南方医科大学学报杂志

南方医科大学学报杂志2021年第8期

• 小核非编码RNA 7SK 128-179截短体通过下调CDC6抑制胚胎干细胞的体外增殖

  陈 蕊, 张玉荣, 陈 鹏, 庞依心, 李宏宝, 陈子溦, 张小用, 张鸿毅, 李武军

  目的 探讨小核非编码RNA 7SK在胚胎干细胞（ESCs）增殖中的作用，为原始侏儒症疾病的早期诊治提供靶点。方法 利用CRISPR/Cas9系统转染ESCs，通过PCR产物测序和甘油梯度分析鉴定每个单克隆细胞系获得7SK 128-179 突变体。使用慢病毒系统敲除CDK9，然后通过Western blotting分析敲除效率和相关通路蛋白的变化。结果 CRISPR/Cas9系统转染后，ESCs中出现128-179 nt缺失突变的7SK，该突变导致ESCs增殖缺陷。7SK 128-179 nt突变的ESCs中LARP7和CDC6的蛋白水平显著下调，通过干预CDK9的活性发现7SK对ESCs增殖的调控作用依赖于CDK9的活性。结论 7SK 128-179 nt截短体可通过下调 CDC6 严重影响ESCs的增殖，且这一过程依赖于CDK9活性，提示7SK截短突变可作为侏儒症的早期筛查和治疗靶点。

• 蒙药七味清肝散抗肝纤维化的作用机制：基于UHPLC-TOF-MS和网络药理学方法

  张春艳, 颜羽昕, 高晓阳, 马月宏

  目的 系统阐明蒙药七味清肝散化学成分组成，运用网络药理学探讨其关键靶点和相关通路，并通过实验进一步明确其抗肝纤维化的作用机制。方法 对蒙药七味清肝散进行UHPLC-TOF-MS测定及成分分析；在Swiss Target Prediction数据库筛选出蒙药七味清肝散相关靶点；在治疗靶点数据库 TTD 和 GeneCards 数据库筛选出肝纤维化相关靶点；通过Venny.2.1.0取交集获得蒙药七味清肝散抗肝纤维化靶点，通过STRING数据库进行蛋白互作分析，在Metascape平台进行GO功能和KEGG通路分析，运用AutoDock软件对核心靶点和活性成分进行分子对接验证；通过动物模型实验和离体细胞实验验证蒙药七味清肝散抗肝纤维化的作用机制。结果 共鉴定出化学成分45个，包括黄酮类、生物碱、香豆素、萜类、酚类、脂肪酸等。通过网络药理学分析，获得蒙药七味清肝散抗肝纤维化靶点62个，其中核心靶点10个。GO富集分析共涉及生物过程（BP）、细胞组分（CC）、分子功能（MF）三个方面。KEGG富集结果显示，PI3K/Akt、Rap1 、MAPK、AMPK、PPAR等是参与肝纤维化发生发展的通路。通过分子对接验证了活性成分 Quercetin、Luteolin、Kaempferol 分别与Akt1、PIK3R1、MAPK1紧密结合。在动物模型实验中，通过Masson染色观察出蒙药七味清肝散给药组可以使纤维组织增生减少，炎症细胞浸润减少，使纤维化的肝脏组织得到改善。Western blotting结果提示，蒙药七味清肝散可以使肝纤维化标志因子α-SMA、Collagen1（P<0.01）和PI3K、Akt蛋白表达量下降（P<0.01）；在离体细胞实验中，蒙药七味清肝散含药血清可以导致HSC-T6凋亡率增加。结论 蒙药清肝散通过多成分、多靶点、多通路的形式发挥抗肝纤维化的作用，作用机制可能参与调控PI3K、Akt等关键靶点，参与调控细胞凋亡和能量代谢。

• 大鼠膝骨关节炎模型中高迁移率族蛋白1的高表达机制

  梅 伟, 洪博文, 黄桂成

  目的 研究膝骨关节炎病理进程中滑膜成纤维细胞（FLSs）焦亡与其释放高迁移率族蛋白1（HMGB1）的分子机制。方法在动物实验中，将SD大鼠利用随机数字表法分为2 组，6只/组，空白对照组（无任何处理），膝骨关节炎组（膝骨关节炎模型），使用前交叉韧带切断法（ACLT）建立大鼠膝骨关节炎模型，通过HE染色及Mankin'评分观察大鼠膝关节软骨的破坏情况，通过蛋白免疫印迹法检测膝关节滑膜组织中细胞焦亡相关的蛋白和HMGB1蛋白的表达情况。在细胞实验中，将细胞随机分为3组，空白对照组（等量的PBS处理），细胞焦亡组（LPS+ATP处理），小干扰RNA转染组（LPS+ATP+siRNA处理）。使用脂多糖+三磷酸腺苷（LPS+ATP）诱导滑膜成纤维细胞发生焦亡，分别使用不同的小干扰RNA抑制滑膜成纤维细胞发生焦亡，使用RT-qPCR验证不同的小干扰RNA抑制NLRP1、NLRP3 、ASC和caspase-1的转染效果，通过Western blot检测滑膜成纤维细胞中细胞焦亡相关的蛋白和HMGB1蛋白的表达情况；使用ELISA检测细胞上清中HMGB1的蛋白水平。结果 动物实验中，与空白对照组相比，膝骨关节炎组滑膜组织中焦亡相关的蛋白及HMGB1蛋白表达明显升高（P<0.05），软骨组织Mankin'评分明显升高（P<0.05）；细胞实验中，小干扰RNA能够明显抑制NLRP1、NLRP3、ASC和caspase-1的mRNA表达（P<0.05），细胞焦亡组中细胞焦亡相关的蛋白及HMGB1蛋白表达明显高于空白对照组和小干扰RNA转染组（P<0.05），各细胞焦亡组细胞上清中HMGB1的蛋白水平明显高于空白对照组和小干扰RNA转染组（P<0.05）。结论 在膝骨关节炎病理进程中，NLRPs炎性小体介导的滑膜成纤维细胞焦亡可促进HMGB1的大量释放，这与细胞焦亡下游因子caspase-1蛋白的活化有关。

• 2-花生四烯酸甘油对海人酸诱导损伤的大鼠尾状核神经元电压门控钠电流的调制作用

  陆永利, 朱时钰, 邹梓良, 何 治, 杨红卫

  目的 探讨内源性大麻素2-花生四烯酸甘油（2-AG）对海人酸（KA）损伤的大鼠尾状核神经元电压门控钠通道电流（INa）的调制作用及其分子机制。方法 原代培养大鼠尾状核神经元，分为空白对照组、KA组、2-AG+KA组、RIM（CB1受体拮抗剂）+2-AG+KA组。培养7 d后，各组细胞于培养基中处理12 h；其中，2-AG+KA组和RIM+2-AG+KA组在添加2-AG、RIM 30 min后添加KA。应用全细胞膜片钳技术检测大鼠尾状核神经元电压门控钠通道电流：包括各组电流密度的变化、通道的电流-电压特性、通道的激活动力学特性和失活动力学特性。结果 在培养的大鼠尾状核神经元中，与对照组相比，KA显著增加神经元电压门控钠通道电流密度（P=0.009）；并使VGSCs的激活电压曲线向超极化方向偏移，半激活电压绝对值明显增大（P=0.008）。与KA组相比，直接给与2-AG提高2-AG水平可阻止KA诱导的钠电流密度增加（P=0.009）和钠电流激活曲线超极化方向移动（P=0.009），且2-AG的这种作用是通过CB1受体依赖性途径介导的。2-AG本身对尾状核神经元电压门控钠通道电流密度、激活及失活等电流特性均不产生效应。结论 2-AG可通过CB1受体途径调控尾状核神经元VGSCs电流朋而起到神经保护作用。

• 原花青素B2通过调控P13K/Akt/Nrf2信号通路减轻氯氰菊酯所致神经元损伤

  周礼华, 常见荣, 高扬丽, 王朝凯

  目的 探讨原花青素B2（PCB2）是否通过调控P13K/Akt/Nrf2信号通路保护氯氰菊酯（CYP）导致的神经元氧化损伤。方 法 原代培养C57BL/6小鼠大脑皮层神经元，将细胞随机分成5组：正常对照组；PCB2处理组（将5 μg/mL的PCB2与细胞共培养24 h）；CYP暴露组（将50 μmol/L的CYP与细胞共培养24 h）；PCB2预处理组（将5 μg/mL的PCB2 与细胞预处理30 min后加入CYP 50 μmol/L共培养24 h）；LY294002处理组（先将20 μmol/L的 LY294002与细胞预处理30 min，然后加入PCB2预处理30 min，后与CYP共培养24 h）。采用CCK-8分析各组细胞活性，采用荧光探针DCFH-DA及流式细胞术检测细胞内ROS水平，通过Hoechst 33342观察细胞核形态变化，采用JC-1检测线粒体膜电位异常，利用Western blot检测Nrf2、HO-1、p-Akt、Akt蛋白表达。结果 CYP暴露降低细胞活性（P<0.001），引起线粒体膜电位下降、促使细胞核出现固缩、浓染等凋亡特征，导致ROS产生异常。PCB2预处理提高细胞存活率（P=0.006），改善细胞核形态异常，逆转CYP导致的线粒体膜电位下降，减弱细胞内ROS产生。CYP暴露引起Nrf2核易位，Nrf2、HO-1、p-Akt蛋白表达上调（P<0.001）。PCB2预处理调节Nrf2、HO-1、p-Akt蛋白过度表达。抑制P13K/Akt信号通路消除了PCB2对CYP诱导损伤的保护作用（P<0.05）。结论 PCB2通过激活P13K/Akt信号通路，调控Nrf2/ARE通路，减轻CYP所致小鼠大脑皮层神经元氧化损伤。

• 褪黑素通过激活Nrf2信号和抑制炎症反应减轻小鼠心脏缺血再灌注损伤

  孔令恒, 徐臣年, 孙 娜, 梁 飞, 魏 明, 苏兴利

  目的 探讨褪黑素（Mel）激活Nrf2信号抑制炎症反应改善小鼠心脏缺血再灌注（IR）损伤的作用。方法 采用小鼠冠状动脉左前降支结扎，缺血30 min，再灌注2 h或24 h模拟缺血再灌注模型，采用随机数字表法将C57/bl6小鼠随机分为4组：假手术组（Sham）、缺血再灌注组（IR）、褪黑素处理缺血再灌注组（Mel+IR）和褪黑素联合Nrf2抑制剂ML-385处理缺血再灌注组（Mel+ML-385+IR）。伊文氏蓝/TTC染色检测心肌梗死面积，ELISA检测血清中LDH含量，超声评价心脏功能，Western blot检测Bax、Bcl2、Nrf2及其底物NQO-1和HO-1以及炎症分子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达，TUNEL染色观察细胞凋亡率。结果 和Sham组相比，IR组心肌梗死面积和血清中LDH含量明显增加，心脏功能降低，Bax表达增加而Bcl2表达减少，细胞凋亡率增加，TNF-α、IL-1β、IL-6的表达显著增加（P<0.01），同时，Nrf2、NQO-1、HO-1的表达明显降低（P<0.01）；而给予Mel处理后，可显著减小心肌梗死面积，降低血清中LDH含量，改善心脏功能，减少Bax表达并增加Bcl2表达，减小细胞凋亡率，降低TNF-α、IL-1β、IL-6表达（P<0.01），上调Nrf2、NQO-1和HO-1的表达（P<0.01）；然而，ML-385可明显阻断Mel对心肌缺血再灌注的保护作用和对Nrf2信号的调控。结论 Mel改善小鼠心脏缺血再灌注损伤，其机制与激活Nrf2信号，降低炎症反应有关。

• 神经调节蛋白2高表达于不同级别胶质瘤组织并通过Akt信号调控胶质瘤细胞GFAP表达

  赵炜疆, 林佳哲

  目的 探讨神经调节蛋白2（NRG2）在胶质瘤中的表达及其在胶质瘤发生发展中的作用。方法 通过GEPIA数据库比较分析与人正常对照组相比，低级别胶质瘤（LGG，n=518）和胶质母细胞瘤（GBM，n=163）样本中NRG2和GFAP基因表达水平变化，并分析LGG和GBM样本中两个分子与患者生存率的关系，以及两个分子表达相关性。获取人胶质瘤组织芯片样本，包含癌旁正常组织10个、LGG组织48个、GBM组织20个；使用免疫组织化学染色观察不同级别人胶质瘤组织芯片样本中NRG2表达水平变化情况，并使用免疫荧光双标法观察NRG2与GFAP的共定位情况。采用Western blot检测Akt抑制剂Perifosine对NRG2调控GFAP表达的影响。结果 NRG2在LGG和GBM样本中均存在高表达，以LGG较为显著（P<0.01）。GBM样本中， 低NRG2水平患者的总体生存率在30月之后略高于高NRG2水平患者。 在LGG样本中，NRG2与GFAP基因表达水平呈负相关（P<0.01），而在GBM样本中则呈正相关（P<0.01）。免疫荧光染色显示LGG样本中NRG2与GFAP多共定位于同一肿瘤细胞，而在GBM样本中则多表达于不同肿瘤细胞。NRG2促进U-87 MG胶质母细胞瘤细胞中GFAP表达，该作用可被Akt抑制剂Perifosine显著抑制（P<0.01）。结论 NRG2可高表达于不同级别胶质瘤组织中，可能部分通过Akt信号调控胶质瘤细胞GFAP表达，影响患者生存率。

• Bax抑制因子1可抑制体外培养的大鼠血管平滑肌细胞的钙化

  陈韦任, 杨 霞, 周玉杰, 马 茜, 吴雪萍, 沙 媛, 钱 赓

  目的 探讨Bax抑制因子1（BI-1）对血管平滑肌细胞钙化的具体作用机制。方法 使用β磷酸甘油和氯化钙诱导大鼠主动脉血管平滑肌细胞建立钙化模型。将模型分为对照组（使用常规培养基）、BI-1过表达组（过表达BI-1蛋白后使用常规培养基）、钙化组（使用钙化培养基）、钙化+BI-1过表达组（过表达BI-1蛋白后使用钙化培养基）4组。运用茜素红S染色测定血管平滑肌细胞钙沉积，酶联免疫吸附法测定细胞碱性磷酸酶活性和钙含量，Western blot法测定Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达水平。结果（1）随着钙化诱导时间的延长，BI-1蛋白表达明显下降，结果具有明显差异性（P=0.001）；（2）使用质粒转染方法过表达BI-1蛋白后，细胞钙含量、碱性磷酸酶活性明显降低（P=0.0006），Runt相关转录因子2和骨形态发生蛋白2表达明显下降（P=0.0001），血管钙化减轻；（3）钙化诱导后血管平滑肌细胞凋亡率增加，而过表达BI-1后细胞凋亡率明显减少（P=0.01），半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3水平下降（P=0.0003）。结论 BI-1抑制细胞凋亡、钙磷沉积和细胞骨型分化起到减轻血管钙化作用。

• 负载成骨生长肽的静电纺丝 PLGA 支架可加速大鼠颅骨缺损再生

  王 聪, 桑伟林, 陈燕敏, 宋滇文

  目的 从体内外水平评价一种负载了成骨生长肽（OGP）的聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）纤维支架作为新型骨组织工程支架的可行性。方法 采用静电纺丝法制备支架，一共有4组。对照组：纯PLGA支架（不含OGP的 PLGA支架）；实验组：0.1%OGP@PLGA（电纺含有0.1%OGP的PLGA溶液制得的支架）、0.2%OGP@PLGA（电纺含有0.2%OGP的PLGA溶液制得的支架）、0.4%OGP@PLGA（电纺含有0.4%OGP的PLGA溶液制得的支架）。通过扫描电子显微镜（SEM）观察支架的微观结构，将材料浸泡在PBS中观察支架中OGP的释放规律，CCK-8和活死细胞染色实验评估支架的体外生物相容性，ALP活性检测和ARS染色评估支架上大鼠骨髓间充质干细胞（rBMSCs）的体外成骨分化水平，在雄性SD大鼠上制备直径为5 mm大小的颅骨缺损模型，将支架植入8周后利用Micro-CT检测、HE染色和Masson染色分析缺损处的骨修复情况。结果 SEM结果显示，支架具有类细胞外基质（ECM）的纤维结构，负载的OGP能持续从支架内缓释长达1月以上，将细胞与支架共培养4、7 d后，负载高浓度OGP（OGP浓度大于2%）的PLGA支架细胞增殖率显著高于纯PLGA支架（P<0.01），ALP活性检测结果显示第14天时，在负载0.4%含量OGP的PLGA支架上rBMSCs的ALP活性最高（P<0.01）。ARS染色结果显示，细胞14 后在负载0.4% OGP的PLGA支架上分泌的钙化结节最多。Micro-CT扫描结果发现，负载0.4% OGP的PLGA组材料周围较其他两组有更多的新骨生成（P<0.01）。此外组织学HE和Masson染色结果和以上结果类似。结论 负载OGP的静电纺丝PLGA支架有效模拟了体内细胞外基质，具有良好的生物相容性及促成骨分化能力，是一种具有潜在应用价值的新型骨组织工程支架。

• 体育锻炼与缺血性卒中复发风险存在因果关系：基于潜在结果理论

  林奕蝶, 张柏杨, 胡美婧, 徐铭涵, 秦成洁, 朱彩蓉

  目的 基于潜在结果理论，采用多重插补法探讨体育锻炼与缺血性卒中复发风险之间的因果关系。方法 收集2010年7月 ~2018年12月入住四川大学华西医院、随访时间满1年且具有行动能力的首发缺血性脑卒中幸存者生存资料。共纳入636例首发缺血性脑卒中患者，将观察对象分为两组：低体育锻炼水平组（LPE）244人，中高体育锻炼水平组（MHPE）392人。采用潜在结果理论将是否复发和复发时间作为每个观察对象在不同体育锻炼水平下的潜在结果，由于实际只能观察到每个个体在一种暴露水平下的潜在结果，因此在个体反事实的潜在结果必然缺失的条件下，采用多重插补法建立缺失结果的预测矩阵并进行填补，构建因果推断模型，估计体育锻炼对卒中复发的平均因果效应。结果 随访期间共148名患者卒中复发，中位复发时间为24个月，累计复发率高达23.3%。对比多重插补前后数据集的分类散点图及核密度图，多重插补的结果没有出现异常点，潜在结果变量的边际分布较为一致，插补效果稳定。基于插补后的10个完整数据集构建因果估计模型并对所得结果进行合并，得到体育锻炼对卒中复发的平均因果效应为ACE=0.578，方差为0.039，即中高体育锻炼水平的首发缺血性卒中幸存者的复发风险是低体育锻炼水平者的0.578倍（95% CI：0.186-0.970，P=0.012）。结论 体育锻炼与缺血性卒中复发风险之间存在因果关系，即卒中后参与中高强度水平的体育锻炼可以降低卒中复发的风险。

• 槲皮素治疗心力衰竭的分子机制:基于网络药理学与分子对接方法

  谭 鑫, 鲜 维, 陈永锋, 李小荣, 王其一, 康品方, 王洪巨

  目的 基于网络药理学和分子对接研究槲皮素治疗心力衰竭(HF)的分子机制。方法 利用TCMSP、PharmMapper、CTD和GeneCards数据库得到槲皮素和HF相关靶点，通过在线Venn网站得到槲皮素-HF交集靶点，构建蛋白质相互作用网络后导入Cytoscape3.7.2得到槲皮素治疗HF的核心靶点。通过R包进行GO、KEGG通路富集分析，利用Auto Dock Vina进行分子对接。通过蛋白质免疫印迹检测槲皮素处理HF细胞模型的AKT1、Phospho-AKT（Ser473）、eNOS、MMP9和Caspase-3的蛋白水平。结果 分析得到80个槲皮素-HF交集靶点，槲皮素治疗HF核心靶点5个：AKT1、CASP3、MAPK1、MMP9和MAPK8。GO分析中，生物过程集中在对肽类激素的反应、磷脂酰肌醇介导的信号传导、脂多糖的反应、对细菌来源分子的反应和炎症反应的调节等。KEGG通路富集分析表明富集最显著的信号通路为：脂质与动脉粥样硬化通路、癌症中的蛋白多糖、PI3K-AKT信号通路、糖尿病心肌病和MAPK信号通路。分子对接显示槲皮素对5个核心靶点具有良好的结合活性。蛋白质免疫印迹结果显示，100 μmol/L 槲皮素可明显降低心力衰竭细胞AKT1、Phospho-AKT（Ser473）、eNOS、MMP9和Caspase-3水平（P<0.01）。结论 槲皮素可能通过调节AKT1-eNOS-MMP9通路抗凋亡从而改善心力衰竭的病理变化。

• 溶酶体膜蛋白Sidt2缺失导致肝脏细胞自噬受损

  耿梦雅, 王李卓, 章 尧, 裴文俊, 漆梦湘, 杨 梦, 许家豪, 梁洋洋, 吕 坤, 何春玲, 高家林

  目的 研究溶酶体膜蛋白Sidt2缺失后对肝脏自噬的影响。方法 利用Crispr-Cas9技术构建Sidt2敲除的人肝脏（HL7702）细胞模型，对自噬关键蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、P62及自噬相关蛋白Atg5、Atg7、Atg12进行蛋白水平检测，同时使用免疫荧光方法对LC3B及P62进行共定位，检测自噬小体对P62货物蛋白的识别与封存以及自噬溶酶体的降解。对LC3B及LAMP1进行免疫荧光共定位，检测自噬小体与溶酶体融合过程。使用LysoTracker对酸性溶酶体进行示踪。结果 成功构建HL7702细胞Sidt2+/+组 及Sidt2-/-组，HL7702细胞Sidt2-/-组较Sidt2+/+组相比，自噬关键蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ及P62表达均增多（P<0.01），免疫荧光结果显示LC3B及P62亦明显增多（P<0.001），同时自噬相关蛋白Atg5、Atg7、Atg12表达减少（P<0.05）。LC3B与P62共定位降低，LC3B 与LAMP1共定位降低，酸性溶酶体数量减少（P<0.05）。结论 Sidt2基因的缺失导致人肝脏细胞自噬小体对P62货物蛋白的识别和封存障碍，同时酸性溶酶体数量减少、自噬小体与溶酶体融合障碍导致自噬溶酶体途径受阻，最终导致LC3B与P62发生堆积，肝脏细胞自噬受损。

• 血浆SEPTIN9甲基化水平检测有助于食管癌诊断和放疗敏感性预测

  孙巧玉, 刘 佳, 樊筱玓, 周咏春, 王效静, 崔 珍

  目的 探讨血浆mSEPT9对食管癌诊断的应用价值及其与放疗敏感性的关系。方法 选取2019年1月~2020年12月在蚌埠医学院第一附属医院放疗科接受根治性放疗的72例食管癌患者，运用PCR法分别检测患者放疗前及放疗后血浆mSEPT9，另以体检中心20例健康人作为对照。用受试者工作特征曲线（ROC曲线）评价mSEPT9对食管癌的诊断价值。用χ2检验分析mSEPT9与食管癌患者临床病理特征的关系。根据放疗疗效将食管癌患者分为放疗敏感组和不敏感组，比较放疗前两组患者mSEPT9差异。动态观察食管癌患者放疗前后mSEPT9变化，分别评价不同放疗敏感性组放疗前后mSEPT9差异。结果 mSEPT9诊断食管癌的灵敏度为62.5%，特异度为100%，ROC曲线下面积为0.813。mSEPT9与食管癌患者淋巴结转移、临床分期有关（P0.05）。放疗敏感组mSEPT9阳性率低于放疗不敏感组（53.06% vs 82.61%，P=0.016）。72例患者放疗后mSEPT9阳性率较放疗前显著下降（30.56% vs 62.5%，P<0.001），其中放疗敏感组放疗后mSEPT9阳性率较放疗前显著下降（14.29% vs 53.06%，P<0.001），不敏感组放疗后mSEPT9阳性率较放疗前无显著性差异（65.22% vs 82.61%，P=0.125）。结论 检测血浆mSEPT9有助于食管癌患者诊断和放疗敏感性预测。

• DR5介导的载多烯紫杉醇靶向脂质微泡联合超声靶向微泡破裂对人肝癌HepG2细胞凋亡及增殖的影响

  杨 健, 曾 妍, 吴小翎, 王志刚

  目的 探讨DR5介导的载多烯紫杉醇靶向脂质微泡联合超声靶向微泡破裂技术对人肝癌HepG2细胞凋亡以及Bcl-2、NF-κB、Caspase-8、DR5蛋白表达的影响。方法 体外培养HepG2细胞并分为9组：空白对照组（Con），药物组（Drug），药物联合超声组（Drug+US），空白微泡组（MBs），空白微泡联合超声组（MBs+US），载药微泡组（DLLM），载药微泡联合超声组（DLLM+US），DR5介导的靶向载药微泡组（DR5-DLLM），DR5介导的靶向载药微泡联合超声组（DR5-DLLM+US）。Drug、Drug+US、DLLM、DLLM+US、DR5-DLLM、DR5-DLLM+US组中的多烯紫杉醇以IC50的药物浓度（5 nmol/L）给药，Con组加入0.5 mL生理盐水，超声以0.5 W/cm2的声强辐照45s，分组处理后，继续培养细胞24 h，分别用CCK-8、TUNEL、流式细胞术检测各组细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期，并检测Bcl-2、NF-κB、Caspase-8、DR5的mRNA和蛋白表达水平。结果 与其他组相比，DR5介导的靶向载药微泡联合超声组对HepG2细胞的增殖抑制作用、凋亡诱导作用和G2/M细胞周期阻滞作用更强（P<0.001），且该组的Bcl-2 和 NF-κB mRNA 和蛋白表达水平明显降低（P<0.001），而 DR5 和 Caspase-8 的 mRNA 和蛋白表达水平明显升高（P< 0.001）。结论 DR5介导的载多烯紫杉醇靶向脂质微泡联合超声靶向微泡破裂技术可通过下调Bcl-2和NF-κB表达、上调Caspase-8和DR5表达，从而增强对人肝癌HepG2细胞周期阻滞、细胞增殖抑制和细胞凋亡诱导作用，因此有望成为一种新型、有效的肝癌超声靶向治疗方法。

• 低剂量脑灌注CT图像恢复方法：基于先验图像约束扩散张量

  牛善洲, 刘 宏, 刘沛沄, 张梦真, 邱 洋, 黎 钰, 谢国强, 刘国良, 卢绍辉

  目的 为减少脑灌注CT检查的辐射剂量，本文提出了一种基于先验图像约束扩散张量的低剂量脑灌注CT图像恢复方法。方法 脑灌注CT图像之间存在丰富的结构冗余信息，高质量的先验图像可以作为结构互补信息引入到低剂量脑灌注CT图像恢复过程中，抑制低剂量脑灌注CT图像中的噪声和伪影。首先，分别计算出先验图像和低剂量脑灌注CT图像的扩散张量，然后构造先验图像约束的扩散张量，并利用新构建的扩散张量对低剂量脑灌注CT图像进行滤波。结果 在数值体膜实验中，本文方法得到的CBF参数图像的SSIM值与FBP算法相比提高了63%。在临床实验中，本文方法得到的CBF参数图像的SSIM值 与FBP算法相比提高了45%。结论 数值体膜和临床数据实验结果表明本文方法在抑制低剂量脑灌注CT图像噪声和伪影的同时可以保持图像的结构细节特征，并且可以获取准确的脑血流动力学参数图像。

• 潜在的胚胎干细胞自我更新与多能性的调控基因的鉴定：基于随机森林算法

  曾彭归航, 唐秀晓, 吴庭芩, 田 奇, 李茫茫, 丁俊军

  目的 基于机器学习的方法整合多组学数据在小鼠胚胎干细胞（mESCs）中鉴定潜在的与干细胞自我更新及多能性相关的基因。方法 收集了mESCs的多组学数据，包括转录组、组蛋白修饰、染色质可及性、转录因子及结构蛋白在染色质上的结合等信息，比较了已知的干细胞自我更新及多能性基因与其他基因的信号差异。整合这些多组学数据，基于包含随机森林在内的多种机器学习分类器构建预测模型并进行了5折的交叉验证。输入的样本中2/3作为训练集用于训练模型，剩余的1/3作为测试集用于独立测试来衡量模型的表现。最终通过基因功能注释和细胞活力测定、克隆形成测定及细胞周期分析等细胞功能实验对模型预测的结果进行了验证。结果 已知的多能性与自我更新基因在多组学数据中有显著区别于随机基因的特征。使用这些数据的算法中随机森林构建的模型具有最好的表现，交叉验证的曲线下面积（AUC）为0.883±0.018，独立测试的AUC为 0.880±0.028。该模型鉴定出了893个潜在的自我更新与多能性相关基因，这些基因在基因功能注释上与已知基因类似，而敲低其中新发现的基因Cct6a会导致mESCs的细胞活性显著降低（P<0.0001），形成细胞克隆的数目显著减少（P<0.01），处于G1期的细胞数量显著增加（P<0.01）而处于S期的细胞数量显著减少（P<0.05）。另外，敲低Cct6a基因的mESCs无法被碱性磷酸酶染色。结论 基于多组学数据构建的机器学习模型可以预测潜在的自我更新与多能性相关调控因子且具有较好的效果。通过构建的模型发现了潜在的自我更新与多能性调控基因如Cct6a并进行了实验验证。

• 低CHA2DS2-VASc评分的非瓣膜性心房颤动患者的心房血栓形成的独立危险因素

  周萌萌, 陈金东, 王 昊, 席斯祺, 甘 田, 赵 亮

  目的 探讨入院时低CHA2DS2-VASc评分（男性≤1分，女性≤2分）非瓣膜性心房颤动（NVAF）患者心房血栓形成的危险因素。方法 采用回顾性研究方法收集2009年6月~2019年2月在上海交通大学附属胸科医院行经食管超声心动图检查的NVAF患者临床资料（10 382例）。纳入48例伴有血栓的NVAF患者作为实验组，240例无血栓NVAF患者作为对照组。对两组的基线特征、临床生化指标和超声心动图进行单因素分析及多因素Logistic回归分析，对指标进行Pearson相关分析。结果 两组研究对象基线资料差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组相比，伴有心房血栓患者的左心房内径增大（P<0.001），肥厚型心肌病比例更多（P<0.001），C反应蛋白（P<0.05）和尿酸（P<0.001）及红细胞分布宽度标准差（P<0.001）水平明显增高，差异均有统计学意义。其中左心房内径（P<0.001）、肥厚型心肌病（P<0.05）和C反应蛋白（P<0.05）是影响低评分患者心房血栓形成的独立影响因素。结论 左心房内径增大、肥厚性心肌病和C反应蛋白升高是低CHA2DS2-VASc评分的NVAF患者心房血栓形成的独立危险因素。临床中对合并上述危险因素的低评分NVAF患者应予积极抗凝，预防卒中发生。

• 眼底图像硬渗出物的分割算法：基于区域分类引导的小波Y-Net的EX分割

  张利云, 方智文 , 唐宇姣, 杨 丰

  目的 为消除视盘在硬渗出物(EX)分割过程中带来的影响提出了基于区域分类引导的小波Y-Net网络的EX分割算法。方法 该网络为端到端的眼底图像EX分割网络，通过区域分类引导EX分割联合实现了视盘区域检测和EX分割，有效地降低了视盘对EX分割的干扰。为了避免因下采样操作产生信息损失而导致微小EX区域分割失效的问题，该网络进一步引入了离散小波变换（DWT）和离散小波逆变换（IDWT）取代传统的池化下采样和上采样操作。同时，采用了基于残差连接的Inception模块获取多尺度特征。所提出的算法在IDRiD、e-ophtha EX数据库上进行训练和测试，并进行像素级评估。结果 区域分类引导的小波Y-Net网络在IDRiD、e-ophtha EX数据库上分别获得0.9858、0.9938的准确率以及0.9880、0.9986的受试者工作特征曲线下面积（AUC）。结论 本文提出的方法能够有效地规避视盘的影响，保留图像细节信息，提升EX的分割效果。

• 3种连续旋转镍钛系统对感染根管内粪肠球菌清除效果的比较

  游月华, 叶惟虎

  目的 比较新型连续旋转镍钛系统EZ Pass与两种传统的连续旋转镍钛系统（ProTaper Gold及ProTaper Next）对体外构建的上颌中切牙感染根管内粪肠球菌的清除效果。方法 选取因牙周病或正畸新鲜拔除的单根上颌中切牙51颗，建立根管内粪肠球菌感染模型。取1个感染样本进行脱矿、包埋、切片、Talor改良的Brown& Brenn技术染色及光镜下观察；将剩余的50个感染样本随机分为5组：EZ Pass组、ProTaper Gold组、ProTaper Next组、0.9% NaCl组及2% NaClO 组。在采用上述机械和化学手段清除根管内细菌前、后分别进行根管内取样，琼脂板菌落计数法定量检测各组根管内细菌减少率及对数减少值之间的差异。结果 根管表面可见广泛的粪肠球菌生物膜，大量的细菌渗入牙本质小管深层，最大渗透深度约为 475 μm。EZ Pass 组、ProTaper Gold组、ProTaper Next组和2% NaClO组根管内细菌减少率之间的差异无统计学意义（P>0.05），但均显著高于0.9% NaCl组（P0.05），但上述3组的对数减少值都高于2% NaClO组（P<0.05），后者显著高于0.9% NaCl组（P<0.01）。结论 EZ Pass的根管内细菌清除能力与ProTaper Gold和ProTaper Next相当，值得临床推广应用。

• 加温湿化高流量鼻导管吸氧可减少老年患者麻醉复苏期缺氧事件发生

  许立倩, 魏 宁, 单美娟, 汪子怡, 叶天成, 梁赛珍, 李 乐, 朱 强, 何路遥, 白建杰, 陈碧霞, 徐金东

  目的 探讨加温湿化高流量鼻导管吸氧在老年患者麻醉复苏期的应用的效果。方法 纳入178例行择期非心脏手术老年患者，采用SPSS 20.0软件生成数字随机序列，将患者随机分为加温湿化高流量鼻导管吸氧组（H组）和常规经鼻导管吸氧组（N 组），89例/组。所有患者送入麻醉复苏室后按复苏室常规流程行麻醉后复苏，气管导管拔除后H组给予加温湿化高流量鼻导管吸氧，N组给予常规鼻导管吸氧，两组均于吸氧10 min后行动脉血气分析并记录相关呼吸指标；吸氧期间观察并记录患者有无缺氧发生（氧饱和度<90%）及发生次数，是否再插管及不良反应（非计划入ICU，呕吐、误吸等）。结果 两组患者均在麻醉复苏室安全复苏并送回病房，其中仅1例常规鼻导管吸氧的患者需再次气管插管。H组与N组比较：缺氧事件发生率（3.4% vs.11.2%，P=0.044），动脉血氧分压[（161.96±51.21）mmHg vs.（114.35±43.60）mmHg，P<0.001]，氧合指数 [（398.76±231.86）vs. （324.10±194.16），P=0.021]。两组患者的平均呼吸频率、动脉血二氧化碳分压、血氧饱和度差异均无统计学差异。结论 加温湿化高流量鼻导管吸氧治疗应用于老年患者麻醉复苏期安全、效果良好，可减少气管导管拔除后缺氧事件的发生，提高动脉血氧分压，改善氧合。

• 新辅助同步放化疗对直肠癌微环境浸润免疫细胞的影响

  杨 群, 周春香, 韩 宸, 张 颖, 蒋玉娜, 李镇江, 马进安

  目的 检测新辅助同步放化疗（CRT）前后直肠癌组织中肿瘤浸润免疫细胞数量和表型的变化，并分析它们与患者临床病理参数之间的相关性。方法 采用免疫组织化学染色ElivisionTM Plus法，检测20例直肠癌患者新辅助CRT前后的活检标本和术后病理标本组织中CD3、CD4、CD8、CD56、Foxp3蛋白的表达水平。结果 新辅助CRT后直肠癌肿瘤组织中CD3（21.8% vs 48.8%，P<0.001）、CD4（16.5% vs 42.2%，P<0.001）、CD8（8.3% vs 33.4%，P<0.001）和CD56（0 vs 7.6%，P=0.012）的表达均较前升高；Foxp3（26.0% vs 15.3%，P=0.005）表达较前下降；CD4/CD8（2.7 vs 5.1）比值较前无明显变化。多因素分析显示新辅助CRT后CD3（HR= 0.16，P=0.028）、CD8（HR= 0.03，P=0.001）阳性细胞的增加与患者术后无复发生存期正相关。结论 直肠癌新辅助CRT后肿瘤组织中CD3、CD4、CD8、CD56阳性浸润免疫细胞比例较治疗前明显增加，Treg淋巴细胞比例则明显下降，CD3、CD8阳性T淋巴细胞数量增加的患者其术后无复发生存期延长。

• 人骨形态发生蛋白-2/人胰岛素样生长因子-1对钛种植体表面细胞的成骨效率的影响

  张 迪, 邓 甜, 罗 震, 朱安棣, 杨 勃, 钟惠兰, 李少萍, 杨晓喻

  目的 制备人骨形态发生蛋白-2（hBMP-2）/人胰岛素样生长因子-1（hIGF-1）涂层钛（Ti）片，探索其作为牙种植体的功效与机制。方法 将hBMP-2与hIGF-1两个生长因子涂覆到具有光滑表面的Ti上，比较两种生长因子包被的Ti与原始Ti在增强骨形成和骨整合的功效。通过扫描电子显微镜SEM和接触角测量，分别测定金属样品的表面特性。将MG63细胞种植于Ti上，MTT实验检测细胞增殖，茜素红实验检查细胞钙化结节，Elisa实验检测碱性磷酸酶，Western blot实验检测骨钙素与骨调素的表达。结果 SEM检测显示，包被了hBMP-2/hIGF-1的Ti，表面呈雪花辐射样。与原始Ti相比，hBMP-2/Ti、hIGF-1/Ti和hBMP-2/hIGF-1/Ti显示出较低的接触角（P=0.032，0.029，0.028），样本呈现良好的亲水性。MTT实验结果显示，MG63细胞能在hBMP-2/hIGF-1加持的钛片表面良好生长。茜素红实验显示，hBMP-2/hIGF-1的加持能提高MG63细胞的成骨效率（P<0.05）。Elisa实验显示，hBMP-2/hIGF-1能促进碱性磷酸酶的分泌（P=0.021，0.014）。Western blot 实验显示，hBMP-2/ hIGF-1的加持能诱导骨钙素与骨调素的表达（P<0.05）。结论 以hBMP-2和hIGF-1两种生长因子涂覆的Ti，能提高其表面细胞的成骨效率，可以作为一种种植材料进一步用于牙科实验。

• 3D-ASL与DSC-PWI在脑肿瘤灌注成像中的一致性分析

  陈世林, 王丽英, 王 莉, 郑长宝, 杨开志

  目的 对比分析三维动脉自旋标记（3D-ASL）和动态磁敏感对比增强扫描灌注成像（DSC-PWI）在脑肿瘤灌注中脑血流量测量的一致性。方法 19例脑肿瘤患者，其中胶质瘤9例，脑膜瘤5例，血管母细胞瘤2例、转移瘤2例，海绵状血管瘤1例。所有病例均经手术病理证实。术前均行常规磁共振平扫、增强扫描及 3D ASL和 DSC-PWI灌注成像，比较19例脑肿瘤患者57个感兴趣区脑血流量(CBF)与相对脑血流量(rCBF)的差异，评价两者之间的一致性。结果 3D ASL所测CBF与DSC 所测rCBF值两者有显著相关性（P=0.005），一致性较好。结论 3D-ASL与 DSC-PWI在评估脑肿瘤脑血流量方面具有一致性，3D-ASL可准确评估脑肿瘤灌注情况。