南方医科大学学报

作者：耿梦雅, 王李卓, 章 尧, 裴文俊, 漆梦湘, 杨 梦, 许家豪, 梁洋洋, 吕 坤, 何春玲, 高家林

单位：皖南医学院弋矶山医院内分泌科，弋矶山医院内分泌糖尿病研究所，临床医学院，安徽省活性生物大分子研究安徽省重点实验室，基础医学院生化教研室，中心实验室，重大疾病非编码RNA转化研究安徽普通高校重点实验室，安徽 芜湖 241002

关键词：Sidt2；自噬小体；溶酶体；融合；货物蛋白,

目的 研究溶酶体膜蛋白Sidt2缺失后对肝脏自噬的影响。方法 利用Crispr-Cas9技术构建Sidt2敲除的人肝脏（HL7702）细胞模型，对自噬关键蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、P62及自噬相关蛋白Atg5、Atg7、Atg12进行蛋白水平检测，同时使用免疫荧光方法对LC3B及P62进行共定位，检测自噬小体对P62货物蛋白的识别与封存以及自噬溶酶体的降解。对LC3B及LAMP1进行免疫荧光共定位，检测自噬小体与溶酶体融合过程。使用LysoTracker对酸性溶酶体进行示踪。结果 成功构建HL7702细胞Sidt2+/+组 及Sidt2-/-组，HL7702细胞Sidt2-/-组较Sidt2+/+组相比，自噬关键蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ及P62表达均增多（P<0.01），免疫荧光结果显示LC3B及P62亦明显增多（P<0.001），同时自噬相关蛋白Atg5、Atg7、Atg12表达减少（P<0.05）。LC3B与P62共定位降低，LC3B 与LAMP1共定位降低，酸性溶酶体数量减少（P<0.05）。结论 Sidt2基因的缺失导致人肝脏细胞自噬小体对P62货物蛋白的识别和封存障碍，同时酸性溶酶体数量减少、自噬小体与溶酶体融合障碍导致自噬溶酶体途径受阻，最终导致LC3B与P62发生堆积，肝脏细胞自噬受损。

来源：2021年第8期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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