南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2023年第3期

• 钢板内固定系统重建椎管的生物力学分析

  陈建民, 刘国印, 包天翼, 柏天婷, 张二来, 赵建宁

  目的 比较椎板切除回植后应用不同钢板内固定系统（微H钢板和微L钢板）重建椎管的生物力学性能。方法 应用3D打印技术打造正常腰4（L4）椎体模型，对L4椎体模型实施全椎板切除，根据椎板回植椎管重建 (RL-SCR) 内固定方式的不同分成微H钢板（H-MFS）组和微L钢板（L-MFS）组；分别通过静态压缩和动态疲劳压缩实验对两组RL-SCR模型进行加载直至钢板失效、断裂或回植椎板塌陷；静态压缩实验采用速度控制模式，动态疲劳压缩实验采用载荷控制模式。同时，通过建立正常L3-L5有限元模型，在验证该模型有效性的前提下进行RL-SCR的生物力学研究；根据处理方式不同分为正常赋值组、椎板切除组、H-MFS组和L-MFS组；在相同载荷下，模拟前屈、后伸、左弯、右弯、左旋和右旋6个方向的生理活动条件，对各组L3-L4和L4-L5的活动度 (ROM)变化进行评估。结果 RL-SCR静态压缩实验中，H-MFS组的持续屈服载荷大于L-MFS组（PL-MFS组（PH-MFS组>正常赋值组。结论 椎板切除会破坏脊柱后柱结构，从而影响其生物力学稳定性，而应用RL-SCR内固定的方式可有效维持脊柱生物力学的稳定性，且与微L钢板相比，微H钢板在维持椎管完整性和生物力学性能上的优势更明显。

• DTX2通过Notch2/Akt轴促进结直肠癌细胞的迁移和侵袭

  马振南, 赵雪峰, 张晓微, 许广大, 刘福全

  目的 探讨DTX2对结直肠癌（CRC）细胞迁移侵袭的影响及作用机制。方法 利用基因工具干预CRC细胞，分为敲低组（DTX2-shRNA）、敲低空载组（neg-shRNA）、未转染组（con）、过表达空载组（pcDNA）及过表达组（pcDNA-DTX2），利用qRT-PCR及Western blotting法检测转染效率。采用划痕和Transwell侵袭实验检测DTX2基因的表达改变对CRC细胞迁移侵袭能力的影响，并通过Western blotting检测各组中Notch2、NICD、Akt、p-AKT、MMP-2及MMP-9蛋白的表达水平。CRC细胞共转染pcDNA-DTX2和Notch2 siRNA ，检测回复实验对CRC细胞迁移侵袭能力的影响。结果 CRC细胞中DTX2 mRNA和蛋白表达量，敲低组中明显降低（P<0.01），过表达组中明显升高（P<0.01）。划痕和Transwell侵袭实验提示，CRC细胞迁移侵袭能力，DTX2 shRNA显著低于con和neg-shRNA（P<0.01）；pcDNA-DTX2显著高于con和pcDNA（P<0.01）。Western blotting检测提示，Notch2、NICD、p-Akt及MMP-2蛋白平均表达水平，与con和neg-shRNA相比，DTX2 shRNA明显降低（P<0.05）；与con和pcDNA相比，pcDNA-DTX2明显升高（P<0.05），而这些蛋白在con、neg-shRNA及pcDNA间的平均表达水平无明显差异（P>0.05）。回复实验提示，siRNA-Notch2 可扭转pcDNA-DTX2增强的CRC细胞迁移侵袭的能力（P<0.01），相应蛋白水平的变化也具有统计学意义。结论 DTX2通过Notch2/Akt轴促进CRC细胞迁移侵袭的能力，DTX2可能成为CRC的新型生物学指标。

• 外周血中KCNMA1基因甲基化水平与肺癌的发生和发展相关

  臧紫珊, 乔 荣, 朱 强, 周夏婕, 顾万建, 韩宝惠, 杨蓉西

  目的 探究外周血中KCNMA1基因的甲基化水平与肺癌的相关性。方法 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）技术对 285 例肺癌患者、186 例年龄、性别匹配的良性肺结节患者和 278 例匹配的健康对照外周血中KCNMA1基因上4个CpG位点甲基化水平进行半定量检测。使用Logistic回归模型校正协变量分析DNA甲基化水平与肺癌的相关性。使用Mann-Whitney U检验分析不同临床特征组别的甲基化水平差异。结果 在>55岁和女性人群中，KCNMA1_CpG_5甲基化水平最高四分位Q4 vs最低四分位Q1均与肺癌显著相关（>55岁人群：OR=2.60，95% CI: 1.25~5.41，P=0.011；女性人群：OR=2.09，95% CI: 1.03~4.26，P=0.042），且KCNMA1_CpG_5甲基化的相关性从Q2到Q4 逐渐增强（P=0.003，0.038）。与良性患者相比，KCNMA1_CpG_5最高四分位Q4在男性肺癌患者中的OR值为0.35（95% CI: 0.16~0.79，P=0.012）。浸润性腺癌中KCNMA1_CpG_3甲基化水平显著低于非浸润性腺癌（P=0.028），较大肿瘤（T2-4）中KCNMA1_CpG_1甲基化水平显著高于较小肿瘤（T1）（P=0.021）。结论 外周血中KCNMA1甲基化水平的改变可能与肺癌发生和发展相关。

• 小分子化合物组合将人胚胎成纤维细胞体外编程为神经前体细胞

  杨 盼, 王圆圆, 高群伟, 刘 阳, 王 翼, 郭 俣, 刘长青, 刘高峰

  目的 通过小分子化合物组合将人胚胎成纤维细胞（HEFs）重编程为化学诱导神经前体细胞（ciNPCs）。方法 HEFs重编程为ciNPCs涉及两个阶段，第1阶段是小分子组合诱导阶段，常氧条件下，将HEFs在含有小分子化合物组合VCR（VPA，CHIR99021，Repsox）的KSR培养基中培养15 d，HEFs形态发生变化，形成致密细胞集落。第2阶段是特异性诱导ciNPCs，将形成的细胞集落胰酶消化后，低粘附板中悬浮培养，可以形成ciNPCs神经球。采用CM-DiI染料标记P3代ciNPCs，并将其移植于6-OHDA法制作的帕金森大鼠模型右脑内侧前脑束（MFB）区，检测ciNPCs在PD大鼠脑内微环境中的存活、迁移以及分化状况。结果 VCR组合诱导10 d细胞开始出现明显的聚集趋势，15 d时，形成致密的细胞集落。单层培养1×105/孔中大约形成40个克隆，且AP染色呈阳性。将细胞集落消化后，低粘附板中悬浮培养培养2 d，可见大量神经球形成，即为第1代ciNPCs（P1代）。ciNPC高表达神经前体细胞（NPCs）特异性标记物（Nestin、Pax6和Sox2），经体外神经特异性诱导分化，ciNPCs表达神经元特异性标记物Tuj1和星形胶质细胞特异性标记物GFAP。而且，P3代ciNPCs移植PD大鼠脑内4 周后，可以分化为Tuj1+、GFAP+、TH+和GABA+细胞。结论 VCR可以将HEFs重编程为ciNPCs，而无需引入外源性基因，为神经科学研究和神经退行性疾病的治疗提供有利的供体材料。

• CD5L在念珠菌血症患者血清中的水平升高并加重模型小鼠的病情

  吴夏楠, 杨 铭, 郭文涛, 呼 洁, 董 轲, 郜赵伟

  目的 检测CD5L水平念珠菌血症患者中的变化，并研究CD5L对念珠菌血症疾病发展的作用。方法 选取健康对照者20例，细菌血症患者27例和念珠菌血症患者35例，ELISA检测各组血清中的CD5L水平。分析CD5L水平与患者血清中感染及肾损伤指标之间的相关性。尾静脉注射白色念珠菌至C57BL/6小鼠，构建念珠菌血症小鼠模型。腹腔注射CD5L蛋白，利用组织病理及血清学检测分析小鼠模型肾损伤，检测肾脏菌载量，统计小鼠生存率，分析CD5L处理对念珠菌血症小鼠病情的影响。ELISA检测CD5L处理对念珠菌血症小鼠血清IL-6及IL-8水平的影响。结果 与健康对照及细菌感染患者相比，念珠菌血症患者血清CD5L水平显著升高（P<0.01），且 CD5L水平与白细胞数（WBC）、1, 3-β-D-葡聚糖（BDG）、肌酐（Scr）和降钙素原（PCT）水平呈正相关。与正常小鼠相比，念珠菌血症小鼠血清及肾脏CD5L水平显著升高（P<0.01）。腹腔注射CD5L蛋白可以显著上调念珠菌血症小鼠肾组织菌载量，促进小鼠表达炎症因子IL-6和IL-8，加重小鼠肾脏损伤，降低小鼠生存率（P<0.05）。结论 血清CD5L水平在念珠菌血症患者中升高，CD5L加重念珠菌血症小鼠病情。

• 酒川芎增强阿美替尼对EGFR突变型非小细胞肺癌脑移植瘤的抑制作用

  牛雯雯, 荣翔宇, 赵 倩, 刘雪柔, 徐廉松, 李姗姗, 李 娴

  目的 探讨酒川芎（WCR）增强阿美替尼抑制EGFR突变型非小细胞肺癌脑移植瘤的作用。方法 建立人脑内皮细胞（hCMEC/D3）和PC9非小细胞肺癌细胞共培养体系，采用流式细胞术考察酒川芎水提液（2 mg/mL）联合阿美替尼（10、20 μmol/L）对PC9细胞凋亡的影响；通过ABCB1-MDCK单层细胞模型评估酒川芎水提液（0.5、1、2 mg/mL）对阿美替尼（8 μmol/L）跨膜转运的影响。以Western blot法检测血脑屏障完整性相关的紧密连接蛋白表达；建立裸鼠非小细胞肺癌脑移植瘤模型，考察酒川芎（1 mg/g）联合阿美替尼（10 mg/kg）抑制EGFR突变型非小细胞肺癌脑移植瘤的作用。结果 与单用阿美替尼组（20 μmol/L）对比，酒川芎（2 mg/mL）联合阿美替尼（20 μmol/L）组给药可致细胞凋亡百分率增加21%（P<0.01）。酒川芎（0.5、1、2 mg/mL）联合阿美替尼的双侧转运Papp（A→B）较单用阿美替尼均显著增加（P<0.05）。与酒川芎联合后，紧密连接蛋白zonula occludens（ZO）-1，claudin-5和外排蛋白P-glycoprotein的蛋白表达明显减少（P<0.05）。在PC9-Luc脑移植瘤裸鼠模型中，酒川芎联合阿美替尼可明显提升单用阿美替尼的抑瘤效果，缓解脑移植瘤裸鼠体质量的下降，并延长脑移植瘤裸鼠的生存时间（P<0.05）；病理组织学染色结果显示，酒川芎联合阿美替尼可明显增加脑移植瘤裸鼠脑组织中肿瘤细胞的凋亡百分率（P<0.05），并改善瘤周脑组织神经损伤。免疫组化染色结果显示，酒川芎能明显下调脑组织中紧密连接蛋白ZO-1和claudin-5的蛋白表达。结论 酒川芎能增加阿美替尼抑制EGFR突变型非小细胞肺癌脑移植瘤的作用，其机制可能与下调ZO-1，claudin-5和P-glycoprotein蛋白表达，从而促进阿美替尼透过血脑屏障有关。

• 文王一支笔的抗炎作用机制：基于网络药理学、分子对接及实验验证

  张 钰, 涂 星, 张 燕, 文德鉴, 赵方毓, 袁 林, 李文慧

  目的 基于网络药理学、分子对接技术及体外实验探讨文王一支笔抗炎作用的主要化学成分及潜在靶点的作用机制。方法 通过文献报道，本草组鉴、GeneCards等数据库获得化合物与抗炎的靶点；利用String数据库、Cytoscape 3.7.2 软件得到PPI网络“、药物-活性成分-作用靶点”网络以及GO、KEGG富集分析。利用Auto Dock Tools1.5.6等软件进行分子对接。体外实验采用脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7炎症细胞模型，分为对照组、模型组（LPS，5 μg/mL），不同浓度文王一支笔干预组（LPS 5 μg/mL+文王一支笔提取液25、50、100、200 μg/mL），ELISA法和Western blot法检测文王一支笔提取液对相关细胞因子含量和蛋白表达的影响。结果 药物与疾病的共有靶点 318 个，核心靶点为 Src、HSP90AA1 和 PIK3CA。KEGG 分析显示有癌症、PI3K/Akt、MAPK等信号通路。分子对接显示主要活性成分与核心靶点均能自发的结合。体外实验结果显示，文王一支笔提取液在100、200 μg/mL浓度下明显抑制IL-1β（P<0.05），在50、100、200 μg/mL浓度下明显抑制IL-6和TNF-α，在25、50、100、200 μg/mL浓度下降低PI3K和Akt蛋白的磷酸化水平（P<0.05）。结论 文王一支笔可以作用于多个靶点、多条通路发挥抗炎作用，其作用机制可能与降低IL-1β、IL-6和TNF-α含量，下调p-PI3K、p-Akt蛋白的表达，进而影响PI3K/Akt信号通路减轻炎症反应有关。

• M2型巨噬细胞来源的外泌体lncRNA NR_028113.1通过激活JAK2/STAT3通路促进巨噬细胞的极化

  张梦莹, 李 志, 裴纬亚, 李雪琴, 杨 辉, 朱小龙, 吕 坤

  目的 探究M2型巨噬细胞来源的外泌体lncRNA NR_028113.1对巨噬细胞极化的影响及机制。方法 体外分离并培养BALB/c小鼠骨髓来源的巨噬细胞（BMDMs），IL-4诱导其向M2型巨噬细胞极化后，提取并鉴定M2细胞上清液所分泌的外泌体exosome（M2-exo），qRT-PCR检测M2外泌体中lncRNA的表达。将100 μg/mL的M2-exo，对照组用等体积的PBS分别与M0巨噬细胞共孵育48 h后，qRT-PCR及Western blot检测各组细胞中Arg1、YM-1、FIZZ1、iNOS和TNF-α 的表达，流式细胞术检测CD206+细胞比例，Western blot检测各组细胞JAK2/STAT3蛋白磷酸化水平。设计、合成lncRNA smart silencer特异性抑制lncRNA NR_028113.1的表达，转染M2细胞48 h后提取各组细胞（exo+NC和exo+smart silencer）上清液分泌的外泌体再与M0型巨噬细胞共孵育，检测孵育后各组细胞中Arg1、YM-1、FIZZ1、iNOS和TNF-α 的表达以及CD206+细胞比例和JAK2/STAT3信号通路蛋白磷酸化水平。结果 lncRNA NR_028113.1在M2型巨噬细胞外泌体中高表达（P<0.05）。相比于PBS对照组，与M2-exo共培养的M0巨噬细胞中Arg1、YM-1和FIZZ1表达均显著上调（P<0.05），iNOS和TNF-α 表达显著下调（P<0.05），CD206+细胞所占比例显著增加（P<0.01），JAK2/STAT3 蛋白磷酸化水平显著增加（P<0.05）。抑制M2-exo中lncRNA NR_028113.1的表达后，共培养的M0巨噬细胞中Arg1、YM-1和FIZZ1表达显著下调（P<0.05），iNOS和TNF-α表达显著上调（P<0.05），CD206+细胞所占比例显著减少（P<0.05），JAK2/STAT3蛋白磷酸化水平显著减少（P<0.05）。结论 M2型巨噬细胞来源的外泌体lncRNA NR_028113.1可显著促进巨噬细胞向M2型极化，其机制可能与激活JAK2/STAT3信号通路相关。

• 心肌梗死后室壁瘤患者的静息心率与主要不良心脑血管事件相关：基于227例回顾性队列研究

  卢丽萍, 钟嘉鑫, 吴锡林, 陈 琴, 林慧中, 陈良龙, 罗育坤

  目的 分析静息心率（RHR）高低与心肌梗死后室壁瘤患者不良预后的关系。方法 回顾性收集2017~2019年入住我院的心梗后室壁瘤患者资料，最终共227例纳入研究，随访24月，随访期间任何主要不良心脑血管事件（MACCEs）的发生都是终点事件。根据基线RHR测量值高低分为RHR90%三组，使用Cox比例风险模型、限制性立方样条（RCS）模型来研究RHR对MACCEs的影响，结果以风险比（HR）的95%置信区间（CI）表示。结果 在24月的随访中，90例（39.6%）患者发生MACCEs。RCS曲线显示RHR与MACCEs发生之间存在非线性“U”型相关性。与RHR在10%~90%组的个体相比，RHR>90%组的MACCEs风险增加了3.01倍（HR=4.01，95% CI：2.07-7.76，P<0.001）。患者在RHR<10%组，10%~90%组和91%~100%组的MACCEs发生率分别为39.1%、36.6%、66.7%（P=0.027），其中，室性心动过速/心室颤动（VT/VF）的发生率分别为17.4%、2.7%、4.8%（P=0.005），心衰再入院的发生率为8.7%、26.8%、42.9%（P=0.036）。结论 持续监测和管理心率范围可为心梗后室壁瘤患者的预后提供指导。

• 和厚朴酚减轻高甘油三酯血症急性胰腺炎大鼠模型的氧化应激：基于激活SIRT3-MnSOD2通路

  蒙 诺, 杨慧莹, 陈金凤, 覃颖颖, 雷 宇, 黄振宁, 唐国都

  目的 探讨和厚朴酚调控Sirtuin-3（SIRT3）-MnSOD2通路对高甘油三酯血症急性胰腺炎（HTGP）大鼠氧化应激的作用。方法 30只4周龄SD雄性大鼠随机分成普通饲养组和高脂饲养组，4周后普通饲养组随机设置为：对照(C)组和急性胰腺炎（AP）组；高脂饲养组随机设置为：高甘油三酯血症（HTG）对照组、HTGP组、和厚朴酚（HKL）治疗组，6只/组。AP组、HTGP组和HKL组经腹腔注射雨蛙肽建立AP模型，HKL组于造模后15 min腹腔注射HKL5 mg/kg。建立模型24 h后处置大鼠，检测大鼠血清甘油三酯（TG）、IL-6、TNF-α水平，HE染色观察胰腺组织病理学，试剂盒检测胰腺组织活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）水平，Western blot测定SIRT3、锰超氧化物歧化酶（MnSOD2）蛋白的表达水平，免疫组化法检测MnSOD2蛋白表达，透射电镜观察胰腺腺泡细胞及线粒体超微结构。结果 与普通组比较，高脂组TG水平显著增高（P<0.05）。与各对照组比较，模型组IL-6、TNF-α、MDA水平均显著增高（P<0.05），GSH水平、SIRT3和MnSOD2蛋白表达均显著降低（P<0.05），HE染色显示有不同程度的水肿及炎细胞浸润，ROS荧光强度增强，电镜下腺泡细胞及线粒体超微结构损伤明显。与HTGP组比较，HKL组IL-6、TNF-α、MDA水平均显著降低（P<0.05），GSH水平、SIRT3和MnSOD2蛋白表达均显著增高（P<0.05），HE染色水肿及炎细胞浸润程度减轻，ROS荧光强度降低，电镜下腺泡细胞及线粒体超微结构损伤改善。结论 HKL可能通过SIRT3-MnSOD2途径改善HTGP大鼠氧化应激水平并减轻胰腺病理损伤。

• 圣草次苷抑制肝细胞癌SMMC-7721细胞的增殖和迁移：基于激活ROS/MAPKs信号轴

  周 慧, 张雨晴, 甘 超, 范喜瑞, 戚之琳, 齐世美

  目的 探讨圣草次苷通过ROS/MAPKs信号轴调控肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移的作用机制。方法 分别用0、25、50、100、150、200、250、300 μg/mL圣草次苷处理肝癌SMMC-7721细胞系24 h后，CCK-8法检测细胞活性；不同浓度的圣草次苷（100、200、300 μg/mL）处理细胞后，运用划痕实验分别在24、48、72 h检测划痕愈合率，Transwell实验检测细胞迁移率，克隆形成实验检测细胞增殖能力，DAPI染色观察细胞核形态变化，Western blot检测侵袭蛋白E-cadherin、N-cadherin、MMP-2、MMP-9、凋亡因子 PARP 和 Pro-caspase 3 以及 MAPKs 通路 p-JNK、p-P38、p-ERK 信号分子；用（分别为 2、5、10 μmol/L）ERK 抑制剂U0126、JNK抑制剂SB203580和P38抑制剂SP600125预先处理细胞2 h，再用200 μg/mL圣草次苷处理细胞24 h，Western blot检测凋亡蛋白PARP的切割情况；分别用N-乙酰-半胱氨酸（NAC）（30 μmol/L）或圣草次苷（100、200、300 μg/mL）单独或共处理细胞后，通过DCFH-DA荧光探针法分别在15、30、60 min检测内源性活性氧（ROS）水平。结果 圣草次苷在50 μg/mL范围内，对细胞活力基本无影响（P>0.05）；圣草次苷能够显著抑制SMMC-7721细胞的划痕愈合（P<0.01），细胞迁移（P<0.01）和克隆形成（P<0.01），在300 μg/mL浓度时作用最显著；圣草次苷明显减少侵袭蛋白N-cadherin、MMP-2、MMP-9的蛋白表达量（P<0.01），上调E-cadherin的蛋白表达量（P<0.05）；圣草次苷诱导SMMC-7721细胞发生显著的凋亡形态学变化，Pro-caspase 3表达降低，PARP切割增多（P<0.01）；圣草次苷在300 μg/mL刺激30 min时ROS表达水平较高，NAC（30 μmol/L）处理后，细胞内ROS表达水平下降明显；圣草次苷能够显著诱导MAPKs信号途径JNK、P38和ERK的磷酸化（P<0.01），U0126 和SB203580能够增强圣草次苷诱导的PAPR切割，而SP600125逆转圣草次苷诱导的PARP切割。结论 圣草次苷通过促进细胞内ROS的合成，诱导MAPKs信号通路的活化，调控肝癌细胞系SMMC-7721的增殖、迁移和凋亡。

• 人骨髓间充质干细胞外泌体来源的miR-335-5p促进人牙周膜干细胞的成骨分化：基于下调DKK1表达

  刘 屿, 曾 莲, 王卫红, 杨艳玲, 王 洲, 刘建启, 李 卫, 孙婧宇, 余晓宏

  目的 探讨人骨髓间充质干细胞（hBMMSCs）外泌体来源的 miR-335-5p 调控 DKK1 对人牙周炎中牙周膜干细胞（PDLSCs）成骨分化的影响及其作用机制。方法 提取hBMMSCs外泌体，通过透射电镜、Western blot以及PKH67标记鉴定外泌体，通过TNF-α诱导PDLSCs构建牙周炎细胞模型。提取的外泌体与TNF-α诱导的PDLSCs共同培养。qRT-PCR检测miR-335-5p，促炎因子 IL-1β、IL-6、IL-8 和成骨标志基因 RunX2、OCN、BMP-2 mRNA 表达。茜素红和 ALP 染色检测钙结节，Western blot检测DKK1蛋白表达，双荧光素酶报告实验验证miR-335-5p与DKK1的靶向关系。结果 提取的hBMMSCs外泌体中CD9和CD81显著表达（P<0.05）。hBMMSC外泌体降低TNF-α诱导的hPDLSCs中促炎细胞因子IL-1β（P<0.01）、IL-6（P<0.05）、IL-8（P<0.05）的mRNA表达并促进成骨标志基因RunX2（P<0.01）、OCN（P<0.05）、BMP-2（P<0.001）mRNA和钙结节生成。miR-335-5p在hBMMSCs外泌体中高表达，过表达miR-335-5p靶向下调DKK1（P<0.001），抑制促炎细胞因子IL-1β、IL-6、IL-8的表达（P<0.001），促进成骨标志物BMP-2、OCN、RunX2的 mRNA表达以及钙结节生成（P<0.001）。结论 hBMMSC外泌体来源的miR-335-5p靶向下调DKK1，促进hPDLSCs成骨分化，抑制牙周炎的发展进程。

• 雪貂食管的形态学及其分子标记物的表达谱

  李 博, 王 磊, 赵 伟, 范玉涵

  目的 分析雪貂食管形态学及分子表达，探讨其作为人食管疾病动物模型的可行性。方法 取生长期为6~8月成年雪貂食管和出生1 d、3 d、5 d、1周和2周幼年雪貂食管各5只于宁夏医科大学总医院病理科制成冷冻切片、包埋石蜡组织。通过苏木精-伊红染色法（HE）染色、过碘酸雪夫染色（PAS）对成年雪貂食管粘膜下腺体（SMG）进行形态学分析；Mucin染色检测MUC5B和MUC5AC的表达情况；免疫组化、免疫荧光技术检测细胞角蛋白（CK）：CK4、CK5、CK7、CK8、CK14、CK17、CK18、CK19、CK20等相关蛋白在成年雪貂食管上皮细胞中的表达情况；免疫荧光检测LEF1在雪貂食管上皮和食管粘膜下腺中表达情况。结果 HE、PAS结果显示，成年雪貂食管粘膜下腺体为食管粘膜肌层下方结缔组织，具有分泌含有粘蛋白粘液的功能；细胞角蛋白在成年雪貂食管不同类型的细胞中呈差异性表达，粘液细胞主要表达CK4，导管细胞表达CK8，上皮细胞表达CK20，其中粘液细胞中细胞角蛋白类型表达最多；Mucin染色结果显示MUC5B、MUC5AC在成年雪貂食管腺体的粘液细胞胞质及腺体管腔内呈阳性表达；粘膜细胞中特异性结合双花扁豆凝集素（DBA）、鸡冠珊瑚树凝集素（ECL）、非偶联西非单叶豆凝集素I（GSL I) 、非偶联西非单叶豆凝集素 II（GSL II）、大豆凝集素（SBA）、他卡林生物化合物凝集素、荆豆凝集素（ULEX）、麦胚凝集素（WGA）；导管细胞细胞膜上特异性结合凝集素GSL I、GSL II，上皮细胞细胞膜凝集素ECL、花生凝集素（PNA）和WGA呈阳性表达；凝集素伴刀豆凝集素(ConA）、红腰果E型凝集素（PHA-E）和红腰果L型凝集素（PHA-L）在浆液细胞胞膜呈阳性表达。免疫荧光结果提示，随着腺体的发育，在雪貂出生后3 d至1周可见到发育腺体中LEF1的表达，当腺体分化成熟时LEF1表达消失。将第 1天至第7天龄雪貂食管腺体中LEF1表达强度与两周龄的雪貂食管腺体中荧光强度相比，差异有统计学意义（P<0.001）。结论 雪貂食管与人类食管组织具有相似的结构和部分共同标记物，尤其是与人类相似的食管粘膜下腺体，未来可将雪貂作为人食管疾病动物模型的选择之一。

• 二甲双胍/维格列汀和利拉鲁肽对肥胖合并2型糖尿病患者的临床疗效比较

  周 蓓, 李 静, 方晨圆, 黄亚楠, 桑贵蕊, 陶少平, 何春玲

  目的 评价基于二甲双胍/维格列汀和利拉鲁肽的两种治疗方案对肥胖合并2型糖尿病患者（BMI>25 kg/m2）的临床疗效。方法 回顾性分析2019~2022年皖南地区107例肥胖合并2型糖尿病患者，根据所选患者初发肥胖合并2型糖尿病，将患者分为二甲双胍/维格列汀治疗组（n=53）和利拉鲁肽治疗组（n=54），持续治疗3个月。比较两组患者治疗前后的BMI、腹围、空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白、空腹C肽、餐后2 hC肽、空腹胰岛素及餐后2 h胰岛素，观察治疗前后各项指标的变化。结果 107例皖南地区肥胖合并2型糖尿病患者中，二甲双胍/维格列汀组和利拉鲁肽组患者治疗前后的BMI（P<0.05）、腹围（P<0.05）、空腹血糖（P<0.05）、餐后2 h血糖（P<0.05）以及糖化血红蛋白（P<0.05）均较前下降，空腹C肽及餐后2 hC肽较前恢复（P<0.05）。对比两组治疗结果，血糖下降水平疗效相当，但利拉鲁肽组的腹围减少疗效更优（P0.05）。结论 二甲双胍/维格列汀和利拉鲁肽作为新型降糖药物，对于肥胖合并2型糖尿病具有很好疗效，可以控制血糖、减轻体质量，但利拉鲁肽对患者体质量的控制效果相对更佳。

• 血清非靶向代谢组学联合靶向胆汁酸代谢组学筛查结直肠癌的潜在生物标志物

  王旋成, 朱一帆, 周海琳, 黄宗声, 陈鸿炜, 张嘉豪, 杨珊伊, 陈广辉, 张淇淞

  目的 应用血清代谢组学技术发现结直肠癌（CRC）的生物标志物以微创且高效地筛查CRC。方法 采用超高效液相色谱串联高分辨率质谱分析技术（UHPLC-HRMS）对79例健康对照（NR组）受试者和82例CRC患者（CRC组）的血清样本进行代谢组学分析。在两组血清代谢轮廓存在明显区别的基础上，采用单因素以及多元统计分析包括主成分分析和正交偏最小二乘判别分析进一步确定组间差异代谢物。以P1.00为筛选标准发现差异代谢物，并通过受试者工作特征曲线分析（ROC）筛选出对CRC具有良好诊断效能（曲线下面积AUC>0.80）的潜在诊断标志物。同时，应用靶向胆汁酸代谢组学对所筛选的胆汁酸类肿瘤生物标志物进行靶向验证。结果 NR组和CRC组的血清代谢谱存在明显差异。基于上述标准共筛选获得82种组间差异代谢物，以脂肪酸和甘油磷脂为主。ROC分析表明包括腺嘌呤、胆红素、ACar（乙酰肉碱）12:0、ACar 10:1、ACar 9:0、PC（磷脂酰胆碱）18:2e、去氧胆酸、鹅去氧胆酸、ACar 14:1、棕榈酰肉碱这10个差异代谢物其AUC值>0.80。其中，与NR组相比，1个差异代谢物在CRC组中呈现显著上调，其余9个差异代谢物均呈显著下调（P<0.05）。此外，基于支持向量机算法的多变量ROC分析发现，其中7个差异代谢物组成的标志物组合的AUC值为0.94，对CRC具有出色的诊断效能。靶向胆汁酸代谢组学结果与非靶向代谢组学的结果一致，去氧胆酸和鹅去氧胆酸的相对血清水平较NR组在CRC中呈现显著下调趋势（P<0.05）。结论 脂肪酸和甘油磷脂的代谢紊乱可能与CRC的形成密切相关。10个差异代谢物对CRC具有良好诊断效能，其中7个差异代谢物组成的标志物组合对CRC的临床诊断具有重要的应用潜力，特别是去氧胆酸和鹅去氧胆酸可作为CRC的潜在生物标志物。

• 沉默SIRT1降低胆管癌细胞对 5-氟尿嘧啶的耐药：基于抑制FOXO1/Rab7自噬通路

  辛 辰, 王笑影, 李 响, 陈 宇, 王 雪, 宁佳曦, 杨 适, 王忠琼

  目的 探讨SIRT1靶向FOXO1/Rab7自噬通路调节胆管癌细胞5-氟尿嘧啶（5-FU）耐药的机制。方法 不同浓度（50、100、150、200 μg/mL）的5-FU处理HCCC-9810细胞构建HCCC-9810/5-FU耐药细胞模型，免疫荧光检测细胞中SIRT1表达情况，Western blot和q-PCR检测SIRT1、FOXO1、Rab7表达水平，Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3、p62表达水平。SIRT1siRNA和NC siRNA转染HCCC-9810/5-FU耐药细胞，CCK-8检测细胞耐药性，划痕实验检测细胞迁移能力，RT-qPCR检测FOXO1、Rab7 mRNA水平，Western blot检测SIRT1、FOXO1、Rab7、Beclin1、LC3、p62蛋白表达水平。结果 不同浓度（50、100、150、200 μg/mL）的5-FU均能抑制HCCC-9810细胞增殖。与对照组相比，HCCC-9810/5-FU耐药细胞中SIRT1荧光强度略有增强；SIRT1、Rab7、p62、FOXO1 和 Beclin 1 蛋白表达上调（P<0.01），LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值增加（P<0.001）；SIRT1、Rab7 和 FOXO1mRNA水平上调（P<0.05）。沉默SIRT1表达后，HCCC-9810细胞的5-FU耐药性降低，细胞迁移能力降低，SIRT1（P<0.01）、Rab7（P<0.05）、p62（P<0.05）、FOXO1（P<0.01）和Beclin1（P<0.001）蛋白表达降低，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低（P<0.001）；FOXO1和Rab7 mRNA水平降低（P<0.05）。结论 沉默SIRT1的表达抑制FOXO1/Rab7自噬通路激活。

• 理想体质量可作为低体质量患者喉罩型号的选择依据：137例随机对照临床试验

  郭志华, 王志鹏, 季文进

  目的 对比基于理想体质量与实际体质量确定经典喉罩型号对低体质量指数患者喉罩首次放置成功率的影响。方法 选取137例18~60岁、体质量指数低于18.5 kg/m2、根据实际体质量和理想体质量选择喉罩型号时存在差异的患者，以随机数字表法将患者分为理想体质量组（n=68）和实际体质量组（n=69）。理想体质量组患者根据公式计算体质量，实际体质量组则根据实际测量体质量，作为经典喉罩型号选择依据。记录喉罩首次放置成功率、总体成功率、纤维支气管镜下视野等级、喉罩漏气压力、麻醉维持期间及麻醉复苏期喉罩相关并发症。结果 理想体质量组患者喉罩首次放置成功率高于实际体质量组（86.8% vs 68.1%，P=0.016），理想体质量组患者较实际体质量组使用较大型号喉罩（P<0.005），且具有较好的纤支镜视野评分（P=0.001）和较高的气道密封压（P0.05）。结论 低体质量指数患者基于身高、性别的理想体质量选择经典型喉罩型号能显著提高喉罩首次放置成功率。

• 附萸汤改善心力衰竭大鼠的心室重构：基于抑制AMPK/mTOR通路介导的细胞自噬

  马金苗, 顼志兵, 朱 杰, 刘迎庆, 王青青, 奚希相, 张莉芬, 黄 静, 孝玲玲

  目的 探究附萸汤对心力衰竭大鼠心室重构的影响及其与AMPK/mTOR通路介导细胞自噬的关系。方法 采用冠状动脉左前降支结扎法建立心力衰竭大鼠模型，将30只建模成功大鼠分成模型组（Model）、附萸汤治疗组（Fuyu Soup）、附萸汤治疗+AMPK激动剂组（Fuyu Soup+EX229），以Wistar大鼠为假手术组（Sham），10只/组。药物干预8周后，测定心室功能及心室重构指标变化。TTC染色检测心肌梗死面积，HE和Masson观察心肌组织病理学变化，TUNEL染色检测心肌细胞凋亡，Western blot检测心肌组织p-AMPK、p-mTOR、LC3-II、Beclin1和p62蛋白表达。结果 与Sham组相比，Model组大鼠舒张末期左心室容积（LVEDV）、收缩末期左心室容积（LVESV）、左心室指数（LVMI）增加（P<0.01），左心室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）、球形指数（SI）降低（P<0.01），心肌梗死面积增加，心肌组织病理损伤及纤维化程度加重，心肌细胞凋亡率，p-AMPK、LC3- II/LC3- I、Beclin1表达升高（P<0.01），p-mTOR、p62表达降低（P<0.01）。与Model组相比，Fuyu Soup组大鼠 LVEDV、LVESV、LVMI降低（P<0.01），LVEF、LVFS、SI增加（P<0.01）；心肌梗死面积降低，心肌组织病理损伤及纤维化程度减轻，心肌细胞凋亡率，p-AMPK、LC3-II/LC3-I、Beclin1表达降低（P<0.01），p-mTOR、p62表达升高（P<0.01）。与Fuyu Soup组相比，EX229能够逆转Fuyu Soup对心力衰竭大鼠上述指标的作用。结论 附萸汤具有改善心力衰竭大鼠心室重构作用，其机制与抑制AMPK/mTOR信号通路介导的心肌细胞自噬有关。

• 香叶木素通过调节小鼠的肠道免疫平衡减轻克罗恩病样结肠炎：基于抑制PI3K/AKT通路

  杨 子, 赵天豪, 程 阳, 周约青, 李岳彤, 王欣茹, 张小凤, 左芦根, 葛思堂

  目的 明确香叶木素对2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的小鼠克罗恩病（CD）样结肠炎的作用效果和机制。方法 将野生型小鼠（WT）随机分为3组：WT组、TNBS诱导的CD样结肠炎组（TNBS组）和香叶木素干预的结肠炎组（50 mg·kg-1·d-1；Dios组），8只/组；采用肠炎疾病活动（DAI）评分、体质量改变、肠炎组织学评分、结肠长度和ELISA法检测的肠黏膜炎症介质水平（TNF-α、IFN-γ、IL-17A）等评估肠炎程度；流式细胞术分析肠系膜淋巴结中T淋巴细胞亚群（Th1/Th2、Th17/Treg）变化；通过网络药理学和分子对接技术分析香叶木素调控PI3K/AKT通路的作用，并在体验证香叶木素改善TNBS小鼠CD样肠炎与抑制PI3K/AKT信号的关系。结果 动物实验显示，Dios组小鼠DAI评分、肠炎组织学评分、体质量降低幅度及结肠黏膜炎症介质水平（TNF-α、IFN-γ、IL-17A）均低于TNBS组小鼠（P<0.05），但仍然高于WT组（P<0.05）；Dios组小鼠结肠长度大于TNBS组（P<0.05），小于WT组（P<0.05）；Dios组小鼠肠系膜淋巴结中Th1/Th17细胞比例低于TNBS组（P<0.05），高于WT组（P<0.05）；Th2/Treg细胞比例高于TNBS组（P<0.05）和WT组（P<0.05）。网络药理学分析获得香叶木素和CD交集靶点46个，其中AKT1、EGFR、SRC、ESR1、MMP9、PTGS2为排名前6位的关键靶点；GO和KEGG分析显示，香叶木素改善CD样结肠炎作用与磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）等信号通路密切相关；分子对接显示香叶木素与关键靶点结合较好。Western blot检测结果显示，Dios组小鼠结肠黏膜p-PI3K和p-AKT水平低于TNBS组（P<0.05），高于WT组（P<0.05）。结论 香叶木素可能通过抑制PI3K/AKT信号调控Th1/Th2和Th17/Treg平衡，改善肠黏膜免疫紊乱，从而缓解TNBS小鼠CD样肠炎。

• 3D-pCASL评估成人烟雾病血管重建术后脑血流动力学的变化

  查相月, 赵茜茜, 许乙凯

  目的 利用三维伪连续动脉自旋标记（3D-pCASL）技术评估成年烟雾病患者血管重建术后脑血流动力学的变化及其与神经症状预后的关系。方法 收集我院经DSA或MRA确诊并接受单侧颞浅动脉（STA）-大脑中动脉（MCA）搭桥术的40例成年烟雾病患者，所有患者均于术前及术后行3D-pCASL检查，术后随访时间为3~11月。在覆盖手术侧大脑中动脉皮层区域及同侧小脑半球勾画感兴趣区（ROI），比较术前术后脑血流量（CBF）及相对脑血流量（rCBF）值，评估脑血流动力学改变情况。分析术前rCBF与铃木（Suzuki）分期的关系以及术后神经症状变化与rCBF变化之间的关系。结果 手术前后CBF分别为（53.96±10.04）mL/100 g·min、（58.90±13.57）mL/100 g·min，差异有统计学意义（t=-3.068，P=0.004）；rCBF分别0.96±0.14、1.15±0.18，差异有统计学意义（t=-7.155，P<0.001）。术后神经症状变化与rCBF变化（P=0.017）及发病类型（P<0.001）有关。结论 3D-pCASL可以用于监测成年烟雾病患者血管重建术后血流动力学变化情况，且由于其无创、无需使用对比剂等特点，值得在临床推广。

• 单中心非肌层浸润性膀胱癌患者行卡介苗灌注治疗的疗效分析

  蔡涛浓, 卢江丽, 林志君, 罗明睿, 梁海滔, 秦自科, 叶云林

  目的 探讨非肌层浸润性膀胱癌（NMIBC）患者行卡介苗（BCG）灌注治疗的疗效、不良反应及其独立危险因素。方法 回顾2015年9月~2021年9月于中山大学肿瘤防治中心术后BCG灌注的患者资料。采用无复发生存率（RFS）、无进展生存率（PFS）和疾病特异生存率（DSS）评估BCG灌注患者的预后。不良反应事件评价标准5.0版评估灌注后不良反应。采用Kaplan-Meier 生存分析，单因素、多因素COX回归分析BCG灌注的独立预测因子。结果 共纳入患者421名，患者平均年龄为61.79±11.51岁，中位随访时间为17月。BCG灌注后88名患者发现复发（20.9%），中位复发时间为13个月；40名患者出现进展（9.5%），中位时间为18个月；14名患者死亡（3.3%），中位时间为30个月。201名患者出现相关不良反应，1级不良反应的患者有69名；2级不良反应有110名；3级不良反应23名。生存分析提示当患者年龄小于67.5岁（P=0.013），肿瘤为初发（P<0.001）、单发（P=0.010）、超过1年复发（P=0.042），且患者中性粒细胞较低（P=0.005），单核细胞较低（P=0.001），NLR（中性粒细胞/淋巴细胞）（P=0.014）较低，细胞角蛋白19片段（CyFra21-1）（P=0.002）较低时无复发生存率明显升高，当患者年龄小于67.5岁（P=0.042），肿瘤为初发（P<0.001），CyFra21-1较低（P=0.042）时患者无进展生存率更高。多因素COX分析提示：肿瘤复发时间（P=0.007，HR=2.669，95% CI 1.316-5.414）、单核细胞数（P=0.015，HR=0.376，95% CI 0.171-0.829）和CyFra21-1值（P=0.002，HR=0.312，95% CI 0.151-0.647）是 NMIBC 患者 BCG 灌注 RFS 的独立预测因素；肿瘤初发或复发（P=0.003，HR=0.301，95% CI 0.138-0.660）、中性粒细胞数（P=0.028，HR=0.302，95% CI 0.103-0.882）和CyFra21-1值（P=0.029，HR=0.358，95% CI 0.142-0.903）是PFS的独立预测因素。结论 对于中、高危的NMIBC患者术后的BCG灌注治疗效果显著，且大部分的不良反应患者可耐受。肿瘤的复发时间、单核细胞计数和CyFra21-1为RFS的独立预测因素，肿瘤的初发或复发、中性粒细胞计数以及CyFra21-1为PFS的独立预测因素。

• 多原发恶性肿瘤合并SWI/SNF复合体缺陷型胃癌1例报告及文献复习

  吕纯鑫, 吴秀奇, 夏 青

  多原发恶性肿瘤合并SWI/SNF复合体缺陷型胃癌的病例报道较少见。本例是由上海交通大学医学院附属仁济医院肿瘤科收治的1例多原发恶性肿瘤合并SWI/SNF复合体缺陷型胃癌的病例，通过分析临床病理特点、诊疗过程等，并结合文献复习，讨论该类肿瘤的发生、病理和免疫组化特征、诊治及预后。该例患者是异时性多原发恶性肿瘤，先确诊早期肺癌，经手术治愈，后确诊为SWI/SNF复合体缺陷型胃癌，合并ARID1A突变及TMB-H，经化疗联合免疫治疗效果不佳，总生存期13月。本报道旨在提高对多原发恶性肿瘤合并SWI/SNF复合体缺陷型胃癌的认知及诊治水平，改善患者的生存预后。