南方医科大学学报

作者：李舒雨, 杨启鑫, 左安娜, 田林华, 霍金海, 蒙艳丽, 汤庆发, 王伟明

单位：南方医科大学中医药学院//广东省中药制剂重点实验室//广东省中药制剂技术工程实验室，广东 广州 510515；黑龙江中医药科学院中药所，黑龙江 哈尔滨 150036

关键词：鲜广地龙；蛋白纯化；质谱分析；TGF-β/Smad；肌成纤维细胞,

目的 寻找一种方便快捷的鲜广地龙蛋白纯化方法，并探究其是否具有抗肺纤维化作用。方法 采用冷冻干燥法对鲜广地龙进行粗提取，再用分子排阻色谱分离纯化得到纯化蛋白（P2），并质谱分析P2蛋白组成。细胞实验分组：C57BL/6小鼠24只，随机分3组（8只/组）。对照组、模型组（5 ng/mL TGF-β1处理）、SB431542组（2 μmol/L）和鲜广地龙纯化蛋白P2组（13.125 μg/mL）。动物实验分组：对照组（不处理）、模型组（博来霉素处理）、博来霉素+鲜广地龙纯化蛋白P2（5 mg/mL）。造模后给药21 d，在第22天进行取材。采用CCK8-法检测P2对MRC-5细胞的细胞毒性和肌成纤维细胞异常增殖的抑制；流式细胞术检验其对肌成纤维细胞的凋亡；HE 和 Massson 染色观察其对肺组织的病理学变化；RT-PCR、Western blot 检测其对α-SMA、Vimentin、E-cadherin和Collagen I的调节；机制方面通过检验P2对Smad2/3及P-Smad2/3的调节作用，进而证明其可通过TGF-β/Smad通路起到抗肺纤维化作用。结果 通过分子排阻色谱法可方便、稳定得到鲜广地龙纯化蛋白P2。体外实验显示P2具有抑制肌成纤维细胞的作用（P<0.01），降低纤维化模型中α-SMA、Vimentin和Collagen I的表达（P<0.001或P<0.01），升高E-cadherin的表达（P<0.01），可抑制Smad2/3和P-Smad2/3的表达（P<0.001或P<0.01）。体内实验显示，P2可降低HE染色中炎症细胞的数量以及Masson染色中蓝色的胶原纤维区域。结论 运用分子排阻色谱可较为理想的获得鲜广地龙纯化蛋白P2，且其可通过调节TGF-β/Smad通路抑制肺纤维化进程。

来源：2022年第4期

《南方医科大学学报》期刊编辑部

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