南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2022年第2期

• 环状RNA在免疫相关疾病中的作用

  詹炜杰, 严 涛, 高嘉文, 宋旻恺, 王 婷, 林 菲, 周海榆, 李 栎, 张 超

  环状RNA（circRNAs）是一种无3’聚腺苷化［poly-(A)］尾或5’帽的共价闭合环结构非编码RNA（ncRNA），是一个崭新的研究领域。环状RNA最早于20世纪70年代在RNA病毒中被发现，但由于传统的多聚腺苷酸转录组分析的局限性，最初发现的circRNAs数量很少。由于特定的生化和计算方法的发展，近年来的研究表明，大量circRNAs在真核转录组中自然而广泛地存在。研究发现circRNAs在多种生理和病理过程中发挥重要作用，如充当miRNA海绵、与RNA结合蛋白（RBP）结合、作为转录调控因子，甚至作为翻译模板。研究者认为circRNAs可能是与各种疾病的诊断、疗效和预后相关的潜在生物标志物，由于其稳定性和组织及发育阶段的特异性，可能成为有效的治疗靶点。本综述重点讨论circRNAs的特性及其免疫功能并揭示其在免疫相关疾病中的作用。

• 龙杞方治疗糖尿病肾脏病的作用机制：基于网络药理学和大鼠验证实验

  邢 磊, 邢文文, 郭宏敏

  目的 基于GEO数据库和网络药理学方法研究龙杞方治疗糖尿病肾脏病（DKD）的作用机制，并通过动物实验进一步验证龙杞方治疗DKD的信号通路。方法 利用GEO、TCMSP、CNKI、ChemDraw 、SwissTarget Prediction等数据库获得龙杞方和DKD靶点，VENNY获得龙杞方-DKD交集靶点，String进行蛋白互作分析，R包进行KEGG和GO富集分析，Cytoscape 3.7.2软件构建网络图。动物实验验证分析，40只健康雄性SD大鼠随机分为5组（8只/组），采用腹腔内注射链脲佐菌素（STZ）诱导的DKD大鼠模型，龙杞方低剂量组（1 g·kg-1·d-1），龙杞方中剂量组（2 g·kg-1·d-1），龙杞方高剂量组（2 g·kg-1·d-1），空白组和模型组采用等体积水灌胃；HE染色观察大鼠肾脏形态，检测肾功能情况；Western blot检测炎症指标NF-κB、p-NF-κB蛋白表达水平。结果 龙杞方共760个主要靶点，通过GEO数据库获得差异基因共1026个，通过VENNY数据库获得龙杞方-DKD交集靶点共61个，通过PPI网络互作获得的核心靶点为MYC、EGF、CASP3、VEGFA、CCL2、SPP1、VCAM1、ICAM1。GO分析龙杞方主要与核受体活性、配体激活转录因子活性等有关，KEGG发现龙杞方主要通过干预NF-κB、TNF、PI3K-AKT等炎症信号通路有关。动物实验显示龙杞方高、中、低剂量干预后DKD大鼠的肾功能指标（Scr、BUN、UALB、UACR）与模型组比较有显著改善（P中剂量组>低剂量组；Western blot结果显示龙杞方高、中、低剂量干预DKD大鼠，与模型组比较，可以使NF-κB、p-NF-κB表达显著下调，效应强度为：龙杞方高剂量组>中剂量组>低剂量组。结论 龙杞方通过多成分、多靶点、多信号通路治疗DKD，龙杞方可能通过抑制炎症信号通路NF-κB起到保护肾功能的作用。

• 抑制TAK1可加重甲苯二异氰酸酯诱导的哮喘小鼠气道炎症

  杨淑銮, 赵文驱, 彭显如, 蓝紫涵, 黄俊文, 韩慧珊, 陈 颖, 蔡绍曦, 赵海金

  目的 探讨转化生长因子β激活激酶1（TAK1）对甲苯二异氰酸酯（TDI）哮喘小鼠气道炎症的影响。方法 建立TDI哮喘小鼠模型，为探讨TAK1在TDI哮喘模型中的作用，将32只小鼠随机分为4组（8只/组）：AOO组，AOO+5Z-7-Oxozeaenol组，TDI组，TDI+5Z-7-Oxozeaenol组；为进一步探讨RIPK1在体内模型的作用，将另外32只小鼠随机分为4组（8只/组）：AOO组，TDI组，TDI+5Z-7-Oxozeaenol组，TDI+5Z-7-Oxozeaenol+Necrostatin-1组。每次激发前使用TAK1抑制剂（5Z-7-Oxozeaenol，5 mg/kg）和/或RIPK1抑制剂（Necrostatin-1,5 mg/kg）。检测各组小鼠气道反应性、气道炎症及气道重塑等指标。体外实验：配制TDI-人血清白蛋白（TDI-HSA）复合物联合TAK1抑制剂处理小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7），通过CCK8检测各组细胞活力，通过Western blot检测各组TAK1、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）及受体相互作用丝/苏氨酸蛋白酶1（RIPK1）相关信号通路分子表达情况；使用RIPK1抑制剂进一步评估对细胞活力及TDI哮喘模型的影响。结果 与单独TDI致敏激发哮喘小鼠相比，TAK1抑制剂加重了小鼠气道炎症、气道高反应性及气道重塑（P<0.05）。抑制TAK1降低了RAW264.7细胞活力，与TDI-HSA共同处理进一步降低（P<0.05）。抑制TAK1降低了TDI-HSA诱导的TAK1磷酸化水平及MAPK信号通路的活化（P<0.05）。TAK1抑制剂与TDI-HSA共同处理后，RIPK1磷酸化水平升高，同时Caspase 8持续活化（P<0.05）；使用RIPK1抑制剂可以恢复TAK1抑制剂与TDI-HSA共同处理引起的细胞活力的减低（P<0.05）。体内RIPK1抑制剂亦可以减轻TAK1抑制剂对TDI哮喘小鼠气道炎症的加重（P<0.05）。结论 抑制TAK1可能通过增加RIPK1的活性，引起Caspase 8的持续活化而增加巨噬细胞的死亡，参与促进TDI诱导的哮喘小鼠气道炎症。

• TIM-3 基因在上皮性卵巢癌中高表达并促进癌细胞的增殖和迁移

  霍叶琳, 王 月, 安 娜, 杜 雪

  目的 通过挖掘GEPIA数据库中的基因信息，分析T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3（TIM-3）基因在上皮性卵巢癌（EOC）中的表达及作用机制。方法 采用GEPIA数据库在线分析TIM-3基因在EOC组织和正常卵巢组织中的表达水平。收集2018年6月~2019年12月在我院实施卵巢手术治疗的82例EOC癌变组织标本和18例正常卵巢组织标本，免疫组织化学法检测标本组织中TIM-3的表达水平，分析TIM-3表达与EOC临床病理参数的相关性；采用Kaplan-Meier Plotter分析TIM-3表达水平与EOC患者生存之间的关系。qRT-PCR法检测卵巢癌组织和正常组织标本TIM-3和Wnt1 mRNA表达水平及相关性。采用pMAGic 4.0质粒转染构建TIM-3沉默卵巢癌SKOV3细胞系，将细胞分为SKOV3组（未转染的SKOV3细胞系）、沉默阴性对照组（SKOV3+NC siRNA组：转染pMAGic 4.0 NC siRNA质粒的SKOV3细胞系）和沉默TIM-3组（SKOV3+TIM-3 siRNA组：转染pMAGic 4.0 TIM-3 siRNA质粒的SKOV3细胞系）；采用pcDNA3.1质粒转染构建TIM-3过表达卵巢癌SKOV3细胞系，将细胞分为SKOV3组、过表达阴性对照组（pcDNA NC组：转染pcDNA3.1质粒的SKOV3细胞系）和过表达TIM-3组（pcDNA TIM-3组：转染pcDNA3.1 TIM-3质粒的SKOV3细胞系）。MTT法检测细胞增殖能力，Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡能力，划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力，TOPflash/FOPflash双荧光素酶报告基因实验检测Wnt/β-catenin通路活性，qPCR检测Wnt/β-catenin信号通路中转录因子TCF-7、TCFL-2及靶基因CD44的mRNA水平，Western blot检测SKOV3细胞中MMP-9，CD44、Wnt1、β-catenin及E-cad蛋白表达。结果 TIM-3在正常卵巢组织中呈阴性表达，在EOC组织中呈阳性表达，EOC组织中TIM-3阳性表达率（84.14%）显著高于正常卵巢组织（16.67%，P<0.05）。TIM-3表达与FIGO分期、组织分化程度及淋巴结是否转移有关（P0.05）。且TIM-3与Wnt1水平呈正相关（P<0.05）。沉默TIM-3基因后，Wnt/β-catenin通路活性受到抑制，SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低（P<0.05），凋亡能力显著升高（P<0.05），转录因子TCF-7、TCFL-2及靶基因CD44的mRNA水平显著下调，细胞MMP-9，CD44、Wnt1、β-catenin蛋白水平均显著下调，EMT相关蛋白E-cad水平显著上调（P<0.05）。过表达TIM-3基因后，Wnt/β-catenin通路活性被激活，SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力显著升高（P<0.05），凋亡能力显著降低（P<0.05），转录因子TCF-7、TCFL-2及靶基因CD44的mRNA水平显著上调，细胞MMP-9，CD44、Wnt1、β-catenin蛋白水平均显著上调，EMT相关蛋白E-cad水平显著下调（P<0.05）。结论 TIM-3在EOC组织中高表达，可促进卵巢癌细胞的恶性生物学行为，其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。

• 萘烯丙基三氟甲基苯并环戊酮抑制肺癌A549细胞增殖并诱导其凋亡

  吴 旭, 何俊杰, 李 萍, 王 毅, 颜 亮, 马金珠

  目的 探讨新型萘烯丙基三氟甲基苯并环戊酮（XX0335）抑制肺癌细胞系A549增殖并诱导凋亡的分子机制。方法 实验分为4组：对照组（含0.1% DMSO的培养液）、另外3组为不同浓度（6.25、12.5、25 μg/mL）的XX0335（该化合物需DMSO溶解，但工作浓度中DMSO的终浓度均低于0.1%）。通过CCK-8和EdU实验分别测定各组对A549细胞活力及增殖的影响，通过流式细胞术测定上述浓度的XX0335对A549细胞凋亡及周期的影响；通过免疫印迹实验测定不同浓度的XX0335对增殖相关蛋白Akt、mTOR、Akt/mTOR磷酸化水平、凋亡相关蛋白cleaved PARP及细胞周期相关蛋白CyclinD1表达水平的影响；通过裸鼠荷瘤实验探究XX0335对A549增殖的影响，动物实验使用4周龄小鼠共10只，随机均分为2组。将2×106A549细胞植入小鼠左侧腋下，待26 d后瘤体长径长至1 cm时，对照组小鼠注射无菌生理盐水（200 μL），对实验组注射化合物XX0335（12.5 μg/mL，200 μL），隔天注射1次，共5次之后取肿瘤观察每组瘤体大小。结果 CCK-8实验表明，A549细胞活力在XX0335的作用下比对照组呈剂量依赖性下降（P<0.01）。EdU实验发现XX0335能显著抑制A549细胞增殖（P<0.001）。流式细胞术检测结果表明，细胞凋亡较对照组呈剂量依赖性上升（P<0.01），且细胞停滞于G1期。与对照组相比，AKT、mTOR的磷酸化受到了明显抑制，cleaved PARP表达量升高，且CyclinD1的蛋白表达量下降。裸鼠荷瘤实验结果显示注射XX0335后肿瘤体积明显减小（P<0.01）。结论 XX0335抑制了肺癌A549细胞增殖并诱导细胞发生了凋亡，且细胞周期阻滞于G1期，其作用机制可能与抑制Akt/mTOR信号通路有关。

• 二氢杨梅素可逆转SKBR3细胞对赫赛汀的耐药：基于上调miR-98-5p抑制IGF1R/HER2二聚体形成

  张明亮, 郭晨旭, 储云棉, 许 睿, 殷发祥, 钱 军

  目的 探索二氢杨梅素对SKBR3细胞miR-98-5p表达影响及在赫赛汀耐药发生中的机制。方法 通过TargetScan在线数据库对IGF2和miR-98在乳腺癌中的表达及相互作用进行生信分析。细胞实验培养SKBR3细胞并构建耐曲妥珠单抗的SKBR3-R细胞和裸鼠异种移植瘤模型，免疫印迹法和免疫组化法检测细胞和组织内关键信号蛋白表达及其磷酸化水平。shRNA慢病毒载体构建转染细胞系，RT-qPCR检测细胞内RNA表达水平，MTS法检测细胞增殖，Transwell法检测细胞侵袭。荧光素酶实验验证RNA间的相互作用，免疫共沉淀法分析IGF-1R/HER2异源二聚体含量。结果 在SKBR3-R细胞中IGF2、pIGF1R、p-Akt、p-S6K水平高于SKBR3细胞，而PTEN蛋白表达正好相反（P<0.05）；SKBR3-R细胞中IGF1R/HER2异源二聚体含量升高（P0.05），但IGF2表达水平降低，细胞侵袭能力降低（P<0.05）；经二氢杨梅素饲养后耐药裸鼠肿瘤组织中miR-98-5p表达上调，IGF2表达下降，对赫赛汀敏感性升高（P<0.05）。 结论 二氢杨梅素通过诱导SKBR3-R细胞内miR-98-5p表达，使其结合IGF2 mRNA 降低IGF2水平，进一步抑制IGF-1R/HER2异源二聚体形成，从而逆转细胞对赫赛汀耐药。

• PFN2在胃癌组织中高表达并促进胃癌细胞的增殖和迁移

  胡曙民, 史良会

  目的 研究PFN2作为胃癌新的预后评价指标及作为胃癌治疗全新靶点的潜力。方法 组织层面上，应用免疫组织化学检测100例胃癌组织及其癌旁组织中PFN2蛋白表达水平；根据PFN2表达量，将研究对象分为癌组织中PNF2高表达组（46例）、低表达（48例）组，以及癌旁组织中PFN2高表达组（26例）、低表达（49例）组；采用χ2检验、Spearman相关性以及Kaplan-Meier 生存分析法，分析PFN2蛋白表达水平与患者的临床参数之间关系；细胞功能上，敲低MKN-45细胞中PFN2，将其分为controlsiRNA组与PFN2-siRNA组；过表达MKN-45细胞中PFN2，将其分为control-vector组与PFN2-vector组，选取Transwell实验、CCK-8实验检测PFN2对胃癌MKN-45细胞增殖及迁移影响。结果 在胃癌组织中PFN2蛋白表达高于癌旁组织（P<0.01）；PFN2蛋白的表达水平和胃癌病人的M分期显著正相关（P<0.05）；在胃癌组织中，PFN2表达和VEGFR表达呈正相关关系（P<0.01）；PFN2蛋白高表达的胃癌患者预后更差（P<0.01），并且是胃癌预后的独立预测因子（P<0.05）；MKN-45细胞中高表达PFN2组较低表达组增殖、迁移能力更强（P<0.001）。结论 PFN2蛋白在胃癌组织中高表达，并促进人胃癌MKN-45细胞的增殖、迁移。

• 低剂量CT图像重建算法对脑出血检测性能的影响

  符 帅, 李明强, 边兆英, 马建华

  目的 探究低剂量CT图像重建算法对脑出血检测性能的影响。方法 对正常剂量（定义为100% dose）脑出血CT图像进行低剂量CT成像仿真，仿真剂量包括30%、25%和20% dose。采用7种CT图像重建算法进行图像重建，以实现抑制低剂量CT图像噪声，包括滤波反投影算法（FBP）、惩罚加权最小二乘的全变分（PWLS-TV）、非局部均值滤波（NLM）、3维块匹配（BM3D）、残差编码解码卷积神经网络（REDCNN）、FBP卷积神经网络（FBPConvNet）和图像恢复迭代残差卷积网络（IRLNet）。基于深度学习方法的脑出血检测模型（CNN-LSTM）对正常剂量图像和7种重建算法得到的图像进行脑出血检测。对7种重建算法与正常剂量图像的脑出血检测结果进行比较，评估不同重建算法对脑出血检测性能的影响。结果（1）对于同一算法，剂量对脑出血检测性能的影响：在30%、25%和20% dose下，FBP算法脑出血检测正确率分别为82.21%、74.61%和65.55%。（2）在相同剂量（30% dose）下，不同图像重建算法对脑出血检测性能的影响：FBP、PWLS-TV、NLM、BM3D、REDCNN、FBPConvNet和IRLNet算法的脑出血检测正确率分别为82.21%、86.80%、89.37%、81.43%、90.05%、90.72%和93.51%。（3）IRLNet算法在30%、25%和20% dose下的脑出血检测正确率分别为93.51%、93.51%和93.06%。结论 剂量和重建算法的选择对脑出血检测性能有显著影响，临床中选择合适的剂量和算法组合能在大幅度降低辐射剂量同时保证脑出血检测性能。

• ANA-12通过靶向阻断BDNF/TrkB信号通路降低大鼠的脊髓炎症和缓解病理性疼痛

  赵佳佳, 杨荷雨, 王招娣, 朱海丽, 谢 敏

  目的 探讨ANA-12靶向阻断脑源性神经营养因子（BDNF）/原肌球蛋白受体激酶B（TrkB）信号对炎症痛的抑制作用及机制。方法 将42只大鼠随机分为7组（6只/组）：BDNF处理下的对照组、ANA-12处理组、BDNF处理组以及BDNF和ANA-12联合处理组（BDNF+ANA-12）；炎症痛模型下的对照组、CFA处理组以及CFA和ANA-12联合处理组（CFA+ANA-12）。给药完毕后，对各组大鼠进行痛觉行为学检测，记录ANA-12处理对BDNF-急性痛和CFA-慢性炎症痛大鼠痛觉行为的影响；采用免疫印迹法检测各组大鼠脊髓组织TrkB信号、小胶质细胞标记蛋白Iba1和促炎细胞因子TNF-α以及炎症因子IL-1β、Caspase-1、NLRP3的表达水平。结果 与对照组相比，BDNF增加自发缩足次数（P<0.05）；与BDNF组相比，ANA-12降低自发缩足次数（P<0.05）。与对照组相比，CFA增加同侧机械刺激敏感性（P<0.05）；与CFA组相比，ANA-12增加同侧缩足阈值（P<0.05）。与对照组相比，BDNF和CFA增加磷酸化TrkB（Y705）水平（P<0.05）；与BDNF或CFA组相比，ANA-12降低TrkB（Y705）磷酸化水平（P<0.05）。与对照组相比，BDNF和CFA上调Iba1、TNF-α以及炎症因子表达（P<0.05）；与BDNF或CFA组相比，ANA-12降低Iba1、TNF-α以及炎症因子表达水平（P<0.05）。结论 ANA-12靶向阻断BDNF/TrkB信号可降低脊髓炎症并缓解急性痛和慢性痛。

• 继发性甲状旁腺功能亢进症来源的甲状旁腺原代细胞的培养及鉴定

  李珮婷, 李 刚, 柳丽丹, 黄 珊, 李 俊, 吴 唯

  目的 分离、培养及鉴定继发性甲状旁腺功能亢进症患者来源甲状旁腺。方法 采用胶原酶消化法提取10例继发性甲状旁腺功能亢进症的甲状旁腺原代细胞进行体外培养，通过显微摄像、细胞计数研究其形态学变化及生长特性，用细胞免疫荧光、qRT-PCR及Western blot检测原代及传代甲状旁腺细胞甲状旁腺素（PTH）、钙敏感受体（CaSR）和神经胶质细胞缺失因子2（GCM2）mRNA及蛋白的表达情况，对所得细胞进行分析鉴定。结果 本研究成功提取甲状旁腺原代细胞，其细胞PTH免疫荧光结果为阳性，细胞增长曲线显示甲状旁腺细胞体外分散培养的群体倍增时间约为71.61 h。P2代细胞分泌PTH较P0、P1代细胞减少（P<0.001）。P1代细胞和P0代细胞间PTH（P=0.572）和GCM2（P=0.892）的mRNA表达差异无统计学意义，PTH（P=0.572）和GCM2（P=0.892）的蛋白表达差异也无统计学意义。但P1代细胞的CaSR mRNA（P=0.017）和蛋白表达（P=0.006）均较P0代甲状旁腺细胞减少。结论 采用胶原酶消化法培养的甲状旁腺细胞一定程度上具有与在体细胞相似的细胞生物学特性。

• 全膝关节置换术中采用内侧髌旁软组织重叠缝合法处理重度膝关节骨关节炎合并固定性髌骨脱位的早中期临床结果

  牛 鸣, 王秋入, 李军伟, 王 同, 吴旭年, 蔡经纬, 王旭勃, 康鹏德

  目的 回顾性分析在全膝关节置换术中采用内侧髌旁软组织结构重叠缝合法处理重度骨关节炎合并固定性髌骨脱位的早中期临床结果。方法 在全膝关节置换术中采用内侧髌旁软组织结构重叠缝合法治疗12例重度膝关节骨关节炎合并固定性髌骨脱位的患者。美国膝关节协会评分、加州大学洛杉矶分校活动等级评分、视觉模拟（VAS）疼痛评分比较术前和术后2年情况及膝关节活动度。影像学检查患者膝关节正侧位、双下肢站立位全长和髌骨轴位复位情况。结果 患者的美国膝关节协会评分由术前的34.2±11.1分提高到术后2年73.5±6.3分（P<0.001）。加州大学洛杉矶分校活动等级评分由术前的3.8±0.8分提高到术后2年5.8±0.6分（P=0.003）。VAS 疼痛评分由术前的42.8±6.0分下降到术后2年20.1±3.7（P<0.001）。膝关节活动度由术前74.6±8.9度提高到术后2年97.5±4.5度（P<0.001）。影像学显示所有患者髌骨未见半脱位或脱位征象。结论 在全膝关节置换术中采用特殊的内侧髌旁软组织结构重叠缝合法处理重度骨关节炎合并固定性髌骨脱位，可以取得令人满意的早中期临床结果。

• TGF-β1通过上调Shh 信号诱导大鼠脑膜成纤维细胞向肌成纤维细胞转化

  文 君, 朱慧敏, 李雪梅, 黄家贵, 陈 月, 杨 琴

  目的 探讨TGF-β1在诱导脑膜成纤维细胞转化为肌成纤维细胞中对Shh信号的影响。方法 新生24 h SD大鼠脑膜原代成纤维细胞经Ⅳ型胶原酶提取纯化。原代脑膜成纤维细胞随机分为3个组：分别为空白对照组、10 ng/mL TGF-β1处理组（TGF-β1组）、10 ng/mL TGF-β1联合20 μmol/L TGF-β1受体抑制剂SB-431542组(TGF-β1+SB组)。各组细胞在药物处理前均用无血清培养基培养24 h后换用加入了药物的DMEM/F12完全培养基处理72 h。采用CCK-8法检测各实验组成纤维细胞的增殖能力；细胞划痕实验检测各实验组成纤维细胞的迁移能力；免疫荧光法检测各实验组纤维连接蛋白（Fn）的表达；Western blotting检测各实验组Fn、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Shh蛋白的表达；q-PCR检测各实验组细胞Shh mRNA的表达。结果 TGF-β1可促进原代脑膜成纤维细胞的增殖（P<0.05）；TGF-β1可促进原代脑膜成纤维细胞的迁移（P<0.05）。TGF-β1可促进成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化并增加Fn的分泌（P<0.05）。TGF-β1处理后可上调Shh蛋白和mRNA的表达（P<0.05），TGF-β1受体抑制剂SB-431542则可抑制TGF-β1引起的原代脑膜成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化并减少纤维连接蛋白的分泌（P<0.05）。结论 TGF-β1可通过上调Sonic Hedgehog信号通路中Shh蛋白的表达，诱导脑膜成纤维细胞转化为肌成纤维细胞。

• 抑制铁死亡可减轻脓毒症小鼠的心肌损伤：脂钙蛋白-2的作用

  黄毓慧, 张共鹏, 梁 欢, 曹珍珍, 叶红伟, 高 琴

  目的 观察铁死亡在盲肠结扎与穿孔（CLP）法诱导的脓毒症小鼠心肌损伤中的作用，并探讨脂钙蛋白-2（Lcn2）在铁死亡中的可能作用。方法 选取8周龄雄性C57BL/6小鼠，采用CLP法诱导脓毒症心肌损伤模型。小鼠随机分为3组（10只/组）：假手术组、脓毒症组（CLP，小鼠接受CLP手术）、脓毒症+铁死亡抑制剂Ferrostain-1组（CLP+Fer-1，小鼠腹腔注射浓度为5 mg/mL的Fer-1 5 mg/kg，1 h后接受CLP手术）。各组小鼠术后24 h通过超声心动图检测小鼠心功能。H&E染色观察心肌损伤，透射电镜观察心肌纤维细微结构和线粒体的变化；ELISA法测定血清中炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平；组织铁试剂盒测定心肌组织铁含量的变化；Western blot法检测心肌组织中Lcn2蛋白和铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）和铁死亡抑制蛋白1（FSP1）的表达变化。结果 与假手术组相比，CLP术后24 h，脓毒症小鼠心脏收缩与舒张功能减弱，左心室射血分数（LVEF%）、左心室缩短分数（LVFS%）和左心室舒张末期内径（LVIDd）降低（P<0.05）；左心室收缩期末期内径（LVIDs）升高（P<0.05）。与CLP组相比，CLP+铁死亡抑制剂Fer-1组LVEF%、LVFS%和LVIDd升高（P<0.05）；LVIDs降低（P<0.05）。光镜下观察到CLP小鼠心肌纤维排列不整齐，部分变性，有炎症细胞浸润，间质水肿，横纹模糊，红细胞渗出。透射电镜观察到部分线粒体嵴减少，外膜破裂，部分线粒体变小，膜密度增高。CLP+Fer-1组小鼠心肌形态学有改善，线粒体损伤减轻。与假手术组相比，CLP组血清TNF-α水平、心肌组织铁含量、Lcn2蛋白表达升高（P<0.01），GPX4、FSP1蛋白表达降低（P<0.01）。与CLP组相比，CLP+Fer-1组血清TNF-α水平、心肌组织铁含量、和Lcn2蛋白表达降低（P<0.05）；GPX4、FSP1蛋白表达升高（P<0.05）。结论 来源于GPX4、FSP1不同途径的铁死亡参与CLP引起的脓毒症性心肌损伤的发生，抑制铁死亡可减轻脓毒症心肌损伤，Lcn2可能参与其中。

• 结肠直肠癌患者肠道黏膜区域的菌群分布

  胡梅梅, 陈开阳, 王宁宇, 赵玙璠, 魏程锦, 孟令祥, 唐 勇, 滕玉鸥, 王海宽

  目的 比较健康人群与结肠直肠癌（CRC）患者粪便菌群及肿瘤/瘤旁黏膜菌群的差异性，尝试寻找CRC新的防治途径。方法 收集了13例CRC患者粪便、6例患者肿瘤/瘤旁黏膜和20名健康对照人群粪便，利用16SrDNA测序技术与生物信息学方法分别对粪便和黏膜的菌群组成差异进行了分析。在流式细胞仪检测粪便中的细菌总数后，采用几种较为常见的细菌培养基对粪便及黏膜中微生物进行分离鉴定，并利用乳酸脱氢酶检测试剂盒测试了其中7株细菌对3株肠癌细胞凋亡的影响。结果 健康人粪便和CRC患者瘤旁黏膜中的菌群α-多样性显著高于CRC患者粪便和肿瘤黏膜中菌群α-多样性（P<0.05）。从特异性微生物来看，与健康人群相比，CRC患者粪便中的特有菌为Lactobacillaceae，而其肿瘤黏膜上特有菌是Escherichia、Enterococcus、Fusobacterium等。通过体外实验发现，分离自CRC患者肿瘤黏膜处的Bacteroides fragilis与Fusobacterium nucleatum分别对肠道癌细胞的增殖具有显著抑制活性（P<0.0001）与促进作用（P<0.001）。结论 CRC患者粪便、肿瘤黏膜及瘤旁黏膜菌群与健康人群粪便菌群差异较大，且CRC患者粪便菌群不能代表肿瘤黏膜特异性菌群。体外实验结果表明，抑制肿瘤黏膜中F.nucleatum定植与促进具有癌细胞毒性的B. fragilis定植可能是治疗CRC潜在的有效方法。

• PI3K/AKT/mTOR信号通路异常激活导致强直性脊柱炎患者的间充质干细胞自噬减弱

  刘振华, 闵少雄, 卢秀仪, 岑水忠, 陈志鹏, 王 涛, 李建君, 曾炜波, 邱素均

  目的 比较强直性脊柱炎患者间充质干细胞（ASMSCs）与健康人间充质干细胞（HDMSCs）自噬水平的差异及其机制。 方法 将ASMSCs和HDMSCs种于6孔板，细胞贴壁后，实验组加入25 ng/mL α-肿瘤坏死因子（TNF-α）及培养液，对照组单纯加入培养液，诱导6 h后进行后续实验。用GFP-LC3B免疫荧光染色检测自噬情况，并通过检测LC3 II/LC3 I及P62的蛋白表达进一步确认。通过qRT-PCR检测基因表达水平，通过Western blot检测蛋白表达水平。使用TG100713特异性阻断PI3K的磷酸化以明确PI3K/AKT/mTOR通路与ASMSCs自噬减弱的关系。 结果 ASMSCs的LC3 II/LC3 I表达水平和GFP-LC3B免疫荧光斑点明显弱于HDMSCs（P<0.05），而P62表达水平明显高于HDMSCs（P<0.05）。在自噬过程中，ASMSCs中p-PI3K/PI3K、pAKT/AKT和p-mTOR/mTOR的表达明显高于HDMSCs（P<0.05）。阻断PI3K磷酸化后，p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR的表达及ASMSCs的自噬可恢复至HDMSCs的水平。结论 TNF-α诱导下，PI3K/AKT/mTOR信号通路异常是导致ASMSCs自噬减弱的关键，可能参与AS慢性炎症的发生。

• 褪黑素通过激活自噬抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的生长和转移

  吴道秋, 张 艺, 汤弘婷, 杨 娟, 李梦醒, 刘虹麟, 李琴山

  目的 探讨褪黑素对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长和转移的作用及其机制。方法 将MDA-MB-231细胞设置对照组以及1、3、5 mmol/L褪黑素处理组，Western blot检测自噬对细胞生长、转移的影响时，添加3-甲基腺嘌呤（3-MA）组、3-MA联合褪黑素组。使用不同浓度褪黑素处理MDA-MB-231乳腺癌细胞24、48 h，并加入0.1%无水乙醇的细胞作为对照，CCK-8法检测细胞增殖活性确定最佳处理浓度和时间，筛选出3 mmol/L褪黑素用于后续实验。集落形成实验及划痕实验检测不同浓度褪黑素对乳腺癌细胞集落形成能力和迁移能力的影响；流式细胞术、免疫荧光检测3 mmol/L褪黑素对MDA-MB-231细胞凋亡率和自噬蛋白阳性着色情况；Western blot检测自噬相关蛋白LC3、P62、Beclin1，凋亡相关蛋白Bcl2、Bax，上皮-间质转化（EMT）相关蛋白E-cadherin、Snai1的水平。结果 CCK-8结果显示，与对照组相比，褪黑素呈浓度及时间依赖性抑制乳腺癌细胞的增殖（P<0.05）；集落形成实验显示，3个浓度褪黑素处理组的集落数低于对照组；褪黑素作用24 h后明显抑制乳腺癌细胞划痕愈合速度（P<0.01），并诱导细胞凋亡率增加（P<0.01）；且与对照组相比，褪黑素组的促凋亡蛋白Bax表达增加（P<0.05），抗凋亡蛋白Bcl2表达下调（P<0.05），Bcl2/Bax的比值逐渐减低（P<0.01）；转录因子Snail减少，上皮细胞标志蛋白E-cadherin增加；单独使用褪黑素能够诱导细胞内自噬标记蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1表达增加，P62表达减少（P<0.05）以及Beclin1蛋白阳性着色增强，P62蛋白阳性着色减弱；3-MA+褪黑素组中自噬相关蛋白Beclin1（P<0.001）、LC3-ΙΙ/LC3-（Ι P<0.05）以及凋亡蛋白Bax（P<0.01）、上皮细胞标志蛋白E-cadherin（P<0.001）明显低于褪黑素组，抗凋亡蛋白Bcl2（P<0.05）、转录因子Snail以及Bcl2/Bax的比值（P<0.01）高于褪黑素组。 结论 褪黑素可通过诱导MDA-MB-231乳腺癌细胞发生自噬，抑制乳腺癌细胞增殖、转移并促进其凋亡，而减少自噬，可减弱褪黑素对乳腺癌细胞生长和转移的抑制作用。

• CaMK Ⅱ在小鼠重症急性胰腺炎胰腺损伤中的作用

  蒋 文, 吴 俊, 曽佳容, 景光旭, 汤礼军, 孙红玉

  目的 观察钙调素依赖蛋白激酶（CaMK Ⅱ）在重症急性胰腺炎（SAP）小鼠胰腺组织中的表达情况，并探讨其抑制剂KN93对SAP胰腺损伤的保护作用和机制。方法 36只健康雄性C57小鼠随机分为假手术组、SAP组、KN93组、SAP组+KN93组，9只/组。于造模后24 h收集血清和胰腺组织；采用HE染色观察胰腺组织病理改变；Elisa检测血清脂肪酶、淀粉酶活性以及炎性因子变化情况；免疫印迹法检测CaMK Ⅱ、p-CaMK Ⅱ、p-NF-κB、MAPK、p-MAPK在小鼠胰腺组织中的表达变化。 结果 与假手术组比较，SAP组p-CaMK Ⅱ、p-NF-κB、p-MAPK表达水平升高（P<0.05）。KN93干预后，SAP小鼠胰腺组织病理损伤减轻，血清脂肪酶、淀粉酶以及炎性因子（TNF-α、IL-6）水平降低（P<0.05），同时NF-κB、ERK和MAPK蛋白磷酸化也降低（P<0.05）。结论 CaMK Ⅱ蛋白在SAP疾病胰腺组织活性升高，CaMK Ⅱ抑制剂KN93能有效减轻SAP小鼠胰腺损伤和炎症程度，其机制可能与ERK/MAPK信号通路有关。

• 唐氏综合征胎儿羊水外泌体miRNA差异表达谱分析

  丁凯泽, 余 蕾, 黄 智, 郑慧玲, 杨 雪, 田 甜 , 谢汝佳

  目的 探讨胎儿羊水外泌体中miRNA在唐氏综合征（DS）胎儿生长发育中的作用。方法 收集DS胎儿羊水和正常胎儿羊水，分别提取羊水外泌体 miRNA。设置对照组：正常胎儿羊水外泌体 miRNA；DS 组：DS 胎儿羊水外泌体 miRNA。运用miRNA测序技术筛选出两组中差异表达的miRNA，并对差异表达的miRNA进行靶基因预测及功能分析（GO）和信号通路分析。从差异表达的miRNA中挑选3个与DS表型最相关的miRNA进行qPCR验证。通过双荧光素酶报告基因技术验证let-7d-5p对BACH1的靶向调控作用。结果 和对照组相比，DS组中存在15个差异表达的miRNA，其中表达上调的miRNA有7个，表达下调的miRNA有8个。靶基因预测结果发现差异表达的miRNA可以靶向调控17种与DS相关的基因。GO分析发现靶基因主要功能与蛋白结合、蛋白转运、ATP结合、转移酶活性、突触等有关。Pathway通路分析发现富集显著的功能通路与神经系统发育有着密切的联系。qPCR验证结果发现与对照组相比，DS组中miR-140-3p、let-7d-5p水平显著降低（P<0.05），与测序结果一致；而DS组中miR-4512水平较对照组显著增加（P<0.05），与测序结果相反。双荧光素酶报告基因检测结果证实let-7d-5p可靶向调控BACH1的表达。结论 羊水外泌体let-7d-5p可能通过调控BACH1的表达促进DS胎儿大脑氧化应激事件。

• 超声引导下星状神经节阻滞加快胃癌根治术患者术后胃肠功能恢复

  李小雨, 姜玉玉, 古翠方, 马沙沙, 程向阳

  目的 探究超声引导下星状神经节阻滞（SGB）对腹腔镜下胃癌根治术患者围术期应激反应、胃肠激素和术后胃肠功能恢复的影响。方法 择期行腹腔镜胃癌根治术患者60例，性别不限，年龄35~75岁，BMI 18.5~26 kg/m2，ASA分组Ⅱ~Ⅲ级。采用随机数字表法将其分为实验组和对照组，各30例。实验组于麻醉诱导前15 min行超声引导下右侧C6水平SGB操作，注入0.5%罗哌卡因7 mL。对照组于同一部位注射生理盐水7 mL。选择SGB前（T1）、术毕（T2）、术后第2天（T3）、术后第6天（T4）时间点采集患者外周静脉血样，测定血中胃动素（MOT）、血管活性肠肽（VIP）、皮质醇（Cor）、血糖（Glu）水平；记录术中舒芬太尼使用量；记录术后36、48、60、72、84、96 h肠鸣音恢复率及首次排气时间。结果 与对照组相比较，两组舒芬太尼总用量差异无统计学意义；与对照组相比，实验组T2、T3、T4时点Cor水平较低，VIP水平较低，MOT水平较高（P<0.05）。与对照组相比，实验组T2、T3时点Glu水平较低（P<0.05）。与对照组相比，实验组术后36、48、60、72、84 h肠鸣音恢复率较高（P<0.05），术后排气时间缩短（P<0.05）。结论 超声引导下SGB可以减轻腹腔镜下胃癌根治术患者围术期应激水平，促进胃肠激素分泌水平恢复，加快术后胃肠功能快速恢复。

• 机器人辅助腹腔镜全子宫切除治疗巨大子宫肌瘤伴盆腔复杂粘连：附1例报告

  陈梦雨, 王 楠, 叶艳箐, 王铭洋, 李 震, 孟元光, 叶明侠

  目的 报告机器人辅助腹腔镜全子宫双侧输卵管切除治疗巨大子宫肌瘤伴盆腔复杂粘连患者l例，结合文献讨论该病的临床症状、手术术式及机器人手术的优势。方法 患者1998年体检发现子宫肌瘤后未予治疗，定期复查提示肌瘤逐渐增长。超声提示多发子宫肌瘤，盆腔MRI提示巨大子宫肌瘤伴出血。结果 完善相关检查后行机器人辅助腹腔镜全子宫+双侧输卵管切除术，手术进展顺利，患者术后4 d出院，腹壁美观，随访恢复良好。结论 机器人辅助腹腔镜因其特有的优势，为巨大子宫切除伴盆腔复杂粘连患者提供了微创手术入路选择。