南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2023年第6期

• 蛹虫草代谢产物虫草素抑制舌鳞癌裸鼠移植瘤的生长

  郑庆委, 邵一丹, 郑婉婷, 邹映雪

  目的 评估虫草素对口腔癌的抑制作用并探讨其作用机制。方法 将人口腔癌TCA-8113细胞接种于BALB/c裸鼠皮下，建立口腔癌裸鼠模型。将裸鼠模型其随机分为模型组和虫草素组，进行为期4周的治疗，之后切除肿瘤并称重，评估虫草素的抗肿瘤效果。通过HE染色评估小鼠心脏、脾脏、肝脏、肾脏和肺部的组织学变化，TUNEL染色检测肿瘤细胞死亡，并通过RT-qPCR和Western blotting评估Bax、Bcl-2、GRP78、CHOP和caspase-12的表达。结果 虫草素治疗可使裸鼠皮下肿瘤生长减少56.09%。此外，虫草素治疗还与肿瘤细胞形态和凋亡死亡的显著变化相关，治疗后荷瘤裸鼠主要器官的形态未发生任何变化。虫草素处理还显著降低了Bcl-2的表达（P<0.05），同时增加了Bax、GRP78、CHOP和caspase-12 RNA和蛋白质水平的表达。结论 虫草素可通过内源性线粒体途径和内质网应激途径诱导TCA-8113细胞凋亡。

• 东革阿里抗炎的物质基础及其作用机制：基于UPLC-Q-TOF-MS/MS和网络药理学方法

  刘 芳, 张远芳, 刘 鹏, 刘佳敏, 刘思妤, 王俊杰

  目的 阐明东革阿里抗炎活性的物质基础及作用机制。方法 利用二甲苯致耳肿胀和脂多糖致急性肺炎模型筛选东革阿里的活性部位；采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术鉴定活性部位的化学组成，结合SwissADME、SwissTargetPrediction、Genecards等数据库筛选东革阿里抗炎的潜在作用靶点，String数据库绘制蛋白互作（PPI）网络图，Cytoscape软件做网络拓扑分析并筛选核心靶点，通过Metascape数据库对核心靶点进行富集分析，使用Autodock软件进行核心成分和靶点进行分子对接，Pymol软件将对接结果可视化；采用脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症模型验证东革阿里抗炎作用机制，通过Griess试剂法检测NO的水平，Western blot法检测MAPK1、JAK2及STAT3蛋白的表达水平。结果 东革阿里75%提取物（ELE）为活性部位，该部位共鉴定出37个化学成分，化合物和疾病共有靶点541个，涉及JAK/STAT3、cAMP等信号通路，筛选出12个指标性成分，指标性成分与涉及信号通路上的2个核心靶点进行分子对接，对接结果良好；细胞验证实验显示ELE的低、中、高剂量组均能显著降低细胞NO的释放量，中剂量可以显著降低JAK2和STAT3的表达。结论 东革阿里抗炎活性的物质基础为苦木素及生物碱类成分，其抗炎作用的机制可能与靶向JAK2、STAT3调控JAK/STAT3信号通路有关。

• Notch信号通路抑制剂DAPT改善酒精诱导的斑马鱼神经元分化障碍

  殷 果, 李 荣, 刘岳飞, 王晓睛, 吴炳义

  目的 探讨Notch信号通路在胎儿酒精谱系障碍（FASD）斑马鱼模型的神经元分化及及感觉-运动能力中的作用。方法 首先，将斑马鱼胚胎分为二甲基亚砜（DMSO）组和50 μmol/L氮-[氮（-3,5-二氟苯乙酰基）-L-丙氨酰]-S-苯基甘氨酸丁酯（DAPT，Notch信号通路抑制剂）处理组，检测比较两组斑马鱼的死亡率、孵化率以及畸形率；比较两组斑马鱼的身体长度；利用原位杂交和qRT-PCR技术检测两组神经干/前体细胞标志物sox2、神经前体细胞分化因子neurogenin1、神经元标志物huc的表达；检测两组在无刺激、强光、震动刺激情况下的行为学表现。其次，将斑马鱼胚胎分为DMSO组、1.5%酒精处理组、DAPT处理组、酒精和DAPT联合处理组，利用原位杂交和qRT-PCR技术检测各组sox2、neurogenin1、huc的表达，检测Notch信号通路相关基因（Notch信号受体notch1a，促进神经发育的靶基因her8a及Notch胞内活性片段（NICD）的mRNA表达水平；检测各组在无刺激、强光、震动刺激情况下的行为学表现。结果 50 μmol/L DAPT处理斑马鱼胚胎后，受精后1 d（1 dpf）胚胎死亡率（P<0.01）显著增加，2 dpf孵化率显著降低（P<0.01），3 dpf畸形率（P<0.001）显著增加，15 dpf斑马鱼体长显著缩短（P<0.05）；斑马鱼胚胎sox2表达水平显著降低（P<0.01），neurogenin1（P<0.05）和huc mRNA（P<0.01）表达水平显著增加；在无刺激、强光、震动刺激情况下，DAPT处理组的斑马鱼运动距离均显著缩短（P<0.001），运动速度均显著降低（P<0.05）。单独使用1.5%酒精处理斑马鱼胚胎后，notch1a、her8a及NICD的mRNA表达水平显著升高（P<0.05）；1.5%酒精联合DAPT处理斑马鱼胚胎后，较酒精单独处理组，neurogenin1和huc mRNA表达水平显著增加，sox2 mRNA表达水平显著降低（P<0.01），在强光刺激下的运动距离显著变长，运动速度显著变快（P<0.05）。结论 酒精上调斑马鱼胚胎Notch信号、抑制神经元分化并降低感觉-运动能力，而抑制Notch信号通路可改善斑马鱼胚胎神经元分化及感觉-运动能力。

• 6条目孤独感量表（ULS-6）是测量中国成年人群孤独感的有效工具

  肖 蓉, 杜静雯

  目的 修订6条目孤独感量表（ULS-6）并在成年人群中使用，评价其测量学性能和适用性。方法 调查1采用UCLA孤独感量表（ULS）、患者健康问卷-9（PHQ-9）、领悟社会支持量表（PSSS）对1480名成年人进行施测，对ULS-6进行项目分析、信效度评价和测量等值性分析；调查2采用UCLA孤独感量表调查652名大学生分析效标效度并对其中300名大学生间隔3周后再次施测以分析ULS-6的重测信度。结果 项目分析显示ULS-6各条目的区分度良好，鉴别指数均在0.775以上（r= 0.775~0.820，P<0.001）。ULS-6为单一维度，其内部一致性信度为0.891，分半信度为0.875，重测信度为0.726。ULS-6与UCLA孤独感量表、ULS-8、PHQ-9及PSSS量表的效标相关系数分别为0.882，0.967，0.528和-0.532。在跨性别、跨年龄组别中均满足测量等值性。成年人ULS-6总分为（12.97±3.96）分，成年人中有20%无孤独感，80%有孤独感（其中轻、中、重度孤独感者分别占39.6%、25.7%和14.7%）。结论 ULS-6孤独感量表具有良好的信效度和适用性，是能简洁快速测量中国成年人群孤独感的有效工具。

• 低HMGB1含量的肿瘤细胞裂解物增强树突状细胞的抗肺癌作用

  潘中武, 李思琪, 王耀辉, 刘海军, 桂 琳, 董博翰

  目的 探讨低含量高迁移率族蛋白B1（HMGB1）的肿瘤细胞裂解物（TCL）对树突状细胞抗肺癌作用的影响。方法 反复冻融的方法制备Lewis肺癌细胞TCL。Western blot检测TCL中HMGB1蛋白的表达情况。用30 nmol/L甘草酸（GA）抑制Lewis肺癌细胞中HMGB1的表达，进而制备低含量HMGB1的TCL（LH-TCL）。用未处理的Lewis肺癌细胞制备正常含量HMGB1的TCL（NH-TCL）。分为不同剂量NH-TCL负载DC组、LH-TCL负载DC组及PBS对照组，用流式细胞术检测体外诱导的小鼠树突状细胞（DC）表面CD11b、CD11c、CD86表达或细胞凋亡，用酶联免疫吸附试验检测DC细胞IL-12分泌情况。分为NH-TCL刺激DC活化的脾细胞组、LH-TCL刺激DC活化的脾细胞组及PBS对照组，用流式细胞术检测小鼠脾细胞表面CD69的表达情况，酶联免疫吸附试验检测小鼠脾细胞TNF-β的分泌。分为NH-TCL刺激DC活化的脾细胞组、LH-TCL刺激DC活化的脾细胞组及PBS对照组，并设5∶1、10∶1、20∶1三个效靶比进行体外杀伤实验，采用CCK8法检测小鼠脾细胞杀伤肿瘤细胞的活性。分为未活化DC组、NH-TCL活化的DC组、LH-TCL活化的DC组及PBS对照组，通过体内抑瘤实验，评估DC过继免疫细胞疗法抑制小鼠皮下移植瘤生长的效果。结果 GA作用后的Lewis肺癌细胞制备的TCL中，HMGB1的含量显著降低（P<0.05）。与NH-TCL相比，LH-TCL具有更好的减少DC 凋亡的能力（P<0.001），并促进DC表面CD86的表达和IL-12的分泌，而负载LH-TCL的DC也能更好地激活脾淋巴细胞并诱导更强的抗肿瘤免疫作用（P<0.01）。在体外，负载LH-TCL的DC激活脾淋巴细胞对Lewis肺癌细胞的杀伤活性显著提高（P<0.01）；在实验动物体内，免疫负载LH-TCL的DC可明显抑制肿瘤组织生长（P<0.05）。结论 用LH-TCL负载DC，可以增强DC诱导的抗肿瘤免疫作用，提高DC过继免疫细胞治疗的疗效，为该免疫治疗方法的改进提供了一个新的途径。

• 乙酰紫堇灵促进大鼠脊髓损伤后的功能恢复：基于调控EGFR/MAPK信号通路抑制小胶质细胞活化

  孙 洋, 许轶博, 肖林雨, 朱国庆, 李 静, 宋 雪, 徐 磊, 胡建国

  目的 探讨乙酰紫堇灵（Ace）对大鼠脊髓损伤（SCI）后功能恢复的作用和机制。方法 使用脊髓撞击仪制备SD大鼠中度挫伤性SCI模型（SCI组），给予不同浓度Ace（10、20、40 mg/kg）腹腔注射干预，以假手术大鼠（Sham组）为对照。通过BBB评分评估SCI大鼠运动功能恢复情况；利用HE染色观察脊髓组织损伤面积变化；采用PCR、ELISA与免疫荧光染色评估脊髓损伤后体内炎症水平（TNF-α、IL-6、IL-1β）变化和小胶质细胞的活化情况（CD11b/CD68）。使用脂多糖（LPS组，100 ng/mL）诱导小胶质细胞BV2活化，分别给予不同浓度Ace处理（Ace组，1、2、4 μmol/L），Control组给予等体积DMSO处理。免疫荧光和PCR验证Ace对BV2活化及炎症因子分泌的作用；利用网络药理学预测Ace抑制小胶质细胞活化的靶点蛋白和信号机制，采用AutoDock软件对Ace与预测的靶点蛋白进行分子对接。使用信号通路阻断剂（Osimertinib），在体干预SCI大鼠模型，体外干预LPS诱导的BV2细胞模型，以验证信号机制。结果 大鼠体内实验显示，与SCI组相比，Ace组大鼠BBB评分增高、脊髓损伤面积减小、小胶质细胞活化数量和促炎因子水平减少（P<0.05）；体外LPS刺激BV2细胞的研究结果显示，Ace组BV2活化及炎症因子水平显著低于对照组（P<0.05）。网络药理学预测EGFR是Ace的主要作用靶点，分子对接技术显示EGFR与Ace的结合能为-8.9 kJ/mol，二者之间存在连接氢键；免疫印迹证实Ace可抑制脊髓组织及BV2细胞中EGFR/MAPK信号通路活化，加入EGFR抑制剂Osimertinib干预后，其抑制效能与Ace相当。结论 Ace可能通过调控EGFR/MAPK通路抑制小胶质细胞介导的炎症反应，从而促进脊髓损伤后组织修复和运动功能恢复，为SCI治疗药物选择提供新的方向。

• 肾病III号方治疗慢性肾脏病大鼠肾脏纤维化的作用机制:基于网络药理学和分子对接技术

  罗冠峰, 刘华熙, 谢 钡, 邓伊健, 谢鹏辉, 赵晓山, 孙晓敏

  目的 观察肾病III号方对5/6肾切除大鼠肾功能、肾脏病理的改善作用及联合网络药理学和分子对接技术分析肾病III号方抗慢性肾脏病肾脏纤维化的作用机制。方法 SPF级雄性SD大鼠40只，从中随机选取10只作为假手术组，30只制作5/6肾切除模型，造模2周后测血清肌酐，并将造模组随机分为肾病III号方组、氯沙坦组、模型组。肾病III号方组予肾病III号方灌胃，氯沙坦组予氯沙坦钾灌胃，模型组与假手术组予生理盐水灌胃，给药16周后测定血清肌酐、尿素氮，HE染色及免疫印迹法观察肾脏病理学改变和纤维化相关因子。网络药理学联合分子对接技术探索肾病III号方抗慢性肾脏病肾脏纤维化的作用机制，免疫印迹法验证核心靶点表达。结果 与模型组比较，肾病III号方治疗后，5/6肾切除大鼠的血清肌酐、尿素氮降低（P<0.05），肾组织的病理损害减轻，且肾组织中上皮间充质转化相关蛋白经治疗后也得到相应改善。进一步通过网络药理学分析，发现肾病III号方主要活性成分有金合欢素、芹菜素、异泽兰黄素、槲皮素、山奈酚、木樨草素等，关键靶点为STAT3、SRC、CTNNB1、PIK3R1、AKT1等。分子对接结果显示，肾病III号方的活性成分与STAT3、SRC、CTNNB1、PIK3R1、AKT1靶点都有良好的结合活性。免疫印迹法验证发现肾病III号方能恢复5/6肾切除大鼠肾组织中STAT3、PI3K、AKT的蛋白表达（P<0.05）。结论 肾病III号方能减轻5/6肾切除大鼠所致的肾脏损伤，其主要的药效成分可能通过调控STAT3、PIK3R1、AKT1等多靶点发挥抗慢性肾脏病肾脏纤维化的作用。

• 茯苓酸缓解小鼠克罗恩病：基于抑制PI3K/AKT信号通路拮抗肠上皮细胞凋亡

  邵荣瑢, 杨 子, 张文静, 张 诺, 赵雅静, 张小凤, 左芦根, 葛思堂

  目的 明确茯苓酸（PA）对2，4，6三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的小鼠克罗恩病（CD）样结肠炎的作用效果及可能机制。方法 将24只野生型小鼠随机分为对照组（WT组）、模型组（TNBS组）和PA干预组（PA组），每组8只。TNBS组和PA组采用TNBS诱导CD样结肠炎；PA组在TNBS造模的同时给予PA干预[5 mg/（kg·d），腹腔注射]，而WT组和TNBS组则每日给予等量的生理盐水腹腔注射。1周后处死小鼠，采用疾病活动度（DAI）评分、体质量改变、结肠长度、组织学炎症评分和小鼠结肠黏膜肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平（ELISA检测）评估肠炎程度；采用异硫氰酸荧光素-葡聚糖（FITC-dextran）、肠型脂肪酸结合蛋白（I-FABP）及跨上皮电阻抗值（TEER）评估小鼠肠屏障功能；TUNEL染色检测各组小鼠肠上皮细胞凋亡情况；通过网络药理学预测PA治疗CD可能的作用靶点；采用String平台和Cytoscape 3.7.2软件进行蛋白互作网络构建；采用David数据库对预测靶点进行GO功能及KEGG通路富集分析；应用AutoDock 4.2.6进行PA与关键靶点的分子对接；采用Western blot检测各组小鼠结肠黏膜组织中p-PI3K和p-AKT的蛋白表达水平以验证KEGG富集分析结果。结果 PA组小鼠DAI评分、组织学炎症评分、体质量降低幅度和结肠黏膜TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著低于TNBS组（P<0.05），但仍高于WT组（P<0.05）；PA组小鼠结肠长度显著长于TNBS组（P<0.05），但仍短于WT组（P<0.05）；PA组小鼠血清中FITC-dextran和I-FABP水平较TNBS组显著降低（P<0.05），但仍高于WT组（P<0.05），而肠组织TEER水平较TNBS组显著升高（P<0.05），但仍低于WT组（P<0.05）；PA组小鼠肠上皮细胞凋亡率显著低于TNBS组（P<0.05），但仍高于WT组（P<0.05）。通过数据库共筛选到PA和CD交集靶点248个；构建PPI网络得到PA作用于CD的核心靶点分别为EGFR、HRAS、SRC、MMP9、STAT3、AKT1、CASP3、ALB、HSP90AA1、HIF1A；GO功能富集分析显示PA对细胞凋亡进程具有负向调控作用，KEGG富集分析显示PA治疗CD可能与PI3K/AKT信号通路密切相关；分子对接显示PA与AKT1、ALB、EGFR、HSP90AA1、SRC及STAT3等6个靶点有较强的结合力；同时，Western blot检测结果显示PA组小鼠结肠黏膜组织中p-PI3K和p-AKT水平较TNBS组显著降低（P<0.05），但仍高于WT组（P<0.05）。结论 PA可能通过调控PI3K/AKT信号通路拮抗肠上皮细胞凋亡保护肠屏障从而缓解TNBS小鼠CD样肠炎。

• 结直肠癌细胞通过激活成纤维细胞的ERK通路诱导癌症相关成纤维细胞的形成

  邓 婷, 杜伯雨, 郗雪艳

  目的 探究结直肠癌（CRC）细胞（HCT116、Caco-2）条件培养基促进癌症相关成纤维细胞（CAFs）形成的机制，为CRC治疗提供新的思路。方法 将对数生长期的人正常结直肠成纤维细胞（CCD-18Co）分为对照组、HCT116细胞条件培养基处理组（HCT116-CM组）、Caco-2细胞条件培养基处理组（Caco-2-CM组）、300 nmol/L ERK抑制剂SCH772984组（iERK组）、HCT116-CM联合ERK抑制剂组（HCT116-CM+iERK组）、Caco-2-CM联合ERK抑制剂组（Caco-2-CM+iERK组）。采用RT-PCR和细胞免疫荧光检测CAFs相关分子标志物表达水平；利用RTCA、克隆形成和创伤愈合实验测定细胞增殖、克隆形成和迁移能力；Western blot检测HCT116-CM和Caco-2-CM激活的成纤维细胞信号通路，同时检测相应信号通路阻断后CAFs形成情况。结果 HCT116-CM和Caco-2-CM可上调CCD-18Co中CAFs标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、成纤维细胞活化蛋白（FAP）、纤连蛋白（FN）和转化生长因子-β（TGF-β）的mRNA表达水平并促进成纤维细胞向CAFs转化（P<0.05）。HCT116-CM和Caco-2-CM促进CCD-18Co细胞的增殖、克隆形成和迁移（P<0.05）。HCT116-CM和Caco-2-CM增强CCD-18Co细胞中α-SMA蛋白的表达和ERK磷酸化修饰水平（P<0.05），ERK抑制剂SCH772984可抑制α-SMA的表达并抑制CRC细胞条件培养基的促CAFs形成作用（P<0.05）。结论 CRC细胞可通过激活成纤维细胞的ERK通路诱导CRC相关CAFs的形成。

• 机器学习模型和Cox回归模型预测食管胃结合部腺癌预后的效能

  高凯绩, 王一豪, 曹海坤, 贾建光

  目的 探讨机器学习和传统Cox回归模型在预测食管胃结合部腺癌（AEG）患者术后生存能力中的应用价值。方法 选取2015年9月~2020年10月本院收治的287例AEG患者，排除失访及临床资料缺失者，共筛选出203例患者的临床病理资料，经过对数据的赋值等处理，转换成满足R语言分析数据的要求的数据。将203例患者数据使用随机数表法按照3∶1的比例划分为训练集和验证集，对两组数据分别进行Cox比例风险模型构建和4种机器学习模型的构建，绘制出ROC曲线、校准曲线和临床决策曲线（DCA）。为评估4种机器学习模型之间的预测效能，进行机器学习模型的内部验证。通过曲线下面积(AUC)评价模型预测的性能，校准曲线反映模型的拟合情况，并通过DAC判断其临床意义。结果 Cox等比例风险回归、极端梯度提升、随机森林、支持向量机、多层感知机验证集中3年生存率的AUC值分别为0.870、0.901、0.791、0.832、0.725，验证集中5年生存率的AUC值分别为0.915、0.916、0.758、0.905、0.737。4种机器学习模型内部验证分别是：极端梯度提升（AUC=0.818）、随机森林（AUC=0.772）、支持向量机（AUC=0.804）、多层感知机（AUC=0.745）。结论 机器学习模型对于AEG患者生存率预测的表现优于Cox等比例风险回归模型，尤其在不满足等比例假设或线性回归模型下，并能够包含较多的影响变量。在内部验证中，XGBoost模型的预测效能最好，支持向量机次之，随机森林出现过拟合，多层感知机受数据量影响可能拟合效果较差。

• 肠道菌群在体外循环心脏手术后围手术期神经认知障碍中的作用：基于菌群人源化大鼠模型

  范嘉宁, 孙莹杰, 梁 冰, 张霄燕, 肖 诚, 黄泽清

  目的 通过肠道菌群人源化大鼠模型探讨体外循环（CPB）后肠道菌群紊乱可否通过激发炎症反应参与围手术期神经认知障碍（PND）的发生。方法 SPF级成年雄性SD大鼠30只随机分为3组（n=10）：伪无菌大鼠（S）组、伪无菌大鼠+接种健康人源粪菌滤液（NP）组和伪无菌大鼠+接种PND患者粪菌滤液（P）组。造模成功后对所有组别大鼠粪便进行宏基因组学检测，Elisa法测定血清炎症因子IL-1β、IL-6及TNF-α的含量，Western-blot法检测海马组织中GFAP、p-Tau蛋白的表达水平，Morris水迷宫实验评估造模后学习和记忆等认知功能。结果 宏基因组学测序结果显示粪菌移植后3组大鼠肠道菌群各自聚集，分区良好；S组克雷伯氏菌属（Klebsiella）（P0.05）均增加，但无统计学差异；与P组相比，NP组IL-1β（P<0.05）、IL-6（P<0.05）和TNF-α（P<0.05）的浓度显著降低，GFAP（P<0.05）、p-Tau（P<0.05）蛋白表达水平均下降，逃生平台穿越次数（P<0.05）和兴趣象限停留时间（P<0.05）均明显增加。结论 肠道菌群的差异性组成参与了CPB心脏手术后PND的发生，其机制可能与炎症反应的发生相关。

• 头臂干与气管的位置关系及其临床意义

  赵 健, 王如雪, 聂泽银, 吴 锋, 李雯娟, 李晨妤, 李怀斌

  目的 观察头臂干与气管的解剖形态和位置关系，为机械性呼吸道阻塞的诊疗和临床气管切开术提供解剖学基础。 方法福尔马林固定后的成年男性标本70例，女性标本21例。自颈部至胸部分离并暴露喉部和气管全长，分离主动脉弓及其三个分支，显露头臂干与气管的解剖位置关系，并测量相关解剖学数值。结果 头臂干与气管的位置关系中，不交叉型占3.30%，不完全交叉型占71.43%，完全交叉型占25.27%。男性标本的主动脉弓、头臂干和气管的外径及气管长度均较女性粗大（P0.05）。头臂干上方的气管软骨环数量最少仅3个，最多可达10个，男女两组的均数无差异（P>0.05）。结论 头臂干与气管的位置关系复杂，在机械性呼吸道阻塞的诊疗和气管切开术时，需注意预防头臂干和主动脉弓的损伤。

• FJX1在胃癌组织中高表达并与不良预后相关

  张 浩, 张 震, 王秋生, 王 炼, 杨 子, 耿志军, 王月月, 李 静, 左芦根

  目的 探讨四连接同源激酶1（FJX1）在胃癌（GC）中的表达以及与预后生存的关系，研究FJX1在胃癌进展中的作用及机制。方法 采用TCGA和GEO数据库胃癌队列分析FJX1在胃癌组织和正常胃黏膜组织中的表达情况，并分析FJX1表达与预后生存的相关性。通过免疫组化检测FJX1在胃癌组织中的蛋白表达水平，并分析FJX1蛋白表达与临床病理参数及预后的相关性。通过生物信息学探讨FJX1在胃癌中的潜在作用途径。采用慢病毒载体构建FJX1过表达和FJX1沉默的胃癌细胞株。采用免疫印记方法检测FJX1差异表达对增殖相关蛋白表达的影响，并采用CCK-8法检测FJX1对细胞增殖的影响。采用免疫印记方法检测FJX1差异表达细胞中PI3K和AKT的蛋白表达及磷酸化蛋白表达。采用裸鼠成瘤实验检测FJX1对肿瘤增殖的影响。结果 生物信息学分析及免疫组化结果显示，与正常胃黏膜组织相比，胃癌组织中的FJX1的mRNA和蛋白表达均显著增高（P<0.05）。此外，FJX1的mRNA和蛋白水平高表达与胃癌患者不良预后相关（P<0.05），并且FJX1高表达是胃癌不良预后的独立危险因素（P<0.05）。FJX1主要表达于胃癌细胞胞质，与Ki67表达呈正相关（R=0.34，P<0.05），并且FJX1表达水平与胃癌患者的CA199水平、肿瘤浸润深度（pT）和淋巴结转移（pN）相关（P<0.05）。Western blot显示FJX1能促进增殖相关蛋白Ki67和PCNA的表达，CCK8实验结果证实FJX1能调控胃癌细胞增殖（P<0.05）。基因集富集分析（GSEA）结果显示PI3K/AKT途径可能是FJX1的潜在分子作用机制，Western blot结果显示FJX1能促进PI3K和AKT磷酸化蛋白的表达。裸鼠移植瘤结果表明，FJX1能促进胃癌细胞在裸鼠体内的增殖（P<0.05）。结论 FJX1在胃癌组织中高表达并与胃癌不良预后相关，能够通过PI3K/AKT信号途径促进胃癌细胞的增殖，有潜力成为胃癌的预后生物标志物和治疗靶点。

• 基于半监督网络的组织感知CT图像对比度的增强方法

  周 昊, 曾 栋, 边兆英, 马建华

  目的 提出一种组织感知的对比度增强网络（T-ACEnet）对CT图像进行增强显示，并验证该结果对于现有器官分割任务的精度提升。方法 原始CT图像通过映射生成具有肺窗、软组织窗对比度的低动态灰阶图像，监督子网络通过肺部掩膜学习感知肺部、腹腔软组织的最佳窗宽窗位设置。自监督子网络通过极值抑制损失函数保持器官边缘结构信息。增强网络生成的图像被用作分割网络的输入，进行腹部多器官的分割。结果 T-ACEnet所生成的图像可以在一幅图像中包含更多窗口设置信息，便于医生进行病灶的初步筛查。且T-ACE图像在SSIM、QABF、VIFF、PSNR指标上相较于次优方法分别提升了0.51、0.26、0.10和14.14，MSE则降低了一个数量级。同时，T-ACE图像作为分割网络输入时，相较于原始CT图像，在不改变模型的情况下可以有效提高器官分割精度，5个分割定量指标均得到了提升，最大一项可提高4.16%。结论 本研究所提出的T-ACEnet可以感知性地增强器官组织对比度，提供更全面、更连续的诊断信息，同时所生成的图像可以显著提高器官分割任务的表现。

• 脂多糖刺激巨噬细胞分泌含miR-155-5p的外泌体促进肝星状细胞的活化及迁移

  林嘉宜, 娄安妮, 李 旭

  目的 探索脂多糖（LPS）刺激下的巨噬细胞来源的外泌体对肝星状细胞的激活及迁移能力的影响及分子机制。方法 以100 ng/mL丙二醇甲醚醋酸（PMA）处理人THP-1巨噬细胞24 h，诱导其分化为巨噬细胞，给予脂多糖刺激后收集巨噬细胞的培养上清，运用超速离心法提取外泌体并加以鉴定。荧光定量PCR（qRT-PCR）检测外泌体中miR-155-5p的表达。采用Transwell共培养体系观察巨噬细胞分泌的外泌体对肝星状细胞LX2增殖、氧化应激、迁移和I型胶原等纤维化标志物表达的影响。同时，LX2转染miR-155-5p-mimics及miR-155-5p-inhibitors分别过表达和干扰miR-155-5p，从正反两方面去验证miR-155-5p对LX2功能的影响。Western blot检测SOCS1以及其下游信号通路蛋白的表达。结果 与对照相比，经脂多糖刺激后巨噬细胞的外泌体处理的LX2细胞增殖迁移能力增强，氧化应激水平和I型胶原等纤维化标志物的表达明显增高（P<0.05）。巨噬细胞经脂多糖处理后分泌的外泌体中miR-155-5p的表达显著增高（P<0.01）。miR-155-5p过表达的LX2中增殖和迁移能力增强，氧化应激水平和I型胶原等纤维化标志物的表达明显增高（P<0.05）；而干扰miR-155-5p表达发挥相反的作用。进一步研究表明miR-155-5p抑制 SOCS1 的表达，促进 p-Smad2/3、Smad 2/3 和 RhoA 蛋白表达（P<0.05）。结论 脂多糖刺激下巨噬细胞来源的外泌体miR-155-5p促进肝星状细胞的活化、迁移、氧化应激及胶原生成。

• 小鼠初级精母细胞GC-2中TUBB4B的表达及其对NF-κB和MAPK信号通路的调控

  刘桐佳, 王万伦, 张 婷, 刘 爽, 边艳超, 张传领, 肖 瑞

  目的 探究微管蛋白（TUBB4B）与胞浆羧肽酶（CCP1）在小鼠初级精母细胞（GC-2）中的互相作用关系，以及TUBB4B在调控GC-2发育中的作用。方法 使用慢病毒感染GC-2细胞分别构建TUBB4B基因敲减组（TUBB4B-KD组）和阴性对照组（NC-KD组）；TUBB4B基因过表达组（TUBB4B-OE组）与阴性对照组（NC-OE组），利用嘌呤霉素筛选稳定细胞株。采用RT-qPCR和Western blot分别在mRNA和蛋白水平上检测细胞模型是否构建成功，并进一步探究在GC-2细胞中TUBB4B与CCP1二者之间相互调控的表达关系。CCK8及流式细胞术检测TUBB4B沉默和过表达后对GC-2细胞增殖及周期的影响；Western blot及细胞免疫荧光实验找出TUBB4B沉默和过表达后发生表达改变的信号通路因子，并在细胞水平上进行标记验证。结果 GC-2中与NC-KD（NC-OE）组相比，TUBB4B沉默和过表达后，CCP1在mRNA和蛋白水平上的表达均发生一致的性改变（P<0.05）；同样CCP1敲减和恢复表达后与NC组相比，TUBB4B的表达也随之发生一致的性改变（P<0.05）。CCK8和流式细胞术实验发现TUBB4B敲减和过表达对GC-2的增殖速率和细胞的周期无明显改变。Western blot和细胞免疫荧光实验显示TUBB4B敲减和过表达后，细胞中核因子κB（NF-κB）信号通路关键蛋白：p65，p-p65与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路关键蛋白：ErK1/2，p-ErK1/2会发生相应的明显改变（P<0.05）；而CCP1敲减后会明显影响PolyE表达（P<0.05）。结论 在GC-2细胞中TUBB4B与CCP1表达相互调控为正向作用，且CCP1对TUBB4B具有去谷氨酰化修饰作用，TUBB4B参与初级精母细胞中NF-κB和MAPK信号通路的调控。

• 头颈癌放疗计划剂量分布的预测方法：基于深度学习的算法

  滕 琳, 王 斌, 冯前进

  目的 研究一种基于深度学习的算法，实现头颈癌放疗计划剂量分布的自动预测。方法 本文提出一种射线束剂量肢解学习（BDDL）方法，以级联网络作为基本方法，通过肿瘤分割掩膜PTV和预定义的射线束角度等信息，拟合射线束的传送方式（“射线束分割掩膜”）作为卷积神经网络的输入，将预测全局空间剂量分布肢解为多个沿着射线束方向的子剂量分布图。此过程可将一个困难任务肢解为多个简单的子任务，使模型更关注于局部细节特征的提取。通过射线束投票机制将多个子剂量分布融合为一个全局空间剂量分布。另外，引入感兴趣区域ROIs内剂量分布特征和剂量边界图作为网络学习的约束条件，使网络更加关注ROIs和剂量边界区域特征的提取。利用OpenKBP-2020挑战公开的头颈癌放疗计划数据集，获得BDDL方法在剂量分布预测的精确性，并进行消融实验分析。结果 本研究提出的方法在量化指标Dose score和DVH score分别取得2.166和1.178（P<0.05），预测精度优于目前最先进方法。与挑战第1名方法相比，本文方法使Dose score和DVH score分别提升26.3%和30%。消融实验结果显示BDDL方法各组成部分的有效性。结论 本研究提出的BDDL方法利用了射线束的传送方式和ROIs内剂量分布等先验信息建立剂量预测模型，相比于现有方法是可解释的和可靠的，有望将其应用于临床放疗中。

• 乙醛脱氢酶2基因rs671位点多态性与化疗所致的恶心呕吐相关

  杨 群, 刘晓鑫, 蒋玉娜, 马进安

  目的 探寻乙醛脱氢酶2（ALDH2）基因rs671位点单核苷酸多态性与化疗所致恶心呕吐的相关性。方法 选择恶性肿瘤首次住院化疗的90例中国患者，多时段观察收集三联止呕方案下患者接受多西他赛联合顺铂化疗方案后120 h内化疗所致恶心呕吐（CINV）的发生情况。问卷采集所有患者的年龄、性别、肿瘤分期、习惯性饮酒、晕动症史、孕吐史、化疗前平均睡眠时间等的资料，并对其ALDH2基因rs671位点进行基因型检测。利用效用程序计算遗传连锁分析Hardy-Weinberg平衡检验。采用SPSS22.0分析ALDH2基因rs671位点多态性及其他因素与CINV间的关系。结果 多西他赛联合顺铂化疗方案首次化疗恶性肿瘤患者CINV发生率为48.9%；单因素分析显示ALDH2基因rs671位点多态性与CINV相关（P<0.05）；Logistic回归分析显示rs671位点突变型（OR：3.019，95% CI：1.056~8.628，P<0.05）、化疗前平均睡眠时间≤6 h（OR：2.807，95% CI：1.033~7.628，P<0.05）是影响多西他赛联合顺铂化疗方案首次化疗恶性肿瘤患者CINV发生情况的相关因素。结论 ALDH2基因rs671位点突变是影响CINV发生情况的相关因素，需进一步明确其内在影响机制，以更加精准、有效地管控临床CINV发生情况。

• 多模态MRI影像组学可预测弥漫性较低级别胶质瘤的1p/19q共缺失状态

  卢明君, 屈耀铭, 马安东, 朱建彬, 邹 霞, 林耕耘, 李榆欣, 刘昕孜, 温志波

  目的 应用多模态MRI影像组学特征无创性预测弥漫性较低级别胶质瘤1p/19q共缺失状态。方法 收集2015年10月~2022年9月经病理证实为弥漫性较低级别胶质瘤的104例患者的MRI数据，并从T2WI、T1WI、FLAIR、对比增强T1WI和DWI序列提取535个组学特征，包括70个形态学特征，90个一阶统计学特征以及375个纹理特征。构建逻辑回归（LR）、基于逻辑回归的最小绝对收缩和选择算子（LRlasso）、支持向量机（SVM）和线性判别分析（LDA）模型，经十折交叉验证后，比较4组模型的预测效能。两位影像医师根据MRI图像来预测弥漫性较低级别胶质瘤1p/19q共缺失状态。采用受试者工作特性曲线（ROC）来评估影像组学模型和影像医师预测效能。结果 LR、LRlasso、SVM、LDA模型在验证集的AUC值分别为0.833、0.819、0.824、0.819，差异不具有统计学意义（P>0.1）。4 组影像组学模型预测效能均高于住院医师（AUC=0.645，P=0.011、0.022、0.016、0.030），并与主治医师相仿（AUC=0.838，P>0.05）。结论 多模态MRI影像组学模型可以非侵入性地预测弥漫性较低级别胶质瘤1p/19q共缺失状态。

• 聚乙二醇干扰素-α2b治疗骨髓增殖性肿瘤的疗效及安全性

  罗冬梅, 罗 洁, 梁瀚尹, 何哲柔, 陈 红, 温紫玉, 王 蔷, 周 璇, 刘晓力, 许 娜

  目的 评价聚乙二醇干扰素-α2b对慢性骨髓增殖性肿瘤患者的临床疗效及不良反应。方法 回顾性分析107例慢性骨髓增殖性肿瘤病例，其中包括95例原发性血小板增多症（ET），12例真性红细胞增多症（PV），接受聚乙二醇干扰素-α2b治疗12月以上，分析其临床数据，评价疗效和不良反应。结果 接受聚乙二醇干扰素-α2b治疗后，ET及PV患者均获得较高的血液学缓解率（P0.05），脾脏长厚径（脾脏指数）下降13.5%（95% CI：8.5%~18.5%），获得血液学缓解的患者MPN10评分下降较为显著（P<0.01）。PV患者 JAK2V617F等位基因突变负荷中位值由67.23%（49.6%~84.86%）下降至19.7%( 0.57%~74.6%)（P<0.05）；ET患者 JAK2V617F突变定量阳由48.97%（0.45%~74.24%）下降至22.1%（0.33%~65.42%）（P<0.05）。ET和PV患者观察到轻微不良反应（1-2级），差异无统计学意义。治疗期间血栓事件发生率为2.8%。未观察到严重不良反应。结论 聚乙二醇干扰素-α2b治疗PV和ET获得较高的外周血细胞缓解率，具有缩脾疗效，并降低JAK2V617F基因突变负荷，不良反应轻微，多数患者可耐受。

• 放疗计划定量评估在宫颈癌外照射精准放疗流程管理中的应用

  郭雨军, 李 婷, 杨 鑫, 祁振宇, 陈 利, 黄思娟

  目的 通过对宫颈癌外照射放射治疗计划的量化评估，探究放疗计划中存在的问题以指导临床，降低出错几率，提高放疗计划质量，完善放疗流程。方法 选取2019年5月~2022年1月在中山大学肿瘤防治中心进行放射治疗的227例宫颈癌患者，将经临床批准且实施的放疗计划通过计划系统至Plan IQTM工作站。根据ICRU83号报告、GEC-ESTRO工作组的推荐指南及本中心临床要求制定评估指标，经高资历临床医生批准后对计划进行量化评估。总结记录放疗计划中存在的问题，同时，对评分较低的计划重新再计划，分析再计划前后的差异性。结果 通过对277例宫颈癌放疗计划分析得出：（1）靶区得分不及格主要是大体肿瘤GTV、计划靶区PGTV（CI、V66Gy），分别为10.6%、65.2%、1%。得分0的有：计划靶区PGTV（CI）、大体肿瘤GTV、计划靶区PCTV（D98%、HI），分别为0.4%、10.1% 、0.4%、0.4%。OARs中不及格的主要是肠道（直肠、小肠、结肠），比例≥20.7%。且直肠、小肠、结肠、肾、股骨头存在得分为0的情况；（2）资深剂量师在PGTV（V60 Gy、D98%）、PCTV（CI）、CTV（D98%）上优于初级剂量师（P≤0.046），且在脊髓和小肠的保护方面一致性优于初级剂量师（P≤0.034）；（3）俯卧位组计划在满足靶区要求的情况下，肠道的剂量明显低于仰卧位组计划（P<0.05）。选择得分低的20例放疗计划进行再计划，结果再计划靶区的GTV（Dmin）、PTV（V45 Gy、D98%）高于原计划（P<0.05）。在OARs中，小肠（V40 Gy和V30 Gy）、结肠（V40 Gy和V30 Gy）、膀胱（D35%）的剂量均明显低于原计划（P<0.05）。结论 放疗计划的量化评估在提高放疗计划质量的同时，可实现放疗计划质量及放疗流程的风险管理。

• 抑郁样小鼠额叶体积的减少与脑源性神经营养因子表达的下降有关

  崔维维, 龚莉雅, 陈纯辉, 唐佳渝, 金 欣, 李紫欣, 靖林林, 文 戈

  目的 研究抑郁样小鼠灰质体积的变化及其可能的内在机制。方法 将24只6周龄C57小鼠随机分为对照组（n=12）与造模组（n=12），利用慢性不可预知温和刺激（CUMS）对小鼠进行35 d的抑郁造模。通过小动物磁共振对两组小鼠进行成像,观察抑郁小鼠较对照组小鼠灰质体积的结构变化。利用免疫印迹与免疫荧光染色的方法观察小鼠相应皮质脑源性神经营养因子（BDNF）的表达情况。结果 造模组小鼠较对照组小鼠在矿场实验中在中央位置的行走距离下降（P<0.05），在强迫游泳实验中不动时间增加（P<0.05）。小动物磁共振成像结果显示，造模组小鼠的额叶皮质体积下降（P<0.001，当团块水平≥10756时，过P=0.05的FDRc矫正）。在蛋白印迹实验中，额叶皮质内成熟BDNF的表达下降（P<0.05）；免疫荧光染色显示，BDNF 在造模后表达下降，并且VBM 分析得到的差异团块的体积大小与蛋白印迹实验中成熟BDNF 表达水平的高低存在相关（P<0.05）。结论 抑郁造模后小鼠额叶皮质体积的下降与额叶皮质内成熟BDNF 表达下降有关。

• 药物基因检测在PLA2R相关性膜性肾病患者治疗中的效果

  谭婷婷, 郑义侯, 李 芸, 曾又佳

  目的 本研究旨在探索药物基因检测对PLA2R相关性膜性肾病相关药物治疗的疗效及安全性的指导作用，以期为PLA2R相关性膜性肾病患者提供个体化精准药物治疗方案。方法 选取2019年1月~2021年10月在深圳市中医院肾病科住院的63例PLA2R相关性膜性肾病患者，其中33例为药物基因指导组，患者用药前均进行药物基因检测，通过筛选免疫抑制药物基因敏感性靶点给予免疫抑制药物，30例为对照组，患者按照指南经验性给予免疫抑制药物。回顾性分析两组人群免疫抑制药物的临床疗效及不良反应。比较两组患者性别、年龄、24 h尿蛋白定量、血清白蛋白、肾功能、血清抗磷脂酶A2受体抗体等，采用配对样本的t检验比较两组人群给药3月后，血清抗磷脂酶A2受体抗体、24 h尿蛋白定量、血清白蛋白、肾功能的差异；以及两组治疗前后的差异。结果 药物基因指导组33例患者中，环孢素表现为GG型的占51.5%，他克莫司表现为AG型的占61.6%，环磷酰胺表现为纯和缺失占51.5%、表现为AA型占63.6%。给药3月后血清抗磷脂酶A2受体抗体、24 h尿蛋白定量、血清白蛋白，药物基因指导组较对照组显著改善，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 通过药物基因检测技术，个体化精准给予免疫抑制药物，有利于PLA2R相关性膜性肾病患者更精准地控制蛋白尿、血清抗磷脂酶A2受体抗体，提升血清白蛋白。