南方医科大学学报

作者：巩奇明, 姜 艳, 卢俊玲, 尤燕舞

关键词：巨噬细胞；极化；Fractalkine；Wnt/β-catenin信号通路,

目的 研究Fractalkine（CX3CL1，FKN）对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞免疫应答的作用机制。方法 体外培养RAW264.7细胞，使用慢病毒技术构建过表达FKN的稳定细胞珠。细胞分为8组：（1）空白对照组；（2）LPS组，细胞给予脂多糖（1 μg/mL，12 h）；（3）ICG-001组，细胞给与Wnt/β-catenin信号通路抑制剂ICG-001（10 μmol/mL，48 h）；（4）过表达FKN组；（5）ICG-001+LPS组，细胞给与ICG-001（10 μmol/mL预处理36 h）后，加入脂多糖（1 μg/mL，12 h）；（6）过表达FKN+LPS组，过表达FKN细胞给与脂多糖（1 μg/mL，12 h）；（7）过表达FKN+ICG-001组，过表达FKN细胞给予ICG-001（10 μmol/mL，48 h）；（8）过表达 FKN+ICG-001+LPS 组，过表达 FKN 细胞给与 ICG-001（10 μmol/mL 预处理 36 h）后，加入脂多糖（1 μg/mL，12 h）；应用CCK-8细胞增殖实验检测ICG-001作用于巨噬细胞中的安全浓度；应用酶联免疫吸附（ELISA）实验检测巨噬细胞上清液中M1型极化因子TNF-α和IL-6的含量；应用蛋白质免疫印记（WB）实验检测巨噬细胞中FKN、Wnt/β-catenin通路关键因子Wnt-4和β-catenin、M1型极化因子iNOS、TNF-α和IL-6的蛋白表达水平；应用免疫荧光（IF）实验检测巨噬细胞中M1型极化因子IL-6蛋白的定位。结果 过表达FKN的RAW264.7细胞中FKN的蛋白水平较空白对照组明显升高（P<0.01）。CCK-8实验显示ICG-001作用于RAW264.7细胞48 h的IC50为10 μmol/mL。与LPS组相比，ICG-001+LPS组上清液中TNF-α和IL-6的分泌量以及细胞内TNF-α、IL-6和iNOS蛋白含量均升高（P<0.05），而细胞内FKN、Wnt-4和β-catenin蛋白含量均显著降低（P<0.01）；EXFKN+LPS组上清液中TNF-α和IL-6的分泌量以及细胞内TNF-α、IL-6和iNOS蛋白含量均显著降低（P<0.01），而细胞内FKN、Wnt-4和β-catenin蛋白含量均显著升高（P<0.01）。与LPS组相比，ICG-001+LPS组中IL-6在细胞质中的定位增强，而EXFKN+LPS组中IL-6在细胞质中的定位受到抑制。结论 过表达FKN通过激活Wnt/β-catenin信号通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞M1型极化。

来源：2020年第12期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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