南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2020年第08期

• 肝素酶通过诱导血管内皮细胞凋亡促进肝癌细胞跨内皮迁移

  陈晓鹏,叶 蕊,戴大飞,伍玉海,俞远林,程 斌

  目的 探索肝癌肝素酶（HPSE）对微血管内皮细胞（MVECs）凋亡及跨细胞迁移的影响。方法 用qRT-PCR和Western blot法从HepG2，BEL-7402和HCCLM3三种肝癌细胞中筛选高表达HPSE的肝癌细胞；构建含有HPSE之RNA干扰序列的慢病毒载体（LV-HPSE -RNAi-1249-2, RNAi组），用含有阴性对照序列的慢病毒载体（LV-HPSE-Control, Control组）作为对照，分别感染肝癌细胞，并验证感染效率。用人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）代表肝癌MVECs，用Transwell小室行肝癌细胞跨内皮迁移试验；肝癌细胞和HUVECs细胞非接触共培养24 h，应用CCK-8法检测内皮细胞存活率；Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡情况，电镜观察细胞形态。肝癌细胞腹腔注射法制作裸鼠肝癌模型，观察肝癌MVECs凋亡及癌细胞跨内皮成瘤情况。结果 从3种肝癌细胞中筛选出高表达HPSE的HCCLM3肝癌细胞。慢病毒载体分别感染HCCLM3细胞72 h后，荧光显微镜显示细胞感染效率达到70%以上，qRT-PCR和Western blot 法检测RNAi组肝素酶 mRNA和蛋白表达下降（P<0.05）。RNAi组肝癌细胞跨内皮迁移率为0.39，显著低于Control组的0.62（P<0.01）。HCCLM3细胞与HUVECs非接触共培养，RNAi组内皮细胞成活率为1.14，显著高于Control组的0.77（P<0.05）；RNAi组凋亡指数3.94±1.51明显低于Control组（12.53±0.55） （P<0.05）。透射电镜示RNAi组细胞形态大致正常；Control组内皮细胞体积变小、变形，胞膜有发泡现象；染色质浓缩、边缘化，部分分割成块状，并见凋亡小体。实验裸鼠全部成活，Control组6只肝组织中均出现GFP标记的肿瘤细胞，镜下成瘤率100% （6/6），显著高于RNAi组成瘤率（33.3%，2/6）（P<0.05）。光镜下Control组肝组织内可见肝癌细胞，部分血管内皮细胞坏死，胞浆可见空泡，核质浓缩；RNAi组肝组织内罕见肝癌细胞，内皮细胞基本正常。结论 肝癌肝素酶可能通过诱导血管内皮细胞凋亡而促进癌细胞转移。

• 基于系统药理学分析透解祛瘟颗粒治疗COVID-19的活性成分

  马世堂,张 雪,岑金凤,洪 阁,洪盛威,居文政

  目的 采用系统药理学多维阐释探寻透解祛瘟颗粒（TJQW）治疗新型冠状肺炎（COVID-19）药效物质基础，并筛选活性成分。方法 采用数据库搜寻、文献挖掘与类药性指标筛选确定TJQW化合物、疾病阳性药物及作用靶点，基于活性成分-阳性药物-疾病潜在靶点交联互作明确关键节点靶标，并对其进行 GO 生物过程分析和 KEGG 通路分析，在此基础上针对核心靶标对TJQW组分进行虚拟筛选，构建成分-靶点-通路网络效应图，最后对活性成分分子结构特征进行阐释。结果 从TJQW组方中得到159个化合物，基于活性成分-阳性药物-疾病三者交联得到18个核心节点蛋白，结合新近报道的4个COVID-19相关蛋白共22个靶标构成了COVID-19靶标。虚拟筛选结果显示每个靶标蛋白有14个及以上化合物与其应答，其中与NR1I2蛋白结合效应的分子多达64个，多途径、多成分、多靶点阐释了TJQW抗COVID-19物质基础，共筛选得到与疾病核心靶标结合较好的前30个分子，黄酮类起主导作用。结论 从“关键活性药效分子-疾病关键节点靶标-相关生物学通路”角度来揭示TJQW多个成分、多个靶点和多条通路机制治疗 COVID-19的作用机制药效物质基础，并筛选出前30个活性先导物，为该组方的临床应用和深入开发提供参考。

• 高强度炎症反应诱导关节软骨特异性瓜氨酸化抗原表达

  覃桂城,林晓吟,梁培彬,李艳鹏,周 春,Kutty Selva Nandakumar,Rikard Holmdahl

  目的 探讨关节软骨蛋白瓜氨酸表位的表达情况，以及瓜氨酸化表位对抗瓜氨酸蛋白抗体（ACPAs）的免疫应答的影响。方法 体外诱导实验：实验组加不同浓度梯度的脂多糖、热灭活细菌（大肠杆菌、金色葡萄球菌）或二型胶原（CII）特异性单克隆抗体等不同刺激物诱导体外培养关节软骨蛋白瓜氨酸化，等量PBS作为对照组，利用特异性结合瓜氨酸化表位的单克隆抗体ACC4（IgG1）进行免疫组织化学染色，ACC1（IgG2a）作为阳性对照，Hy2.15（IgG1）和L243（IgG2a）分别作为同型阴性对照，显微镜下观察瓜氨酸化蛋白表达；体内诱导实验：SD大鼠右膝关节内注射不同浓度脂多糖作为实验组，左膝关节内注射等量PBS为对照组，3 d后取膝关节组织，制成冰冻切片，利用上述抗体进行免疫组化染色，显微镜下观察瓜氨酸化蛋白表达；建立不同种系的胶原诱导性关节炎（CIA）小鼠模型，评价其疾病发生率和严重程度，同时收集小鼠血清与高滴度抗瓜氨酸化抗体的类风湿性关节炎患者血清，采用液相芯片技术检测小鼠及类风湿患者血清中抗瓜氨酸化蛋白抗体水平，并用免疫组织化学检测关节炎小鼠关节软骨瓜氨酸化蛋白的表达水平。结果 特异性结合瓜氨酸化CII 表位的ACC4抗体未能结合至经不同诱导的关节软骨组织；与健康对照组相比，ACC4抗体和含高滴度的抗瓜氨酸化蛋白抗体的类风湿性关节炎患者血清中的抗体均能结合至CIA小鼠关节炎症关节软骨周围的滑膜组织；成功构建不同种系小鼠类风湿性关节炎模型，其发病率和疾病严重程度无统计学差异（P>0.05）；液相芯片技术分析结果显示，小鼠血清中的抗瓜氨酸化抗体低表达或几乎不表达，但抗CII三螺旋结构多肽的抗体反应性较强。结论 轻度急性炎症反应不足以引起关节软骨蛋白瓜氨酸化，其特异性抗原表位的表达需要高强度的炎症反应。二型胶原诱导的小鼠关节炎模型中炎症关节软骨蛋白可表达瓜氨酸化抗原表位，但瓜氨酸化抗原表位的表达不足以引起小鼠体内抗瓜氨酸化抗体的免疫应答，其免疫应答需要更多的刺激信号来诱导。

• 下调Pannexin2通道能增强顺铂诱导睾丸癌（I-10）细胞凋亡

  姚言雪,董淑英,朱晨露,胡 淼,杜宝龙,童旭辉

  目的 探讨Pannexin2（Panx-2）蛋白在睾丸癌细胞中的表达水平以及干扰Panx-2表达对顺铂诱导睾丸癌（I-10）细胞凋亡的影响。方法 免疫印迹法Panx-2蛋白在睾丸癌细胞中的表达水平；以睾丸癌I-10细胞株为研究对象，实验分为转染试剂对照组（mork组）、阴性对照质粒组（NC组）、干扰Panx-2组（shRNA1质粒组和shRNA2质粒组），采用免疫印迹法验证Panx-2的表达；在转染细胞中添加16 μmol/L的顺铂诱导细胞死亡，通过MTT法分别检测细胞在24、48、72 h的存活率，集落克隆法检测细胞的集落形成能力；在顺铂（16 μmol/L）处理8 h后，采用AnnexinV/PI双染法检测细胞的早期凋亡；在顺铂（16 μmol/L）作用24 h后，免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白caspase 3、Bcl-2和Bax的表达水平。结果 与I-10细胞和Tcam-2细胞相比，I-10/DDP细胞（P< 0.001）和Tcam-2/DDP细胞（P<0.01）中Panx-2的表达显著增加；干扰Panx-2基因后，免疫印迹结果显示，与NC组相比，shRNA1和shRNA2组中Panx-2的表达量下降（P<0.05）；MTT法显示shRNA1和shRNA2组细胞的存活率均低于NC组（P<0.001）；在含顺铂培养基的培养下，集落克隆法显示shRNA1和shRNA2组细胞的集落形成能力低于NC组（P<0.001）；AnnexinV/PI双染法显示shRNA1和shRNA2组的早期凋亡率（P<0.01）均低于NC组；免疫印迹结果显示，与NC组相比，shRNA1和shRNA2组中凋亡相关蛋白caspase 3表达升高（P<0.05），Bcl-2表达降低（P<0.01），Bax表达升高（P<0.05）。结论 下调Pannexin2通道能增强顺铂诱导睾丸癌（I-10）细胞凋亡。

• 维生素E通过抑制铁坏死减少放射性神经损伤

  任 陈,李旋子,杜莎莎

  目的 背景 探索维生素E在海马神经元放射性损伤过程中的作用并探讨其可能机制。方法 HT-22细胞及U251细胞体外培养，分别设置对照组：细胞正常培养；单纯放疗组（RT）：放射线单次照射8 Gy；VE组：维生素E（200 μmol/L）处理24 h；Fer-1 组：铁坏死抑制剂（Ferrostatin-1，5 μmol/L）处理24 h；RT+VE组：放疗联合维生素E处理；RT+Fer-1组：放疗联合铁坏死抑制剂处理；RT + ZVAD 组：放疗联合凋亡抑制剂（ZVAD-FMK, 2 μmol/L）处理；RT + Necro-1 组：放疗联合坏死性凋亡抑制剂（nerosulfonamide, 100 μmol/L）处理。MTT实验测定各组细胞生长情况。检测铁坏死相关氧化应激指标包括还原型谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、脂质活性氧簇（Lipid ROS）以及细胞内铁离子水平评估各组细胞铁坏死状态。实验小鼠根据随机数表法随机分为4组（3只/组）：对照组：小鼠正常喂养；VE组：维生素E（500 U/kg）饮食喂养6周；RT组：小鼠全脑单次16 Gy照射；RT+VE组：放疗联合维生素E处理。观察各组小鼠水迷宫实验的探索时间及探索距离评估小鼠认知功能状况。结果 与RT组相比，RT+VE组HT-22细胞存活增加（P<0.05），U251无明显改变（P>0.05）；RT+Fer-1组HT-22细胞存活也明显增加（P<0.05），RT+ZVAD组和RT+Nerco-1组HT-22细胞存活无改变（P>0.05）。与对照组相比，RT组HT-22细胞铁坏死相关氧化应激水平上升，包括GSH下降、MDA及Lipid ROS水平上升，细胞内铁离子水平增加（P<0.05）；而与RT组相比，RT+VE组及RT+Fer-1组能逆转铁坏死相关氧化应激水平改变（P<0.05）。与对照组及VE组比较，RT组小鼠水迷宫实验中游行的距离和探索时间较RT组明显增加（P<0.05）；RT+VE组小鼠相比于RT组水迷宫探索距离及时间均有明显下降（P<0.05）。结论 铁坏死，而非凋亡和坏死性凋亡，是海马神经元放射性损伤过程中的重要因素，维生素E能通过抑制铁坏死减少放射性神经损伤。

• 超氧化物歧化酶2在乳腺癌中的表达及其临床意义

  李金平,刘尧邦,刘奇伦

  目的 评估超氧化物歧化酶2（SOD2）在乳腺癌中表达及预后价值，揭示其在乳腺癌发生发展中可能的作用机制。方法 采 用R 软件对TCGA数据进行生信分析，用Wilcoxon秩和检验和Wilcoxon符号秩和检验分析SOD2在乳腺癌中的表达及临床相关性，应用KEGG的基因集进行基因富集分析（GSEA），然后通过STRING数据库构建蛋白质相互作用网络，用Cytoscape 软件进行关键基因筛选，两基因相关性使用Pearson’s相关性分析。通过免疫组化和 RT-qPCR 法对2018~2019年收治的原发性乳腺癌组织、癌旁组织样本各60例进行临床验证。结果 SOD2在乳腺癌组织中的表达明显低于乳腺正常组织，其表达与乳腺癌TNM分期和腋窝淋巴结转移显著相关（P<0.05）。Kaplan-Meier法生存分析显示SOD2高表达患者的无复发生存、无远处转移生存和后进展生存期均显著低于SOD2低表达者（P<0.05）；GSEA富集分析结果显示SOD2在JAK-STAT信号通路中发挥重要的生物学作用。构建PPI网络筛选出关键基因IL10和STAT4，二者均与SOD2呈正相关性。SOD2在临床乳腺癌组织样本中高表达，其表达与腋窝淋巴结有无转移、雌激素受体表达及雄激素受体表达有显著性差异（P<0.05）。结论 SOD2在乳腺癌中的表达与TNM分期、腋窝淋巴结转移显著相关，SOD2可能通过调控IL10和/或STAT4介导JAK/STAT信号通路影响乳腺癌细胞的增殖、侵袭和转移。

• 成人COVID-19重症及危重症患者的临床特征分析

  谢维当,朱世杰,刘亚楠,白煜佳,傅卫军,陈 辉,陈仲清,张建武

  目的 探讨新型冠状病毒肺炎（COVID-19）重症及危重症患者的临床特征。方法 对2020年1月~2020年3月湖北省洪湖市人民医院75例COVID-19重症及危重症患者临床资料进行回顾性分析。结果 75例患者重型43例，危重型32例，男性41例 （54.67），女性34例（45.33%），年龄58.1±15.9岁，49.3%患者有基础疾病史，主要临床表现为发热（78.67%）和咳嗽（70.67%）等。与重型患者比较，危重型患者在年龄>60岁患者比例、入院时WBC计数、hsCRP、PCT、凝血酶原时间、D二聚体、ALT、CRE、LDH、cTnI、NT-proBNP等均较重症组明显升高，有显著性统计学差异（P<0.05）。单因素logistic 回归分析结果显示，年龄>60岁、WBC计数升高、hs-CRP升高、凝血酶原时间延长、D二聚体升高、NT-proBNP升高、cTnI升高是 COVID-19 危重型的相关因素 （P均<0.05）。进一步多因素logistic回归分析结果显示，年龄>60岁（OR=8.165，95%CI 1.483，45.576，P=0.017），凝血酶原时间延长（OR=7.516，95%CI 2.568，21.998，P=0.006）和NT-proBNP 升高（OR=6.194，95%CI 1.305，29.404，P=0.022）是 COVID-19 危重型的独立相关因素。结论 年龄大于60岁、凝血酶原时间延长和NT-proBNP升高是COVID-19危重症患者的重要临床特征，可能为危重症患者的早期预警因素。

• 当归拈痛汤调控Fas/caspase-8通路促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡

  赵 帆,李佳钰,陆麒瑾,陈恩生,袁立霞

  目的 探究当归拈痛汤（DGNTD）对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞（FLS）凋亡及TNF受体超族成员6（Fas）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8（caspase-8）通路的影响。方法 收集临床RA患者的滑膜组织，无菌条件下采用酶解法分离并培养出FLS细胞。采用免疫荧光染色法对细胞进行鉴定。FLS细胞分为空白组（NC组）、DGNTD低剂量组、DGNTD中剂量组、DGNTD高剂量组、Fas抑制剂联合DGNTD组（KR-33493+DGNTD组）。NC组：10%空白血清干预FLS细胞；DGNTD低剂量组：10% DGNTD低剂量含药血清干预 FLS 细胞；DGNTD 中剂量组：10% DGNTD 中剂量含药血清干预 FLS 细胞；DGNTD 高剂量组：10% DGNTD高剂量含药血清干预FLS细胞；KR-33493+DGNTD组：20 μmol/mL KR-33493+10% DGNTD高剂量含药血清干预FLS细胞。通过MTT法检测不同剂量DGNTD对FLS细胞增殖的影响；Hoechst 33342法和Annexin V-FITC/PI流式细胞术分别检测FLS细胞凋亡特性和凋亡率；qPCR和Western blot分别检测FLS细胞Fas、Fas相关蛋白（FADD）、caspase-8、caspase-3的mRNA和蛋白表达量。结果 免疫荧光实验证明本实验提取出的细胞为FLS细胞；MTT结果显示DGNTD含药血清随着剂量和干预时间的增加可显著抑制FLS的增殖（P<0.05）；Hoechst33342和流式细胞术结果显示不同剂量的DGNTD含药血清可以显著促进FLS细胞凋亡（P<0.05）；qPCR和Western blot均显示不同剂量的DGNTD含药血清可以显著提高Fas、FADD、caspase-8、caspase-3 mRNA和蛋白的表达水平（P<0.05）；进一步发现，Fas蛋白抑制剂（KR-33493）可以逆转DGNTD对FLS细胞的上述作用（P<0.05）。结论 当归拈痛汤可能通过激活Fas/caspase-8通路来诱导FLS细胞凋亡。

• 东方栓孔菌多糖对小鼠的降血糖和降血脂作用

  周凌云,鲁 斌,孙 玉

  目的 探讨东方栓孔菌多糖组分的降血糖和降血脂作用。方法 东方栓孔菌粗多糖经DEAE纤维素柱分离，利用水和0.5 mol/L NaCl溶液冲洗，收集其中多糖含量较高的组分DEAE-水和DEAE-盐，两部分分别经Sephadex G-100凝胶柱得到4个多糖组分TOPW-1，TOPW-2，TOPS-1，TOPS-2。通过2,2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）法考察各多糖组分抗氧化活性，对紫外检测信号一致的收集液TOPW-1，TOPS-1利用HPGPC测定相对分子质量，对均一的TOPW-1通过酸水解结合HPLC分析测定单糖组成。体外检测TOPW-1，TOPS-1对DPP4（二肽基肽酶-4）抑制活性，脂肪细胞摄取葡萄糖能力和对胰脂肪酶的抑制活性，初步判断降糖作用，并建立高脂饲料高血脂小鼠模型和链脲霉素（STZ）高血糖小鼠模型，实验动物分为正常组，模型组，模型+TOPS-1高、中、低剂量组（0.1，0.2，0.4 g/kg），模型+丹参（0.5 g/kg）组和模型+消渴丸（5丸/kg）组，后两组为阳性对照组，灌胃给药。采用血糖测试仪和全自动生化分析仪分别测定血清血脂指标[总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）]和血糖水平，评价TOPS-1降血糖和降血脂作用，探讨可能的作用机制。结果 TOPW-1为均一组分，是由D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖及D-岩藻糖组成的多糖，但TOPW-1的抗氧化及体外降血糖作用均不显著。TOPS-1为非均一多糖，具有较强的抗氧化能力（在500 μg/mL浓度下，其清除率达到90.15%），对胰脂肪酶有一定的促进作用，进一步动物实验表明TOPS-1中剂量组（0.2 g/kg）能显著降低高血糖小鼠的空腹血糖值及高血脂小鼠的TC、TG和LDL-C含量，且给药过程中未出现小鼠死亡。TOPS-1低、高剂量组降血糖作用不显著，高剂量组给药存在一定增加小鼠死亡率的可能。结论 东方栓孔菌多糖具有抗氧化，降血糖和调血脂的作用，推测其降糖作用与降低氧化应激水平，减少糖尿病人脂肪代谢紊乱有关。

• 血小板生成素通过修复化疗后骨髓内皮祖细胞促进巨核细胞造血

  曾晓媛,焦营营,李宗鹏,张玉娇,叶洁瑜

  目的 探索血小板生成素（TPO）能否通过修复大剂量化疗后患者的骨髓内皮祖细胞（BM-EPC）恢复其对巨核细胞的造血支持作用。方法 选取23例血液系统恶性肿瘤患者化疗后30 d的骨髓以及10例健康人骨髓作为实验标本。采用表面特异性抗原CD34，CD309，CD133对BM-EPC进行鉴定；使用CCK8分析TPO是否可促进血液肿瘤患者化疗后BM-EPC增殖及其最佳作用浓度。设置TPO处理组为实验组，无TPO为对照组，健康人BM-EPC为健康对照组；通过DiL-Ac-LDL摄取及FITC-UEA-I结合实验检测实验组、对照组和健康对照组的BM-EPC数量。利用成管及迁移实验评估3组的BM-EPC功能；分别将实验组和对照组BM-EPC与巨核细胞共培养，利用流式细胞术检测巨核细胞增殖情况。结果 实验组BM-EPC高表达CD34/CD133/CD309；TPO可促进BM-EPC增殖，最佳作用浓度为100 μg/L。免疫荧光双标实验显示，实验组BM-EPC数量较对照组明显增加（P<0.05）。实验组成管能力及迁移能力较对照组增强（P<0.05）。共培养后，实验组巨核细胞数多于对照组（P=0.013）。结论大剂量化疗后患者BM-EPC受损，TPO具有直接刺激巨核系统造血作用，还可能通过促进BM-EPC增殖，修复其功能，从而恢复BM-EPC对巨核细胞的造血支持作用。

• PCSK9抑制剂对不同基线水平的甘油三酯降低效果不同

  彭彦人,陈国军,郑 华

  目的 本研究旨在探讨不同甘油三酯（TG）基线水平下，使用前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶9（PCSK9）抑制剂对甘油三酯的影响。方法 选取2019年2月~2020年3月在南方医科大学南方医院、中山大学附属第一医院、佛山市南海区人民医院、玉林市第一人民医院及广东省人民医院等5家医院使用PCSK9抑制剂（Evolocumab，瑞百安）治疗的共59名患者，根据PCSK9抑制剂治疗前TG水平分为4组：正常组（TG<1.70 mmol/L，n=24），轻度升高组（1.70≤TG<2.29 mmol/L，n=11），中度升高组（2.30≤TG<5.63 mmol/L，n=13）及重度升高组（TG≥5.64 mmol/L，n=11），比较不同分组下PCSK9抑制剂对TG的影响。结果 PCSK9抑制剂治疗后，不同TG分组间TG改变度不同，在TG正常组和轻度升高组中，TG降幅较小且TG前后变化无统计学意义，但在TG中度升高组及重度升高组，TG降幅较为明显且前后变化有统计学意义（P<0.005）。结论 PCSK9抑制剂对不同基线水平的TG影响不同，基线较低时可能无明显作用，但在基线较高时降幅较大。

• 鳖甲煎丸对二乙基亚硝胺诱导的大鼠肝癌的抑制作用及机制

  冯明辉,贺松其,黄松泽,林佳鑫,杨惠琳,王嘉吉,庞 杰

  目的 研究鳖甲煎丸对二乙基亚硝胺（DEN）诱导大鼠肝癌的抑制作用及其对炎症小体相关通路的影响，探讨其肿瘤抑制作用与炎症小体信号通路的关系。方法 65只雄性SD大鼠平均分为5组（13只/组）：对照组（Con）、DEN模型组（DEN）、鳖甲煎丸低剂量治疗组［DEN+BJJ-L，0.55 g/（kg· d）］、鳖甲煎丸中剂量治疗组［DEN+BJJ-M，1.1 g/（kg· d）］及鳖甲煎丸高剂量治疗组（DEN+BJJ-H，2.2 g/kg· d）。在使用DEN造模4周后，分别使用鳖甲煎丸低、中、高3种剂量灌胃处理，继续造模并持续给药12周 后，收集组织通过HE和Masson染色观察肝脏组织病理形态学改变，通过ELISA检测了大鼠血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）和总胆红素（TBIL）含量以判断肝损伤，利用ELISA检测肝脏组织中氧化应激相关指标，通过免疫印迹实验及ELISA方法对炎症小体相关通路的分子表达进行检测。结果 鳖甲煎丸可显著抑制大鼠肝脏肿瘤生长，HE和Masson染色结果显示鳖甲煎丸可降低大鼠肝组织纤维化程度，减少癌变细胞和炎性细胞浸润。ELISA显示，鳖甲煎丸可显著降低DEN处理后大鼠血清中增加的ALT、AST、ALP和TBIL含量，同时显著升高肝组织中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶含量，并降低丙二醛水平。对炎症小体通路相关分子的检测结果表明，鳖甲煎丸处理可显著降低肝脏NLRP3、ASC、caspase-1、pro-IL-1β、pro-IL-18、IL-1β和 IL-18表达水平，且呈现剂量依赖相关。结论 鳖甲煎丸对二乙基亚硝胺诱导大鼠肝癌的有抑制作用，这种抑制作用呈剂量依赖且这种抑制作用与抗氧化能力的增强及显著下调炎症小体相关通路相关。

• 生酮饮食抑制裸鼠皮下移植人神经母细胞瘤的生长

  贺娇娇,吕麟亚,彭俊伟,李长春,孔祥如,章 均,彭 亮

  目的 探究生酮饮食（KD）抑制人神经母细胞瘤裸鼠皮下移植瘤生长的作用。方法 选取雌性BALB/c-nu裸鼠建立人神经母细胞瘤细胞株SH-SY-5Y皮下移植瘤模型，当移植瘤体积约250 mm3时，随机分为标准饮食组（SD，标准饲料喂养+PBS60 mg· kg-1· d-1）、生酮饮食组（KD，生酮饲料喂养+PBS 60 mg· kg-1· d-1），环磷酰胺联合生酮饮食组（CP+KD，生酮饲料喂养+环磷酰胺mg· kg-1· d-1），每组8只。测量瘤体长径、短径，计算移植瘤体积。检测裸鼠体质量、血糖、血酮体（β-羟基丁酸）水平和肝脏脂肪变性。Western blot检测凋亡蛋白caspase3、caspase8；免疫组化（IHC）检测增殖蛋白Ki67。透射电镜观察自噬体；IHC和Western blot检测自噬蛋白Beclin1、LC3A/B及P62。结果 种瘤后第28天，KD和CP+KD组裸鼠生存期较SD组显著延长（P< 0.001）；接种第22 天，KD组瘤积小于SD组（P<0.05）；接种第16、19、22 天，CP+KD组瘤积明显小于SD组（P<0.01）。接种第19天，KD组裸鼠体质量较SD组减轻（P<0.05），其余测量时间点上无显著差异（P>0.05）；接种第13天，KD组血糖较SD组下降（P< 0.05），其余测量时间点上的KD和CP+KD组血糖与SD组无显著差异（P>0.05）；KD和CP+KD组血酮全程较高（P<0.05），而血糖/血酮值较低（P<0.05）；KD和CP+KD组裸鼠肝脏脂肪变性评分高于SD组（P<0.05）。Ki67和凋亡蛋白在各组肿瘤组织中均表达。透射电镜下KD组中自噬体较多于SD组；KD组P62蛋白表达明显低于SD组（P<0.01），而Beclin1、LC3A/B蛋白表达增加（P<0.05），与IHC结果较一致。结论 KD能抑制人神经母细胞瘤裸鼠移植瘤的生长，其可能的抗肿瘤机制与细胞自噬相关。

• 正畸牵引力对牙釉质层微观结构的影响

  李祉欣,张凯亮,李瑞萍,许龄丹,何璐璐,庞晓婵,卢纪元,曹宝成,张宝平

  目的 探讨正畸牵引力对牙釉质层微观结构的影响，为口腔正畸临床实践提供力学依据。方法 选取48颗离体前磨牙，随机分为6组，8颗/组。A组为空白对照组，仅使用光固化粘接法粘接正畸托槽，不加任何力。B1、B2、B3组均使用光固化粘接法粘接正畸托槽，分别加载50 g力持续6月，200 g力持续6月和200 g力持续1月。C1、C2组分别使用光固化粘接和化学固化粘接技术粘接托槽。对试样组的牙齿进行不脱钙环氧树脂包埋，经硬组织切片机切片后，使用扫描电子显微镜（SEM）、原子力显微镜（AFM）及能谱仪（EDS）对断裂界面形态和元素组成进行分析。结果 实验组离体牙相比对照组粘合剂残余指数较大，SEM观察到牙釉质表面出现微裂纹和空隙结构，AFM显示不同粘接方式釉质表面形成与打磨方向呈角度的微裂纹。实验组随托槽上加的力值增大，牙釉质界面微裂隙越多。界面粗糙度方面A与C2组具有差异（P<0.05）；峰-谷距离方面，A、C1和C2组三者具有显著差异（P<0.05）。结论 正畸牵引力改变了正常牙釉质层的微观结构。

• 三维可视化联合3D打印在Bismuth-Corlette III、IV型肝门部胆管癌个体化精准外科治疗中的应用

  曾 宁,杨 剑 ,项 楠,文 赛,曾思略,齐 硕,祝 文,胡浩宇,方驰华

  目的 探讨三维可视化3D打印在Bismuth-Corlette Ⅲ、Ⅳ型肝门部胆管癌个体化精准外科治疗中的应用价值。方法 回顾性分析南方医科大学珠江医院肝胆外科2016年5月~2019年3月在三维可视化3D打印指导下10例肝门部胆管癌外科手术治疗患者。收集患者薄层CT数据，进行三维重建后打印3D模型，观察肿瘤与肝内胆管、肝动脉、门静脉和肝静脉系统的三维立体关系，进行术前模拟手术并制定手术方案，将3D打印模型带入手术室进行术中实时导航，指导手术治疗。结果 10例患者均成功构建三维可视化打印3D模型，进行 Bismuth-Corlette三维可视化分型：Ⅲa型4例、Ⅲb型4例、Ⅳ型2例，其中门静脉变异4例，肝动脉变异3例。门静脉“三分叉”变异2例；“工字型”变异1例；1例罕见的门静脉右前支缺如变异；2例既有门静脉变异又出现肝动脉变异。肝动脉变异3例，1例肝左动脉起自胃左动脉，2例肝右动脉起自肠系膜上动脉。其中Ⅲb型4例行左半肝切除术; Ⅲa型4例行右半肝切除；Ⅳ型1例行围肝门区域切除，1例行左半肝切除术。此组患者术前三维可视化3D打印模型及术前规划与术中情况均一致。手术时间452±75.12 min，术中出血量356±62.35 mL，术后住院时间15±4.61 d。术后出现胆漏1例,少量胸腔积液3例，经通畅引流及内科治疗后康复出院，围手术期无肝功能衰竭及死亡病例。结论 三维可视化联合3D打印对Bismuth-Corlette Ⅲ、Ⅳ肝门部胆管癌进行准确的术前评估、手术规划，优化手术方案，尤其在肝内血管变异情况下，有助于提高手术安全性，降低手术风险。

• 医学生文化信仰及其与抑郁的关系

  肖 蓉,于馨淼

  目的 研究医学生文化信仰状况及其与抑郁的关系。方法 使用中国传统文化信仰量表（CTCBS）和9条目患者健康问卷（PHQ-9）对977名医学生采用方便抽样进行网络问卷调查。结果（1）医学生文化信仰总体水平为48.34±7.31，54.4%的医学生拥有明确的文化信仰；（2）医学生文化信仰水平不存在性别、居住地和经济状况上的差异，但有理想信念者的文化信仰显著高于无理想信念者［48.87±7.40 vs 47.09±6.95，P<0.001］；（3）医学生文化信仰水平与抑郁呈负相关（r=-0.215，P<0.001）；高文化信仰者的抑郁情绪表现更少［6.09±3.88 vs 7.42±3.82 vs 9.00±4.90，P<0.001］。无抑郁者的总体文化信仰和各维度表现均显著高于有抑郁者（P<0.01）。文化信仰程度越低者的抑郁筛查阳性率越高（37.8% vs 18.8% vs 12.2%）。结论 医学生具有较高水平的文化信仰，高文化信仰有利于减轻医学生的抑郁症状，降低抑郁的发病率。在医学生人文素质教育中应增强中国传统文化教育。

• α7nAChR基因敲除HIV-1gp120转基因小鼠模型的构建

  胡彤彤,龚泽龙,万 宇,李煜彬,高雪锋,伦静娴,黄胜和,曹 虹

  目的 通过构建双基因编辑小鼠模型（α7R-/-/gp120+），为探索α7乙酰胆碱受体（α7 nAChR）介导gp120中枢神经毒性的作用和机制提供研究基础。方法 α7 nAChR基因敲除小鼠（α7R-/-）与HIV-1 gp120转基因小鼠（gp120+）杂交（F0），从产生的F1小鼠中，选取基因型为α7R+/-/gp120+的小鼠进一步交配，得到F2小鼠。PCR法鉴定和筛选F3小鼠基因型，免疫组化分析双转基因动物模型蛋白表达；体外实验使用gp120蛋白和α7 nAChR抑制剂处理小胶质细胞，ELISA检测各组IL-1β与TNF-α表达情况。结 果 F3小鼠的PCR结果符合预期，其中有2只双基因编辑成功的小鼠。免疫组化结果显示双基因编辑小鼠（α7R-/-/gp120+）的脑组织缺乏α7 nAChR的同时高表达gp120蛋白。体外实验结果表明Gp120可促进小胶质细胞分泌IL-1β与TNF-α，而抑制α 7nAChR后IL-1β与TNF-α表达明显降低（P<0.001）。结论 α7R-/-/gp120+双基因修饰小鼠成功构建，且具有稳定遗传的特点，可为后续探索α7 nAChR介导gp120中枢神经毒性的作用和机制提供重要的动物模型。

• 有氧运动联合HWTX-I调控II相解毒酶对阻塞性黄疸致中枢神经系统损伤的影响

  梁 微,陈嘉勤,陈 伟

  目的 探讨有氧运动联合HWTX-I介导Keap1-Nrf2-ARE途径对II相解毒酶HO-1和NQO1的影响，以及在阻塞性黄疸小鼠中枢神经系统损伤中的保护作用。方法 50只雄性KM小鼠随机分为5组，10只/组：空白组（GO），模型组（M），有氧运动组（T），HWTX-I组（H），有氧运动联合HWTX-I组（TH）。M组、T组、H组、TH组小鼠均采用手术线直角悬挂阻断胆总管72 h构建阻塞性黄疸模型。通过有氧运动及尾静脉注射HWTX-I（0.05 µg/g）进行干预，采用一般行为学观察及Clark神经功能评分、ELISA酶联免疫、脑组织nissl染色、海马组织Western blot检测、mRNA检测及肝组织mRNA表达谱测序分析，探讨有氧运动及HWTX-I对阻塞性黄疸小鼠脑组织中枢神经损伤的改善效果。结果 M组胆总管悬挂72 h后出现明显黄疸症状，皮肤局灶黄染面积增大，尿液变黄及粪便呈浅灰色，Clark神经功能评分显著升高（P<0.01）；与M相比，T组、H组、TH组血清肝功能指标ALT、AST、TBIL和TBA含量水平下降（P<0.01），海马组织5-HT、BDNF含量上升，S100B、NSE含量下降（P<0.01），上述除肝功能指标外，有氧运动与HWTX-I间均存在协同效应。镜下显示，M组脑组织皮质神经细胞尼氏小体大量丢失，有明显空泡、深染，大量核固缩、核坏死。T组、H组针对上述症状明显改善，TH组干预效果最佳。相比M组，T组、H组、TH组脑组织中Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA表达及蛋白表达水平显著升高（P<0.01，P<0.05），且有氧运动与HWTX-I间均存在协同效应。Illumina高通量测序筛选肝组织神经相关因子及关联分析显示，差异表达因子主要富集于神经活性配体-受体相互作用、GABA能突触、多巴胺能突触、突触小泡循环及轴突指导等神经调控通路，涉及组织细胞神经细胞信号转导、凋亡抑制、免疫反应、毒性等，有氧运动与HWTX-I可显著增加神经元损伤修复、增殖等相关信号通路的富集。且有氧运动与HWTX-I间均存在协同效应。结论 7周有氧运动或HWTX-I尾静脉注射可通过Keap1-Nrf2-ARE途径上调II相解毒酶HO-1和NQO1的表达，增强机体阻塞性黄疸后脑组织中枢神经的保护作用，且有氧运动与HWTX-I联合应用效果最佳。

• 食管鳞癌患者来源移植瘤模型：B-NDG®小鼠与BALB/c裸鼠的比较

  管柳柳,邹晴晴,刘 倩,陈斯泽

  目的 探讨不同品系的小鼠对于食管鳞癌患者来源的异种移植瘤（ESCC PDX）成瘤率的影响，为ESCC的临床个体化治疗建立更优势的临床前动物模型。方法 收集22例ESCC患者手术切除的肿瘤组织，分别利用B-NDG®（NSG）鼠和BALB/c裸鼠来建立ESCC PDX模型。通过观察移植瘤成瘤情况，测量移植瘤体积，绘制生长曲线图，计算成瘤率和成瘤时间，HE染色、免疫组化及基因组测序等实验，比较移植瘤组织与原患者肿瘤组织的一致性。结果 22例标本的PDX模型移植结束，发现NSG小鼠ESCC肿瘤发生率（50%，11/22）高于BALB/c裸鼠（18.18%，4/22）（P=0.027）。NSG小鼠的平均肿瘤成瘤时间为75.95 d短于BALB/c小鼠的91.67 d，差异具有统计学意义（P<0.001）。在NSG小鼠和BALB/c小鼠异种移植模型中，肿瘤均能保持病人ESCC肿瘤组织的形态学特征。基因分析结果显示，与BALB/c裸鼠相比，NSG小鼠肿瘤与亲代患者肿瘤样本间的基因相似度更高（P<0.0001）。结论 成功构建了NSG小鼠和BALB/c裸鼠ESCC皮下移植瘤模型，并发现NSG小鼠对于模型成功的建立更具有优势。

• 不同结扎材料对慢性压迫性损伤模型胶质细胞活化的影响

  王 琛,陈 鹏,林东升,陈 弋,吴智兵,林兴栋

  目的 探究不同结扎材料对慢性压迫性损伤（CCI）模型行为学表现、脊髓胶质活化及相关炎症因子表达的影响。方法 44只SD大鼠随机分为对照组（n=15）、丝线CCI组（n=15）和铬线CCI组（n=14），术后3、7、11、15 d检测大鼠损伤侧机械缩足反射阈值（MWT）及热缩足反射阈值（TWL）。并采用特殊染色、Western blot法及RT-PCR法检测大鼠损伤部位病理改变、胶质细胞及炎性细胞因子的表达。结果 术后3~15 d，丝线组与铬线组的MWT和TWL水平较对照组显著降低（P<0.05），术后3 d铬线组的TWL较丝线组出现显著降低（P<0.05）。坐骨神经染色结果显示丝线组与铬线组均出现了神经干损伤及脱髓鞘改变。Western blot法及RT-PCR法检测结果提示丝线组与铬线组大鼠小胶质细胞标记物（CD11b）及胶质纤维状酸性蛋白（GFAP），以及IL-1β 及TNF-α mRNA表达水平接近，并显著高于对照组（P<0.05），而铬线组IL-6 mRNA表达高于丝线组（P<0.05）。结论 丝线和铬线制备的CCI模型均产生了胶质细胞激活作用，其中铬线组的炎症反应更加强烈。

• 成人普通变异型免疫缺陷病13例并文献复习

  龚胜兰,蒲 银,谢玲俐,杨晓娅,毛 辉

  目的 探讨普通变异型免疫缺陷病的临床特点、免疫学特征、治疗方法和预后。方法 回顾性分析我院 2010.01.01~2019.09.26间诊断为普通变异型免疫缺陷病的13例住院患者的临床资料，包括临床表现、实验室检查、影像学检查、病理检查、治疗等。结果 依据2016年国际专家共识中普通变异型免疫缺陷病的诊断标准共纳入13例患者，发病年龄是24.46±16.82岁，诊断年龄是32.54±14.86岁，诊断延迟中位数5年（IQR：2~15年）。患者主要表现为反复感染，其中反复呼吸道感染 10例 （76.9%），反复腹泻3例（23.1%），3例（23.1%）患者并发自身免疫性疾病，10例（76.9%）患者并发慢性呼吸系统疾病。所有患者IgG、IgA、IgM均降低。10例（76.9%）患者CD4+T细胞比例降低，11例（84.6%）CD8+T细胞比例升高，10例（76.9%）CD4/CD8降 低。58.3%（7/12）的患者补体C3降低，33.3%（4/12）的患者补体C4减低。12例（92.3%）患者在院内给予静脉输注丙种球蛋白治疗，以及相应的对症治疗。1例患者因消化大出血死亡，其余患者好转出院。结论 普通变异型免疫缺陷病临床表现多样，以反复的呼吸道感染最为常见。实验室检查中IgG降低，常伴IgA、IgM降低。目前临床上以免疫球蛋白替代治疗和对并发疾病的对症治疗为主。

• 3D打印骨科手术导板的临床应用进展

  陆 声,辛 欣,黄文华,李严兵

  3D打印骨科手术导板是根据术中需要，通过对术前获取的影像学数据进行三维重建，采用计算机辅助设计(CAD)和3D打印技术制备，能够在手术过程中精准定位相互空间距离、成角关系、方向和深度的3D打印辅助手术器械。3D打印骨科手术导板技术在骨科的应用，实现了手术设计规划从影像学二/三维图形向立体三维实体的跨越，为现代骨科学提供了一种个性化、精准化治疗的新方法。本文综合介绍3D打印导板技术国内外发展历史、临床应用及其基本分类作用，分析了3D打印导板的优势与不足，提出现阶段存在的问题，展望3D打印导板的未来。