南方医科大学学报

作者：徐小惠, 李 锐, 曾 欣, 王 欣, 薛炳乾, 黄道超, 黄 轶

关键词：NDUFA13；基因敲除小鼠模型；NLRP3；自发性肝炎,

目的 构建线粒体蛋白（NDUFA13）基因肝特异性敲除小鼠，探讨NDUFA13表达失活在小鼠自发性肝炎病理进程中的作用及可能机制。方法 采用Cre/loxP转基因技术，将NDUFA13 flox基因编辑小鼠NDUFA13fl/fl与Alb-Cre转基因小鼠杂交，得到肝脏特异性NDUFA13杂合敲除（NDUFA13fl/-；Alb-Cre）小鼠。经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳，对鼠尾与肝脏DNA基因进行分型鉴定。以同窝NDUFA13fl/fl小鼠为对照，将肝脏特异性NDUFA13fl/-小鼠作为研究对象，10只/组，分别在4周龄、2年龄时各处死5只，获取小鼠肝组织样本，通过HE染色分析肝组织病理变化，免疫组化分析NDUFA13、NF-κB/p65、NF-κB/p-p65及炎症小体NLRP3的表达，ROS染色试剂盒分析细胞总ROS及线粒体ROS水平；免疫组化与免疫荧光分析免疫细胞标志物CD45、MPO、F4/80以及炎症因子IL1β、IL33的表达情况。结果 PCR鉴定结果显示成功建立肝特异性NDUFA13杂合敲除小鼠；HE染色显示4周龄与2年龄NDUFA13fl/-小鼠肝组织均损伤严重；免疫组化检测显示，4周龄与2年龄NDUFA13fl/-小鼠NDUFA13蛋白表达显著下调（P<0.05），NF-κB信号分子p65、p-p65（Ser536）及炎症小体NLRP3蛋白表达显著增加（P<0.05）；ROS测定发现NDUFA13基因杂合敲除导致小鼠肝脏细胞总ROS、线粒体ROS水平均显著增加；免疫组化与免疫荧光结果显示，肝组织CD45、MPO、F4/80等炎症细胞标志物的聚集以及IL1β、IL33等炎症因子的分泌均明显增多（P<0.05）。结论 NDUFA13蛋白表达失活可诱导小鼠自发性肝炎病理表型，其机制可能与活化的ROS/NF-κB/ NLRP3信号通路相关。

来源：2021年第1期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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