南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2021年第6期

• miR-483-5p通过靶向FKBP4加重顺铂诱导的小鼠卵巢损伤

  赵茴茴, 古文清, 潘文斌, 张汉彬, 帅 领, 刁瑞英, 汪丽萍

  目的 探讨FKBP4蛋白在顺铂诱导的早发性卵巢功能不全（POI）中的作用及其机制研究。方法 采用ITRAQ技术测定4对顺铂诱导的小鼠POI模型组及生理盐水对照组卵巢组织的差异蛋白。使用TargetScan软件进行靶点预测，利用qRT-PCR和Western blot方法确定顺铂诱导组及生理盐水对照组miR-483-5p及FKBP4的表达水平。收集POI患者及正常患者血清各 6 例，并利用 qRT-PCR 检测 miR-483-5p 表达水平。利用细胞转染及双荧光素酶实验验证 miR-483-5p 和 FKBP4 的关系。利用转染和/或顺铂分别处理原代颗粒细胞及KGN细胞系（人颗粒细胞系），将细胞分为对照（NC）组、miR-483-5p组、miR-483-5p+顺铂处理组和miR-483-5p+FKBP4+顺铂处理组。以此验证miR-483-5p、FKBP4在顺铂处理的颗粒细胞中的作用；利用 Cre-loxp 系统构建卵母细胞特异性过表达 miR-483-5p 及同窝未过表达的转基因小鼠，用免疫荧光、原位杂交及ELISA检测卵巢功能。结果 与生理盐水组相比，顺铂诱导的POI小鼠的卵巢中FKBP4表达下降（P<0.05）。靶点预测软件发现miR-483-5p的潜在靶点是FKBP4，并且较生理盐水对照组，它在顺铂诱导的POI小鼠的卵巢、血清以及POI患者的血清中均高水平表达（P<0.01）。体外实验进一步证实FKBP4是miR-483-5p的作用靶点。人颗粒细胞系及小鼠原代颗粒细胞过表达FKBP4缓解了顺铂联合miR-483-5p过表达引起的细胞凋亡（n=5，P<0.05）。与同窝未过表达的小鼠比较，卵母细胞过表达miR-483-5p的小鼠顺铂诱导造成的卵巢损伤更严重。结论 miR-483-5p/FKBP4在顺铂诱导的POI中发挥作用。顺铂诱导的卵巢损伤过程可能与上调的miR-483-5p靶向作用FKBP4，导致的FKBP4表达下降有关。miR-483-5p上调可能增加卵巢对顺铂药物的敏感性，使卵巢功能降低。检测血清miR-483-5p可以用来预测POI的发生和发展。

• 基线25（OH）D水平与2型糖尿病发病风险无相关性：基于5044例人群的前瞻性队列研究

  苏 姗, 汤旭磊, 车红霞, 甄洁玉, 刘丽娟, 赵 楠, 刘进进, 关聪会, 傅松波, 王丽婷, 李红利, 张 迪, 王强梅, 甄东户

  目的 探讨甘肃兰州城关区中老年人群基线血清25（OH）D水平与2型糖尿病（T2DM）发病和血糖控制的相关性。方法 选取2011年开展的“REACTION”研究兰州地区40~75岁居民的资料并于2014年开始随访，对2次调查资料完整的5044例对象进行研究。根据25（OH）D四分位水平将基线人群分为Q1、Q2、Q3、Q4组，比较不同糖代谢状态下各组的糖尿病发病情况和血糖控制情况及其相关性。结果（1）基线25（OH）D水平与空腹血糖（FPG）、OGTT-2h后血糖（2hPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）无相关性（P>0.05）；（2）平均随访3.4±0.6年后发现，无论在正常糖耐量人群中还是在糖调节受损患者中，与Q1组相比，Q2、Q3、Q4组的糖尿病前期亦或糖尿病的发病风险均未见显著降低（P>0.05）；（3）T2DM患者随访后血糖控制达标率高于随访前（63.4% vs 60.6%），且随访后的HbA1c、FPG、2h-PG水平较随访前明显下降，但与Q1组比较，无论是血糖控制达标率还是HbA1c、FPG、 2h-PG水平，Q2、Q3、Q4组随访前后的差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 本研究尚未发现基线25（OH）D水平的高低与糖尿病的发病风险及T2DM患者的血糖控制情况有关。

• 猪诱导多能干细胞可定向分化为前脑GABA能神经元前体

  朱 缓, 孙婷婷, 王圆圆, 王 铁, 马彩云, 王春景, 刘长青, 郭 俣

  目的 探讨猪诱导多能干细胞（iPSCs）体外定向分化为GABA能神经元前体的方法体系。方法 猪iPSCs诱导分化为GABA能神经元前体遵循两个阶段，第1阶段，猪iPSCs悬浮培养，第3天时形成类胚体，采用神经诱导培养基NIM（SB431542、DMH1、FGF2）继续诱导，第12天分化为原始神经上皮细胞。第2阶段，使用含Pur、B27的NIM培养基悬浮培养形成神经球，至第21天时形成GABA能神经元前体。CM-DiI标记后，定向移植帕金森（PD）模型大鼠黑质纹状体，检测其在宿主脑内存活、迁移及分化状况。结果 猪iPSCs在饲养层细胞上稳定传代，表达多能性标记OCT4、Nanog、SSEA1和TRA-160，并且核型分析显示没有其他物种来源细胞污染。第12天经诱导分化获得原始神经上皮细胞能够形成玫瑰花环结构，并表达其表面标记物（PAX6、SOX2 和 Nestin）与神经微管蛋白标志物 Tuj1。第 21 天诱导细胞高表达 GABA 能神经元前体的表面特异性抗原NKX2.1和前脑标志物FOXG1。移植8周后，体内可分化为GABA能神经元与多巴胺能神经元，明显改善PD大鼠运动行为。结论 结合无血清培养基筛选法逐步定向诱导猪iPSCs高效分化为前脑GABA能神经元前体，移植后能够显著改善PD大鼠的运动功能障碍，为诱导GABA能神经元前体移植治疗神经损伤疾病奠定基础。

• 烟酰胺-N-甲基转移酶在胃癌中高表达并与预后负相关：基于生物信息学方法

  文智慧, 梁炜祺, 钟依秀, 孙 菲, 张庆玲

  目的 探讨烟酰胺-N-甲基转移酶（NNMT）在胃癌中的表达、生物学功能和临床病理学意义。方法 运用公共数据库GEO、Oncomine及TCGA分析筛选与胃癌分型和临床预后相关的基因；利用STRING、GSEA、DAVID、Cytoscape等软件分析预测与候选基因相关的分子通路，构建蛋白质相互作用关系网络；通过qRT-PCR分析候选基因在28例胃癌和配对癌旁组织中mRNA的差异表达；CCK8增殖实验、平板克隆形成实验、划痕愈合实验、Transwell小室细胞运动实验等分析NNMT表达对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果 NNMT在多个数据库分析中呈高表达且与胃癌预后负相关；通路分析显示，NNMT高表达与细胞外基质受体和细胞黏附分子等细胞粘附相关通路以及细胞因子受体等分子通路相关；而NNMT低表达可能与碱基错配修复和核黄素代谢等生物过程相关。蛋白相互作用分析显示，NNMT可能与AURKA等16个差异表达的蛋白存在相互作用关系，且与TAGLN、PTRF、AKAP12、IGF2BP2蛋白存在较高的共表达趋势。在临床组织标本中，qRT-PCR结果显示，胃癌组织中NNMTmRNA的表达明显高于癌旁组织（P<0.05）。在胃癌细胞系中，NNMT的过表达可显著促进细胞增殖、侵袭和迁移，而NNMT敲除可对细胞增殖、侵袭和迁移产生明显的抑制作用。结论 NNMT在胃癌中异常高表达并促进胃癌细胞的增殖、侵袭和转移；NNMT高水平表达与胃癌患者预后呈负相关，提示NNMT可能为胃癌预后相关分子。

• 葛根素通过Fetuin B-AMPK/ACC信号通路减轻2型糖尿病小鼠肝脏胰岛素抵抗

  高俊凤, 刘曼曼, 郭召平, 胡春平, 冯珍凤, 严 军

  目的 探讨葛根素通过Fetuin B-AMPK/ACC信号通路对高脂饮食联合链脲佐菌素诱导的2型糖尿病小鼠肝脏胰岛素抵抗的调控机制。方法 C57BL/6J小鼠随机选取10只正常饮食作为正常对照组，其余40只通过高脂饲料喂养联合腹腔注射100 mg/kg链脲佐菌素建立2型糖尿病小鼠模型，造模成功后采用随机数字表法将小鼠分为模型对照组、葛根素低剂量组（Pue-50 mg/kg）、葛根素中剂量组（Pue-100 mg/kg）和葛根素高剂量组（Pue-200 mg/kg），干预8周。末次给药后，尾静脉取血检测各组小鼠空腹血糖（FBG），取血和肝组织；ELISA法检测各组小鼠血清空腹胰岛素（FINS），肝脏甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸水平；HE染色法观察小鼠肝脏病理变化；免疫组化法检测小鼠肝脏Fetuin B含量；实时荧光定量聚合酶链式反应法检测小鼠肝脏Fetuin B、AMPK、ACC mRNA表达；Western blot法检测小鼠肝脏Fetuin B、AMPKα1、ACC、P-AMPKαT183/T172、P-ACCS79蛋白表达。结果 末次给药后，Pue-100 mg/kg、Pue-200 mg/kg剂量组甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸及FBG低于模型对照组（P<0.01）；葛根素不同剂量给药组较正常对照组，FINS和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)降低（P<0.01）。与正常对照组比较，模型对照组小鼠肝脏 Fetuin B、ACC mRNA表达明显上升，AMPK mRNA表达降低（P<0.01）；Fetuin B、ACC蛋白表达升高，AMPKα1、P-AMPKαT183/T172、P-ACC S79蛋白表达降低（P<0.01）；病理学观察到肝脏脂肪变性明显，肝脏Fetuin B表达含量增加。与模型对照组比较，葛根素呈剂量依赖性抑制肝脏Fetuin B、ACC mRNA表达和Fetuin B、ACC蛋白表达，上调AMPK mRNA表达和AMPKα1、P-AMPK αT183/T172、P-ACC S79蛋白表达（P<0.01）。Pue-50 mg/kg给药组上调AMPK mRNA表达，下调ACCmRNA表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论 葛根素可能通过调节肝脏Fetuin B-AMPK/ACC信号通路减轻2型糖尿病小鼠胰岛素抵抗，进一步改善糖脂代谢。

• 三硫二苄基抑制头颈部鳞状癌细胞HN30的增殖并诱导其凋亡

  徐 璐, 钱 峰, 孙 磊

  目的 探究三硫二苄基（DTS）抑制头颈癌细胞HN30增殖和促进其凋亡的作用机制。方法 通过克隆形成实验检测DTS对不同头颈癌细胞HN30、HN12、SCC25增殖能力的影响，并用MTT实验检测不同浓度DTS对HN30细胞活力的影响；DTS（3、10、30 μmol/L）刺激HN30细胞24 h，经Annexin Ⅴ-FITC/PI双染及JC-1荧光探针染色，采用流式细胞仪检测DTS对HN30 细胞凋亡及线粒体膜电位的影响，并通过免疫印迹实验检测不同浓度 DTS 作用对凋亡相关蛋白 caspase 3、cleavedcaspase-3和Bcl-2表达的影响；通过免疫印迹实验检测HN30细胞在DTS（10 μmol/L）不同作用时间（0、0.5、1、2、4、8、16 h） 下，Akt/p53磷酸化水平的变化。结果 克隆形成实验发现1 μmol/L DTS能够明显抑制头颈癌细胞HN30、HN12及SCC25的增殖。MTT实验发现，与溶剂对照组相比，HN30细胞的细胞活力在DTS作用下呈剂量依赖性降低，在100 μmol/L DTS作用时效果显著（P<0.001）。采用Annexin Ⅴ-FITC/PI双染及JC-1荧光探针染色后，流式细胞术检测发现随着DTS作用浓度增高，HN30细胞的凋亡细胞比例逐渐增高（30 μmol/L DTS作用下，P<0.01），线粒体膜电位逐渐降低（30 μmol/L DTS作用下， P<0.001）。与溶剂对照组相比，DTS 刺激 24 h 后，HN30 细胞中 cleaved caspase-3 的表达升高（30 μmol/L DTS 作用下，P< 0.01），Bcl-2的表达降低（30 μmol/L DTS作用下，P<0.001）。与溶剂对照组相比，10 μmol/L DTS刺激HN30细胞16 h后，Akt磷酸化水平被显著抑制（P<0.001），而p53的磷酸化水平升高（P<0.01）。结论 DTS抑制HN30细胞的增殖，并诱导凋亡，其作用机制可能与Akt/p53信号通路有关。

• MiR-4719通过靶向调控ARHGAP36抑制人乳腺癌细胞的迁移和侵袭

  李 侨, 邱宇翔, 金 婷, 柳满然, 侯懿烜

  目的 检测miR-4719在乳腺癌组织和细胞中的表达，研究其对乳腺癌细胞侵袭迁移的影响及其分子机制。方法 采用实时荧光定量PCR检测30对人乳腺癌组织和癌旁组织，乳腺癌细胞株（BT549和MDA-MB-231）以及正常乳腺上皮细胞（MCF-10A）中miR-4719和ARHGAP36的表达水平。生物信息手段分析miR-4719对乳腺癌患者生存率的影响，并预测miR-4719的潜在靶基因。将miR-4719模拟物，靶向ARHGAP36的shRNA、ARHGAP36过表达质粒分别转染乳腺癌细胞。Western blot和免疫组化实验检测ARHGAP36的蛋白水平；细胞划痕实验和Transwell实验检测癌细胞的迁移和侵袭能力；双荧光素酶报告实验验证miR-4719与ARHGAP36的mRNA 3'-非翻译区（3'-UTR）直接结合。结果 与癌旁组织、正常乳腺上皮细胞相比，miR-4719和ARHGAP36分别在乳腺癌组织(P<0.001)和乳腺癌细胞（P<0.01）中显著降低和增高。miR-4719低表达与乳腺癌患者不良预后密切相关（P<0.01）。过表达miR-4719或敲低ARHGAP36可明显抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移（P<0.01）。乳腺癌组织中miR-4719和ARHGAP36表达水平呈负相关（P<0.01），双荧光素酶报告实验显示miR-4719可靶向调控ARHGAP36的表达（P<0.01），向癌细胞外源性导入miR-4719可明显抑制ARHGAP36的表达（P<0.01）。此外，过表达ARHGAP36可逆转miR-4719模拟物对癌细胞迁移和侵袭能力的抑制作用（P<0.01）。结论 乳腺癌组织和癌细胞中miR-4719的丧失，导致靶基因ARHGAP36的异常高表达，促进了人乳腺癌细胞的迁移和侵袭。

• 卒中患者肠道宏病毒组的组成和菌群特征

  王展强, 徐开宇, 周宏伟

  目的 探究卒中患者和健康志愿者之间肠道宏病毒组和肠道菌群的差异。方法 选取2014年2月~2016年2月在南方医院神经内科就诊的急性缺血性卒中患者15名，同时招募15名年龄性别匹配的健康志愿者，对所有志愿者的粪便样本进行宏病毒组测序和16S rRNA测序，分析卒中患者和健康志愿者肠道宏病毒组和肠道菌群组成和结构的差异。结果 宏病毒组测序结果显示卒中患者肠道宏病毒组的整体多样性与健康志愿者无差异（α多样性：P=0.320，β多样性：P=0.169, R2=0.037），但两者宏病毒组的组成不同，LEfSe分析提示Bacteroides phage B40_8和Cronobacter phage CS01的相对丰度在卒中患者中升高。16S rRNA测序结果显示卒中患者肠道菌群的结构和组成与健康志愿者存在显著差异（α多样性：P=0.950，β多样性：P=0.005, R2=0.117），LEfSe分析提示卒中患者中Megasphaera等菌属的相对丰度增加，而Bifidobacterium等菌属的相对丰度下降。此外，相关性分析显示在卒中患者的肠道宏病毒组中Streptococcus的噬菌体的相对丰度与其宿主呈正相关（r=0.550, P=0.036）；而在健康志愿者的肠道宏病毒组中Faecalibacterium、Bilophila和Roseburia的噬菌体的相对丰度分别与其宿主呈正相关（Faecalibacterium: r=0.520, P=0.049; Bilophila: r=0.541, P=0.040; Roseburia: r=0.526, P=0.046）。结论 卒中患者肠道宏病毒组的整体多样性与健康志愿者相似，但宏病毒组的组成及其与菌群的相互作用模式不同；卒中患者肠道菌群的结构与健康志愿者存在差异，机会致病菌的相对丰度在卒中患者中升高，但共生菌的相对丰度降低。

• PI3K/Akt通路在内吗啡肽-1后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

  吴胜男, 张 露, 樊红莲, 黄艳平, 宗巧凤, 高 琴, 李正红

  目的 探讨内吗啡肽-1对心肌缺血再灌注损伤中PI3K/Akt信号通路的作用以及对细胞凋亡的影响。方法 将50只SD雄性大鼠随机分为5组：假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）、内吗啡肽-1后处理组（EM50组）、内吗啡肽-1+渥曼青霉素后处理组（EM50+Wort组）和PI3K/Akt信号通路抑制剂渥曼青霉素后处理组（Wort组）。采用结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支30 min，再灌注120 min复制心肌缺血再灌注模型，实验期间动态监测大鼠心率、平均动脉压；再灌注结束后检测大鼠血浆乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α、氧化应激指标超氧化物歧化酶和丙二醛等生化指标，RT-PCR检测Bax和Bcl-2基因的表达情况，Western blot检测心肌组织中凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、磷酸化Akt蛋白和总Akt蛋白的表达。结果 与S组比较，IR组心率和血压降低（P<0.05）；与IR组比较，EM50组心率和血压有所增高（339.94±26.65 vs 284.01±34.99；75.02±14.45 vs 55.83±20.98，P<0.05）；血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α和丙二醛含量或活性下降（P<0.05），氧化应激指标超氧化物歧化酶活性增加（132.77±8.25 vs 84.10±12.42，P<0.05）；p-Akt蛋白表达水平较高（0.61± 0.06 vs 0.38±0.04，P<0.05），Bax基因和cleaved caspase-3蛋白表达量降低（1.70±0.39 vs 3.78±0.71；0.30±0.08 vs 0.53±0.07，P< 0.05），Bcl-2基因的表达量升高（1.20±0.44 vs 0.55±0.25，P<0.05）；与EM50组比较，EM50+Wort组心率和血压降低（P<0.05）；血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α和丙二醛含量或活性增加（P<0.05），氧化应激指标超氧化物歧化酶活性降低（P<0.05）；p-Akt蛋白表达水平较低（P<0.05），Bax基因和cleaved caspase-3蛋白表达量升高（P<0.05），Bcl-2基因表达量降低（P<0.05）。结论 EM-1后处理可调节细胞凋亡，减轻心肌缺血再灌注损伤。PI3K/Akt信号通路可能对EM-1后处理产生的心肌保护效应发挥一定的介导作用。

• 变异链球菌sepM基因中存在与变链素IV形成相关的突变类型

  刘姗姗, 刘玉东, 张容秀, 路晓淼, 胡 浩, 胡 洁, 张 凯, 孙 钰

  目的 了解sepM基因在变异链球菌临床株中的突变类型及其分布特征；探索sepM基因突变与变异链球菌变链素IV形成能力的关系。方法 采用抑菌圈法检测80株变异链球菌临床株的变链素IV形成能力，根据核心基因组多位点序列分型方法构建这80株变异链球菌临床株的最小生成树，根据最大似然法构建这80个样本的进化树。采用GeneMarkS 软件预测这些菌株的编码基因，并将预测到的基因与参考基因组UA159的sepM基因序列进行比对，了解sepM基因在变异链球菌临床株中的突变类型及其分布特征。通过分析变链素IV形成组和无变链素IV形成组菌株中差异分布的突变类型及比较突变组和无突变组菌株中抑菌圈的大小，明确与变链素IV形成相关的突变类型。结果 80株变异链球菌临床株中有变链素IV形成（变链素IV形成组）和无变链素IV形成（无变链素IV形成组）的菌株各25和55株。最小生成树结果提示变链素IV形成组菌株之间的等位基因差异少于变链素IV形成组和无变链素形成组组间菌株，并且变链素IV形成组菌株间起源类似。80株变异链球菌临床株中共检测到34个单碱基突变位点，其中有4个碱基突变（C31T、G533A、C756T、C1036T）在组间存在差异（P分别为0.001、<0.001、 0.025及0.003）。这些差异分布的突变均与变链素IV的形成呈正相关。 结论 变异链球菌临床株sepM基因中存在与变链素IV形成相关的突变类型。

• 基于转录组测序技术的椎间盘退变特异基因表达谱分析

  夏博文, 邢军超, 艾秋池, 李瀚卿, 徐美涛, 侯天勇

  目的 通过筛选分析椎间盘退变过程中的表达变化基因寻找临床治疗间盘退变的新靶点。方法 运用转录组测序技术评估了临床采集到的椎间盘退变患者（IDD，n=4）和非IDD（n=3）椎间盘样本，筛选出具有显著性的差异基因并利用基因本体论(GO）数据库和京都基因和基因组百科全书(KEGG)数据库进行基因功能富集，筛选在IDD进展中可能起关键作用的基因和信号通路，最后使用qRT-PCR技术对上述识别到的部分显著差异基因进行验证。结果 测序结果识别出512个显著差异基因（DEGs），GO数据库主要将这些DEGs主要富集到角化、细胞外基质（ECM）构成、生长因子结合以及炎症趋化作用，而KEGG富集分析的前10通路分别为：阿米巴病、病毒蛋白与细胞因子及其受体的相互作用、ECM受体的相互作用、IL-17信号通路、细胞因子与其受体的相互作用、TNF信号通路、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、PI3K-Akt信号通路、趋化因子信号通路以及雌激素信号通路。选取的 13个作为qRT-PCR验证目标的DEGs在两组间表达具有差异显著性（P1）。结论 ECM、生长因子、胶原纤维蛋白组分、炎症趋化因子以及TNF-α和PI3K-Akt信号通路在IDD进展过程中发挥重要作用，这些因素可能成为椎间盘退变临床治疗的新靶点。

• 联合检测粪便中ITGA4和SFRP2基因甲基化在大肠肿瘤诊断和预后中的价值

  金 红, 庞丽莹, 李华洋, 徐明鑫, 闫海润, 李荣辉

  目的 探讨大肠肿瘤患者粪便中ITGA4和SFRP2基因甲基化水平在其疾病诊断和预后中的价值。方法 实时荧光定量PCR法检测结直肠癌（n=85）、结直肠腺瘤（n=65）和健康人（n=40）粪便中ITGA4和SFRP2基因甲基化水平。结果 3组年龄性别无明显差别,粪便ITGA4和SFRP2基因启动子甲基化在结直肠癌中的阳性检出率分别为48.2%和62.4%，联合检测的阳性检出率81.2%；在结直肠腺瘤中的阳性检出率分别为23.1%和43.1%，联合检测的阳性检出率69.2%。结直肠癌组ITGA4和SFRP2基因启动子甲基化阳性检出率明显高于结直肠腺瘤组（P<0.001，P=0.001）和健康对照组（P均<0.001），差异有统计学意义。而结直肠癌组术前ITGA4和SFRP2基因启动子甲基化水平与术后是否出现肿瘤复发有关；采用Kaplan-Meier法绘制无复发生存曲线，结果显示ITGA4和SFRP2基因启动子甲基化阳性患者组无复发生存率均明显低于阴性患者组（P=0.0002，P= 0.007）。其他因素均校正的情况下，经COX比例风险回归模型多因素分析，结果显示，术前ITGA4和SFRP2基因启动子甲基化和肿瘤分化程度与结直肠癌的复发有关（P=0.01，P=0.03），可以作为结直肠癌复发的独立危险因素。结论 基于粪便ITGA4和SFRP2基因甲基化单独检测的阳性检出率较低，而联合检测可以提高结直肠癌的阳性检出率，弥补了单独检测的不足。ITGA4 和SFRP2基因启动子甲基化和肿瘤分化程度可以作为结直肠癌复发的独立危险因素。

• 基于系统仿真的数字乳腺层析成像性能分析

  邓耀宏, 朱曼曼, 李 穗, 王永波, 高 杨, 马建华

  目的 基于系统仿真的数字乳腺层析成像（DBT）进行性能分析研究。方法 基于临床DBT系统获取不同辐射剂量下物理体模和常规剂量水平下临床患者的原始测量数据，并进行低剂量仿真和使用3种重建算法进行重建，即Feldkamp-Davis-Kress（FDK）算法、联合代数重建技术（SART）、具有全变分约束的自适应最速下降凸集投影（ASDPOCS-TV）算法。采用信噪比（SNR），峰值信噪比（PSNR），噪声功率谱（NPS），伪影扩散函数（ASF）以及 ASF的全宽半高值（FWHM）指标对辐射剂量水平和重建算法两因素对图像质量的影响进行统计对比分析。结果 低剂量DBT仿真策略的有效性经评估实验得以保证；在合适的剂量水平范围内，增加剂量可促进减少高频噪声成分和显著提高信噪比（P<0.05），当曝光剂量低于40 mAs，不同剂量水平下的图像具有相似表征；不同重建算法在不同解剖结构区域处的表现性能有差异，ASDPOCS-TV算法的结果包含更少的层间伪影和更轻微的噪声，优于SART 算法和FDK算法。结论 辐射剂量和重建算法的选择对DBT成像质量有显著影响，应当平衡各影响因素、整体图像质量、临床诊断需求之间的关系，以达到临床任务中最优成像性能的目标。

• Mn2+掺杂普鲁士蓝纳米颗粒T1-T2双模磁共振成像和光热治疗的体外研究

  何庚翰, 陶 泉, 刘 闯, 张 迪, 周宇平, 刘瑞源

  目的 制备一种Mn2+掺杂普鲁士蓝纳米颗粒，用于检测体外T1-T2双模磁共振成像和光热治疗效果。方法 采用微乳液法，以二氯化锰、氯化亚铁和铁氰化钾为原料制备Mn2+掺杂普鲁士蓝纳米颗粒；观察纳米颗粒的体外T1-T2双模磁共振成像性能；考察808 nm 激光照射后纳米颗粒的升温效果；通过CCK-8法和AM/PI活死细胞染色法观察体外光热治疗效果。结果 成功制备了Mn2+掺杂普鲁士蓝纳米颗粒，粒径为39.46±0.42 nm，电位为-25.9±1.2 mV，粒径均匀，分散性好；808 nm激光照射10 min 后，纳米颗粒分散系可以升温至 90 ℃。由 7T 磁共振测得的数据拟合获得 r1 值为 0.68（mmol/L）-1s-1，r2 值为 3.65（mmol/L）-1s-1，具有良好的T1-T2双模磁共振成像效果；在808 nm激光照射下，可显著降低细胞存活率（P<0.05）；CCK-8 法和AM/PI活死细胞染色法的结果均显示纳米颗粒对HepG2细胞具有良好的光热治疗效果。结论 成功制备了粒径均一的Mn2+掺杂普鲁士蓝纳米颗粒，该纳米颗粒的T1-T2双模磁共振成像效果和体外光热治疗效果良好，且无明显细胞毒性。

• 胸部数字合成体层成像时的呼吸信号提取

  李 仟, 刘 佳, 莫 英, 于佳弘, 张昆鹏, 张 华

  目的 利用一次模型分析在胸部数字合成体层成像（CTS）扫描过程中的扫描对象的呼吸状态。方法 从CTS投影图像中提取横膈肌的运动产生呼吸信号。通过动态规划获取的横膈肌运动轨迹进行模型拟合，根据拟合数据，分离出横膈膜的基底运动曲线及呼吸信号曲线。采用物理体模数据、数字Xcat体模数据和临床患者数据进行实验，验证本文方法的性能。结果 物理体模数据的实验中提取出的横膈膜的运动轨迹是线性的；3组不同类型的呼吸状态下的临床数据实验中都能有效的提取出呼吸信号；Xcat仿真实验中所提取的呼吸信号与原设计的呼吸信号之间的相关系数为0.9797。结论 利用一次模型能够实时地有效获取病人的呼吸运动信息。临床上医生能实时获取病人的呼吸信息，便于医生做出是否要重新扫描的判断。

• 新型抗菌肽KR-1的设计、筛选及抗菌活性评价

  何佳宁, 梁东生, 梁悦娥, 左诗雅, 赵望泓

  目的 构建高活性、低毒性的新型抗菌肽，对其抗变异链球菌及其他口腔致病菌的活性进行评价，探讨其在防治龋病中的潜在应用价值。方法 以天然抗菌肽Histatins5的类似物Dhvar4为模版合成新型抗菌肽KR-1、KR-2。通过所设计抗菌肽对变异链球菌的最小抑菌浓度（MIC）实验，兔血红细胞溶血试验以及CCK-8法，筛选出高活性、低毒性的目标抗菌肽；使用96孔板培养变异链球菌生物膜，分为实验组（用浓度梯度为0.6×、0.8×、1×、2×MICs的KR-1进行处理）与阳性对照组（用浓度梯度为0.6×、0.8×、1×、2×MICs的洗必泰进行处理），通过结晶紫染色定量法观察生物膜量的改变；使用10×MIC浓度KR-1作用于变异链球菌生物膜后通过激光共聚焦显微镜观察结构的改变；通过KR-1作用口腔链球菌后杀菌所需的时间探讨目标抗菌肽对口腔链球菌的抗菌效率。结果 实验测得KR-1及KR-2的MIC分别为3.2 μmol/L和12.8 μmol/L，有效浓度下，兔血红细胞溶血率分别为0.35%和48.8%，24 h牙龈成纤维细胞存活率分别为72.96 %和21.94 %，将活性较高、生物相容性较好的KR-1作为目标抗菌肽；经结晶紫染色后测定KR-1的50%生物膜最小抑制浓度（MBIC50）低于1.92 μmol/L，且浓度为2.56 μmol/L时效果优于阳性对照组洗必泰（P=0.001），共聚焦显微镜下观察可见经KR-1处理后生物膜结构疏松；KR-1在5 min内可杀灭约90%细菌。结论 KR-1抗菌肽具有较强的抗菌活性和较低的毒性，且有良好的抗变异链球菌生物膜作用。

• LncRNA SNHG3对宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移及侵袭的影响

  孙子久, 胡 静, 胡 凯, 唐 敏, 孙恃雷, 方玉婷, 余伙梅, 张 彦

  目的 探究长链非编码RNA（lncRNA）小核仁RNA宿主基因3（SNHG3）对人宫颈癌细胞系SiHa增殖、迁移及侵袭的影响。方法 利用 GEO 数据库芯片分析 lncRNA SNHG3 在正常宫颈组织和宫颈癌样本中的表达；通过实时定量 PCR 检测LncRNA SNHG3、上皮-间质转化标志物 N-cadherin、Snail、Vimentin 和 E-cadherin 基因表达水平；通过 Western blot 检测 N-cadherin、Snail、Vimentin和E-cadherin蛋白表达水平；在SiHa细胞中转染siRNA干扰片段来敲低lncRNA SNHG3，并采用qRT-PCR验证转染效率；通过CCK8实验检测细胞增殖能力，划痕愈合实验检测细胞横向迁移能力，Transwell小室实验检测细胞纵向迁移及侵袭能力。结果 LncRNA SNHG3在宫颈癌组织及细胞系中高表达；敲低lncRNA SNHG3后，明显抑制SiHa细胞的增殖能力（P<0.001）、迁移能力（P<0.01）和侵袭能力（P<0.001）；qRT-PCR和Western blot结果显示敲低lncRNA SNHG3可下调N-cadherin、Snail和Vimentin表达水平（P<0.001），同时上调E-cadherin表达水平（P<0.001）。结论 LncRNA SNHG3可通过激活EMT通路促进宫颈癌细胞SiHa增殖、迁移及侵袭能力。

• 獐牙菜苦苷可减轻糖尿病大鼠的周围神经痛：基于抑制NOXS/ROS/NLRP3通路实验

  王 保, 姚嘉茵, 尧新华, 劳俊铭, 刘 栋, 陈陈燕, 鲁 义

  目的 基于NOXS/ROS/NLRP3信号通路探讨獐牙菜苦苷对糖尿病周围神经痛（DPN）大鼠的治疗作用及分子机制。方法 采用链脲佐菌素(STZ)法构建大鼠模型，造模成功后第1、7、14天分别按大鼠体质量腹腔注射干预制剂。将32只SD大鼠随机分为4组：空白对照组、DPN模型组、獐牙菜苦苷治疗组、NOXS抑制剂治疗组。空白对照组：给予10 mL/kg生理盐水；DPN模型组：给予10 mL/kg生理盐水；獐牙菜苦苷治疗组：给予5 mg/kg獐牙菜苦苷；NOXS抑制剂治疗组：给予10 mL/kg二苯基氯化碘盐。在给药完毕30 min后，对各组大鼠进行触觉过敏试验，采用ELISA检测NOXS/ROS/NLRP3以及炎性因子表达水平，采用Western blot方法检测各组大鼠脊髓组织的NOXS/ROS/NLRP3表达水平。结果 与空白对照组比较，DPN模型组大鼠在造模后出现痛觉过敏（P<0.001），促炎因子TNF-α以及IL-6表达升高（P<0.001），抑炎因子TGF-β表达下降（P<0.001），NOXS/ROS/NLRP3通路各因子表达升高（P<0.001）。獐牙菜苦苷干预后有效减轻触觉过敏（P<0.001），且抑制促炎因子TNF-α（P=0.03）以 及IL-6（P=0.002）的表达，促进抑炎因子TGF-β的表达（P=0.04）；并且下调NOXS（P<0.001）、ROS（P0.05）。结论 獐牙菜苦苷有效缓解触觉过敏，治疗DPN，通过抑制NOXs/ROS/NLRP3信号通路表达，纠正DPN炎性因子失衡是其分子机制之一。

• JNET Type 2B在结直肠肿瘤内镜诊断中的应用价值

  刘 明, 谢佳宜, 谭川川, 阮晓惠, 王 震, 罗晓蓓, 林建姣, 项 立, 李爱民, 韩泽龙, 刘思德

  目的 探讨影响JNET 2B分型预测病变组织病理学类型准确性的因素。方法 收集2018年7月~2021年4月南方医科大学南方医院行窄带光成像放大内镜检查诊断为JNET 2B型的261 例结直肠病变资料，分析影响JNET 2B型诊断病变病理性质的因素，包括病灶形态、大小、位置及PP分型。结果 纳入的261个病变包括低级别上皮内瘤变91 例（34.9%），高级别上皮内瘤变132例（50.6%），黏膜下浅层浸润癌13 例（5.0%），黏膜下深层浸润癌25 例（9.6%）。JNET 2B病理预测符合率为55.6%（145/261）。病灶的形态学分类及大小与JNET 2B分型预测病变组织病理学类型准确性的差异有统计学意义（P<0.001），PP分型对JNET 2B预测病变组织病理学类型准确性的差异具有统计学意义（P<0.001）。结论 结直肠病灶的形态学分类和病灶大小会对JNET 2B分型预测病变组织病理学类型准确性产生影响，联合JNET分型和PP分型能提高病变病理组织学预测的准确性。

• 维持性血液透析患者甲状旁腺切除术后影响移植组织存活的危险因素

  龚 薇, 谢 宇, 林雅琪, 孟子璐, 王玉栋

  目的 探讨维持性血液透析（MHD）合并继发性甲状旁腺功能亢进（SHPT）患者接受甲状旁腺切除联合甲状旁腺部分组织移植在自体胸锁乳突肌区（TPTX+AT）后甲状旁腺移植的部位、方式以及甲状旁腺组织存活影响因素。方法 回顾性分析2010年1月~2020年2月在广东药科大学附属第一医院因SHPT接受TPTX+AT的MHD患者的临床资料。收集入选患者的一般临床资料和围手术期iPTH、血磷、血钙、ALP，血红蛋白（Hb）指标结果。根据术后2周双前臂及甲状旁腺素（iPTH）比值>1.5与否分为成活组与未成活组。比较两组患者的一般临床资料和围手术期相关指标的差异，logistics回归分析影响患者术后甲状旁腺移植存活的危险因素。结果 87例患者纳入本研究，术后甲状旁腺移植的存活率为78.16%。甲状旁腺移植存活组与非存活组术后1周、1月、2月、3月、6月、12月的血钙、血磷、iPTH、碱性磷酸酶（ALP）较术前明显下降(P<0.001)；血红蛋白较术前明显升高（P=0.007）。多元线性回归分析ALP是影响甲状旁腺移植存活的独立危险因素[OR=1.003，95%CI（1.001，1.005），P=0.004]。结论 TPTX+AT是治疗SHPT的一种安全有效的方法，术前血ALP较高的患者术后甲状旁腺组织不容易存活。

• 褐藻素通过线粒体通路和氧化应激诱导前列腺癌细胞凋亡

  李国平, 常秀亭, 罗小菊, 赵映淑, 王为服, 康新立

  目的 旨在探讨褐藻素（Fx）对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 采用相应的试剂盒检测PC-3细胞活力和细胞凋亡。荧光探针染色检测PC-3细胞中的线粒体膜电位、线粒体形态和线粒体超氧化物。同时采用相应的试剂盒检测PC-3细胞中三磷酸腺苷、过氧化氢、丙二醛和超氧化物的含量以及总抗氧化能力。Western blot方法检测PC-3细胞中Bcl-2、Bax和细胞色素c蛋白的表达。采用相应的试剂盒检测PC-3细胞中caspase-9和caspase-3/7活性。结果 Fx呈时间和剂量依赖性地抑制PC-3细胞活力，呈剂量依赖性地诱导PC-3细胞凋亡（P<0.05）。经Fx处理后，PC-3细胞中的线粒体膜电位水平降低，线粒体碎片化，线粒体超氧化物水平升高（P<0.05），且Fx的作用效果成剂量依赖性。Fx剂量依赖性地降低PC-3细胞中的三磷酸腺苷水平和总抗氧化能力，剂量依赖性地增加过氧化氢、丙二醛和超氧化物的含量（P<0.05）。经Fx处理后，PC-3细胞中Bax和细胞质中细胞色素c的水平呈剂量依赖性增加，PC-3细胞中Bcl-2和线粒体中细胞色素c的水平呈剂量依赖性降低（P<0.05）。结论 Fx通过引发线粒体功能障碍导致氧化应激和激活线粒体介导的凋亡信号通路诱导PC-3细胞凋亡，提示Fx有望成为治疗前列腺癌的潜在药物。

• DNA折纸在纳米生物医学中的应用

  王建华, 张 萍, 夏青林, 魏余辉, 陈文勇, 王 静, 李鹏程, 李 宾, 周星飞

  DNA纳米技术是一种人工设计并自组装形成复杂核酸结构的技术，DNA折纸技术的出现使构建具有不同尺度二维和三维复杂纳米结构简便易行，是结构DNA纳米技术发展的一个里程碑。由于DNA折纸具有结构可控、可精确寻址、易于化学修饰和生物相容性好等特点，近年来在纳米生物医学领域获得了广泛关注并取得巨大进展。本文对DNA折纸在以下3个方面的应用做了简述：在生物分子检测方面介绍了癌细胞识别、单分子水平直读检测和抗原抗体相互作用；在靶向给药方面介绍了红霉素体内运输和纳米机器人药物运输；最后，在生物材料方面主要介绍了折纸作为抗凝剂抑制凝血酶的活性产生、折纸金属化以及折纸纳米片药物的合成等方面的应用。