南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2019年第10期

• 计算机辅助联合吲哚菁绿分子荧光影像技术在肝脏肿瘤诊断和手术导航中的应用指南（2019版）

  方驰华

  计算机辅助联合吲哚菁绿分子荧光影像技术可以从三维的形态解剖和细胞功能水平进行术前规划和术中侦测，从而导航肝癌解剖性、功能性、根治性的肝切除术，临床应用证明其有重要的诊疗价值，此项技术现已在全国得到了广泛推广和应用。为规范计算机辅助联合吲哚菁绿分子荧光影像技术在肝脏肿瘤精准诊疗中的应用，本指南在以下几个方面进行了研究：（1）三维可视化技术应用流程；（2）ICG分子荧光成像的机制及应用流程；（3）三维可视化和虚拟现实技术的临床应用；（4）ICG分子荧光影像技术的临床应用。ICG分子荧光成像技术能从分子、细胞水平层面实现肿瘤边界界定、肝段和肝叶切除切线的确定；微小病灶或转移灶的侦测；术中根据肝脏肿瘤的荧光信号特点，结合术中快速冰冻病理学检查，可初步判定肝脏占位性病变的分化程度；肝切除后对肝断面进行残留肿瘤病灶和胆漏的检测。计算机辅助联合ICG分子荧光影像技术在肝脏肿瘤诊断和手术导航中的应用，为肝脏肿瘤的外科治疗提供了一种新的数字智能化外科诊疗技术，该项技术亦将不断改进和完善，为肝脏肿瘤的精准诊疗展现出良好的应用前景。

• 阿司匹林抗人乳腺癌增殖的直接作用蛋白靶点的生物信息学分析

  朱星枚,杨嘉妮,张恩户,乔炜,李学军

  目的基于生物信息学分析大量公共数据库，探讨阿司匹林抑制人乳腺癌细胞增殖的分子机制。方法利用Drug Bank5.1.3搜索确定阿司匹林的直接靶点蛋白（DPTs），STRING在线构建阿司匹林DPTs的蛋白-蛋白相互作用（PPI）网络和信号通路；使用cBio Portal研究人乳腺癌中DPTs基因突变，并利用OncoPrint可视化；从TCGA数据库下载乳腺癌与正常组织中的转录组数据，利用DECenter分析差异过表达基因，对STRING分析得到的DPTs相互关联基因与TCGA中的差异过表达基因求交集，确认阿司匹林抑制人乳腺癌细胞增殖的潜在靶点，并利用Gene Ontology进行GO功能富集分析。最终通过蛋白免疫印迹实验验证阿司匹林抑制人乳腺癌细胞增殖的潜在靶点。结果搜索Drug Bank 5.1.3确定了11个阿司匹林DPTs，KEGG通路富集表明其中6个DPTs（EDNRA，IKBKB，NFKB2，NFKBIA，PTGS2和TP53）与癌症发生发展有关。通过分析TCGA数据库中乳腺癌与正常组织中的转录组数据获得10220个过表达差异基因，与STRING分析得到的6个阿司匹林DPTs的相互关联基因求交集，发现4个基因（CDC25C，TPX2，CDC20，PLK1）可能是阿司匹林抑制人乳腺癌细胞增殖的潜在靶点，其基因功能主要富集于细胞周期与细胞分裂。蛋白免疫印迹实验结果显示：阿司匹林可以降低人乳腺癌细胞中CDC25C，TPX2，CDC20，PLK1的蛋白表达。结论CDC25C，TPX2，CDC20和PLK1可能是阿司匹林抑制人乳腺癌细胞增殖的潜在靶点，其可能通过影响细胞周期和细胞分裂发挥抗肿瘤增殖作用。

• 慢性乙型肝炎患者肝脏良性占位的发病率及其特点：基于39 450例彩色多普勒超声的病例对照研究

  任彦瑜,袁国盛,周宇辰,胡承光,刘俊维,Muhammad IkramANWAR,唐淬蓉,李园,于文轩,周元平,戴琳

  目的调查慢性乙型肝炎（CHB）患者中肝脏良性占位性病变的发病率，以普通人群为对照，分析其高发的风险因素及其与小肝癌的鉴别要点。方法回顾性分析2016年1月~2017年12月于南方医院肝脏中心就诊的17721例CHB患者的影像学资料及相关临床资料，与同期在南方医院健康管理中心行常规体检的21629 例普通人群进行比较分析。结果与普通人群相比，CHB患者的肝囊肿、肝血管瘤、肝硬化结节发病率更高，局灶性结节性增生的发病率更低（分别为11.8% vs 8.7%、8.2% vs 1.6%、20.6% vs 2.4%、0.006% vs 0.042%，均P<0.05），肝细胞腺瘤的发病率无统计学差异（P>0.05）。肝囊肿和肝硬化结节的发病率随年龄增长而升高，其中男性发病率高于女性（P<0.001）；肝血管瘤的发病率在30~49岁患者中最高，无性别差异（P>0.05）。肝脏良性占位的超声表现多为内部回声均匀，边界清晰，形态规则：肝血管瘤常为高回声（83.32%，1579/1895），与小肝癌相比，它的四周与内部血流信号较少，固有动脉流速更低，门静脉流速更高；肝硬化结节多为强、弱混合回声（79.60%，7637/9595），结节内部和周边无血流信号，当其体积增大，伴内部回声发生不均匀改变时，提示恶变概率升高；肝囊肿常表现为内部无回声，后方回声增强。结论CHB患者较普通人群更易发生肝囊肿、肝血管瘤和肝硬化结节；其发病率与年龄、性别相关。本研究总结的肝脏良、恶性占位，特别是肝硬化结节的超声声学和血流学特征，能够为早期识别肝脏占位的性质提供重要线索和依据。

• 清肾颗粒对肾性贫血患者炎症/铁调素轴及铁代谢的干预机制：单中心前瞻性随机对照研究

  张磊,王亿平,金华,王东,魏玲,任克军,茅燕萍

  目的基于炎症/铁调素轴探讨清肾颗粒对肾性贫血湿热证患者的治疗效果和铁代谢的干预机制。方法符合纳入标准的60例慢性肾衰竭湿热证患者，随机分为治疗组和对照组各30例。两组均予以西医基础治疗，治疗组在对照组治疗基础上，加用清肾颗粒1包/次，3次/d。两组疗程均为12周。观察两组患者治疗前后中医证候积分值变化情况及血肌酐、肾小球滤过率、血红蛋白、红细胞压积、红细胞水平、白介素-6、超敏C反应蛋白、铁调素、生长分化因子-15水平以及血清铁、总铁结合力、转铁蛋白饱和度、可溶性转铁蛋白受体和铁蛋白水平。结果治疗后，治疗组患者中医证候积分与治疗前比较明显改善，并优于同期对照组（P=0.000）；两组患者血肌酐、肾小球滤过率与治疗前比较均明显改善。两组患者血红蛋白、红细胞压积、红细胞水平均较治疗前改善，且治疗组优于对照组（P=0.002，P=0.002，P=0.017）；两组患者白介素-6、超敏C反应蛋白、铁调素、生长分化因子-15水平均较治疗前下降，且治疗组较对照组下降明显（均P=0.000）。两组患者血清铁、转铁蛋白饱和度水平均较治疗前上升，总铁结合力、可溶性转铁蛋白受体、铁蛋白较治疗前，可溶性转铁蛋白受体下降水平治疗组优于对照组（P=0.000）。结论在肾性贫血湿热证患者贫血治疗过程中联合清肾颗粒口服可以有效改善贫血状态，其机制可能是通过减轻患者炎症状态，下调铁调素水平改善患者铁代谢实现的。

• 大鼠三叉神经痛觉传入通路的电生理检测和咬合干扰的影响

  王云,钱金萍,顾亚茹,陈传俊,汪萌芽

  ：目的通过建立电刺激大鼠三叉神经节（TG），记录三叉神经脊束核尾侧亚核（SPVC）生物电活动的技术，观察咬合干扰对三叉神经痛觉传入通路功能、SPVC神经元兴奋性的影响。方法取雄性健康Wistar大鼠（体质量250~280 g）20只，随机均分为对照组和模型组（n=10）。模型组大鼠用光固化流动树脂粘接法在大鼠右上第一磨牙牙合面制造咬合高点造模，持续咬合干扰30 d，期间用von Frey尼龙毛检测咬肌压痛并进行痛敏评分鉴定。然后在乌拉坦麻醉下同步记录SPVC生物电活动和心电、呼吸肌肌电、体温等多项生理指标，并观察电刺激TG对各项指标的影响。结果与对照组相比，模型组大鼠在造模后1 d即开始出现咬肌的痛敏评分升高，7 d后达到高峰；咬合干扰30 d后模型组大鼠SPVC自发放电频率增加（P<0.05）；给予TG不同强度的单脉冲刺激（0.5~8.0 mA，0.1~0.2 ms），在两组大鼠SPVC均可诱发放电性反应，其幅值具有刺激强度依赖性（P<0.05），在4 mA和8 mA强度模型组大鼠的反应幅值与对照组相似（P>0.05）；给予TG高频串刺激（0.2 ms，1 mA，30 s，100 Hz），在两组大鼠SPVC均引发放电频率呈一过性升高，但仅模型组刺激后放电频率升高有统计学意义（P<0.05）。结论大鼠三叉神经痛觉传入通路的活动可用电刺激TG记录SPVC生物电活动的方法进行检测，咬合干扰可能提高该通路的敏感性和SPVC神经元的兴奋性，导致通路的神经可塑性变化。

• 下调miR-205-5p增强3-溴丙酮酸对人鼻咽癌CNE2Z细胞的凋亡诱导作用

  时宗芬,张配,鲁星月,朱晨露,陈长江,赵素容,刘浩

  目的探讨下调miR-205-5p对3-溴丙酮酸诱导的鼻咽癌CNE2Z细胞凋亡的影响。方法以鼻咽癌CNE2Z细胞株为研究对象，实验分为4组，分别为对照组、转染组（转染miR-205-5p-mimic或miR-205-5p-inhibitor）、3-溴丙酮酸组（80 μmol/L 3-溴丙酮酸）、合用组（转染miR-205-5p-mimic或miR-205-5p-inhibitor后合用3-溴丙酮酸）。MTT法检测3-溴丙酮酸和miR-205-5p对CNE2Z细胞增殖的影响；线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）检测细胞早期凋亡情况；DAPI荧光染色法检测细胞核形态变化以及细胞晚期凋亡情况；Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率的变化；Western blot检测Bcl-2、Bax、Mcl-1、Bak蛋白的表达。结果3-溴丙酮酸对CNE2Z 细胞的增殖有明显的抑制作用，并且随着药物浓度和作用时间的增加细胞增殖抑制作用越明显；80 μmol/L 3-溴丙酮酸处理CNE2Z细胞24、48、72 h的抑制率分别为（45.7±1.21）%、（64.4±2.02）% 、（78.3±1.55）%；转染miR-205-5p-mimic 后，80 μmol/L 3-溴丙酮酸作用24、48、72 h 的抑制率分别为（27.7±1.04）%、（34.8±2.10）%、（44.3±1.57）%；转染miR-205-5p-inhibitor后，80 μmol/L 3-溴丙酮酸作用24、48、72 h的抑制率分别为（80.5±0.94）%、（87.9±0.50）%、（93.8±1.16）%。线粒体膜电位检测结果显示，转染miR-205-5p-inhibitor后3-溴丙酮酸组红绿荧光的相对比例明显降低；DAPI荧光检测结果显示，转染miR-205-5p-inhibitor后3-溴丙酮酸组的细胞核碎裂及核固缩明显增加；Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法检测结果显示，转染miR-205-5p-inhibitor 后3-溴丙酮酸组的凋亡率明显高于单独处理组的凋亡率（P<0.01）；Western blot 检测结果显示，转染miR-205-5p-inhibitor后3-溴丙酮酸组的Bcl-2、Mcl-1蛋白的表达水平明显降低，Bax、Bak蛋白的表达水平明显增高。结论3-溴丙酮酸能诱导CNE2Z细胞凋亡，转染miR-205-5p-inhibitor 能增强3-溴丙酮酸诱导的细胞凋亡，其机制可能与下调Mcl-1 和Bcl-2表达，上调Bak和Bax蛋白的表达有关。

• Daxx过表达能显著抑制AngII 诱导的血管平滑肌细胞的增殖和迁移

  曹玉梅,孙四玉,杨冬梅,霍艳杰,邱飞,谢雪娇,庹勤慧

  目的构建重组慢病毒表达载体pCDH-Daxx-EGFP，并探讨Daxx对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导VSMCs增殖的影响。方法基于PAS（PCR-based Accurate Synthesis）的方法构建重组慢病毒表达载体pCDH-Daxx-EGFP。经测序和酶切验证后，用重组慢病毒表达载体pCDH-Daxx-EGFP与包装辅助载体共转染293T细胞进行慢病毒包装，收集病毒液纯化后感染VSMCs，Western blot法鉴定过表达Daxx的VSMCs株。然后将pCDH-EGFP病毒液感染的空载体细胞和pCDH-Daxx-EGFP病毒液的感染的过表达Daxx细胞都分成无血清培养基孵育组和AngⅡ孵育组。用MTT法检测细胞活性、流式细胞术观察细胞周期、划痕法检测细胞迁移、Western blot法检测细胞中p-Akt蛋白表达。结果基因测序与双酶切鉴定表明Daxx基因慢病毒表达载体构建成功；与Vector组比，转染Daxx组、蛋白表达水平明显增加（P<0.05）；经AngII处理后，转染Daxx组细胞活性、S期细胞比率和与细胞迁移率与Vector 组比较显著降低（P<0.05）；转染Daxx组细胞中p-Akt 蛋白表达显著降低（P<0.05）。结论成功构建了重组慢病毒表达载体pCDH-Daxx-EGFP和过表达Daxx 的VSMCs株；Daxx能显著抑制AngII诱导的VSMCs增殖和迁移，其机制可能与p-Akt蛋白有关。

• 白术多糖对肝癌细胞增殖及侵袭的抑制作用及其机制

  朱云,李成,林鑫盛,孙晶晶,程旸

  目的探讨白术多糖（PAM）对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制。方法体外培养肝癌细胞HepG2分别给予不同浓度的PAM处理，通过CCK-8和Transwell实验检测肝癌细胞的增殖、侵袭能力。采用免疫荧光技术检测肝癌细胞中β-catenin蛋白表达水平，采用RT-PCR技术和免疫印迹法检测AKT、GSK-3β的基因和蛋白表达水平及其磷酸化表达，检测MMP-2的基因和蛋白表达水平。HepG2 细胞给予LiCl/PAM/LiCl 联合PAM处理，检测细胞增殖、侵袭能力改变，检测GSK-3β磷酸化和MMP2的蛋白水平。结果与空白对照组相比，PAM处理后肝癌细胞体外增殖能力下降、侵袭能力下降（P<0.05）；PAM处理可以下调β-catenin蛋白表达、下调MMP-2基因与蛋白表达水平，同时抑制AKT与GSK-3β的磷酸化（P<0.05）。PAM对肝癌细胞体外增殖、侵袭及AKT/GSK-3β/β-catenin通路的影响呈浓度依赖性：PAM的浓度越高，对肝癌细胞体外增殖、侵袭的抑制作用越强；对AKT与GSK-3β的磷酸化的抑制作用越强，对β-catenin表达的抑制作用也越强。LiCl可以逆转PAM对肝癌细胞增殖、侵袭的抑制作用，同时可以逆转PAM对GSK-3β磷酸化和MMP2的蛋白表达的抑制。结论PAM对肝癌细胞的体外增殖和侵袭能力具有抑制作用，PAM可能通过影响Wnt/β-catenin 信号通路发挥作用。

• 肺腺癌患者miR-126-5p的差异性表达及其作用机制预测

  周伟,聂军,张大发

  目的探讨肺腺癌患者miR-126-5p的表达差异性及其在患者临床预后中的价值，基于生物信息学方法，分析其作用机制。方法检索STARBASE数据库，分析肺腺癌组织和正常肺组织中miR-126-5p表达水平差异。使用Kaplan-Meier Plotter在线网站分析肺腺癌患者生存预后，绘制癌组织miR-126-5p不同表达水平患者的生存曲线。利用STARBASE数据库预测miR-126-5p作用的靶基因，在线网站分析靶基因的表达水平及对预后的影响。使用qPCR法检测30例健康对照组及30例肺腺癌患者外周血清mir-126-5p表达水平。结果STARBASE数据库检索结果提示正常肺组织中miR-126-5p高表达，肺腺癌组织中miR-126-5p低表达，Kaplan-Meier Plotter在线大数据分析提示肺腺癌组织中miR-126-5p高表达的患者生存预后优于低表达者（HR=0.68，P=0.015）。miR-126-5p预测结合靶基因BRCC3 mRNA 3’UTR区，二者表达量呈负相关（r=-0.197，P<0.05）；与正常组织相比，BRCC3 在肺腺癌患者中呈现高表达，与患者不良预后相关（HR=1.39，P<0.05）。对照组血清中miR-126-5p 高于肺腺癌患者（1.23±0.21 vs 0.63±0.12，P<0.05）。结论肺腺癌组织中miR-126-5p 表达水平低于正常肺组织，肺腺癌患者外周血清中miR-126-5p表达水平低于正常人，miR-126-5p高表达患者预后较好，低表达患者预后较差。通过生物信息学预测，miR-126-5p可能通过调控BRCC3发挥抑癌作用。

• SETD2基因敲除前后鼻咽癌细胞中定量蛋白组学研究及差异信号富集

  曾玉梅,王思思,封慕茵,邵钟铭,袁建玲,申志华,揭伟

  目的分析甲基转移酶SETD2 表达改变对人鼻咽癌（NPC）细胞中蛋白表达谱的影响并富集差异信号通路。方法提取SETD2基因敲除细胞株CNE1SETD2-KO和野生型细胞CNE1WT的总蛋白，利用Tandem Mass Tag（TMT）标记蛋白质定量技术和串联质谱分析技术筛选出差异表达蛋白质，应用GO数据库对差异表达蛋白质进行注释和富集，应用KEGG数据库进行差异蛋白质涉及信号通路富集。结果以表达倍数（FC）≥1.2倍且P<0.05为筛选标准，SETD2基因敲除的CNE1细胞鉴别出2049个差异表达蛋白质，其中904个表达上调，1145个表达下调。GO功能注释结果表明，SETD2敲除后在生物过程（细胞过程及调节，细胞运动、代谢过程及细胞组分的生物合成）、分子功能（催化活性及分子结合、转录因子活性）和细胞组分（胞膜、细胞器、大分子复合物）等具有特征性。KEGG信号富集结果表明SETD2 敲除主要影响与肿瘤关系密切的信号有MAPK、PI3K-Akt、Ras、Rap1、mTOR、Hippo、HIF-1、Wnt、AMPK、FoxO、ErbB、p53、JAK-STAT等。结论SETD2敲除后显著改变了NPC细胞中蛋白质表达特征并影响多条与肿瘤关系密切的信号通路，研究结果为NPC的发病机制和治疗标靶筛选提供了参考。

• Adaptive Elastic Net结合加速失效时间模型在亚组识别中的应用

  康佩,许军,黄福强,刘颖欣,安胜利

  目的针对临床试验中的生存数据，基于加速失效时间模型提出一种亚组识别方法。方法将Adaptive Elastic Net应用于加速失效时间模型（称为惩罚模型），通过检验协变量与治疗组别的交互项来识别亚组相关协变量。采用基于极大似然的change-point算法寻找预测计分的截断点以对患者进行亚组分类。采用二阶段适应性设计，以评价治疗效果是否存在于所识别的获益亚组人群中。对比四种模型（含协变量主效应的惩罚模型、单变量模型，以及不含协变量主效应的惩罚模型、单变量模型）的亚组识别效果。结果模拟结果显示，在样本量较小、删失率较高、获益亚组占比较小以及样本量不超过协变量个数的情况下，含协变量主效应的惩罚模型在获益亚组的识别上有明显的优势；而其他情况下，则是不含主效应的单变量模型较优。在二阶段适应性设计中，这两种模型进行亚组识别的Ⅰ类错误均控制在0.05左右；当潜在获益亚组时，相比于传统设计，适应性设计很大程度上提高了检验效能。结论含协变量主效应的惩罚模型适用于生存数据的亚组识别；相比于传统设计，二阶段适应性设计更适用于潜在获益亚组的疗效评价。

• GnRH拮抗剂方案中西曲瑞克与加尼瑞克具有相似的抑制排卵效果和良好的妊娠结局

  张俊,周星宇,陈映雪,张庆颜,黎莹,折晶,陈薪,陈士岭

  目的研究体外受精-胚胎移植时采用促性腺激素释放激素拮抗剂（GnRH-ant）方案中应用西曲瑞克与加尼瑞克抑制排卵效果的差异及对临床妊娠结局的影响。方法回顾性分析南方医科大学南方医院生殖中心2013 年1 月~2016 年12 月应用GnRH-ant方案促排卵患者相关资料，根据使用拮抗剂药物不同分为西曲瑞克组和加尼瑞克组，分析比较两组患者基本资料、促排卵过程及临床妊娠结局。结果本研究共纳入GnRH-ant方案2572周期，其中西曲瑞克组1368周期，加尼瑞克组1204周期。西曲瑞克组与加尼瑞克组相比，两组患者平均年龄（33.10 vs 33.89 岁，P<0.001）、体质量指数（BMI）（21.57 vs 21.84 kg/m2，P=0.024）存在统计学差异，基础卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）、孕酮（P）水平、扳机日FSH、LH、E2、P水平及平均获卵数均无统计学差异（P>0.05），但加尼瑞克组中重度卵巢过度刺激综合征（OHSS）的发生率明显高于西曲瑞克组（0.7% vs0.1%，P=0.008）。两组患者扳机日LH>10 U/L所占比例（3.7% vs 3.2%）、自发排卵率（0.6% vs 0.5%）、新鲜胚胎移植临床妊娠率（47.7% vs 45.9%）及活产率（37.5% vs 33.6%）亦无统计学差异（P>0.05）。校正患者年龄及BMI后，两组患者基础及扳机日FSH、LH、E2、P水平、平均获卵数、扳机日LH>10 U/L所占比例、自发排卵率、新鲜胚胎移植临床妊娠率及活产率均无统计学差异（P>0.05），加尼瑞克组中重度OHSS发生率仍高于西曲瑞克组（P=0.006）。结论GnRH-ant方案中应用西曲瑞克与加尼瑞克可达到相似的抑制排卵效果，扳机日LH升高发生率相同，加尼瑞克组中重度OHSS发生率略高于西曲瑞克组，但两组均获得良好的临床妊娠结局。

• 基于张量广义全变分最小的稀疏角度螺旋CT重建

  谌高峰,王永波,边兆英,韦子权,邓耀宏,李明强,马昆,陶熙,李彬,马建华,黄静

  目的为减少螺旋CT扫描X射线辐射剂量，提出一种基于凸集投影的张量广义全变分最小（TTGV-POCS）的稀疏角度螺旋CT迭代重建算法。方法将螺旋CT三维体数据看作三阶张量，利用张量广义全变分（TTGV）最小约束刻画其三维图像的数据特性，并纳入凸集投影迭代重建框架，实现稀疏角度螺旋CT的鲁棒重建。TTGV-POCS算法充分利用螺旋CT图像数据的一阶梯度与二阶梯度的空间结构稀疏性和三维数据层间相关性，可有效抑制稀疏角度重建图像中的伪影与噪声，并较好保持图像边缘信息。结果XCAT体模数据与病人扫描数据的实验结果表明，TTGV-POCS算法相比现有重建算法在降低噪声、去除伪影和保持边缘等方面均有较好的表现；比较XCAT体模数据稀疏角度重建结果，本文提出的TTGV-POCS算法相比现有重建算法PSNR定量指标可提升9.17%~15.24%；FSIM定量指标可提升1.27%~9.30%。结论TTGV-POCS算法可有效改善稀疏角度螺旋CT重建图像质量，降低螺旋CT检查辐射剂量，更好服务于临床影像诊断。

• 罗伊氏乳杆菌对坏死性小肠结肠炎氧化应激的保护机制

  唐佳,郭春宝,龚放

  目的探讨罗伊氏乳杆菌（L. reuteri）DSM17938菌株对坏死性小肠结肠炎（NEC）新生小鼠模型氧化应激的保护作用及可能机制。方法将96只10日龄C57BL/6J新生小鼠随机分为3组（n=32）：对照组、NEC组、NEC+L. reuteri组。通过HE染色观察回盲部肠组织病理变化并行双盲病理评分。采用实时荧光定量PCR检测肠组织中TNF-α、IL-1β的基因表达水平。通过ELISA检测肠组织TNF-α、IL-1β的蛋白表达水平。采用比色法检测SOD活力及抑制率、MDA、GSH、GSSG、GSSG/GSH比值。结果与对照组相比，NEC组小鼠体质量下降（P<0.05），肠道损伤加重，病理评分增加（P<0.05），TNF-α、IL-1β在基因及蛋白水平均表达升高（P<0.05），SOD活力及抑制率、GSH降低，MDA、GSSG、GSSG/GSH比值显著升高（P<0.05）。与NEC组相比，NEC+L.reuteri 组病理评分降低，TNF-α、IL-1β在基因及蛋白水平均表达降低（P<0.05），SOD活力及抑制率、GSH 增加，MDA、GSSG、GSSG/GSH比值明显降低（P<0.05），两组生存率差异无统计学意义（P>0.05）。结论L. reuteri DSM17938可能通过减少肠道氧化应激、增加其抗氧化能力，从而减轻肠道炎症反应，发挥对NEC新生小鼠肠道保护作用。

• 黑根霉胞外多糖硫酸酯的制备及其抗肿瘤活性

  秦国正,邵太丽,李萍,周玉燕,李艳,洪旭晨,李璋,王国栋

  目的分析EPS硫酸酯化修饰中配料比对硫酸基取代度的影响及其硫酸酯化修饰对EPS抗肿瘤活性的影响。方法采用氯磺酸-吡啶法修饰EPS，氯化钡-明胶浊度法测定硫酸基取代度，分析酯化剂配料比对硫酸基取代度的影响；红外光谱分析硫酸基团是否与EPS结合形成硫酸酯；CCK-8法检测EPS硫酸酯（SEPS）抑制人结肠癌HCT 116增殖活性；Annexin V-FITC/PI双染法检测SEPS 诱导HCT 116 细胞凋亡活性。结果酯化剂和EPS 配料比1∶1 和2∶1 条件下产物硫酸基取代度分别为0.98%（SEPS-1）和1.18%（SEPS-2），增加酯化剂配料比可以提高产物取代度（P<0.05）。红外光谱分析发现1249 cm-1附近出现-OSO3-的S=O 伸缩振动吸收峰，表明硫酸基团与EPS 结合形成硫酸酯。CCK-8 实验表明，在0.02~0.10 mg/L 各浓度梯度范围内，SEPS-1对HCT 116细胞增殖的抑制率明显高于EPS（P<0.05）；在0.04、0.06、0.10 mg/mL浓度梯度水平时，SEPS-2活性高于EPS（P<0.05）；在0.04~0.08 mg/L 各浓度梯度水平，SEPS-1 活性高于SEPS-2（P<0.05）。流式细胞术检测结果显示SEPS-1 诱导HCT 116细胞凋亡活性较EPS明显增强，随着SEPS-1浓度的增加，发生早期凋亡的细胞与坏死细胞相应增加，并呈现剂量依赖性，0.06、0.08、0.10 mg/mL处理组细胞早期凋亡率分别为6.38%、11.8%与12.5%，晚期凋亡和坏死细胞率分别为5.26%、8.04%、6.80%。结论黑根霉EPS硫酸酯化修饰中，酯化剂配料比对产物取代度有直接影响，增加酯化剂配料比可以提高产物取代度。黑根霉EPS硫酸酯化修饰可以提高其抗肿瘤活性，但取代度高低与活性高低没有直接关系。

• 乌司他丁减轻失血性休克大鼠肺炎性损伤的机制

  陈硬,徐志鹏,宋琦,王振杰,纪忠,邱兆磊,程峰,姜海

  目的探讨乌司他丁对创伤失血性休克大鼠肺炎性介质及其信号通路miR-146a/TLR4/NF-κB的影响。方法72只SD大鼠，随机分为休克不复苏组（SR，n=24），醋酸钠林格液组（AR，n=24）及乌司他丁组（UR，n=24）。通过股动脉放血将3组制成休克模型（平均动脉压维持在30~40 mmHg），SR组休克制备成功后不予复苏，并分别于休克后1、4、6 h（若大鼠死亡则大鼠死亡即刻）取大鼠肺组织；AR组、UR组分别系维持休克60 min后应用醋酸钠林格液、醋酸钠林格液联合乌司他丁进行30 min液体复苏，并分别于复苏后1、4、6 h取大鼠肺组织。利用实时荧光定量PCR法检测各组肺组织中miR-146a、TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6、IL-10的mRNA含量以及通过Western blot检测TLR4、MyD88、IκB-α、p-IκB-α、NF-κB p65、IRAK4、p-IRAK4（Thr345、Ser346）、p-IRAK4（Thr342）、TRAF6的蛋白相对表达量。在光镜下观察3组肺组织病理学变化。结果与休克组相比，醋酸钠林格液组肺组织炎症浸润程度稍减轻，其中miR-146a、IL-4 和IL-10 的mRNA水平升高（P<0.05），IκB-α、p-IRAK4（Thr342）及p-IRAK4(Thr345、ser346)的蛋白表达增加（P<0.05）；TNF-α、IL-1和IL-6的水平降低（P<0.05），TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-IκB-α、IRAK-4及TRAF6的蛋白表达减少（P<0.05）。与醋酸钠林格液组比较，乌司他丁组的肺组织炎性损伤得到了进一步改善，升高了miR-146a、IL-4 和IL-10 的mRNA水平（P<0.01）及IκB-α、p-IRAK4（Thr342）及p-IRAK4(Thr345、ser346)的蛋白表达（P<0.01），降低了TNF-α、IL-1和IL-6的水平（P<0.01）和TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-IκB-α、IRAK-4及TRAF6的蛋白表达（P<0.01）。结论乌司他丁联合醋酸钠林格液复苏创伤失血性休克大鼠可能是通过增强miR-146a的表达，负反馈调控TLR4/NF-kB信号通路，进而调节体内促炎因子和抗炎因子平衡，以达到保护肺组织的作用。

• 苦参碱通过调控β-catenin信号通路抑制肝癌细胞干性

  戴美琴,蔡茁,陈娜娜,李金州,温嘉泳,谭丽转,郭丹

  目的探讨苦参碱对人肝癌HepG2和Huh7细胞增殖活性、细胞干性、β-catenin转录活性以及AKT/GSK3β/β-catenin信号通路的影响。方法应用MTT法检测细胞增殖活性，平板克隆形成实验检测0 g/mL、200 g/mL、400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱对人肝癌HepG2 和Huh7 细胞的克隆形成能力，荧光定量PCR分析0 g/mL、200 g/mL、400 μg/mL、800 μg/mL 苦参碱对人肝癌HepG2 和Huh7 细胞干性基因CD90、EpCAM（上皮细胞粘附分子）和CD133 mRNA的表达水平，双荧光素酶报告基因检测0 g/mL、200 g/mL、400 μg/mL、800 μg/mL 苦参碱对人肝癌HepG2 和Huh7 细胞内β-catenin 转录活性，Western blotting 检测0 g/mL、400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱对人肝癌HepG2和Huh7细胞内AKT（蛋白激酶B）、GSK-3β和β-catenin及其相应磷酸化蛋白的表达水平。结果MTT实验结果显示，苦参碱呈时间-浓度依赖性地抑制肝癌HepG2 和Huh7 细胞的增殖，处理24、48、72 h 对HepG2 细胞的半数抑制浓度依次为2369、1565、909.1 μg/mL，对Huh7 细胞的半数抑制浓度依次为1355、781.8、612.8 μg/mL。苦参碱浓度依赖性地抑制肝癌细胞的克隆形成能力，400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱能够显著抑制HepG2细胞的克隆形成能力（P<0.01，P<0.001），200 g/mL、400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱能够显著抑制Huh7细胞的克隆形成能力（P<0.05，P<0.01，P<0.001）。苦参碱能够显著肝癌细胞内CD90、EpCAM和CD133 等干细胞标志物mRNA的表达，其中400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱能够显著抑制HepG2细胞中CD90（P<0.01，P<0.001）、EpCAM（P<0.05，P<0.01）和CD133（P<0.01，P<0.01）mRNA的表达，400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱能够显著抑制Huh7细胞中CD90（P<0.01，P<0.01）、EpCAM（P<0.05，P<0.01）和CD133（P<0.01，P<0.01）mRNA的表达。同时400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱显著抑制HepG2细胞（P<0.001，P<0.001）和Huh7细胞（P<0.01，P<0.001）内β-catenin的转录活性。研究结果显示400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱能够显著降低HepG2和Huh7细胞内β-catenin和磷酸化的AKT和GSK-3β蛋白水平，增加β-catenin的磷酸化水平。结论苦参碱可抑制肝癌HepG2和Huh7细胞的增殖、克隆形成以及肝癌干性基因CD90、EpCAM和CD133的表达，其机制可能与抑制AKT/GSK3β/β-catenin信号通路，从而降低β-catenin的转录活性有关。

• 三种不同大鼠蛛网膜下腔给药方式的比较

  郑燕平,蒋猛,李长丽,余壁湘,潘春球,周望梅,史鹏伟,黄鹏,何耀全,廖生武

  目的比较三种大鼠蛛网膜下腔给药途径的优缺点。方法将成年雄性SD大鼠分为3 组，分别作如下处理：重复穿刺（1 次/d），椎板切除置管以及经皮置管。设空白对照组。记录操作前后大鼠体质量变化；评估其一般行为及神经生物学行为；Rota-Rod跑步行为学测试，检查运动平衡与协调功能变化；痛敏刺激测试其对伤害的感受性反应。HE染色评价局部炎症反应，并行甲苯胺蓝染色试验评价不同方法的给药精度。结果重复穿刺组成功率较低，并且引起较多并发症：包括异常的神经行为学表现以及严重的运动功能障碍、痛觉过敏、脊髓背侧严重的局部炎症反应。留置导管可以方便进行后续给药，适合长期的药理学及行为学研究。经椎板切除置管创伤大，严重影响动物的生理功能，并且容易引起脊髓额外损伤（P=0.03）。经皮置管具有最高的手术成功率，且创伤小，仅引起轻度的脑脊液漏、微弱的感觉运动障碍以及脊髓背侧极轻微的组织病理学改变，给药精度高（P=0.002）。结论3种方法相比，经皮置管是一种安全、有效、精确的重复给药途径。

• 胎盘植入组织lncRNA表达特征与ceRNA调控网络构建

  吴淑贞,张慧珊,刘雁,王瑞,叶少欣,曾萌,刘正平

  目的探讨lncRNA在胎盘植入中的表达特征及潜在的ceRNA调控机制。方法随机选取2017年12月~2018年6月于我院行剖宫产合并胎盘植入的植入部分胎盘组织与邻近正常胎盘组织各5例，采用基因芯片技术检测组织lncRNA的表达水平；植入组与对照组比较，筛选差异表达lncRNAs；随机选取5个差异表达lncRNAs进行实时荧光定量PCR检测，验证基因芯片结果的准确性与可靠性，对差异表达基因进行GO功能聚类分析及KEGG 通路分析；选取芯片扫描与qRT-PCR结果均显示显著差异的ENST00000511361（RP5-875H18.4）、NR_027457（LINC00221）和NR_126415（FOXP4-AS1）3条lncRNAs构建ceRNA调控网络。结果植入组与对照组比较，筛选出329个差异表达lncRNAs与179个差异表达mRNAs，实时荧光定量PCR变化趋势与芯片结果相一致；差异表达mRNAs主要参与TGF-β通路的调控；ceRNA调控网络的构建提示RP5-875H18.4--miRNA-218--SLIT2在胎盘植入的发生中存在潜在ceRNA调节机制。结论差异表达lncRNAs可能通过调控TGF-β通路参与胎盘植入的发生发展过程，RP5-875H18.4--miRNA-218--SLIT2在胎盘植入的发生中存在潜在ceRNA调节机制，但该结果还需进一步验证。

• 基于神经影像学技术的双语语码切换研究新进展

  马恒芬,白婧婷,申彤,卢国华,贾丽萍

  探究双语者对两种语言系统的加工过程，尤其是双语者有效地从一种语言切换到另一种语言即双语语码切换，是双语研究领域的关键科学问题。随着神经影像学技术的快速发展，双语加工尤其是语码切换研究取得了重要的进展，但是对于双语语码切换的内部产生机制，目前还没有一致的结论。从神经心理和影像学角度开展的双语切换研究可以从时间和空间两方面阐明双语者进行语码切换的过程和大脑机制，为双语者语码切换的产生机制提供直接的证据。本文从事件相关电位技术、功能性磁共振成像技术和脑磁图技术三个方面分析双语语码切换的研究，并对未来研究方向及其技术手段进行展望。