南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2022年第3期

• 白三烯B4受体在急性髓系白血病中的预后价值和功能富集分析

  张晓宁, 张晓瑜, 刘 鹏, 刘 阔, 李文文, 陈倩倩, 马万山

  目的 运用生物信息学分析白三烯B4受体（LTB4R）在急性髓系白血病（AML）患者中的表达模式、预后价值和潜在生物学功能。方法 从癌症基因组图谱（TCGA）数据库和美国国立生物技术信息中心（NCBI）公共基因芯片数据平台（GEO）下载mRNA基因芯片数据集和临床基线资料数据集，利用R studio进行表达分析、生存分析、Cox风险回归分析、相关性分析研究LTB4R的表达模式和预后价值。利用UALCAN 平台研究 LTB4R表达水平与临床特征的关联。利用linkedomics平台筛选出LTB4R共表达基因进行GO和KEGG信号通路富集分析。应用STRING平台构建蛋白质相互作用网络。基于LTB4R表达水平将LAML数据集分组并筛选差异表达基因，继而进行GSEA分析。收集临床30例AML患者及21例健康对照者外周静脉抗凝血2 mL，分离单个核细胞，采用qRT-PCR对LTB4R和免疫检查点基因表达水平、相关性进行验证；分离外周血500 μL血清，采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测LTB4R蛋白表达水平。结果 LTB4R表达水平在AML患者骨髓样本中显著增强（4.898±1.220 vs 2.252±0.215，P<0.001），与不良预后相关[P=0.004，风险指数（HR）=1.74]，并可做为AML预后的独立风险因素（P=0.019，HR=1.66）。同时LTB4R与FAB分型、细胞遗传学风险、染色体异常、NPM1突变相关。 LTB4R 的共表达基因富集到多个肿瘤发生相关的信号途径，例如粒细胞炎症、淋巴细胞激活、免疫反应信号传导、能量代谢等。GSEA分析显示差异基因富集于免疫细胞分化、活化、细胞因子信号途径等。临床实验证实AML患者样本中LTB4RmRNA（P=0.044）及蛋白表达水平增高（P=0.008），并且mRNA表达水平与HAVCR2呈正相关（r=0.466，P=0.040）。结论 LTB4R 可做为AML的新型标志物和独立预后指标，潜在功能富集于肿瘤免疫、代谢相关信号通路，可为AML 疾病进程相关信号通路和分子网络研究提供线索。

• p300诱导的乙酰化修饰参与脂多糖诱导的炎症介质合成

  胡 柯, 曹湘玉, 李玉娴, 刘灵丽, 陈月富, 陈立军, 黄民江, 谭碧峰, 尹辉明

  目的 探讨辅助激活因子p300诱导的乙酰化修饰介入脂多糖（LPS）诱导的炎症介质合成过程及其作用机制。方法 Agilent Sureprint G3 Mouse Gene Expression V2 微阵列芯片以及蛋白免疫印迹（WB）技术联合于小鼠巨噬细胞（RAW246.7）中筛选表达水平与LPS刺激强度相关的分子；凝胶电泳迁移实验（EMSA）以及染色质免疫共沉淀（chip-qpcr）方法验证相关分子与炎症基因IL-6以及TNF-α启动子部位的结合现象；相关分子过表达或干扰质粒转染RAW246.7后，WB法检测转染质粒的作用效果，ELISA方法检测IL-6以及TNF-α合成水平，染色质免疫沉淀-测序技术（chip-seq）分析炎症基因启动子部位相关分子的结合以及H3K27的乙酰化修饰水平。结果 微阵列芯片以及WB技术共同证实p300的表达与LPS刺激强度存在较好关联。免疫共沉淀证实了p300与c-myb存在结合现象。EMSA证实c-myb可与炎症基因启动子序列结合，而p300不能直接结合；chipqPCR表明当c-myb被干扰时，p300不能与炎症基因启动子序列结合。WB检测显示过表达或干扰质粒均能够干预相关分子的表达，且p65、p300以及c-myb 3者在表达上无相互影响。ELISA联合chip-seq显示与对照组比较，p300过表达以及LPS刺激均可导致炎症基因启动子部位结合的p300和H3K27乙酰化修饰水平增加，从而促进p65与启动子的结合和炎症基因转录（P<0.05）；而c-myb表达被干扰时，p300过表达以及LPS刺激诱导的p300与p65在启动子的结合、H3K27乙酰化修饰和炎症介质合成均被遏制（P<0.05）。在p65干扰相关组别中，p65与启动子的结合以及炎症基因转录均被抑制（P<0.05），但未对p300的结合以及H3K27乙酰化水平造成影响。结论 LPS刺激可诱导p300合成，后者在c-myb介导下结合于炎症基因启动子区域，并通过乙酰化H3K27易化启动子与p65结合，从而促进炎症基因表达。

• Bax抑制因子1通过促进视神经萎缩蛋白1表达抑制小鼠动脉血管钙化

  陈韦任, 杜 辉, 钱 赓, 周玉杰, 陈韵岱, 马 茜, 吴雪萍, 沙 媛

  目的 探讨Bax抑制因子1（BI-1）和视神经萎缩蛋白1（OPA1）蛋白对血管钙化的影响。方法 ApoE-/-糖尿病小鼠高脂喂养12周后予以腹腔注射Nε（- 1-羧甲基）-L-赖氨酸16周建立血管钙化模型，实验将小鼠分为4组，6只/组：对照组（ApoE-/-小鼠普通饲料喂养）、钙化组（ApoE-/-小鼠建立钙化模型）、钙化+BI-1TG组（血管特异性过表达BI-1的ApoE-/-小鼠建立钙化模型）和钙化＋BI-1TG＋OPA1-/-组（血管特异性过表达BI-1和基因敲除OPA1的ApoE-/-小鼠建立钙化模型）。另β磷酸甘油诱导血管平滑肌细胞建立细胞钙化模型。使用von Kossa染色检测血管钙化程度，使用ELISA检测主动脉钙含量，使用免疫组织化学方法检测Runt相关转录因子2和骨形态发生蛋白2表达、使用TUNEL检测细胞凋亡率，使用Western blot检测BI-1、OPA1、Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2和活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3水平的表达。结果 血管钙化后，BI-1和OPA1蛋白表达均下降（P=0.0044），钙沉积、Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2及活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达增加（P=0.0041）。过表达BI-1促进OPA1蛋白表达，钙沉积、Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2及活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达均减少（P=0.0006）。基因敲除OPA1蛋白后，钙沉积、Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2及活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3又明显增多（P=0.0007）。结论 BI-1可能通过促进OPA1表达，减轻钙沉积、细胞骨型分化和细胞凋亡，继而抑制血管钙化。

• 老年阻塞性睡眠呼吸暂停患者远期缺血性脑卒中的风险评分模型： 多中心前瞻性队列研究

  苏小凤, 韩继明, 高莹卉, 范 利, 何子君, 赵 哲, 林俊岭, 郭静静, 陈开兵, 高 燕, 刘 霖

  目的 基于临床资料分析老年阻塞性睡眠呼吸暂停（OSA）患者远期缺血性脑卒中发生的独立危险因素，构建老年OSA患者缺血性脑卒中风险评分模型并进行验证，为相关临床治疗提供参考。方法 采用多中心前瞻性队列设计。2015年1月~2017年10月，多中心连续纳入年龄≥60岁、基线无明显心脑血管病史且无重要临床指标缺失的的首次确诊为OSA的老年患者进行随访，随访结局为缺血性脑卒中的发生情况。收集所有纳入研究对象的基线人口学资料、临床特征、睡眠参数指标、实验室和超声检查结果，以3∶1的比例将其随机分为建模组856例和验证组258例。采用LASSO回归用于变量的降维和筛选，并基于Cox比例风险回归构建老年OSA相关的缺血性脑卒中风险评分预测模型。结果 共入组1141例研究对象，中位随访42（41，54）月内，58例发生缺血性脑卒中，累计发病率为5.08%，其中建模组和验证组缺血性脑卒中的累计发病率分别为5.14%和4.91%（P<0.05）。多变量逐步Cox比例风险回归的变量筛选结果显示，年龄（HR=3.44，95% CI：2.38~7.77）、空腹血糖（FPG）（HR=2.13，95% CI：1.22~3.72）、升主动脉内径（HR=2.60，95% CI：1.04~4.47）、左心房前后径（HR=1.98，95% CI：1.75~2.25）和最低氧饱和度（LSpO2）（HR=1.57，95% CI：1.20~1.93）是缺血性脑卒中发生风险的独立危险因素（P<0.05，P<0.01）；利用ROC曲线分析进行比变量转化，以这5个风险变量的回归系数比取整数构建老年OSA患者远期缺血性脑卒中风险评分模型。Bootstrap 法（自抽样次数=500）前后，建模组队列风险评分模型的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.84（95% CI：0.78~0.90）和0.85（95% CI：0.78~0.89），验证组队列风险评分模型的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.83（95% CI：0.73~0.93）和0.82（95% CI：0.72~0.90），提示模型预测效能较好且稳健性高。以模型最佳临床截点的对应值进行风险分层后的生存分析结果显示，高风险组OSA患者的缺血性脑卒中累积发生率高于低风险组（P=0.021）。结论 该模型有助于在老年人群中识别高风险OSA患者进行早期干预，以降低今后与OSA潜在相关的缺血性脑卒中风险。

• HSP90α通过调控气道上皮细胞内质网应激加重屋尘螨诱导的哮喘气道炎症

  黄浩华, 乔妤婕, 黄 奕, 董航明

  目的 探讨热休克蛋白90（HSP90α）参与屋尘螨（HDM）诱导的哮喘气道炎症的作用及调控气道上皮细胞内质网应激的机制。方法 人气道上皮细胞HBE体外培养，由HDM诱导哮喘体外模型，浓度梯度刺激24 h，分为正常对照组；200 U/mL组；400 U/mL组；800 U/mL组。随后分别使用siHSP90α干扰序列转染及HSP90抑制剂17-AAG干预，分为HBE正常对照组、HBE+HDM组（800 U/mL，24 h）、HBE+HDM（800 U/mL，24 h）+siHSP90α（50 nmol，12 h）组、HBE+HDM（800 U/mL，24 h）+17-AAG（900 nmol，6 h）组，测定HSP90α以及内质网应激标志物的表达水平。C57BL/6小鼠由HDM诱导哮喘体内模型，分为正常对照组、17-AAG滴鼻组、HDM滴鼻组、HDM+17-AAG滴鼻组，测定气道炎症水平与内质网应激标志物的表达水平。结果 在HDM诱导的HBE细胞哮喘体外模型中，蛋白电泳结果显示HSP90α（P=0.011）表达上调，琼脂糖凝胶电泳结果显示内质网应激标志物XBP-1（P=0.044）、ATF-6α（P=0.030）和GRP-78（P=0.027）表达水平显著上调；而敲低HSP90α和使用17-AAG会显著抑制HDM诱导的XBP-1（P=0.008）上调；在HDM诱导的哮喘小鼠模型中，相较于HDM组，H&E染色和瑞氏-姬萨姆染色显示HDM+17-AAG组的气道炎症改善，炎症细胞聚集明显减少。肺泡灌洗液计数显示，炎症细胞数量显著减少（P=0.014）。ELISA法显示肺泡灌洗液中炎症因子IL-4（P=0.030）、IL-5（P=0.035）显著降低。免疫组织化学染色显示气道上皮细胞XBP-1和GRP-78表达明显减少。结论 HSP90α加重HDM诱导的哮喘气道炎症，可能通过上调内质网应激实现的。

• Leptin对缺氧状态下大鼠视网膜祖细胞体外增殖和分化的影响

  邢 瑶, 刘子瑶, 张晓辉, 王建明

  目的 探讨Leptin对体外培养的缺氧状态下视网膜祖细胞（RPCs）增殖、分化的影响及细胞中PTEN蛋白表达的变化。方法 原代培养大鼠RPCs，不同浓度Leptin作用RPCs细胞，分为：常氧培养组（Control组）、缺氧培养（Hypoxia）+0、0.3、1.0、3.0、10、30 nmol/L Leptin组，分别培养至12、24、48 h，CCK-8法检测细胞增殖活性。将原代培养的RPCs细胞分为：Control组、Hypoxia组、Hypoxia+Leptin组，培养48 h后，转换为分化培养基继续培养6 d，采用免疫荧光染色法对GFAP阳性细胞比例和β-tubulin III阳性细胞比例进行统计分析。Control组、Hypoxia组、Hypoxia+Leptin组细胞培养48 h后，采用Western blot法检测各组RPCs中PTEN蛋白表达水平。结果 原代培养的P0代RPCs为圆形悬浮生长，培养2 d后细胞可聚集成神经球。低浓度Leptin（0.3、1.0、3.0 nmol/L）作用RPCs 48 h，细胞增殖活性较Control组及Hypoxia组增强，RPCs细胞增殖活性随Leptin浓度增高呈递增趋势，其中，3.0 nmol/L Leptin作用48 h细胞增殖活性最强（P<0.05）；高浓度Leptin（10 nmol/L，30 nmol/L）组细胞增殖活性较对照组减弱（P0.05），而PTEN蛋白表达量较对照组显著下调（P<0.05）。结论 低浓度Leptin可促进缺氧状态下大鼠RPCs细胞增殖，抑制细胞中PTEN蛋白表达，对细胞分化无明显影响。

• 五类栽培白芷与兴安白芷的挥发油成分及其化学亲缘关系

  田恩伟, 成 欣, 刘银榕, 陈建玲, 晁 志

  目的 测定5类栽培白芷及野生兴安白芷（根）的挥发油成分及含量并分析各类白芷间的化学亲缘关系。方法 水蒸气蒸馏法提取6类白芷挥发油，采用GC-MS法对其组分分离及鉴定，采用面积归一化法计算各组分相对含量，并对挥发油成分进行聚类分析和主成分分析。结果 5类栽培白芷（川白芷、杭白芷、祁白芷、禹白芷、毫白芷）和野生兴安白芷共鉴定出81种化合物，分别鉴定出27、34、24、32、28、34种。主要为烷烃类、烯烃类、酯类、有机酸类、醇类等五大类化合物。壬基环丙烷、环十二烷和正十六酸分别为各类白芷共有成分中相对含量最高的挥发油成分。化学聚类结果显示：兴安白芷与5类栽培白芷形成2个分支，栽培白芷又可分为2小类，即川白芷、禹白芷、杭白芷聚为1小类，祁白芷和亳白芷聚为另1小类。主成分分析结果与聚类结果基本一致。结论 六类白芷的挥发油组份及其含量存在一定差异，壬基环丙烷、环十二烷和正十六酸在各类白芷中含量较高。六类白芷总体上分为野生与栽培2大类。

• 雷公藤甲素抑制类风湿关节炎患者的成纤维样滑膜细胞的炎症和迁移： 基于circRNA 0003353/JAK2/STAT3信号通路

  王 杰, 刘 健, 文建庭, 王 馨

  目的 探讨雷公藤甲素（TPL）通过调控环状非编码RNA（circRNA）0003353对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）炎症和细胞迁移的作用机制。方法 纳入我院风湿科住院RA患者50例和正常人30例，收集外周血单个核细胞（PBMCs）及血清，检测circRNA 0003353的表达、免疫炎症指标[类风湿因子（RF）、C反应蛋白（CRP）、红细胞沉降率（ESR）、anti-CCP、IgA、IgG、IgM、C3、C4]和计算DAS28评分；采用最佳浓度10 ng/mL TPL处理RA-FLS，并转染circRNA 0003353过表达质粒。采用CCK-8法和Transwell实验检测RA-FLS细胞活力、迁移能力；ELISA法检测细胞因子IL-4、IL-6、IL-17；RT-qPCR法检测circRNA 0003353、Western blot检测p-JAK2、p-STAT3、JAK2、STAT3蛋白。结果 circRNA 0003353在RA患者PBMCs中表达升高，在协助诊断RA方面有良好效能（AUC=90.5%，P<0.001，95% CI：0.83-0.98），circRNA 0003353与ESR、RF、DAS28呈正相关（P<0.05）；TPL呈时间依赖性降低circRNA 0003353表达，抑制RA-FLS的细胞活力和迁移能力，降低促炎细胞因子IL-6、IL-17，升高抑炎细胞因子IL-4（P<0.01）；TNF-α刺激后，RA-FLS中p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值升高，而TPL干预后降低（P<0.01）；在TPL干预基础上，转染circRNA 0003353过表达质粒，RA-FLS中circRNA 0003353表达升高，细胞活力和迁移能力升高，IL-4降低，IL-6、IL-17升高，p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值升高（P<0.01）。结论 circRNA 0003353在RA-PBMCs和RA-FLS中表达均升高，TPL可通过circRNA 0003353，调控JAK2/STAT3信号通路，抑制RA-FLS炎症和细胞迁移。

• 可穿戴式心电信号R峰检测的心拍感知卷积网络

  谭慧欣, 赖杰伟, 王 祚, 季 磊, 张一行, 王进亮, 宋育章, 阳 维

  目的 实现可穿戴式心电信号的R峰检测，为准确估计心率、心率变异性等生理参数提供基础。方法 采用全卷积网络预测R峰热图，对热图进行峰值定位获得R峰位置。引入心拍感知模块，联合心拍数量预测任务和R峰热图预测任务进行学习，提高卷积网络对全局上下文信息的提取能力。心拍感知模块预测的心拍数量还可估计R-R间期，用作峰值定位的峰间最小水平距离。为满足移动端的实时应用，采用深度可分离卷积减小模型的参数量和计算量。结果 实验仅使用可穿戴式心电数据训练模型。测试中定位误差容忍度设置为150 ms时，本文方法在可穿戴式心电数据集和公开数据集LUDB上的R峰检测灵敏度均高达100%，真阳率均超过99.9%；对于时长10 s的ECG信号，R峰检测CPU耗时约为23.2 ms。结论 本文方法对可穿戴式和常规心电信号的R峰检测均可达到良好效果，且满足R峰检测的实时性需求。

• 瓜蒌提取物抗氧化药效成分群的筛选与验证

  孙明雪, 邹纯才, 鄢海燕

  目的 基于均值化邓氏关联度计算法研究瓜蒌提取物抗氧化的物质基础并进行抗氧化药效成分群的筛选与验证。方法 采用HPLC法建立瓜蒌提取物的指纹图谱，测定瓜蒌提取物（27、9、3 mg/mL）对DPPH自由基（DPPH·）、超氧阴离子自由基（O2-·）清除率，采用均值化邓氏关联度计算法研究瓜蒌提取物抗氧化的谱效关系并筛选抗氧化药效成分群。按瓜蒌提取物抗氧化药效成分群中已知成分的含量制备混合对照品溶液并测定DPPH·、O2-·清除率。结果 瓜蒌提取物HPLC指纹图谱中36个共有峰与DPPH·、O2-·清除率间的关联度不同，关联度大于中位数值的共有峰为：21、36、8、31、14、5、27、2、24、15、18、33、22、34、35、19、28、25号峰，初步认定山奈酚（36号峰）、异槲皮苷（8号峰）、木犀草素（31号峰）、芦丁（5号峰）、芹菜素（35号峰）5个成分为瓜蒌提取物抗氧化药效成分群（简称抗氧化药效成分群），山奈酚：异槲皮苷：木犀草素：芦丁：芹菜素=3∶2∶2∶1∶1（质量比）。抗氧化药效成分群（6.12、2.04、0.68 μg/mL）对DPPH·清除率分别为65.4%、64.0%、61.0%，对O2-·清除率分别为12.9%、9.5%、8.3%。结论 明确了瓜蒌提取物抗氧化的物质基础并筛选出了其抗氧化药效成分群。

• CD36基因缺失通过上调PTP1B基因表达降低小鼠肌肉胰岛素敏感性

  陈 琳, 曾 晗, 秦 虹, 阮雄中, 杨 萍

  目的 探讨在正常饮食状态下，CD36基因缺失对小鼠肌肉胰岛素信号通路的影响及作用机制。方法 野生型小鼠（WT）和CD36基因敲除小鼠（CD36-/-）给予正常饮食喂养14周（n=12）。小鼠禁食4 h，腹腔注射胰岛素（1 U/kg）进行胰岛素耐量实验。Real-time PCR检测小鼠肌肉胰岛素受体(IR)、胰岛素受体底物1/2（IRS1/2）、蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）基因表达。Western blot检测小鼠肌肉蛋白激酶B(AKT)、IR、IRS1/2和PTP1B的蛋白表达。免疫共沉淀（Co-IP）检测肌肉IR和IRS1的酪氨酸磷酸化程度。染色质免疫共沉淀（ChIP）技术检测肌肉PTP1B启动子组蛋白乙酰化水平。结果 在正常饮食状态下，与WT小鼠相比，CD36-/-小鼠的胰岛素耐量显著增强（P<0.05），血清胰岛素浓度升高（P<0.01），胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)升高（P<0.05）。在肌肉组织中，CD36-/-小鼠与WT小鼠相比，p-AKT/AKT蛋白表达比值显著降低（P0.05）。Co-IP实验显示IR和IRS1的酪氨酸磷酸化水平在CD36-/-小鼠中显著降低（P<0.05）。CD36-/-小鼠肌肉中PTP1B mRNA和蛋白表达均高于WT小鼠（P<0.05），ChIP实验显示PTP1B基因启动子的组蛋白乙酰化水平显著升高（P<0.01）。腹腔注射PTP1B的抑制剂可改善CD36-/-小鼠的胰岛素敏感性。结论 在正常饮食条件下，CD36基因对于维持生理肌肉胰岛素敏感性十分重要，小鼠CD36基因缺失通过上调PTP1B基因表达，诱导IR、IRS1去酪氨酸磷酸化而使肌肉胰岛素信号传导受损。

• 带TRS基序突变的新型冠状病毒威胁更大

  贝锦龙, 徐国峰, 常 嘉, 王欣钰, 丘栋安, 阮吉寿, 李 鑫, 高 山

  目的 研究冠状病毒转录调控序列（TRS）基序突变，为深入研究冠状病毒的爆发、传播规律以及开发减毒活疫苗等提供理论基础。方法 采用进化与分子功能联合分析法，对公开的全部套目病毒基因组数据进行分析。结果 冠状病毒基因组内的前导转录调控序列（TRS-L）通常由其5'端非编码区内的前60~70个核苷酸残基组成，长度不同的基因体转录调控序列（TRS-B）位于除ORF1a和1b外的其它基因紧邻的上游，每个冠状病毒基因组的TRS-L和TRS-B共有一段特定的一致性序列，即TRS基序，TRS基序中出现的碱基变化叫做TRS基序突变。TRS基序突变如果发生在TRS-L或多个TRS-B中，会形成超级减毒株。超级减毒株的扩散，可引起无症或轻症感染者增多，潜伏时间长，以及漏检率上升等问题，对SARS-CoV-2的防控提出新的挑战。超级减毒株还会增大与人类长期共存的概率，将长期威胁人类健康。Delta突变株与此前出现的突变株有显著不同，如果不高度重视，可能引起大规模传播。带TRS基序突变的Delta突变株已经在新加坡出现并有扩散趋势，因此新加坡，甚至东南亚可能形成下一波疫情的传播中心。结论 各种SARS-CoV-2突变株都将产生TRS基序突变，只有带TRS基序突变的超级减毒株，才能最终失去跨物种传播和大爆发的能力。

• 甘珀酸增强RSL3对耐顺铂睾丸癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用

  杜家如, 李 彬, 朱晨露, 韩家乐, 童旭辉

  目的 探讨铁死亡诱导剂RSL3对耐顺铂睾丸癌细胞（I-10/DDP）增殖、侵袭和迁移能力的影响以及甘珀酸对RSL3抗耐药睾丸癌活性的作用。方法 MTT法检测不同浓度RSL3（0、1、2、4、8、16、32 μmol/L）及合用甘珀酸（100 μmol/L）作用后I-10/DDP细胞的存活率、铁死亡抑制剂Fer-1（2 μmol/L）的作用下RSL3（4 μmol/L）及甘珀酸（100 μmol/L）合用RSL3（4 μmol/L）处理后I-10/DDP细胞的存活率。后续实验分为Control组、甘珀酸（100 μmol/L）组、RSL3（2 μmol/L）组、甘珀酸（100 μmol/L）合用RSL3（2 μmol/L）组，采用集落克隆实验检测细胞增殖能力、划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭与迁移能力。Western blot检测GPX4水平、C11 BODIPY 581/591荧光探针检测lipid 活性氧（ROS）水平、FerroOrange荧光探针检测Fe2+水平。结果 RSL3呈浓度依赖性降低I-10/DDP细胞存活率，且在RSL3浓度2、4、8 μmol/L 时，合用甘珀酸后细胞存活率显著降低（P<0.05）；与Control组相比，RSL3处理后I-10/DDP细胞的集落形成数减少、划痕愈合率减小（P=0.012）、侵袭和迁移细胞数减少（P<0.001）；与单用RSL3相比，甘珀酸合用RSL3处理后I-10/DDP细胞的集落形成数显著减少、划痕愈合率显著减小（P=0.005）、侵袭和迁移细胞数显著减少（P=0.001，P=0.002）。Fer-1降低单用RSL3、甘珀酸合用RSL3对I-10/DDP细胞增殖的抑制率（P<0.01）；与Control组相比，RSL3作用后细胞内GPX4水平降低（P=0.001）、lipid ROS 水平（P=0.001）和Fe2+水平升高；且与单用RSL3相比，甘珀酸合用RSL3处理后细胞内GPX4水平明显降低（P=0.01）、lipid ROS 水平（P=0.001）和Fe2+水平明显升高。结论 RSL3可诱导耐顺铂睾丸癌细胞发生铁死亡，并能抑制细胞增殖、侵袭和迁移能力；甘珀酸通过促进RSL3诱导的铁死亡从而增强RSL3的抑制作用。

• 吡非尼酮通过抑制TGF-β1通路和炎症反应预防大鼠尿道损伤后的纤维化及狭窄

  李 中, 黄 旭, 陈守峰, 张智健, 梁 心, 李海慧, 秦 雷, 郭园园

  目的 探讨吡非尼酮对大鼠尿道损伤后狭窄形成的预防作用及可能机制。方法 选取SD雄性大鼠30只，随机分为3组（10只/组）：阴性对照组、阳性对照组及吡非尼酮组。吡非尼酮组：切开后尿道海绵体建立大鼠尿道损伤模型，按100 mg·kg-1·d-1腹腔注射吡非尼酮；模型组：同对照组构建大鼠尿道损伤模型，腹腔注射等量溶剂；假手术组：不予尿道损伤处理，但腹腔注射等量溶剂。术后2周逆行尿道造影观察尿道狭窄，留取尿道损伤组织，行HE染色观察尿道组织形态学变化，Masson染色检测胶原变化，免疫组化及Western blot检测a-SMA和TGF-β1的蛋白表达，qRT-PCR检测大鼠尿道组织中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA的表达。结果 吡非尼酮组大鼠较阴性对照和阳性对照组体质量下降，逆行尿道造影显示阳性对照组大鼠尿道显著变窄，吡非尼酮组大鼠尿道较阳性对照组大鼠明显好转（P<0.05）。HE染色显示阳性对照组尿道上皮细胞增生，管腔狭窄，炎性细胞增多；吡非尼酮组病理学表现与阴性对照组相似。Masson染色显示吡非尼酮组较阳性对照组胶原纤维含量少，排列规则有序。免疫组化和Western blot结果表明阳性对照组尿道a-SMA和TGF-β1表达显著高于阴性对照组（P<0.05，P<0.01），而吡非尼酮能够抑制TGF-β1和α-SMA的表达。qRT-PCR结果显示吡非尼酮能够抑制损伤组织中TNF-α、IL-6、IL-1β等炎症因子的基因表达（P<0.05，P<0.01）。结论 吡非尼酮可预防尿道损伤后纤维化及狭窄，并可能与抑制TGF-β1通路和炎症反应相关。

• 唐氏综合征胎盘差异miRNA表达谱分析： 基于全转录组测序分析技术

  何建萍, 唐 健, 苏 虹, 沈翠花, 罗胜军, 王海涛, 钱 源, 吕梦欣

  目的 通过筛选唐氏综合征胎盘中表达变化的miRNAs并分析具体生物学途径来探讨唐氏综合征新的标记物及其分子发病机制。方法 运用全转录组测序分析技术分析唐氏综合征确诊胎盘（DS，n=3）和产前诊断确诊正常胎盘（n=3）样本，筛选出显著差异表达的miRNA，通过miRWalk、Targetscan、miRDB软件预测其靶基因并进行GO和KEGG-Pathway功能富集分析。结果 测序分析共检出82个差异表达的miRNA。DS胎盘组织中有29个miRNA表达上调（变化倍数≥2，P<0.05），15个miRNA表达下调（变化倍数≥2，P<0.05）；根据表达丰度共筛选出 4 个表达上调的 miRNA，6 个表达下调的 miRNA。其共同靶基因BTBD3、AUTS2均与神经发育相关。GO富集分析结果显示差异表达miRNA的靶基因主要富集到蛋白结合、水解酶活性、金属离子结合、转移酶活性、核苷酸结合、胞质组分、细胞核组分、转录调控、RNA代谢过程调控、DNA依赖性RNA聚合酶Ⅱ启动子转录调控、眼睛发育、感觉器官发育等。KEGG富集分析结果显示差异表达miRNA靶基因主要参与的信号通路包括肿瘤相关信号通路、PI3K-Akt信号通路、Ras信号通路、Rap1信号通路、细胞骨架调控信号通路、嘌呤代谢相关信号通路、P53相关信号通路。结论 miRNAs可能参与了唐氏综合征胎盘损伤和相关的妊娠病理，并可能对其他智力障碍相关疾病提供一定临床思路及对未来的预防治疗发挥重要作用。

• 二甲双胍和LPS通过转录因子RUNX2调控NFATc2基因的转录

  薛晓阳, 李忠豪, 赵 明

  目的 构建人T细胞活化核因子C2（NFATc2）基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-NFATc2-promoter，检测其转录活性，探究二甲双胍和脂多糖对其转录活性的影响。方法 利用UCSC网站查找人NFATc2基因的启动子序列并设计上下游引物PCR扩增人NFATc2基因启动子片段；用限制性内切酶KpnⅠ和HindⅢ双酶切质粒pGL3-basic，将人NFATc2基因启动子片段插入到pGL3-basic质粒，重组质粒命名为pGL3-NFATc2-promoter。将pGL3-NFATc2-promoter与内参质粒pRL-TK共转染293F细胞，检测其荧光素酶活性。同时构建人NFATc2基因启动子不同片段长度的报告基因载体并进行荧光素酶活性检测，分别给予不同浓度的二甲双胍和脂多糖处理24 h后检测二甲双胍和脂多糖对NFATc2转录活性的影响。进一步突变NFATC2基因启动子上转录因子RUNX2的结合位点探究二甲双胍和脂多糖对NFATc2的转录调控作用。结果 研究成功构建了不同片段长度（2170、2077、1802、1651、1083、323 bp）的人NFATC2基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-NFATc2-promoter，经酶切及测序鉴定完全正确。将不同片段长度的pGL3-NFATc2-promoter转染到293F细胞，发现pGL3-1651 bp具有最高转录活性，荧光素酶活性约为pGL3-2170 bp的3.3倍（1.8433±0.1457 vs 0.5467±0.0850）。中浓度（5 mmol/L）和高浓度（10 mmol/L）的二甲双胍分别上调pGL3-1651 bp的转录活性多达2.5、3倍（1.3467±0.1601 vs 0.8867±0.0321，1.8124±0.2771 vs 0.8867±0.0321）。不同剂量的脂多糖均能上调pGL3-1651 bp的转录活性不低于1.6倍（1.4813±0.0616 vs 0.8867±0.0321）。突变pGL3-1651 bp上的RUNX2结合位点后，二甲双胍和脂多糖上调的pGL3-1651 bp转录活性均受到抑制，转录活性下降（2.1667±0.1527 vs 1.233±0.1155；2.3667±0.2887 vs 1.1333±0.3786）。结论 pGL3-NFATc2-promoter在293F细胞中能被转录激活，并证实脂多糖和二甲双胍转录激活pGL3-NFATc2-promoter依赖于转录因RUNX2。

• 雌二醇通过上调IRE1α-XBP1信号轴抑制小鼠腹腔巨噬细胞的分化

  卓灵剑, 王烁辰, 刘 星, 陈保安, 李 想

  目的 研究雌二醇其通过内质网应激通路影响巨噬细胞免疫特性的可能机制。方法 提取C57小鼠腹腔巨噬细胞，IFN-γ60 ng/mL作用下体外培养巨噬细胞，分组检测雌激素对巨噬细胞影响：实验组为雌二醇（1.0 nmol/L）处理；抑制剂组为雌二醇（1.0 nmol/L）和雌激素受体拮抗剂（Acolbifene, 4 nmol/L）同时作用；对照组加等量PBS处理，培养48 h后通过Western blot法检测比较巨噬细胞极化蛋白MHC-II、iNOS和内质网应激标志性蛋白IRE1α、eIF2α和ATF6的表达水平，通过RT-PCR法检测巨噬细胞TGF-β、IL-6、IL-10、TNFα mRNA水平变化。随后分组检测内质网应激对巨噬细胞的影响：雌激素处理组；雌激素和内质网IRE1α信号抑制剂（4 μ 8 C，50 μmol/L）处理组；IRE1α激动剂组（TG，0.2 nmol/L）处理组；对照组加等量PBS处理，随后检测巨噬细胞的分化情况。结果 和对照组比较，雌激素处理后巨噬细胞M1相关蛋白MHC-II （P=0.021）和iNOS（P<0.001）表达显著降低，促炎细胞因子TNF-α（P=0.003）和IL-6 mRNA（P=0.004）表达下调，抗炎的M2型细胞因子TGF-β（P=0.002）和IL-10（P=0.008）mRNA表达上升，同时发现内质网相关的IRE1α（P<0.001）蛋白活化水平升高，其下游转录因子XBP-1（P<0.001）表达上调，加入雌激素受体阻断剂能够改变这种变化。和单纯雌激素处理组比较，在培养基中加入雌激素的同时加入IRE1α抑制剂4 μ 8 C会导致巨噬细胞 M1 相关蛋白 MHC-II（P=0.002）和 iNOS（P=0.003）表达显著上调，促炎细胞因子 TNF-α（P=0.003）和 IL-6mRNA（P=0.024）表达上调，抗炎的M2型细胞因子TGF-β（P<0.001）和IL-10（P<0.001）mRNA表达下调，而激动IRE1α通路会矫正这种变化。结论 雌激素能够通过上调IRE1α-XBP-1信号轴抑制巨噬细胞促炎表型的分化，从而对炎症反应发挥抑制作用。

• 皖南蝮蛇毒抑瘤组分-Ⅰ通过MMP2抑制三阴性乳腺癌细胞体外血管生成拟态

  葛 钰, 卢林明, 田澍雨, 肖 雨, 谢尚富, 王 琪, 支 慧

  目的 探讨皖南蝮蛇毒抑瘤组分-I(AHVAC-I)对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231血管拟态能力的影响及其可能的作用机制。方法 采用CCK8实验根据半数抑制浓度（IC50）确定AHVAC-I实验浓度，将MDA-MB-231细胞分为3组：对照组（不含药物的培养基处理）、AHVAC-I实验组、药物对照组（5-Fu处理）。Matrigel实验检测分析不同浓度AHVAC-I作用对MDA-MB-231血管拟态能力的影响。运用定量PCR和Western blot检测基质金属蛋白酶2（MMP2）与MMP9的表达水平。结果 相较对照组，5、10、20 μg/mL AHVAC-I可显著抑制MDA-MB-231细胞的血管拟态能力（P<0.01），且呈剂量依懒性。RT-PCR及Westernblot结果显示，AHVAC-I能够抑制MMP2的表达水平，降低三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231分泌生成的MMP2（P<0.01），而MMP2的补入可恢复因AHVAC-I作用而抑制的MDA-MB-231细胞血管拟态的能力。结论 AHVAC-I可通过下调MMP2的表达，抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231血管生成拟态的形成能力。

• 体外循环术后早期升高的C反应蛋白与术后心房颤动有关

  何 勇, 刘四云, 罗永金, 吴洪坤, 余 杨, 陈 灏

  目的 探讨术后C反应蛋白水平与术后房颤发生情况的关系。方法 回顾性分析我院2018年9月~2021年5月期间进行体外循环手术的550例患者，根据排除标准进行研究对象的筛选，最终入选患者363例，采用非参数检验（两独立样本Wilcoxon秩和检验）对年龄、术后早期C反应蛋白与术后房颤发生情况进行单因素分析，采用χ2检验分析研究对象性别、疾病类型、合并症发生情况与术后房颤发生情况的关系；多因素分析采用二分类logistic回归。结果 本次研究中共入组363例患者，其中瓣膜病247例，主动脉夹层42例，冠心病37例，先天性心脏病37例。术后房颤发生人数101人，发生率为27.82%；术后C反应蛋白中位数88.65 mg/L，年龄中位数为57岁，最小5岁，最大77岁；将研究对象根据术后心房颤动的发生分为房颤组和窦性组。使用单因素和多因素相关性研究显示，术后早期C反应蛋白是术后心房颤动发生的重要因素。结论 术后早期升高的C反应蛋白与术后房颤的发生有关系。

• RNA结合蛋白Musashi2在实体瘤中的研究进展

  杨英桂 , 赵 敏, 丁腾腾, 倪楚萍, 郑清友, 李 欣

  RNA结合蛋白（RBP）在基因调控过程中扮演着关键的作用，参与RNA的翻译、修饰、剪接和转运等重要生命活动，探索RBP对RNA的具体作用意义重大。多项研究表明RBP的异常表达与多种疾病相关。哺乳动物的Musashi （Msi）家族是一类进化保守且功能强大的RBP，其家族成员Msi1和Msi2在调控干细胞活性和肿瘤发生发展中具有重要的作用，具体为通过绑定并调节mRNA的翻译、稳定性及其下游的细胞信号通路从而调控机体的多种生物学进程，其中Msi2与胚胎的生长发育、肿瘤干细胞的维持、血液系统肿瘤的发展等密切相关，而近年来越来越多的报道证实Msi2在实体性肿瘤发生发展中同样发挥着至关重要的作用，主要影响肿瘤的增殖、侵袭、转移及耐药等。具体机制上Msi2主要涉及Wnt/β-catenin、TGF-β/SMAD3、Akt/mTOR、JAK/STAT和Numb及其相关信号通路（Notch、p53和Hedgehog通路）等信号通路。将Msi2基因作为靶点指导肿瘤治疗的临床前研究目前取得了一些初步的成果。本文就Msi2的分子结构、生理功能、在多种实体瘤的发生发展中的作用以及相关信号通路等方面的最新研究进展进行综述。