南方医科大学学报

作者：张梦颖, 杨玉有, 刘 敏, 梁 利, 罗 瑞, 尹丹旸, 郭风劲

关键词：雌二醇；重组人雌激素受体β；内质网应激；凋亡；增殖；ERK信号通路,

目的 探究雌二醇（E2）结合其重组人雌激素受体β（ESR2）对C28I2细胞增殖和凋亡的效应。方法 PCR扩增ESR2序列并构建腺病毒重组质粒pAd-ESR2，在HEK293细胞中包装重组腺病毒Ad-ESR2。用Ad-ESR2和ESR2-siRNA处理人正常软骨细胞C28I2，分别设置对照组（C28I2+DMSO）、E2组（C28I2+E2）、Ad-ESR2组（C28I2+DMSO+ Ad-ESR2）、E2+Ad-GFP组（C28I2+ E2+Ad-GFP）、E2+Ad-ESR2组（C28I2+E2+Ad-ESR2）、E2+sicontrol组（C28I2转染sicontrol+E2）、E2+ESR2-si1组（C28I2转染ESR2-si1+E2）、E2+ESR2-si3组（C28I2转染ESR2-si3+E2）。免疫印迹测定ER Stress和细胞凋亡相关蛋白表达，qRT-PCR检测增殖相关标志基因的表达，借助EdU试剂盒和流式细胞术测定细胞增殖和凋亡情况。使用ERK通路抑制剂U0126分别设定E2 组、E2+U0126组（C28I2+E2+U0126）、E2+Ad-ESR2组、E2+Ad-ESR2+U0126组（C28I2+E2+Ad-ESR2+U0126）。通过免疫印迹实验探究C28I2细胞中E2通过ERβ调控ERK信号通路影响ER stress和凋亡。结果 成功构建过表达腺病毒Ad-ESR2和靶向ESR2的siRNA；过表达Ad-ESR2能够促进E2处理后IRE1α[1.20±0.06 vs 0.95±0.05，P<0.05]、PERK[1.29±0.04 vs 1.03±0.02，P< 0.05]和XBP1s[1.17±0.03 vs 0.82±0.02，P<0.05]的表达，促进凋亡Cleaved Caspase12（P<0.05）、抑制增殖相关标志基因PCNA（P<0.05）、CyclinB1（P<0.05）、CyclinD1（P<0.05）的表达，且ERK磷酸化激活降低（P<0.05）；转染ESR2-siRNA后，细胞的内质网应激相关蛋白和细胞凋亡相关蛋白的表达降低，与细胞增殖相关的基因被上调，且细胞内pERK/ERK比值相对增加。经特异性ERK通路抑制剂U0126处理后，雌二醇结合ERβ促进的内质网应激蛋白及细胞凋亡蛋白的表达被拮抗。结论 雌二醇靶向ERβ通过激活ERK通路磷酸化调控内质网应激及凋亡，进而抑制软骨细胞增殖。

来源：2021年第3期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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