南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2019年第12期

• 奇任醇通过抑制炎症细胞因子和诱导淋巴细胞凋亡减轻小鼠溃疡性结肠炎

  刘秀红,杜亚军,刘国星,但国梅,童 鑫,肖 娟

  目的 研究奇任醇在葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的小鼠溃疡性结肠炎（UC）发生和发展中的作用。方法 将C57BL/6小鼠随机分为UC+双蒸水灌胃组和UC+奇任醇治疗组。所有小鼠连续7 d在饮水中加入DSS建立UC模型，第0天到第7天双蒸水或奇任醇灌胃给药。每日观察小鼠体质量、直肠出血和粪便性状等临床指标并进行疾病活动度指数评分（DAI）。7 d后处死小鼠，观察结肠组织形态和长度，行组织病理学分析。取肠系膜淋巴结制成单细胞悬液并体外用抗CD3和抗CD28刺激活化，分析细胞培养上清中分泌的细胞因子IFN-γ、IL-17A、IL-6 和TNF-α的含量，流式细胞术检测肠系膜淋巴结细胞的凋亡百分比。结果奇任醇可以抑制DSS诱导的溃疡性结肠炎的发生发展，减轻结肠损伤，抑制炎症细胞因子的分泌，诱导淋巴细胞的凋亡。结论奇任醇可以缓解DSS诱导的溃疡性结肠炎，这种作用可能与抑制炎症细胞因子分泌和诱导炎性淋巴细胞凋亡有关。

• 血清CA125和HE4水平及ROMA、CPH-I模型在鉴别卵巢良恶性肿瘤中的价值对比

  龚时鹏,陈咏宁,张雅迪,李婵媛,江启帆

  目的 比较CA125、HE4、ROMA、CPH-I在鉴别卵巢良恶性肿瘤中的应用价值。方法 回顾性分析719例卵巢肿瘤患者的术前血清CA125、HE4水平及基于二者计算的ROMA和CPH-I。结果 在所有符合条件的患者中，531例为卵巢良性肿瘤，44例为交界性卵巢肿瘤，119例为上皮性卵巢癌，25例为非上皮性卵巢癌。对于卵巢良恶性肿瘤的鉴别，HE4、ROMA、CPH-I的曲线下面积分别为0.854、0.856、0.854，均优于CA125（0.792），CA125、HE4、ROMA、CPH-I的敏感性分别为70.2%、56.9%、69.1%、63.8%，特异性分别为72.9%、94.4%、87.6%、94.7%。在预测上皮性卵巢癌时，CA125、HE4、ROMA、CPH-I的曲线下面积和敏感性分别增加到0.888、0.946、0.947、0.943和84.0%、79.8%、87.4%、84.9%。在其他不同人群分析中，HE4、ROMA和CPH-I的曲线下面积均优于CA125。结论 HE4、ROMA和CPH-I在鉴别卵巢良恶性肿瘤时的效能比CA125更高。此外，HE4和CPH-I在特异性方面优于CA125和ROMA，后两者则具有更好的敏感性。

• 三维可视化联合吲哚菁绿荧光影像技术在原发性肝癌诊治中的价值

  曾思略,曾 宁,祝 文,项 楠,杨 剑,文 赛,方驰华

  摘要：目的 研究三维可视化技术联合吲哚菁绿（ICG）荧光影像技术在原发性肝癌诊治的应用价值。方法 收集2016年1月~2018年11月南方医科大学珠江医院肝胆外科收治的154例患者临床资料进行回顾性分析，分为实验组与对照组。实验组57例患者术前完成CT、GD-EOB-DTPA增强MRI、三维可视化并进行手术规划，术中使用ICG荧光影像实时侦测肿瘤部位、边界，肝内卫星癌灶、转移癌灶，根据术中荧光探查结果并联合三维可视化手术规划，完成最终手术方案；对照组97例患者进行常规手术评估及手术切除。对术前肿瘤的影像学信息、术中肿瘤的探测情况、术后实验室指标、病理信息及随访信息进行分析。结果 实验组57例，术前CT影像学检查发现63个病灶；MRI发现70个病灶；术中ICG分子荧光发现80个病灶，比CT多发现的17个病灶 中，病理证实10个为肝细胞癌，7个为肝硬化结节。实验组术中中位出血量为300（250）mL[M(QR)]，少于对照组的400（390）mL（Z=2.291，P=0.022）；两组患者均无严重并发症发生及围手术期死亡。实验组患者术后并发症发生率为21%（12/57），与对照组的48.4%（47/97）相比，差异有统计学意义（χ2=11.406，P=0.001）。实验组的24个月总体无瘤生存率为74.9%，而对照组总体无瘤生存率为28.9%，两组间的差异性具有统计学意义（P=0.022）。 结论 三维可视化技术联合ICG荧光影像能够为原发性肝癌治疗提供精确的术前诊断、手术规划及实施方案，以及术中微小肝癌侦测、精准导航，减少术后并发症发生，提高术后无瘤生存时间。

• 基于LC-MS筛选肺结核耐药患者的血清代谢标志物

  林东子,王 威,邱 峰,李玉美,余晓琳,林炳耀,陈胤文,雷春燕,马 燕,曾今诚,周 杰

  目的 筛选潜在可用来指示不同耐药肺结核的新型血清代谢标志物，并分析其潜在机制与功能。方法 收集结核药敏（DS）、单耐药异烟肼（MR-INH）、单耐药利福平（MR-RFP）、耐多药（MDR）和多耐药（PR）患者血清样本。有机试剂振荡、去蛋白、提取全部血清样本中的代谢物质，LC-MS/MS 技术检测全部样本中的代谢物质。Pareto-scaling 方法进行归一化，应 用 MetaboAnalyst 4.0软件进行差异分析，组间T检验，P≤0.05视为有差异的代谢物。进一步通过代谢物功能富集及共表达分析，明确差异代谢物的功能并探讨其作为标志物的意义与机制。结果 基于LC-MS/MS技术分析发现相较于DS组，MR-INH组存在286个异常表达代谢物、MR-RFP组存在362个差异代谢物、MDR组存在277个差异代谢物、PR组存在1208个差异代谢物。其中Acetylagmatine（P<0.05）、Aminopentol（P<0.05）、Tetracosanyl oleate（P<0.05）在MR-INH组中表达具有显著差异；Ala His Pro Thr（P<0.001）、Glycinoprenol-9（P<0.05）在MR-RFP组中表达差异明显；Trimethylamine（P<0.05）、Penaresidin A（P< 0.05）、Verazine（P<0.05）在MDR组中表达具有显著差异；PIP（18∶1（11Z）/18∶3（6Z,9Z,12Z））（P<0.001）、Pro Arg Trp Tyr（P< 0.001）、N-Methyldioctylamine（P<0.001）、Phytolaccoside E（P<0.05）在PR组中表达具有显著差异。与DS组相比，Phthalic acid Mono-2-ethylhexyl Ester（P<0.05）和 Eicosanoyl-EA（P<0.05）在 MR-INH、MR- RFP、MDR、PR 组均存在显著差异。结论 Acetylagmatine、Aminopentol、Tetracosanyl oleate、Ala His Pro Thr、Glycinoprenol-9、Trimethylamine、Penaresidin A、Verazine、PIP（18∶1（11Z）/18∶3（6Z,9Z,12Z））、Pro Arg Trp Tyr、N-Methyldioctylamine、Phytolaccoside E、Phthalic acid Mono-2-ethylhexyl Ester、Eicosanoyl-EA共14种新型代谢物可能是指示结核单耐药、耐多药、多耐药的潜在标志物，联合分子标志物来评估结核耐药的发生发展，可以增强诊断的灵敏度和特异性，具有一定的临床应用前景。

• 曲古菌素A抑制神经病理性痛大鼠脊髓HDAC4上调并逆转差异表达的miRNAs

  欧阳碧函,唐朝辉,侯新冉,陈 旦,郭曲练,翁莹琪

  目的 探讨曲古菌素A（TSA）缓解神经病理性痛的可能作用机制。方法 成年雄性SD大鼠，采用坐骨神经慢性缩窄性损伤（CCI）方法建立大鼠神经病理性疼痛模型，随机分为3组：sham+DMSO组（S组）、CCI+DMSO组（C组）、CCI+TSA组（T组）。于术后第7至第9天，每日1次向鞘内注射5% DMSO溶液或TSA 10 µg（TSA溶于10 µL 5% DMSO）。术后第10 天行为学测量后取各组大鼠腰段脊髓，检测HDAC4 蛋白及 mRNA 表达水平，采用Sanger miRBase V19.0芯片筛选各组差异表达的微小RNA，选取miR-190b-5p和miR-142-3p，采用实时荧光定量PCR进行验证。结果 与S组比较，CCI术后3~10 d机械痛阈均明显降低（P<0.05），而鞘内注射TSA痛阈回升（P<0.05）。HDAC4表达于大鼠腰段脊髓灰质，主要位于胞质，CCI术后HDAC4蛋白表达增高(P<0.05），而 TSA可逆转其增高趋势（P<0.05）。与S组比较，C组大鼠腰段脊髓差异表达（fold change≥2或≤0.5，P< 0.05）的miRNAs共有83种；鞘注TSA可逆转CCI术后差异表达的miRNAs共58种（差异表达倍数fold change≥2或≤0.5），其中CCI术后表达下调，鞘注TSA后表达上调的miRNAs有41 种。通过real-time PCR，我们验证了miR-190b-5p和miR-142-3p的变化。结论 鞘内注射TSA能抑制神经病理性痛大鼠脊髓HDAC4上调及改变部分miRNAs的表达，这种改变可能参与TSA的镇痛作用。

• 二甲双胍抑制酸性环境下的调节性T细胞增殖及功能

  韦莉莉,罗周翔,李金龙,李红卫,梁 瑶,李金连,申玉婷,李天柏,宋 捷,胡志明

  目的 探讨二甲双胍对酸性环境下的调节性T细胞（Treg）的调控及二甲双胍的抗肿瘤作用。 方法 经磁珠分选得到CD4+CD25+ Treg细胞。在pH 7.4或pH 6.7环境加入二甲双胍干预的条件下，培养Treg或T细胞（Tcon）24~72 h后，采用流式细胞术检测细胞增殖、凋亡及Foxp3表达情况，采用Real-time PCR检测糖代谢相关基因水平。动物实验中，将32只C57BL/6雄性小鼠单次皮下注射RM-1细胞建立小鼠前列腺癌模型，随机分为PBS对照组、二甲双胍治疗组、疫苗治疗组及联合治疗组（各组n=8）。于接种后第4天开始，按100 mg· kg-1· d-1给予二甲双胍治疗组及联合治疗组小鼠腹腔注射二甲双胍，给予疫苗治疗组及联合治疗组小鼠每4 d一次肌注疫苗。PBS注射作为对照。连续监测肿瘤大小，在植瘤后第25天处死小鼠获取肿瘤及血液样本。采用流式细胞术检测瘤内及外周血内CD4+、CD8+、CD4+Foxp3+细胞亚群的变化。 结果 较中性缓冲条件，酸性环境下Treg细胞活性增强（P<0.05），而Tcon细胞增殖受到抑制（P<0.001）。QPCR结果显示，酸性环境较正常酸碱环境下，Treg细胞OXPHOS相关基因pgc1a（P<0.001）及cox5b（P<0.01）水平增高，而Tcon细胞内相关基因水平变化不显著。酸性环境下Treg细胞凋亡显著减少（P<0.01）、Foxp3+细胞比例增加（P<0.001）、胞内pH值偏碱性（P<0.001），加入二甲双胍，逆转了Treg细胞的酸性耐受。但是，二甲双胍对Tcon细胞影响不显著。动物实验中，二甲双胍（P<0.05）或疫苗（P<0.01）单独治疗均可减小肿瘤体积，而联合治疗组肿瘤体积减小最多（P<0.001）。二甲双胍单独治疗对肿瘤内CD4+细胞、CD8+细胞影响不明显，但可显著降低CD4+Foxp3+细胞比例（P<0.05），而疫苗单独治疗显著提高肿瘤内CD4+细胞、CD8+细胞（P<0.001），但CD4+Foxp3+细胞也升高（P<0.05）。联合治疗组肿瘤内CD4+细胞、CD8+细胞增高最多（P<0.01），CD4+Foxp3+细胞比例较疫苗单独治疗组下降（P<0.01）。结论 二甲双胍抑制酸性环境下的调节性T细胞增殖及功能，并且在体内通过减少Treg细胞比例提高肿瘤疫苗效果，发挥抗肿瘤功能。

• Musashi1正调控肝细胞癌细胞的生长并促进其增殖

  李 杰,闫 堃,杨 屹,李 华,王志东,徐 心

  目的 Musashi1（MSI1）属于RNA结合蛋白（RBP）家族，可特异性地结合mRNA并对蛋白质的翻译起激活或抑制作用，但它在肝细胞癌（HCC）中的功能还未被深入探究。本课题主要探讨MSI1在HCC细胞生长及增殖中的作用及机制。方法 构建MSI1过表达或敲除细胞系。采用免疫组化和Western blot技术检测MSI1在HCC组织中的表达。采用MTT、流式等方法探讨过表达或沉默MSI1对HCC细胞增殖、细胞活力及细胞周期分布的影响，同时检测细胞内PCNA、Cyclin D1以及Wnt/β-catenin通路关键分子APC和β-catenin的表达。结果 MSI1在HCC组织中的表达比非肿瘤的癌旁组织高。与对照细胞相比，HepG2细胞过表达MSI1不仅显著促进了其生长（7 d时的MTT值从0.52±0.12大幅增加至1.01±0.14，P<0.01），且处于G0/G1期的细胞比率也从（58.42±3.18）%降至（40.67±1.22）%，而S期细胞比率则从（28.51±1.93）%增加至（40.06±1.92）%（P<0.01）。与此同时，细胞PCNA和Cyclin D1蛋白的表达明显上调。反之，敲除MSI1使Huh7细胞的生长显著受抑，更多细胞停滞于G0/G1期（G0/G1期细胞比率从（43.83±1.57）%增加至（62.84±1.22）%（P<0.01），同时细胞PCNA和Cyclin D1的表达则显著下调。MSI1的过表达可以降低Wnt/β-catenin信号通路分子APC但增加β-catenin的表达，反之MSI1的敲低却可以增加细胞内APC而降低β-catenin的表达。结论 MSI1可以通过正调控HCC细胞的生长及细胞周期的进程而加速HCC病程的进展，其作用可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路实现的。

• DNMT3B通过Hippo信号通路促进肝癌细胞的增殖与侵袭

  董高宏,丘福良,刘长安,邬 昊,刘 彦

  目的 探索DNMT3B 对肝癌细胞的增殖与侵袭的影响。方法 收集2008年5月~2013年5月在重庆医科大学附二院确诊的175例肝癌患者并制作成组织芯片，分析DNMT3B蛋白表达水平的差异与患者的预后情况及患者肿瘤无瘤生存率与肿瘤特异性生存率的关系。使用单因数与多因素Cox回归分析DNMT3B 的表达对肝癌患者预后的影响。使用小干扰RNA（siRNA） 与慢病毒过表达干扰DNMT3B 的表达，利用CCK-8及EDU染色检测肝癌细胞增殖情况，对细胞进行Transwell 实验检测细胞迁移侵袭能力分析。结果 免疫组化显示DNMT3B 蛋白在肝癌中的表达率（67.4%）高于配对癌旁组织的表达率（41.1%）。DNMT3B 的高表达与肿瘤大小（P=0.001）、血管侵犯（P=0.004）、肝内转移（P=0.018）密切相关。DNMT3B 高表达患者其肿瘤无瘤生存率与肿瘤特异性生存率低于DNMT3B 低表达患者（P<0.005）。沉默DNMT3B 显著抑制Huh-7 细胞增殖，Transwell 实验检测结果表明，与对照组相比沉默DNMT3B 抑制Huh-7 细胞的迁移与侵袭能力。Western blot 检测显示，沉默DNMT3B 的表达升高了LATS1 的表达水平，降低了YAP1 的表达，激活了Hippo 信号通路。同时，甲基化特异性PCR显示LATS1 的甲基化水平降低。结论 肝癌中DNMT3B的表达高于癌旁组织，并且DNMT3B 的高表达与患者的低生存率密切相关。沉默DNMT3B 抑制细胞增殖、迁移和侵袭能力。DNMT3B 主要通过甲基化LATS1 并抑制其表达，促进癌基因YAP1的表达进而抑制Hippo信号通路的抑癌作用，从而促进肝癌恶性发展。

• 外泌体双膜蛋白共表达检测平台：基于磁性分离和催化发夹组装

  陈贤华,潘炜伦,李 博,郑 磊

  目的 构建基于磁性分离和催化发夹组装（CHA）信号放大策略的外泌体双膜蛋白共表达检测平台。方法 细胞培养与细胞上清液中外泌体的分离纯化和表征。超分辨成像技术与免疫印迹实验表征CD63在外泌体膜上的表达。外泌体与AptEpCAM-T催发链反应电泳图验证EpCAM适配体与外泌体结合。荧光检测法验证CHA核酸序列的可行性、优化反应条件以及验证该方法特异性。结果 超分辨成像技术与免疫印迹实验显示乳腺癌MDA-MB-231细胞来源外泌体富含CD63膜蛋白。外泌体与AptEpCAM-T催发链反应电泳结果显示EpCAM适配体能够识别并结合外泌体。检测平台特异性试验：人正常乳腺上皮细胞外泌体（MCF-10a exo）荧光检测信噪比：1.10±0.01，乳腺癌细胞外泌体（MDA-MB-231 exo）荧光检测信噪比：2.09±0.08。结论 构建基于磁性分离和CHA信号放大策略的外泌体双膜蛋白共表达检测平台。可同时检测外泌体膜上表达的两种蛋白：CD63和EpCAM。乳腺癌细胞外泌体与人正常乳腺上皮细胞外泌体膜蛋白CD63和蛋白EpCAM表达有区分度。

• 颅内电极重建在帕金森病患者脑深部刺激治疗中的应用价值

  郑小斌,余良宏,万欣龙,王惠清,俞 挺,何 秋,林章雅,康德智

  目的 评估颅内电极重建技术应用于帕金森病患者脑深部刺激术（DBS）临床治疗的可行性。方法 回顾性纳入2016年1 月~2017年12月接受双侧丘脑底核（STN）DBS治疗的帕金森病患者27例，基于本研究中颅内电极重建技术，根据植入电极与STN的位置关系，将病例分为3组（A组：双侧电极最佳DBS刺激触点均位于STN内；B组：仅一侧电极最佳刺激触点位于STN内；C组：双侧电极最佳刺激触点均不位于STN内）。统计分析3组病例在基线水平、术后6月、术后12月的Hoehn-Yahr分期、统一帕金森病评定量表第3部分（UPDRS Ⅲ）分值、Schwab & England 日常活动评分（SE-ADL）、左旋多巴等效剂量（LEDD）的差异，并进一步通过分析基于重建电极与标准开机程控两种方式筛选的最佳刺激触点的吻合度以及触点坐标的差异，判断该项技术的准确性与可靠性。结果 STN-DBS术后3组病例在药物-关期的H-Y分期、UPDRS Ⅲ分值、SE-ADL分值及LEDD均不同程度改善，但在术后12月，仅有组A病例的上述分值改善仍是显著的。基于重建电极与标准开机流程两种方式筛选的最佳触点的吻合度达77.78%（42/54），二者的触点空间坐标值差异无统计学意义（P>0.05）。结论 颅内电极重建技术有利于研究颅内电极植入位置与DBS临床疗效的相关性，符合术后程控最佳DBS触点筛选的精度需求。

• 氯氰菊酯通过抑制Nrf2/ARE信号通路诱导原代C57BL/6小鼠大脑皮层神经元损伤

  周礼华,常见荣,周梦晴,肖梦曦,谭涵丹

  目的 探讨Nrf2/ARE信号通路在CYP诱导的小鼠大脑皮层神经元损伤中的作用及其机制。方法 原代培养并鉴定C57BL/6小鼠大脑皮层神经元细胞，建立CYP诱导细胞损伤模型。将不同剂量的CYP（0、25、50、100 μmol/L）分别暴露细胞48 h。CCK-8分析CYP对细胞活性的影响、荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧、流式细胞术检测细胞凋亡率，qPCR及Westernblotting检测Nrf2及其下游基因HO-1、NQO1的mRNA和蛋白表达。结果 与0 μmol/L组相比，CYP各剂量组神经元活性均受抑制，随着CYP剂量增加，神经元细胞活性逐渐下降、细胞内ROS随之增加、细胞凋亡率逐渐升高，且CYP剂量越高，神经元损伤程度越严重。与0 μmol/L组相比，CYP 50 μmol/L组HO-1、NQO1，CYP 100 μmol/L组HO-1、NQO1、Nrf2 mRNA及蛋白表达下调（P<0.01）。结论 CYP暴露抑制Nrf2/ARE信号通路，下调Nrf2及其下游基因HO-1、NQO1 mRNA和蛋白表达，诱导神经元细胞氧化损伤和凋亡，CYP对神经元的毒性呈现剂量效应关系。

• MiR-155-5p：在肾母细胞瘤中表达下调并抑制肾母细胞瘤细胞的增殖、迁移及促进细胞凋亡

  罗 鑫,董军君,何兴跃,沈炼桔,龙春兰,刘 丰,刘 星,林 涛,何大维,魏光辉

  目的 探讨miR-155-5p在肾母细胞瘤中的表达及其对肾母细胞瘤细胞增殖、迁移及凋亡能力的影响。方法 收集40例肾母细胞瘤患者的肿瘤组织及其相对应的瘤旁组织，瘤旁组织作为正常对照组，应用RTqPCR检测肾母细胞瘤组织和正常瘤旁肾脏组织中miR-155-5p的表达水平；在肾母细胞瘤细胞株G401中，运用脂质体转染技术过表达及抑制miR-155-5p；采用CCK-8实验检测肾母细胞瘤细胞增殖能力的变化；划痕实验检测肾母细胞瘤细胞迁移能力的变化；流式细胞术检测肾母细胞瘤细胞凋亡能力的变化。结果 RTqPCR结果显示肾母细胞瘤肿瘤组织中miR-155-5p的表达水平显著低于正常肾脏组织，且miR-155- 5p的表达与肾母细胞瘤的临床分期呈负相关，差异有统计学意义（P<0.05）；在人肾母细胞瘤细胞G401中上调miR-155-5p表达能够显著抑制肿瘤细胞的增殖和迁移，促进凋亡（P<0.05）；下调miR-155-5p表达能够显著促进肿瘤细胞的增殖和迁移，抑制凋亡（P<0.05）。结论 miR-155-5p在肾母细胞瘤患者肿瘤组织中表达显著下调，且其表达量与临床分期呈负相关；miR-155-5p可抑制肾母细胞瘤细胞增殖和迁移，促进细胞凋亡；miR-155-5p有望成为肾母细胞瘤诊断、治疗和预后评估的一个新的潜在标志物。

• 可溶性晚期糖基化终产物受体：在非PCOS患者卵泡液中的水平与其促排后卵巢反应性相关

  李美玲,卲 永,伏海燕,周 城,姚 兵,谈 勇

  目的 探讨非PCOS卵泡液可溶性晚期糖基化终产物受体（sRAGE）水平与其促排后卵巢反应性的相关性。方法 ELISA法测定90例非PCOS患者常规长方案COH患者取卵日卵泡液中sRAGE浓度；收集患者临床基础状态、激素水平、获卵数以及受精率等数据。采用SAS统计软件对各项指标进行分析。结果 卵泡液的sRAGE水平与基础FSH（P=0.0036）、Gn使用量（P< 0.0001）呈显著负相关关系。卵泡液的sRAGE水平与AFC（P<0.0001）、获卵数（P<0.0001），受精率（P=0.0047）呈显著正相关关系。并按照获卵数分为3组：目标获卵数以下（<7个）、在目标标获卵数范围内（7-15），在目标获卵数目以上（>15个）；单因素方差分析卵泡液sRAGE水平与获卵数呈正相关关系，与明显高于目标获卵数组和目标获卵数目以下组（P值分别为：P<0.0001 和 P=0.0012）。结论 卵泡液中sRAGE水平与非PCOS患者卵巢储备功能相关，卵泡液中sRAGE水平可以反映COH后获卵数与受精率情况，可以预测在控制性超促排卵过程的卵巢反应性。

• 聚焦超声降低SD大鼠外阴慢性单纯性苔藓复发率的机制

  刘 瑶,范艺巾,李成志

  目的 通过观察聚焦超声治疗SD大鼠外阴慢性单纯性苔藓（LSC）模型后SD大鼠外阴皮肤组织真皮层胶原纤维化的变化，探寻聚焦超声降低SD大鼠外阴慢性单纯性苔藓模型复发率的机制。方法 建立50只雌性大鼠LSC模型，随机分为治疗组和对照组（n=25）。治疗组采用聚焦超声治疗，对照组大鼠采用聚焦超声假辐照治疗。聚焦超声治疗前后，HE染色观察外阴组织学病理变化，masson染色鉴定SD大鼠外阴皮肤组织真皮浅层胶原纤维的密度，电镜下观察真皮浅层胶原纤维超微组织结构。免疫组化和Western blot检测notch1和c-fos在外阴皮肤组织中的表达，比较组间差异。结果 经过聚焦超声干预的治疗组大鼠中，16%（4/25）大鼠继续进展为外阴低级别鳞状上皮内病变，4%（1/25）大鼠仍为LSC，80% (20/25)实验大鼠外阴皮肤恢复正常。经聚焦超声假辐照治疗的对照组中有19只（76%）大鼠会继续进展为外阴低级别鳞状上皮内病变，3只（12%）仍然表现为LSC，3只（12%）恢复正常，两组间治愈率差异有统计学意义（P<0.05）。治疗组真皮浅层胶原纤维密度明显低于对照组，且notch1和c-fos在治疗组外阴组织中的表达明显低于对照组（P<0.05）。结论 聚焦超声治疗可能通过影响外阴皮肤组织中notch1和c-fos的表达，抑制真皮浅层胶原纤维化，从而降低外阴慢性单纯性苔藓的复发率。

• Lnc AK079912 在小鼠脂肪组织发育及棕色化过程中的时序表达规律

  黄佳琪,贾 如,魏晓静,罗 肖

  目的 研究新的长链非编码RNA lnc AK079912在小鼠代谢相关组织、脂肪组织发育及棕色化过程中的时序表达情况。方法 采集8周龄C57BL/6J小鼠肩胛间棕色脂肪组织（iBAT）、皮下白色脂肪组织（sWAT）、附睾白色脂肪组织（eWAT）、肝脏和肌肉组织，以及发育过程中（出生第0天，第21天、第8周和第6月的小鼠）、4 ℃冷刺激1~5 d和腹腔注射CL316，243（1 μg/g体质量）1~5 d小鼠（8~10周龄）的iBAT、sWAT和eWAT，利用Trizol提取上述组织中的总RNA，RT-qPCR技术检测lnc AK079912的表达情况；同时分离培养小鼠原代前体脂肪细胞并诱导分化至成熟，利用CL316，243（2 μmol/L）诱导不同时间，提取细胞总RNA，并利用RT-qPCR技术检测lnc AK079912的表达情况。结果 lnc AK079912在小鼠脂肪组织，尤其是iBAT中高表达，肌肉次之，而在肝脏中几乎不表达（4.63±0.71 vs 1.00±0.18 vs 0；P<0.05）；在脂肪组织发育过程中，iBAT和sWAT的lnc AK079912表达水平持续上升，而在eWAT中先上升后下降（P<0.001）；冷刺激1~5 d lnc AK079912的表达量差异无统计学意义（P>0.05），腹腔注射CL316，243 1~5 d，lnc AK079912的表达量在iBAT和sWAT中下降（P<0.05），而在eWAT中上升（P<0.05），但在CL316，243处理24 h内的脂肪细胞中，其表达量有显著增加（P<0.05）。结论 lnc AK079912在脂肪组织中高表达；伴随着脂肪组织的发育，其表达量逐渐升高，但存在部位特异性。lnc AK079912在脂肪组织棕色化的早期有显著升高，提示lnc AK079912在脂肪组织发育及棕色化过程中起着重要的调控作用。

• 手机依赖性使用与睡眠和饮食行为相关：基于2122名大学生问卷调查

  方乐琴,许晓珩,林晓敏,陈燚林,郑馥盈,贝燕柔,张 璐,张 斌

  目的 调查广州市某医学院校大学生手机依赖性使用情况与睡眠和饮食行为的相关性。方法 使用手机依赖性量表（MPIQ）、匹兹堡睡眠质量指数（PSQI）及三因素饮食问卷R21（TFEQ-R21），对2122 名在校大学生进行问卷调查，对数据行t检 验、方差分析、两两相关分析及设置哑变量的多元线性回归分析。结果 年龄、身体质量指数（BMI）、PSQI总分、TFEQ-R21的3个因子分（非控制性进食、认知限制进食、情绪性进食）、睡前使用手机、手机使用时间与MPIQ总分均呈显著相关（P<0.001），多元线性回归方程提示最终模型的R2值为21.8%（调整后R2为21.5%）。结论 手机的依赖性使用与睡眠障碍和不良的饮食习惯均相关，学校应该对手机依赖性使用人群进行必要的宣教和干预。

• 光纤拉曼内窥探头可有效鉴别胃癌组织

  韦 仲,毛 华,黄富荣,钟会清,黄丽韫,黎远鹏,卢 敏,金少琴

  目的 研发可加载于胃镜系统的光纤拉曼内窥探头，评估其鉴别胃癌组织的能力。方法 分别利用共聚焦显微拉曼光谱仪、光纤拉曼内窥探头获取正常胃黏膜组织和胃癌组织的拉曼光谱，对光谱数据进行平滑、消除基线和归一化处理后，利用线性判别进行鉴别分析，以病理学诊断结果作为金标准，从准确率、灵敏度、特异性来评价光纤拉曼内窥探头的诊断效能。结果 光纤拉曼内窥探头能够采集到不同胃黏膜组织的典型的拉曼光谱；正常胃粘膜组织和癌变组织的拉曼光谱存在显著差异，光纤拉曼内窥探头能够鉴别出正常胃黏膜组织和胃癌组织的拉曼光谱，灵敏度、特异性和准确率分别为80.56%、88.89%、84.72%。结论 光纤拉曼内窥探头可获取丰富的胃黏膜组织拉曼光谱，结合线性判别能够快速、有效地鉴别胃癌组织，具有较好的临床应用潜力。

• 术前C反应蛋白水平同老年股骨颈骨折患者的术后并发症相关

  赵昌盛,王军锋,张 恒,王晓华,孙 彬,张 克,杨 滨

  目的 分析术前C反应蛋白水平同老年股骨颈骨折患者术后并发症的相关性。方法 回顾分析147 名老年股骨颈骨折患者 （年龄中位数：80岁，女性：73.5%），根据术前CRP水平将患者分为正常组（CRP<10 mg/L）31名，轻度升高组（10 mg/L≤CRP<40 mg/L）51名，严重升高组（CRP≥40 mg/L）65名。比较不同CRP水平同术后并发症的相关性。结果 术前CRP水平同术后并发症存在相关性（P=0.003）。同正常组相比，轻度升高组和严重升高组的校正前OR值分别为0.97（0.29，3.27），3.04（1.03，8.98）；校正后OR值分别为1.13（0.33，3.90），4.89（1.47，16.26）。结论 术前CRP水平同老年股骨颈骨折患者关节置换术后发生并发症风险呈剂量反应关系。当术前CRP≥40 mg/L时，老年股骨颈骨折患者关节置换术后发生并发症的风险是正常组的4.89倍（P=0.003）。

• CRISPR技术发展及其在骨和软骨组织工程中的应用

  陈 果,程 度,陈 滨

  由Cas9核酸酶和单向导RNA（sgRNA）组成的CRISPR/Cas9系统，可对sgRNA靶向的DNA序列进行缺失、插入和点突变等基因重编程操作，是新兴的基因编辑技术。此外，CRISPR/dCas9（Cas9核酸酶活性丧失的突变体），仍保留sgRNA靶向结合DNA的能力，dCas9蛋白融合转录激活物（CRISPRa）后可激活目标基因表达，也可通过融合转录阻遏物（CRISPRi）抑制目标基因表达。CRISPR/Cas9系统的高效输送是限制其临床广泛应用的主要问题之一。病毒载体被广泛用于递送CRISPR/Cas9元 件；但就安全性、简便性和灵活性而言，非病毒载体研究更具吸引力。本文主要总结了CRISPR技术的原理和研究进展，包括CRISPR/Cas9的递送载体，递送模式以及递送过程的障碍，并回顾基于CRISPR技术在骨和软骨组织工程中的研究进展，讨论CRISPR技术在骨和软骨组织工程应用中面临的挑战和未来。