南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2021年第7期

• 长链非编码RNA Linc00638对类风湿关节炎患者炎症和氧化应激的影响

  孙艳秋, 刘 健, 忻 凌, 周 琴, 陈晓露, 丁 香, 张先恒

  目的 探究类风湿关节炎（RA）患者长链非编码RNA（lncRNA）Linc00638的表达，及其对RA滑膜成纤维细胞（FLS）炎症、氧化应激的影响。方法 收集20例正常人（健康对照组）、35例RA患者（RA组）外周血单个核细胞（PBMCs），RT-qPCR法检测Linc00638表达，并研究其与临床指标的相关性；构建Linc00638过表达质粒和小干扰RNA，转染至RA-FLS中；CCK8检测细胞活力；RT-qPCR法检测Linc00638的过表达和干扰效率。ELISA法检测细胞上清液中白介素-4（IL-4）、白介素-6（IL-6）、活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）的表达。结果 与健康对照组相比，RA患者血沉（ESR）、C反应蛋白、类风湿因子（RF）、抗环瓜氨酸肽抗体（Anti-CCP）、IgA、 C4显著升高（P10年）、ESR、RF、anti-CCP的升高，与IL-4、SOD的降低具有强关联。过表达Linc00638能够抑制细胞活力，干扰Linc00638能够提升细胞活力。过表达Linc00638组能够显著升高Linc00638、IL-4、SOD水平（P<0.05），降低IL-6、ROS表达（P<0.05）；si-Linc00638组能显著降低Linc00638、IL-4、SOD表达（P<0.05），升高IL-6、ROS表达（P<0.05）。结论 Linc00638在RA患者中低表达，可能通过调控炎症和氧化应激参与疾病进展。

• 巨噬细胞移动抑制因子介导MPP+/MPTP诱导的小胶质细胞NLRP3炎症小体的激活

  黄河灵, 高玉元, 聂 坤, 王丽娟

  目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子（MIF）/κb（NF-κB）对1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP+）/1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）激活小胶质细胞NLRP3炎症小体的影响和机制，进而对神经元的影响。方法 慢病毒MIF-shRNA感染Bv-2细 胞，敲低MIF表达。Western blot检测MPP+干预的Bv-2 NLRP3和MIF表达水平、转染病毒后细胞NLRP3、p65、caspase-1表达水平及细胞核、浆蛋白p65表达水平。ELISA检测细胞培养上清液IL-1β、IL-18表达水平。将细胞培养上清液作为条件培养基培养MN9D细胞，Western blot检测TH蛋白表达水平。C57BL/6小鼠腹腔注射MPTP构建PD小鼠模型，向中脑黑质致密部立体定位注射腺相关病毒MIF-shRNA（AAV-MIF-shRNA）敲低MIF表达。对小鼠进行旷场实验、爬杆实验、悬挂实验行为学评估，组织免疫组化检测小鼠多巴胺能神经元细胞数目和小胶质细胞活化情况，Western blot 检测小鼠黑质 MIF、NLRP3及TH表达情况。结果 感染病毒的细胞MIF mRNA（P<0.001）和MIF蛋白（P=0.014）明显降低。Western blot显示，0.2 mmol MPP+使Bv-2细胞NLRP3（P=0.012）和MIF（P=0.019）表达增高。与MPP组比较，MIF-shRNA组NLRP3（P=0.042） 和caspase-1（P=0.003）表达减少，细胞总蛋白中p65表达没有差异（P=0.978）。ELISA检测细胞上清液发现MIF-shRNA组较MPP组IL-1β（P<0.001）、IL-18（P=0.002）水平降低。与MPP组比较，MIF-shRNA组核蛋白p65表达降低（P=0.016），浆蛋白p65表达升高（P<0.001）。相较于MPP+的条件培养基，MN9D细胞在MIF-shRNA条件培养基中TH（P=0.01）表达增加。与MPTP 组比较，注射 MIF-shRNA 的小鼠爬杆实验（P=0.024）和旷场实验（P=0.026）评分显著降低，悬挂实验评分显著升高（P=0.001）。组织免疫组化结果显示，相较于MPTP组，AAV-MIF-shRNA组小鼠TH阳性神经元细胞数量增多（P=0.004），小胶质细胞数量减少（P=0.049）。MIF（P=0.033）、NLRP3表达减少（P=0.045），TH蛋白明显增多（P=0.043）。结论 抑制MIF表达可以减少MPP+/MPTP干预所引起的小胶质细胞NLRP3炎症小体表达和炎症因子释放，减轻小胶质细胞激活，减轻炎症反应，改善MPTP引起的黑质多巴胺能神经元损伤，在帕金森病神经炎症方面具有保护作用。

• 抑制线粒体活性氧自由基可减轻高糖诱导的心肌细胞焦亡和铁死亡

  王佳慧, 梁 欢, 方 典, 黄毓慧, 苗雅琼, 于 影, 高 琴

  目的 探讨抑制线粒体氧化应激和炎症小体减轻高糖诱导的H9C2心肌细胞焦亡和铁死亡的作用，分析线粒体活性氧自由基（ROS）和炎症小体之间可能的上下游关系。方法 将H9C2心肌细胞按照随机数字表法随机分为5组。正常对照组（CON）：含25 mmol/L浓度葡萄糖的DMEM完全培养基；高糖损伤组（HG）：含35 mmol/L浓度的高糖完全培养基；高糖+线粒体抗氧化剂Mitoquinone（MitoQ）组（HG+MitoQ）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为0.5 μmol/mL的MitoQ；高糖+ NLRP3抑制剂MCC950组（HG+MCC950）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为1 μmol/mL的MCC950；高糖组+MCC950+线粒体电子传递抑制剂Rotenone（ROT）组（HG+MCC950+ROT）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为1 μmol/mL的MCC950和0.5 μmol/mL的ROT。各组心肌细胞干预24 h后，CCK-8法测定细胞活性；CellRox和MitoSox荧光探针分别测定心肌细胞内和线粒体氧化应激水平变化；免疫荧光法检测细胞内NLRP3炎症小体水平；Western blot检测心肌细胞中NLRP3、GSDMD和Cleaved-GSDMD（GSDMD-NT）等焦亡相关重要因子的蛋白表达和铁死亡相关因子GPX4蛋白表达。结果 与CON组相比，HG组细胞活性明显下降（P<0.01），心肌细胞和线粒体内ROS荧光强度（P<0.01）、NLRP3免疫荧光强度（P<0.01）以及焦亡相关因子NLRP3，GSDMD和GSDMD-NT的蛋白表达（P<0.01）均明显升高，铁死亡相关因子GPX4蛋白表达下降（P<0.01）。与HG组相比，HG+MitoQ和HG+MCC950组细胞活性明显升高（P<0.01），细胞和线粒体内ROS荧光强度（P<0.01）、NLRP3免疫荧光强度（P<0.01）以及 NLRP3、GSDMD 和 GSDMD-NT 的蛋白表达明显降低（P<0.05），GPX4 蛋白表达增高（P<0.01）。与HG组相比，HG+MCC950+ROT组细胞活性和NLRP3、GSDMD-NT的蛋白表达无明显差异（P>0.05）；但与HG+MCC950组相比，HG+MCC950+ROT组细胞活性明显降低（P<0.01），ROS荧光强度、NLRP3炎症小体免疫荧光以及NLRP3、GSDMD-NT的蛋白表达均明显升高，GPX4蛋白表达降低（P<0.05）。结论 MitoQ直接抑制线粒体ROS的产生减轻了高糖诱导的心肌细胞NLRP3炎症小体的生成，减少焦亡和铁死亡的发生；抑制NLRP3炎症小体减少线粒体ROS的产生；线粒体ROS和NLRP3之间可能存在着相互影响。

• 冠状动脉最大面积狭窄率联合冠周脂肪CT衰减指数可预测冠状动脉血流动力学异常

  单冬凯, 王更新, 王 玺, 丁熠璞, 陈韵岱, 杨俊杰

  目的 探讨冠状动脉计算机断层扫描造影（CCTA）指标与冠周脂肪CT衰减指数（FAI）在预测冠脉血流动力学异常方面的联合价值。方法 回顾性纳入2017~2019年于解放军总医院接受CCTA检查，并于1月内行有创血流储备分数（FFR）检查的患者。从血管水平检测CCTA指标，包括斑块分布、冠脉血管钙化积分、病变长度、最大直径狭窄率、最大面积狭窄率（MAS）、总斑块负荷，并测量冠周FAI和基于机器学习的CT-FFR。有创FFR≤0.8被认为存在病变特异性的血流动力学异常。结果 回顾性入组99例患者，共计血管124支。从血管水平，FFR≤0.8组的冠脉血管钙化积分，最大直径狭窄率、MAS和总斑块负荷均显著高于FFR>0.8组，冠周FAI（P<0.01）和CT-FFR（P<0.01）差异也存在统计学意义。诊断试验显示，MAS联合冠周FAI的AUC达 到0.818，与CT-FFR相比差异无统计学意义（P=0.076）。结论 MAS与冠周FAI联合应用对鉴别血流动力学意义的冠脉狭窄具有较高的诊断价值，与CT-FFR技术相类似。

• SHOX2体外增强膀胱癌细胞的迁移、侵袭和干细胞特性

  植 曦, 周俊豪, 田 湖, 周冉冉, 黄振辉, 刘存东

  目的 探讨人矮小同源盒基因2（SHOX2）对人膀胱癌细胞迁移、侵袭能力和干细胞特性的影响及其可能机制。方法 分析TCGA肿瘤数据库中SHOX2基因在膀胱癌标本和癌旁对照标本的表达情况，利用GEPIA网站对TCGA膀胱数据中的SHOX2基因表达量进行单因素生存分析，并利用GSEA软件预测其可能的生物学功能。选取对数生长期的人膀胱癌细胞T24，采用SHOX2 shRNA及SHOX2过表达质粒分别敲低、过表达SHOX2基因，用Western blot检测SHOX2蛋白表达量，通过划痕实验、Transwell侵袭实验检测细胞的迁移、侵袭能力，悬浮成球、克隆形成实验检测细胞的干细胞特性。在光镜下观察细胞形态变化，并用Western blot检测细胞上皮间充质转化（EMT）标志分子E-cadherin、Vimentin蛋白表达量的变化和TGF-β信号通路重要组件TβR-I蛋白表达量的变化。结果 与癌旁膀胱组织相比，SHOX2基因在TCGA膀胱癌组织中表达升高（P=0.01），在配对的膀胱癌组织中明显升高（P=0.001），SHOX2基因表达与总生存率呈负相关（P=0.01）；GSEA显示SHOX2基因表达与EMT（P=0.002，P=0.03）及干细胞特性（P=0.006，P=0.008）呈正相关。在膀胱癌细胞 T24 中，两种不同的 SHOX2 shRNA 均能降低SHOX2的蛋白表达水平（shSHOX2-1，P=0.004；shSHOX2-2，P=0.03），SHOX2过表达质粒则能提高SHOX2的蛋白表达水平（P=0.007）。划痕实验、Transwell侵袭实验结果显示，抑制SHOX2表达后膀胱癌细胞的迁移（P<0.001，P=0.02）、侵袭（P=0.002，P=0.003）能力明显降低，而SHOX2过表达则提高膀胱癌细胞的迁移（P<0.001）、侵袭（P=0.004）能力。悬浮成球、克隆形成实验结果显示，抑制SHOX2表达后明显减弱膀胱癌细胞的干细胞特性（P=0.002，P=0.007，P<0.001）；而SHOX2过表达则增强膀胱癌细胞的干细胞特性（P=0.002，P<0.001）。此外，抑制SHOX2表达可使细胞发生上皮样形态改变，而SHOX2过表达可使细胞发生间充质样形态改变；Western blot结果显示，抑制SHOX2表达可使膀胱癌细胞中的E-cadherin蛋白表达水平升高（P<0.00），Vimentin（P<0.001，P=0.01）、TβR- I（P=0.03，P=0.02）蛋白表达水平降低；而 SHOX2 过表达可使膀胱癌细胞中的Vimentin（P=0.04）、TβR-I（P=0.003）蛋白表达水平升高。结论 SHOX2在膀胱癌中扮演致癌基因：SHOX2增强膀胱癌细胞的迁移、侵袭能力和干细胞特性，其作用机制可能与TGF-β信号通路参与调控的EMT有关。

• 复方保肝宁减轻小鼠肝纤维化的机制：抑制肝脏组织中的IDO1进而促进树突状细胞表型成熟

  莫 婵, 谢淑雯, 高 磊, 吕志平

  目的 观察中药复方保肝宁对肝纤维化模型小鼠的保护作用并探讨其作用机制。方法 本研究分为两部分，第1部分：按 0.6 mL/（kg·d）予以腹腔注射25% CCl4（CCl4∶橄榄油=1∶3）的方式诱导野生型小鼠建立肝纤维化病理模型，随机分为对照组、模型组、阳性对照组及保肝宁低、中、高浓度组，10只/组。造模给药8周后处死小鼠，取小鼠血清检测AST、ALT水平。另取肝组织做HE、天狼星红染色及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫组化染色并检测吲哚胺2,3-双加氧酶1（IDO1）的表达水平。流式细胞仪检测小鼠肝脏树突状细胞（DCs）及T细胞的数量和表型变化。第2部分：按3×1011 v.g/只尾静脉注射IDO1过表达腺相关病毒，取正常野生型小鼠随机分为腺相关病毒阴性对照（AAV9-NC）干预组、IDO1过表达腺相关病毒（AAV9-IDO1）干预组及高浓度保肝宁+IDO1过表达腺相关病毒联合干预组，6只/组。干预4周后，取肝组织做IDO1免疫组化染色并检测小鼠肝脏树突状细胞（DCs）及T细胞的表型变化。结果 与模型组比较，保肝宁高浓度组能有效降低肝纤维化小鼠血清中AST、ALT水平（P< 0.01）；改善肝组织病理损伤，减少肝纤维组织的形成及α-SMA和IDO1的沉淀（P<0.05）。保肝宁高浓度治疗组肝纤维化小鼠肝脏中CD11C+DCs、CD11C+CD80+DCs、CD11C+CD86+DCs、CD11C+CD40+ DCs、CD11C+MHCII+ DCs细胞和CD3+T、CD3+CD4+T细胞比例与模型组相比均呈不同程度的升高（P<0.05）。高浓度保肝宁干预后可显著降低IDO1过表达腺相关病毒干预小鼠肝脏中IDO1的表达水平及上调CD11C+CD40+ DCs、CD11C+MHCII+ DCs和CD3+CD4+T细胞比例（P<0.05）。结论 保肝宁对CCl4所致小鼠肝纤维化具有一定的治疗作用，其机制可能与降低肝组织中IDO1的表达水平继而促进肝脏中DCs表型成熟使DCs刺激T细胞增殖能力增强有关。

• miR-424通过调控ATG14的表达抑制肝癌细胞的自噬和增殖

  赵梓丹, 黄 为, 和君建, 冯 超

  目的 研究miR-424通过调控ATG14表达影响自噬和肝癌细胞增殖。方法 收集肝癌患者因手术切除的肝癌组织及其癌旁组织，采用 qRT-PCR 法检测肝癌组织中 miR-424-5p，ATG14 的表达。培养人肝癌细胞系 HepG2、SMMC-7721、Huh-7、MHCC97H、HCCLM3和人正常肝细胞LO2，qRT-PCR法检测上述各细胞系的miR-424-5p表达，选取表达量较高的Huh-7和表达量较低的HCCLM3肝癌细胞为研究对象，Huh-7细胞实验分组（n=3）：干扰miR-424-5p表达阴性对照组（in-NC组），干扰miR-424-5p表达组（in-miR-424-5p组）；HCCLM3细胞实验分组（n=3）：过表达miR-424-5p组（mi-miR-424-5p组），另设过表达miR-424-5p阴性对照组（mi-NC组）；过表达miR-424-5p阴性对照+过表达ATG14阴性对照组（mi-NC+NC组）；过表达miR-424-5p阴性对照+过表达ATG14组（mi-NC+ ATG14组）；过表达miR-424-5p +过表达ATG14阴性对照组（mi-miR-424-5p+NC组）；过表达miR-424-5p +过表达ATG14组（mi-miR-424-5p +ATG14组）。qRT-PCR法及Western blot法验证各组miR-424-5p和ATG14的转染情况。采用MTT法检测各组细胞的细胞增殖，流式细胞术检测各组细胞的细胞凋亡水平，Western blot检测各组细胞的ATG14和自噬相关蛋白LC3、Beclin1和P62的表达水平，双荧光素酶报告基因实验检测miR-424-5p和ATG14之间的相互作用。结果 在肝癌组织和细胞中ATG14高表达，miR-424-5p低表达。与相应对照组相比，过表达miR-424-5p抑制肝癌细胞增殖和促进凋亡（P<0.05）；干扰miR-424-5p表达及过表达ATG14促进肝癌细胞增殖和抑制凋亡（P<0.05）；miR-424可能通过靶向ATG14发挥抑癌的作用。干扰miR-424-5p表达及过表达ATG14均能提高肝癌细胞自噬体标志蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1的表达水平（P<0.05），降低自噬受体蛋白P62的表达水平（P<0.05）；过表达miR-424-5p则降低肝癌细胞自噬体标志蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1的表达水平（P<0.05），提高自噬受体蛋白P62的表达水平（P<0.05）。结论 miR-424调控ATG14表达影响自噬，从而抑制肝癌细胞增殖。

• miR-let-7c-5p通过靶向HMGA2抑制膀胱癌细胞侵袭和迁移

  姚 越, 张 冲, 熊言骏, 韩 兵, 高幸福, 汪 盛

  目的 探讨miR-let-7c-5p能否调控HMGA2抑制膀胱癌细胞侵袭和迁移。方法 生物信息学方法确定miR-let-7c-5p的关键基因；RT-qPCR和Western blot检测膀胱癌和癌旁组织中miR-let-7c-5p mRNA和HMGA2 蛋白相对表达量。以人正常膀胱细胞SV-HUC-1作为对照，RT-qPCR和Western blot检测膀胱癌细胞系T24，UM-UC-3，5637细胞中miR-let-7c-5p mRNA和HMGA2蛋白的相对表达量。对UM-UC-3细胞中miR-let-7c-5p分别进行上调和下调，上调实验设模拟物阴性对照组（mimic-NC）、miR-let-7c-5p模拟物组（mimicmiR-let-7c-5p）、下调实验设阴性对照组（inhibitor NC）及miR-let-7c-5p抑制剂组（si-miR-let-7c-5p），双荧光素酶实验、RT-qPCR和Western blot法共同验证miR-let-7c-5p和HMGA2的靶向关系；Transwell小室检测单独上调或下调miR-let-7c-5p表达及同时下调miR-let-7c-5p和HMGA2表达UM-UC-3细胞侵袭和迁移的变化；Western blot检测上皮间质转化（EMT）相关蛋白（E-cadherin, N-cadherin, vimentin, Snail）相对表达量。结果 HMGA2为miR-let-7c-5p的靶基因之一；与癌旁组织相比，膀胱癌组织中miR-let-7c-5pmRNA相对表达量降低（P<0.05），HMGA2蛋白相对表达量增加（P< 0.05）；与SV-HUC-1细胞相比，UM-UC-3细胞中miR-let-7c-5p相对表达量显著降低，HMGA2显著增加（P=0.01）。上调miR-let-7c-5p表达，UM-UC-3细胞侵袭和迁移能力均显著下降（P<0.05）；下调miR-let-7c-5p表达，UM-UC-3细胞侵袭和迁移能力均显著增加（P<0.05）；当同时下调miR-let-7c-5p和HMGA2表达UM-UC-3细胞侵袭和迁移能力显著下降（P<0.05）。Western blot结果显示，上调miR-let-7c-5p表达，E-cadherin表达增加，N-cadherin，vimentin，Snail蛋白表达下降；下调miR-let-7c-5p表达，E-cadherin表达下降，N-cadherin，vimentin，Snail蛋白表达增加；同时下调miR-let-7c-5p和HMGA2表达能够抑制UM-UC-3细胞EMT（P<0.05）。结论 miR-let-7c-5p通过靶向HMGA2抑制EMT进而抑制UM-UC-3细胞侵袭和迁移。

• TRIM59靶向调控PPM1B对鼻咽癌侵袭和迁移的作用

  王文忠, 周兰柱, 孙 哲, 吴 俊, 崔忆旋

  目的 探讨TRIM59能否通过靶向PPM1B影响鼻咽癌侵袭和迁移。方法 TCGA数据库分析TRIM59在鼻咽癌中的表达；Western blot实验检测TRIM59和PPM1B在鼻咽癌和癌旁组织中的表达情况；RT-PCR和Western blot实验分别检测鼻咽癌细胞系中TRIM59和PPM1B mRNA和蛋白的相对表达量；建立HNE1细胞TRIM59过表达及抑制表达的稳定细胞系，实验设未转染组（Control）、模拟物阴性对照组（mimic NC）、TRIM59 模拟物组（mimic-TRIM59）、抑制剂阴性对照组（inhibitor NC）及TRIM59抑制剂组（si-TRIM59）。Western blot和荧光素酶报告基因实验检测TRIM59和PPM1B靶向关系；Transwell小室检测HNE1细胞侵袭和迁移能力的变化。结果 TCGA数据库结果表明，TRIM59在鼻咽癌组织中的表达明显高于癌旁组织（P= 0.006）；TRIM59在鼻咽癌组织中表达增加（P=0.01）且PPM1B 表达下降（P=0.03）；与HNEpC细胞相比，TRIM59在HNE1细胞中相对表达量显著增加（P=0.04），PPM1B在HNE1细胞中相对表达量显著下降（P=0.02）；PPM1B为TRIM59下游靶基因且与TRIM59表达呈负相关（P=0.01）；Transwell结果显示，上调TRIM59表达，HNE1细胞侵袭和迁移能力增强（P=0.01，P=0.02），下调TRIM59表达，HNE1细胞侵袭和迁移能力受到显著抑制（P=0.01）；同时下调TRIM59且上调PPM1B表达后，HNE1细胞侵袭和迁移能力均较单独下调TRIM59表达显著被抑制（P=0.02，P=0.01）。结论 TRIM59通过靶向调控PPM1B影响鼻咽癌细胞侵袭和转移。

• 甲状旁腺激素相关蛋白加重蛋氨酸胆碱缺乏饲料诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病进展

  覃碧艳, 刁 娜, 白 岚

  目的 研究甲状旁腺激素相关蛋白（PTHrP）对蛋氨酸胆碱缺乏饲料（MCD）诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的影响。方法 构建小鼠 NAFLD 模型并分为空白对照组（普通饲料喂养 4 周）、AAV-Vehicle 组（注射空载腺相关病毒 AAV-Vehicle）和AAV-PTHrP组（注射PTHrP 过表达腺相关病毒）。实验期间监测小鼠体质量。收集小鼠肝脏组织进行HE染色、油红染色和天狼星红染色评估肝脏组织病理学改变；检测肝脏及血清中谷草转氨酶、谷丙转氨酶、甘油三酯和游离脂肪酸浓度评估小鼠肝脏损伤及脂肪代谢水平。250 μmol/LFFAs诱导小鼠正常肝细胞和人正常肝细胞24 h构建NAFLD细胞。根据有无PTHrP处理分为PTHrP组、对照组。油红及尼罗红染色检测细胞内脂质沉积程度；CCK8试剂盒检测PTHrP对脂肪变性肝细胞的毒性作用。结果 动物实验：对比AAV-Vehicle组，AAV-PTHrP组小鼠体重下降更为快速；AAV-PTHrP组小鼠肝脏谷草转氨酶（P<0.05）、谷丙转氨酶（P<0.05）、甘油三酯（P<0.01）、游离脂肪酸（P<0.05）水平，NAS评分以及SAF评分均显著升高（P<0.01， P<0.05），肝脏脂滴堆积更为明显。细胞实验：同时加入PTHrP，小鼠及人NAFLD细胞模型的脂质沉积更为明显（P<0.01），且细胞活性下降（P<0.05）。结论 PTHrP可能通过促进肝细胞脂滴沉积，加重MCD诱导的小鼠NAFLD。

• 血管内超声指导下的旋磨术联合切割球囊预处理冠状动脉重度钙化病变：120例前瞻性随机对照试验

  韩风杰, 郑海军, 郑献召, 晋 辉, 王中明, 曾 辉, 邱翠婷, 刘 静, 朱艳霞

  目的 探讨血管内超声（IVUS）指导下冠脉旋磨术（RA）联合切割球囊（CB）预处理冠状动脉重度钙化病变的的疗效及安全性。方法 2016年1月~2019年1月在我院选取经IVUS检查出冠状动脉重度钙化病变且需行冠脉介入（PCI）的患者120例。按照数字表法随机分为两组，在PCI前分别给予不同的预处理方案：SB组[RA+普通半顺应性球囊（SB），60例]和CB组（RA+CB，60例）。预处理后均置入药物洗脱支架。比较两组患者的即刻PCI成功率、PCI术后IVUS检测指标（最小支架内管腔直径、最小支架内管腔横截面积、管腔横截面积残余狭窄程度、即刻管腔直径获得、即刻管腔横截面积获得），统计病变残余狭窄<10%的优良率，随访术中并发症及术后24月主要不良心脏事件（MACE）。结果 CB组患者的手术即刻成功率高于SB组（P=0.032）；预处理及支架置入后，CB组患者的最小支架内管腔直径（P=0.035）、最小支架内管腔横截面积（P=0.029）、即刻管腔获得、即刻管腔横截面积获得及病变残余狭窄<10 %的优良率均明显大于SB组（P<0.001），CB组患者的管腔横截面积残余狭窄程度轻于SB组（χ2=7.859，P=0.005）；CB组患者的术中并发症发生率（χ2=5.997，P=0.014）及术后24月MACE发生率均低于SB组（χ2=4.285，P=0.038）。结论 对适合PCI的冠状动脉重度钙化病变实施RA+CB，可明显提高即刻PCI成功率，扩大PCI术后支架内管腔直径及横截面积，即刻管腔获得显著，降低术中并发症及术后24个月MACE发生率，改善患者预后。

• 高龄不孕症患者冻融胚胎移植胚胎数目和质量与早期妊娠丢失率的关系

  张庆颜, 张 俊, 周星宇, 黎 莹, 陈映雪, 陈 薪, 陈士岭

  目的 分析高龄不孕患者接受辅助生殖技术（ART）行冻融胚胎移植（FET）周期的胚胎数目和质量与早期妊娠丢失率的关系。方法 选择2015年1月~2018年12月于南方医科大学南方医院接受ART并行FET的≥36岁的不孕症患者共2622例，对妊娠的976例患者根据后续妊娠情况分为早期妊娠丢失组和持续妊娠组，分析早期妊娠丢失率与年龄、移植胚胎数、胚胎质量等的关系；根据患者年龄分为：36~37岁组、38~39岁组、40岁组、41岁组、42岁组、43岁组、44岁组和45~48岁组，进一步分析不同年龄段早期妊娠丢失率与胚胎移植数及胚胎质量的关系。结果 本研究共纳入2622例FET周期，其中临床妊娠976例，临床妊娠率37.2%（976/2622），活产663例，活产率25.3%。临床妊娠患者中早期妊娠丢失241例，继续妊娠735例，早期妊娠丢失率24.7%（241/976）。各组患者临床妊娠率及活产率随年龄增长而降低，早期妊娠丢失率随年龄增长而显著升高（P<0.001）；早期妊娠丢失组患者FET年龄及取卵年龄均高于持续妊娠组，移植D3胚胎数高于持续妊娠组（0.97 vs 0.81，P=0.030），着床胚胎数低于持续妊娠组（1.09 vs 1.25，P0.05）。结论 高龄不孕女性患者冻融移植胚胎周期的早期妊娠丢失率随年龄增长而升高，年龄是导致早期妊娠丢失的无法补救的危险因素，故应对高龄不孕女性尽早实施ART助孕治疗。为降低早期胚胎丢失率，同时权衡多胎妊娠的风险，根据胚胎质量谨慎决定胚胎移植数。

• 双mTORC1/2抑制剂AZD2014可抑制裸鼠体内的人肝细胞癌的生长

  廖 晖, 王 毅, 徐小平, 周陈杰, 张健民, 钟克波, 杨定华

  目的 体内研究双 mTORC1/2 抑制剂AZD2014 对肝细胞癌是否具有抗癌作用。方法 将肝癌细胞 HCCLM3 接种至祼鼠皮下，待形成明显瘤块，随机分成 2 组（对照组和 AZD2014组），每组各 5 只。AZD2014 组腹腔内注射AZD2014，5 mg/kg体质量，1次/d；对照组腹腔内注射药物溶剂2.5 mL/kg体质量，1 次/d。定期测量肿瘤大小，绘制肿瘤体积增长曲线。给药后第24天，剥离皮下肿瘤，测量肿瘤的体积，并行HE 染色和免疫组织化学检测细胞增殖、凋亡和 EMT 相关蛋白。结果 AZD2014 组肿瘤的体积自给药后几乎未再增大，而对照组中的肿瘤体积随着时间的延长而不断增大（P<0.001）。HE 染色显示AZD2014 组中发生坏死的细胞显著多于对照组。免疫组化检测发现 AZD2014 组中细胞增殖核抗原 Ki-67 和血管内皮细胞标志蛋白 CD31的表达量显著低于对照组，而促凋亡蛋白 Cleaved caspase-3显著高于对照组；此外，AZD2014 组间质细胞表型蛋白 N-cadherin和 Vimentin的表达水平显著低于对照组，而上皮细胞表型蛋白 E-cadherin 的表达水平则显著高于对照组。结论 AZD2014可以抑制肝细胞癌的增殖、微血管形成和 EMT 进程，同时还可以促进肝癌细胞发生坏死和凋亡。

• 两种黄体酮阴道用药方案在胚胎植入前经遗传学检测的冻融胚胎移植中的临床效果

  邓 宇, 欧展辉, 梁云浩, 陈志恒, 孙 玲

  目的 比较黄体酮阴道缓释凝胶联合地屈孕酮和黄体酮软胶囊联合地屈孕酮作为胚胎植入前遗传学检测（PGT）冻融胚胎移植后黄体支持的效果。方法 选择2017年6月~2020年6月在我院接受PGT助孕的209例患者，根据在激素替代冻融胚胎移植周期中阴道黄体支持用药的不同将患者分为2组：黄体酮阴道缓释凝胶（雪诺同）+地屈孕酮组（n=135）和黄体酮软胶囊（安琪坦）+地屈孕酮组（n=74），比较两种联合用药方案的临床应用效果及妊娠结局。结果 两组的年龄、不孕年限、抗苗勒氏激素、基础窦卵泡数、BMI、基础FSH、基础LH、基础E2差异无统计学意义（P>0.05）；两组Gn启动剂量、Gn时间、Gn总剂量、hCG日LH、 E2、P及内膜厚度、获卵数、MII卵子数、受精数及可移植囊胚数差异无统计学意义（P>0.05）；两组冻胚移植周期内膜准备时间、内膜转化日P和内膜厚度、生化妊娠率（69.63% vs 78.38%）、临床妊娠率（62.96% vs 72.97%）、流产率（12.94% vs 11.11%）、早孕阴道出血率（20% vs 27.78%）及阴道出血者的流产率（35.29% vs 20%）的差异无统计学意义（P>0.05）。结论 黄体酮阴道缓释凝胶联合地屈孕酮和黄体酮软胶囊联合地屈孕酮作为PGT冻融胚胎移植后黄体支持可获得相似的临床效果。

• 半乳糖凝集素-3通过lncARSR影响小鼠冠状动脉粥样硬化易损斑块稳定的机制

  许名东, 李丽华, 李晚泉, 刘家超, 李小丹, 叶浩彬, 陈健芳, 邹文毕

  目的 探讨半乳糖凝集素-3（Gal-3）通过lncARSR影响冠状动脉粥样硬化易损斑块稳定的机制。方法 将60只雄性BALB/c小鼠随机分为3组（n=20）：正常饮食组、高脂饮食组（15%脂肪+0.25%胆固醇饮食）、高脂饮食+lncARSR抑制剂组（15%脂肪和0.25%胆固醇饮食，隔日尾静脉注射50 nmol/L lncARSR抑制剂），12周后取材。通过苏丹IV和油红O染色分析小鼠冠状动脉粥样硬化及斑块损伤，Westen blot分析小鼠冠状动脉Gal-3和ARSR蛋白表达，免疫组化检测小鼠冠状动脉中PI3K和Akt表达。同时取冠状动脉组织进行细胞培养，分为对照转染组、Gal-3转染组和Gal-3抑制组，转染24 h后用双荧光素酶报告基因测定Gal-3与lncARSR的靶标关系，RT-qPCR检测转染细胞中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-β（IL-β）、IL-6的mRNA表达。结果 正常饮食组苏丹IV阳性面积和红油染色面积以及ARSR的蛋白表达最低，而高脂饮食组最高（P<0.05）；Gal-3转染组较对照转染组、Gal-3抑制组的WT-lncARSR酶活性升高（P=0.026），Gal-3抑制组较对照转染组WT-lncARSR酶活性降低（P= 0.017）。高脂饮食组较正常饮食组PI3K和Akt的蛋白以及TNF-α、IL-β、IL-6的mRNA表达升高，高脂饮食+lncARSR抑制剂组较高脂饮食组PI3K和Akt的蛋白以及TNF-α、IL-β、IL-6的mRNA表达降低（P<0.05）。结论 冠状动脉粥样硬化中Gal-3和lncARSR过量表达。Gal-3能靶向调控lncARSR，通过抑制lncARSR表达，调控PI3K/Akt信号通路，降低炎症反应，调节冠状动脉粥样硬化易损斑块稳定。

• Exendin-4通过促进自噬减少非酒精性脂肪性肝病细胞模型的脂质沉积

  林楚曼, 方俊博, 向倩如, 周 蕊, 杨 力

  目的 探究Exendin-4改善肝细胞脂质沉积的作用机制，讨论Exendin-4治疗非酒精性脂肪肝病的可能机制。方法 对照组（人正常肝细胞LO2和肝癌细胞HepG2，不做任何处理）；棕榈酸钠（PA）组（LO2与HepG2分别进行PA处理，以构建肝细胞脂肪变性模型）；PA+Exendin-4组（LO2与HepG2分别进行PA与Exendin-4共处理）；PA+Exendin-4+3BDO组（LO2与HepG2分别进行Exendin-4与3BDO共处理）。通过油红O染色实验、CCK8实验，检测对照组、PA组、PA+Exendin-4组的脂质沉积程度与细胞增殖能力，并通过Western blot检测信号通路关键分子p-mTOR、m-TOR、p-AKT、AKT，以及自噬相关蛋白LC3-I/II和p62的表达；通过 Western blot 与免疫荧光实验，检测 LO2 与 HepG2 细胞中 GLP-1R 表达情况；通过 Western blot，检测对照组、PA+Exendin-4组、PA+Exendin-4+3BDO组中LC3-I/II和p62的表达。结果 油红O染色实验表明，PA诱导后细胞中脂质明显增加，PA+Exendin-4组脂质沉积程度较PA组降低；细胞增殖实验表明，PA组细胞增殖水平较对照组明显受抑制（P<0.01）；PA+Exendin-4组细胞增殖水平较PA组升高（P<0.05）；免疫荧光实验表明，人正常肝细胞LO2和肝癌细胞HepG2细胞株中均有GLP-1R表达；Western blot表明，PA+Exendin-4组p-mTOR的表达较PA组下调，p-AKT的表达较PA组上调。Exendin-4可下调自噬相关蛋白p62，而上调LC3-II的表达，而这一结果可被3BDO逆转。结论 Exendin-4可能通过直接作用于细胞上GLP-1R，激活AKT-mTOR信号通路，进而促进自噬；同时，Exendin-4有助于缓解PA作用下肝细胞的脂质沉积过程，并促进细胞增殖。提示Exendin-4在PA作用下肝细胞的脂质沉积过程中具有重要作用。

• 雌性小鼠次级听皮层对通讯声音的响应识别和修饰加工

  雷书君, 肖中举

  目的 研究C57雌鼠次级听皮层（A2）对乳鼠叫声（WC）的响应特点及机制。方法 使用在体膜片钳技术和免疫荧光染色标记技术，标记和记录A2声诱发神经元的动作电位发放情况及细胞类型。对照组：使用纯音(Tone)和白噪音（Noise）刺激小鼠。WC声刺激组：使用WC声刺激小鼠，提取WC声中4,5 kHz，9 kHz，13.5 kHz的声波，设置为单一频率模拟组：使用4.5、9、13.5 kHz声波刺激小鼠。双频率模拟组：使用4.5 kHz+9 kHz，9 kHz+13.5 khz，4.5 kHz+13.5 kHz的组合声波刺激雌鼠。三频率模拟组：使用4 kHz+7.7 kHz+13.5 kHz和4.5 kHz 9 kHz+13.5 kHz的组合声波刺激小鼠。最后分析A2单个神经元对WC声以及各组模拟WC声的组合声、Tone、Noise的声诱发动作电位的发放模式、发放数、阈值、延时等情况。结果 通过比较次级听皮层神经元对WC声、各组WC声的模拟声、Tone和Noise的响应发放数，发现在次级听皮层存在3种对WC敏感性不同的神经元，其中，对WC声敏感的神经元，它对WC声的平均响应发放数明显高于对各类模拟声和Noise的平均响应发放数，有统计学差异（P<0.001）；比较这3类神经元对WC声、Tone、Noise的反应延时和阈值，发现对WC敏感的神经元和对WC不敏感的神经元对WC声的平均反应延时长于对纯音的平均反应延时，有统计学差异（P=0.002），但与对Noise的平均反应延时比较，则并无统计学差异（P=0.093）；对WC声敏感的神经元对WC声的响应阈值低于对Tone、Noise的阈值（P=0.02）；通过对神经元动作电位发放模式的分析，发现对WC声敏感的神经元主要是由小白蛋白抑制性中间神经元（PV）组成；免疫荧光双染结果提示实验组中对WC响应的A2神经元中，确实存在抑制性中间神经元。结论 在雌性小鼠A2中，存在对WC通讯声敏感性不同的3种神经元。其中对WC声敏感的神经元主要是PV神经元，它对于不同类型声音的响应特性，有助于解释次级听皮层对通讯声音识别响应和修饰加工的机制。

• 近视小鼠巩膜成纤维细胞的基因表达谱：基于单细胞RNA测序的生物信息学分析

  余嘉珍, 莫 亚

  目的 利用单细胞RNA测序( RNA-seq)技术探索巩膜成纤维细胞在近视形成前后基因表达的变化探索巩膜成纤维细胞在近视中的作用机制。方法 将正常健康的C57BL/6J小鼠按随机数字法平均分为近视模型组与阴性对照组，6只/组。阴性对照组双眼前节无遮盖、近视模型组使用半透明眼罩行右眼形觉剥夺，实验开始及结束时均测眼轴，并单细胞捕获右眼巩膜成纤维细胞进行RNA-seq，筛选差异表达基因，使用GO功能分析和京都基因和基因组百科全书（KEGG）途径进行功能显著性富集分析。结果 近视模型组与阴性对照组比较，筛选出差异基因169个（P>0.05），112个上调基因和 57个下调基因，分子功能中71个GO项（P<0.05）。GO功能分析显示差异基因中有：白细胞聚集、分化以及细胞黏附等与炎症相关GO项；ATP代谢与结合，氧化还原过程、氧化应激反应、氧化磷酸化等与缺氧相关的GO项；蛋白质折叠、蛋白质转运以及蛋白质代谢过程的负调控、内质网、内质网腔、内质网应激等与蛋白质及内质网应激相关GO的生物学过程。KEGG分析显示差异基因显著的富集信号通路主要为与缺氧相关的三羧酸循环、氧化磷酸化、过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路、氧化磷酸化等通路，与炎症相关的丝裂原活化蛋白激酶信号通路、白细胞跨内皮转运等，以及与蛋白质相关的帕金森氏病、亨廷顿病、蛋白质消化吸收等通路。结论 巩膜成纤维细胞在近视形成过程中出现功能障碍，与炎症、缺氧、蛋白质调节及内质网应激的相关基因表达和通路的调节有一定关系。

• Z-Score成像系统辅助脑血流灌注SPECT对早期阿尔茨海默病患者的诊断有较高价值

  王思飞, 齐永帅, 江 英, 池晓华, 黄 凯, 阮楚茵, 杨晓镪, 李贵平

  目的 利用简易Z-Score成像系统（eZIS）对脑血流灌注SPECT图像进行分析，探讨其在早期阿尔茨海默病（AD）诊断中的价值。方法 回顾性分析2018年9月~2020年9月至南方医院核医学科行脑血流灌注SPECT检查的71例受检者的临床资料，根据2011版NIA-AA标准诊断为阿尔茨海默病源性轻度认知障碍（MCI）12例，阿尔茨海默病痴呆阶段（AD）11例，无认知障碍的的健康中老年人（NC）8例。所有受检者均已行脑血流灌注SPECT显像，并应用eZIS辅助分析，获得指标值——严重程度、范围和比率。应用SPSS23.0软件比较3组间严重程度、范围、比率的差异，并分析3个指标值单项及联合分析在早期AD中诊断效能。结果（1）3组受检者间性别（P=0.58）、年龄（P=0.21）、受教育程度（P=0.88）的差异无统计学意义；AD组（P=0.00）、MCI组 （P=0.04）简易精神状态检查量表（MMSE）分数低于NC组，AD组（P=0.02）MMSE分数明显低于MCI组，差异均有统计学意义；（2）AD组的严重程度（P=0.00）、范围（P=0.00）高于MCI组，AD组、MCI组的严重程度（P=0.00、0.00）、范围（P=0.00、0.00）、比率（P=0.00、0.00）均高于NC组，且差异均有统计学意义，AD组、MCI组的比率（P=0.09）差异无统计学意义；（3）单项分析时严重程度的诊断性能（AUC=0.911）和灵敏度（87.0%）最高，联合分析时诊断性能及灵敏度均高于单项分析，其中范围、比率联合分析的诊断性能（AUC=0.948）和灵敏度（87.0%）较高。结论 eZIS辅助脑血流灌注SPECT分析在早期阿尔茨海默病诊断中有较高的应用价值。

• 2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷可减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤

  陈加宝, 刘 华

  目的 观察2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（TSG）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠急性肺损伤（ALI）的保护作用，探讨其相关机制。方法 将36只SD大鼠随机分为正常对照组（n=9，蒸馏水 10 mL/kg，灌胃）、模型组（LPS组，n=9，脂多糖5 mg/kg，尾静脉注射）、TSG低剂量组（n=9, TSG 50 mg/kg，灌胃）和TSG高剂量组（n=9, TSG 100 mg/kg，灌胃）6 h后处死大鼠，观察大鼠肺组织病理切片并行肺损伤评分，测定肺组织湿/干质量比（W/D），ELISA法检测血清中炎症因子TNF-α和IL-6的浓度，同时检测肺组织中超氧化物歧化酶（SOD）的活力和丙二醛（MDA）的含量，并运用Western blot检测肺组织中NF-κB p65的表达水平。结果 与LPS组相比，TSG低、高剂量组肺病理损伤明显减轻（P<0.001），血清TNF-α和IL-6的浓度显著降低（P<0.001），肺组织W/D明显下降（P<0.001），SOD活性明显升高（P<0.001），MDA含量明显减少（P<0.001），NF-κB p65的表达水平显著下降，差异均具有统计学意义（P<0.001）。而TSG低剂量组和高剂量组之间比较并无差异（P 病理损伤评分=0.99，PTNF-α=0.99，PIL-6=0.86，PW/D=0.84， PSOD=0.76，PMDA=0.74，PNF-κB p65=0.17）。结论 TSG可减轻脂多糖诱导的急性肺损伤，其保护作用可能与抑制NF-κB通路的激活，提高抗氧化能力，减少炎症因子的释放有关。

• 人参皂苷Rh2调控盘状结构域受体1对糖尿病大鼠肾纤维化和细胞凋亡的影响

  沈炳香, 王法财, 周 艺, 李 婷, 何春远, 赵为陈

  目的 分析人参皂苷Rh2（G-Rh2）对糖尿病肾病（DN）大鼠肾纤维化和细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 SPF级，雄性，SD大鼠30只，随机分为对照组（Control组）、DN组以及G-Rh2药物干预组。DN和G-Rh2药物干预组大鼠腹腔注射链脲佐菌素构建DN大鼠模型，Control组大鼠给予等量的柠檬酸缓冲溶液注射。待DN大鼠模型构建成功后，G-Rh2药物干预组给予G-Rh2（20 mg·kg-1 ·d-1）连续灌胃12周，Control和DN大鼠给予等量的生理盐水灌胃。HE染色和PAS染色观察大鼠肾组织形态，Masson染色观察大鼠肾组织纤维化程度，TUNEL染色观察肾组织细胞凋亡情况；Western blot检测大鼠肾组织CollagenI、CollagenIII、Cleaved-caspase-3、Bcl-2、DDR1表达水平；免疫组化定位检测肾组织DDR1表达情况。结果 与Control组相比，DN组肾组织纤维化程度加重，细胞凋亡指数升高（P<0.01），CollagenI、CollagenIII、Cleaved-caspase-3、DDR1表达上调（P<0.01），Bcl-2表达下调（P<0.01）；与DN组相比，G-Rh2药物干预组肾组织纤维化程度，细胞凋亡指数，CollagenI、CollagenIII、Cleaved-caspase-3、DDR1表达均显著降低（P<0.05或P<0.01），Bcl-2表达显著升高（P<0.05）。结论 G-Rh2抑制糖DN肾纤维化和细胞凋亡可能与下调DDR1表达有关。

• 口腔颌面部恶性肿瘤患者肠内营养喂养不耐受状况及影响因素

  曾佳琪, 张 博, 苏红辉

  目的 探讨口腔颌面部恶性肿瘤患者发生肠内营养（EN）喂养不耐受的状况及其影响因素。方法 对2018年3月~2021年3月入住某三级甲等综合医院实施EN的122例口腔颌面部恶性肿瘤患者病例资料进行回顾性分析，根据患者EN是否耐受分为耐受组（n=70）与不耐受组（n=52），比较两组患者一般资料（年龄、性别、身高、体质量、病理分期）、EN制剂种类、临床治疗（物理降温、鼻饲药物）、药物应用（镇静药、血管活性物、抑酸药、钾制剂、抗生素种类、激素药）、生化指标（血清总蛋白、血清白蛋白、血 糖、血钾浓度）差异，采用Logistic回归分析来分析患者EN喂养不耐受的影响因素。结果 实施EN的122例口腔颌面部恶性肿瘤患者中，喂养不耐受发生率为42.6%。Logistic回归分析显示，使用钾制剂（OR=4.125, P=0.027, 95% CI：1.178~14.444）、使用镇静药（OR=4.125, P=0.000, 95% CI：2.007~11.765）、低蛋白血症（OR=3.557, P=0.010, 95% CI：1.351~9.366）是口腔颌面部恶性肿瘤患者发生EN喂养不耐受的独立危险因素；肠内营养制剂中添加膳食纤维（OR=0.108, P=0.015, 95% CI：0.018~0.643）是其保护性因素。结论 口腔颌面部恶性肿瘤患者EN喂养不耐受发生率较高，建议使用添加膳食纤维的肠内营养制剂，医护人员应密切观察使用钾制剂、镇静药、低蛋白血症患者的EN喂养耐受性情况，及时采取干预措施，降低喂养不耐受发生率。

• 不同评价系统对慢阻肺患者病情及治疗疗效的评估价值

  谭漫琳, 简文星, 梁秋菊, 李树钧, 崔海燕

  目的 探索不同评价系统对慢性阻塞性肺疾病（慢阻肺）患者临床诊疗的实用性和临床意义。方法 回顾性分析2020年11月~2021年1月收治入南方医科大学第三附属医院呼吸与危重症医学科的28例慢阻肺急性加重患者临床资料，收集患者入院时第1秒用力呼气容积占预计值百分比（FEV1%pred）、慢阻肺评估测试（CAT）、呼吸困难评分（mMRC）、基础呼吸困难指数（BDI）、慢阻肺临床问卷（CCQ）、圣乔治呼吸问卷（SGRQ）、BODE指数、汉密尔顿抑郁量表（HDRS）及出院1月后CAT、mMRC、呼吸困难变化指数（TDI）、CCQ、SGRQ、HDRS。对入院时的FEV1% pred、CAT、mMRC、BDI、CCQ、SGRQ、BODE、HDRS进行相关性分析，并根据患者出院后吸入药物种类，将患者分为单药组（8例）、二联组（10例）、三联组（10例），对3组患者出院1月后TDI及CAT、mMRC、CCQ、SGRQ、HDRS变化情况进行分析。结果 FEV1%pred与SGRQ、BDI中度相关(r=-0.66, r=0.61, P< 0.01)；CCQ活动评分与mMRC、SGRQ活动评分、BDI高度相关(r=0.82, r=0.92, r=-0.89, P<0.01)；SGRQ活动评分与mMRC、BDI高度相关（r=0.84, r=-0.91, P<0.01）；SGRQ症状评分与BODE高度相关(r=0.80,（P<0.01)；SGRQ影响评分与HDRS中度相关（r=0.57, P<0.01）。以所有患者为整体进行分析，除CCQ心理评分及HDRS外，各评分均有改善（P<0.05）；单药组CCQ较前下降（P<0.05），二联组CAT、mMRC、CCQ、SGRQ较前下降（（P<0.05），三联组CCQ及SGRQ较前下降（P0.05）。结论 相对于mMRC，更推荐BDI及TDI进行呼吸困难评估；CAT、CCQ、SGRQ疗效反应灵敏，可用于治疗后的常规评估，其中SGRQ最为全面，时间充分的情况下，建议完善SGRQ；BODE评分相对复杂，但对于患者未来生存率有极高的预测价值；建议完善HDRS 进行慢阻肺合并抑郁的常规筛查。