南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2022年第4期

• 定量集成磁共振成像鉴别乳腺良恶性病变

  张力莹, 赵 鑫, 殷 星

  目的 探讨定量集成磁共振成像（SyMRI）在乳腺良恶性病变鉴别诊断中的应用价值。方法 回顾性分析经病理证实的95例乳腺病变患者的磁共振成像（MRI）资料。患者均于术前行乳腺常规MRI和SyMRI扫描，病灶动态增强磁共振成像（DCEMRI）均显示乳腺肿块样病变。根据病理结果将病例分为良性组和恶性组，分析病变的MRI征象，同时测量病变增强前后的SyMRI定量参数，分别记录为T1p、T2p、PDp和T1e、T2e、PDe，并计算各定量参数的相对变化率。基于全子集回归和Logistic回归构建不同的诊断模型，通过受试者工作特征曲线（ROC）评价不同诊断模型鉴别乳腺良恶性病变的效能。结果 乳腺良性和恶性病变的MRI征象（形态、边界、内部强化方式、时间-信号强度曲线和T2WI信号特征）差异具有统计学意义（P<0.05）。除PDp和T2e外，其他定量参数在两组间的差异均有统计学意义（P<0.05）。“DCE-MRI+SyMRI (DCE-MRI+T2p+T1e)”的诊断模型是最佳的预测模型，其AUC为0.995（95% CI：0.983~1.000）。结论 定量SyMRI的衍生定量参数可以间接反映乳腺病变组织的微结构特征，有助于乳腺良恶性病变的鉴别诊断。

• 汉黄芩苷通过上调SIRT1表达减轻糖尿病视网膜病变引起的细胞和组织损伤

  邵晓丽, 余江毅, 倪卫惠

  目的 探究汉黄芩苷对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞（hRMECs）功能障碍的作用和对链脲佐菌素（STZ）诱导的大鼠糖尿病视网膜的损伤的影响及潜在的分子机制。方法 hRMECs常规培养，实验分为对照组（5 mmol/L葡萄糖）、渗透对照组（5 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇）、高糖组（30 mmol/L葡萄糖）、给药组（30 mmol/L葡萄糖+10、20、30、40 μmol/L汉黄芩苷）。通过CCK-8与Transwell实验分别检测细胞增殖和迁移能力，小管形成与单层细胞膜通透性实验分别检测细胞成管能力和细胞膜通透性，ROS、NO、GSH-ST试剂盒检测细胞氧化应激水平，qRT-PCR和ELISA试剂盒分别检测IL-1β、IL-6的表达水平和含量，Western blot检测VEGF、HIF-1α和SIRT1蛋白表达。选取40只SPF级雄性SD大鼠，随机分为对照组（Sham组）、模型组（STZ组）、汉黄芩苷组（Wog组）和汉黄芩苷治疗组（STZ+Wog 组），10只/组。模型组和汉黄芩苷治疗组腹腔注射0.1 mol/L柠檬酸缓冲液（pH=4.5）溶解的STZ，剂量为60 mg/kg建立糖尿病大鼠模型，对照组与单独的汉黄芩苷组给予等剂量的柠檬酸缓冲液。糖尿病大鼠模型建立 1 周后给予汉黄芩苷治疗，对照组、模型组予等量生理盐水注射，连续 6 周。比较4组大鼠视网膜组织损伤、HIF-1-α 、ROS、VEGF、TNF-α、IL-1β、IL-6水平以及sirt1蛋白表达情况。结果 与对照组相比，高糖诱导hRMECs异常增殖和迁移，提高了hRMECs小管形成能力及细胞膜通透性（P<0.05），同时高糖诱导的hRMECs炎症水平和氧化应激水平上升（P<0.05）。而与高糖组相比，汉黄芩苷可浓度依赖性抑制高糖诱导的hRMECs细胞增殖、迁移、小管形成及细胞膜通透性的增加（P<0.05），此外汉黄芩苷可降低高糖诱导的hRMECs的炎症和氧化应激水平（P<0.05）。SIRT1在高糖诱导的hRMECs中低表达，30 μmol/L剂量汉黄芩苷处理后高糖诱导的低SIRT1表达部分恢复（P<0.01），干扰SIRT1表达可逆转汉黄芩苷对高糖诱导hRMECs异常增殖、迁移、小管形成、细胞膜通透性、炎症及氧化应激的抑制作用。动物实验显示，与对照组相比，STZ组视网膜组织厚度增加（P<0.05），而汉黄芩苷治疗后能缓解糖尿病引起的大鼠视网膜增厚（P<0.05）。同时STZ处理提高了VEGF、HIF-1α、IL-1β、IL-6 和 ROS 的水平（P<0.001），汉黄芩苷的处理降低了 STZ 诱导的大鼠视网膜损伤且上调了 SIRT1 的表达（P<0.001）。结论 汉黄芩苷通过上调SIRT1的表达缓解糖尿病视网膜病变引起的损伤。

• 泛癌分析长链非编码RNA MIR22HG的表达特征

  王 惠, 黎雯雯, 张冬艳

  目的 泛癌分析长链非编码RNA（lncRNA）MIR22HG的表达及其与临床特征的关系。方法 R语言分析癌症基因组图谱（TCGA）中MIR22HG在不同肿瘤组织中的表达及其与临床分期、淋巴结转移、肿瘤突变负荷（TMB）及微卫星不稳定（MSI）的关系；应用TIMER比较MIR22HG表达与免疫浸润的关系；使用cBioPortal分析MIR22HG的突变频率及其与预后的关系；使用GDSC在线数据库分析MIR22HG与化疗药物敏感性的关系。利用GEO数据库肝癌数据集和12对肝癌标本验证MIR22HG在肝癌中的表达及其与索拉非尼治疗反应的关系；分析MIR22HG表达与索拉非尼治疗预后的关系；在肝癌细胞株HCC-LM3中过表达MIR22HG（NC组，MIR22HG过表达组），在肝癌细胞株MHCC-97H中敲除MIR22HG（NC组，sh-MIR22HG组），采用CCK-8检测肝癌细胞中MIR22HG对索拉非尼IC50的影响。结果 MIR22HG在大多数肿瘤中低表达（P<0.05），且多数肿瘤中MIR22HG基因存在缺失突变，其突变与肿瘤不良预后相关（P<0.05）。MIR22HG的表达水平与多种肿瘤的临床分期及淋巴结转移相关（P<0.05）。在多种肿瘤中MIR22HG的表达水平与TBM、MSI、免疫评分、免疫检查点相关基因表达及化疗药的药物敏感性显著相关（P<0.05）。6种常见免疫细胞中，中性粒细胞浸润水平与MIR22HG的表达水平相关性最强，尤其在乳腺癌、直肠癌及肾乳头状细胞癌中明显。多个数据集的分析结果验证MIR22HG在肝癌中低表达，且其低表达与肝癌进展相关（P<0.05）。MIR22HG低表达的患者经索拉非尼治疗后预后较好（HR=2.94, P=0.075），其低表达能有效预测肝癌患者索拉非尼治疗效果（AUC=0.8095）。过表达MIR22HG能降低肝癌细胞对索拉非尼的敏感性（IC50 NC vs IC50 MIR22HG=7.731 vs 15.61）；而敲除MIR22HG的表达则能增加肝癌细胞对索拉非尼的敏感性（IC50 NC vs IC50sh-MIR22HG=7.986 vs 5.085）。结论 MIR22HG的表达与多种肿瘤的分期、有否淋巴结转移、肿瘤突变负荷、微卫星不稳定、免疫细胞浸润及化疗药物敏感性相关。

• 甲基转移酶样蛋白27是结肠癌预后的生物标志物并与免疫浸润相关

  王 康, 张 军, 邓牧文, 剧永乐, 欧阳满照

  目的 探讨甲基转移酶样蛋白27（METTL27）在结肠癌中的表达、基因功能、免疫浸润和临床预后意义。方法 运用R语言，通过公共数据库TCGA、GEO、HPA数据库分析33种癌谱METTL27表达水平，并鉴定结肠癌中METTL27的差异基因，通过基因功能注释和富集分析鉴定相关信号通路；应用GSVA中的ssGSEA算法进行免疫浸润分析；Wilcoxon秩和检验(连续变量)、Logistic分析评价METTL27表达与临床病理特征的相关性；Kaplan-Meier分析、单因素和多因素Cox回归分析，构建列线图和校准图分析评价METTL27表达与临床预后的相关性。qPCR及Western blot实验验证METTL27在肠癌细胞株以及16例肠癌组织中的表达水平。结果 METTL27在21种肿瘤中显著高表达，结肠癌中METTL27的表达明显高于癌周组织（P<0.001）；METTL27进行差异分析，并鉴定了METTL27相关的差异基因，绘制了差异表达正负相关前10基因（P<0.001）；通过鉴定了METTL27的差异表达基因，初步对其进行了基因功能注释，发现METTL27在跨膜物质转运以及脂质代谢进程中显著富集，进一步GSEA识别了与之相关的5条信号通路；同时分析了METTL27表达与辅助T细胞、辅助T细胞2型、中央记忆型T细胞呈负相关关系（P<0.001）；在临床特征与预后分析中，METTL27 mRNA高表达的患者OS、DSS较差，Cox回归分析显示，METTL27表达是OS的独立预后因素；修改为：在不同肠癌细胞株以及16例肠癌组织样本中，METTL27的mRNA表达水平高于正常细胞及组织（P<0.05）；配对的4例肠癌组织蛋白检测也证实这一结果（P<0.001）。结论 METTL27在结肠癌中异常高表达，并代表了不良的临床预后；高表达的METTL27显示了更少的T细胞免疫浸润，提示METTL27可能为结肠癌的预后标记物。

• RUNX3调控胃癌细胞对曲妥珠单抗耐药的机制：基于超效高液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱的代谢组学分析

  刘文虎, 汤建才, 常晋霞

  目的 探讨Runt相关转录因子3（RUNX3）在胃癌曲妥珠耐药细胞中的代谢调控作用，阐释敲除RUNX3逆转耐药的代谢机制。方法 基于超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱联用技术，对曲妥珠耐药胃癌细胞（NCI N87R）及RUNX3敲除细胞（NCI N87R/RUNX3）进行代谢组分析；采用多变量结合单变量分析方法及二级质谱离子匹配打分筛选差异变量；使用MetaboAnalyst 5.0数据库进行通路富集分析；基于OmicsNet数据库构建差异代谢物-基因调控关系；通过试剂盒检测还原性/氧化性谷胱甘肽（GSH/GSSG）及还原性/氧化性辅酶II（NADPH/NADP）的比值。结果 RUNX3敲除前后NCI N87R细胞的代谢特征显著改变，鉴定到81个对分类有显著贡献的差异代谢物，其中43个代谢物在NCI N87R/RUNX3细胞中增加，38个代谢物减少。RUNX3敲除导致耐药细胞8条通路显著改变（P<0.01），包括谷氨酰胺、糖酵解、甘油磷脂酸-烟酰胺及谷胱甘肽代谢等。试剂盒检测结果显示，NCI N87R/RUNX3胞内GSH/GSSG及NADPH/NADP降低（P<0.01）；差异代谢物-基因网络揭示了代谢分子与基因之间的调控关系。结论 RUNX3通过调控能量代谢及氧化-还原稳态逆转胃癌细胞对曲妥珠单抗耐药，提示RUNX3可能是胃癌曲妥珠单抗耐药的潜在治疗靶标。

• 靶向维生素D受体的miRNA的筛选及其对继发性甲状旁腺功能亢进患者甲状旁腺激素分泌的影响

  蒋 韩, 李珮婷, 柳丽丹, 黄 珊, 李 俊, 吴 唯

  目的 探讨靶向维生素D受体（VDR）基因的miRNA及其对继发性甲状旁腺功能亢进甲状旁腺激素（PTH）分泌的影响。方法 用胶原酶消化法提取、分离和培养出继发性甲状旁腺功能亢进的甲状旁腺组织的原代细胞；运用生物信息学方法及全转录组测序的方法筛选得到靶向VDR的miRNA，双荧光素酶报告基因实验验证筛选出的miRNA与VDR的靶向关系；qRT-PCR及Western blotting检测过表达或抑制miRNA后的对VDR mRNA水平及蛋白水平和对PTH分泌的影响；qRT-PCR和免疫组织化学分别验证部分miRNA、VDR mRNA和蛋白水平的表达差异。结果 成功培养得到甲状旁腺原代细胞；筛选并验证了hsa-miR-149-5p、hsa-miR-221-5p、hsa-miR-222-3p、hsa-miR-29a-5p、hsa-miR-301a-5p、hsa-miR-873-5p、hsa-miR-93-3p均与VDR存在靶向关系；筛选并验证的7个miR中，过表达hsa-miR-149-5p、hsa-miR-301a-5p PTH分泌增加。hsa-miR-149-5p在继发性甲状旁腺功能亢进中高表达（P=0.046），VDR mRNA（P=0.0267）和蛋白水平表达均下降。结论 hsa-miR-149-5p、hsa-miR-301a-5p可能通过下调VDR基因的表达促进继发性甲状旁腺功能亢进患者PTH的分泌。

• 二氢杨梅素的体外护肝作用：基于脂噬介导的LO2细胞脂质蓄积及HepG2细胞增殖

  廖晓珊, 郝宇婷, 伍梦婷, 刘会平, 蒋 亮, 叶子充, 廖文镇, 邓 红

  目的 基于脂噬途径研究二氢杨梅素（DMY）对LO2细胞脂质蓄积的防治效果及其机制，并探索其对HepG2细胞的增殖抑制。方法 FBS诱导LO2细胞建立脂肪变性模型，研究分别设置对照组：10%FBS-DMEM正常培养；模型组：50%FBS-DMEM；阳性对照组：100 μg/mL DMY+10%FBS-DMEM；处理组（L-DMY组：50 μg/mL DMY+50%FBS-DMEM；M-DMY组：100 μg/mLDMY+50%FBS-DMEM；H-DMY组：200 μg/mL DMY+50%FBS-DMEM）及恢复对照组：先50% FBS-DMEM培养，后10%FBS-DMEM培养。油红O染色测定脂滴累积。试剂盒测定TC、TG、LDL水平和AST、ALT和LDH酶活性。AO染色观察自噬溶酶体数量，透射电镜观察自噬体数量。Western blot检测自噬蛋白LC3表达量。MDC染色观察自噬体形成情况，q-PCR测定LC3、ATG7、AMPK、mTOR、p62和Beclin1的mRNA表达水平。细胞周期阻滞实验分析HepG2细胞周期比例，流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况，细胞DNA断裂实验检测HepG2细胞DNA的完整情况。结果 DMY干预和预处理可抑制LO2细胞的脂质蓄积，并且降低TC、TG、LDL水平和AST、ALT和LDH酶活性，差异具有统计学意义（P<0.05）；DMY可促进LO2细胞的自噬体和自噬溶酶体的形成，并促进自噬蛋白LC3的表达；DMY可减轻高FBS诱导的LO2细胞自噬体形成抑制，并上调LC3（P< 0.01）、ATG7（P<0.01）、Beclin1（P<0.05）和AMPK（P<0.001）的mRNA水平，下调p62（P<0.001）和mTOR（P<0.001）的mRNA水 平。DMY可阻滞HepG2细胞的有丝分裂和细胞增殖（53.90% vs 14.62%; 32.31% vs 70.17%），诱导HepG2细胞的晚期凋亡（4.74% vs 57.86%）和DNA断裂。结论 DMY通过调节AMPK/mTOR介导的脂噬途径减少LO2细胞的脂质累积，通过阻滞细胞周期和促进凋亡抑制HepG2增殖，发挥体外护肝作用。

• 负载骨髓干细胞来源外泌体的3D水凝胶通过调节免疫促进损伤软骨的修复

  管鹏飞, 崔瑞文, 王其友, 孙永建

  目的 分探究负载骨髓干细胞来源外泌体的GelMA水凝胶对软骨损伤的修复情况。方法 首先利用超速离心法分离提取出骨髓干细胞上清液中的外泌体，并通过外泌体透射电镜、粒径分析以及Western blot检测外泌体表面marker。检测负载外泌体的GelMA水凝胶相关性能（包括流变以及电镜）。通过BCA测蛋白法检测外泌体的释放情况，以及通过PKH26红色荧光染料标记外泌体，观察外泌体被RAW264.7细胞吞噬情况。将RAW264.7细胞种在孔板表面，分为空白对照组（Control组）、单纯外泌体组（Exo组）、单纯水凝胶组（GelMA组）、负载外泌体的水凝胶组（GelMA-Exo组）。通过q-PCR以及免疫荧光检测负载外泌体的GelMA水凝胶对于RAW264.7细胞极化的影响。建立材料/RAW264.7细胞/软骨细胞Transwell共培养模型，上室为软骨细胞，下室为材料/ RAW264.7细胞，分组与上面一致，通过q-PCR以及免疫荧光检测损伤软骨细胞的修复情况。构建大鼠膝关节软骨损伤模型，分为假手术组（Sham组）、单纯损伤组（SI组）、单纯水凝胶组（GelMA组）以及负载外泌体的水凝胶组（GelMA-Exo组），通过HE和Masson染色检测软骨修复情况。结果 通过对提取的细胞进行多系分化能力的检测，成功获取了骨髓干细胞。通过透射电镜、粒径分析以及Western blot检测，成功分离出骨髓干细胞外泌体。负载外泌体的GelMA水凝胶明显促进RAW264.7细胞向M2型极化（P<0.05）。体外共培养模型表明负载外泌体的GelMA水凝胶能显著促进损伤软骨细胞的修复通过调节RAW264.7细胞由M1型向M2型转化（P<0.05）。HE和Masson染色表明负载骨髓干细胞来源外泌体的GelMA水凝胶明显促进软骨损伤的修复。结论 负载骨髓干细胞来源外泌体的GelMA水凝胶能够通过改善免疫微环境明显促进大鼠软骨损伤的修复。

• 三七总皂苷联合环磷酰胺对荷肝癌H22细胞移植瘤小鼠的治疗作用

  邹 琼, 伍晓萍, 王进吉, 夏 谍, 邓萌玥, 丁俞珍, 代玉玲, 赵嵩月, 陈 彤

  目的 探究三七总皂苷（PNS）联合环磷酰胺（CTX）对肝癌H22荷瘤小鼠的治疗作用。方法 不同浓度的PNS体外干预肝癌H22细胞24~72 h后，CCK8比色法检测PNS对肝癌H22细胞增殖的影响；Annexin V/PI双荧光染色法检测PNS对肝癌H22细胞凋亡的影响；体内构建肝癌H22荷瘤小鼠模型，随机分为模型组、CTX组（25 mg/kg）、PNS低剂量组（120 mg/kg）、PNS中剂量组（240 mg/kg）、PNS 高剂量组（480 mg/kg）及 PNS 低剂量+CTX 组（120 mg/kg+25 mg/kg）、PNS 中剂量+CTX 组（240 mg/kg+25 mg/kg）、PNS高剂量+CTX组（480 mg/kg+25 mg/kg），连续给药10 d后处死小鼠，取材，检测PNS及PNS联合CTX对肝癌H22荷瘤小鼠单核-巨噬细胞的吞噬能力、脾淋巴细胞增殖能力、肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-2（IL-2）的水平、血清溶血素抗体水平、血液指标、抑瘤率和生存期的影响。结果 PNS对肝癌 H22细胞的增殖抑制呈浓度依赖性，能显著促进肝癌H22细胞的凋亡（P<0.01）。体内单用PNS及PNS联合CTX能增强单核-巨噬细胞的吞噬、刺激脾淋巴细胞的增殖、促进TNF-α、IL-2释放、促进血清溶血素抗体的生成，增加外周血中白细胞、红细胞、淋巴细胞的数量，PNS高剂量+CTX组的抑瘤率高达83.28%（P<0.01）、生命延长率达131.25%（P<0.05）。结论 PNS及PNS与CTX联用可提高机体的免疫力和抑瘤率，延长肝癌H22荷瘤小鼠的生存期。

• 腹膜透析相关腹膜炎患者治疗失败预测模型的构建和验证：一项多中心临床研究

  孟令飞, 朱学研, 杨立明, 李忻阳, 程思宇, 郭师正, 庄小花, 邹洪斌, 崔文鹏

  目的 构建和验证腹膜透析相关性腹膜炎（PDAP）患者治疗失败的风险预测模型。方法 对2013年1月1日~2019年12月31日在吉林省3个腹膜透析中心发生PDAP的腹膜透析（PD）患者进行了回顾性分析。收集入选者基线临床资料，主要研究终点为治疗失败。根据腹膜透析中心地域的不同，将数据分为训练集（吉林大学第二医院、吉林大学第一医院二部）和验证集（吉林市中心医院）。采用Logistic风险回归模型筛选影响PDAP治疗失败的危险因素，用Stata建立预测模型；用ROC曲线和校准曲线评估模型的区分度和准确性，并以DCA曲线评估列线图的临床有效性。结果 共纳入977例次PDAP，训练集中625例次，其中78例治疗失败，验证集中352例次，其中35例治疗失败。建模队列多因素Logistic回归分析结果显示，血清白蛋白、第5天腹透液白细胞计数、透析龄和致病微生物类型是治疗失败的独立危险因素，在训练集中的C统计量为0.827（95% CI：0.784–0.871）。在验证集中，C统计量为0.825（95%CI：0.743-0.908）。预测模型在训练和验证集的校准方面都表现良好。结论 基于血清白蛋白、第5天腹透液白细胞计数、透析龄和致病微生物类型构建了预测模型，性能良好。

• 过表达TrxR1重组HEK293细胞株的构建和鉴定

  吕晓梅, 周知音, 朱 丽, 周 吉, 黄慧丹, 张 超, 刘晓平

  目的 构建稳定过表达硫氧还蛋白还原酶1（TrxR1）的HEK293细胞株，为TrxR1的功能研究以及靶向TrxR1药物筛选提供细胞模型。方法 通过PCR扩增，连接转化以及Sanger双脱氧测序构建并筛选出TrxR1的重组慢病毒表达载体pLVX-PuroTXNRD1，转染HEK293细胞，经嘌呤霉素筛选获得稳定转染细胞株。后续研究分为3组进行：①TrxR1过表达HEK293细胞：pLVX-Puro-TXNRD1载体稳定转染细胞；②对照HEK293细胞：pLVX-Puro空载病毒载体稳定转染细胞；③正常HEK293细胞；通过RT-qPCR、Western blot实验检测上述3组细胞中TrxR1的mRNA以及蛋白表达情况；通过胰岛素终点法以及TRFS-green探针成像检测上述3种细胞内TrxR1的酶活力；通过CCK8实验检测上述3种细胞对TrxR1特异性抑制剂auranofin的敏感性。结果 构建载体经DNA测序，成功获得插入TrxR1的重组慢病毒表达载体pLVX-Puro-TXNRD1。与HEK293以及HEK293-NC细胞相比，HEK293-TrxR1-OE细胞中TrxR1的mRNA和蛋白高表达，且酶活力也同样显著上升（P<0.005）；而与HEK293以及HEK293-NC细胞相比，auranofin对HEK293-TrxR1-OE细胞中TrxR1酶活力以及细胞增殖的抑制效率均显著下降（P<0.005）。结论 通过构建pLVX-Puro-TXNRD1慢病毒载体，成功获得过表达TrxR1酶的HEK293细胞株，该细胞对特异性靶向TrxR1的抑制剂的抗增殖作用具有抵抗，因而可用于靶向TrxR1药物的筛选。

• 腹腔穿刺引流术通过激活Nrf-2/HO-1通路和抑制自噬减轻大鼠重症急性胰腺炎

  卢一琛, 吴 俊, 蒋 文, 刘江涛, 且华吉, 孙红玉, 汤礼军

  目的 探讨早期腹腔穿刺引流术（APD）对大鼠重症急性胰腺炎（SAP）自噬及Nrf-2/HO-1通路的影响及其可能机制。方法 将32只SD大鼠随机分为假手术组（SO组，n=8），重症急性胰腺炎组（SAP组，n=8，4%牛磺胆酸钠逆行注射法），腹腔穿刺引流术组（APD组，n=8，SAP造模后于右下腹置管引流），APD+HO-1特异性抑制剂组（APD+ZnPP组，n=8，APD造模前12 h腹腔注射30 mg/kg ZnPP）。造模后12 h采集大鼠血样及胰腺组织。以HE染色评价胰腺组织病理改变，全自动生化分析仪检测血清中淀粉酶、脂肪酶水平，ELISA法检测血清炎症因子水平，比色法检测胰腺组织内氧化应激水平，透射电镜下观察胰腺腺泡细胞内亚细胞器结构及自噬改变，RT-PCR及Western blotting检测自噬相关蛋白及Nrf-2/HO-1通路蛋白的表达。结果 与SAP组相比，APD组大鼠胰腺组织病理损伤显著减轻（P<0.05），血清淀粉酶、脂肪酶及肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素1-β（IL-1β）水平明显下降（P<0.05），胰腺组织内氧化应激水平显著下降（P<0.05），并伴有Nrf-2/HO-1通路的激活（P<0.05）。ZnPP可以抑制上述的治疗作用。同时，APD干预可逆转SAP造成的线粒体、内质网损伤，并减少p62积累（P<0.05），抑制腺泡细胞内自噬受损。结论 早期APD引流治疗可通过激活Nrf-2/HO-1通路减轻局部氧化应激、修复受损自噬进而降低SAP的严重程度。

• miR-20a-5p通过下调HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549增殖

  刘海军, 王 杰, 申珈馨, 吴 旭, 李玉磊

  目的 探讨miR-20a-5p调控HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549增殖的分子机制。方法 转染HOXB13过表达质粒与HOXB13 siRNA到肺癌细胞系A549，通过qRT-PCR及Western blot实验检测HOXB13 mRNA及蛋白的表达水平；CCK-8及EdU实验检测HOXB13对肺癌细胞系A549细胞增殖的影响；利用生物信息学分析筛选HOXB13可能结合的miRNA；通过qRT-PCR检测转染miR-20a-5p mimic与miR-20a-5p inhibitor到肺癌细胞系后miR-20a-5p的表达水平；Western blot实验检测HOXB13在肺癌细胞系中的表达情况；CCK-8及EdU实验检测miR-20a-5p肺癌细胞系A549细胞增殖的影响；在A549细胞中共转染miR-20a-5p mimic及HOXB13过表达质粒，CCK-8及EdU实验检测A549细胞增殖能力。结果 HOXB13促进了A549细胞的增殖（P<0.05）；生物信息学筛选出HOXB13可能结合的miRNA为miR-20a-5p；在肺癌细胞系中过表达miR-20a-5p后，HOXB13蛋白表达量降低（P<0.05）；而干扰miR-20a-5p表达后，HOXB13蛋白的表达量升高（P<0.05）；细胞增殖实验结果显示，miR-20a-5p与HOXB13对细胞增殖的影响相反，miR-20a-5p及HOXB13同时过表达，细胞增殖情况介于单独过表达miR-20a-5p及单独过表达HOXB13组之间（P<0.05）。结论 miR-20a-5p调控HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549的增殖。

• 埃博霉素D对大鼠外伤性视神经损伤的保护作用

  王鹏飞, 罗生平, 申 晨, 喻哲昊, 聂祖庆, 李志伟, 文 婕, 李 萌, 曹 霞

  目的 探讨埃博霉素D治疗大鼠视神经损伤（TON）的治疗效果。方法 42只健康SD大鼠分成埃博霉素D治疗组（1.0 mg/kg埃博霉素D腹腔注射）和等量DMSO溶剂对照组，3 d/次给药治疗直至28 d，首次给药次日建立大鼠TON模型。在3、7、28 d时运用活体闪光视觉诱发电位（FVEP）检测，免疫荧光检测，Western blot检测对两组大鼠视觉通路特性，视网膜神经节细胞（RGC）数量，受损轴突再生标志物蛋白GAP43表达水平，以及视网膜和视神经Tau及其pTau-396/404的变化情况进行研究。结果 治疗组相对于对照组在3 d和28 d两个检测时间点中RGC的丢失率都显著下降（3 d下降19.12%，P=0.032；28 d下降22.67%，P=0.042），然而FVEP未能在治疗终点28 d时在生理上观测到视觉通路的改善（N2波潜伏期相对差异，P=0.236；P2-N2波振幅相对衰减差异，P=0.441）。视网膜中3 d时治疗组相对于对照组总Tau含显著增加（P<0.001），且总Tau和pTau-396/404的含量变化较一致；而在视神经轴突中，7 d时治疗组相对于对照组总Tau水平显著降低（P=0.002），但总Tau和pTau-396/404的变化关系不明显。此外，埃博霉素D的作用可使受损轴突在28 d时仍然表达GAP43。结论 埃博霉素D对外伤性视神经损伤存在保护作用，其可促进损伤RGC的存活，增强存活RGC中胞体Tau的含量，降低受损轴突中Tau的累积，刺激受损轴突持续再生。

• 多核糖核苷酸核苷转移酶1在氧糖剥夺诱导心肌细胞凋亡损伤中的作用

  张信琴, 汪 雄, 李 琴, 陈颖梅, 张新颜, 王 鹏, 袁 木, 裴海峰

  目的 探讨多核糖核苷酸核苷转移酶1 (PNPT1)对氧糖剥夺（OGD）诱导心房肌细胞凋亡的影响和作用机制。方法 体外培养HL-1心房肌细胞，PNPT1-siRNA转染HL-1细胞。实验分组为：正常组（Control）、OGD组、NC-siRNA组（转染乱码RNA）、PNPT1- siRNA组、OGD+NC-siRNA组和OGD+PNPT1- siRNA组。通过CCK-8检测细胞存活率，qPCR检测ACTB mRNA和TUBA mRNA的含量，Western blot检测PNPT1蛋白水平，流式细胞术检测HL-1细胞凋亡率，JC-1试剂盒检测线粒体膜电位，透射电镜观察线粒体形态。结果 随OGD诱导时间延长，HL-1细胞质中PNPT1的蛋白表达水平呈上升趋势（P<0.05）。与NCsiRNA相比，PNPT1-siRNA明显减少细胞内PNPT1表达。OGD条件下，ACTB mRNA和TUBA mRNA降解增加（P<0.05），HL-1心房肌细胞凋亡率增加（P<0.05）；相反地，PNPT1-siRNA则抑制ACTB mRNA和TUBA mRNA降解（P<0.05），同时降低HL-1心房肌细胞凋亡率（P<0.05），并且改善线粒体膜电位以及线粒体形态。结论 抑制PNPT1可改善线粒体损伤并减少凋亡相关mRNA的降解，从而减轻OGD诱导的HL-1心房肌细胞凋亡损伤。

• 经阴道分娩史对静脉全麻下宫腔镜手术患者麻醉管理的影响——99例前瞻性临床试验

  于晓萌, 郭 英, 公茂伟, 王苗苗, 闫志风, 孙 立, 娄景盛

  目的 评估接受非插管静脉全麻下宫腔镜手术女性患者，其术前经阴道分娩史对术中麻醉管理的影响。方法 收集非插管静脉全麻下宫腔镜手术患者99例，依据是否有经阴道分娩史分为有经阴道分娩史组（VD组，43例）和无经阴道分娩史组（NVD组，56例），比较两组患者：①麻醉前（T1）、麻醉后（T2）、扩宫后（T3）以及扩宫后3 min（T4）的血压、心率、血氧饱和度（SpO2）、脑电双频指数（BIS）变化及血管活性药应用情况；②两组患者麻醉术中丙泊酚和依托咪酯诱导剂量、丙泊酚应用总量、丙泊酚追加剂量及次数、患者术中体动情况、呼吸抑制情况、手术时长、手术医生满意度评分；③术后清醒时长、术后恢复时长、术后30 min疼痛视觉模拟评分（VAS)及术后恶心呕吐发生情况。结果 两组患者T1与T2时间点收缩压、舒张压、心率、SpO2变化均未见差异；T3、T4时点NVD组较VD组收缩压、舒张压明显升高（P0.05）；NVD组丙泊酚应用总量、术中丙泊酚追加剂量和次数均大于VD组（P<0.01）；NVD组术中发生体动次数更多（P<0.01），手术医生满意度评分更低（P<0.01），术毕清醒（P<0.05）和恢复时间更长（P<0.01），术后疼痛VAS评分更高（P<0.05），其余结果无统计学意义。结论 术前是否存在经阴道分娩史明显影响非插管静脉全麻下宫腔镜手术患者麻醉管理，其围术期血流动力学变化、麻醉用药以及术后恢复质量等均发生明显变化，提示在此类手术中，需要根据患者不同分娩史进行差异化麻醉围术期管理。

• 双 mTORC1/2 抑制剂 AZD2014 可抑制大鼠肝移植后的急性排斥反应

  廖 晖, 王 毅, 徐小平, 周陈杰, 张健民, 钟克波, 杨定华

  目的 在同种异基因大鼠肝移植模型中验证AZD2014是否具有抑制肝移植术后急性排斥反应的作用。方法 采用Kamada 提出的“二袖套”法建立Lewis→BN 同种异基因大鼠肝移植急性排斥反应模型，随机分成对照组和AZD2014组，各4只。AZD2014组腹腔内注射AZD2014药物，5 mg/kg，1次/d；对照组腹腔内注射药物溶剂2.5 mL/kg，1次/d。不同时间点取外周血检测肝功能（丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶和总胆红素）。记录生存时间，进行生存分析。移植肝脏行免疫组化检测CD3和Foxp3的表达水平，评估T淋巴细胞和Treg淋巴细胞浸润的程度；移植肝脏行HE染色，采用Banff方案评估肝移植术后排斥反应的严重程度。结果 对照组在术后14 d内有3/4 的大鼠死亡，而AZD2014组在术后14 d内无大鼠死亡，AZD2014组与对照组相比生存时间明显延长（χ2=4.213，P=0.040）。对照组血清中ALT、AST和TBIL进行性升高，上述指标均高于同时间AZD2014组（P<0.05）。病理检查显示对照组移植肝内排斥反应明显重于AZD2014组（排斥指数P<0.01），对照组中T淋巴细胞（CD3阳性）浸润相较于AZD2014组更为严重（P<0.01），而Treg细胞（Foxp3阳性）明显少于AZD2014组（P<0.01）。结论 双mTORC1/2抑制剂AZD2014可以有效地抑制同种异基因大鼠肝移植术后的急性排斥反应。

• 糖尿病足溃疡合并下肢动脉病变的临床特点及相关危险因素

  何爱萍, 丁心怡, 黄佳利, 罗祥蓉, 孟健夫, 曹 瑛, 高 方, 邹梦晨

  目的 研究糖尿病足溃疡（DFU）合并下肢动脉病变（LEAD）的临床特点，分析DFU合并LEAD相关危险因素。方法 收集2017年1月~2019年12月南方医科大学南方医院内分泌代谢科住院治疗的650例DFU患者的临床资料，并进行随访。根据DFU是否合并LEAD分为LEAD组与非LEAD组，分析两组一般资料情况，使用Logistic回归分析DFU合并LEAD的相关危险因素。结果 650例DFU患者中，72.4%的患者合并LEAD。平均随访时间约3.5个月，DFU平均愈合时间为2.55个月，其中愈合453例，截肢183例。两组年龄、住院费用、舒张压（DBP）、糖化血红蛋白（HbA1c）、血脂、病程、踝肱指数（ABI）、愈合时间、吸烟率、临床结局、Wagner分级、影像学结果其差异有统计学意义（P<0.05）。多因素Logistic回归显示年龄（OR=1.070，95% CI1.049-1.091）、吸烟史（OR=2.013，95% CI 1.268-3.195）、DBP下降（OR=0.980，95% CI 0.963-0.997）为DFU合并LEAD的独立危险因素，愈合时间长则为DFU合并LEAD的临床特点。结论 DFU患者合并LEAD发病率高，易致残、死亡，具有高龄、高吸烟率、愈合时间更长的特点，特别发现舒张压的下降也是危险因素之一。

• Talin1在输卵管妊娠患者的输卵管和绒毛中高表达并促进妊娠滋养细胞的侵袭

  邱 嫔, 林欣仪, 邓高丕

  目的 验证Talin1在妊娠输卵管组织及输卵管妊娠绒毛中的表达差异及对HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响，探讨其作用机制。方法 采用免疫组化及Western blot检测Talin1在妊娠输卵管组织及输卵管妊娠绒毛中的表达定位及蛋白表达差异；HTR-8/SVneo细胞内转染Talin1 siRNA，划痕实验及Transwell实验检测Talin1对HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响；qRTPCR及Western blot检测HTR-8/SVneo细胞中MMP-2、MMP-9、N-cadherin、Snail的表达。结果 正常输卵管组织及妊娠输卵管组织中均可检测到Talin1的阳性表达，主要表达于纤毛细胞的细胞质中；妊娠输卵管组织中Talin1的蛋白表达高于正常输卵管组织（P<0.01）；输卵管妊娠绒毛中Talin1表达高于宫内妊娠绒毛（P<0.01）；沉默Talin1抑制HTR-8/SVneo细胞的侵袭（P<0.01）和迁移（P<0.05）；Talin1下调HTR-8/SVneo细胞中N-cadherin、MMP-2、Snail的表达（P<0.05），上调MMP-9的表达（P<0.05）。结论 输卵管妊娠患者的输卵管组织及绒毛中Talin1的表达显著升高，输卵管妊娠的发生可能和Talin1调控妊娠滋养细胞的侵袭相关。

• 鲜广地龙纯化蛋白的制备及其体外抗肺纤维化活性评价

  李舒雨, 杨启鑫, 左安娜, 田林华, 霍金海, 蒙艳丽, 汤庆发, 王伟明

  目的 寻找一种方便快捷的鲜广地龙蛋白纯化方法，并探究其是否具有抗肺纤维化作用。方法 采用冷冻干燥法对鲜广地龙进行粗提取，再用分子排阻色谱分离纯化得到纯化蛋白（P2），并质谱分析P2蛋白组成。细胞实验分组：C57BL/6小鼠24只，随机分3组（8只/组）。对照组、模型组（5 ng/mL TGF-β1处理）、SB431542组（2 μmol/L）和鲜广地龙纯化蛋白P2组（13.125 μg/mL）。动物实验分组：对照组（不处理）、模型组（博来霉素处理）、博来霉素+鲜广地龙纯化蛋白P2（5 mg/mL）。造模后给药21 d，在第22天进行取材。采用CCK8-法检测P2对MRC-5细胞的细胞毒性和肌成纤维细胞异常增殖的抑制；流式细胞术检验其对肌成纤维细胞的凋亡；HE 和 Massson 染色观察其对肺组织的病理学变化；RT-PCR、Western blot 检测其对α-SMA、Vimentin、E-cadherin和Collagen I的调节；机制方面通过检验P2对Smad2/3及P-Smad2/3的调节作用，进而证明其可通过TGF-β/Smad通路起到抗肺纤维化作用。结果 通过分子排阻色谱法可方便、稳定得到鲜广地龙纯化蛋白P2。体外实验显示P2具有抑制肌成纤维细胞的作用（P<0.01），降低纤维化模型中α-SMA、Vimentin和Collagen I的表达（P<0.001或P<0.01），升高E-cadherin的表达（P<0.01），可抑制Smad2/3和P-Smad2/3的表达（P<0.001或P<0.01）。体内实验显示，P2可降低HE染色中炎症细胞的数量以及Masson染色中蓝色的胶原纤维区域。结论 运用分子排阻色谱可较为理想的获得鲜广地龙纯化蛋白P2，且其可通过调节TGF-β/Smad通路抑制肺纤维化进程。