南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2022年第11期

• 过表达miR-607通过下调TRPC5表达抑制肝细胞癌的生长和转移

  李 超, 陈双江, 姜业臻

  目的 研究miR-607异常表达在肝细胞癌（HCC）中的临床意义及对肝癌细胞生长转移的影响。方法 荧光定量PCR检测45对HCC及癌旁组织中miR-607表达，分析miR-607表达与患者临床病理特征间的相关性。通过转染miR-607 mimics提高HCC细胞（Huh-7和HCCLM3）内miR-607的表达水平。采用CCK-8、流式细胞仪、划痕愈合实验及transwell小室模型分别检测过表达miR-607对HCC细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因系统检测miR-607是否与潜在靶点TRPC5的mRNA 3'-非翻译区直接结合。Western blot检测过表达miR-607对HCC细胞内TRPC5、CCND1、MMP2表达及Akt磷酸化的影响。结果 MiR-607在HCC组织及HCC细胞中的表达水平均降低（P5 cm、血管侵犯及较晚TNM分期（III+IV）密切相关（P<0.05）。过表达miR-607抑制HCC细胞增殖、迁移、侵袭并诱导细胞凋亡（P<0.05）。双荧光素酶报告基因系统证实 miR-607 与 TRPC5 mRNA 3'-非翻译区直接结合（P<0.05）。过表达 miR-607 抑制HCC细胞内TRPC5、CCND1及MMP2表达并下调Akt的磷酸化水平（P<0.05）。结论 miR-607低表达与肝细胞癌恶性临床特征密切相关，miR-607可能通过下调TRPC5表达进而抑制Akt通路激活来发挥抗HCC生长转移作用。

• CBL通过泛素化降解NCK2抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭

  宋筱羽, 肖 斌, 陆景润, 张文武, 李锦潮, 竹 昕, 孙朝晖, 李林海

  目的 阐明Casitas B系淋巴瘤（CBL）蛋白对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响并探讨其作用机制。方法 乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF7常规培养，实验分为NC组、过表达CBL组和siNC组、siCBL组，采用克隆形成法和细胞计数试剂盒-8（CCK-8）、伤口愈合实验、Transwell实验检测过表达（沉默）CBL对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响；流式细胞术和Western blot验证CBL对乳腺癌细胞周期进程、细胞周期标志物和上皮-间充质转化（EMT）的影响；罗丹明标记的鬼笔环肽染色细胞骨架观察CBL对细胞丝状伪足数量的影响。采用IP-质谱法筛选CBL的相互作用蛋白并确定NCK2为研究对象。实验分为CBL组、NCK2组、CBL+NCK2组，通过免疫共沉淀（IP）和免疫荧光共定位实验验证CBL与NCK2蛋白互作情况。通过环己酰亚胺追踪实验和泛素化实验检测CBL对NCK2蛋白稳定性和泛素化的影响。采用CCK-8和Transwell实验检测NCK2对CBL介导的乳腺癌细胞增殖及迁移能力的影响。结果 过表达CBL组的细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低（P<0.05）；沉默CBL组的细胞增殖、迁移、侵袭能力显著增加（P<0.01）。沉默CBL促进MCF7细胞周期G1/S转换（P<0.05）。过表达CBL下调乳腺癌细胞周期相关蛋白 CDK2/4（P<0.01）、Cyclin A2/B1/D1/D3/E2（P<0.05）、EMT 相关蛋白 Snail、N-Cadherin、Claudin-1（P<0.05），同时上调E-Cadherin（P<0.05）；沉默CBL上调乳腺癌细胞周期相关蛋白CDK2/4/6（P<0.05）、Cyclin A2/B1/D1/D3/E2（P<0.05），EMT相关蛋白Snail、Vimentin、Claudin-1（P<0.05），同时下调E-Cadherin（P<0.05）。过表达CBL使乳腺癌细胞系MDA-MB-231中丝状伪足数量减少；沉默CBL使乳腺癌细胞系MCF7中丝状伪足数量增加。NCK2与CBL相互作用。过表达CBL抑制NCK2蛋白稳定性（P<0.05），并促进其泛素降解（P<0.01）。过表达NCK2能够逆转CBL介导的乳腺癌细胞增殖和迁移的抑制作用（P<0.01）。结论 CBL可通过泛素化降解NCK2抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

• Aumolertinib可体内外抑制人脉络膜黑色素瘤MUM-2B细胞的增殖

  李 娟, 王爱莲, 李 宁, 祝英泽, 李 坤, 刘 浩, 高自清

  目的 评估新型第3代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂Aumolertinib对人脉络膜黑色素瘤MUM-2B细胞增殖的影响，探索Aumolertinib在眼科肿瘤治疗中的应用潜力。方法 不同浓度Aumolertinib（0、2、4、6、8、10 μmol/L）处理MUM-2B细胞。用CCK-8法检测Aumolertinib对MUM-2B细胞存活率的影响；细胞集落克隆形成实验检测Aumolertinib对MUM-2B细胞的增殖抑制作用；利用流式细胞分析技术检测Aumolertinib对MUM-2B细胞凋亡坏死、线粒体膜电位、活性氧、细胞周期分布的影响；建立人脉络膜黑色素瘤细胞MUM-2B裸鼠荷瘤模型，设置空白组，给药组（40 mg/kg），考察Aumolertinib在体内的抗肿瘤活性。结果 CCK-8和细胞集落克隆形成实验的结果表明，Aumolertinib显著抑制MUM-2B细胞的增殖，并呈浓度依赖性。凋亡坏死分析结果显示，当Aumolertinib浓度增加到8 μmol/L时，MUM-2B细胞的总凋亡率可达到76.65%。同时，MUM-2B细胞内ROS水平也随Aumolertinib浓度增加显著增多。此外，Aumolertinib能够有效降低MUM-2B细胞的线粒体膜电位，诱导MUM-2B细胞发生G1期周期停滞。体内研究表明，Aumolertinib有效抑制肿瘤增长，而不会使动物体质量明显减轻。结论 Aumolertinib对人脉络膜黑色素瘤MUM-2B细胞在体外、体内试验中均发挥有效的抗肿瘤作用，在脉络膜黑色素瘤的治疗方面 具有潜在用途。

• Fkbp38基因缺失导致小鼠早发性卵巢功能不全：基于激活mTOR通路并诱导细胞凋亡

  周玉霞, 赵茴茴, 帅 领, 佘加杰, 刁瑞英, 汪丽萍

  目的 探讨他克莫司结合蛋白38（Fkbp38）在卵泡发育中的作用及其缺失导致早发性卵巢功能不全（POI）的机制。方法 采用Cre-loxp系统构建卵母细胞特异性敲除Fkbp38转基因小鼠，并应用PCR鉴定小鼠基因型，然后在蛋白水平上验证Fkbp38在卵母细胞中的敲除效果。通过HE染色在显微镜下计数敲除小鼠与同窝对照小鼠卵巢原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡及窦卵泡数量分析卵母细胞缺失Fkbp38基因对小鼠卵泡发育的影响。通过繁殖实验及ELISA实验检测小鼠繁殖能力及血清性激素水平，明确卵母细胞敲除Fkbp38基因对卵巢功能的影响。TUNEL法检测敲除小鼠与同窝对照小鼠卵巢颗粒细胞凋亡情况。检测雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路下游靶蛋白磷酸化核糖体S6（PS6）活性验证Fkbp38基因对mTOR信号通路的影响。IF检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）及Bcl2-Associated X（BAX）表达明确Fkbp38基因敲除对卵母细胞发育的影响。结果 卵母细胞特异性敲除Fkbp38转基因小鼠模型构建成功。敲除小鼠较对照小鼠表现出生育力下降，性激素水平紊乱，卵巢内原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡数均显著减少（P<0.05），引起POI样改变。卵母细胞特异性敲除Fkbp38基因后，mTOR信号通路激活，颗粒细胞凋亡增加，卵母细胞内BAX蛋白表达增强，Bcl-2蛋白表达减弱，BAX/Bcl-2蛋白比值显著升高（P<0.05）。结论 Fkbp38在卵泡发育中发挥重要作用，其缺失致POI发生的机制可能是通过激活mTOR信号通路诱导细胞凋亡而引起的。

• 甲状腺99mTcO4-显像ROI比值的作用：估算个体化治疗甲亢的131I剂量

  齐永帅, 池晓华, 江 英, 黄 凯, 刘 峰, 刘智维, 唐刚华, 李贵平

  目的 探讨甲状腺99mTcO4-显像ROI比值代替24 h 摄碘率(RAIU)个体化治疗甲亢的可行性。方法 回顾性分析2019年1~6月在南方医科大学南方医院核医学科进行131I治疗132例患者的临床资料，根据患者3 h/24 h RAIU峰值比是否前移分为高峰前移组（≥80%）和无高峰前移组（0.05）；ROC曲线分析治疗3月后ROI比值预测甲亢复发、甲减最佳临界值分别约15.79、6.33。结论 甲状腺99mTcO4-显像ROI比值可用于个体化治疗甲亢计算131I剂量，该方法有助于患者的协助诊治，可以判断预后。

• 敲低galectin-1可抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭并促进其凋亡

  陈文邦, 朱 潇, 周 少, 杏福宝, 唐 震, 李小军, 张 雷

  目的 探讨半乳糖凝集素-1（galectin-1）对肺腺癌细胞的影响及其机制。方法 收集并比较肺腺癌组织和癌旁正常组织galectin-1的表达水平。qRT-PCR法检测肺腺癌细胞系A549、H1299与正常支气管上皮细胞细胞BEAS-2b中galectin-1的表达差异。通过si-RNA敲低galectin-1，分为对照组和si-RNA组，对照组转染同剂量NC-siRNA片段。通过qRT-PCR和Westernblot检测galectin-1mRNA和蛋白水平的表达情况。CCK8、Transwell实验、划痕实验和流式细胞术检测敲低galectin-1后对肺腺癌细胞增殖能力、侵袭和迁移能力和细胞凋亡的情况。Western blot检测敲低galectin-1后凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、Caspase3等蛋白和AKT、ERK二条通路蛋白的相对表达情况。结果 galectin-1的mRNA在肺癌组织和肺腺癌细胞株中表达量明显升高（P<0.05）。抑制galectin-1表达后，细胞增殖、迁移和侵袭等下降，凋亡率明显升高（P<0.05）。在抑制galectin-1表达后,ERK信号通路磷酸化水平明显降低（P<0.05）。结论 galectin-1具有抑制肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和促进其凋亡的作用，其机制可能与ERK通路的磷酸化激活水平有关。

• MiR-4772通过调控卵巢癌免疫相关基因改变肿瘤免疫微环境

  赵爱月, 苏云霞, 傅德强

  目的 运用生物信息学分析miR-4772对卵巢癌肿瘤免疫微环境的影响，并深入挖掘其潜在作用机制。方法 基于TCGA数据库的294例卵巢癌患者数据，计算并获得肿瘤组织PD-L1表达最佳阈值；筛选PD-L1高、低表达组之间的差异表达基因（DEG），采用相关性分析获得重要DEG，运用WGCNA分析从DEG筛选出权重基因和PD-L1相关miRNA，重要DEG和权重基因交集获得核心基因；通过ssGSEA分析探讨PD-L1表达和miR-4772表达对卵巢癌肿瘤免疫格局的影响；KEGG法分析核心基因所涉及的信号通路；PPI网络分析核心基因相互作用；采用生存分析确定生存相关的核心基因。采用GEO数据库的399例卵巢癌患者数据，结合miR-4772模拟物和抑制物转染SKOV3细胞并进行基因表达谱测序验证。结果 卵巢癌肿瘤组织PD-L1表达最佳阈值1.31582，即90%分位数；基于PD-L1高、低表达组，筛选出840个差异表达基因，包括549个基因显著上调，291个基因显著下调，20个重要DEG与miR-4772表达密切相关；WGCNA分析筛选48个miR-4772表达相关的权重基因；12个核心基因共存于重要DEG和权重基因。ssGSEA分析显示，PD-L1和miR-4772高表达组展现更活跃的肿瘤组织免疫浸润和功能活性。KEGG功能分析结果显示12个核心基因主要涉及免疫相关信号通路，PPI分析显示12个核心基因存在密切相互作用，CD96和TBX21表达水平与卵巢癌患者生存预后密切相关。SKOV3细胞转染miR-4772模拟物和抑制物后，基因表达谱测序结果显示12个核心基因和PD-L1表达水平随着miR-4772表达水平变化出现相应改变。结论 miR-4772通过作用于12个核心基因，对卵巢癌肿瘤免疫微环境结构组成发挥调控作用。

• 经导管主动脉瓣置换术前测量主动脉根部参数的一致性及与短期预后的关联性：基于Anythink和3mensio CT软件比较

  刘长福, 孙泽瑜, 王 晶, 王民汉, 辛 然, 丁熠璞, 王 玺, 穆 洋, 陈 韬, 蒋 博, 王 琳, 章 明, 单冬凯, 陈韵岱

  目的 通过对比国产半自动术前CT分析软件Anythink与3mensio应用于经导管主动脉瓣置换术前测量的数据，评价Anythink软件测量主动脉根部参数的一致性与短期预后间的关联性。方法 回顾性纳入2016年12月~2022年2月于中国人民解放军总医院行TAVR手术的67例患者，由一名完成专业培训的心内科医生分别使用新型半自动分析软件Anythink与“金标准”3mensio软件同步重建主动脉根部模型，测量主动脉瓣环及周围结构，分析两种软件结果的相关性及一致性；由两名独立医生应用Anythink软件重复测量，评价Anythink对于同一研究对象测量的可重复性；依据Anythink和3mensio软件测量结果选取瓣膜型号，分析两软件在实际用于指导临床瓣膜选择时的异同。结果 Anythink与3mensio测量的左冠脉开口高度（13.37±3.35 mm vs 13.19±3.19 mm）、右冠脉开口高度（15.45±2.89 mm vs 15.75±2.93mm）、瓣环直径（24.0±2.2 mm vs 23.9±2.3 mm）、瓣环面积（450.6±88.3 mm2 vs 447.5±90.0 mm2）、瓣环周长（76.5±7.2 mm vs 76.1±7.6 mm）、主动脉瓣环与水平面夹角（53.5°±10.0°vs 51.1°±9.7°）差异均无统计学意义（P>0.05）。Pearson相关分析结果显示，两软件测量数据呈正相关（r=0.884~0.981，P<0.01）；Anythink测量瓣环数据组内相关系数ICC=0.894~0.992，组间相关系数ICC=0.651~0.954；Anythink与3mensio依据平均直径、面积直径、周长直径的选取瓣膜型号Kappa检验值分别为0.886、0.796、0.775；依据两次Anythink测量的平均直径、面积直径、周长直径选取瓣膜型号组内Kappa值为0.819、0.841、0.795，组间Kappa值为0.812、0.812、0.768。与患者短期预后关联性部分，在出现术后瓣周漏的患者中，Anythink测量面积直径相较于3mensio软件推荐的瓣膜型号略大，而在出现术后新发传导阻滞的患者中，Anythink推荐的瓣膜型号略小。结论 国产半自动TAVR术前CT分析软件Anythink与3mensio软件在主动脉根部参数测量方面具有较好的一致性与较高的可重复性。经过专业训练的心内科医生可运用Anythink软件来获得相对准确的主动脉根部数据，为TAVR术前瓣膜型号的选择提供指导和参考。

• 慢性药物性肝损伤的复发风险与肝纤维化程度高度相关

  邓 亚, 王春艳, 付懿铭, 李忠斌, 纪 冬

  目的 构建慢性药物性肝损伤（DILI）复发风险预测模型，进而评价DILI复发风险与肝纤维化的关系。方法 回顾性收集2017年1月~2022年1月在解放军总医院第五医学中心住院经肝活检证实的慢性DILI患者的临床资料，按照是否复发分为复发组(n=154)和无复发组（n=984）。根据Logistic单因素和多因素回归分析的结果构建相关风险预测模型，采用AUC值及Hosmer-Lemeshow检验评价模型的区分度及校准度，应用200次5、10、20折交叉验证法对模型进行验证。Spearman等级相关分析评价新建模型与纤维化的相关性，并绘制ROC曲线比较新建模型与APRI、FIB-4诊断肝纤维化的效能。结果 共纳入慢性DILI患者1138例，平均年龄44.9±11.7岁，女性524例（46.0%），复发组较未复发组肝纤维化程度更重，复发组较未复发组肝纤维化程度更重，复发组中 S0、S1、S2、S3、S4 分别为 1.9%、13.1%、42.2%、27.9%、14.9%，而未复发组分别为 8.9%、43.5%、26.1%、17.1%、4.4%。Logistic多因素分析结果显示LSM≥13.7kPa（OR=4.35，95% CI：2.61~7.25，P<0.001），CHE<2500 U/L（OR=5.17，95% CI：2.13~12.53，P<0.001），CHE 2500~5000 U/L（OR=4.07，95% CI：2.75~6.01，P2×ULN（OR=2.29，95%CI：1.38~3.80，P=0.001）是慢性DILI复发的危险因素。基于以上无创指标构建ACLS预测模型，AUC值为0.803（95% CI：0.78-0.83），Hosmer-Lemeshow拟合优度检验示χ2=7.73（P=0. 46），200次5、10、20折交叉验证显示平均AUC值为0.803，表明该模型稳定性良好。Spearman等级相关分析显示ACLS评分与肝纤维化程度呈正相关（rho=0.530，P<0.001），ACLS模型诊断中度肝纤维化的最佳界值3分，AUC值为0.78（特异度72.7%，灵敏度73.3%），效能优于APRI和FIB-4（P<0.001）；诊断重度肝纤维化的界值为6分，AUC值为0.83（特异度75.7%，灵敏度72.7%），效能优于APRI（P<0.001），但与FIB-4差异无统计学意义（P=0.38）。结论 复发风险高的慢性DILI患者，肝纤维化程度更重，此类患者需要密切随访并适时采取积极的治疗。

• 轻型多尺度黑色素瘤目标检测网络模型的建立：基于注意力机制调控

  钟友闻, 车文刚, 高盛祥

  目的 提出一种融入坐标注意力和高效通道注意力机制的深度学习目标检测模型AM-YOLO。方法 运用Mosaic图像增强与MixUp混类增强对图像进行预处理，采用One-Stage结构的目标检测模型YOLOv5s，并对该模型的骨干网络与颈部网络进行改进。在该模型的骨干网络中把空间金字塔的最大池化层替换成二维最大池化层，接着将坐标注意力机制和高效通道注意力机制分别融入到YOLOv5s模型的C3模块与该模型的骨干网络中。将改进后的模型与未改进的YOLOv5s模型，YOLOv3模型，YOLOv3-SPP模型，YOLOv3-tiny模型进行相关算法指标的对比实验。结果 融入了坐标注意力和高效通道注意力机制的AM-YOLO模型能够有效提升对黑色素瘤的识别率，同时也减少了模型权重的大小。AM-YOLO模型在准确率，召回率以及平均精度均值上都要明显优于其他模型，并且对于早期和晚期黑色素瘤的平均精度均值分别达92.8%和87.1%。结论 本文采用的深度学习目标检测算法模型能够应用于黑色素瘤目标的识别中。

• 胎儿心电信号的无创提取：基于时间卷积编解码网络

  曹 石, 巩 高, 肖 慧, 方威扬, 阙与清, 陈超敏

  目的 实现从孕妇腹壁混合心电信号中提取微弱的胎儿心电信号，为准确估计胎儿心率、分析胎儿心电波形等提供基础。方法 利用深度卷积网络（deep CNN）优越的非线性映射能力，本文提出了一种基于时间卷积编解码网络的非线性自适应噪声消除（nonlinear ANC）提取框架，以实现胎儿心电信号的有效提取。首先构建适用于处理胎儿心电信号的深度时间卷积网络（TCED-Net）模型作为非线性映射工具；然后以孕妇胸部心电信号为参考，利用该模型估计孕妇腹壁混合心电信号中的母体心电成分；最后从腹壁混合信号中减去所估计的母体心电成分，以得到完整的胎儿心电信号。实验利用合成心电数据（FECGSYNDB）和临床心电数据（NIFECGDB、PCDB）对方法性能进行测试与对比。结果 本文方法在FECGSYNDB上的胎儿R峰检测精度（[F1]值）、均方误差（MSE）和质量信噪比（qSNR）分别达到98.89 %，0.20和7.84；在NIFECGDB上的[F1]值达到99.1%；在 PCDB 上的[F1]值达到 98.61%。在不同数据集中较之 EKF（[F1=]93.84%）、ES-RNN([F1] =97.20% )和 AECG-DecompNet（[F1]=95.43%）等现有性能最佳的算法，本文方法的R峰检测精度指标分别高出5.05%、1.9%和3.18%，均优于现有最佳方法。结论 与现有算法相比，本文方法可以提取出更为清晰的胎儿心电信号，对孕期进行有效的胎儿健康监护具有一定的应用价值。

• 类黑色素纳米颗粒联合近红外光照射具有良好的抗卵巢癌作用

  杨洁容, 陈小平

  目的 探讨类黑色素（PDA）纳米的制备、物化表征及其与光热治疗（PTT）/光动力治疗（PDT）协同抗肿瘤效率。方法采用透射电镜（TEM），水合粒径分析及Zeta电位分析分析PDA纳米的形貌、粒径大小，利用近红外激发光（NIR）探究其光热及光动力性能。将卵巢癌细胞分别用全培（Control组）、单纯PDA、PDA+NIR（0.7 W/cm2与1.0 W/cm2）进行处理，进一步采用流式细胞术、细胞毒性试验（CCK-8）、Transwell实验与单侧皮下荷瘤模型评估类黑色素纳米的PTT/PDT协同抗肿瘤作用。结果 制备的 PDA 纳米为-20 mV及100 nm 左右的圆球颗粒。在 NIR（0.7 W/cm2与 1.0 W/cm2）照射下其变化温度值（ΔT）分别约为15 ℃或30 ℃，同时可产生大量单线态氧，具有优良的PTT/PDT性能。流式细胞学结果表明：相比于空白组，PDA纳米不会引起卵巢癌细胞活性氧生成及线粒体膜电位变化，PDA联合NIR照射可诱导卵巢癌细胞内活性氧显著上升以及线粒体膜电位下降（P<0.001）；且相比较于低功率NIR（0.7 W/cm2）光照组，高功率NIR（1.0 W/cm2）处理的细胞活性氧水平更高、线粒体膜电位下降越显著（P<0.01）。CCK8实验表明：相比于空白组，PDA对肿瘤细胞无明显毒性，PDA联合NIR照射对卵巢癌细胞具有显著杀伤作用（P<0.001），且相比较于低功率NIR（0.7 W/cm2）光照组，高功率NIR（1.0 W/cm2）处理的细胞存活率越低（P<0.001）。Transwell实验表明：相比于空白组，PDA不能抑制卵巢癌细胞的侵袭迁移能力，PDA联合NIR照射能显著抑制卵巢癌细胞的侵袭迁移能力（P<0.001），且相比较于低功率NIR（0.7 W/cm2）光照组，高功率NIR（1.0 W/cm2）处理的卵巢癌细胞侵袭迁移数目越少（P<0.001）。小鼠单侧皮下荷瘤模型表明：相比于生理盐水组和单独的PDA组，PDA联合NIR照射能发挥显著的体内抗肿瘤作用（P<0.001）。结论 类黑色素联合近红外光照射具有良好的抗肿瘤效应，是卵巢癌治疗的一种潜在新方法。

• 内皮素-1和结缔组织生长因子在心房颤动患者中高表达并与射频消融术后的复发相关

  高 琦, 耿嘉逸, 丁洋洋, 姚卓亚, 孟金金, 王 聪, 张 恒, 康品方, 唐 碧

  目的 探讨内皮素-1（ET-1）和结缔组织生长因子（CTGF）在心房颤动（AF）中的表达变化及对射频消融术后复发的预测价值。方法 选取蚌埠医学院第一附属医院心内科就诊的阵发性房颤（PaAF）患者66例和持续性房颤（PeAF）患者72例为实验组，80例窦性心律者为对照组，采用ELISA和Western blot分别检测血清中ET-1和CTGF的表达水平；同时选取我院心脏外科行手术的房颤和窦性心律患者各6例，术中取右心耳组织，采用HE染色和Masson染色分别观察心肌细胞结构形态和心肌纤维化程度，免疫组织化学染色和Western blot检测ET-1和CTGF蛋白表达情况；对实验组行射频消融术的患者开展了为期6个月的临床随访，以评估预后情况。结果 与对照组（CON）相比，AF组心肌细胞结构明显被破坏、纤维化程度显著增加；PaAF和PeAF组ET-1和CTGF表达水平明显高于CON组，且PeAF组明显高于PaAF组。在所有实验组中ET-1和CTGF水平与LAD大小呈正相关（P<0.05），ET-1与 CTGF水平呈显著正相关（P<0.05）。同时，房颤复发组（Re）患者术后ET-1、CTGF水平均高于未复发组（NRe），术前、术后的ET-1和CTGF表达水平与PeAF术后复发呈正相关，且ET-1、CTGF为PeAF术后复发的独立危险因素。结论 ET-1和CTGF在AF患者中表达明显增加，与AF持续时间呈正相关；ET-1和CTGF在AF复发组患者中表达水平明显升高，且二者对PeAF患者射频消融术后复发有预测价值。

• LINC01285促进结直肠癌细胞的增殖和转移

  朱显军, 罗喜俊, 李 涛, 梁俊杰, 何嘉琳, 唐兴奎

  目的 探究长链非编码RNA LINC01285在结直肠癌（CRC）中的表达特点及临床意义，阐明潜在的生物学功能及调控机制。方法 基于Starbase生物数据库检索LINC01285在CRC及癌旁组织中的表达量；收集本单位结直肠癌患者的CRC样本及周围正常样本各70例，分组为肿瘤组与非肿瘤组；利用荧光定量PCR实验（RT-qPCR）验证本中心CRC队列、肿瘤细胞中LINC01285的表达量，并分析其与患者临床病理参数及无瘤生存时间的关系。采用脂质体转染技术构建LINC01285低表达细胞株并分为si-Control（对照组）、si-LINC01285-1（敲低组1）、si-LINC01285-2（敲低组2）3个组，采用CCK-8实验、流式细胞学、Transwell 法及蛋白印迹法检测 LINC01285 对结直肠癌细胞的增殖、凋亡及转移能力的影响及潜在的调控机制。结果Starbasev3.0 公共数据库获取 TCGA-COAD 转录组测序数据发现 LINC01285 在癌组织中的表达量明显高于正常组织（P=0.00016）；RT-qPCR结果显示：与非肿瘤组相比，LINC01285在肿瘤组表达水平显著上调（P=0.0002），其表达量与肿瘤组织学分化程度（P=0.036）、T分期（P=0.000）、淋巴结转移（P=0.001）、TNM分期（P=0.000）、Duke分期（P=0.009）和无瘤生存时间（P=0.0102）密切相关。相比于正常结直肠粘膜细胞，CRC细胞（尤其在SW620和HT-29）内LINC01285的表达水显著高表达（P<0.001）。相比于 si-Control 组，脂质体转染的细胞（si-LINC01285-1、si-LINC01285-2）内 LINC01285 表达量显著下降（P<0.001）。同时相比于si-Control组，LINC01285敲低CRC细胞组的增殖能力明显降低（P<0.001）、早期凋亡、晚期凋亡及总凋亡率明显升高（P<0.05）。相比于si-Control组，LINC01285敲低组的CRC细胞迁移和侵袭能力显著下降（P<0.001），且上皮-间质转化相关通路的E-钙粘蛋白表达量显著升高（P<0.001、N-钙粘蛋白显著下调（P<0.001）。结论 LINC01285的表达与CRC的预后高度相关，可调节上皮-间质转化通路影响CRC细胞的增殖、凋亡与转移能力。

• 黄芪多糖减轻大脑中动脉闭塞模型大鼠的血脑屏障损伤：基于抑制P2X7R通道

  袁 巧, 谢丽英, 陈朝俊

  目的 研究黄芪多糖（APS）通过P2X7R通道对大脑中动脉闭塞（MCAO）模型大鼠血脑屏障的影响。方法 建立血脑屏障体外模型及OGD模型，通过试漏实验对体外血脑屏障的形成进行初步判断，LC-MS检测APS对血脑屏障体外模型通透性的影响。将18只SD大鼠随机分为3组：对照组、MCAO+生理盐水组、MCAO+APS组，6只/组。对照组大鼠腹腔注射生理盐水，连续3 d；建立MCAO模型，造模成功后，MCAO+生理盐水组大鼠腹腔注射生理盐水，连续3 d；MCAO+APS组大鼠腹腔注射APS（45 mg/kg），连续3 d。取大鼠脑组织、血清，进行依文思蓝（EB）含量测定，制作标准曲线得到吸光度值换算成EB含量以评价血脑屏障的通透性；运用ELISA检测各组大鼠脑组织中三磷酸腺苷（ATP）含量变化情况；运用Western blot检测各组大鼠脑组织基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、P2X7R表达水平。结果 经过APS处理可修复ATP或OGD状态下血脑屏障的完整性。与对照组相比，MCAO+生理盐水组、MCAO+APS组大鼠脑组织EB含量增多（P<0.01）、血脑屏障通透性增大（P<0.01），与MCAO+生理盐水组相比，MCAO+APS组大鼠脑组织EB含量减少（P<0.05），血脑屏障通透性改善（P<0.05）。与对照组相比，MCAO模型大鼠脑组织中ATP含量减少（P<0.05），MMP-9、P2X7R表达水平升高（P<0.01）；与MCAO+生理盐水组相比，MCAO+APS组ATP含量有所恢复（P<0.01），MMP-9 、P2X7R表达水平降低（P<0.05）。结论 黄芪多糖通过稳定脑缺血缺氧状态下的内环境，下调MMP-9表达水平，改善血脑屏障的通透性，起到对MCAO模型大鼠脑组织保护作用；并且其作用机制可能与抑制P2X7R通道相关。

• MiR-342-3p在类风湿关节炎患者中低表达并促进滑膜成纤维细胞的炎症和迁移

  周 琴, 刘 健, 孙艳秋, 陈晓露, 张先恒, 丁 香

  目的 探究类风湿关节炎(RA)患者miR-342-3p的表达，及其对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞细胞（RA-FLS）炎症和迁移的影响。方法 收集正常人30例、RA患者50例外周血单个核细胞（PBMCs），检测PBMCs中miR-342-3p的表达，并研究其与临床指标RF、ESR、anti-CCP、hs-CRP、C3、DAS-28、SAS、SDS的相关性。建立RA-FLS细胞系，20 ng/mL TNF-α刺激细胞，构建mimics-miR-342-3p 和 inhibitor-miR-342-3p 及空转组，转染至 RA-FLS 中；实验分为 6 组：RA-FLS 组，TNF-α+RA-FLS 组，mimics-NC组，mimics-miR-342-3p组，inhibitor-NC组和inhibitor-miR-342-3p组；采用定量实时聚合酶链反应（RT-qPCR）检测miR-342-3p的表达；酶联免疫吸附法（ELISA）检测白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达。CCK8检测细胞活力。Transwell小室检测滑膜细胞的迁移。结果 与正常组相比，RA患者miR-342-3p表达显著降低（P<0.05），ROC曲线结果显示AUC 97.53% 。miR-342-3p与RF（r=-0.321）、ESR（r=-0.284）、anti-CCP（r=-0.355）、hs-CRP（r=-0.320）、C3（r=-0.294）、DAS-28（r=-0.395）、SAS（r=-0.366）、SDS（r=-0.397）呈显著负相关（P<0.05）。miR-342-3p与anti-CCP 、DAS-28、SDS、SAS的升高有较强的关联，规则支持均大于85%、置信度均大于88%和提升均大于1；与RA-FLS组相比，TNF-α刺激后细胞活力显著升高（P<0.05），IL-1β、IL-6、TNF-α表达显著升高，IL-10的表达显著降低（P<0.05）；与mimics-NC组相比，mimics-miR-342-3p组细胞活力显著降低（P<0.05）；与inhibitor-NC组相比，inhibitor-miR-342-3p组细胞活力显著升高（P<0.05）；与mimics-NC组相比，mimics-miR-342-3p组IL-1β、IL-6、TNF-α表达显著降低，IL-10的表达显著升高（P<0.05）；与inhibitor-NC组相比，inhibitor-miR-342-3p组IL-1β、IL-6、TNF-α表达显著升高，IL-10的表达显著降低（P<0.05）。结论 miR-342-3p在RA患者中表达降低，通过促进RA-FLS炎症和迁移，参与RA的发病机制。

• Wilson病脂代谢异常患者发生肝纤维化的列线图预测模型的建立与验证

  赵晨玲, 董 婷, 孙伦燕, 胡慧冰, 王 琼, 田丽伟, 江张胜

  目的 建立并验证Wilson病（WD）脂代谢异常患者发生肝纤维化的列线图预测模型。方法 回顾性收集2018年12月~2021年12月就诊于安徽中医药大学第一附属医院脑病科的500例WD脂代谢异常患者的临床资料，并将其分为建模人群和验证人群。在建模人群中通过LASSO回归、多因素Logistic回归分析筛选出WD脂代谢异常患者发生肝纤维化的独立危险因素，并对其建立列线图预测模型。采用受试者工作特征曲线（ROC）的曲线下面积（AUC）、校准曲线和决策曲线分别在建模人群和验证人群中对列线图预测模型进行内外部验证以判断其区分度、校准度和临床实用性。结果 甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和载脂蛋白B为WD脂代谢异常患者发生肝纤维化的独立危险因素（P<0.05）。列线图预测模型在建模人群和验证人群中均具有良好的区分度、校准度和临床实用性。结论 本研究所建立的列线图预测模型具有较高的准确性，可方便地用于WD脂代谢异常患者发生肝纤维化的早期识别和风险预测。

• 程氏蠲痹汤通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号轴促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的自噬

  孙广瀚, 许 霞, 万 磊, 南淑玲, 王玉凤, 赵 黎, 程 卉, 王 坤, 刘 莹, 方妍妍, 孙 朗, 朱 俊

  目的 研究程氏蠲痹汤（JBT）通过PI3K/Akt/mTOR信号轴调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞（RA-FLS）自噬的影响及相关机制。方法 实验分为4组：FLS组、FLS+JBT组、FLS+RAPA组、FLS+RAPA+JBT组。CCK8检测程氏蠲痹汤抑制RA-FLS的最佳浓度和时间，透射电镜观察细胞自噬小体的变化，自噬双标腺病毒实验观察细胞内自噬体、自噬溶酶体数量，RT-qPCR和Western blot检测相关指标表达水平。结果 CCK8实验筛选结果表明JBT冻干粉浓度在0.5 mg/mL，培养12 h效果最佳。电镜结果与自噬双标腺病毒实验结果趋势相同，FLS组中自噬体少量存在，JBT加入能显著增加自噬体，自噬溶酶体较少。RT-qPCR结果显示，FLS+RAPA+JBT组较FLS组、FLS+JBT组、FLS+RAPA组相比，PI3K、Akt和mTOR的mRNA水平降低更明显（P0.05），p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、P62受到了明显抑制（P<0.05）。FLS+RAPA+JBT组较FLS组、FLS+JBT组、FLS+RAPA组相比，Beclin-1、LC3B蛋白表达量明显上升（P<0.05）。结论 程氏蠲痹汤可抑制RA-FLS的存活率，并可提高细胞自噬水平，其机制可能与下调PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

• 基于氧化亚铜纳米颗粒的光热/化学动力协同策略体外抑制胃癌细胞的迁移

  温海飞, 黄显莹

  目的 探讨氧化亚铜（Cu2O）纳米的制备、物化表征及其胃癌抗肿瘤效应的作用。方法 采用透射电镜，动态光散射，Zeta电位分析及紫外吸收光谱分析方法分析Cu2O纳米的形貌、粒径大小及类芬顿性能，利用不同浓度的Cu2O纳米对细胞进行处理，并进行光照或者非光照处理，并分别采用细胞增殖-毒性实验（CCK-8）、Transwell细胞迁移实验评估该纳米的体外抗肿瘤作用效应。结果 制备的Cu2O纳米为100 nm左右的类圆形结构，在近红外光（NIR, 0.5/cm2）照射5 min后Cu2O纳米温度从25 ℃提高到50 ℃，同时Cu2O纳米在过氧化氢浓度和pH为近中性的条件下（pH=6.5）可催化大量活性氧（ROS）生成。CCK-8试验表明：相比于对照组，Cu2O纳米对胃癌细胞具有浓度依赖性抑制增殖作用；Transwell细胞迁移实验表明：Cu2O纳米能抑制胃癌细胞的迁移能力。结论 Cu2O铜基纳米颗粒具备良好的光热性能、化学动力性能及抗肿瘤效应，是胃癌治疗的一种潜在新方法。

• 苦参碱联合LY294002对人髓系白血病K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

  郝艳梅, 纪俊莉, 刘纯艺, 张 楠, 宫雅娟

  目的 探究苦参碱（Mat）联合LY294002对人髓系白血病K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及可能机制。方法 采用CCK-8法检测不同浓度Mat单药和联合LY294002对K562细胞增殖的影响；将K562细胞分为对照组、Mat组、LY294002组和Mat+LY294002组，分别采用0.4 g/L Mat及10 μmol/L LY294002单独或联合干预48 h后，应用光学显微镜观察细胞形态变化，流式细胞术annexin Ⅴ-FITC/PI双标记检测细胞凋亡，PI单标记检测细胞周期变化，Western blot法检测Mat联合LY294002对K562细胞p-mTOR、p-PI3K、Akt、p-Akt、CyclinD1、Bcl-2、Caspase-9蛋白表达的影响。结果 CCK-8结果显示，不同浓度Mat单药和联合LY294002均可抑制K562细胞的增殖，具有时间和浓度依赖性，且联合组增殖抑制率比单药组明显升高（P<0.01）。形态学检查显示，联合用药组比单药组凋亡表现更明显。流式细胞结果显示，与对照组及单药组相比，联合组显著促进细胞凋亡（[ 42.50±2.63）%，P<0.01]，显著增加了细胞周期G0/G1期细胞比率（[ 57.23±1.44）%，P<0.01]。Western blot结果表明，两药联合后K562细胞p-mTOR、CyclinD1、p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白表达水平明显增高（P<0.01），Caspase-9蛋白表达水平下降（P<0.01）。结论 Mat和LY294002联合应用可以增强对K562细胞生长抑制的协同作用，其机制可能是通过有效下调PI3K/Akt信号通路中的p-Akt表达，使p-mTOR、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达下调，Caspase-9蛋白表达上调来实现的。