFs的纤维化表型作用（P<0.05），并可减弱circRNA_005647对小鼠CFs中纤维化相关基因表达的抑制作用。结论 CircRNA_005647在心肌纤维化中表达增强，并通过结合miR-27b-3p发挥抑制心肌纤维化作用。

• 基于多尺度小波残差网络的稀疏角度CT图像恢复

  韦子权,王永波,陶 熙,贾 晓,边兆英,谌高峰,李明强,马 昆,李 彬,马建华

  目的 稀疏角度CT具有加速数据采集和减少辐射剂量的优点。然而，由于采集信息的减少，使用传统滤波反投影算法（FBP）进行重建得到的图像中伴有严重的条形伪影和噪声。针对这一问题，本文提出基于多尺度小波残差网络（MWResNet）对稀疏角度CT图像进行恢复。方法 本网络中将小波网络与残差块相结合，用以增强网络对图像特征的提取能力和加快网络训练效率。实验中使用真实的螺旋几何CT图像数据“Low-dose CT Grand Challenge”数据集训练网络。通过观察图像表征和计算定量参数的方法对结果进行评估，并与其他现有网络进行比较，包括图像恢复迭代残差卷积网络（IRLNet），残差编码解码卷积神经网络（REDCNN）和FBP卷积神经网络（FBPConvNet）。结果 实验结果表明，本文提出的多尺度小波残差网络优于其余对比方法。结论 本文提出的MWResNet网络能够在保持稀疏角度CT图像边缘细节信息的同时有效抑制噪声和伪影。

• 外源性硫化氢通过抑制阴茎海绵体平滑肌细胞凋亡改善海绵体神经损伤大鼠勃起功能障碍

  曾琴宇,何书华,钟立仁,王 力,陈逢志,张海波,惠佳亮,韦安阳

  目的 观察外源性硫化氢对双侧海绵体神经损伤（BCNI）大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞（CCSMC）凋亡及勃起功能障碍的影响。方法 将24只SD雄性大鼠随机分为3组（n=8只/组）：假手术组、双侧海绵体神经损伤组（BCNI组）、硫化氢干预组（BCNI+NaHS组）。通过钳夹损伤双侧海绵体神经构建BCNI模型。BCNI+NaHS组每天腹腔注射100 μmol/kg的NaHS溶液；BCNI组每日腹腔注射等量生理盐水。治疗4周后检测海绵体内压（ICP）和平均动脉压（MAP），并通过Western blot检测胱硫醚-β-合成酶（CBS）和胱硫醚-γ-裂解酶（CSE），α-SMA，Collagen-Ⅰ，Caspase-3、Bax、Bcl-2表达水平，通过免疫组化检测CBS、CSE表达情况，Masson’s Trichrome染色检测海绵体平滑肌/胶原比值，以及 TUNEL+α-SMA组织免疫荧光双染检测CCSMC凋亡水平。结果 治疗4周后，BCNI+NaHS组ICP/MAP比值高于BCNI组（P<0.05）；Masson’s Trichrome染色结果显示，BCNI+NaHS组海绵体平滑肌/胶原比值较 BCNI 组显著升高（P<0.05）；Western blot 结果显示 BCNI+NaHS 组α-SMA 蛋白表达高于 BCNI 组（P<0.05），同时 Collagen-Ⅰ蛋白表达低于 BCNI组（P<0.05）；TUNEL+α-SMA组织免疫荧光双染结果显示，BCNI+NaHS组CCSMC凋亡数较BCNI组降低（P<0.05）。与BCNI组相比，BCNI+NaHS组Caspase-3、Bax蛋白表达降低（P<0.05），Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值升高（P<0.05）。BCNI组CBS、CSE表达较其余两组显著降低（P<0.05）。结论 外源性硫化氢可提高经典的抗凋亡蛋白Bcl-2及抑制CCSMC凋亡，进而改善BCNI大鼠勃起功能。

• 脓毒症通过抑制AKT/GSK3β磷酸化导致骨骼肌细胞膜nAChRs聚集障碍

  李天梅,刘 力,王晓斌

  目的 探究蛋白质丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（AKT）/糖原合成酶激酶3β（GSK3β）介导的信号通路在脓毒症导致骨骼肌细胞膜上烟碱型乙酰胆碱受体（nAChRs）聚集障碍中的作用。方法 小鼠源性C2C12肌原细胞经2%马血清诱导分化为肌管后随机分为4组：Sham组：假手术小鼠血清处理；Sepsis组：脓毒症小鼠血清处理；Sepsis+D组：脓毒症小鼠血清和二甲基亚砜（DMSO）处理；Sepsis+SB组：脓毒症小鼠血清和GSK3β抑制剂SB216763处理，各组在作相应处理前均加入Agrin蛋白诱导nAChRs聚集。血清处理 5.5 h后采用 Alexa Fluor 594-conjugated α-bungarotoxin（α-BTX）标记肌管膜上 nAChRs聚集簇，采用 Western blotting检测AKT、磷酸化AKT（p-AKT）、GSK3β、磷酸化GSK3β（p-GSK3β）、细胞质连接蛋白相关蛋白2（CLASP2）的表达水平，采用免疫共沉淀（Co-IP）检测磷酸化CLASP2（p-CLASP2）以及CLASP2与微管蛋白α-tubulin的结合水平。结果 与Sham组相比，Sepsis 组 C2C12 肌管膜上 nAChRs 聚集簇面积和密度均降低，p-AKT、p-GSK3β水平下降，p-CLASP2 水平升高，CLASP2 与 α-tubulin 的结合减少；与 Sepsis+D 组相比，Sepsis+SB 组 C2C12 肌管膜上 nAChRs 聚集簇面积和密度均增加，p-CLASP2水平降低，CLASP2与α-tubulin的结合水平增加。结论 脓毒症小鼠血清通过抑制Akt/GSK3β磷酸化导致下游信号分子CLASP2与α-tubulin结合减少，引起C2C12肌管膜上nAChRs聚集障碍。

• 薄荷醇通过mTOR活化促进人支气管上皮细胞气道炎症相关因子的表达

  陈海博,李敏超

  目的 探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）活化对薄荷醇诱导的人支气管上皮细胞（BEAS-2B）气道炎症相关因子表达的影响及其机制。 方法 将细胞分为4组：正常对照组、薄荷醇组、雷帕霉素组、薄荷醇+雷帕霉素组。用CCK-8法检测细胞存活率，实时荧光定量 PCR检测瞬时受体电位蛋白-8（TRPM8）、肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-1β mRNA的表达，Western blot检测BEAS-2B 中磷酸化的mTOR（p-mTOR）、TRPM8、TNF-α和IL-1β的蛋白表达。用流式细胞术检测胞内Ca2+荧光强度。 结果 与正常对照组相比，薄荷醇组中细胞TNF-α和IL-1β mRNA及蛋白表达升高，p-mTOR蛋白表达升高，胞内Ca2+浓度升高（P<0.05）。与正常对照组相比，雷帕霉素组中细胞TNF-α和IL-1β mRNA及蛋白表达均无差异（P>0.05），p-mTOR蛋白表达降低（P<0.05），胞内Ca2+浓度无差异（P>0.05）。与薄荷醇组相比，薄荷醇+雷帕霉素组中细胞TNF-α和IL-1β mRNA及蛋白表达降低，p-mTOR蛋白表达降低，胞内Ca2+浓度降（P<0.05）。 结论 薄荷醇可能通过活化mTOR诱导胞内Ca2+浓度升高，进而促进气道炎症相关因子IL-1β和TNF-α的表达。

• 唐氏筛查临界风险的非高龄孕妇有必要行无创性产前检测：6804例结果分析

  杨兴坤,郭晓玲,钟 进,陈志华,吴水娟

  目的 探讨无创性产前基因检测技术对血清学筛查阳性的非高龄孕妇血浆胎儿游离DNA进行染色体非整倍体检测的有效性。方法 选择2011年10月~2018年6月于佛山市妇幼保健院行无创性产前基因检测的6804例非高龄孕妇（预产期年龄<35岁）为研究对象，孕周：12~24周，预产期年龄：21~34岁，均为单胎。按照血清学指标分为高风险组和临界风险组，血清学筛查高风险组 3763例（21三体风险值≥1/270或 18三体风险值≥1/350），临界风险组 3041例（1/1000≤21三体风险值<1/270或 1/1000≤18三体风险值<1/350）。对无创性产前基因检测结果阳性的孕妇行羊膜腔穿刺或脐静脉血穿刺，行常规染色体核型分析和/或高通量测序检测。对所有检测孕妇行电话随访，并统计分析无创性产前基因检测的准确性在两组差别有无统计学意义。结果 6801例成功完成无创性产前基因检测，3例样本由于血浆游离DNA浓度过低检测失败。3761例血清学筛查高风险组中产前基因检测染色体拷贝数异常高风险者共70例，其中53例行进一步产前诊断，结果显示高风险组无创性产前检测技术对21三体检测的灵敏度为 95.65%，特异度99.91%，阳性预测值 88.0%，假阳性率 0.09%，假阴性率 4.35%；对 18三体检测的灵敏度100%，特异度100%，阳性预测值100%，假阳性率0，假阴性率0。对13三体检测的假阳性率0.09%，假阴性率0；对性染色体异常检测的灵敏度100%，特异度99.80%，阳性预测值30.0%，假阳性率0.2%，假阴性率0；对其他染色体异常检测的灵敏度100%，特异度99.88%，阳性预测值16.60%，假阳性率0.18%，假阴性率0。3040例血清学筛查临界风险组产前基因检测染色体拷贝数异常高风险者共54例，其中的36例行进一步产前诊断，结果显示临界风险组孕妇无创性产前检测技术对21三体检测的灵敏度为100%，特异度100%，阳性预测值100%，假阳性率0，假阴性率0；对18三体检测的假阳性率0.11%，假阴性率0。13三体检测的假阳性率0.04%，假阴性率0；对性染色体异常检测的灵敏度100%，特异度99.79%，阳性预测值50%，假阳性率0.21%，假阴性率0；对其他染色体异常检测的假阳性率0.18%，假阴性率0。高风险组和临界风险组对21三体和性染色体非整倍体检测敏感度、特异度，假阳性率，阳性预测值差别均无统计学意义（P>0.05）。结论 唐氏筛查高风险但拒绝产前诊断和临界风险的非高龄孕妇很有必要进一步行无创性产前检测。该技术检测胎儿染色体非整倍体具有高敏感度和特异度，假阳性率和假阴性率很低。

• 二甲双胍通过调控血管平滑肌肌动蛋白骨架系统抑制小鼠动脉粥样硬化形成

  李 挺,何铭垣,李忠豪,王德奖,徐颖怡,吴 炜,燕 翼

  目的 探讨二甲双胍（Met）对代谢综合征小鼠动脉粥样硬化形成的影响与其作用机制。方法 用Met刺激转染了EGFPCLIP170或EGFP-Pdlim5质粒的小鼠主动脉平滑肌细胞，观察pAMPK、pCLIP-170、pPdlim5等蛋白的表达，免疫荧光染色观察细胞的微管系统及肌动蛋白骨架系统的变化。对小鼠主动脉平滑肌细胞行划痕实验，用Met梯度浓度（0、0.5、1 mmol/L）刺激细胞8 h，观察划痕愈合情况，评价各组细胞迁移能力。对ApoE-/-小鼠注射链脲佐菌素诱导实验性糖尿病，之后予以高脂饲料喂养建立代谢综合征兼动脉粥样硬化模型。治疗组（Met组，n=12）给予Met灌胃干预，对照组（Control组，n=10）予生理盐水。造模8周后提取动物主动脉全长及根部分别行油红O染色和α-平滑肌肌动蛋白染色，评价小鼠主动脉斑块内平滑肌细胞的异位迁移和脂质沉积情况。结果 小鼠主动脉平滑肌在Met处理后肌动蛋白骨架系统形态发生改变，应力纤维增粗，黏附斑增强，细胞的迁移运动受到明显抑制（P<0.05），但Met对微管骨架系统无明显影响；动物实验显示：在造模8周后，主动脉根部α-平滑肌肌动蛋白染色示Met组平滑肌细胞迁移运动受到抑制，异位扩散程度较Control组明显降低，油红O染色示Met组脂质沉积较Control组明显减少（P<0.05）。结论 二甲双胍通过调控细胞肌动蛋白骨架系统，抑制平滑肌细胞的迁移运动，从而抑制小鼠动脉粥样硬化的形成。

• 基于开端同轴探头技术的肺癌转移和非转移淋巴结介电特性

  孙 颖,于洪峰,周地福,辛学刚,卢 笛,蔡开灿,余学飞

  目的 本文通过测量来自肺癌手术的淋巴结介电特性，研究肺癌转移和非转移淋巴结的介电特性（相对介电常数和电导率）差异。方法 使用开端同轴探头法，在1 MHz~4 GHz频率范围内，对76名肺癌患者手术中切除下来的淋巴结进行介电特性测量，然后对照病理结果将淋巴结分成转移淋巴结和非转移淋巴结两类，又将转移淋巴结分为肺鳞癌转移淋巴结和肺腺癌转移淋巴结两类，在全频段和6个特定频率点（64、128、298、433、915、2450 MHz）分别分析其介电特性差异。结果 在1 MHz~4 GHz频率范围内转移淋巴结的介电特性值明显高于非转移淋巴结。肺鳞癌转移淋巴结和肺腺癌转移淋巴结介电特性不具有明显差异。在6个频率点，转移和非转移淋巴结的介电特性差异具有统计学意义（P<0.01）。结论 开端同轴探头技术虽不能鉴别出淋巴结由何种肺癌细胞转移而来，但能很好的检测出肺癌转移和非转移淋巴结介电特性差异，有望为临床上鉴别淋巴结是否转移提供一种全新的检测依据。

• 体表针刺电刺激诱发心室纤颤猪模型的构建

  梁国栋,郑汝钢,菅洪健,张旻海,袁慧琼,洪睫敏,武 钢

  目的 构建一种经济、简便、安全又高效的心脏骤停（CA）猪模型。方法 以12只西藏小型猪为研究对象。使用2根针灸针分别穿刺于心脏左右两侧，一根于胸骨右缘第四肋间与胸壁呈30°~60°夹角插入约3 cm，并调整针柄，直至针柄随心脏节律性跳动而心电图未出现室性早搏改变；另一根插入左侧腋下皮下组织约3 cm，以不损伤重要器官为宜。将2根针柄通过导线与3节串联9V干电池组连接，形成回路及直流电刺激。经皮电刺激3 s诱导心室颤动，以构建CA猪模型，记录模型构建成功率。经4 min非干预期后，根据Utstein模式标准对实验动物进行心肺复苏（CPR），并观察该模型复苏后生存情况。结果 12只西藏小型猪通过经皮电刺激诱导室颤，有11只致颤成功，成功率为91.67%（11/12）。动物模型经CPR后，5只实现自主循环恢复（ROSC），复苏成功率为45.45%（5/11）。在后续生存观察中发现：成功复苏的动物24 h存活率达100%（5/5），72 h存活率达80%（4/5）。经72 h观察后对成功复苏的西藏小型猪进行解剖，均未发现实验操作所致的胸腹部重要器官明显损伤。结论 利用西藏小型猪，采用针灸针与干电池可以成功构建出相对稳定的CA模型。该模型构建方法具有经济、简便、安全及高效的优势。

• 凤仙花、散沫花及海娜花对小鼠雄激素性脱发的治疗作用及其机制

  郑雨诗,胡永轩,刘康兴,卢 艳,胡燕卿,周冼苡

  目的 通过皮下多点注射丙酸睾酮溶液制备C57BL/6小鼠雄激素性脱发模型，探讨不同药物对小鼠雄激素性脱发的治疗效果及作用机制。方法 将48只C57BL/6雄性小鼠随机分为药物组（T）、模型组（M）和空白组（K），药物组中又分为凤仙花组（T1）、散沫花组（T2）、海娜花组（T3）、米诺地尔酊组（T4），每组各8只，行背部局部脱毛处理后，除空白组外其余小鼠均皮下注射丙酸睾酮溶液5 mg/kg·d以构建雄激素性脱发模型，同时T1、T2、T3组分别用凤仙花粉、散沫花粉和海娜花粉于脱发部位外敷封包，1次/d，每次0.5 h；T4组外用5%米诺地尔酊，2次/d；模型组及空白组均予外用生理盐水。35 d后对小鼠背部进行拍照，并分别检测小鼠血清睾酮、双氢睾酮及脱毛处皮片睾酮、双氢睾酮、Ⅱ型5α还原酶的含量，同时取背部脱毛区全层皮肤制作石蜡切片，计算终毛/毳毛比。通过SPSS 20.0对实验数据进行统计学分析。结果 药物组各组均能诱导C57BL/6小鼠毛发生长。治疗35 d后各药物组小鼠背部脱毛区均可见新发生长，其中T3组背部毛发密度最高，且可见部分皮肤变为灰色，T2组小鼠背部毛发密度最低；药物组实验部位皮肤组织HE染色切片在100倍显微镜视野下计数的总毛囊数量（22.75±4.301、31.38±13.212、33.00±13.825、31.12±8.357）及终毛毛囊数量（13.25±2.605、18.88±9.463、21.25±8.379、21.62±5.805）均高于模型组（9.12±6.854、3.62±2.504），差异有统计学意义（P<0.05）；T1及T3组小鼠皮片中睾酮（0.81±0.12、0.85±0.19）、双氢睾酮（1.41±0.23、1.29±0.39）含量均明显低于模型组（4.75±0.41、6.48±0.57），差异有统计学意义（P<0.05）；各药物组血清中睾酮、双氢睾酮含量及皮片中Ⅱ型5α还原酶含量与模型组间均无显著性差异。结论 凤仙花、散沫花和海娜花对C57BL/6小鼠雄激素性脱发模型有治疗作用，其中凤仙花和海娜花可能通过降低局部皮肤中的雄激素含量来治疗雄激素性脱发。

• CRISPR/Cas9文库筛选技术的发展及在肿瘤研究中的应用

  雷 婷,肖 斌,何咏茵,曲 璟,孙朝晖,李林海

  近年兴起的CRISPR/Cas9［Clustered regularly interspaced short palindromic repeats（CRISPR）/CRISPR-associated（Cas）9］技术因其能快速、简便、精准地实现基因敲除、敲入、激活、干扰等编辑功能而成为一种强大的遗传筛选工具，目前已在各类细胞系和小鼠及斑马鱼等多种动物模型中得到大规模运用。利用CRISPR系统构建基因组文库进行高通量筛选，是研究疾病特别是肿瘤靶标基因的主要策略。本文就CRISPR/Cas9文库筛选技术的原理和发展，脱靶效应的改进方案，文库筛选的基本流程以及近年来该技术在肿瘤研究中的应用进行总结。