南方医科大学学报

作者：张冬艳, 邹雪晶, 宋 旸, 吴德华

关键词：lncRNA；UPK1A-AS1；肝癌；糖酵解；HIF-1α,

目的 探讨长链非编码RNA UPK1A-AS1对肝癌细胞糖酵解的影响及其分子机制。方法 通过慢病毒过表达系统构建UPK1A-AS1稳定过表达组（UPK1A-AS1）和慢病毒阴性对照组肝癌细胞株，两组细胞均分别置于常氧（21% O2）及乏氧（1% O2）条件下培养24 h，获得不同氧气条件下的UPK1A-AS1过表达组和阴性对照组肝癌细胞，利用葡萄糖及乳酸试剂盒检测过表达UPK1A-AS1对肝癌细胞糖酵解的影响。利用qRT-PCR法检测糖酵解相关基因HIF1A、GLUT1、HK1、HK2及PGK1的表达，采用双荧光素酶报告实验检测过表达UPK1A-AS1对HRE活性的影响。用放线菌酮处理肝癌细胞，检测过表达UPK1A-AS1对HIF-1α蛋白质稳定性的影响。利用泛素化蛋白质免疫共沉淀法明确UPK1A-AS1对HIF-1α蛋白泛素化修饰的影响。将肝癌细胞分为对照组、UPK1A-AS1稳定过表达组（UPK1A-AS1）、HIF-1α敲除组（si-HIF-1α）、UPK1A-AS1稳定过表达联合HIF-1α敲除组（UPK1A-AS1+si-HIF-1α），检测在过表达UPK1A-AS1的基础上干扰HIF-1α的表达后，肝癌细胞葡萄糖消耗及乳酸生成，HRE活性和糖酵解相关基因HK1、HK2及PGK1的表达情况，明确UPK1A-AS1是否通过上调HIF-1α的表达促进肝癌细胞的糖酵解水平。结果 与对照组相比，不论在常氧还是乏氧的条件下，过表达UPK1A-AS1均能促进肝癌细胞葡萄糖的消耗水平，并促进肝癌细胞生成乳酸，差异具有统计学意义（P<0.05）；过表达UPK1A-AS1能明显上调糖酵解相关基因HIF1A、GLUT1、HK1、HK2及PGK1的表达，且过表达UPK1A-AS1能促进HRE的转录活性（P<0.05）；Western blot显示，过表达UPK1A-AS1能增加HIF-1α蛋白的稳定性，并显著减少HIF-1α的泛素化修饰。葡萄糖消耗及乳酸生成实验表明，敲除HIF-1α能逆转过表达UPK1A-AS1对葡萄糖消耗及乳酸生成的促进作用（P<0.05）；干扰HIF-1α能恢复过表达UPK1A-AS1对HRE活性的上调作用。结论 长链非编码RNA UPK1A-AS1通过稳定HIF-1α的表达上调糖酵解相关基因的表达，进而促进肝癌细胞的糖酵解水平。

来源：2021年第2期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

查看南方医科大学学报杂志2021年第2期