南方医科大学学报

作者：王金焱, 王晋秋, 顾 诠, 杨 艳, 马亚军, 朱 静, 张全安

关键词：微小RNA；磷脂酰乙醇胺结合蛋白1；肿瘤转移；乳腺癌,

目的 探讨miR-4443对乳腺癌转移的影响。方法 使用高通量测序技术测定检测3例乳腺癌患者原位癌组织及其配对的癌旁组织中miR-4443的表达。使用TCGA数据库验证miR-4443在乳腺癌组织以及正常乳腺组织中的表达水平。以MCF-7细胞（低侵袭性乳腺癌细胞）和MDA-MB-231细胞（高侵袭性乳腺癌细胞）为研究对象，采用RT-qPCR验证miR-4443在这两种细胞株中的表达水平。通过电转染法将miR-4443 mimics（miR-4443模拟物）、mimics-NC（miR-4443模拟物的对照物）或miR-4443inhibitors（miR-4443抑制物）、inhibitors-NC（miR-4443 抑制物的对照物）转染至不同的细胞株，利用RT-qPCR检测miR-4443在转染前后的表达水平，使用流式细胞分析仪分析 miR-4443 表达水平的变化对乳腺癌细胞凋亡的影响，使用划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-4443表达水平的变化对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。使用生物信息学软件预测miR-4443潜在的靶基因，并进一步使用双荧光素酶报告基因系统验证。采用RT-qPCR和Western blot分别检测不同细胞株中PEBP1（重组人磷脂酰乙醇胺结合蛋白1）在mRNA和蛋白水平的表达。结果 高通量测序技术检测发现在乳腺癌组织中miR-4443的表达远高于癌旁组织（P<0.01）。TCGA数据分析显示，与正常乳腺组织想比，miR-4443在乳腺癌组织中的表达升高（P<0.01）。RT-qPCR显示，与MCF-7细胞相比，MDA-MB-231细胞中miR-4443的表达升高（P<0.01）。与转染mimics-NC相比，MCF-7细胞转染miR-4443 mimics后，miR-4443的表达上调（P<0.01）；而转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞，其表达下调（P<0.01）。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照差异无统计学意义（P>0.05），并且转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照亦差异无统计学意义（P>0.05）。划痕实验及Transwell侵袭实验显示转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的迁移及侵袭能力减弱（P<0.01）。相反的，转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞迁移及侵袭能力加强（P<0.01）。生物信息学软件预测发现PEBP1可能是miR-4443的潜在靶基因且与转移的相关程度最高。进一步行双荧光素酶报告基因实验，验证PEBP1是miR-4443的靶基因（P<0.01）。RT-qPCR和Western blot显示，MDA-MB-231细胞中PEBP1在mRNA及蛋白中的水平均低于MCF-7细胞（P<0.01）。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞中，PEBP1 在mRNA及蛋白水平均低于对照（P<0.01）；转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞中，PEBP1 在mRNA及蛋白水平均高于对照（P<0.01）。结论 miR-4443通过抑制PEBP1的表达水平促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力，而抑制乳腺癌细胞中miR-4443的表达可能是未来潜在的治疗方法。

来源：2020年第12期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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