南方医科大学学报

作者：许笑雯, 储全根, 储 俊, 蔡正银, 轩 云, 罗宝璐, 李 帅, 陈 静, 罗世旷, 王悦琦

单位：安徽中医药大学，安徽 合肥 230038；安徽中医药大学教育部新安医学重点实验室，安徽 合肥 230038

关键词：痰瘀同治；AGEs/RAGE轴；原代心肌微血管内皮细胞；糖尿病心肌微血管病变；氧化应激,

目的 观察痰瘀同治对高糖诱导心肌微血管内皮细胞损伤的保护作用并从AGEs/RAGE轴探讨其作用机制。方法 利用酶消化法从大鼠心脏中分离出原代心肌微血管内皮细胞（CMECs），经免疫荧光法鉴定后，培养传代备用。在不同时间段采用不同浓度的葡萄糖对大鼠CMECs进行诱导干预，MTT检测方法发现葡萄糖浓度在33 mmol/L且干预48 h为最佳造模条件；予不同浓度的含药血清，同上法检测得10%含药血清干预48 h为最佳干预方法。将造模成功的CMECs分成5组：模型组（MC）、化痰组（RP）、化瘀组（DBS）、痰瘀同治组（RPDBS）、ALT-711组，予以10%含药血清和ALT-711细胞干预制剂进行干预；另设一组空白对照组（NC）。采用ELISA法检测各组内皮细胞AGEs含量；免疫荧光法、Western blot法和RT-qPCR法检测各组内皮细胞RAGE蛋白及基因表达水平；细胞色素c还原法检测各组内皮细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶活性水平；二氢乙锭荧光探针法检测各组内皮细胞活性氧自由基（ROS）活性水平。结果 MC组较NC组，细胞内晚期糖基化终末产物（AGEs）含量、RAGE蛋白及基因表达水平、NADPH氧化酶活性水平和ROS活性水平均升高（P<0.01）。与MC组比较，各治疗组的上述指标均降低（P<0.01）。在降低AGEs含量、RAGE蛋白及基因表达水平和NADPH氧化酶活性水平上，RPDBS组较RP组与DBS组显著下降（P<0.01，P0.05），较RP组显著下降（P<0.01）。结论 痰瘀同治法可能通过抑制AGEs/RAGE轴及氧化应激对高糖损伤的CMECs起到保护作用，从而防治糖尿病心肌微血管病变，且痰瘀同治法优于单独化痰法和单独化瘀法。

来源：2021年第10期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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