南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2019年第09期

• 糖化血红蛋白和病程对2 型糖尿病胰岛β细胞功能的影响

  何银辉,徐海燕,付麒,杨涛

  目的比较不同糖化血红蛋白（HbA1c）水平、不同病程的2型糖尿病患者胰岛β细胞功能的差异。方法2014年12月~2016年4月于南京医科大学第一附属医院内分泌科住院的803例2型糖尿病患者作为研究对象，测定人体参数、生化指标、胰岛自身抗体，并行馒头餐试验评估患者的胰岛β细胞功能及胰岛素抵抗。结果二者线性相关分析发现2 型糖尿病患者HbA1c 与HOMA2-IR、HOMA2-%β、DI30、DI180 均呈负相关（P=0.000），病程与HOMA2-IR、HOMA2-%β、DI180 均呈负相关（P<0.05）。将患者依据HbA1c水平分为3组，3组间HOMA2-IR、HOMA2-%β、DI30和DI180均有统计学差异（P=0.000），低HbA1c水平组（HbA1c≤7.8%）患者HOMA2-%β、DI30、DI180 明显高于其他2 组，而高HbA1c 水平组（HbA1c>9.8%）HOMA2-%β明显下降。将患者按病程分为3组，协方差分析显示3组间HOMA2-IR、HOMA2-%β、DI30、DI180均有统计学差异（P=0.000），随着病程延长，DI30、DI180逐步下降。多元线性回归分析显示，HbA1c、糖尿病病程和体质量指数是2型糖尿病胰岛β细胞功能的独立影响因素。结论随着HbA1c水平的升高或病程的延长，2型糖尿病患者胰岛β细胞分泌功能均逐渐下降。HbA1c明显升高时，患者胰岛β细胞分泌功能明显下降，而病程明显延长时，患者胰岛β细胞分泌功能并未急速下降。

• 双歧杆菌改变肿瘤组织声学特性对高强度聚焦超声消融效果的影响

  徐蝶,罗勇,高悬,熊洁,蒋冰蕾,汪瑶台,唐瑜,蒋富杰,王璐,李桦楠,乔海,邹建中

  目的探讨双歧杆菌对裸鼠皮下肿瘤组织声学特性变化及高强度聚焦超声（HIFU）消融的影响。方法培养双歧杆菌，建立人乳腺癌（MDA-MB-231）荷瘤鼠模型。将40只荷瘤裸鼠随机分为2组，即实验组（n=20）和对照组（n=20）。实验组连续3 d尾静脉注射双歧杆菌悬液（200 μL、浓度4×108 cfu/mL），对照组连续3 d注射磷酸盐缓冲液（PBS，200 μL）。注射前、第1次注射后第3天、第7天，采用剪切波弹性成像评估肿瘤组织硬度变化；注射后第7天（从第1次注射算起）两组均处死10只荷瘤鼠，剥离肿瘤，插入式脉冲取代法测量肿瘤组织声速和声衰减；Masson染色观察肿瘤内胶原纤维改变、免疫组化行血小板-内皮细胞粘附分子（PECAM-1/CD31）标记，评估组织内新生血管变化。两组各剩余的10只荷瘤鼠进行HIFU消融，通过对比辐照前/后灰度变化值、凝固性坏死体积、能效因子和病理检查，评价消融效果。结果组织声学特性：实验组中胶原纤维形态粗大、排列致密，新生血管含量较少呈条索状或点状；对照组肿瘤内胶原纤维形态细小、排列疏松，新生血管含量较多呈长条形或类圆形。双歧杆菌定植于肿瘤内第7天，实验组肿瘤硬度大于对照组（P=0.01）。实验组超声波在肿瘤中的传播速度大于对照组（P=0.001）、声衰减大于对照组（P=0.000）。HIFU消融效果：实验组灰度变化值平均值大于对照组（P=0.0006），凝固性坏死体积大于对照组（P=0.0045），能效因子小于对照组（P=0.0134）。结论通过静脉注射双歧杆菌，可改变肿瘤组织胶原纤维含量、声传播速度、声衰减，并减低HIFU辐照的能效因子，提高HIFU辐照效率。

• 采用CRISPR/Cas9 技术构建新品系HBeAg转基因小鼠

  郭睿,田怡,金雪媛,陈海燕,王贵虎,黄小钟,李步荣,李宗芳,杨军

  目的培育一种HBeAg转基因小鼠新品系。方法克隆乙型肝炎病毒HBeAg基因；采用CRISPR/Cas9技术，通过同源重组的方式分别在Rosa26基因位点定点插入pliver-HBeAg表达框，获得含有HBeAg基因的表达载体pliver-HBeAg，经酶切得到含有HBeAg基因的线性DNA 片段，将Cas9 mRNA、gRNA和donor vector显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，再将其移植入C57BL/6J雌性代孕小鼠子宫，获得F0代建系小鼠；采用长片段PCR对出生小鼠进行鉴定，共获得HBeAg基因正确同源重组的F0代建系小鼠；F0代阳性小鼠与野生型C57BL/6J小鼠交配，繁育获得F1代小鼠，经PCR鉴定及测序确认阳性F1代小鼠；将携带HBeAg基因的F1代转基因小鼠再次回交，对子代小鼠进行PCR基因型鉴定，直至获得纯合子子代转基因小鼠；采用全自动化学发光免疫分析仪、胶体金法和免疫组织化学方法分别检测HBeAg转基因鼠血浆和肝组织中HBeAg和HBeAb的表达。结果采用CRISPR/Cas9技术共获得56只F0代小鼠，其中2只为正确同源重组的F0代小鼠；F1代小鼠中6只阳性F1代小鼠。截至目前，共获得22只F2代纯合子和29只杂合子HBeAg转基因小鼠。所有HBeAg转基因小鼠外周血中均可检出高浓度的HBeAg蛋白，但未检出HBeAb的表达。而且免疫组化结果显示HBeAg转基因小鼠肝脏肝细胞中可特异性表达HBeAg蛋白。结论采用CRISPR/Cas9技术成功构建了能在肝脏肝细胞中稳定表达HBeAg蛋白且对HBeAg免疫耐受的新品系HBeAg转基因小鼠，为HBV的研究提供了新的实验动物模型。

• 基于fMRI的近似熵和ReHo在肠易激综合征检测中的敏感性和有效性比较

  南姣芬,张亮亮,郑倩,张明慧,卢振泰

  目的比较基于功能磁共振成像（fMRI）数据的熵分析方法和热门的局部一致性（ReHo）方法在检测肠易激综合征患者脑活动状态的有效性和敏感性。方法本研究基于54例肠易激综合征（IBS）患者与54例健康被试的静息态fMRI数据，计算所有被试体素水平上的近似熵（ApEn）。然后采用双样本t检验进行特征筛选，并用支持向量机方法对两组被试进行分类判别，得到不同特征数目下的分类性能，并将该结果与ReHo获得的特征分类性能进行对比。结果IBS 患者与健康对照组ReHo在左侧三角部额下回、右侧顶下缘角回、左侧颞下回、左侧颞中回、左侧舌回、双侧枕中回和双侧枕上回区域差异具有统计学意义（P<0.05），ApEn在双侧中央后回、右侧中央前回、右侧颞下回、双侧颞中回和左侧枕上回区域差异存在统计学意义（P<0.05）。而且，无论特征数目如何变化，以ApEn为特征的识别效果均优于以ReHo为特征的识别效果。以ApEn为特征得到的分类正确率、特异性和敏感性可高达93.5%、90.7%与96.2%，而以ReHo为特征得到的分类正确率、特异性和敏感性则高达86.1%、85.1%与87.0%。结论与ReHo方法相比，基于fMRI的熵分析方法在IBS的识别和诊断中具有更高的敏感性和有效性。

• Necroptosis与细胞凋亡在激素诱导成骨细胞死亡中的相互作用

  冯敏,张睿锐,杨佩,王坤正,强辉

  目的探讨Necroptosis与凋亡在激素诱导成骨细胞死亡中的相互作用。方法向MC3T3-E1细胞内添加浓度为10-6 mol/L的地塞米松诱导细胞死亡，随后在本组细胞中分别添加凋亡抑制剂z-VAD-fmk（40 μmol/L）和Necroptosis抑制剂Necrostatin-1（40 μmol/L），作用2 h 后，AV/PI 双染观察细胞死亡的变化情况，并对细胞进行Hoechst 染色计算凋亡率，用透射电镜观察细胞超微结构的改变，测定细胞线粒体膜电位和ATP水平，对Necroptosis 和凋亡通路的相关蛋白进行Western blot 检测。结果10-6 mol/L地塞米松可以诱导MC3T3-E1细胞同时发生凋亡和Necroptosis。AV/PI双染的结果发现，当凋亡受到抑制后，更多的细胞发生坏死（P<0.01），而透射电镜结果也证实细胞发生了坏死样改变，Hoechst 染色结果发现，凋亡细胞数明显减少（P<0.01）；当使用Necroptosis特异性抑制剂Necrostatin-1将这种作用阻断后，包括Hoechst染色和AV/PI双染的结果都证实凋亡的细胞数明显增多（P<0.01），同时，在这一作用过程中伴随着MMP及ATP的明显变化（P<0.01）。结论在激素诱导成骨细胞死亡过程中，Necroptosis和凋亡在一定条件下可以相互转化，这一转化过程中伴随着线粒体功能的明显改变。

• 小鼠胫骨不脱钙树脂包埋法的改良与应用

  邓仲豪,林锦德,聊哲霆,陈宇璠,吴德胜,冯舒皓,陈纳淳,赵宝红,赵亮

  目的改良树脂包埋复数小鼠不脱钙胫骨的方法，提高树脂包埋法的效率及稳定性，探索减少树脂切片脱片的方法。方法取15只B6小鼠共30胫骨，标记、固定、脱水、渗透后将其包埋于直径4 mm的圆柱型树脂块中，胫骨近端1/4处切断后再对剩余的3/4胫骨包埋。在包埋时将5个胫骨切面贴于平整树脂板并包埋于同一树脂块中。分别在包埋液制备、切片、染色3个阶段随机将样本分为对照组及实验组，分别在3个改良组中采用以下方案处理，包括：向包埋液冲入CO2；在切面上涂抹包埋液；在脱塑水化前以95 ℃加热切片15 min。分析树脂凝固时间、切片脱片率及骨形成、成骨细胞定量指标。结果成功包埋6个树脂块，每个树脂块内有5个胫骨，胫骨横截面于同一平面上，树脂块凝固完全，适于切片。向包埋液冲入CO2可以缩短树脂块凝固时间，提高凝固成功率。在切面上涂抹包埋液可以显著降低切片时的脱片率（P<0.05）且不影响骨标记的荧光分析（P>0.05）。在脱塑前加热切片可以显著降低脱塑水化后的脱片率（P<0.05），且不影响成骨细胞定量分析（P>0.05）。结论复数小鼠不脱钙胫骨的树脂包埋改良法有效可行，这可能是一种理想的不脱钙骨组织研究方法。

• 连续应用特立帕肽对正常和去势小鼠骨代谢的影响

  李明翰,何友华,童国军,杨德鸿

  目的探讨连续泵入特立帕肽（TPTD）对去势和正常小鼠骨代谢的影响，为研究TPTD及其相关肽破骨作用的动物模型选择提供实验依据。方法6周龄雌性C57BL小鼠24只，分别接受去势（OVX）或者假手术（SHAM），1周后用微量泵泵入TPTD或者等量的溶剂（VEH），分成SHAM-VEH，SHAM-TPTD，OVX-VEH，OVX-TPTD四组。2周后，获取胫骨组织经显微CT测量胫骨和皮质骨相关参数。并对胫骨组织行进行组织切片HE染色和TRAP染色，统计破骨细胞数目及生长板厚度。测量小鼠血清中的钙离子浓度。取部分颅骨原代成骨细胞加雌二醇（E2）和TPTD刺激培养48 h后提取细胞总蛋白，分析β-catenin和RANKL蛋白的表达。结果OVX小鼠的骨小梁骨量较SHAM小鼠的骨量显著减少（P<0.05）。TPTD泵入显著减低SHAM小鼠松质骨骨量股骨中段皮质骨面积，与此相反，TPTD泵入增加OVX小鼠松质骨骨量，不改变皮质骨面积。TRAP染色结果发现，OVX较SHAM小鼠胫骨骨松质破骨细胞明显增多，SHAM-TPTD较SHAM小鼠增多（P<0.05）。细胞学蛋白分析结果显示，E2 和TPTD持续刺激48 h后，β-catenin表达量较TPTD单纯刺激降低，RANKL表达相对升高。结论TPTD的连续应用促进正常小鼠的骨吸收，但对去势小鼠不具有明显的促骨吸收作用，去势小鼠不适用于研究TPTD及相关肽的促破骨作用。

• 腺苷酸环化酶相关蛋白2 在胃癌组织中高表达并与肿瘤进展密切相关

  葛思堂,王姗,项武军,王利利,朱玉可,朱翔,王迅,左芦根,姜从桥,李仕青,刘牧林

  目的探索腺苷酸环化酶相关蛋白2（CAP2）在胃癌组织中的表达情况，并明确其与病理组织学和远期预后的关系。方法纳入105例2010年1月~2013年10月在我院接受胃癌根治术的患者，采用免疫组化法评估CAP2的表达在胃癌组织和癌旁组织中的差异，以目标蛋白相对积分光密度值量化免疫组化结果，并进一步评估CAP2与病理组织学参数的关系。以CAP2相对表达量的中位数（3.5）为界将患者分为CAP2低表达组（n=52）和高表达组（n=53），并进一步采用Cox回归模型分析CAP2表达量是否影响胃癌患者术后5年生存率。采用ROC曲线分析CPA2表达量是否对胃癌术后远期生存期具有预测价值。结果免疫组化分析显示CAP2及Ki67表达量均高于癌旁组织（P<0.01）；相关性分析显示胃癌组织CAP2表达量与Ki67、外周血CEA及CA19-9间均存在正相关关系（P<0.01）。CAP2高表达组患者CEA≥5 μg/L、CA19-9≥37 kU/L、病理分级为G3~G4、T分期为3~4期及N分期为2~3期的比例高于CAP2低表达组（P<0.05）。K-M生存分析显示，CAP2高表达组患者术后5年生存率低于低表达组（P<0.01）。经单因素及Cox多元回归模型分析得出，CAP2高表达、CEA≥5 μg/L、CA19-9≥37 kU/L及病理分级为G3~G4为影响胃癌根治术后5 年生存期的独立危险因素。此外，以CAP2 相对表达量3.45 为截点值，预判术后5 年死亡的敏感性为70.15%，特异性为71.05%，曲线下面积为0.779（P<0.01）。结论CAP2在胃癌组织中高表达并与肿瘤进展密切相关，是胃癌根治术后5年生存率的独立危险因素，对预后评估具有一定临床价值。

• CEP55 可能是治疗成熟阻滞型非梗阻无精子症的分子靶标

  朱永通,刘君婷,张为青,吴嘉敏,李文锋,李惠溪,褚庆军,罗琛

  目的应用siRNA技术沉默CEP55基因表达对小鼠精原细胞增殖的影响。方法选取2017年1月1日~12月31日在南方医科大学南方医院妇产科生殖中心就诊的无精子症男性不育症患者，根据其睾丸病理切片诊断分为成熟阻滞组和生精正常组各3 名。应用核素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术，发现两组患者的睾丸组织表达差异蛋白质CEP55 蛋白。设计并合成CEP55 基因特异性的siRNA 序列，转染小鼠精原细胞，分为空白对照组、阴性对照组及siRNA 转染组，应用Western blot 和qPCR检测在siRNA 对CEP55的影响，CCK8实验观察siRNA抑制CEP55后对小鼠精原细胞增殖的影响。结果通过iTRAQ核素标记结合LC/MS/MS分析，共鉴定出差异蛋白共两百多个，CEP55在基因表达水平差异最显著。Western blot结果显示，siRNA转染组CEP55蛋白的相对表达水平明显低于空白对照组和阴性对照组（P<0.05）。qPCR结果显示，siRNA转染组CEP55的mRNA表达量低于空白对照组和阴性对照组（P<0.05）。CCK8实验发现siRNA干扰CEP55表达后，小鼠精原细胞生长明显受到抑制（P<0.05）。结论CEP55可能在精子发生过程中起到关键作用，CEP55可能成为治疗成熟阻滞型非梗阻无精子症的分子靶标。

• 人卵巢癌SKOV3 细胞筛选获得的肿瘤干细胞样细胞在血管生成拟态形成中的作用

  梁军,邢慧敏,吴小华,张蕾,赵郡

  目的探讨卵巢癌SKOV3细胞中分离肿瘤干细胞样细胞的生物学特性及其在血管生成拟态（VM）形成中的作用。方法采用无血清悬浮培养法对SKOV3细胞培养传代至第7代；流式细胞术测定亲代SKOV3细胞及第1、3、5、7代分选细胞CD133、CD117阳性细胞比例；平板克隆形成和小鼠体内成瘤实验鉴定分选细胞（第7代，下同）生物学特性；三维立体培养比较分选细胞与亲代SKOV3细胞形成VM的能力。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)方法及Western blot法检测分选细胞与亲代SKOV3细胞的基质金属蛋白酶2，9的表达水平。结果SKOV3部分细胞能在无血清培养基中形成悬浮生长的细胞球，可连续传代至第7代；流式细胞术结果显示CD133、CD117阳性细胞比例随传代递增。分选细胞克隆形成率高于亲代SKOV3细胞（P<0.01）。小鼠体内成瘤实验显示第7代悬浮细胞的成瘤率（6/6）明显高于亲代细胞的成瘤率（0/6）。三维立体培养发现分选细胞比亲代SKOV3细胞VM形成能力强。第7代分选细胞基质金属蛋白酶2，9基因和蛋白表达较SKOV3细胞均增高，差异均具有统计学意义（P<0.01）。结论采用无血清悬浮培养法培养的SKOV3分选细胞具有肿瘤干细胞的生物学特性，具有较强的VM形成能力，可能在VM形成中发挥作用。

• 基于心拍的端到端心律失常分类

  邓力,傅蓉

  目的提出一种端到端的心律失常分类方法，以提高计算机对室上性异位心搏（SVEB）和室性异位心搏（VEB）的分类性能。方法首先对心电信号进行心拍分割、校正等预处理；然后通过卷积神经网络构建心律失常分类网络，最后结合新的损失函数训练分类器模型。结果利用MIT-BIH心律失常数据集验证本文分类方法的性能，其中在SVEB和VEB上的AUC分别达到了0.77和0.98。在引入前5 min片段作为局部数据的情况下，SVEB和VEB的灵敏度分别达到了78.28%和98.88%；而在引入0、50、100、150个样本作为局部数据时，SVEB和VEB的灵敏度最高分别达到82.25%和93.23%。结论本文提出的方法与现有的方法相比，有效改善了样本类别不平衡带来的消极影响，SVEB和VEB灵敏度均有一定程度的提升，为心律失常的自动分类提供了新的技术方案。

• 华蟾素对骨癌痛大鼠背根神经节细胞瞬时外向钾通道电流的影响

  朱时钰,刘丹,胡卫,杨红卫

  目的观察华蟾素对骨癌痛（CIBP）大鼠背根神经节细胞瞬时外向钾电流（IA）的影响，探讨华蟾素可能的镇痛机制。方法急性分离SD大鼠背根神经节（DRG）细胞，应用全细胞膜片钳技术记录华蟾素对骨癌痛大鼠DRG细胞IA的影响。结果骨癌痛大鼠背根神经节细胞IA电流密度减小，激活曲线向右移动，失活曲线向左移动；华蟾素能调节骨癌痛大鼠背根神经节细胞IA电流密度，并且逆转骨癌痛IA电流激活和失活曲线的改变。结论在大鼠胫骨内注入肿瘤细胞后，DRG神经元IA电流减小；华蟾素可能通过调节大鼠背根神经节细胞IA电流激活和失活特性，该作用可能与它的镇痛机制有关。

• HSP110 家族在各发育阶段小鼠睾丸、附睾中的表达及与激素调控的关系

  戎成婷,杜子伟,刘娟,吴新安

  目的研究HSP110家族在发育中的小鼠睾丸和附睾中的表达及其是否受激素调控。方法收集不同周龄（出生后14、21、28、35、42、49、70、90 d）小鼠睾丸及附睾组织，每周龄3只，应用RT-PCR检测HSP110家族成员在不同发育阶段小鼠睾丸、附睾中的基因表达水平。建立小鼠去势实验模型，应用RT-PCR检测HSP110家族基因在假手术组、去势组及去势后补充睾酮组小鼠附睾中的表达水平。结果HSP110家族成员随着发育过程的进行其基因表达水平发生变化：HSPA4、HSPA4l、HSPH1的基因在出生后不同发育阶段的小鼠睾丸中表现出先增后降，逐渐趋于平稳的趋势；HSP110家族4个成员在出生后不同发育阶段小鼠附睾中的表达也是先增后降，逐渐平稳。小鼠去势实验结果显示HSPA4和HSPA4l随着激素水平的降低其基因表达水平降低（P<0.05），补充外源性激素后其表达恢复正常。结论HSP110家族成员的基因表达水平受发育调控的影响，HSPA4和HSPA4l基因的表达受激素调控。

• Connexin43 蛋白对耐顺铂睾丸癌I-10/DDP细胞自噬的抑制作用

  苑敏,董淑英,姚言雪,门运政,毛凯锦,童旭辉

  目的探讨缝隙连接蛋白（Cx43）蛋白对耐顺铂睾丸癌I-10/DDP细胞自噬的作用。方法免疫印迹法检测Cx43蛋白在睾丸癌I-10细胞与耐顺铂睾丸癌I-10/DDP细胞中的表达水平；实验分为转染试剂对照组（Mock 组）、阴性对照组（NC组）、过表达组（mCx43 组），过表达（mCx43）Cx43 基因后，通过免疫印迹法检测Cx43 蛋白确定转染效率，自噬相关蛋白LC3 和p62 水平。mCherry-GFP-LC3B转染法和透射电镜分析Cx43基因过表达后耐顺铂睾丸癌I-10/DDP细胞自噬水平。结果与I-10细胞相比，I-10/DDP细胞中Cx43的表达量明显降低（P<0.01）；过表达Cx43基因后，与NC组相比，mCx43组中自噬相关蛋白LC3-II表达降低（P<0.01），p62表达升高（P<0.05）。使用mCherry-GFP-LC3B转染法和透射电镜观察自噬水平，与NC组相比，mCx43组中细胞自噬体数量降低。结论Cx43抑制耐顺铂睾丸癌I-10/DDP细胞自噬。

• 影像组学预测甲状腺乳头状癌中央区淋巴结转移

  王伟镇,李颖嘉

  目的探讨影像组学方法提取甲状腺乳头状癌（PTC）的纹理特征以预判颈部中央区淋巴结转移的可能性。方法前瞻性收集本院接受甲状腺细针穿刺活检证实为PTC的189例患者，常规超声检查有无中央区淋巴结转移；然后基于其PTC的超声横切面、纵切面及双切面的纹理特征，利用随机森林方法对纹理特征进行筛选并建立预测模型，预测颈部中央区淋巴结是否发生转移，并以最终手术病理结果为金标准进行比对。结果189例患者中，术前甲状腺超声检查诊断颈部中央区淋巴结转移的准确率为35%，灵敏度为28.6%，特异度为55%。影像组学分析PTC的超声横切面/纵切面/双切面预测颈部中央区淋巴结转移的准确率为66.06%／68.12%/77.69%，灵敏度为53%/46%/40%，特异度为52%/53%/51%。结论结合PTC的超声横及纵双切面纹理特征，影像组学方法预测颈部中央区淋巴结转移的准确性较单切面高，且远高于常规超声检查的准确率。

• JNK/c-Jun 信号通路通过调控细胞骨架重构参与大鼠垂体柄损毁后精氨酸加压素神经元修复

  李凯,冯展鹏,欧毅超,周明锋,彭君洁,龚浩东,武广森,刘亚伟,漆松涛

  目的探究大鼠垂体柄损毁后精氨酸加压素（AVP）神经元通过双皮质素(DCX)促进神经元骨架修复的机制。方法取32只SD大鼠，随机分为实验组（损毁后1 d组，n=4；损毁进神经元骨架恢后3 d组，n=7；损毁后7 d组，n=7；损毁后14 d组，n=7）和对照组（假手术组，n=7），经颅顶损毁垂体柄，记录尿量、饮水量和尿比重，通过免疫荧光染色比较各组视上核（SON）AVP神经元中Ⅲ型β微管蛋白（Tuj1）、DCX和caspase3表达情况，并通过蛋白质印迹法探讨其调控机制。结果垂体柄损毁后，饮水量、尿量和尿比重出现了典型的三相性尿崩症（损毁后1~2 d为第一相，术后3~5 d为第二相，6 d以后为第三相）。免疫荧光的结果提示了AVP神经元损伤后修复现象，主要表现为DCX表达在损毁后不同程度的升高。AVP神经元中DCX阳性率分别为：假手术组，（37.93±1.83）%；损毁后1 d，（44.67±1.79）%；损毁后3 d，（48.09±2.96）%；损毁后7 d，（71.34±2.18）%；损毁后14 d，（61.08±2.15）%，（P<0.01）。同时，神经元骨架蛋白Tuj1也呈现出相同时间规律，即垂体柄损毁后7 d最高[假手术组，（42.82±2.02）%；损毁后7 d，（60.70±1.28）%，P<0.01]。另一方面，神经元凋亡现象与骨架修复呈现相反的时间规律，主要表现为caspase3+DCX+双阳性细胞占DCX阳性细胞的比例逐渐下降：损毁后3 d，（66.03±3.58）%，损毁后7 d，（43.42±4.45）%，损毁后14 d，（35.11±1.73）%。通过蛋白质印迹技术，进一步研究发现，神经元损伤相关通路（JNK/c-Jun）在损毁后不同时间点出现上调，表现为：p-JNK仅在损毁后3 d时表达上调（P<0.05），c-Jun，p-c-Jun表达于损毁后3 d时表达上调（P<0.05），并于损毁后7 d时达到高峰（P<0.01），这分别与神经元凋亡与修复的时间规律相符合。结论垂体柄损毁后，JNK/c-Jun信号通路激活，一方面诱发早期AVP神经元凋亡，另一方面可能通过诱导DCX表达，促进Tuj1合成从而修复细胞骨架，保护神经元免受凋亡以及促进神经内分泌功能重建。

• 肺原位腺癌和微浸润性腺癌的影像学表现与临床病理学、分子基因特征及预后

  申磊磊,林吉兴,王柏霖,徐恒亮,赵恺,张连斌

  目的总结分析肺原位腺癌和微浸润性腺癌的影像学表现与临床病理学、分子基因特征及预后。方法回顾性纳入2014年1月~2019年3月在解放军总医院海南医院胸外科行手术切除后病理证实为肺原位腺癌（AIS）和微浸润性腺癌（MIA）患者，分析其围手术期资料，区分AIS和MIA的CT影像特点，组织病理学特征，基因突变结果及预后情况。结果共纳入73例患者，其中AIS患者25 例，MIA患者48 例，MIA组患者年龄小于AIS组（P=0.016），AIS组中有46.4%的纯磨玻璃结节（pGGOs），MIA组中有44.4% pGGOs，并在多发GGOs方面显著多于AIS组（P=0.049）。在反映边缘特征的CT影像学方面，AIS组中患者更少出现毛刺现象（P=0.041），其他影像特征未见明显差异。因AIS组患者行基因检测较少，在表皮生长因子受体（EGFR）基因突变方面两组未见明确差异，Ki-67指数在2.8%的截断点亦无统计学差异，但MIA组有更多的患者Ki-67指数>2.8%。MIA组随访时间明显短于AIS组，但均未出现复发或死亡病例。结论AIS和MIA患者在手术安全性及随访预后方面都有满意的结果，但在CT影像特点、基因突变状态及Ki-67指数上仍存在不同。

• 西藏小型猪乳牙牙体的组织结构特性

  卢婷,郑颖纯,杨海英,吴补领,熊君,黄呈,潘育桦,黎美怡,何菲,熊符

  目的探索西藏小型猪乳牙牙体及牙胚的组织病理结构特性，为牙齿相关疾病及牙再生研究奠定基础。方法通过X线拍摄西藏小型猪乳牙牙牙合系统结构，扫描电镜观察其乳牙牙釉质及牙本质超微结构，采用Micro-CT对乳牙进行扫描，Mimics软件对颌骨及牙齿进行三维重建，进一步应用Image J 软件计算灰度值及计算乳牙矿化密度值，通过HE染色了解西藏小型猪牙胚及牙髓组织结构特点。结果西藏小型猪乳牙牙冠由牙釉质、牙本质及牙髓组织构成。乳牙牙釉质和牙本质超微结构与人类乳牙较一致，牙釉质和牙本质矿化密度值分别为2.47±0.09 g/cm3和1.72±0.07 g/cm3，牙胚和牙髓组织病理结构与人类牙齿结构也较一致，乳牙牙髓组织处于未分化状态。结论西藏小型猪的乳牙解剖、超微结构、组织病理结构均与人类相似，是研究人类牙体组织疾病发病及牙再生机制理想的动物模型。

• 血清25（OH）维生素D与非酒精性脂肪肝肝脏脂肪含量的相关性

  付丽坤,崔红梅,卢坤玲,邹春燕,纪桂贤,李莉,李京龙,盛丽娜,谢长顺

  目的探讨血清25（OH）维生素D与非酒精性脂肪肝（NAFLD）肝内脂肪含量的关系。方法选取2017 年6~8 月我院健康体检及住院的NAFLD者120例，将患者分为血清25（OH）维生素D>75 nmol/L（n=25，A组），50~75 nmol/L（n=35，B组），25~50 nmol/L（n=32，C组），<25 nmol/L（n=28，D组）。采用ELISA法检测血清25（OH）维生素D浓度，应用T1WI同/反相位测定肝内脂肪含量。全部计量资料用均数±标准差表示，多组间比较采用方差分析及Spearman 相关分析，两两比较采用LSD-t 检验。P<0.05表示差异有统计学意义。结果B组（28.66±6.45）%及C组（38.74±11.47）%肝脏脂肪含量高于A组（22.79±6.10）%，但差异无统计学意义（P>0.05）。D组（54.79±5.28）%肝脏脂肪含量高于A、B、C三组，差异有统计学意义（P>0.05）。随着血清25（OH）维生素D含量减低，肝脏脂肪含量升高，呈负相关关系（P<0.05，r=-0.125）。结论血清25（OH）维生素D越低，肝脏脂肪含量越高，血清25（OH）维生素D有望成为NAFLD的预测指标。

• 术后疼痛引起老年患者术后认知功能障碍的相关机制研究进展

  陈小慧,任晓强,马亚兵,葛莉,胡钟元,阎文军

  术后认知功能障碍（POCD）与年龄、手术创伤、炎症、疼痛、麻醉等多因素作用有关，而手术创伤导致的术后疼痛可能起着重要作用。本文就术后疼痛在POCD发病中的相关机制，如神经损伤、神经重塑、应激创伤等以及如何加强老年患者POCD的预防与治疗等方面对其研究进展作一综述。总结近年来的研究进展及热点，通过评估患者的术后疼痛状态，制订合理的多模式镇痛，从而有效预防、干预POCD的发生发展，对于加强老年患者围术期脑功能的保护至关重要。