南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2023年第10期

• 中性粒细胞/淋巴细胞、血小板/淋巴细胞比值是评价托法替尼治疗后类风湿关节炎活动性的有效指标

  唐 娟, 陈 娟, 林国新, 张 浩, 桂 明, 李楠楠, 谷依红, 罗林娟, 孙 剑

  目的 探讨接受托法替尼治疗的类风湿关节炎（RA）患者新兴炎症标志物中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR）、血小板与淋巴细胞比值（PLR）与炎症因子IL-6、疾病活动性的关系。方法 选取2019~2021年在湘雅第三医院确诊的RA患者98例，健康对照100例。在托法替尼治疗前1个月和治疗后6个月采集血样，测定红细胞沉降率（ESR）、C反应蛋白（CRP）、白介素6（IL-6）及其他血液参数，评估托法替尼治疗前后RA患者的PLR和NLR，分析二者与RA疾病活动性指标的相关性。结果 RA患者PLR、NLR较健康对照组明显升高。在托法替尼治疗之前与之后，PLR、NLR与超敏C反应蛋白（hs-CRP）、ESR、IL-6、DAS28-ESR值及RA生物标志物抗环瓜氨酸肽（CCP）和类风湿因子（RF）水平均呈正相关关系。与治疗前相比，RA患者接受托法替尼治疗6个月后 hs-CRP、ESR、IL-6、CCP、RF和DAS28-ESR水平明显降低。结论 NLR和PLR是评价托法替尼治疗后RA疾病活动性的有效指标。

• 高表达分泌颗粒蛋白II增加结直肠癌细胞对奥沙利铂的耐药性

  邓金海, 潘 腾, 周广林, 高 悦, 彭伟雄, 魏 玮, 吕纯鑫

  目的 探究分泌颗粒蛋白II（SCG2）在结直肠癌（CRC）组织中的表达特点，并分析其对奥沙利铂化疗敏感性的影响。方法 通过对组织芯片（包括96个癌组织和84个癌旁组织）进行免疫组化染色检测CRC患者癌组织及配对癌旁组织中SCG2的表达量并分析SCG2表达量与结直肠癌患者临床特征的关系。进一步采用蛋白免疫印迹Western blot和实时荧光定量PCR（qPCR）等方法检测化疗药物奥沙利铂（Oxa）处理结直肠癌细胞系后的SCG2的表达水平。利用CRISPR/Cas9技术建立SCG2敲除（SCG2-KO）的DLD1细胞株，采用CCK-8实验检测SCG2对药物敏感性的影响，采用Western blot和qPCR实验检测凋亡相关蛋白的表达水平。最后，用高浓度奥沙利铂持续处理DLD1细胞构建了对奥沙利铂耐药的DLD1细胞株，采用Western blot实验检测耐药株的SCG2的表达水平。结果 相较于癌旁组织，癌组织中SCG2表达量更高（P<0.0001），且更高的肿瘤N分期和临床分期患者结直肠癌组织SCG2阳性表达率更高。奥沙利铂处理结直肠癌细胞系可以显著增加其SCG2的表达量（P<0.05）。反过来，敲除SCG2降低了DLD1细胞对于奥沙利铂的药物敏感性（P<0.05）。机制研究发现SCG2敲除后凋亡相关分子表达量上调。并且，相较于亲本细胞株，SCG2在奥沙利铂耐药的DLD1细胞株（DLD1-OXAR）中显著高表达（P<0.05）。结论 SCG2是一个结直肠癌的危险性基因，且能够降低结直肠癌患者对奥沙利铂化疗药物的敏感性。

• 淫羊藿素通过调控铁死亡增加鼻咽癌细胞的放射敏感性

  胡 桐, 勾文峰, 任中昊, 刘改廷, 李祎亮, 左代英, 侯文彬

  目的 探索淫羊藿素对鼻咽癌细胞放射增敏作用以及机制。方法 通过MTT实验和克隆形成实验，观察淫羊藿素对鼻咽癌HONE1和HNE1细胞增殖能力的影响，筛选出给药剂量以及照射剂量。建立鼻咽癌细胞γ射线照射模型以及淫羊藿素给药模型，将细胞分为空白组、淫羊藿素组、照射组和淫羊藿素与照射联合组。通过流式细胞术检测4组细胞活性氧（ROS）的变化、周期分布以及细胞凋亡情况，通过Western blot实验检测DNA损伤标志蛋白γ-H2AX、周期相关蛋白CDC25C、p-CDC25C、和CyclinB1以及铁死亡标志蛋白ACSL4和GXP4的表达情况。构建HONE1细胞裸鼠皮下移植瘤模型，观察淫羊藿素与放射联合对肿瘤组织的生长情况的影响。结果 淫羊藿素以剂量依赖性方式抑制鼻咽癌细胞活力，增强放射对鼻咽癌细胞增殖能力的抑制作用。流式细胞术及Western blot实验显示，淫羊藿素与放射联合后促进鼻咽癌细胞ROS增多，γ-H2AX表达上调（P<0.001）。与单纯照射组相比，联合组会使鼻咽癌细胞发生G2期阻滞，CDC25C和CyclinB1表达下调，p-CDC25C表达上调（P<0.01）。联合组会促进鼻咽癌细胞发生细胞凋亡，铁死亡蛋白ACSL4表达上调而GXP4表达下调（P<0.001）。与空白组相比，其余3组的肿瘤生长速度明显减慢。与照射组相比，联合组肿瘤生长速度减慢，瘤体重量下降（P<0.001）。结论 淫羊藿素可在体内、体外均增强鼻咽癌对放射的敏感性，可能主要是通过增强细胞活性氧促进鼻咽癌细胞发生铁死亡来达到放射增敏的作用。

• 靶向结直肠癌的小白菊内酯脂质体纳米颗粒诱导程序性坏死并改善T细胞耗竭

  姚婉瑜, 汪枭睿, 杨 雨, 游俊雄, 金军国, 曾 平, 韩钦芮, 姚学清, 孙学刚, 周 瑾

  目的 研究小白菊内酯（PTL）诱导结直肠癌细胞程序性坏死，并通过调节T细胞耗竭抑制结直肠癌的发展的机制，并通过构建其靶向脂质体改进其临床应用。方法 通过CCK8 实验检测不同结直肠肿瘤细胞经PTL处理后的增殖能力。利用ROS 与LDH 检测分析PTL诱导MC38细胞死亡的方式并进行蛋白免疫印迹分析。将24只小鼠随机分成对照组（等量生理盐水）、低剂量PTL组（5 mg/kg）与高剂量PTL组（15 mg/kg），通过在小鼠腹股沟皮下注射MC38细胞构建皮下瘤模型，给药后检测各组小鼠皮下瘤的重量与CD8+ T细胞的浸润情况，分析CD8+ T细胞耗竭表型的变化。构建PTL脂质体并对其进行表征。通过在小鼠回盲部移植肿瘤构建结直肠癌原位移植瘤模型，将32只小鼠随机分成对照组（等量生理盐水）、PTL处理组（100 μg/mL）、低剂量靶向脂质体TCP-1-PTL-LNPs组（100 μg/mL）和高剂量TCP-1-PTL-LNPs组（200 μg/mL），尾静脉注射给药，通过免疫组化分析CD8在肿瘤中的表达情况。结果 多种结直肠癌细胞（SW480、DLD1、HCT116和MC38）在PTL作用下随着药物浓度梯度增加细胞活力逐渐下降。在MC38细胞中，这一效应可被抑制剂Nec-1拮抗，同时免疫蛋白印迹分析显示经PTL处理细胞出现RIP3和MLKL的磷酸化。在小鼠皮下瘤模型中，经流式细胞术分析，与对照组或低剂量组相比，高剂量PTL组出现了肿瘤CD3+ CD8+ T细胞的浸润增加（P<0.01），同时PD1hiTIM3+ T细胞比例显著增加（P<0.01），而PD1loTIM3-T细胞比例显著降低（P<0.01）。在小鼠结直肠癌原位移植瘤模型中，经过PTL治疗，免疫组化结果显示CD8表达较对照组明显增加，而使用了高浓度靶向脂质体治疗的肿瘤中CD8表达更进一步增加（P<0.01）。结论 小白菊内酯通过诱导细胞程序性坏死、增加肿瘤CD8+T细胞浸润，改善CD8+ T细胞耗竭，其靶向脂质体能提高其抗肿瘤效应。

• 二甲双胍减轻阿霉素诱导的心脏毒性：基于AMPK通路

  魏 佳, 杨 强, 林 琳, 朱参战, 魏 瑾

  目的 探究AMPK通路是否以及如何影响二甲双胍调节体内阿霉素心脏毒性的能力。方法 临床研究：以123例使用阿霉素进行阶段性化疗的髓系白血病、非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌患者为研究对象，其中80例未联用二甲双胍（对照组），43例联用二甲双胍（200 mg/d，试验组）治疗。首先对两组患者进行基线资料对比，再使用自身对照及组间对照方法，回顾分析两组患者用药前后心肌损伤指标[血浆肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平、乳酸脱氢酶（LDH）]水平及心衰相关指标[血浆B型钠尿肽（BNP）、左心室射血分数（EF）、左室短轴缩短率（FS）]等的变化。基础研究：以24只6周龄AMPKα2基因敲除小鼠（AKO）为研究对象，24只6周龄C57BL/6野生型小鼠（WT）为对照，将AKO组和WT组小鼠组内再随机分为4组，分别是对照组（Con）、二甲双胍组（MET）、阿霉素组（DOX）及二甲双胍联合阿霉素组（MET+DOX），6只/组。对上述各组小鼠行血清LDH、肌钙蛋白（I cTnI）、心肌细胞凋亡水平检测，心功能FS测定。结果 临床研究结果：两组患者化疗前血CK-MB、LDH、BNP水平及左心室EF、FS值无差别。化疗后对照组血CK-MB、LDH及BNP水平显著高于化疗前，EF及FS显著低于化疗前（P<0.05）；而试验组血CK-MB、LDH及BNP水平明显低于化疗前（P0.05）。比较两组患者化疗后上述指标发现，试验组患者化疗后血CK-MB、LDH及BNP水平明显低于对照组，EF值及FS值明显高于对照组（P<0.05）。基础研究结果：心功能检测结果显示，阿霉素单药干预可使两组小鼠FS均显著降低，但AKO组FS降低程度轻于WT组（P<0.05）；二甲双胍与阿霉素共同干预，可使WT组降低的FS有所提高（P<0.05），但对AKO组降低的FS无明显改善；血清学指标检测结果显示，阿霉素单药干预可使两组小鼠LDH和cTnI均显著升高，但AKO组升高程度轻于WT组（P<0.05）；二甲双胍与阿霉素共同干预，可使WT组小鼠升高的LDH和cTnI有所降低（P0.05）；心肌细胞凋亡水平检测结果显示，阿霉素单药干预可使两组小鼠心肌细胞凋亡水平显著升高（P<0.01），但AKO组细胞凋亡程度轻于WT组（P<0.05）。结论 阿霉素在临床应用时可能引起患者心脏毒性作用，阿霉素联合二甲双胍后在一定程度减轻了心脏毒性，AMPK可能在二甲双胍抗阿霉素心脏毒性时发挥作用。

• 甲基转移酶样3抑制剂STM2457通过调节线粒体功能改善代谢相关脂肪性肝病

  高毅男, 王培君, 逯素梅, 马万山

  目的 探讨甲基转移酶样3（METTL3）特异性抑制剂STM2457在代谢相关脂肪性肝病（MAFLD）中的作用及机制。方法 动物水平：15只SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为基础组（CD组，n=5，10%低脂饲料喂养16周）、高脂组（HFD组，n=5，60%高脂饲料喂养16周，建模MAFLD）、STM2457组（STM组，n=5，60%高脂饲料建模小鼠MAFLD后，给予STM245750 mg/kg腹腔注射2周）。斑点杂交实验（Dot-blot）检测小鼠肝组织m6A修饰水平，检测各组肝组织匀浆甘油三酯（TG）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）含量，HE染色观察小鼠肝组织形态，IPGTT和IPITT检验小鼠胰岛素抵抗程度，代谢笼实验检测代谢方式的改变，透射电镜(TEM)检测线粒体的形态。细胞生物学水平：油酸钠/棕榈酸钠作用48 h诱导建立人肝癌细胞株HepG2脂肪变性模型（FFA）。STM2457组在诱导脂肪变性的同时给予STM2457（1 μmol/L）作用48 h，通过线粒体膜电位荧光探针（JC-1）检测线粒体功能。结果 经高脂饮食诱导建立的MAFLD模型小鼠，其肝组织中m6A修饰水平升高，METT3的mRNA表达上调，与CD组比较，HFD组METT3的mRNA表达上调1.557±0.074倍（P<0.05），而在STM2457作用下，小鼠体质量显著下降且肝脏脂质沉积减少，肝组织m6A修饰水平下降，葡萄糖耐量和胰岛素敏感性升高，肝组织匀浆TG含量减少，（P<0.05），血清ALT、AST含量降低（P<0.05），。HFD组肝细胞线粒体肿胀明显，线粒体膜电位下降，STM2457作用后线粒体形态恢复正常，膜电位上升（P<0.05）。结论 METTL3抑制剂STM2457能够通过减轻高脂饮食诱导的线粒体损伤改善MAFLD。

• 莪术醇逆转胶质瘤细胞对替莫唑胺的耐药：基于调节UTX/MGMT轴

  孙江川, 邢家恒, 谭茹雪, 钱 颖, 田 男

  目的 探讨莪术醇在逆转胶质瘤原发性耐药方面的作用及其潜在机制。方法 将胶质瘤细胞分为以下主要分组：以0、10、20、40 μg/mL浓度莪术醇处理胶质瘤细胞，选择40 μg/mL莪术醇处理；通过慢病毒转染构建UTX过表达的胶质瘤细胞，空白对照组、莪术醇组（40 μg/mL）、UTX 过表达组（UTX 过表达细胞）、UTX 过表达和莪术醇联合处理组（40 μg/mL 莪术醇处理UTX过表达细胞）；空白对照组、莪术醇组（40 μg/mL）、莫唑胺（TMZ）组（10 μg/mL）、莪术醇（40 μg/mL）和TMZ（10 μg/mL）联合处理组。将16只裸鼠随机分为空白对照组、莪术醇组（20 mg/kg）、TMZ组（20 mg/kg）、莪术醇（20 mg/kg）和TMZ（20 mg/kg）联合处理组，4只/组，构建BALB/c裸鼠移植瘤模型。MTT法、细胞克隆形成实验检测细胞的活力和克隆形成能力；流式细胞术检测细胞凋亡情况（TMZ预处理10 μg/mL）；UTX活性试剂盒检测细胞内的UTX活性；ChiP-qPCR检测MGMT启动子区域的UTX、H3K27me3的富集程度；Western blot和免疫组化检测胶质瘤细胞内的蛋白表达情况。结果 莪术醇能显著抑制胶质瘤细胞的增殖能力（P<0.05，P<0.01），并促进胶质瘤细胞的凋亡（P<0.01）。莪术醇能抑制体内胶质瘤瘤体的生长增殖（P0.05）。莪术醇能显著抑制胶质瘤细胞内的UTX活性（P<0.01），增加H3K27me3的蛋白表达水平。UTX过表达细胞系的UTX活性显著升高（P<0.01），UTX蛋白表达增加且H3K27me3蛋白表达减少，UTX过表达能显著逆转莪术醇抑制胶质瘤细胞增殖并促进其凋亡的作用（P<0.01）。莪术醇能降低UTX和H3K27me3在MGMT启动子区域的富集程度（P<0.05，P<0.01）。莪术醇能降低MGMT蛋白表达水平，UTX过表达则能逆转该作用。在体内和体外实验中，莪术醇与TMZ联用均能提高胶质瘤细胞内的H3K27me3蛋白表达水平，降低下游靶基因MGMT的表达，进而增强胶质瘤细胞对TMZ的敏感性。结论 莪术醇能够通过调控UTX/MGMT轴增强胶质瘤细胞对TMZ的敏感性。

• 清络通痹方调控类风湿关节炎“免疫-骨侵蚀”的机制

  刘天阳, 周学平, 黄传兵, 周玲玲, 谌 曦, 万 磊, 纵瑞凯, 范海霞, 孙 玥, 俞志超, 汤忠富, 徐耿瑞, 周子译

  目的 观察清络通痹方对类风湿关节炎（RA）B细胞亚群、B细胞活化因子（BAFF）、骨侵蚀及骨形成指标以及核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）/核因子-κB受体活化因子（RANK）/骨保护素（OPG）信号通路的影响，探讨本方调控RA“免疫-骨侵蚀”的机制。方法 将64例RA患者随机分为对照组和研究组，32例/组，对照组口服甲氨蝶呤，研究组口服清络通痹方，两组疗程均为12周。采用流式细胞术检测RA患者外周血CD3-CD19+B细胞亚群、CD19+CD27+B细胞亚群和CD19+BAFFR+B细胞亚群百分比，ELISA法检测血清BAFF、RANKL、RANK、OPG水平，ELISA法检测RA患者治疗前后血清β胶原降解产物（β-CTX）、人抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5b）、血清骨钙素（BGP）、骨碱性磷酸酶（BALP）、Ⅰ型前胶原氨基端原肽（PINP）水平，DXEA双能X线骨密度仪测定骨密度。细胞实验：以RAW264.7细胞作为破骨细胞，分成空白组、模型组、清络通痹方低剂量组（125 μg·mL-1）、中剂量组（250 μg·mL-1）、高剂量组（500 μg·mL-1），甲氨蝶呤组（2 μg·mL-1）。干预时间为48 h。采用免疫印迹法检测RANKL、RANK、OPG、Fos原癌基因（C-FOS）蛋白表达情况。结果 RA患者B细胞与RANKL/RANK/OPG系统呈相关性，清络通痹方能下调RA患者外周血B细胞亚群百分比、血清BAFF水平，下调血清β-CTX及TRACP-5b水平，上调BGP、BALP、PINP水平，改善腰椎骨密度值（P<0.05），并与调控B细胞表达呈显著相关性（P<0.05）；该处方能下调OC中RANKL、RANK、C-FOS表达，上调OPG表达（P<0.05）。结论 清络通痹方调控RA“免疫-骨侵蚀”的机制可能为通过调控B细胞亚群百分比表达及BAFF表达水平抑制骨破坏，并进一步干预RANKL/RANK/OPG通路抑制破骨细胞分化，从而抑制骨侵蚀的发生。

• ANKRD6高表达是结肠癌不良预后的有效预测指标

  赵海远, 刘 刚, 李 阳, 杨年钊, 赵 军

  目的 探讨ANKRD6基因在结肠癌（COAD）中的表达情况以及其在结肠癌预后和治疗中的潜在作用。方法 通过免疫组化检测20例配对的结直肠腺癌组织和癌旁组织，利用实时定量PCR方法比较结肠癌细胞系和正常结肠细胞中ANKRD6基因的表达差异。通过TCGA数据库下载521例COAD患者和41例正常组织的基因表达矩阵、免疫浸润数据和临床信息，利用R软件分析ANKRD6在COAD组织中与临床病理特征的表达差异、相关基因集富集和免疫浸润情况。采用单因素和多因素Cox回归以及 Kaplan-Meier 方法评估 COAD 的预后及相关因素，并构建含 ANKRD6 的预后列线图。最后进行体外实验，通过Western blot、CCK-8实验、划痕实验和Transwell检测siANKRD6与siCtrl的COAD细胞生物学活性。结果 ANKRD6在COAD细胞系中高表达，并在恶性程度较高的COAD组织中表达上调（P<0.05）。ANKRD6的表达上调与COAD患者的不良预后（总体生存期和无病生存期）相关（P<0.05）。单因素和多因素Cox回归分析显示，高表达的ANKRD6与患者整体生存率相关（P<0.05）。在此基础上，构建了预后Nomogram，其C-index值为0.739，能有效地预测患者1年、3年和5年的生存预后因素，Calibration校准曲线、DCA曲线和ROC曲线评估该模型的准确性较高。免疫浸润分析结果显示，ANKRD6的表达与巨噬细胞等免疫浸润程度呈正相关（P<0.05），而与Th17细胞等免疫浸润程度呈负相关（P<0.05）。GOKEGG的富集分析结果显示，ANKRD6在COAD中主要富集于Wnt信号通路、血管内皮生长因子受体信号通路和钙信号通路等。体外实验显示，相对于siCtrl，siANKRD6可减弱COAD细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05）。结论 ANKRD6是COAD预后不良的有效预测指标，为COAD的诊断、治疗靶点的寻找和个体化治疗等提供了参考。

• 槲皮素诱导肝星状细胞凋亡：基于调控miR-146影响PI3K/Akt信号通路

  高晓阳, 赵晓璐, 张春艳, 颜羽昕, 金 蓉, 马月宏

  目的 探讨槲皮素（Que）通过调控肝星状细胞内miR-146水平影响PI3K/Akt信号通路诱导细胞凋亡的作用机制。方法 以大鼠肝星状细胞系（HSC-T6）为研究对象，设计实验分组：空白对照组、TGF-β组、TGF-β+Que-L（40 μmol/L）、TGF-β+Que-M（60 μmol/L）和TGF-β+Que-H（80 μmol/L）为药物治疗部分；各组阴性对照组、miR-146模拟剂（mimic）和抑制剂（inhibitor）为细胞转染部分。CCK-8法检测不同浓度的Que对细胞抑制情况，选出低、中、高3个剂量浓度用于后续细胞实验；细胞凋亡流式细胞术检测Que对HSCs细胞凋亡的影响；RT-qPCR法检测 HSC-T6细胞药物治疗以及细胞转染后miR-146、α-SMA、CollagenⅠ、TRAF6、PI3K和Akt mRNA表达情况；Western blot法检测以上各组中α-SMA、CollagenⅠ、TRAF6、PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达情况；免疫荧光实验检测HSC-T6细胞药物治疗中α-SMA、CollagenⅠ蛋白表达强弱。结果 CCK-8实验结果显示，相同时间不同浓度时，与Control组相比，随着药物浓度的递增，细胞A450 nm值显著降低（P<0.05）；相同浓度不同时间比较，发现药物浓度在40、60、80 μmol/L时细胞A450 nm值间的差异最为显著。流式细胞术检测结果显示，Que各给药组总细胞凋亡率均显著升高（P<0.01）。Que对HSC-T6细胞的作用结果显示，与Control组相比，TGF-β组α-SMA、CollagenⅠ、TRAF6、PI3K和Akt的mRNA和蛋白表达水平显著升高（P<0.05）；与TGF-β相比，Que各治疗组α-SMA、CollagenⅠ、TRAF6、PI3K、Akt的mRNA和蛋白表达水平显著下调（P<0.05）。免疫荧光实验显示Que能显著减弱TGF-β组中α-SMA、CollagenⅠ蛋白的荧光强度。Que显著上调HSC-T6细胞中miR-146表达（P<0.01）；与各自阴性对照组相比，miR-146 mimic显著降低α-SMA、CollagenⅠ、TRAF6、PI3K、Akt的mRNA和蛋白表达水平（P<0.05），而miR-146 inhibitor使上述指标mRNA和蛋白表达水平显著逆转（P<0.05）。结论 Que通过上调miR-146影响PI3K/Akt信号通路来抑制HSCs增殖，促进其凋亡。

• 高表达RAB7A通过促进肿瘤侵袭影响胃癌患者的预后

  张 敏, 刘生宝, 张 诺, 张文静, 夏勇生, 宋 雪, 张小凤, 左芦根, 李 静, 胡建国

  目的 探讨Ras相关蛋白7A（RAB7A）在胃癌组织中的表达对预后的影响及其作用机制。方法 基于癌症公共数据库和本院接受胃癌根治术的104例患者，分析RAB7A在胃癌及癌旁组织中表达的差异以及其与患者临床病理学参数和预后的关系；采用生物信息学富集分析预测RAB7A影响胃癌侵袭途径的作用和机制；通过慢病毒转染获得过表达和低表达RAB7A的胃癌细胞系（MGC803），采用免疫印迹、划痕及Transwell实验探究RAB7A对ECM降解的影响以及RAB7A对胃癌细胞迁移、侵袭的作用和机制。结果 癌症公共数据库分析显示胃癌组织中RAB7A的表达高于正常对照组，且负面影响患者生存期（P<0.01）。本院患者数据显示，胃癌组织中RAB7A的表达高于癌旁组织（P<0.01），且与外周血胚抗原、糖类抗原19-9水平正相关（P<0.001）。单因素结合Cox多因素分析显示，RAB7A高表达是影响胃癌5年生存率的独立危险因素（HR：2.882；95% CI：1.459~5.693）；ROC曲线分析显示，以RAB7A相对表达量2.625为截断值，其预测患者术后5年死亡的敏感性为84.62%，特异性为71.15%。生物信息学富集分析显示，RAB7A参与了胃癌组织ECM降解和PI3K/AKT信号激活；体外实验证实，过表达RAB7A可激活胃癌细胞PI3K/AKT信号（P<0.01），增强基质金属蛋白酶（MMP-2和MMP-9）表达（P<0.01），以及胃癌细胞迁移和侵袭能力（P<0.01）。结论 RAB7A在胃癌组织中高表达并影响患者预后，其作用和激活胃癌PI3K/AKT信号并促进ECM降解和肿瘤侵袭有关。

• β-羟基丁酸抑制肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用机制

  黄云龙, 朱玉峰, 石 瑾, 刘 蓉, 曾 婷, 韩良辅

  目的 探究β-羟基丁酸（BHB）对肺腺癌细胞（A549细胞、LLC细胞）的作用及其调控机制。方法 分别用0 mmol/L（PBS）、5 mmol/L、10 mmol/L的BHB处理人肺腺癌A549细胞和LLC细胞，用CCK-8、EdU染色、细胞划痕和transwell实验检测细胞的活性、增殖、迁移和侵袭。GEPIA在线分析GPR109A在正常和肺腺癌样本之间的表达差异。RT-PCR和Western blot检测不同剂量BHB处理对GPR109A表达的影响。敲低GPR109A后观察A549细胞和LLC细胞对BHB的反应，探究GPR109A是否参与介导BHB的抑癌作用。在裸鼠和Balb/c小鼠右腋皮下分别接种A549细胞、LLC细胞及相应系的GPR109A敲低细胞，给予BHB或等体积无菌水灌胃21 d，观察肿瘤生长情况。结果 BHB以浓度依赖方式抑制A549细胞和LLC细胞的活性、增殖、迁移和侵袭（P<0.05）。GEPIA在线分析发现GPR109A在肺腺癌病人中表达下调，且体外验证发现GPR109A的mRNA表达量和蛋白表达量随BHB浓度升高而上升（P<0.05）。BHB对A549细胞和LLC细胞的抑制作用是由GPR109A部分介导，体内实验结果进一步显示BHB可通过介导GPR109A的表达来抑制裸鼠和balb/c小鼠体内肿瘤的生长（P<0.05）。结论 BHB可部分介导GPR109A的表达来抑制肺腺癌细胞的恶性行为，并抑制小鼠体内的肿瘤生长。

• 铅暴露加重Aβ1-42处理的小胶质细胞活化和小胶质细胞中的铜离子蓄积

  陈丽旋, 黄定帮, 郑 刚, 孟晓静

  目的 探讨铜离子在铅（Pb）加重Aβ1-42处理的小胶质细胞活化及神经元损伤中的作用，以揭示铅加重阿尔兹海默症（AD）样变的调控机制。方法 将BV2细胞分为Control组（不予任何处理）、Aβ1-42组（5、10、15、20 μmol/L Aβ1-42处理12 h）、Pb组（5、10、15、20 μmol/L Pb处理12 h）和Aβ1-42+Pb组（10 μmol/L Aβ1-42+10 μmol/L Pb处理12 h）。CCK8检测细胞活力，相差显微镜观察细胞形态学改变，细胞免疫荧光检测iNOS释放及氧化应激情况，ELISA检测小胶质细胞的炎性因子释放情况，Western blot检测CTR1和ATP7A蛋白表达量，ICP-MS检测细胞铜含量。结果 15 μmol/L和20 μmol/L的 Aβ1-42处理BV2细胞12 h可降低其生长活力（P<0.05和P<0.01）；与对照组相比，10 μmol/L Aβ1-42处理BV2细胞12 h可引起iNOS、炎性因子TNF-α和IL-6释放增加（P<0.05）；10 μmol/L Aβ1-42联合15 μmol/L和20 μmol/L的铅处理BV2细胞可影响其生长活力（P<0.05）；与10 μmol/LAβ1-42单独处理组相比，10 μmol/L 铅与10 μmol/L Aβ1-42联合处理BV2细胞12h可使激活的小胶质细胞增多，具体表现为BV2细胞形态呈现胞体增大、突起增多且细长，iNOS、炎性因子TNF-α和IL-6、IL-1β释放增加（P<0.05），细胞ROS释放增多，细胞内铜离子蓄积（P<0.001），铜转运蛋白CTR1表达水平上升（P<0.05）；BV2细胞的激活明显降低了海马神经元HT22细胞生长活力（P<0.001）；与Aβ1-42+Pb组相比，在使用抗氧化剂NAC和铜螯合剂TM后，激活的小胶质细胞減少，且对神经元细胞的生长活力损伤有所减轻（P<0.05）。结论 铅暴露加重了Aβ1-42处理的小胶质细胞造成的神经元损伤，与铅加重Aβ1-42处理的小胶质细胞铜离子蓄积，氧化应激，炎性因子释放增加，引发小胶质细胞活化有关。

• LncRNA LINC00342通过靶向 miR-596 促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭

  辛宝山, 刘 刚, 张成雄, 汪 兵, 史良会

  目的 研究LINC00342在胃癌组织、细胞中的表达水平及影响胃癌细胞生物学功能的具体通路。方法 运用生物信息学技术，通过GEO数据库及相关预测软件，进行相关筛选及文献查询后，确定所研究的LncRNA及其下游所调控的miRNA；采用qRT-PCR检测LINC00342、miR-596在胃癌细胞系及人胃黏膜细胞中、胃癌组织及相应癌旁组织中的表达差异；细胞生物学功能上，过表达胃癌BGC-823细胞系中的LINC00342 ，将其分为pcDNA-LINC00342组和pcDNA组；过表达胃癌MGC-803细胞系中的miR-596，将其分为miR-596-mimic组及mimic-NC组；敲低胃癌MGC-803 细胞系中LINC00342的表达，将其分为si-LINC00342组及si-NC组、敲低胃癌BGC-823细胞系中miR-596的表达，将其分为miR-596-inhibitor组及inhibitor-NC组；分别进行 CCK-8、Edu细胞增殖实验、划痕实验、Transwell细胞侵袭实验、细胞周期实验以验证LINC00342 及 miR-596对胃癌细胞功能的影响 ；双荧光素酶标记实验验证LINC00342与miR-596的靶向调控关系。结果 通过生物信息学技术及相关软件预测分析，确定所研究LncRNA为 LINC00342，预测其下游调控的miRNA为miR-596；LINC00342在胃癌组织中表达高于癌旁组织（P<0.05）；在人胃癌细胞系中表达高于人胃黏膜细胞系（P<0.05），miR-596则相反（P均<0.05）；在胃癌细胞中，LINC00342 的过表达能促进胃癌细胞的增殖（P<0.05）、迁移（P<0.01）和侵袭（P<0.001），且减少处于G0/G1期的细胞比率（P<0.01）；LINC00342敲低后，胃癌细胞的增殖（P<0.05）、迁移（P<0.01）和侵袭（P<0.001）则受抑制，增加处于G0/G1期的细胞比率（P<0.01）；miR-596则发挥着相反的作用。LINC00342和miR-596能特异性结合（P=0.0067）。结论 在胃癌细胞中，LINC00342通过调控miR-596，促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

• 丙泊酚诱导新生大鼠少突胶质细胞的凋亡：基于激活caspase家族蛋白和抑制抗凋亡程序

  纪雪霞, 朱 毅, 张登文, 蔡宇晶, 周国斌

  目的 探讨丙泊酚诱导少突胶质细胞凋亡的分子机制。方法 采用随机数字表法将45只7 d SD乳鼠分为对照组（n=15）、脂肪乳剂组（n=15）和50 mg/kg丙泊酚组（n=15）。单次腹腔注射丙泊酚，0.4 mL/只（体积不足者用生理盐水补齐）。对照组和脂肪乳剂组腹腔注射等体积的生理盐水和中长链脂肪乳。丙泊酚腹腔注射麻醉8 h后，采用qPCR和Western blot检测不同组别caspase-3、caspase-8、caspase-9 mRNA和蛋白表达水平；检测NGF mRNA和P-PI3K/P-PAkt表达水平。结果 与对照组相比，丙泊酚组 caspase-3、caspase-8、caspase-9 mRNA 和蛋白表达水平升高（P<0.05）；NGF mRNA 和 P-PI3K/P-PAkt 表达水平降低（P<0.05）。结论 丙泊酚通过激活凋亡程序中caspase家族蛋白成员和抑制抗凋亡程序，诱导少突胶质细胞的凋亡。

• 大黄素对胶原诱导性关节炎大鼠的骨保护作用:基于抑制铁死亡和降解基质金属蛋白酶

  周思聪, 杨 威, 曾 丽, 曹春浩, 袁 速, 荣晓凤

  目的 探讨大黄素对类风湿关节炎（RA）铁死亡相关信号通路介导的骨保护作用机制。方法 除正常组外，使用200 μL不完全弗氏佐剂乳化的牛二型胶原构建胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠的类风湿关节炎模型。21 d后分为正常组（Normal）、模型组（Model）、甲氨蝶呤组（MTX，0.2 mg/kg，3 次/周）、大黄素（Emo）高（80 mg·kg-1·d-1）、低（40 mg·kg-1·d-1）剂量组，10只/组。记录大鼠造模之后的关节炎评分和足趾体积；使用丙二醛（MDA）试剂盒检测组织MDA含量；用番红固绿染色法、苏木精-伊红染色法对踝关节石蜡切片进行染色，光镜下观察大鼠踝关节组织形态学改变；用免疫组织化学法对踝关节切片的基质金属蛋白酶（MMP）3、13进行染色，光镜下观察大鼠踝关节MMPs的表达；Western blot法检测大鼠踝关节组织中长链酯酰辅酶A合成酶4（ACSL4）、溶质载体家族7成员11（SLC7A11）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、铁蛋白重链1（FTH1）的蛋白质含量。结果 与正常组相比，模型组大鼠的关节炎评分指数、足趾肿胀度增高（P<0.05）；软骨表面粗糙，软骨细胞丢失、排列杂乱稀疏；MDA含量和ACSL4的蛋白质含量升高，SLC7A11、GPX4、FTH1的含量降低（P<0.05）；踝关节MMP3和MMP13的表达量升高；与模型组相比，MTX组和大黄素（40 mg/kg、80 mg/kg）组的关节炎评分指数、足趾肿胀度降低（P<0.05），软骨表面相对光滑平整，软骨细胞排列整齐，MDA含量升高（P<0.05）；MTX组和大黄素高剂量组ACSL4的蛋白质含量降低，SLC7A11、GPX4、FTH1的含量升高（P<0.05）。结论 大黄素能有效控制CIA大鼠关节炎症、改善关节骨侵蚀。调节铁死亡相关信号通路ACSL4、SLC7A11、GPX4、FTH1的含量，降低MMP3和MMP13的表达,可能是其抑制RA骨破坏的重要机制和途径之一。

• HIF-1α活化介导的胆固醇稳态失调加速大鼠的糖尿病肾病进展

  王 影, 周明俊, 朱倩文, 张 翠, 王 林, 李 曙, 胡泽波

  目的 探讨糖尿病慢性缺氧时缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）激活在糖尿病肾病（DN）胆固醇稳态失调中的作用及机制。方法 将SD大鼠随机分为3组，10只/组：对照组、糖尿病组（DM）、YC-1干预组（DM+YC-1）。DM和DM+YC-1组大鼠接受60 mg/kg链脲佐菌素单次腹腔注射构建糖尿病模型，对照组大鼠接受等量柠檬酸缓冲液腹腔注射。体外研究中，应用氯化钴（CoCl2，100 μmol/L）刺激有或无葡萄糖（30 mmol/L）条件下培养的人近端小管上皮细胞HK-2细胞24 h。采用24 h尿蛋白定量评估各组大鼠肾损伤情况，过碘酸-雪夫染色观察各组大鼠肾小管病理学损伤；总胆固醇定量检测及Filipin染色观察肾组织及HK-2细胞中胆固醇沉积情况；Western blotting、免疫组织化学染色检测大鼠肾组织HIF-1α的蛋白表达、细胞免疫荧光检测HK-2细胞中HIF-1α的表达情况，检测大鼠肾组织及HK-2细胞中胆固醇代谢相关分子3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMGCR）、低密度脂蛋白受体（LDLr）、CXC型趋化因子配体16（CXCL16）和纤维化相关分子转化生长因子-β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）的蛋白表达。结果 与对照组相比，DM组大鼠24 h尿蛋白水平升高（P<0.001），肾小管损伤加重，且肾脏胆固醇含量升高（P<0.05）并伴有肾小管HIF-1α蛋白表达升高（P<0.01），而YC-1干预可降低糖尿病大鼠24 h尿蛋白水平（P<0.05）、明显减轻肾小管损伤、降低肾总胆固醇含量（P<0.05）。体外研究中，氯化钴有效诱导HIF-1α表达（P<0.0001）且显著增加HK-2细胞中的胆固醇含量（P<0.05），同时上调胆固醇代谢相关蛋白HMGCR、LDLr、CXCL16以及纤维化因子TGF-β1、CTGF的表达（P<0.01，P<0.05）。与细胞实验结果相一致，YC-1干预可下调糖尿病大鼠肾小管胆固醇代谢相关蛋白的表达，也减少纤维化因子TGF-β1（P<0.001）和CTGF（P<0.05）的表达。结论 HIF-1α活化可通过增加胆固醇从头合成、摄取介导肾小管上皮细胞胆固醇稳态失调，加重细胞脂质沉积和损伤，促进DN进展。

• 低强度脉冲超声抑制脓毒症大鼠脾脏淋巴细胞的凋亡

  唐文韬, 邓 娟, 贺思程, 李君粉, 周艺情, 王 嫣

  目的 探讨低强度脉冲超声（LIPUS）对脓毒症SD大鼠脾脏淋巴细胞凋亡的抑制效应及可能机制。方法 通过盲肠结扎穿刺术建立脓毒症SD大鼠模型，将78只雌性SD大鼠随机分为超声组（LIPUS，n=26）、盲肠结扎穿刺组（CLP，n=26）和假手术组（Sham，n=26）。超声参数如下：声强200 mW/cm2，辐照时间20 min，频率0.37 MHz。观察各组大鼠术后72 h内的存活情况；苏木精-伊红染色法观察脾脏淋巴细胞的数量变化；脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法和流式细胞术检测脾脏淋巴细胞凋亡情况；免疫组化、蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR检测线粒体凋亡通路B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和半胱氨酸蛋白酶3（Caspase 3）的蛋白及mRNA的表达水平。结果 Sham组72 h内全部存活，LIPUS组的存活率显著高于CLP组（P<0.05）；与CLP组相比，LIPUS组脾脏淋巴细胞凋亡率显著降低（P<0.05），Bcl-2的蛋白及mRNA表达水平显著升高（P<0.05），Bax及Caspase 3的蛋白及mRNA表达水平显著降低（P<0.05）。 结论 LIPUS可能通过调节线粒体通路上的关键分子（Bcl-2、Bax及Caspase 3）抑制脓毒症SD大鼠脾脏淋巴细胞凋亡，提高其72 h内存活率、延长存活时间。

• 高同型半胱氨酸通过Notch1/Hes1信号通路促进HT22细胞自噬和凋亡

  张竞文, 何 静, 米晓娟, 许贤瑞, 田 英, 燕 茹

  目的 探讨高同型半胱氨酸（HHcy）引起神经细胞损伤的相关机制。方法 采用HT22细胞，分为空白对照组（简称0组），高同型半胱氨酸组（Hcy 100 μmol/L，简称100组），高同型半胱氨酸维生素B干预组（Hcy 100 μmol/L +叶酸+维生素B12，简称100+fv组），空白对照+叶酸+维生素B12组（简称0+fv组）。通过透射电镜和流式细胞术观察自噬及凋亡；Western blotting、Real-time PCR 检测Hes1、Hes5、Notch1、Jagged1、Bcl-2、Bax、P62、LC3II/LC3I表达。结果 培养48 h后，高同型半胱氨酸组（100组）中死亡细胞明显增加（P<0.05）。流式细胞检测结果显示，高同型半胱氨酸组凋亡细胞比例均高于0组、100+fv组和0+fv组（P<0.05）。透射电镜观察显示，在高同型半胱氨酸组，线粒体肿胀、空泡化，自噬体增加。Western blot显示，在高同型半胱氨酸组，Bax/Bcl-2比值明显高于对照组和100+fv组（P<0.05）；P62相对值明显低于对照组（P<0.05）；LC3II/LC3I比值明显高于对照组和100+fv组（P<0.05）；HES1、HES5、Notch1和Jagged1蛋白表达明显低于对照组（P<0.05）。Real-time PCR 检测结果显示，在高同型半胱氨酸组，LC3 mRNA、Beclin1 mRNA明显高于对照组和100+fv组，P62mRNA明显低于100+fv组（P<0.05）；Hes1mRNA和Hes5 mRNA明显低于对照组、100+fv组和0+fv组（P0.05）。结论 高同型半胱氨酸能诱导HT22细胞自噬和凋亡增加，伴有Hes1和Jagged1基因表达下调。

• 转录组测序鉴定兔移植静脉桥血管再狭窄相关基因

  周海深, 杨利博, 谢 诗, 杨家明, 张家庆

  目的 使用转录组测序技术鉴定兔移植静脉桥血管再狭窄相关的基因。方法 选取40只实验用新西兰兔，分为实验组、对照组，上述两组再分为2周组和4周组，10只/组。实验组将兔左侧颈外静脉移植至左颈总动脉上，分别于2周、4周时取下桥血管标本，对不同组别标本进行病理学检查，观察血管内膜、中膜厚度，血管平滑肌细胞的增殖情况；对照组不做手术处理，2周或4周后取出左侧颈外静脉。之后使用转录组测序技术对术后4周的移植血管进行检测，与对照组对比，寻找差异表达的基因，并利用GO数据库及KEGG数据库对表达差异的基因进行筛选分析。结果 术后2周桥血管病理提示：内膜及中膜增厚，血管平滑肌细胞增殖，术后4周时，上述改变进一步加重。与对照组静脉相比，术后4周的移植静脉标本明显上调基因1583个，下调608个。用GO以及KEGG数据库分析筛选出前10个处于中心位置基因分别为CD4、ZAP70、SYK、CD28、PIK3CD、CXCR4、CCR5、ITK、CCL5、BTK。结论 CD4、ZAP70、SYK、CD28、PIK3CD、CXCR4、CCR5、ITK、CCL5和BTK可能是引起兔静脉桥血管再狭窄的基因。

• 丙泊酚对不同发育时期斑马鱼鞘磷脂蛋白表达的影响

  郭志华, 王志鹏, 曾琳玲, 纪雪霞

  目的 探讨丙泊酚对斑马鱼鞘磷脂蛋白（MBP）表达的影响及相关机制。方法 将受精后6~48 h胚胎（共180个）采用随机数字表法分别浸泡于新鲜养鱼水（对照组）、含二甲基亚砜养鱼水（二甲基亚砜组）和含30 μg/mL丙泊酚养鱼水（丙泊酚组）中，每组60个胚胎。于受精后3、4、5、6、7、10 d收集幼鱼，通过RT-qPCR法和Western blot法检测不同发育时期mbp mRNA及蛋白表达。采用TUNEL、免疫荧光法检测3 d少突胶质细胞的凋亡情况。采用RT-qPCR和Western blot法检测凋亡相关因子caspase-8、caspase-9和caspase-3的表达。结果 与对照组相比，丙泊酚组出生后3~7 d幼鱼mbp mRNA和蛋白表达均降低（P<0.05）；丙泊酚组少突胶质细胞凋亡增多，并伴随caspase-8、caspase-9和caspase-3 mRNA和蛋白的表达上调。结论 丙泊酚抑制MBP表达具有短期持续性，其机制可能与少突胶质细胞凋亡相关。

• 二甲双胍缓解小鼠放射性皮炎引起的病理性疼痛：基于抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路

  曹 静, 刘海波, 安 琪, 韩 枫

  目的 探讨二甲双胍（Met）对放射性皮炎病理性疼痛的治疗作用及其可能机制。方法 将32只SPF级雄性ICR小鼠随机分为4组，即正常对照组（Control组）、放射性皮炎模型组（Model组）、二甲双胍干预组（Met组）及阳性药物加巴喷丁组（GBP组），8只/组。小鼠模型制备成功后，Met组小鼠采用腹腔注射方式给药，每次剂量为200 mg/(kg·d)，连续给药16 d，GBP组加巴喷丁灌胃[100 mg/(kg·d)]，连续灌胃16 d，Control组及Model组小鼠腹腔内注射与二甲双胍组等体积生理盐水。末次给药后评估各组小鼠放射性皮炎分级情况；分别于建模前及建模后第1、4、8、12、16天观察并记录各组小鼠建模侧（右侧）后足机械缩足反射阈值（MWT）和热缩足反射潜伏期（TWL）；Western blot检测脊髓L4~L6节段p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、核转录因子-κB p65（NF-κB p65）、磷酸化（p）-p38MAPK、磷酸化（p）-NF-κB p65蛋白表达。ELISA检测脊髓组织中白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。结果 与Control组相比，Model组、Met组及GBP组小鼠右后足表现出明显的放射性皮炎症状（P<0.05）；与Model组及GBP组相比，Met组放射性皮炎症状减轻（P<0.05）。与Control组相比，Model组小鼠MWT和TWL降低（P<0.05）；与Model组比较，Met组及GBP组MWT和TWL明显提高（P<0.05）。与Model组相比，Met组小鼠脊髓组织中 p-p38MAPK及p-NF-κB p65 蛋白表达降低（P<0.05），其炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平也明显降低（P<0.05）。结论 二甲双胍可缓解放射性皮炎小鼠的病理性疼痛症状，且该作用可能是通过抑制p38MAPK/NF-κB信号通路的活化实现的。

• 驱动压指导的肺保护性通气策略对COVID-19感染康复期患者术后发生肺部并发症的影响

  江连祥, 陈文胜, 余 伟, 胡美珠, 曹 亚, 姚卫东, 陈永权

  目的 探究驱动压指导的肺保护性通气策略（LPVS）预防新冠感染康复期患者术后肺部并发症（PPCs）的价值，为优化术中呼吸管理提供临床依据。方法 选择2022年12月~2023年2月经历新冠病毒感染，年龄≥18岁，ASA I~III级，择期在全身麻醉下行非心脏手术患者118例，采用计算机随机分为两组（每组59例）。LPVS组设VT为6 mL/kg，呼气末正压（PEEP）采用驱动压指导个体化滴定，每隔30 min进行1次肺复张；对照组采取常规机械通气。主要比较两组患者PPCs和低氧血症的发生风险，肺部超声评分等结局指标。结果 两组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05）。LPVS组患者PPCs发生率（16.95% vs 35.59%，χ2=5.294，P=0.021）、低氧血症发生率（15.25% vs 30.51%，χ2=3.890，P=0.049）及肺部超声评分（5.31±1.07 vs 8.32±2.34，t=8.986，P<0.001）均低于对照组；LPVS组患者PEEP值、气道压及平台压高于对照组（P<0.05），驱动压和潮气量低于对照组（P<0.05）。结论 驱动压指导的肺保护性通气策略可改善新冠感染康复患者氧合，降低术后肺部并发症发生风险。

• 乳腺手术的关键操作细节标准：广东省医疗行业协会专家共识

  广东省医疗行业协会乳腺病整形修复管理分会

  目的 通过解决临床实践中的有争议或有临床意义的手术相关问题，建立行业技术标准并改善乳腺癌手术实践。方法 85名擅长乳腺癌保乳手术、整形保乳术和乳房重建手术的乳腺外科医生参与了本共识的建立。通过组织3次会议最终达成本共识。第1次会议专家组提出并制定了相关投票议题，第2次会议进行了相关议题的现有证据展示以及初步投票，第3次会议则根据投票结果明确了共识的首选推荐议题以及对部分有争议的议题展开了讨论。本共识标准要求只有当超过70%的专家一致同意时才能定义为达成共识。结果 专家组提出并设定了57个议题作为投票题目，从中达成11个首选推荐手术标准，1个为可考虑推荐的手术标准。首选推荐手术标准涵盖了包括乳腺癌保乳手术、乳房切除术、乳房重建手术、叶状肿瘤手术治疗等方面的手术细节。专家组对未达成共识的议题也进行了讨论，其主要观点收录于本文讨论部分。结论 首选推荐手术标准有助于为临床实际工作提供指引。