南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2021年第9期

• ELK3在胃癌中的表达特征和功能分析

  周立强, 吴 忧, 辛 林

  目的 探讨ELK3在胃癌中的表达特征和潜在功能。方法 采用非配对t检验、χ2检验分析E-MTAB-6693数据集ELK3在胃癌的表达特征；Kaplan-Meier生存分析、单因素和多因素Cox回归分析ELK3对预后的预测能力。Chip-Atlas、ChipBase、基因转录调控数据库、hTFtarget预测并构建ELK3转录调控网络。R软件“org.Hs.eg.db”包对靶基因进行功能富集分析。Cibersort工具分析胃癌组织中浸润性免疫细胞的比例，并计算Pearson系数分析ELK3与这些细胞的相关性。使用基因表达谱分析人类蛋白图谱公共数据库验证ELK3的表达。收集5组胃癌临床样本，利用rt-PCR验证ELK3的mRNA水平表达，利用Western blot验证ELK3在配对胃癌组织中蛋白水平表达差异。结果 在公共数据集和临床样本中ELK3在胃癌中高表达（P<0.05）；其表达随M分期、AJCC分期、神经侵袭的进展而升高（P<0.05）。χ2检验表明ELK3表达水平与N分期、AJCC分期、Lauren分型、分化程度、病理分型、微卫星状态相关（P<0.05）。ELK3高表达患者的总体生存期和无病生存期较低表达患者显著降低，是胃癌的独立预后因素（P<0.05）。综合鉴定出176个潜在的ELK3转录调控靶基因，富集分析表明ELK3可能调控 Rap1、AMPK、趋化因子、VEGF、TNF、肿瘤PD-L1/PD-1信号（P<0.05）。ELK3表达与胃癌中调节T细胞、滤泡辅助性T细胞、CD8+T细胞数量呈负相关（P<0.05）。结论 ELK3在胃癌中充当癌基因，可能促进胃癌细胞发生、发展和免疫逃避。

• 基于深度学习并行网络模型的心律失常分类方法

  甘 屹, 施俊丞, 高 丽, 何伟铭

  目的 提出一种并行神经网络分类方法，以提高对正常搏动、室上性异位搏动、心室异位搏动、融合搏动4种心律失常的分类性能。方法 首先进行心电信号去噪、小尺度心拍和大尺度心拍的分割、数据增强等预处理；然后基于深度学习理论，应用密集连接卷积神经网络改善人工提取波形特征的局限性，并结合双向长短时记忆网络和高效通道注意力网络，以增强提取波形时序特征和重要特征的功能；接着采用并行网络结构，同时输入小尺度心拍和大尺度心拍的的波形特征，以提高心律失常分类的准确性；最后使用Softmax函数实现对心律失常的4分类任务。结果 利用MIT-BIH心律失常数据库和3组实验验证所提方法。多种并行网络模型分类性能对比实验和不同心拍输入方式下，各分类模型性能对比实验得出所提分类模型的总体准确率、平均灵敏度和平均特异性分别达到99.36%、96.08%、99.41%；并行网络分类模型收敛性能分析实验得出分类模型每次训练时间为41 s。结论 并行多网络分类方法在保持较高总体准确率的同时，平均灵敏度、平均特异性以及训练时间均有改善，该方法有望为心律失常临床诊断提供新的技术方案。

• 神经生长因子联合牙髓干细胞可促进大鼠种植体周围骨结合

  路晓淼, 田瑞雪, 刘姗姗, 徐锦程

  目的 研究神经生长因子（NGF）联合牙髓干细胞（DPSCs）调节种植体周围骨结合的作用及机制。方法 培养SD大鼠的DPSCs并随机分3组，每组实验重复4次。对照组：不含药物的培养基处理；NFG组：含有NGF的培养基处理；NFG+K252a组：含有NGF及TrkA拮抗剂+K252a的培养基处理。成骨诱导后检测钙结节，Western blot检测RUNT相关转录因子2（RUNX2）、骨钙素（OCN）的表达量。SD大鼠建立股骨种植模型并分为对照组、DPSCs组、DPSCs+NGF组、DPSCs+K252a组、DPSCs+NGF+K252a组，8只/组。干预4周后进行种植体周围骨组织的micro-CT检查及HE染色并采用Western blot检测RUNX2、OCN表达量。结果 NGF组DPSCs的钙结节数目及RUNX2、OCN的表达水平均高于对照组（P<0.05）；NGF+K252a组DPSCs的钙结节数目及RUNX2、OCN的表达水平均低于NGF组（P<0.05）。DPSCs组及DPSCs+NGF组大鼠种植体周围骨组织的骨矿密度（BMD）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁数量（Tb.N）及RUNX2、OCN的表达水平均明显高于对照组（P<0.05）且DPSCs+NGF组种植体周围骨组织的BMD、Tb.Th、Tb.N及RUNX2、OCN的表达水平高于DPSCs组（P0.05）；DPSCs+NGF+K252a组种植体周围骨组织的BMD、Tb.Th、Tb.N及RUNX2、OCN的表达水平均明显低于DPSCs+NGF组（P<0.05）。结论 NGF联合DPSCs能够促进大鼠种植体周围骨结合，NGF通过TrkA促进DPSCs成骨分化是可能的分子机制。

• 适用于单细胞RNA测序的半月板细胞提取方法的优化

  陈纳淳, 吴汉森, 邓仲豪, 廖哲霆, 冯舒皓, 骆梓恒, 楚玉豪, 邱耿韬, 李啸宇, 金 昱, 戎圣炜, 王富华, 甘 露, 陈如歌, 赵 亮

  目的 优化半月板细胞提取的方法，缩短细胞提取时间，稳定地获取细胞数量多和细胞活率高的细胞悬液，使获得的细胞悬液悬液适用于单细胞RNA测序。方法 比较细胞悬液的细胞数量及细胞活率评价不同细胞提取方法的有效性，细胞提取方法包括传统半月板细胞提取法（短时间消化和长时间消化）和优化提取法；通过分析单细胞RNA测序数据集评价优化提取法获取的细胞悬液的稳定性；通过比较优化提取法获得的单细胞RNA测序数据集与公开的半月板单细胞RNA测序数据集，分析优化提取法的可靠性。结果 在3次重复实验中，优化提取法获得细胞数量最多的细胞悬液，细胞数量超过105，且细胞活率最高，平均达80%。通过分析单细胞RNA测序数据发现每个样本中80%以上细胞的线粒体基因含量少于20%。CD34+，MCAM+细胞以及COL1A1+胞均存在每个单细胞RNA测序数据集中。在比较基于优化提取法单细胞RNA测序数据集与公开的半月板单细胞RNA测序数据集时发现，优化提取法也能捕获COL3A1+细胞，COL1A1+细胞，MYLK+细胞，BMP2+细胞，CD93+细胞和CDK1+细胞。结论 优化细胞提取方法能稳定地获得适用于10×Genomics平台的单细胞RNA测序技术的单细胞悬液。

• 川芎通过多成分、多靶点、多信号通路和多生物学功能发挥抗肺癌脑转移作用

  徐廉松, 黄富豪, 张语涵, 牛雯雯, 庞金龙, 李姗姗, 李 娴

  目的 利用网络药理学方法和分子对接技术研究川芎治疗肺癌脑转移的潜在分子机制。方法 通过中药系统药理学分析平台TCMSP数据库获取川芎的化学成分和作用靶点；通过GeneCards数据库筛选肺癌脑转移的相关靶点；借助Clusterpro-filerR包进行GO和KEGG富集分析；利用Cytoscape及STRING数据库构建川芎“活性成分-靶点-疾病”网络、蛋白相互作用网络，根据拓扑学参数筛选川芎治疗肺癌脑转移的核心成分及作用靶点，并将两者进行分子对接；最后，通过川芎处理人肺癌细胞PC9，运用Western blot法检测相关蛋白表达对核心靶点进行初步验证。结果 本研究共筛选出（Z）-藁本内酯、丁苯酞、油酸、杨梅酮等48个有效成分；INS、BDNF、FOS、VEGFA、PTGS2、ESR1、MAPK14、PTGS1等49个靶点蛋白；核受体活性、配体激活、转录因子活性等57个生物学功能；Prolactin signaling pathway、Breastcancer、Etrogen signaling pathway等40条信号通路。分子对接结果显示，杨梅酮、丁苯酞、4-羟基-3丁基苯酞、（Z）藁本内酯、洋川芎内酯-E等成分与BDNF、FOS、PTGS2、MAPK14等7个核心靶点有较强亲和能力。Western blot结果显示，0.1 mol/L和1 mol/L川芎处理肺癌细胞PC9后PI3K的磷酸化水平分别为（86.51±13.09）%、（71.58±5.56）%，AKT的磷酸化水平分别为（87.49±13.09）%、（71.47±13.02）%，VEGF的水平分别为（84.39± 8.95）%、（80.65±10.07）%，且差异均具有统计学意义（P<0.01）。结论 川芎通过多成分、多靶点、多信号通路和多生物学功能发挥抗肺癌脑转移的作用。

• ELF4通过激活Akt通路促进胰岛素瘤细胞增殖并抑制细胞凋亡

  卫国红, 王 利, 万学思, 谭泳谣

  目的 探索ELF4促进胰岛素瘤细胞增殖与抗凋亡的作用及其机理。方法 利用逆转录病毒载体系统，构建稳定高表达ELF4的胰岛素瘤细胞BON-ELF4，以及载体对照组细胞BON-Vector。采用MTT法检测胰岛素瘤细胞BON-ELF4和BON-Vector各组细胞的生长情况。采用0.1 μmol/L化疗药物表阿霉素处理BON-ELF4和BON-Vector细胞24 h后，检测细胞凋亡相关指标，采用免疫印迹法检测各组肿瘤细胞中凋亡通路关键因子caspase-9，caspase-8和PARP切割带的表达水平；采用Annexin V-FITC/PI双染色结合流式细胞术分析各组细胞凋亡情况。采用免疫印迹法检测胰岛素瘤细胞BON-ELF4和BON-Vector细胞中Akt磷酸化水平。结果 免疫印迹法检测结果显示，BON-ELF4细胞中ELF4蛋白表达量高于对照组细胞BON-Vector（P=0.013），稳定高表达外源性ELF4蛋白的细胞系BON-ELF4构建成功。稳定高表达ELF4的细胞系BON-ELF4生长明显较快（P<0.05）。相比较于载体对照组 BON-Vector，BON-ELF4 细胞在 0.1 μmol/L 表阿霉素处理 24 h 后 caspase-8，caspase-9的蛋白前体降低，而caspase-8，caspase-9切割成熟体升高（P<0.05）；同时，相应的PARP切割带随着ELF4的高表达而降低（P<0.05）；流式细胞术检测结果显示，22.90%的载体对照组BON-Vector细胞呈现出Annexin V阳性、PI阴性的早期凋亡结果，6.03%的BON-ELF4细胞组呈现出Annexin V阳性、PI阴性的早期凋亡结果。外源高表达ELF4的肿瘤细胞中Akt的磷酸化显著升高（P<0.05），而Akt总蛋白的水平基本未受影响（P>0.05）。结论 ELF4能通过激活Akt通路而促进胰岛素瘤胞增殖和抗凋亡。

• 干扰长链编码RNA FOXCUT能抑制鼻咽癌细胞上皮间质转化及诱导线粒体损伤

  高莉莉, 张 雄, 窦思雨, 岳小丁, 杨捷玲

  目的 探讨干扰长链编码RNA FOXCUT对鼻咽癌细胞上皮间质转化及线粒体功能的影响。方法 RT-PCR检测50例鼻咽癌患者癌组织及癌旁组织和NP69、CNE1、CNE2、SUNE2、HER2和5-8F细胞株中FOXCUT表达水平；将shRNA FOXCUT转染至CNE1细胞，随机分组为Control组、shRNA-NC组和FOXCUT-shRNA3组。采用CCK8法和克隆形成实验检测细胞增殖；显微镜观察细胞形态；免疫荧光检测Vimentin+含量；试剂盒检测氧化应激标记物SOD、MDA、LDH的水平；流式检测线粒体膜电位的变化；Western blot法检测E-cad、N-cad、Vimentin、Bax、Bcl-2、caspase-3和c-Myc蛋白表达水平。结果 与癌旁组织相比，鼻咽癌组织中FOXCUT表达水平均升高（P<0.001）。与NP69细胞相比，CNE1、CNE2、SUNE2、HER2和5-8F细胞FOXCUT表达水平均升高（P<0.001）。与Control组相比较，FOXCUT-shRNA3组细胞增殖倍数及克隆形成率降低（P<0.001），细胞形态呈短梭形、扁平型或圆形，细胞间的连接较为紧密，具有铺路石样特征；N-cad、Vimentin的表达水平降低，E-cad的表达水平升高（P<0.05），Vimentin+含量降低（P<0.001），MDA、LDH的含量明显升高（P<0.05），SOD的活性明显降低（P<0.05），红色荧光细胞向绿色荧光细胞转变较明显，绿色荧光细胞百分比增加，Bax/Bcl2、Cleaved cas3/cas3表达显著上升，c-Myc表达显著降低（P<0.001）。结论 干扰长链非编码RNA FOXCUT能够抑制鼻咽癌细胞增殖，减少上皮间质转化，增强氧化应激、降低膜电位，诱导CNE1细胞线粒体功能损伤，促进凋亡；干扰长链非编码RNA FOXCUT对CNE1细胞抑制效果显著，具有靶向治疗鼻咽癌的潜力。

• 1-脱氧野尻霉素减轻2型糖尿病小鼠的肝纤维化

  赫小乔, 孙志远, 马凯元, 梅英武

  目的 探讨1-脱氧野霉素（DNJ）对糖尿病所致的肝纤维化的改善作用及其内在机制。方法 建立2型糖尿病小鼠（T2D）模型，随机分为3组，5只/组：（1）对照组：腹膜内注射柠檬酸盐缓冲液（50 mg/kg）；（2）糖尿病组（DM）：采用高脂饮食饲养8周，静脉注射STZ（50 mg/kg），持续3 d，空腹血糖浓度≥16.7 mmol/L；（3）DNJ组：给予高脂饮食和10%DNJ（200 mg·kg-1·d-1）饮水，持续8周。测定体质量（BW）、血糖、血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、超氧化物歧化酶（SOD）。制作肝组织切片行苏木精伊红染色（H&E）和天狼星红染色。此外，检测肝组织中胶原蛋白的溶解度。应用实时定量PCR法检测MCP-1、TNF-α、IL-1β、TGF-β1mRNA相对表达水平。Western-blot法测定α-SMA和Collagen2（ColA2）蛋白水平。将L929小鼠成纤维细胞用DNJ（10 μg/mL）或PBS预处理30 min，然后在含高浓度葡萄糖的MEM培养基培养24 h。使用二氢乙锭（DHE）染色测定ROS的产生。结果 DNJ可显著降低糖尿病小鼠血清中的血糖、TC、TG和SOD水平（P<0.05），并显著减轻肝组织胶原交联程度，尤其以酶溶型胶原（PSC）以及总胶原含量的减低为主要表现（P<0.05）。同时，DNJ显著降低由糖尿病引起的促炎因子以及纤维化相关细胞因子的高表达（P<0.05）。用DNJ预处理后培养的L929细胞在DHE染色中显示出较低的红色荧光强度（P<0.05）。结论 DNJ作为一种潜在的天然功能性营养物质，可以通过降血糖，抗炎以及抗氧化作用减轻T2D诱导的肝纤维化。

• 腹膜透析相关的混合菌感染的发生和治疗失败的危险因素——814例多中心回顾性研究

  刘美君, 杨立明, 朱学研, 张晓暄, 张 禹, 庄小花, 白晓莹, 周文华, 罗 萍, 崔文鹏

  目的 明确混合菌腹膜透析相关性腹膜炎（PDAP）发生和治疗失败的危险因素。方法 回顾性收集2013~2019年期间，在吉林省4家三甲医院腹膜透析（PD）中心随访的PDAP患者临床资料，将其分为混合菌PDAP组和对照组。比较两组患者的临床资料与治疗结果，应用多因素回归分析探讨影响混合菌PDAP发生和当次治疗失败的独立危险因素。结果 共纳入814例次PDAP，分为混合菌PDAP组（79例次PDAP）和对照组（735例次PDAP）。与对照组相比，混合菌PDAP组老年人（>65岁）和难治性PDAP占比更高，第1天透出液白细胞计数更多，抗生素治疗天数更长（P<0.05）。混合菌PDAP组拔管和发生治疗失败（拔 管+PDAP相关性死亡）的风险分别是对照组的2.972倍（OR=2.972，95% CI 1.634~5.407，P<0.001）和2.692倍（OR=2.692, 95%CI1.578~4.591，P65岁）发生混合菌PDAP的风险是中青年人的1.937倍（OR=1.937，1.207~3.109，P=0.006）；合并糖尿病（OR=5.554，95% CI 1.021~30.201，P=0.047）、致病菌类型为混合真菌（OR=343.687，95%CI 21.554~5480.144，P< 0.001）或铜绿假单胞菌感染（OR=11.518，95% CI 1.632~81.310，P=0.014）分别可使混合菌PDAP患者治疗失败（拔管+PDAP相关性死亡）的风险增加4.554倍、342.687倍、10.518倍。结论 本地区近3年混合菌PDAP在整体PDAP中的占比较以往升高，混合菌感染是当次PDAP治疗失败的独立危险因素。老年人是发生混合菌PDAP的独立危险因素，合并糖尿病与致病菌混合真菌感染或混合铜绿假单胞菌感染是混合菌PDAP当次治疗失败的独立危险因素。

• 基于术前CT影像组学列线图可预测Ⅰ~Ⅲ期肾透明性细胞癌术后复发

  张海捷, 殷 夫, 陈梦林, 漆安琪, 杨丽洋, 崔维维, 杨姗姗, 文 戈

  目的 探讨Ⅰ~Ⅲ期肾透明细胞癌术后复发的术前CT影像组学特征并构建列线图，以期为肾癌个体化治疗提供参考。方法 回顾性收集256例（训练集175例，测试集81例）肾透明细胞癌患者的临床病理及 CT 资料。利用 ITK-SNAP 软件和PyRadiomics计算平台对肿瘤的容积图像进行分割和特征提取。训练集中，基于lasso-CV算法进行特征筛选，并计算影像组学评分Rad_score；利用单因素和多因素逻辑回归分析筛选临床病理及CT特征为Clinic因素；构建Rad_score、Clinic、Rad_score+Clinic列线图，并在测试集中进行验证。评估列线图的辨别度和校准度，应用决策曲线分析评估其临床应用价值。结果 6个影像组学特征最终用于计算Rad_score。Clinic因素为KPS评分、血小板、钙化和TNM临床分期。在辨别度方面，Rad_score+Clinic列线图的效能（训练集AUC 0.84，测试集AUC 0.85）显著高于Rad_score列线图（训练集AUC 0.78，P=0.029；测试集AUC0.77，P=0.025）和 Clinic列线图（训练集AUC 0.77，P=0.014，测试集AUC 0.77，P=0.011）。校准度方面，Rad_score+Clinic列线图拟合优度检验为训练集P=0.065，测试集P=0.628。决策曲线分析显示，加入Rad_score后的Rad_score+Clinic列线图比单纯Clinic列线图应用价值高。结论 基于术前CT影像组学特征的列线图预测Ⅰ~Ⅲ期肾透明细胞癌术后复发有较高的效能，可为肾癌个体化治疗提供参考。

• 基于Wasserstein Gan的无监督单模配准方法

  陈 宇, 万辉帆, 邹茂扬

  本文提出一种基于Wasserstein Gan的无监督单模配准方法。与现有的基于深度学习的单模配准方法不同，本文的方法完成训练不需要Ground truth和预设的相似性度量指标。本文方法的主要结构包括生成网络和判别网络。首先，生成网络输入固定图像（正例图像）和浮动图像并提取图像间潜在的形变场，通过插值方式预测配准图像（负例图像）；然后，判别网络交替输入正例图像和负例图像，判断图像间的相似性，并将判断结果作为损失函数反馈，进而驱动网络参数更新；最后，通过对抗训练，生成网络预测的配准图像能欺骗判别网络，网络收敛。实验中随机选取30例LPBA40脑部数据集、25例EMPIRE10肺部数据集和15例ACDC心脏数据集用作训练数据集，然后将剩下的10例LPBA40脑部数据集、5例EMPIRE10肺部数据集和5例ACDC心脏数据集用作测试数据集。配准结果与Affine算法、Demons算法、SyN算法和VoxelMorph算法对比。实验结果显示，本研究算法的DICE系数（DSC）和归一化相关系数（NCC）评价指标均是最高，表明本文方法的配准精度高于Affine算法、Demons算法、SyN算法和目前无监督的SOTA算法VoxelMorph。

• 一致性评价系数应用于无序多分类资料的效果评价

  梁绮红, 陈昭宇, 张 峥, 黄 爽, 安胜利

  目的 基于AC1系数的构建思想，建立一致性评价系数（CEA）在两评价者无序多分类结局的评价方法，并可避免Kappa系数的缺陷。方法 通过随机抽样生成诊断试验类型数据，使用Monte Carlo模拟，在样本量、指定事件在总体的占比、偶然评价率、类别数等不同参数组合下进行重抽样，比较Kappa系数、AC1系数和CEA系数的均方误、方差和方差的期望。通过从总体中随机抽样1000次得到CEA系数的分布描述。结果 偶然评价率的不一致会导致CEA系数的均方误波动较大。与Kappa系数相比，AC1系数和CEA系数在指定事件的占比为极端值的情况更为稳定。在小样本、偶然评价率不一致的情况下，Kappa系数的方差和方差的期望变大，CEA系数变化较小。大样本条件下，CEA系数近似服从正态分布。结论 Kappa系数、AC1系数、CEA系数均受偶然评价率的影响最大，样本量次之。针对无序多分类结局，CEA系数在不同的样本量、偶然评价率下具有更稳健的性质。

• 非酒精性脂肪性肝病患者的肝组织差异蛋白的定量分析：基于iTRAQ技术

  朱雅莉, 章述军, 阳 成, 薛 薇, 张 佳, 李佳俊, 赵金秋, 徐 静, 黄文祥

  目的 应用蛋白质组学在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）肝脏组织中筛选差异蛋白,寻找关键的作用靶点。方法 收集符合纳入标准的肝脏组织，通过 HE 染色病理切片筛选出非酒精性脂肪性肝炎样本（NASH组）3例和正常对照样本3例。提取NASH组及正常对照组的肝脏蛋白，使用iTRAQ试剂对多肽进行标记进行液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）检测，用蛋白质鉴定软件Mascot2.3.02比对UniProt蛋白数据库搜索鉴定，应用GO数据库对差异表达蛋白质进行注释和富集，应用KEGG数据库进行差异蛋白质涉及信号通路富集。实时荧光定量PCR（qPCR）检测显著差异表达蛋白对应的mRNA表达水平。结果 NASH组和对照组相比，以差异倍数（>1.2或<0.8）且P2.0或<0.5）且P<0.05的25个显著差异表达蛋白进行筛选，共有6个蛋白与蛋白组学的结果趋势一致，包括5个下调蛋白：Jumonji 蛋白（JARID2）、莱伯西林样蛋白（LCA5L）、突触素1（SYN1）及胶原α-1（XIII）链（COL13A1）、FYVE，RhoGEF和PH结构域蛋白5（FGD5），以及1个上调蛋白：谷胱甘肽S-转移酶Mu 4（GSTM4）。结论 iTRAQ技术和生物信息学方法在NASH肝脏组织筛选出差异表达蛋白648个，其中JARID2、SYN1、COL13A1、FGD5、GSTM4可能是NASH的关键靶向蛋白。

• 癌旁circWDR25与肝细胞癌根治性切除术后的预后相关

  刘 磊, 杜成友, 魏续福, 廖 锐

  ：目的 探讨癌旁组织中肝星状细胞（HSCs）分泌表达的circWDR25（hsa-circRNA-0004310）与肝细胞癌（HCC）患者行根治性切除术后的预后关系。方法 肝星状细胞系LX-2分别与3种肝癌细胞系Hep3B、SMMC-7721、HCCLM3行transwell小室法共培养，建立肿瘤细胞活化的HSCs，收集HSCs上清分离外泌体，提取RNA后检测circRNA基因表达谱；收集2014年1月~2015年10月在重庆医科大学附属第一医院肝胆外科接受根治性切除手术的288例HCC患者的癌旁肝组织，行原位杂交，检测circWDR25与α-SMA的阳性表达量，预后单因素分析和多因素分析分别采用Log-rank检验和Cox回归分析。结果 基因表达谱发现肿瘤活化的LX-2所分离出的外泌体中circWDR25表达上调最显著；癌旁circWDR25和HSCs呈正相关（r=0.156，P=0.008）。术前AST>36 g/L、肿瘤多发、肿瘤>5 cm、HSC>70、circWDR25>190为影响HCC患者根治性切除术后总体生存率的独立危险因素；术前AST>36、肿瘤多发、肿瘤>5 cm、有癌栓、HSC>70、circWDR25>190为肝癌患者无瘤生存的独立危险因素。结论 癌旁circWDR25和HSCs是HCC患者根治性肝切除术后预后的影响因素，二者在癌旁组织中的高表达与预后差密切相关。

• RUNX2/LAPTM5在小鼠颅骨前成骨细胞矿化诱导中的表达

  邢 磊, 耿远明, 李文昊, 林丽佳, 徐平平

  目的 探讨RUNX2/LAPTM5在矿化诱导过程中的表达与成骨及溶酶体的相关性。方法 矿化诱导MC3T3-E1，对照组不做处理，茜素红染色检测矿化情况，碱性磷酸酶染色检测成骨分化情况。RT-qPCR及Western blot检测分化0-5 d RUNX2及LAPTM5的基因及蛋白表达。过表达与干扰RUNX2/LAPTM5的表达后，Western blot检测RUNX2、LAPTM5的表达。过表达与干扰LAPTM5的表达后，Western blot检测成骨相关基因碱性磷酸酶、骨钙素 的表达。结果 倒置显微镜下观察，茜素红染色矿化结节计数随时间变化逐渐增多，矿化结节的大小也逐渐变大；碱性磷酸酶染色蓝紫色颗粒计数随时间逐渐增加。RT-qPCR及Western blot结果显示RUNX2及LAPTM5的表达，其在成骨矿化过程中呈上升趋势（P<0.001）。过表达与干扰RUNX2影响LAPTM5表达（P<0.05）；过表达与干扰LAPTM5对RUNX2的影响不显著。过表达与干扰LAPTM5影响了成骨的表达（P< 0.01）。结论 RUNX2/LAPTM5可能参与了成骨细胞分化调节，RUNX2可能参与LAPTM5的表达调控。RUNX2/LAPTM5可能在溶酶体参与成骨矿化的过程中起到桥梁作用。

• 基于高阶奇异值分解和Rician噪声校正模型的扩散加权图像去噪算法

  徐 朴, 郭 莉, 冯衍秋, 张鑫媛

  目的 研究一种新颖的基于高阶奇异值分解（HOSVD）的扩散加权图像去噪算法，用以提高扩散加权（DW）图像的信噪比以及后续量化参数的准确性。方法 我们提出一种基于HOSVD稀疏约束和Rician噪声校正模型的去噪方法，将Rician噪声信号期望融合到传统的HOSVD去噪框架中，从而能够直接对带有Rician噪声的DW图像进行去噪。此外，考虑到对相似块组成的高维数组进行HOSVD去噪处理，容易引入条形伪影，因此本文直接对每个局部DW图像块进行HOSVD去噪，从而解决了条形伪影问题。为了验证所提方法的有效性，我们将本方法与低秩+边缘约束（LR+Edge）、基于全局指导下的局部高阶奇异值分解（GL-HOSVD）、基于块匹配的三维滤波（BM3D）和非局部均值（NLM）4种去噪算法进行了实验对比。结果 实验结果表明，所提方法能够有效降低DW图像噪声，同时较好的保留图像细节以及边缘结构信息。无论是从DW图像的峰值信噪比（PSNR）和结构相似性（SSIM）以及各向异性分数均方根误差定量指标，还是从去噪图像和各向异性分数图的视觉效果来看，本算法都要明显优于LR+Edge，BM3D和NLM。此外，GL-HOSVD虽然可以得到较好的去噪结果，但是在高噪声水平下，会引入条形伪影，而本文方法不但可以得到较好的去噪结果，并且不存在伪影问题。结论 本文提出了一种新颖的HOSVD去噪方法，可以直接处理带有Rician噪声的DW图像，并且解决了同类算法中伪影问题，去噪效果明显，能够为临床提供更准确的量化参数结果，更好服务于临床影像诊断。

• 褪黑素可改善PBDE-47所致PC12细胞的异常自噬与凋亡

  肖博雅, 董理鑫, 高 慧, 杨凯朝, 王亚飞, 李晓凝, 邱海霞, 王爱国, 张 舜

  目的 探讨褪黑素（MT）对2，2'，4，4'-四溴联苯醚（PBDE-47）所致大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞异常自噬与凋亡的影响。方法 通过一系列浓度梯度 MT（12.5、25、50、100、200 μmol/L）预处理 PC12 细胞 2 h 后，并联合浓度为 20 μmol/L的PBDE-47染毒细胞24 h，采用细胞计数试剂盒（CCK8）检测细胞存活率，筛选25 μmol/L MT用于后续实验。实验分组为：溶剂对照组（0.5‰ DMSO）、20 μmol/L PBDE-47处理组、20 μmol/L PBDE-47+25 μmol/L MT处理组、25 μmol/L MT处理组。采用免疫荧光技术检测自噬体标志蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）阳性着色情况；采用Western blot技术检测自噬关键蛋白自噬相关蛋白7（ATG7）、自噬选择性底物p62、LC3-II水平，以及凋亡相关蛋白活化型含半胱氨酸的天冬氨酸-3（active caspase-3）和剪切型多（ADP-核糖）聚合酶（cleaved PARP）水平。结果 CCK8结果表明，PBDE-47处理组细胞活力相比对照组有所下降（P=0.001）；与PBDE-47处理组相比，PBDE-47+25 μmol/L MT处理组细胞存活率上升且在80%以上，差异均有统计学意义（P=0.023）。与对照组相比，PBDE-47处理后PC12细胞LC3蛋白阳性着色增强；此外，PBDE-47处理组PC12细胞ATG7蛋白水平下降，p62、LC3-II、active caspase-3、cleaved PARP蛋白水平上升，差异均有统计学意义（P 均<0.001）。与PBDE-47处理组相比，PBDE-47+MT处理组LC3蛋白阳性着色减弱；此外，PBDE-47+MT处理组ATG7蛋白水平上升（P=0.034），p62蛋白水平下降（P=0.048），LC3-II蛋白水平下降（P=0.018），active caspase-3蛋白水平下降（P<0.001），cleaved PARP蛋白水平下降（P=0.032）。结论 PBDE-47可通过诱导PC12细胞自噬损伤引起自噬体蓄积，并能促进细胞凋亡，从而降低细胞存活；褪黑素可改善PBDE-47所致PC12细胞异常自噬与凋亡，进而提高细胞存活。

• 不同射血分数心力衰竭患者的客观睡眠特征及睡眠呼吸暂停的危险因素

  韩彬彬, 王闪闪, 李国华, 王学惠, 陈志刚, 赵国安, 陈莹恩, 李 猛, 李 燕, 张 敏, 艾思志

  目的 研究不同射血分数心力衰竭患者的客观睡眠特征并探讨影响睡眠呼吸暂停的相关独立危险因素。方法 本研究共纳入2019年4月~2020年10月期间在新乡医学院第一附属医院心血管内科住院治疗的慢性心力衰竭患者共107例。根据心脏 超声左心室射血分数将其分为射血分数减少的心力衰竭患者（HFrEF组，LVEF<40%，35例）、射血分数中间值的心力衰竭患者（HFmrEF组，40%≤LVEF<50%，21例）及射血分数保留的心力衰竭患者（HFpEF组，LVEF≥50%，51例）。收集3组患者入院期间的基线人口学资料，并进行夜间多导睡眠监测，评估其客观睡眠特征，采用Spearman相关分析及多分类Logistic回归模型分析影响心衰患者客观睡眠特征的风险因素。结果 HFpEF组患者的非快速眼动睡眠1期占比及呼吸暂停低通气指数（AHI）水平显著低于HFrEF组患者，且较少表现为中枢性睡眠呼吸暂停（CSA）（P0.05）。Spearman相关分析表明，性别、利尿剂使用、左室射血分数（LVEF）、NT-proBNP及总胆固醇水平与心衰患者的AHI水平及呼吸事件相关（P<0.05）。多分类Logistic回归分析显示年龄、饮酒及LVEF是心衰患者睡眠呼吸暂停发生及严重程度的独立危险因素。结论 3组心衰患者均存在客观睡眠结构的紊乱，以睡眠呼吸暂停为主，但与HFrEF组患者相比，HFpEF组患者发生睡眠呼吸暂停包含CSA的比例较低。高龄、饮酒及低LVEF是心衰患者睡眠呼吸暂停发生及严重程度的独立危险因素。

• 自体造血干细胞移植可改善多发性骨髓瘤患者的临床状态

  宁雪琴, 魏小磊, 郭绪涛, 韦 祁, 黄 芬, 范志平, 许 娜, 孙 竞, 冯 茹, 刘启发, 魏永强

  目的 探究蛋白酶体抑制剂和来那度胺治疗下，自体造血干细胞移植（ASCT）对初发多发性骨髓瘤（MM）患者缓解深度和生存的影响。方法 回顾性收集2015年1月~2019年12月在南方医科大学南方医院接受蛋白酶体抑制剂和或来那度胺治疗的初发及适合移植的MM患者临床资料，按照患者是否接受自体干细胞移植分为移植组及未移植组。移植组纳入接受4~6疗程蛋白酶体抑制剂和或来那度胺为基础的诱导治疗后序贯ASCT的患者，未移植组纳入仅接受8疗程以上的蛋白酶体抑制剂和或来那度胺为基础的诱导及巩固的患者，比较两组患者的治疗疗效及生存的差异。结果 总共105例患者纳入研究，移植组48例 （45.7%）、未移植组57例（54.3%），两组患者在性别、年龄及4疗程诱导治疗后疗效等方面相似（P>0.05）。两组患者在首次复发前获得过的最佳缓解程度有统计学差异（P<0.001），移植组获得完全缓解（85.4% vs 54.4%，P=0.001））和完全缓解+非常好的部分缓解（95.8% vs 73.7%，P=0.002）的比例高于未移植组；截止2020年12月31日末次随访时，移植组和未移植组的中位无进展生存期（PFS）分别为未达到和 29 月（P=0.013），两组患者的中位总生存期（OS）均未达到，但移植组 OS 优于未移植组（P= 0.022）。结论 在新药时代，ASCT仍能进一步提高初发MM患者的缓解深度并改善患者的生存。

• 静脉溶栓治疗急性重度脑梗死的疗效及预后的不良相关危险因素：152例随机对照临床试验

  翟跃芬, 王虎清, 展淑琴, 吴海琴

  目的 探讨静脉溶栓治疗急性重度脑梗死的疗效、安全性，分析溶栓后预后不良相关危险因素。方法 采用前瞻性随机对照研究，共纳入152例急性重度脑梗死患者，发病时间均在4.5 h之内，随机信封法分为对照组（76例）和观察组（76例），对照组给予抗血小板聚集、调脂固斑、神经保护及活血药物等常规治疗，观察组在常规治疗的同时给予阿替普酶静脉溶栓治疗。记录两组患者治疗24 h、1周和1月后的NIHSS评分；治疗3月后的mRS评分；治疗1周后发生症状性颅内出血的例数。依据治疗3月 后mRS评分将观察组患者分为预后良好组（30例）、预后不良组（46例），对影响预后的相关危险因素进行单因素及多因素Logistic回归分析。结果 观察组治疗24 h、1周及1月后的NIHSS评分显著低于对照组（F=24.684，P<0.001）。治疗3月后，观察组mRS评分显著低于对照组（t=4.396，P<0.001），预后良好率明显高于对照组（χ2=13.636，P<0.001）。治疗1周后，观察组和对照 组分别发生症状性颅内出血4例和2例，无明显差异（χ2=0.694，P=0.405）。发病至溶栓间隔时间（OR=0.173，P=0.035）、溶栓前收缩压（OR=0.869，P=0.019）及入院时NIHSS评分（OR=0.466，P=0.011）是静脉溶栓治疗急性重度脑梗死预后不良的独立危险因素。结论 急性重度脑梗死应用静脉溶栓治疗是有效且安全的；发病至溶栓间隔时间、溶栓前收缩压及入院时NIHSS评分是 静脉溶栓后预后不良的独立危险因素。

• 20例ABO血型抗原表达异常样本的血型基因分析

  孙文杰, 何 婷, 韩 军, 任晓艳, 李 萌

  目的 探讨20例样本ABO血型抗原表达减弱的分子生物学机制。方法 采用微柱凝集法及盐水试管法进行ABO血型血清学鉴定；对ABO基因第1-7外显子及其上游启动子区域PCR产物直接测序进行基因分型。结果 11例样本通过家系分析可以确定其基因型（1例ABO*A2.01/ABO*B.01，1例ABO*A2.01/ABO*O01.01，1例A1.02/B3.04，2例B3.04/O.01.01、2例B3.02/O.01.02，4例Bw.12/O.01.01）；3例样本在ABO基因启动子区域发生-35_-18位的碱基缺失，通过家系分析，提示该变异发生在B等位基因；1例样本在ABO基因启动子区域发生-119位C>T变异；1例样本发生第7外显子1054位点缺失碱基C；4例样本在ABO血型基因1-7外显子及其调控区域未发现变异。结论 启动子区域-119位C>T变异及Exon7 1054del变异可能是导致ABO血型抗原异常表达的新变异；部分ABO亚型可能与内含子异常或mRNA合成异常有关；本地区B亚型明显多于A亚型。

• 半剂量荧光素钠造影剂对轻中度慢性肾病患者肝肾功能的影响——回顾性队列研究

  李 莹, 石 磊, 贾 亮, 张鸿瑫

  目的 观察半剂量荧光素钠造影剂对轻中度慢性肾病（CKD 1-3期）患者肝、肾功能的影响。方法 纳入2017年1月~2021年1月住院的77例肾功能正常及轻中度异常的慢性肾病患者，应用半剂量荧光素钠进行眼底荧光造影（FAG）检查。测定造影前3 d内和术后1、3、7、30±1 d的肝功能、血肌酐、血尿素氮（BUN）、尿β2微球蛋白（β2—MG）、肾小球滤过率（eGFR）等，分析造影剂对患者肾功能的影响。结果 77例患者中，男性50例，女性27例，年龄53.5±9.6岁，只有1例发生造影剂肾病，发病率为1.30%。FAG前后BUN、尿β2-MG、快速微量白蛋白/肌酐差异均无统计学意义（P>0.05）。血肌酐在 FAG后1、7 d均无升高，3 d升高值24.6±2.3（P<0.01），30 d升高16.0±21.7（P=0.239）。尿NAG酶、尿渗透压在FAG术后1、3、7、30 d均明显降低（P<0.01）。eGFR在术后第3天显著下降，下降值为10.23±0.62，术后第7天恢复正常。尿白蛋白定量在FAG术后1、3、7、30 d均明显降低（P<0.01）。血β2-MG在FAG术后3 d升高0.314±0.121（P<0.01），术后7 d降低0.134±0.143（P=0.391），术后30 d升高0.119± 0.058（P=0.402）。造影前后的转氨酶在术后第3、7天下降（P<0.01）。结论 半剂量荧光素钠对轻中度慢性肾病患者肝脏功能无明显影响，肾脏功能影响极小，可以安全的进行眼底荧光血管造影检查。